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TCNICAS

CROMATOGRFICAS
HIFENADAS A TCNICAS
ESPECTROMTRICAS NA
ANLISE DE PRODUTOS
NATURAIS

Prof. Dr. Joo Henrique G. Lago


UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC
E-mail: joao.lago@ufabc.edu.br
A QUMICA DOS PRODUTOS NATURAIS CLSSICA....

ISOLAMENTOS E
DETERMINAES
ESTRUTURAIS
Tendncias na rea
evitar o isolamento de compostos conhecidos
e de ampla ocorrncia e buscar novas
substncias (estruturas inditas e/ou com
valor agregado, por exemplo, bioatividade)

COMO OTIMIZAR???
EXTRATO - matriz complexa

Realizar uma busca dos compostos presentes na


matriz sem necessidade de isolamento e
caracterizao estrutural posterior

COMO???

ASSOCIAR
TECNICAS CROMATOGRAFICAS +
TECNICAS
ESPECTROSCPICAS/ESPECTROMTRICAS
TCNICAS HIFENADAS

Acoplamento entre duas ou mais


tcnicas analticas (tcnicas de
separao e deteco), com o objetivo
de obter uma ferramenta analtica
mais eficiente e rpida que as
tcnicas convencionais.
A QUIMICA DE PRODUTOS NATURAIS MODERNA
TCNICAS HIFENADAS
VANTAGENS

No necessita de uma grande quantidade


do analito na sua forma purificada;
Seletividade da amostra pode ser ajustada,
levando a uma maior velocidade de anlise
ou uma melhora nos limites de deteco;
Maior sensibilidade;

Ferramenta analtica mais eficiente e


rpida que as tcnicas convencionais.
NO CASO DOS PRODUTOS NATURAIS...
TCNICAS HIFENADAS
CROMATOGRAFIA EM FASE GASOSA ACOPLADA A
ESPECTROMETRIA DE MASSAS (CG-EM)

Refere-se ao acoplamento de um cromatgrafo a


gs (CG) com um espectrometro de massas (EM).
A cromatografia em fase gasosa foi a primeira
tcnica a ser interfaceada com o detector de
massas, devido a facilidade do manuseio do
efluente gasoso do cromatgrafo.
Os espectros de massa obtidos por esta tcnica
hifenada oferece informaes mais estrutural com
base na interpretao de fragmentaes.
Os ons do fragmento com diferentes abundncias
relativas podem ser comparados com os espectros
de biblioteca.
TCNICAS HIFENADAS
CG-EM
O equipamento de CG/EM
TCNICAS HIFENADAS
CG-EM APLICAO EM PRODUTOS NATURAIS
Anlise do leo essencial do limo
TCNICAS HIFENADAS
CG-EM APLICAO EM PRODUTOS NATURAIS
Anlise de extratos vegetais - compostos de baixa polaridade

2 folhas de S. argutidens

Extrato hexnico

Analise por CG/EM


TCNICAS HIFENADAS
CLAE-EM

Refere-se ao acoplamento de um cromatgrafo


liquido (CLAE) com um espectrometro de massas
(EM).
Quando os compostos a serem analisados tm
baixa volatilidade ou so muito polares para
anlise por CG, o mtodo de escolha CLAE.
As amostras separadas pela cromatografia podem
ser identificadas com base em seus dados de
espectro de massas, confirmando suas
identidades moleculares.
O equipamento de CLAE/EM

CLAE

EM
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-EM
EM

CLAE
Analysis of
benzoic acid
derivatives from
Baccharis sp.

Preparation
of crude
extract
(5 mg of
leaves in
MeOH)
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-EM - APLICAO

Curcuma longa
AAFRO DA TERRA
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-EM - APLICAO
Figostigma
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-RMN

Refere-se ao acoplamento de um cromatgrafo liquido (CLAE) com um


equipamento de ressonncia magntica nuclear (RMN).
O uso de CLAE-EM nem sempre suficiente para a identificao de
compostos, muitas vezes, faltam informaes estruturais conferidas
pela CLAE-RMN.
O mtodo permite a identificao de muitos compostos numa s
anlise.
Compostos de ampla faixa de polaridade podem ser analisados por
CLAE-RMN incluindo aqueles que no podem ser analisados por CG-
EM
A resposta obtida por CLAE-RMN reflete diretamente a concentrao
do analito, enquanto que, em CLAE-EM, a resposta depende da
eficincia de ionizao, ou seja, das propriedades qumicas do analito.
Entre as tcnicas hifenadas disponveis at ento, CLAE-RMN o
menos sensvel e um dos mais caros, sendo portanto, de utilizao
restrita.
RMN

CLAE

?
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-RMN RMN

CLAE
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-RMN - APLICAO Identificao de benzoquinonas de
Tabebuia avellanedae (Bignoniaceae)
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-RMN - APLICAO

Seleo de compostos bioativos de Genipa americana (Rubiaceae)


CARACTERIZAO DOS
COMPOSTOS ATIVOS !!
TCNICAS HIFENADAS
CLAE-RMN - APLICAO

catuaba
TCNICAS HIFENADAS
CLAE/RMN - APLICAO
TCNICAS HIFENADAS
PANORAMA GERAL
Tcnica Caracterstica Vantagens Desvantagens
CG-EM Identificao de - Fornece fragmentos / on - Tempos
compostos volteis. molecular razoavelmente longos
Fornece informao - Alta resoluo (CG) - Necessidade de
estrutural da molcula. - Quantificao feita atravs de derivatizao em
Permite comparao com monitoramento de 1 ou mais vrios casos
bibliotecas espectrais. ons - Eficiente apenas com
- Maior a massa Maior compostos volteis.
seletividade
CLAE-EM Utilizado para compostos - Fornece fragmentos / on - No confere
de baixa volatilidade. molecular diretamente a
Confirmao de - Analisa compostos com ampla concentrao do analito
identidade molecular. faixa de polaridade
CLAE-RMN Fornece informaes - Confere informaes - Baixa sensibilidade
estruturais. estruturais - Alto custo
- Analisa compostos com ampla
faixa de polaridade
- Confere diretamente a
concentrao do analito
- Identifica vrios analitos em
um s espectro
OBRIGADO!!!