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Palavras-chave
1 . Introduo
2 . Experimental
3 . Resultados e discusso
4 . Concluses
Reconhecimentos
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Figuras ( 5 )

Mesas ( 6 )

tabela 1
mesa 2
Tabela 3
Tabela 4
Tabela 5
Tabela 6

Jornal microqumico
Volume 112 ,janeiro de 2014, pginas 119-126
Determinao de dezenove resduos de pesticidas
(organofosfatos, organoclorados, piretrides, carbamato,
tiocarbamato e estrobilurina) em gua de coco por SDME / GC-
MS
Jeancarlo Pereira. dos Anjos , Jailson B. de Andrade

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https://doi.org/10.1016/j.microc.2013.10.001 Obter direitos e contedo

Destaques

um mtodo simples e eficiente para a determinao de resduos de

pesticidas.

O mtodo foi aplicado com sucesso a amostras reais de gua de coco.

A metodologia apresenta capacidade para quantificar baixos nveis de

pesticidas.

Abstrato
A gua de coco uma bebida isotnica natural e uma rica fonte de acares, sais,
vitaminas, minerais e aminocidos e pode ser servida como bebida para saciar a sede. As
palmeiras so muitas vezes atacadas por insetos e / ou pragas, reduzindo assim sua
produtividade. A fim de melhorar a produo de coco, os pesticidas so frequentemente
utilizados. Assim, o objetivo principal deste estudo propor um mtodo simples e eficiente
para a determinao de resduos de pesticidas, de diferentes classes qumicas, em
amostras de gua de coco industrializada e natural, utilizando microextrao de gota nica
(SDME), seguida de cromatografia em fase gasosa acoplado espectrometria de massa
(GC-MS). O passo de extrao usando SDME foi otimizado e verificou-se que as melhores
condies experimentais para 10 mL de amostras foram obtidas utilizando tolueno como
um solvente de extrao; tempo de agitao de 30 min a 200 rpm; volume de queda de
1,0 L; e acidificao com HCl sem adio de sal. O mtodo cromatogrfico foi validado e
bons valores foram encontrados para as figuras de mrito, com LOD variando entre 0,1 e
0,88 g L - 1 e LOQ entre 1,21 e 6,69 g L - 1 . O mtodo foi aplicado com sucesso em
amostras reais de gua de coco natural e industrializada, e os pesticidas sulfotep, demeton-
O, dimetoato, disulfoto, fenitrotion e malatio foram determinados em concentraes
variando de < LOQ a 12,1 g L - 1 . A metodologia proposta apresenta alta
sensibilidade e a capacidade de detectar e quantificar baixos nveis de pesticidas em
amostras de gua de coco.

Palavras-chave
Pesticidas; gua de cco; SDME; GC-MS

1 . Introduo
A gua de coco uma bebida isotnica natural e uma fonte rica de acares, sais,
vitaminas, minerais e aminocidos e pode ser servida diretamente como bebida para saciar
a sede. um lquido claro, incolor e doce, apresentando um sabor ligeiramente cido, com
pH variando de 4,2 a 6,0. comercializado na sua forma natural ou aps o processamento,
no qual submetido a vrias etapas de esterilizao e adio de conservantes [1-3] .

As palmeiras so muitas vezes atacadas por vrios insetos e / ou pragas, reduzindo assim
sua produtividade. A fim de aumentar a produo de coco, os pesticidas so
freqentemente usados em vrias formas, seja por pulverizao nas folhas ou por injeo
atravs dos sistemas de haste e raiz. A injeo de pesticidas no tronco de palmeiras
comeou em meados da dcada de 1950 e continua em vrios pases do sul da sia.
Pesticidas como monocrotofos, carbofurano e seu metabolito 3-hidroxicarbofurano foram
encontrados em amostras submetidas a pulverizao ou injeo no tronco ou nas folhas. A
presena de resduos destes compostos na gua de coco pode ser um risco para a sade
dos consumidores, devido sua potencial toxicidade [3-5] .

Hoje em dia, os pesticidas de diferentes classes qumicas so freqentemente utilizados

para o controle de pragas em culturas de palmeira, especialmente carbamatos
(carbofuran), piretrides (bifentrina), organofosforados (dimetoato, malatio, metilparatio e
triclorofon), entre outros [6] . Apesar do uso intensivo de pesticidas, o governo brasileiro
no estabeleceu um limite mximo para resduos de pesticidas em gua de coco [7] .

