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USO DEL MICROSCOPIO

El microscopio ptico compuesto, con iluminacin en campo claro es el ms utilizado en los


laboratorios de microbiologa. El microscopio compuesto recibe este nombre porque el sistema
ptico dispone de dos o ms lentes de aumento. Estructuralmente un microscopio se divide en
dos el soporte y el sistema ptico

Soporte: Es el elemento que proporciona un apoyo fijo y estable a todo el resto de elementos del
microscopio. Sus partes principales son las siguientes:

La base: Que normalmente alberga la fuente de iluminacin (lmpara incandescente o halgena).


Muchos microscopios poseen en su base un restato para variar la intensidad de la luz que llega a
la preparacin.

El brazo: Soporta el sistema ptico, el cabezal porta oculares (mono o binocular) y el revolver
porta objetivos. En el brazo se dispone tambin el mecanismo de anclaje de la platina, dotado de
un sistema de movimiento en el eje vertical controlado por los tornillos macrometrico y
micromtrico

La platina: Es la pieza donde se coloca la preparacin microscpica para su observacin. Presenta


un orificio central por donde pasa la luz y est equipada con un sistema de fijacin de la
preparacin. En los microscopios modernos el elemento que sujeta el portaobjetos est dotado de
un sistema mecnico que permite su desplazamiento sobre la platina en los dos ejes del plano
horizontal y facilita el cambio del campo de observacin. En la parte inferior de la platina se sita
el sistema de fijacin del condensador.

Los tornillos macrometrico y micromtrico controlan el movimiento de la platina en el eje vertical


y as permiten el enfoque de la preparacin, El primero se emplea para un enfoque rpido
mientras que el tornillo micromtrico permite afinar el enfoque cuando se utilizan los objetivos de
mayor aumento (x40, x100)

Sistema ptico: El sistema ptico de un microscopio compuesto consta normalmente de tres


lentes denominados condensador, objetivo y ocular. Las dos ltimas se alojan en los extremos del
tubo del microscopio y su accin combinado produce el aumento total de la imagen, puesto que
son las lentes que se interponen entre la preparacin y el ojo del observador. Para evitar los
defectos pticos inherentes a las lentes nicas (denominados aberracin cromtica y aberracin
esfrica), tanto el ocular como los objetivos estn formados por sistemas o conjuntos de lentes
cuyo diseo reduce al mximo estos defectos

Condensador: Es la lente o conjunto de lentes colocadas entre la fuente de iluminacin y la


preparacin. Su misin es recoger los rayos de luz procedentes de la fuente de iluminacin y
concentrarlos sobre la preparacin, Para una observacin optima el punto o foco donde
convergen los rayos de luz deben hacerse coincidir con el plano de la muestra. El condensador
incorpora un diafragma tipo iris, que permite ajustar la cantidad de luz que llega a la preparacin y
acta de un modo muy eficaz sobre el contraste final de la imagen microscpica. La disposicin
correcta del condensador es de gran importancia a la hora de obtener una imagen clara y
contrastada. Cuando se empleen grandes aumentos, es fundamental conseguir una iluminacin
optima; en este caso es necesario realizar un centrado, tanto de la fuente de la luz como del
condensador adems de un correcto diafragmado

Objetivo: Genera una imagen ampliada e invertida que se forma en el plano focal anterior del
ocular. Los objetivos estn montados sobre un soporte rotatorio o revolver que posibilita cambiar
de un objetivo a otro mediante un sencillo giro. En bacteriologa se usa con mucha frecuencia el
objetivo de inmersin (normalmente de 100 aumentos), que se distingue por que suele tener un
anillo de color negro. A diferencia del resto de objetivos, el objetivo de inmersin est diseado
para emplearse en contacto directo con aceite de inmersin para microscopia, que se aplica
previamente sobre la preparacin y se interpone entre esta y el objetivo. Como los ndices de
refraccin del portaobjetos (vidrio) y del aceite son prcticamente iguales, los rayos de luz no son
refractados al pasar de un medio a otro lo que se traduce en una mayor resolucin.

Ocular: Es la lente o conjunto de lentes que aumentan a modo de lupa la imagen real proyectada
por el objetivo y permite que sea percibida en la orientacin y posicin correctas por el ojo del
observador. El ocular es el elemento del sistema ptico que se encuentra ms prximo al ojo del
observador. Se puede llevar grabado el nmero de aumentos (x10, generalmente).

