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TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Se basan en la biologa molecular, el DNA se contiene informacin que se va a transformar en rna, y este produce
como mensajero una protena hoy se sabe ms y no solo produce una protena, sino que diversas molculas

DNA, rna y protenas

PCR: amplifica muchas veces una regin de DNA o un cido nucleico

HIBRIDACION INSITU: detecta anomalas en algunas clulas que pueden ser marcadas, ejemplo se pueden marcar
anticuerpos con biotina que desarrollan sustratos color caf o tambin con marcadores fluorescentes que se pueden
observar por inmunofluorescencia

MICROARREGLOS DE DNA: usa trnas de clulas ej. clulas normales o tumorales son marcados fluoroclorimetricos
de color rojo o verde y son hibridados en un microchip, los colores van a indicar que genes se estn expresando y me
indican que tipo de enfermedad

MUESTRAS

Se obtiene de todos los tejidos vivos ya sea vegetal, animal, virus, bacterias. A todos se les puede detectar DNA, rna
o protenas.

Ejemplo de laboratorio: DNA se disgrega de la clula con un detergente, se rompe y que da en un tubo en solucin,
se precipita con un solvente que puede ser etanol o isopropanol, se genera un precipitado de cido nucleicos. El DNA
tambin puede ser purificado y posteriormente analizado con las distintas tcnicas.

Se pueden tomas muestra infectadas con bacterias o virus, se disgregan de la misma manera, se precipitan y se
obtiene el DNA no solo de la clula infectada sino tambin el DNA del virus o la bacteria, as se obtiene el sustrato.

Hoy en da se usan columnas que permiten disgregar las distintas clulas lisarlas usando centrifuga o una jeringa
para generar succin y hacer pasar DNA o rna en la columna esto queda en una silica y todo el resto protena y
citoplasma se elimina, el proceso es mucho ms rpido, 15 minutos aprox.

PCR

Fue introducida en 1983 a travs de la DNA polimerasa que amplifica el DNA, se comercializa como taq polimerasa
porque no se denatura a altas temperaturas es termfila y resiste los ciclos

Como sustrato pcr utiliza partidores, oligonucletidos que son complementarias a una regin especfica del DNA,
debe ser conocida la regin presente o no en la clula para la ausencia o presencia de un gen

Se pueden hacer ciclos sucesivos y en cada ciclo se amplifican molculas de DNA

6 COMPONENTES BASICOS ESENCIALES PCR

DNA polimerasa: amplifica molculas de DNA o templado que puede ser DNA o cidos nucleicos

Partidores o primers

Dntps: desoxitimina-adenina-guanina-citosina-trifosfato. Atp, ctp

Buffer: sales y pH optimo

DNA templado: acta la polimerasa , tb sirve como control negativo

Magnesio: para que ocurra la reaccion

Tenemos una doble hebra de DNA extraida de un tejido y por pcr se amplifica alguna regin conocida con la cual se
disean los partidores. Un partidor es una sonda de oligonucletido complementaria a la hebra:

5- T A C G A - 3

ATGCT hebra de oligonucletido complementario a la regin que se desea


amplificar.

Se necesitan 2 primers para acotar la regin , ejemplo 20 ciclos se genera 1000000de molculas en 1 hora

El magnesio hace que la unios de primers sea estable no se desarme , la estabilidad de este dimero dna polimerasa
es necesaria para que pueda entrar un nucletido y se pueda formar poco a poco una hebra complementaria.