Vrios mtodos analticos foram propostos para a determinao simultnea de

multirresidentes de pesticidas em matrizes aquosas. O desenvolvimento de tais mtodos
muitas vezes difcil, uma vez que os compostos tm diferentes graus de polaridade,
solubilidade e volatilidade, bem como diferentes coeficientes de partio octanol-gua (
Tabela 1 ), o que dificulta a extrao e anlise [8] . Portanto, os mtodos de rotina para a
determinao de resduos de pesticidas no ambiente e nos alimentos geralmente requerem
muitas etapas de preparao da amostra antes da anlise instrumental, como extrao,
limpeza e pr-concentrao [9]. No caso especfico da gua de coco, o fato de ser um meio
complexo deve ser levado em considerao, considerando suas propriedades fsicas e
qumicas. Assim, mesmo com a recente instrumentao analtica avanar, h pouca
informao disponvel na literatura aberta sobre metodologias analticas que identificaram e
quantificaram pesticidas em gua de coco. At agora, era apenas a quantificao de
malatio encontrada. Isso foi possvel devido ao uso de vrios procedimentos para limpeza
de amostras e prconcentrao [3] .

Tabela 1 . Propriedades fsico-qumicas dos pesticidas selecionados para estudo [10] .

Pesticida Frmula Grupo log K ow - pH 7; 20 Solubilidade em gua - 20 C

molecular qumico C (mg L - 1 )

Carbofurano C 12 H 15 NO 3 Carbamato 1.8 3,22 10 2

Molinado C 9 H 17 NOS Thiocarbamato 2.86 1,10 10 3

Sulfotep C 8 H 20 O 5 P 2 S Organofosfato 3.99 10

Dimetoato C 5 H 12 NO 3 PS Organofosfato 0,704 3,98 10 4

Demeton-o C 6 H 15 O 3 PS 2 Organofosfato 0,47 330

Diazinon C 12 H 21 N 2 O 3 Organofosfato 3.69 60

PS

Disulfoton C 8 H 19 O 2 PS 3 Organofosfato 3.95 25

Paratito de C 8 H 10 NO 5 PS Organofosfato 3 55
metilo

Fenitrothion C 8 H 10 NO 5 PS Organofosfato 3.32 19

Malathion C 10 H 19 O 6 PS Organofosfato 2.75 1,48 10 2

Fenthion C 10 H 15 O 3 PS Organofosfato 4.84 4.2

Dursban C 9 H 11 Cl 3 NO 3 Organofosfato 4,7 1.05

PS

Paratio C 10 H 14 NO 5 Organofosfato 3.83 12.4

PS

Endosulfan C 9 H 6 Cl 6 O 3 S Organocloro 4.75 3,20 10 - 1

Ethion C 9 H 22 O 4 P 2 S Organofosfato 5.07 2

Bifenthrin C 23 H 22 ClF 3 O Pyrethroid 6.6 10 - 3

2
Permethrin i C 21 H 20 Cl 2 O 3 Pyrethroid 0,2 6.1

Permethrin ii C 21 H 20 Cl 2 O 3 Pyrethroid 0,2 6.1

Azoxistrobina C 22 H 17 N 3 O 5 Strobilurin 2,5 6.7

Estudos recentes se concentraram no desenvolvimento de mtodos analticos econmicos,

miniaturizados e com baixo impacto no meio ambiente. Neste contexto, a tcnica de
microextrao de gota nica (SDME) surgiu como um procedimento de preparao simples
e praticamente sem solventes, rpido e barato. Esta tcnica baseia-se no princpio da
distribuio de analitos entre um microbolo de solvente orgnico, na ponta de uma agulha
de microbiologia e a fase aquosa (amostra). O microfone exposto a uma amostra aquosa
em que o analito extrado na gota. Aps a extrao, o microbolo retrado na micro-
microfira e injetado em instrumentos para cromatografia lquida ou gasosa para anlise
[9,11]. Esta tcnica tem sido usada com sucesso na determinao de diferentes classes de
substncias, como compostos fenlicos [12] , compostos de enxofre [13] , metais [14,15] ,
aminas [16] , bem como para a extrao de pesticidas [ 9,17-20] em diferentes matrizes.

Portanto, o objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um mtodo eficiente para a
determinao de resduos de pesticidas, de diferentes classes qumicas, em amostras de
gua de coco industrializada e natural, utilizando microextrao de gota nica (SDME),
seguida de cromatografia em fase gasosa acoplada espectrometria de massa (GC-MS) e,
em seguida, aplicar o mtodo desenvolvido a amostras reais de gua de coco.

2 . Experimental

2.1 . Padres, reagentes e amostras

Os padres certificados utilizados para a anlise de pesticidas foram carbofuran, molinato,
sulfotep, demeton-O, dimetoato, diazinon, disulfoton, metilparatio, fenitrotion, malathion,
fentions, dursban, paratio, endossulfo, etnon, bifentrina, permetrina e azoxistrobina,
todos adquiridos a partir de AccuStandard.

O tolueno utilizado foi adquirido da Merck; metanol, ciclo-hexano e isooctano (grau HPLC)
foram obtidos de JT Baker. Adicionou-se tambm cido clordrico fumante, cido fosfrico
(Merck) e cloreto de sdio (99,6%) (JT Baker).

