AO DE LA DIVERSIFICACION PRODUCTIVA Y EL

FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACION

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA INDUSTRIAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA

AGROINDUSTRIAL E INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

INFORME N04: mtodos de medios de cultivo de

microorganismos tcnicas de siembra

CURSO: MICROBIOLOGIA

INTEGRANTES:
Calle Daz Josefa

Julca Morales Maybelline Jhanett

DOCENTE: JULIA TICONA MICHILOT

FECHA DE ENTREGA: 19/10/2015

PIURA PER
2015
INTRODUCCION

En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados

en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus
propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo
cultivos axnicos o puros. Un cultivo axnico o puro es aquel que contiene un slo tipo de
microorganismo y que procede generalmente de una sola clula; el crecimiento de sta
origina, en medio slido, una masa de clulas fcilmente visible que recibe el nombre de
colonia. Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin microbiana mixta, se
utilizan las denominadas tcnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el siglo XIX.
En un principio, Lister utiliz diluciones seriadas en medio lquido con esta finalidad, pero la
presencia de contaminacin, es decir, de microorganismos no deseados, dificult el
aislamiento. La escuela de Robert Koch introdujo los medios slidos, complementados con
agar, y las placas de Petri en Bacteriologa, permitiendo as la separacin fsica de las colonias
sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior del mismo. El aspecto de las colonias
sirve para diferenciar distintas especies microbianas.

Las bacterias se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos denominados medios

de cultivo, cuyos componentes son muy variados. La eleccin del medio se basa en el
propsito del estudio. El material que se inocula en el medio se denomina inculo.
Cuando se inocula un medio como el agar nutritivo u otros medios con agar en cajas de
Petri, por el mtodo de siembra por estra cruzada en placa. Las clulas quedan
separadas individualmente. Durante la incubacin, las clulas microbianas individuales
se reproducen tan rpidamente que en un tiempo de 18 a 24 horas producen masas
visibles a simples vista, denominadas colonias. Cada colonia que se observe diferente,
presumiblemente es un cultivo puro de una sola clase de bacterias. Si dos clulas
microbianas procedentes del inculo original quedan muy cerca una de la otra sobre el
medio de agar, las colonias que resultan pueden quedar mezcladas o muy juntas. La
siembra por estra permite aislar las bacterias que dan lugar a colonias separadas y
posteriormente, transfiriendo una sola colonia a un medio nuevo, se permite el
desarrollo de un cultivo puro bacteriano. (Luis Roberto Alarcn, 2004).

El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos cultivables en medios de

cultivo, recibe el nombre de siembra; esta operacin la podemos realizar a partir de
muestras biolgicas o de un cultivo microbiano a otro, esto se hace con el fin de
reconocer la morfologa microscpica y macroscpica de estos microorganismos
incluyendo su comportamiento. Existen tcnicas adecuadas para realizar estos cultivos,
mediante el uso de algunos elementos importantes para realizar siembras como: el
mechero, el asa bacteriolgica (asa redonda), o micolgica (asa en punta), los espacios
adecuados, las condiciones aspticas y los medios de cultivos ya preparados y
atemperados a 37C. (Luis Roberto Alarcn, 2004).
 II. MARCO TEORICO:

Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn
lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente
se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido. El objetivo
ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin. Uno de los
sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000
medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.

Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan un
medio que contenga clulas vivas.

Siembra

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo) en un

medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

Que se efecten aspticamente

Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estn esterilizados
Que se realicen solo los manipuleos indispensables
 Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos

del microorganismo a estudiar.

Medios slidos:

Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa o caja de Petri y sobre
el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este mtodo se
utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersin. Una
vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este mtodo se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaeroflicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inculo. Con ayuda
de una esptula de Drigalsky se extiende el inculo hasta su absorcin total por
el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.
Siembra en estra: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido
y se deja solidificar.