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Compruebe que las lentes del ocular y de los objetivos estn limpias. De no ser as lmpielas
cuidadosamente con un pauelo o papel especiales para la ptica. No toque las lentes con los
dedos

Coloque el portaobjetos (sin cubreobjetos y con la muestra en la parte superior) sobre la platina,
de manera que quede asegurado por el dispositivo de sujecin. Compruebe previamente que el
objetivo de menor aumento est en la posicin de empleo

Disminuya la iluminacin de la preparacin bajando el condensador (mas contraste) y con el


diafragma abierto

Coloque en posicin el objetivo de 10 aumentos (x10) y realice la operacin de enfoque de la


siguiente manera
Sin mirar por el ocular, gire el tornillo y acerque al mximo la lente del objetivo a la preparacin (si
mira por el ocular corre el riesgo de percutir el objetivo en la preparacin con el consiguiente
destrozo de ambos)

Mirando por el ocular, gire el tornillo macrometrico en sentido opuesto y aleje el objetivo de la
preparacin lentamente hasta que obtenga un enfoque ntido

Gire el revlver y coloque en posicin el objetivo de x40. Suba ligeramente el condensador hasta
obtener una iluminacin suficiente para su aumento. La imagen debera de estar casi enfocada,
pero puede ser necesario afinar el enfoque girando un poco el anillo micromtrico. Si no consigue
enfocar con facilidad es preferible volver a enfocar con el objetivo de x10 y repetir la operacin. La
distancia optima funcional del objetivo es de x40 es de unos pocos milmetros por encima de la
preparacin, por lo que podra romperse si se descuidan las precauciones descritas para su
enfoque. Por otra parte dada esta proximidad, no puede volver a enfocar con el objetivo de x40
tras la observacin con el x100 en aceite de inmersin, ya que como se mencion con anterioridad
esta lente de x40 no debe nunca contactar con aceite

Empleo del objetivo de inmersin (x100)

Una vez haya enfocado con el objetivo de x40, gire el revlver hacia el objetivo de inmersin sin
llegar a colocarlo en posicin sino a medio camino entre los dos objetivos citados

Coloque una gota de aceite de inmersin sobre la muestras en la zona de observacin

Gire con precaucin el revlver hasta situar en posicin el objetivo de inmersin y asegrese de
que no toca la preparacin pero si la gota de aceite. Tenga en cuenta que la distancia del objetivo
de inmersin a la preparacin es muy pequea por lo que el riesgo de daar dicho objetivo es
ahora mximo

Gire ligeramente el tornillo micromtrico hasta conseguir un enfoque ntido. La preparacin


debera de estar prcticamente enfocada si se ha realizado un enfoque adecuado con el objetivo
de x40. De no ser as es preferible volver a enfocar de nuevo un campo distinto partiendo del
objetivo de inmersin girando el revlver hacia el objetivo de menor aumento, pues de lo
contrario correra el riesgo de manchar de aceite el objetivo x40. De hecho este objetivo solo
podr ser empleado ya sobre una preparacin nueva y por tanto libre de aceite de inmersin

Finalizada la observacin de una preparacin y antes de retirarla de la platina, se colocara el


objetivo de menor aumento.

Nota: Nunca retire la preparacin con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.

Retire la preparacin y limpie el objetivo de inmersin con cuidado empleando un pauelo o papel
especiales para ptica. Compruebe tambin que el objetivo de x40 est perfectamente limpio

Tincin simple
Esta es una tincin directa que utiliza solo un colorante, el cual debe de ser bsico para que la
clula bacteriana se tia. Permite demostrar la morfologa general de una clula de manera
rpida; al emplearse un nico colorante, todas las clulas se observaran del color del colorante
empleado. Los ms empleados son cristal violeta, azul de metileno, fuscinafenicada, estos
colorantes difieren en la velocidad y grado en que tien. El azul de metileno reacciona a menor
velocidad, toma de 30 a 60 segundos para teir una preparacin microbiana. El cristal violeta es
ms reactivo y usualmente requiere solo 10 segundos. La fucsina fenicada es un colorante an ms
rpido, generalmente requiere solo 5 segundos. Su reactividad es tan grande que con frecuencia
sobretie especialmente en preparaciones que contienen grandes cantidades de materia orgnica
y detritos

Tincion Gram

Esta tincion desarrollada por el doctor Christian Gram en 1884, es hoy la mas ultilizada en los
laboratorios de bacteriologia y permite de acuerdo con la estructura y grosor de la pared
bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y en Gram negativas. La Gram positivas poseen
una capa gruesa de peptidoglican y carecen de membrana externa, mientras que las Gram
negativas tienen una capa mas delgada de peptidoglican y poseen una membran externa

FUENTES DE INFORMACION
Diaz, R., Gamazo, C., & Lopez-Goi, I. (1995). Manual prctico de
Microbiologa. Allergologia et Immunopathologia, 23, 47-47.
Cavallini, E. R. (2005). Bacteriologa general: Principios y prcticas de laboratorio. Editorial
Universidad de Costa Rica.