Foram adquiridas amostras de gua de coco industrializada (de 3 marcas diferentes, entre
as quais 5 lotes diferentes) em um estabelecimento comercial na cidade de Salvador,
Bahia, e amostras de gua de coco natural foram adquiridas em mercados abertos.

2.2 . Preparao de padres e amostras

As solues stock foram preparadas em concentraes de 100 mg L - 1 (demeton-S,
diazino, dissulfoto, etio, malation, paration de metilo e paratio), 500 mg de L - 1
(bifentrina, azoxistrobina, Dursban e dimetoato), 600 mg de L - 1 (carbofurano) e 1000 mg
de L - 1 (permetrina, molinato, sulfotep, fenitrotion e fentio), solubilizados em metanol, com
excepo do endossulfo (500 mg L - 1 ), que foi solubilizado em acetato de etilo; as
solues foram mantidas sob refrigerao.

O mtodo utilizado para quantificar os compostos foi a padronizao externa. Para a

construo de curvas de calibrao, as diluies de uma soluo intermediria foram
realizadas em gua ultrapura, contendo uma mistura de todos os padres na mesma
concentrao (1,0 mg L - 1 ), e esta mistura foi obtida por diluio das solues de
estoque previamente preparadas em metanol .

Antes do procedimento SDME, as alquotas de 15 mL das amostras foram centrifugadas

(3000 g ) durante 5 min para remover partculas de coco suspensas na bebida, pois
prejudicaram a estabilidade do microfone no final da agulha da seringa.

2.3 . Microextrao de solteiro (SDME)

Para o procedimento SDME, utilizou-se uma microverila de Hamilton de 10 L para medir e
introduzir o microbeto do solvente de extrao (tolueno) em um frasco de vidro contendo a
soluo de extrao ou a amostra, uma barra de agitao magntica e um septo de
silicone. Antes de cada extrao, a seringa foi enxaguada 6 vezes com metanol, depois 3
vezes com tolueno. O mbolo foi ento colocado na posio zero e 2 L de tolueno foram
empurrados para dentro da seringa. Em seguida, a agulha de microbiologia foi inserida
atravs do septo e imersa diretamente na soluo de extrao ou amostra (10 mL) sob
agitao (200 g). O mbolo de microbiografia estava deprimido (at a posio 1 L -
volume de queda) para expor a gota de tolueno, de modo que a transferncia de analito
ocorreu da fase aquosa para a gota orgnica. Aps o tempo de extrao (30 min), a queda
foi extrada para a microverteira, removendo a agulha do frasco de vidro e imediatamente
injetada em um sistema de cromatografia em fase gasosa acoplado a um espectrmetro de
massa (GC-MS) para posterior anlise.

2.4 . Anlises cromatogrficas

As anlises de pesticidas foram realizadas utilizando um cromatgrafo de gs Shimadzu
acoplado a um espectrmetro de massa (GCMS-2010 Plus) equipado com um injetor split /
splitless, operando no modo sem diviso a uma temperatura de 300 C durante a
execuo cromatogrfica, com um tempo de purga de 0,75 min. As separaes de
pesticidas foram realizadas utilizando uma coluna capilar Restek Rtx-1MS (30 m 0,25
mm ID, 0,25 m de espessura do filme). O gs transportador utilizado foi o hlio (99,999%
de pureza) sob um fluxo de 1,0 mL min - 1 . O programa de temperatura do forno foi de 60
C (1,0 min); 200 C a 25 C min - 1 ; 280 C a 10 C min - 1 ; 300 C a 5 C min -
1 e tempo de espera a 300 C durante 1,40 min, com tempo de execuo total de 20 min.
Para o detector de massa, utilizou-se temperatura da linha de transferncia e fonte de ies
a 300 C, bem como ionizao por impacto de eltrons a 70 eV.
A otimizao dos tempos de reteno foi realizada no modo SCAN, utilizando uma soluo
padro de pesticidas a uma concentrao de 10 mg L - 1 . A quantificao de pesticidas
nas amostras de gua de coco foi realizada no modo SIM (Monitorao de Ionografia
Selecionada) e foram escolhidos dois ons especficos para cada analito: o primeiro on foi
utilizado para quantificao e o segundo para confirmao ( Tabela 2 ). Para permetrina,
que apresenta estereoisomerismo, foram detectados dois picos, correspondentes aos
ismeros cis (Z) e trans (E).

Tabela 2 . Parmetros experimentais selecionados para a anlise de pesticidas pelo GC-MS.

