Tema 26.

Metabolismo del grupo amino de los aminocidos.

Enzimas clave del metabolismo de aminocidos. Origen del nitrgeno de la
urea. Transaminasas y vitamina B6. Glutaminasa. Glutamato dehidrogenasa.
Glutamina sintetasa. Trasnporte de nitrgeno al hgado. Ciclo de la glucosaalanina.
Toxicidad del amonio en animales. Eliminacin del grupo amino. Estrategias. Ciclo
de la urea. Relacin con el ciclo de los cidos tricarboxlicos. Regulacin del ciclo
de la urea. Enfermedades metablicas relacionadas con el ciclo de la urea

BIOQUMICA 1 de Medicina
Dpto. Biologa Molecular
Javier Len

Tema 26 08-09 1

Molculas de excrecin del amonaco/amonio en animales terrestres

1. El amonaco es una base fuerte y podra producir un cambio de pH

NH4+ NH3 + H+ pK = 9,3

A pH fisiolgico (7,4) la concentracin de NH4+ es casi 100 veces la del NH3, que es la forma
neutra, permeable a membranas.

Formas de excrecin
de amonio en
animales terrestres Urea Acido rico
Mamferos Reptiles
tiburomes Aves

Friedrich Whler (1800-1882)

Tema 26 08-09 2
 Catabolismo de aminocidos
Protena
intracelular

DEGRADACION SNTESIS DE PROTENAS (TRADUCCIN)

DE PROTEINAS

Protena de la Aminocidos
DIGESTION
dieta

NH4+
Esqueletos carbonados
Biosntesis de AA, nucletidos y
otras aminas biolgicas

-cetocidos
Carbamil-fosfato

Acetil-CoA
Asp

CICLO CICLO
DE LA DE
UREA Fumarato KREBS
Cuerpos
cetnicos

Oxalacetat
Urea co2 o
(producto de GLUCONEO-
excrecin del GNESIS
nitrgeno)
Glucosa

Tema 26 08-09 3

1. El amonio (-> NH3) es txico, sobre todo para el tejido nervioso

2. El amonio se convierte en urea en el hgado

El amonio se ha de transportar al hgado en una forma distinta de NH4+

AA Glu Gln y Ala SANGRE Gln y Ala NH4+ Urea

TEJIDOS HIGADO

Enzimas clave del metabolismo del grupo amino

Transaminasas o aminotransferasas: pueden transferir grupos aminos entre aminocidos

Glutaminasa: genera NH4+ y glutamato a partir de Gln.

Glutamato dehidrogenasa: produce NH4+ y -CG a partir de Glu en una reaccin de

desaminacin oxidativa. En hgado. Reversible

Glutamina sintetasa: incorpora NH4+ en Glutamato

CINCO ENZIMAS DEL CICLO DE LA UREA:

La Carbamil-fosfato sintetasa: condensa CO2 y NH4+ para dar carbamil-fosfato

Tema 26 08-09 4
 Reacciones bioqumicas que generan amonio

1. Aminotransferasas + glutamato dehidrogenasa (GDH)

NH3+ Aminotransferasas
R-CH + -CG -ceto-AA + Glu
COO- (suelen usar -CG y son
especficas para el AA)

Glutamato dehidrogenasa
Glu + NAD+ -CG + NADH+ + NH4+
(deaminacin oxidativa)

3. Glutaminasa Gln + H2O Glu + NH4+

4. Desaminacin directa (Ser-dehidratasa y Thr dehidratasa)

Menos Ser Piruvato + NH4+

importantes
Thr -cetobutirato + NH4+

5. Aminoacido oxidasa

AA + O2 + H2O -cetoAA + H2O2 + NH4+

Tema 26 08-09 5

Reacciones de transaminacin: aminotransferasas, transaminasas

Aminotransferasa
NH3+ O o transaminasas O NH3+

H CCOO- + CCOO- CCOO- + HCCOO-

R1 R2 R1 R2
CH2OH
H O C H2 OH

N H+ C H3

Piridoxina (Vit B6)

H O NH2
C CH2
-2O P O C H OH -2O P O C H
3 2
3 2 OH

N H+ C H3 N H+ C H3

Fosfato de Piridoxal (PLP) Fosfato de Piridoxamina (PMP)

Grupo prosttico de las transaminasas, unido

covalentemente a una Lys del centro activo

Tema 26 08-09 6
 Mecanismo enzimtico de las aminotransferasas es del tipo ping-pong

