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Purificacin del Extracto Hidroalcohlico de Salpichroa origanifolia

Boeris M. A.
Centro de Investigacin y Desarrollo de Frmacos (CIDEF) Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLPam.

Resumen
La extraccin de principios activos presentes en las plantas se realiza con distintos
solventes y se recupera un residuo slido o semislido que se emplear luego en las
investigaciones farmacolgicas. En el caso especfico de Salpichroa origanifolia se
obtuvo un extracto hidroalcohlico de alto rendimiento, de difcil resuspensin para el
empleo en bioensayos ocasionando inconvenientes en la dosificacin y provocando
problemas en la absorcin de los principios activos. En este trabajo se comunica el
procedimiento utilizado para purificar el extracto hidroalcohlico empleando distintos
mtodos de extraccin y separacin para obtener fracciones slidas solubles, a efectos
de investigar, la presencia de compuestos activos que permitan inferir actividad
farmacolgica y la solubilidad en excipientes para administrarlas a animales.
Palabras claves: Salpichroa origanifolia, extracto metanlico, polvo amorfo

Abstract
The extractions of active principles present in plants are made with different solvent,
and the solid remainders are used soon in the pharmacology investigations. In the
specific case of Salpichroa origanifolia obtained a hidroalcoholic extract of high
performance, which made difficult to the resuspention of it for the use in bioassays
causing difficulties in the metering and problems in the absorption of the active
principles. In this communication, we present the procedure to purify the hidroalcoholic
extract of Salpichroa origanifolia using different methods like extraction and separation
to obtain soluble solid fractions, in the same ones will investigate the active compound
presence that allows determinate activity and the solubility in excipient to administer
them to animals.
Palabras claves: Salpichroa origanifolia, extracto metanlico, polvo amorfo

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Introduccin
La obtencin de extractos estandarizados de las plantas es una prioridad en la
investigacin farmacognstica. De esta manera se garantiza repetibilidad en los datos
recogidos en distintos ensayos.
Los extractos obtenidos por maceracin presentan ventajas como buena conservacin y
aumento de la biodisponibilidad de las sustancias activas disueltas. Estos extractos,
antes de ser utilizados en modelos experimentales, pueden concentrarse para eliminar el
solvente de extraccin totalmente en el caso que interfiera con la accin farmacolgica
o parcialmente para reducir el volumen y de esa manera facilitar la administracin. Los
inconvenientes que presenta el extracto concentrado son la baja estabilidad de las
soluciones y la escasa disolucin de los principios activos, que en ocasiones puede
disminuir su eficacia. Adems, pueden sufrir variaciones del contexto natural,
descompensando el equilibrio de los componentes que necesitan actuar asociados
(Kuklinsky, 2000). En estos casos, es necesario purificar el extracto utilizando otros
solventes con el fin de obtener fracciones ms estables en solucin y que conserven la
propiedad teraputica (Recio Iglesia, 1999).
Al reducir en rotavapor el extracto hidroalcohlico de Salpichroa origanifolia se
observaron problemas de solubilidad, lo que dificult su administracin en ratones
cuando se evalu el efecto antiinflamatorio. El extracto con alta densidad de solutos, de
color verde oscuro a marrn y un rendimiento del 44%, present escasa solubilidad en
excipientes polares y no polares.
Para resolver esta dificultad, se purific el extracto hidroalcohlico con distintos
procesos extractivos hasta encontrar una formulacin ms equilibrada y que conservara
el principio activo.
Este proceso fue evaluado con reacciones de caracterizacin que permitieron confirmar
la presencia de metabolitos secundarios, presentes en el extracto hidroalcohlico, para
prever una accin farmacolgica que luego sera corroborada por bioensayos.

Materiales y Mtodo

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El extracto hidroalcohlico de las partes areas de Salpichroa origanifolia obtenido por

maceracin a temperatura ambiente (etanol:agua, 1:1, v/v), (3x) fue reducido en
rotavapor hasta consistencia semislida. En los bioensayos para evaluar el efecto
antiinflamatorio en ratones, utilizando el test de la carragenina (Winter et al., 1962), se
administr el extracto hidroalcohlico proveniente de 1 g de Salpichroa origanifolia por
animal, solubilizado en excipiente de carboxi metil celulosa llevado a un volumen de
0,5 ml (Boeris et al., 2004).
Dicho residuo, por las caractersticas descriptas, fue extrado con metanol (3x) y se
obtuvieron dos fracciones, la soluble en el solvente metanlico y un residuo que
precipit, las que se separaron por filtracin. El precipitado se sec en estufa a 55 C
obtenindose un polvo y la fraccin metanlica se llev a sequedad en rotavapor hasta
obtener un extracto metanlico seco (Esquema 1). Se utilizaron ambas fracciones para
realizar ensayos biolgicos y fisicoqumicos.