Segmentos Analito Quantificao de ons (m / Confirmao de ons (m / t R (min)

(min) z) z)

0.00-6.00 Carbofurano 164 149 5.73

6,01-8,20 Molinado 126 55 6.97

Sulfotep 322 97 7.66

Demeton-o 88 60 7.94

Dimetoato 87 125 7.66

8.21-8.70 Diazinon 137 304 8,35

Disulfoton 88 60 8,45

Paratito de 109 125 8,45

metilo

8.71-10.00 Fenitrothion 109 125 8.97

Malathion 93 125 9.37

Fenthion 278 125 9.53

Dursban 97 197 9,59

Paratio 291 109 9,59

10.01-11.20 Endosulfan 241 339 10.73

11.21-12.00 Ethion 231 384 11.57

12.01-14.00 Bifenthrin 181 105 13.02

14.01-15.50 Permethrin I 183 163 14.55

Permethrin II 183 163 14.66

15.51-20.00 Azoxistrobina 344 388 17,21

A Fig. 1 mostra o perfil cromatogrfico da soluo padro de pesticidas a uma
concentrao de 10 g L - 1 com a identificao dos respectivos compostos, de acordo
com os segmentos de tempo listados na Tabela 2 .

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Fig. 1 . Cromatograma da soluo padro de pesticidas (10 g L - 1 ) (A) e uma amostra de gua de
coco (B) aps a otimizao dos parmetros de extrao por SDME. Identificao dos picos: 1 -
carbofurano; 2 - molinato; 3 - sulfotep; 4 - dimetoato; 5 - demeton-O; 6 - diazinon; 7 - disulfoton; 8 - metil
paratio; 9 - fenitrotion; 10 - malatio; 11 - fentio; 12 - dursban; 13 - Paratio; 14 - endossulfo; 15 -
ethion; 16 - bifentrina; 17 - permetrina I; 18 - permetrina II; e 19 - azoxistrobina.

2.5 . Validao do mtodo cromatogrfico

Para garantir a qualidade analtica dos resultados, foram realizados procedimentos para
validar o mtodo, nos quais foram avaliados os seguintes parmetros: seletividade,
linearidade, preciso, limite de deteco, limite de quantificao e preciso [21, 22] .

3 . Resultados e discusso
3.1 . Otimizao de condies experimentais para SDME
A escolha de um solvente adequado muito importante para a obteno de uma boa
seletividade e melhor eficincia de extrao dos analitos. Assim, o solvente selecionado
deve apresentar pouca solubilidade em gua, baixa toxicidade e boa estabilidade da gota
formada e, acima de tudo, ser capaz de extrair efetivamente os analitos [23] .

Em um trabalho anterior [19,24] foi aplicado um projeto experimental multivariante para a

otimizao de condies experimentais para SDME na anlise de pesticidas
organofosforados e piretride na avaliao de gua, entre outras, as seguintes variveis:
solvente, tempo de extrao e volume de queda. Com base no achado anterior, foi possvel
utilizar neste trabalho um projeto experimental univariado, para avaliao: solvente
(tolueno, ciclo-hexano, isooctano); tempo de extrao (10, 20, 30 e 40 min) e volume de
queda (0,5, 0,8 e 1,0 L).

Na Fig. 2 pode-se observar que todos os solventes estudados apresentaram bom

desempenho na extrao de pesticidas. Assim, o tolueno foi selecionado devido sua
baixa toxicidade, quando comparado aos outros solventes testados e, pela compatibilidade
com a anlise de pesticidas por cromatografia gasosa.

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Fig. 2 . reas obtidas para otimizao de solventes (tempo de extrao: 30 min, volume de queda: 1,0
L). Soluo padro (50 g L - 1 ): 1 - carbofurano; 2 - molinato; 3 - sulfotep; 4 - demeton-O; 5 -
dimetoato; 6 - diazinon; 7 - disulfoton; 8 - metil paratio; 9 - fenitrotion; 10 - malatio; 11 - fentio; 12 -
dursban; 13 - Paratio; 14 - endossulfo; 15 - ethion; 16 - bifentrina; 17 - permetrina I; 18 - permetrina II;
e 19 - azoxistrobina.

Geralmente, quando o mtodo SDME aplicado, a eficincia de extrao aumenta com o

tempo. Enquanto isso, o tempo selecionado deve ser suficiente para permitir que o micrbio
extraia adequadamente os analitos de destino, mas no muito longo para evitar a
dissoluo das microdrogas [23] . Na Fig. 3 pode-se observar que, o equilbrio de extrao
foi atingido em 30 minutos, na maioria dos pesticidas. Aps este tempo, a dissoluo do
microfone foi aumentada tornando difcil o controle do tamanho do microcho. Por isso, o
tempo de extrao de 30 min foi escolhido.

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Fig. 3 . reas obtidas para otimizao do tempo de extrao (solvente: tolueno, volume de queda: 1,0
L). Soluo padro (50 g L - 1 ): 1 - carbofurano; 2 - molinato; 3 - sulfotep; 4 - demeton-O; 5 -
dimetoato; 6 - diazinon; 7 - disulfoton; 8 - metil paratio; 9 - fenitrotion; 10 - malatio; 11 - fentio; 12 -
dursban; 13 - Paratio; 14 - endossulfo; 15 - ethion; 16 - bifentrina; 17 - permetrina I; 18 - permetrina II;
e 19 - azoxistrobina.