H2O
R1
+
ENZ-PLP-C O ENZ-PLP-C N C COO-
H H

Aminocido 1 -Cetocido 1
ENZ-PMP-C NH2

-Cetoglutarato
Glutamato
CH2-CH2-COO-
+
ENZ-PLP-C O ENZ-PMP-C- N CCOO-
H H
H O
C NH2
CH2
-2O P
3
OCH2 OH
-2O P O C H OH
3 2

NH+ CH3
NH+ CH3

Fosfato de Piridoxal (PLP) Fosfato de Piridoxamina (PMP)

Tema 26 08-09 7

Hay dos transaminasas que informan de la salud del hgado y corazn

GPT / ALT
Ala + -cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Ms especfica de dao heptico

GOT / AST
Asp + -cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
GOT: Glutamato-Oxalacetato Transaminasa = AST: Aspartato Transaminasa

Valores normales en sangre: 2-40 mU /ml. Puede llegar a 1000 en casos de hepatitis
viral, cirrosis, isquemia cardiaca, hepatotoxicidad

Tema 26 08-09 8
 Regulacin alostrica
ADP GTP

+ -
COO COO
+H N
NAD(P)+ NAD(P)H + H+
3 - CH -O
C
+ H2O
+ NH4+
CH2 CH2
CH2 Glutamato Dehidrogenasa CH2
COO (GDH) COO
Glutamato (Matriz mitocondrial, - Cetoglutarato
hgado, reversible,
puede usar NAD+ o NADP+)

Suma de las reacciones de aminotransferasas y GDH:

Aminocido + NAD+ -cetocido + NH4 (mitoc)+ NADH +
H+
UREA

H2O NH4+

COO COO
+ +
H3N CH H3N CH

CH2 CH2 Glutamato

Glutamina
CH2 Glutaminasa CH2
C (Matriz mitocondrial, COO
H2N O hgado)

Tema 26 08-09 9

Glutamina Sintetasa

ATP ADP NH4+ Pi

COO COO
COO
+
+ +H N- CH H3N CH
H3N CH 3

CH2 CH2
CH2
CH2 CH2
CH2
C C
COO
P O O H2N O

Glutamato - Glutamil fosfato Glutamina

Gln sintetasa y GluDH presentes en

todos los organismos 12 subs x 50 kDa.
Gln Sintetasa: citoslica Citoslica
GDH: mitocondrial

Glutaminase en todos los tejidos, ms

abundante en intestino, hgado,
rin, cerebro (astrocitos)

Tema 26 08-09 10
 Regulacin alostrica de la Gln Sintetasa

Glutamato
Gly
NH4 +
ATP

- Gln Sintetasa - Ala

ADP + Pi
Regulacion
covalente

Glutamina
AMP CTP
Qu enzima?
(entra para
examen)

Carbamil-fosfato

Nucletidos de pirimidina

Tema 26 08-09 11

Transporte de N al hgado
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina MAYORIA
Transa- Gln Sintetasa DE
minasas -cetocido ADP+ Pi+ H2O
TEJIDOS

NH4+ Gln Sintetasa

Glutaminasa CICLO UREA

Glutamato Glutamina DE LA
a as

UREA
amin

NH4+
NH4+
Glut

Glutamato -Cetoglutarato
Glutamato DH
(INTES.) HIGADO
Glutamina
Piruvato Alanina Asp
Transaminasa
Transa-
OAA
minasas
+
Bacterias GLUCOSA Glutamato
AA
SANGRE

GLUCOSA Piruvato Alanina

Transaminasas

Glutamina Glutamato -cetoglutarato

MUSCULO
PROTEINAS
Transaminasas
Cetocido Aminocido

Tema 26 08-09 12
 Transaminasas com marcadores de dao heptico
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina MAYORIA
Transa- Gln Sintetasa DE
minasas -cetocido ADP+ Pi+ H2O
TEJIDOS

NH4+ Gln Sintetasa

Glutaminasa CICLO UREA

a Glutamato Glutamina DE LA
as
UREA
amin

NH4+
NH4+
Glut

Glutamato -Cetoglutarato
Glutamato DH
(INT.) HIGADO
Glutamina
Piruvato Alanina Asp
Transaminasa
Transa-
OAA
minasas
+
Bacterias GLUCOSA Glutamato
AA

GPT / ALT
Ala + -cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Ms especfica de dao heptico

GOT / AST
Asp + -cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato

Tema 26 08-09 13

A
Ciclo de la glucosa-alanina

Asp
-Cetoglutarato
CICLO
Transaminasa DE LA
UREA
NH4+

Glutamato -Cetoglutarato
Glutamato DH
UREA
Transaminasa
Piruvato ALANINA
HIGADO
Gluconeognesis
GLUCOSA