Existen distintas tcnicas para la siembra en estras, el objeto es obtener colonias

aisladas.

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio

de cultivo fundido y estril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

El inculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:

En profundidad con ansa de punta

En superficie con ansa de aro
OBJETIVOS

Ejecutar las tcnicas bsicas para el aislamiento de microorganismos en cultivo.

 PROCEDIMIENTO

AISLAMIENTO DE COLONIAS POR AGOTAMIENTO:

1) Limpiar el rea 4x3 con algodn y alcohol.

2) Prender el mechero.
3) Flamear el asa en el mechero.
4) Flamear el frasco del microorganismo.
5) Sacar con el asa una porcin pequea de microorganismo.
6) Coger la placa Petri que contiene agar y hacer las estras.

AISLAMIENTO POR DILUCIONES SUCESIVAS Y RECUENTRO DE COLONIAS:

7) Agregar en un matraz 10 ml de agar y 90ml de solucin salina.

8) Agitar para que se mezcle.
9) Flamear el matraz y la pipeta.
10) Sacar con una pipeta 1ml de la muestra.
11) Sacarle el algodn al tubo de ensayo.
12) Agregar la muestra con cuidado en el centro del tubo de ensayo de agar
lquido.
13) Mezclar con cuidado para que no se moje el algodn
14) De este sacar 1ml del tubo I.
15) Agregar al tubo II.
16) Sacar un ml del tubo II y agregarla al tubo III.

AISLAMIENTO POR TRANSPLANTE:

Agar inclinado:
17) Flamear el asa.
18) Flamear el microorganismo.
19) Sacar una parte de microorganismo.
20) Hacer las estras en el agar inclinado que est en el tubo de ensayo en medio
slido.
 Agar en columna:

21) Flamear el asa.

22) Flamear el microorganismo.
23) Sacar una parte de microorganismo.
24) Introducir el asa en medio del agar para que no se disperse por las paredes
del tubo y no puedan quedarse all.

Agar en medio liquido

25) Flamear el asa.

26) Flamear el microorganismo.
27) Sacar una parte de microorganismo.
28) Y agregarlo al agar liquido

Colocar en la cocineta para esterilizarlo y ver los microorganismos presentes.

AISLAMIENTO DE
COLONIAS

POR AGOTAMIENTO
RESULTADOS
DISCUSION
1. DEBES TOCAR LAS CAJAS DE PETRI CON AGAR CON TUS MANOS?
Para tocar las placas de agar con las manos ests deben estar debidamente
protegidas con guantes de ltex para evitar la contaminacin del agar, y as
obtener un buen resultado de la siembra de los microorganismo

2. PUEDE ENCONTRAR ORGANISMOS EN EL AIRE?

Si, de toda clase de microorganismo entre ellos estn las esporas asperigillus,
esporas clandosporium, esporas alternaras, microccocus. etc.

3. QU RESULTADOS SOPORTAN TUS CONCLUSIONES?

Los obtenidos en la prctica, como en la lectura de las placas y la informacin
recolectada

4. CUANDO TRABAJAS CON CULTIVOS MICROBIANOS

PUEDES HABLAR SI Y NO PORQUE?
No, porque el cultivo se contaminara De acuerdo a los resultados obtenidos en
la anterior prctica de laboratorio podemos decir que los medio de cultivo
constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los
microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas
sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
CONCLUSIONES
En este laboratorio aprendimos cmo se realizaban los distintos tipos de siembra en los
cuales se aislaron los cultivos de bacterias y el hongo aspergillus a los cuales se
introdujo varias veces el asa en el agar haciendo piquetes o enredamientos del hongo en
los agares. Se concluye que cada una de estas bacterias tiene particularidades diferentes
debido a la observacin que se hizo de sus caractersticas macroscpicas, luego se
realiz su respectiva interpretacin teniendo en cuenta sus conceptos. Al final se pudo
identificar los tipos de asas al momento que se realiz la siembra.