Em geral, o uso de um maior volume de queda resulta em um aumento na resposta do

instrumento analtico. No entanto, gotas muito volumosas podem ser difceis de manusear e
so menos confiveis. Alm disso, pode haver uma queda no processo de difuso dos
analitos devido ao aumento do volume de queda, ento haver a necessidade de um tempo
maior para alcanar o equilbrio [23] . Portanto, o volume de queda escolhido foi de 1,0 L,
para mostrar uma boa estabilidade de queda, bem como uma melhor eficincia de extrao
de pesticidas, para garantir uma boa reprodutibilidade e permitir o uso de agitao rpida (
Fig. 4 ).

Baixe a imagem em tamanho real

 Fig. 4 . reas obtidas para otimizao do volume de queda (solvente: tolueno, tempo de extrao: 30
min). Soluo padro (50 g L - 1 ): 1 - carbofurano; 2 - molinato; 3 - sulfotep; 4 - demeton-O; 5 -
dimetoato; 6 - diazinon; 7 - disulfoton; 8 - metil paratio; 9 - fenitrotion; 10 - malatio; 11 - fentio; 12 -
dursban; 13 - Paratio; 14 - endossulfo; 15 - ethion; 16 - bifentrina; 17 - permetrina I; 18 - permetrina II;
e 19 - azoxistrobina.

Foram realizados testes adicionais para obter uma melhor resposta para cada pesticida
analisado. Desta forma, aqueles avaliados foram o volume da soluo (1, 5 e 10 mL),
velocidade de agitao (sem agitao, 100, 200 e 300 rpm), acidificao do meio de
extrao (sem cido, com H 3 PO 4 e com HCl ), e o efeito salgante (sem sal e com 10% de
NaCl). Para os testes realizados com diferentes volumes de soluo, embora as reas
obtidas fossem muito prximas dos volumes de 5 e 10 mL, o uso de 10 mL de soluo foi
escolhido, uma vez que este volume se mostrou melhor colocado no frasco quando a
agitao foi realizada com uma barra de agitao magntica submersa na soluo.

Observou-se tambm que a agitao foi um fator que determinou um aumento significativo
na rea de pico de pesticidas. Uma melhor eficincia de extrao foi obtida quando se
usava uma agitao rpida, devido ao fato de que a agitao permite uma exposio
contnua da superfcie de extrao pela amostra. Foi possvel observar maiores eficincias
de extrao de pesticidas para as velocidades 200 e 300 rpm. No entanto, 200 rpm foi a
velocidade escolhida, uma vez que, nessa velocidade, ocorreria um distrbio de soluo
menor quando comparado a 300 rpm e, consequentemente, uma maior estabilidade de
microfone na ponta da agulha de microbiografia. Para velocidades superiores a 300 rpm,
verificou-se que a queda destacou-se muito facilmente, impedindo a sua coleta de ser
posteriormente injetada no sistema cromatogrfico.

Ito et al. [25] sugeriram que as molculas de certos pesticidas so muitas vezes mais
estveis em meio aquoso cido, em comparao com o meio bsico, como no caso do
fenitrotion. Desta forma, estudou-se o efeito da acidificao do meio na eficincia de
extrao dos pesticidas utilizando cidos no oxidantes: cido clordrico e cido fosfrico.
Pode ser observado na Fig. 5que, com o uso de ambos os cidos, existe uma correlao
linear positiva significativa entre os dados obtidos para a extrao sem o uso de cido e a
extrao acidificando o meio. Os coeficientes de correlao (R) de 0,9924 foram obtidos
para o uso de cido clordrico e 0,9593 para o uso de cido fosfrico, revelando que a
acidificao do meio um fator importante para a extrao de pesticidas usando SDME.
Alm disso, observou-se que a inclinao da linha reta obtida para a correlao com cido
clordrico (1.6023) foi maior que a obtida pelo uso de cido fosfrico (0.8216),
demonstrando um maior aumento na eficincia de extrao quando se usou cido
clordrico. Neste contexto, foi adotada a acidificao do meio para extrao de pesticidas e
foi escolhido o cido clordrico,
 Baixe a imagem em tamanho real

Fig. 5 . Grfico para a correlao entre as respostas obtidas para a extrao de pesticidas sem o uso de
cido e acidificao do meio.