SANGRE

GLUCOSA Piruvato ALANINA

Glucolisis
Transaminasa

Glutamato - cetoglutarato

MUSCULO PROTEINAS
Transaminasa
Cetocido Aminocido

Tema 26 08-09 14
 Posibles causas de la toxicidad del amonio
Concentracin de amonio en sangre: 30-60 M. Supone el 2-3% del nitrogno excretado en orina
(85% es urea, 30 g/24 h; el resto creatinina, creatina y cido rico)
A concentraciones mayores de amonio (>0.2 mM): visin borrosa, prdida de conciencia, letargia,
lesiones cerebrales, coma.
El mal funcionamiento del ciclo de la urea por deficiencia en alguna de sus enzimas o por patologa
heptica (por ej cirrosis alcohlica) produce hiperamonemia.

POSIBLES CAUSAS:
1) Bajan los niveles de -cetoglutarato al empujar la reaccin de la GluDH hacia la formacin de Glu y
la de la Gln sintetasa hacia formacin de Gln (ambas enzimas abundantes en tejido nervioso)
baja la actividad del ciclo de Krebs baja la produccin de ATP en la neurona

2) Baja la relacin NADH/NAD+ baja la produccin de ATP

NH4+ NH4+ + NADH+ + H+

Glutamina Glutamato - Cetoglutarato
Gln Sintetasa Glutamato DH
NAD+

3) Bajan los niveles de glutamato al acelerar la sntesis de Gln por la Gln Sintetasa Baja la
concentracin del neurotransmisores glutamato y su derivado gamma-aminobutirato (GABA)

4) El exceso de Gln es txico para astrocitos

Tema 26 08-09 15

De dnde viene el nitrgeno que entra en el ciclo de la urea?

Uno de los dos nitrgenos de la urea viene del NH4+ libre y el otro del NH2
del aspartato
1. Reacciones de transaminacin por transaminasas + glutamato dehidrogenasa
NH3+
R-CH + -Cetoglutrato (-CG) -ceto-AA + Glu
COO-

Glu + OAA -CG + Asp

GOT / AST

Reaccin de la glutamato dehidrogenasa (deaminacin oxidativa)

Glu + NAD+ -CG + NADH+ + NH4+

2. Reaccin de la glutaminasa
Gln + H2O Glu + NH4+

Tema 26 08-09 16
 Ciclo de la Urea (1)
(ciclo de la ornitina, ciclo de Krebs-Henseleit)

Carbamil fostato sintetasa I (CPSI, mitocondrial)

por qu se necesitan dos ATPs si slo hay un fosfato en el carbamil-fosfato?

Pi + H+

O-
C P O C NH2
HO + NH4+ + 2 ATP
O
O
2ADP Carbamil-fosfato
Bicarbonato

Qu otras enzimas humanas

con capaces de fijar el NH4+ en
otras molculas orgnicas?

Tema 26 08-09 17

Ciclo de la Urea (2)

O
P O C NH2
O
Carbamil-P HN C NH2
H3N+ CH2
CH2
Ornitina CH2
Entrada a la mitocondria CH2 Transcarbamilasa
CH2
CH2
H2N CH COO-
H2N CH COO-
Orn Pi Citrulina
Ornitina

ol
a al citos
Salid
COO-

CH2
Aspartato -OOC

CH CH2
+H N COO-
3
O CH

HN C NH2 NH COO-
CH2 Arginino-succinato HN C NH2+
CH2 sintetasa CH2

CH2 CH2

H2N CH COO- CH2

Citrulina ATP AMP + PPi H2N CH COO-

Arginin-succinato
2 Pi
Tema 26 08-09 18
 Ciclo de la Urea (3)

-OOC
-OOC
CH
CH2
Fumarato
HC
COO-
CH
NH COO- NH2
HN C NH2+
HN C NH2+
CH2 Arginino-Succinato
CH2
CH2 Liasa CH2
CH2
CH2
H2N CH COO-
H2N CH COO-

Arginin-succinato Arginina
H2O

a sa
rg in
+ NH3 A
CH2
NH2
CH2
+ O C NH2
CH2
H2N CH COO- UREA
Ornitina

Excreccin (no podemos metabolizarla)

Tema 26 08-09 19

Protenas de la dieta
(Reqerimiento: 50-60 g/da para
70 Kg peso)
EXCESO DE
PROTS. DIETA

Otras rutas SINTESIS

biosintticas: Pool de ~ 300 g
Protena
Glucosa aminocidos tisular
Bases ~ 100 g DEGRADACIN
Hormonas ~ 300 g
etc
DEGRADACIN
Y
EXCRECIN

