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Microscopa

Norleyn Navas Guzmn, M.Sc


Resvis: Luis E. Ruiz, M.Sc
Universidad del Atlntico
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Objetivos
Identificar las partes de un microscopio.
Explicar diferencias entre la microscopa ptica
y la electrnica.
Identificar el uso de los distintos microscopios.
Definir magnificencia y resolucin.

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Microscopio
Instrumento utilizado para observar objetos demasiado
pequeos que no pueden verse a simple vista.

Los primeros microscopios utilizaban una sola lente,


similares a una lupa.
Microscopios de Leeuwenhoek: 300x

R. Hooke, Zacharias Janssen (1600)


Microscopios compuestos de varios lentes
Baja calidad, no observacin de bacterias

Joseph Jackson Lister (1830)


Microscopio de mayor calidad
Mejoras al microscopio de Lister dieron paso al
microscopio moderno.
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Tipos de Microscopios
ptico o de luz Electrnico
Usa un rayo de luz para Usa un haz de electrones
iluminar los objetos, que y sus lentes son imanes
entonces son magnificados en vez de lentes de
y enfocados por lentes de cristal.
cristal.

Campo claro Rastreo


Campo oscuro Transmisin
Contraste de fase
Fluorescencia
Nomarsky
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Partes del microscopio ptico compuesto

Lentes oculares

Anillo de enfoque
Cabezal
Brazo
Revlver

Lentes objetivos Ajuste


mecnico de
Platina la platina

Condensador Tornillo
macromtrico
Diafragma
Tornillo
Iluminador
micromtrico

Base

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Partes del microscopio


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Base
Sostn del instrumento.
Columna o brazo
Sostiene los lentes oculares y los lentes objetivos.
Platina
Superficie para colocar la laminilla.
Ajuste mecnico de la platina
Ajuste para mover la laminilla.
Revlver
Contiene los lentes objetivos.
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Partes del microscopio


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Lentes objetivos.
Lentes principales del microscopio. Estos lentes
son parafocales porque permiten que la imagen
quede casi enfocada al cambiar de objetivo.
Usualmente hay cuatro lentes objetivos:
a. Rastreo magnifica cuatro veces (4x)
b. Baja potencia 10x
c. Alta potencia 40x
d. Inmersin de aceite 100x
Cabezal
Contiene los lentes oculares.
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Partes del microscopio


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Lentes oculares
El microscopio es monocular si tiene un ocular y binocular
si tiene dos oculares.
Los oculares magnifican diez veces (10x) y uno de ellos
puede tener un puntero.
Anillo de enfoque del lente ocular izquierdo
Se usa para enfocar bien la imagen con el ojo izquierdo
luego de haber enfocado con el ojo derecho; este ajuste
compensa por la diferencia entre la agudeza visual de
ambos ojos.
Ajuste de distancia interpupilar
Aumenta o disminuye la distancia entre los lentes oculares
para compensar por diferencias en la distancia entre los dos
ojos.
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Partes del microscopio


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Tornillo macromtrico o ajuste grueso


Sube y baja la platina rpidamente.
Slo se usa con los lentes objetivos de 4x y 10x.
Tornillo micromtrico o ajuste fino
Sube y baja la platina muy lentamente.
Se usa con todos los lentes objetivos para perfeccionar
el enfoque de la imagen.
Iluminador o lmpara
Provee una intensidad variable de iluminacin.
Interruptor
Prende y apaga el iluminador.
Indicador de encendido.
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Ajuste de iluminacin
Controla la intensidad de la iluminacin
Condensador
Enfoca la luz en el plano de la laminilla.
Ajuste del condensador
Sube y baja el condensador, aunque ste siempre
debe quedar un poco por debajo de su posicin
ms alta.
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Diafragma
Controla el dimetro del rayo de luz que llega a la
laminilla.
No debe usarse para aumentar o disminuir la
intensidad de la iluminacin.
Al disminuir la apertura del diafragma, se
aumenta el contraste de la imagen y la
profundidad del foco, pero se disminuye la
resolucin.
Para obtener la mejor imagen posible hay que
cambiar la apertura del diafragma cada vez que
cambia el lente objetivo.
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Partes del microscopio


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Filtro azul
Absorbe el exceso de luz roja y amarilla que
produce el iluminador de tungsteno para que la
iluminacin sea ms similar a la luz natural.
Cordn elctrico
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Microscopios pticos
Microscopio de campo claro
Utiliza luz visible como fuente de
iluminacin.
La muestra aparece contra un fondo
claro.
No puede resolver estructuras con
tamao menor a 0.2 m.
Se usa para observar muestras
tenidas y para el conteo de
microorganismos.