Limpieza del Polvo en Soxhlet

El polvo fue diluido completamente con metanol en Soxhlet hasta que no se observ
coloracin en el solvente, obtenindose un rendimiento del 30% con respecto al peso
inicial. A este residuo se lo denomin polvo limpio de Salpichroa origanifolia
(Esquema 1). Dicho polvo de color pardo, se sec en estufa a 55C y se almacen a 8C.
Esquema 1. Obtencin de Polvo limpio y Extracto Metanlico a partir del Extracto Hidroalcohlico de
Salpichroa origanifolia

100 g Salpichroa origanifolia

Extraccin con etanol:agua 24 hs (3x)

Marco 44 g EHA
Extraccin con metanol

Extracto Metanlico Precipitado

Rotavapor Estufa 50 C

22 g Extracto Metanlico 5,7 g Polvo

seco
Extraccin con metanol en
Soxhlet

70
1,7 g Polvo limpio de
Salpichroa origanifolia
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A ambos extractos se le realizaron pruebas de identificacin para detectar grupos

qumicos, cuya presencia en el extracto hidroalcohlico permitira inferir la actividad
farmacolgica del mismo.

Reacciones de caracterizacin para flavonoides

Reaccin de Cloruro Frrico: a una alcuota de extracto metanlico de Salpichroa
origanifolia se la diluy en 5 ml de metanol. A esta solucin se le agreg unas gotas de
cloruro frrico acuoso. Al polvo se lo solubiliz en una solucin hidroalcohlica y se le
agreg tambin unas gotas de cloruro frrico acuoso..
Reaccin de Shinoda: se le agreg a la solucin metanlica de Salpichroa origanifolia
una granalla de magnesio y 0,2 ml de cido clorhdrico concentrado. Se esper la
disolucin de la granalla y se le agreg 0,2 ml de alcohol amlico y luego 2 ml de agua
destilada (Shinoda, 1928). Con el polvo en solucin hidroalcohlica tambin se
realizaron los pasos detallados en el prrafo precedente.

Reacciones para determinar presencia de Alcaloides

Reaccin de Mayer y de Dragendorff: a una alcuota de extracto metanlico y de polvo
disueltos en solucin cida se le agreg el Reactivo de Mayer (yoduro de potasio) y el
Reactivo de Dragendorff (yoduro de bismuto), observndose la formacin o no de un
precipitado blanco y cambios en la tensin superficial de la gota.

Resultados
Como resultado de la extraccin para purificar el extracto hidroalcohlico se obtuvieron
2 fracciones: extracto metanlico y polvo de Salpichroa origanifolia.
Las caractersticas de ambos extractos permitieron mejorar la administracin, y en el
caso del polvo se pudo determinar estrictamente la dosis por pesaje.
Los anlisis qumicos determinaron en el extracto metanlico la presencia de
flavonoides ya que dieron positivas las pruebas de Cloruro Frrico y Shinoda. En esta
misma fraccin las Reacciones de Mayer y de Dragendorff, para detectar presencia de
alcaloides, dieron negativas.

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El Polvo, disuelto en medio hidroalcohlico, dio negativo a las reacciones de cloruro

frrico y Shinoda, descartando la presencia de flavonoides en esa fraccin, al menos en
cantidades detectables.
El polvo, en medio cido, dio positivo a los reactivos de Mayer y Dragendorff
indicando la presencia de alcaloides. Estas determinaciones cualitativas de flavonoides
y alcaloides son el paso inicial en la investigacin fitoqumica del principio activo.

Conclusiones
Las fracciones extracto metanlico y polvo de Salpichroa origanifolia mostraron
ventajas comparativas respecto al extracto hidroalcohlico en sus caractersticas
fisicoqumicas, mostrando buena solubilidad en excipientes polares, facilitando la
dosificacin.
Las reacciones de caracterizacin realizadas al extracto metanlico de Salpichroa
origanifolia determinaron la presencia de flavonoides y polifenoles.
Las reacciones de caracterizacin realizadas al polvo de Salpichroa origanifolia
determinaron la presencia de alcaloides.
En la investigacin farmacognstica de plantas se puede aplicar este proceso de
purificacin a los extractos hidroalcohlicos y utilizar en los bioensayos un residuo con
mejor solubilidad y menor concentracin de solutos para evaluar la actividad
farmacolgica.

Bibliografa
Boeris M. A, Toso R. E, Skliar M. I. 2004. Actividad Antiinflamatoria de Salpichroa origanifolia. Acta
Farmacologa Bonaerense, 23 (2): 138-141.
Kuklinski C. 2000. Mtodos Generales en la obtencin de los principios activos. En: Farmacognosia,
Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Ediciones Omega, Barcelona, pp.
32-42.
Recio Iglesia M. del C. 1999. Mtodos generales de extraccin y purificacin de principios activos de
drogas. En: Farmacognosia General, Angel Villar del Fresno, Editor. Ed. Sntesis S.A., Madrid, Espaa,
pp. 83-98.

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Winter C. A, Risley E. A, Nuss G. 1962. Carrageenan-induced edema in hind paw of the rat as an assay
for anti-inflammatory drugs. Proceedings of Society of Experimental Biology and Medicine, 111: 544-
547.
Shinoda J. 1928. Color reactions of flavones and flavonol derivatives and the like. Journal Pharmacology
Society Japan, 48: 214-220.

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