O efeito salgante est relacionado conexo entre gua e sal, reduzindo assim a
hidratao de molculas em soluo aquosa (solvatao) [26] . Neste contexto, sais como
o cloreto de sdio melhoram a estruturao da fase aquosa e, conseqentemente, a
energia de ligao gua, devido sua forte interao com seus dipolos, promovendo uma
mudana no equilbrio particional de solutos orgnicos neutros em direo a fases no
aquosas , facilitando a extrao de analitos contidos em fases aquosas [27] . Por outro
lado, Kin e Huat [23]mostrou que a adio de sal causou uma ligeira reduo na eficincia
de extrao para a maioria dos pesticidas estudados e foi mais pronunciada para
compostos menos polares. No entanto, neste estudo, no se observou influncia
significativa na extrao de pesticidas quando o sal foi adicionado soluo padro, pois
as reas obtidas entre as solues com e sem adio de sal foram muito prximas.
Portanto, neste estudo, nenhum sal foi adicionado soluo padro para a extrao de
pesticidas.

No presente trabalho, a otimizao das condies experimentais para a extrao de SDME

mostrou que os melhores parmetros para a anlise dos pesticidas estudados foram:
solvente (tolueno), tempo de extrao (30 min); volume de queda (1,0 L); volume da
soluo (10 mL); taxa de agitao (200 rpm); com acidificao do meio com HCl e sem
adio de sal, uma vez que permite uma melhor extrao de analitos do meio aquoso.

3.2 . Validao do mtodo

3.2.1 . Seletividade
Sob as condies cromatogrficas empregadas, observou-se que as amostras no
apresentaram substncias interferentes nos tempos de reteno dos pesticidas analisados,
o que foi verificado pela comparao do cromatograma de uma amostra sem a adio do
padro de pesticida e da mesma amostra fortificada com os padres dos compostos
analisados a uma concentrao de 10 g L - 1 para cada analito, confirmando assim a
seletividade do mtodo analtico.

3.2.2 . Linearidade
Ao construir curvas de calibrao, foram obtidos coeficientes de determinao (R 2 )
variando de 0.9254 (malathion) a 0.9996 (ethion) ( Tabela 3 ), mostrando a forte correlao
linear entre a concentrao dos compostos analisados e as reas dos picos, permitindo a
quantificao de pesticidas em gua de coco.

Tabela 3 . Figuras de mrito obtidas para os pesticidas estudados.

Pesticida Gama linear (g L - 1 ) r2 LOD a (g L - 1 ) LOQ a (g L - 1 )

Carbofurano 1.0-25.0 0,9911 0,88 2.94

Molinado 0,5-15,0 0,9997 0,38 1.28

Sulfotep 0,5-15,0 0,9922 0,10 2.51

Demeton-O 0,5-15,0 0,9955 0,25 3.26

Dimetoato 0,25-15,0 0.9927 0,25 6,11

Diazinon 0,5-15,0 0,9957 0,10 2.53

Disulfoton 0,5-15,0 0,9974 0,10 2.37

Paratito de metilo 0,5-15,0 0.9914 0.50 6.65

Fenitrothion 0,5-15,0 0,9922 0.50 3.47

Malathion 1.0-25.0 0.9254 0,73 2.42

Fenthion 0,5-15,0 0,9951 0,10 2,96

Dursban 0,5-15,0 0,9968 0,25 2.48

Paratio 0,5-15,0 0,9913 0,25 6.69

Endosulfan 0,25-10,0 0,9984 0,10 1,99

Ethion 0,5-15,0 0,9996 0,10 2.73

Bifenthrin 0,5-25,0 0.9885 0,36 1.21

Permethrin I 0,5-15,0 0,9916 0,25 1.81

Permethrin II 0,5-25,0 0,9981 0,10 2.42

Azoxistrobina 0,5-15,0 0,9925 0,25 2.67

uma
LOD = limite de deteco; LOQ = limite de quantificao.
3.2.3 . Limites de deteco e quantificao
Os limites de deteco e quantificao foram obtidos utilizando os parmetros das curvas
de calibrao construdas e calculadas por suas relaes matemticas: LOD = 3SD / m e
LOQ = 10SD / m (onde SD = estimativa do desvio padro da linha de regresso e m =
coeficiente angular da linha de calibrao) [22] . Os limites de deteco e quantificao
encontrados para os pesticidas variaram de 0,1 a 0,88 g L - 1 e de 1,21 a 6,69 g L - 1 ,
respectivamente ( Tabela 3 ).

3.2.4 . Preciso
A preciso do mtodo analtico foi avaliada em relao aos nveis de repetibilidade,
estimando o desvio padro relativo (RSD) para cada composto analisado a partir de
medidas sucessivas ( Tabela 4 ). Foram avaliadas as reas de pico obtidas a partir da
injeo de solues padro de pesticidas em trs nveis de concentrao (1, 5 e 10 g L - 1
). No entanto, para os compostos dimetoato e endossulfo, a concentrao de 0,5 g L -
1 tambm foi medida, uma vez que foi a menor concentrao em relao s respectivas
curvas de calibrao. O mtodo mostrou uma preciso satisfatria para a maioria dos
pesticidas analisados em gua de coco, apesar da complexidade do tipo de extrao de
analito utilizada neste estudo. Para os pesticidas carbofurano e fenitroto, no foram obtidos
valores considerveis de repetibilidade para os nveis mais baixos de concentrao e,
portanto, no foram apresentados.