Urea en orina
~ 30-40 g /da

Tema 26 08-09 20
 Composicin de la orina

No es necesario
aprenderse estos
nmeros

1. Urea es el 85-90% del nitrgeno en

orina (20-35 g / 24 h).
2. Amonio es 2-3% (0.7-1 g)
3. El resto de compuestos nitrogenados
(10%): cido rico, creatinina , creatina

Urea (20-35 g/24 h) >> NH4+ > creatinina > rico >>
otros componentes orgnicos no nitrogenados*

* Aminocidos (1-3 g) >> cuerpos cetnicos, glucosa, protenas

Tema 26 08-09 21

a
in as
Urea N2COH4 g
Ar
Orn Citrulina Arg Urea Amonio, NH4+

Acido rico N4C5O3H4

Orn Citrulina Arg
Y
LehningeCHEMISTR
BIO r

Urea N2COH4

Tema 26 08-09 22
 Balance del ciclo de la urea

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+ 2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa
H2O
Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato

Arg-succinato sintetasa ATP

Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

BALANCE (sin tener en cuenta el fumarato)

NH4+ + HCO3- + Asp + 3ATP4- + H2O

urea + fumarato + 2ADP3- + 2Pi + PPi + AMP2- + 5H+

2 Pi + H2O se gastan 4 ATPs

http://www.wiley.com/college/fob/quiz/quiz20/20-8.html en total por urea
Tema 26 08-09 23

Relaciones entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos (1)

AMINOACIDOS MITO-
CONDRIA

+
Aspartato
NH4
CO2
-cetoglutarato

Glutamato
Carbamil-P
Citrulina Aspartato
3
Oxalacetato

Oxalacetato
Arginin-
Ornitina UREA Succinato
2
NADH

Malato Malato

Arginina Fumarato 1
UREA H2O

1 Fumarasa: isozimas citoslica y mitocondrial

2 Malato dehidrogenasa: isozimas citoslica y mitocondrial

Malato + NAD+ OAA + NADH + H+ ; NADH 2,5 ATPs

BALANCE GLOBAL DE LA SINTESIS DE UREA = 4 - 2.5 = 1,5 ATP
3 GOT/AST aminotransferase

Tema 26 08-09 24
 Relaciones entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos (2)

-ceto-Glu
Aspartato Aspartato Citrato
3
3 Glu
Acetil-CoA
Oxalacetato Oxalacetato Isocitrato
CICLO 2
NADH
UREA 2 NADH
CO2
Malato Malato

1 1 CICLO a-Cetoglutarato
H2O
H2O KREBS
Fumarato Fumarato
CO2
Succinil-CoA

Succinato

1 Fumarasa: isozimas citoslica y mitocondrial

2 Malato dehidrogenasa: isozimas citoslica y mitocondrial
3 GOT/AST aminotransferase

Lanzadera Aspartato-Malato
Ciclo de Krebs -TCA

Tema 26 08-09 25

Regulacin del ciclo de la urea

Induccin de enzimas por dieta rica en protena

Regulacin alostrica de la CPSI

AcetilCoA Arginina
COO-
O
CH2
CH3 C
SCoA
O
+ CH3 C
HN
CH2

CH COO-
COO- N- Acetil-Glutamato
Sintasa N- Acetil- Glutamato
CH2

CH2
HS-CoA
H2N CH COO-

Glutamato

+ O
CPS-I
HCO3- + NH4+ H2N C O P Urea
Carbamil-fosfato
2ATP 2ADP
+ Pi

Tema 26 08-09 26
 El ciclo de la urea est compartimentalizado en la clula y en el hgado

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+ 2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa
Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato
Arg-succinato ATP
sintetasa
Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

Glutamina
SANGRE portal sintetasa
(del intestino)
Glu + NH4+ Gln
Glutaminasa
Ciclo urea
SANGRE
(al resto de tejidos)
Gln Glu + NH4+
NH4+ urea
Tema 26 08-09 27

Enfermedades metablicas del ciclo de la urea

Nombre Dficit enzimtico Otras caractersticas

1) Deficiencia en CPS CPS I Glicina en plasma aumentada

(Hiperamonemia I)
2) Deficiencia en OTC
(Hiperamonemia tipo II)
3) Citrulinemia
Orn Transcarbamilasa Glutaminia en plasma aumentada
(OTC) Ligada al X. Retraso mental
Arginino succinato Gln y Citrulina aumentadas en plasma
sintetasa Citrulina en orina aumentada. Rara

4) Arginino succinato aciduria Arginino succinato liasa Arginin- succinato en plasma y orina. Rara

5) Argininemia Arginasa Arginina elevada en plasma

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+ 2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa
Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato
Arg-succinato ATP
sintetasa Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

Tema 26 08-09 28
 Tema 26. Cuestiones

1) Si el pK de la disociacin del amonio es 9,3, qu porcentahje estar en forma d NH3 y en forma NH4+ a
pH 7,4?