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Microscopios pticos
Microscopio de campo oscuro
Fondo negro sobre el cual se ven los
objetos intensamente iluminados.
Se logra mediante el uso de un
condensador especial.
Se dirigen al objetivo solo los rayos
de luz que tropiezan con un objeto
en la muestra.

Ventajas: se observa la forma y


motilidad de los organismos vivos
sin tener que teirlos.
Ejemplo: Espiroquetas (Sfilis) no se
tien con tintes convencionales

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Microscopios pticos
Microscopio de contraste de fase

La muestra se ilumina por medio de objetivos y condensadores


especiales.
Se observan estructuras celulares internas que difieren en su ndice
de refraccin y que no se pueden ver en el de campo claro.

Ventajas: distinguir detalles estructurales en clulas vivas sin fijar


ni tenir la muestra.

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Microscopios pticos
Microscopio de
fluorescencia

Usa luz ultravioleta en vez de


luz visible.

Los organismos o clulas con


compuestos fluorescentes
emiten luz visible al
iluminarlos con luz
ultravioleta, por lo cual brillan
sobre un campo oscuro.

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Microscopio electrnico
Utiliza haz de electrones en vez de luz y lentes
electromagnticas en vez de lentes de cristal.
Observacin de objetos con tamaos menores a
0.2 m.
Virus
Estructuras celulares internas
Imgenes producidas siempre son negras y
blancas.

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Microscopios electrnicos
Microscopio Electrnico de
Rastreo o Barrido (MEB)

Imgenes tridimensionales de las


superficies de las estructuras.
Utilizado para visualizar parte
externa, superficies.
Produce aumento de 1.000 a
10.000x.

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Microscopios electrnicos
Microscopio Electrnico de
Transmisin (MET)

Imgenes planas de organelos,


capas distintas de una muestra.
Utilizado para visualizar parte
interna.
Produce aumento de 10.000 a
100.000x
Cortes delgados de la muestra no
permite observar imgenes
tridimensionales.

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Imagen en diferentes microscopios

Campo claro Campo oscuro Contraste de fases

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Transmisin Barrido
Tomado de Introduccin a la Microbiologa, Tortora. 2007.
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Conceptos en microscopa
Magnificacin: capacidad de aumentar el
tamao de la muestra.
El aumento se calcula multiplicando el aumento
(potencia) del objetivo por el aumento (potencia)
del ocular.
Aumento del ocular: 10x
Aumento de los objetivos
Objetivo 4x: rastreo
Objetivo 10x: bajo poder
Objetivo 40x: alto poder
Objetivo 100x: aceite de inmersin
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Conceptos en microscopa
Resolucin: Capacidad de las lentes de
distinguir por separado dos puntos adyacentes y
cercanos, es decir, distinguirlos como
individuales.
Ejemplo: un microscopio con poder de resolucin
de 0.4 nm, distingue dos puntos como objetos
separados si se encuentran a 0.4 nm de distancia.

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Relaciones entre los


tamaos de diversas
muestras y la resolucin
del ojo humano, el
microscopio ptico y el
microscopio electrnico

Tomado de Introduccin a la Microbiologa, Tortora. 2007.


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Profundizacin
1. Cules son las diferencias entre microscopio simple y
compuesto?
2. Cules son las diferencias entre microscopio ptico y
electrnico?
3. Cmo se calcula el aumento que tiene un microscopio sobre
un objeto?
4. Qu es poder de resolucin?
5. Cul es el propsito de utilizar aceite de inmersin?
6. Cules son las caractersticas de cada uno de los tipos de
microscopios?
7. Identifica las partes del microscopio.
8. Qu funcin tiene cada una de las partes del microscopio?
9. Cul es el procedimiento bsico para usar un microscopio?
10. Qu cuidados deben tenerse al usar un microscopio?

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Recursos
Web link
http://www.cellsalive.com/toc_microsc.htm
http://www.olympuslatinoamerica.com/spanish/
ola_aboutolympus_microscopes_esp.asp

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Referencias
Tortora, G. J., B. R. Funke y C. L. Case. 2007.
Introduccin a la Microbiologa. 9a ed. Medica
Panamericana.
Madigan, M. T., J. M. Martinko, and J. Parker. 2002.
Brock Biology of Microorganism. 10th ed. Prentice
Hall. NJ.
Harley, J. P. 2005. Laboratory Exercises in
Microbiology. 6th ed. Mc Graw Hill. NY.

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