Tabela 4 . As mdias da rea mxima (n = 5) e o desvio padro relativo (RSD) obtidos para cada
pesticida na avaliao da repetibilidade do mtodo.

Composto 0,5 g L - 1 1 g L - 1 5 g L - 1 10 g de L - 1

rea RSD (%) rea RSD (%) rea RSD (%) rea RSD (%)

Carbofurano - - - - 4340.0 25,0 14975.6 13.3

Molinado - - 31566.6 11.3 196889.2 12.6 378529.0 6.10

Sulfotep - - 8016.2 7.95 43669.6 16,7 76874.0 14,5

Demeton-O - - 15714.6 16.3 122354.5 12.3 211692.8 14,5

Dimetoato 833.0 10.3 3311.3 4.32 24165.2 9,61 35506.6 7.11

Diazinon - - 36523.8 10,5 207875.6 18,2 324939.2 13.2

Disulfoton - - 99546.5 3.09 817022.3 37,9 1179516.8 4.99

Paratito de metilo - - 3765.3 5.89 32950.8 19.1 52343.8 8.68

Fenitrothion - - - - 104945.0 21.1 384215.0 10.4

Malathion - - 23396.8 15.6 35880.75 13.6 91883.4 18,5

Fenthion - - 65840.5 9.91 244304.2 13.5 724325.8 12.2

Dursban - - 61876.7 9.70 257517.2 9.56 737409.2 11.4

Paratio - - 3193.2 9.87 13300.2 17,2 38411.4 8.63

Endosulfan 1261.6 14,5 6586.7 7.46 25121.4 8.28 69107.6 10.1

Ethion - - 31874.5 7.71 90983.6 14,6 292495.2 15.4

Bifenthrin - - 10324.3 7.16 23774.7 17,9 47672.6 7.53

Permethrin I - - 3476.3 6.78 8942.8 16,9 21943.8 12,5

Permethrin II - - 8677.0 3.95 23752.5 19.3 62438.8 14.0

Azoxistrobina - - 8775.8 12.3 16148.4 19,9 39810.2 21.4

3.2.5 . Preciso
A preciso do mtodo analtico foi avaliada por experincias de recuperao ( Tabela 5 ).
possvel observar que, em geral, o mtodo mostrou uma boa recuperao para compostos
cujos valores mdios foram includos nos limites aceitveis (entre 50% e 120%, devido
complexidade da extrao de analitos usando SDME como extrao / tcnica de pr-
concentrao).

Tabela 5 . Recuperao de compostos fenlicos em amostras de gua de coco. uma

Composto Concentrao na amostra (g L - 1 ) Concentrao adicionada (g L - 1 )

0,5 1 5 10

Recuperao (%)

Carbofurano ND NQ 110 99,3

Molinado ND 37.1 78.2 72,6

Sulfotep ND 133 90,5 104

Dimetoato ND 160 93.4 106

Demeton-O < LOD 80.0 117 92.2

Diazinon ND 142 119 102

Disulfoton < LOQ 55.3 75,7 83.2

Paratito de metilo ND 114 128 102

Fenitrothion 5.51 72,6 133 110

Malathion 3.57 95.4 86,4 95,9

Fenthion ND 121 89.2 102

Dursban ND 110 55,9 77.4

Paratio ND 118 82.6 84.2

Endosulfan ND 28.3 28.3 30.4

Ethion ND 88.3 52,7 57,0

Bifenthrin ND NQ 65,6 82.1

Permethrin I ND 27,9 40,7 49,6

Permethrin II ND 54,0 40,5 40.6

Azoxistrobina ND 160 143 100

uma
ND = no detectado; NQ = no quantificado; < LOD = inferior ao limite de deteco; < LOQ =
inferior ao limite de quantificao.

importante notar que, para alguns compostos, como a permetrina I e a permetrina II,
foram obtidos valores de recuperao baixos (39,4% e 45,0%, respectivamente), uma vez
que so compostos que apresentam coeficientes de partio relativamente baixos ( Tabela
1 ), apresentando assim uma maior afinidade para a fase aquosa. Portanto, possvel
notar uma maior dificuldade de migrao desses analitos da fase aquosa (amostra) para a
fase orgnica (queda).