2) Citar dos analogas entre el ciclo de glucosa-alanina y el ciclo de Cori

3) El amonio producido en el msculo se transporta al hgado preferentemente en forma de Ala, pero podra
hacerlo en forma de Gln, como otros tejidos: por qu crees que se utiliza Ala para esta funcin?

4) Qu aminocidos pueden sintetizarse directamente a partir de intermediarios del ciclo d Krebs por
reacciones de transaminacin?

5) Dibuje la estructura y d el nombre del - cetocido resultante de la transaminacin de Aspartato,

Glutamato, Alanina y Fenilalanina. Escriba una reaccin catalizada por alguna transaminasa que se mide en
suero para detectar dao heptico, indicando nombre de enzimas, molculas y estructuras

6) Las manifestaciones clnicas de las deficiencias en el ciclo de la urea aparecen en el periodo neonatal. Los
nios son normales al nacer pero a las 24 h empiezan a desarrollar letargia, hipotermia y apnea, acompaados
de altos niveles de amonio en sangre. Dados las concentraciones de metabolitos en sangre que se indican
abajo, determinar qu enzima del ciclo puede ser deficiente en cada caso:
Nio Citrulina Arginina Amonio
I Baja Baja Alta
II Alta Baja Alta
III Normal Alta Moderadamente alta

7) En respuesta a la acidosis metablica se observa que hay ms Gln en el rin y menos en el hgado : cul
es la razn bioqumica?

8) Escribir las reacciones y nombrar tres enzimas que permiten incorporar in amonio/amoniaco en otras
molculas
Tema 26 08-09 29

9) Una dieta de reduccin de peso muy promocionada hace algunos aos requera la ingestin diaria de
protena lquida (sopa de gelatina hidrolizada) agua y un surtido de vitaminas. Deban evitarse cualquier
otra comida o bebida. La gente perda generalmente entre 5 y 7 kilos en la primera semana. Los oponentes
argumentaban que la prdida se deba casi exclusivamente a agua por lo que se recuperara casi
inmediatamente cuando se volviera a la dieta normal. Cul es la base bioqumica argumento? Cules son
algunos de los peligros inherentes a esta dieta?

10) Cuando se aade 15NH4+ a un homogenado de hgado se detecta urea marcada con 15N en un solo tomo de
N a los pocos minutos. A tiempos ms largos, aparecen marcados los dos atamos de N de la urea. Describe
las reacciones bioqumicas que explican por qu no aparecen los dos N marcados desde el principio

11) Qu diferencia la regulacin del ciclo de la urea de regulacin de la mayora de las rutas metablicas?

12) Los pacientes de cistinuria tienen mutado el gen de un transportador de aminocidos (SLC3A1 ) y
excretan cantidades anormalmente altas de cistina, as como Orn, Lys y Arg. Estos pacientes suelen sufrir
clicos por piedras de cistina. Hay otra enfermedad caracterizada por la aparicin de altas
concentraciones de Orn, Lys y Arg en orina, pero con niveles normales (muy bajos) de cistina a) Qu es la
cistina y cmo se forma?. b) Qe caractersticas comparten los 4 aminocidos citados que los hacen
sustrato de un mismo transportador?. c) A partir de los datos aportados: crees que hay otros
transportadores de algunos de los aminocidos citados, aparte del SLC3A1?. d) Como distinguir entre
aminoacidurias debidas a defectos en algn transportador y las debidas a defectos en alguna enzima del
catabolismo del aminocido?
13) En qu caso esperaras un mayor efecto en la sntesis de urea: un defecto en fumarasa o un defecto en
Ala aminotransferasa?

14) Se incuba un corte de hgado con malato marcado radiactivamente (C14) en el carbono 2 y con aspartato
marcado con N15. En qu intermediarios o productos del ciclo de la urea aparecer la radiactividad?

15) Un paciente con hiperamonemia tiene un defecto congnito en el ciclo de la urea. Se le ha remediado en
buena medida con la administracin de carbamil-glutamato, un anlogo estructural del N-acetil-glutamato.
Explicar cul es la reaccin enzimtica que es defectuosa en este paciente
Tema 26 08-09 30