I.

INTRODUCCION
La determinacin de la biomasa es una de las variables ms importantes de un
bioproceso. Ya que su determinacin nos lleva a la comprensin de la eficiencia del
mismo. Se trata de una variable clave para establecer las tasas de produccin, de
consumo de nutrientes y el clculo de los balances de masa de cualquier proceso
biolgico. (Guillard y Ryther, 1962)
La biomasa puede ser definida de manera general como los microorganismos
presentes en un sistema, adems se puede referir a la cantidad de clulas, la
biomasa engloba una serie de recursos muy diversos, y llega a ser delimitada y
clasificada teniendo en cuenta el binomio recurso-tecnologa. La biomasa puede
clasificarse como biomasa slida y lquida, a su vez, la biomasa slida se clasifica
en biomasa primaria y secundaria: la primera comprende los cultivos y biomasa
forestal que apuntan a fines de produccin energtica, la segunda incluye los restos
agrcolas, forestales o de procesos industriales cuyo fin es distinto a la produccin
energtica (Nogus et al., 2010).
El crecimiento microbiano o aumento de la biomasa se expresa como el incremento
de biomasa ya sea en forma de nmero de clulas (cl/mL), en peso seco (total y/o
orgnico), cantidad de protena, de pigmentos, medidos directamente o en unidades
arbitrarias de fluorescencia, volumen de las clulas o carbono celular total, calculado
para un perodo de tiempo o una fase de crecimiento especfica (Arredondo-Vega
et al., 1997).
Este incremento puede ser estimado por diferentes mtodos, entre los cuales los
ms utilizados en los laboratorios son el recuento celular a travs del microscopio o
mediante contadores de partculas (aunque stos son generalmente costosos, por
lo cual su uso estar supeditado a la posibilidad de adquirirlos), la determinacin de
los cambios de densidad ptica del cultivo por espectrofotometra o finalmente la
cuantificacin de la biomasa en peso seco, total u orgnico, o de sus componentes
bioqumicos que son de inters para los fines de un cultivo en particular (protenas,
pigmentos o cidos grasos, entre otros). De estos mtodos, el recuento celular es
el ms utilizado por ser un mtodo sencillo y poco costoso, el cual permite adems
un mejor seguimiento del cultivo mediante su inspeccin visual. Es necesario
remarcar que la correspondencia entre la concentracin celular y la informacin
proporcionada por los otros mtodos (como la cantidad de pigmentos o de otros
componentes celulares, que son ms laboriosos y requieren de tiempo, material y
equipamiento ms costoso) no es constante, ya que stos dependen del estado
fisiolgico de las clulas, de la fase de crecimiento y de las condiciones ambientales
a las cuales est sometido el cultivo (Alfonso y Leal, 1998).
Una de las dificultades para el recuento al microscopio es obtener una buena
reproducibilidad, por lo cual es importante saber seleccionar el tamao de la
muestra, la dilucin, el tipo de cmara de recuento, el objetivo del microscopio y la
tcnica de llenado de la cmara. En algunos casos, puede ser necesario corroborar
el volumen de la cmara que se est utilizando. Para realizar el recuento celular se
han diseado diferentes cmaras que contienen un volumen determinado de
muestra entre una lmina y una laminilla rgida (cubreobjeto especial) colocada
sobre plataformas laterales a una altura establecida (Heredia-Tapia, 2005)
En la mayora de los laboratorios, la cmara de recuento que se utiliza es el
hematocitmetro de 0.1 mm de profundidad con reglilla de Neubauer, la cual consta
de 9 cuadrados con lados de 1 mm (rea total de recuento = 0.9 mm2), cada uno
de los cuales corresponde a un volumen de 0.1 L. Los cuatro extremos estn
subdivididos en 16 cuadros pequeos. El cuadro central contiene 25 cuadros, cada
uno con un rea de 0.04 mm2 (0.2 mm x 0.2 mm), a su vez divididos en 16 cuadros
ms pequeos. Para clulas ms grandes de 6 m y con cultivos relativamente poco
concentrados, se aconseja que el recuento se haga en los cuatro cuadros marcados
(A, B, C y D), aunque en varios laboratorios se prefiere contar por lo menos un
cuadro adicional, seleccionado cada vez al azar. Cuando las clulas son pequeas
y la concentracin de los cultivos es muy alta, es preferible utilizar cinco cuadros
menores del cuadro central marcado con X. (Guillard y Sierracki, 2005).
El objetivo del presente trabajo fue Comprender el uso y lectura de microorganismos
por cmara de Neubauer determinando la concentracin de microorganismos, as
mismo Determinar la desviacin estndar, promedio y coeficiente de variacin de la
muestra analizada.
BIBLIOGRAFIA
Nogus, F., Garca-Galindo, D., y Rezeau, A. (2010). Energa de la Biomasa.
Volmen 1. Espaa: Editorial Prensas Universitarias de Zaragoza. Universidad de
Zaragoza.
ARREDONDO VEGA, B.O., Cordero Esquivel, B., Herrero, C. y Abalde, J. (1997).
Manual de Tcnicas Bioqumicas Aplicadas en Ficologa. Manual de Prcticas del
Ier. Curso Terico Prctico: Aplicaciones Biotecnolgicas del Cultivo de Microalgas.
La Paz, Baja California Sur, Mxico. Septiembre 1-5, 1997. 40 pgs
ALFONSO, E. y Leal, S. (1998). Creacin y Mantenimiento de un Cepario de
Microalgas. Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de La Habana.
Habana, Cuba. 21 pgs.
GUILLARD, R.R.L. y Sieracki, M.S. (2005). Counting cells in cultures with the light
microscope. En: Algal Culturing Techniques. Andersen, R.A. (ed.). Elsevier
Academic Press, 239-252 pp.
HEREDIA-TAPIA, A. (2005). Aislamiento, cultivo y caracterizacin parcial del
dinoflagelado marino Prorocentrum lima (Ehrenberg) Dodge de la isla El Pardito,
Baja California Sur, Mxico. Tesis de Licenciatura. Universidad Autnoma de Baja
California Sur (UABCS). La Paz, Baja California Sur. 78 pgs.
GUILLARD, R.R.L. y Ryther, J.H. (1962). Studies of marine planktonic diatoms. I.
Cyclotella nana Hustedt and Detonula confervacea (Cleve) Gran. Canadian Journal
of Microbiology 8: 229-239.