Para o endossulfo composto, apesar de ter um coeficiente de partio relativamente

elevado em comparao com outros analitos, observou-se uma anormalidade no
comportamento durante o processo de extrao, uma vez que o valor de recuperao
obtido foi baixo (29,0%) e deve apresentar maior afinidade para a fase orgnica e, portanto,
uma melhor extrao. A dificuldade na extrao deste composto provavelmente est
relacionada sua interao com outras substncias presentes na gua de coco. Este fato
pode ser explicado pela maior polaridade das molculas de compostos organoclorados, em
comparao com outras classes de compostos, tais como os organofosfatos, que
promovem uma maior afinidade para as fases aquosas do que para as fases orgnicas,
prejudicando assim a extrao dessas substncias.

3.3 . Aplicao do mtodo a amostras reais de gua de coco

Aps a obteno das melhores condies para a extrao / pr-concentrao dos
pesticidas e a validao do mtodo, foi aplicado na avaliao desses analitos em amostras
de gua de coco industrializada e natural. A Tabela 6 mostra as concentraes de
pesticidas encontradas em amostras de gua de coco.

Tabela 6 . Concentraes de pesticidas (g L - 1 ) encontradas para amostras de gua de coco

industrializada e natural.

Pesticida Concentrao (g L - 1 ) a

Marca 1 Marca 2 Marca 3

Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lo
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4

Carbofurano ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Molinado ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Sulfotep ND ND ND ND ND ND ND < ND ND ND ND ND ND
LOQ

Dimetoato < ND ND 12,1 ND ND < ND ND ND ND < ND ND

LOQ LOQ LOQ
7,48

Demeton-O < < < < < ND < < < < < < < ND
LOQ LOQ LQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ

Diazinon ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Disulfoton ND ND ND ND < ND < ND ND ND ND ND ND ND

LOQ LOQ

Paratito de ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
metilo

Fenitrothion < < < < 5,51 < < < < < < < < ND
LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ LOQ
1,37

Malathion 3,41 4,23 3,28 3,70 3,57 ND 3,31 3,52 ND ND 5,57 5,11 3,65 ND

0,27 0,82 0,06 0,58 0,70 0,18 0,90 2,43 0,24 0,80

Fenthion ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Dursban ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Paratio ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Endosulfan ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Ethion ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Bifenthrin ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Permethrin I ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Permethrin II ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

Azoxistrobina ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

uma
Mdia desvio padro; ND = no detectado; < LOQ = abaixo do limite de quantificao.

By the results obtained, it is possible to observe that the pesticides found in the samples of
coconut water were sulfotep, demeton-O, dimethoate, disulfoton, fenitrothion and malathion.
Among the analytes found in the analyzed samples, the concentrations ranged from < LOQ
to 12.1 g L 1 (dimethoate). It is noteworthy that, among the pesticides found in the
analyzed samples, the insecticides and acaricides most commonly used to control the
action of pests in palm crops are dimethoate and malathion [6], which showed the highest
concentrations in samples of coconut water, especially in the samples of industrial origin.

Studies performed by Deme et al. [3] using solid phase extraction (SPE) followed by LC
MS/MS analysis showed that, among the pesticides analyzed in coconut water, only
malathion was found in 23% of the samples, at concentrations ranging from 24 to
45 ng L 1. The authors comment that the detection of this analyte in the samples was
possible only after the execution of different preconcentration steps of the samples. In this
context, the method proposed in this study has the advantage of simplicity and execution of
only one step for the extraction and preconcentration of the samples.

Other studies reported in the literature using different instrumental methods and techniques
of extraction/preconcentration were applied in the analysis of pesticides in coconut water.
Techniques such as matrix solid-phase dispersion (MSPD) followed by analysis by liquid
chromatography with ultraviolet detection or gas chromatography coupled to mass
spectrometry showed that it was not possible to detect pesticide residues in samples of
coconut water, probably because they did not reach detection levels compatible for this type
of analysis [7,28].
Because there is no specific legislation for the presence of pesticides in coconut water, the
results obtained in this study were compared to the drinking water standards for chemicals
that present health risk. Brazilian law establishes maximum limits for two pesticides used in
this study, endosulfan (20 g L 1) and permethrin (20 g L 1) [29], while international law
establishes a maximum allowable limit of 40 mg L 1 for the pesticide carbofuran in drinking
water [30]. Thus, the results obtained for these pesticides in coconut water were below the
limits set in relation to Brazilian and international legislation for drinking water, since they
were not detected in the analyzed samples.

4. Conclusions
After obtaining the optimal experimental conditions for SDME, the developed method was
successfully applied to real samples of coconut water, being fast and efficient. The method
enabled the identification and quantification of pesticides from different chemical classes in
the samples analyzed, and the presence of the pesticides sulfotep, demeton-O, dimethoate,
disulfoton, fenitrothion and malathion was verified. It was found that the highest
concentrations of pesticides were observed for samples of industrialized coconut water,
since there is great concern on the part of the industry to have a good performance in its
production.

Acknowledgments
The authors wish to thank Brazilian agencies who have funded this work: CAPES, CNPq,
FAPESB, PRONEX and INCT (Energy and Environmental).

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