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FACULTE

DES SCIENCES DE TUNIS


Cycle prparatoire Biologie-Gologie: BG1
GENETIQUE
Cours 3

Prsent par Salwa ZEHDI


et Hajer ENNAFAA

CHAPITRE II
ORGANISATION DES GENOMES
EUCARYOTES ET PROCARYOTES
(SUITE)

S. ZEHDI & H. ENNAFAA


II-5 REPLICATION DE LADN

Pour que deux cellules lles hritent le mme


patrimoine gnTque de la cellule mre, il faut que
lADN se rplique dlement.
Comment se fait ceYe rplicaTon dle de la molcule
dADN ?
Trois modles de rplicaTon de lADN ont t
proposs: le modle semi-conservaAf, le modle
conservaAf et le modle dispersif.

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Dans le modle semi-conservaAf (modle suggr
par Watson et Crick), chaque double hlice lle
conTent un brin de la molcule parentale et un brin
nosynthTs.
Dans le modle conservaAf, la molcule parentale
est conserve et la double hlice lle est consTtue
de 2 brins nosynthTss.
Dans le modle dispersif, les molcules lles sont
consTtues de brins qui comportent tous deux la
fois des fragments dADN parental et dADN
nosynthTs.
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II-5-1 La replicaAon de lADN est semi-
conservaAve
Lexprience de Meselson et Stahl
En 1958, deux scienTques, MaYhew Meselson et
Franklin Stahl imaginrent une exprience pour
dterminer lequel des trois modles dcrivait
correctement la rplicaTon de lADN:
Culture des cellules DE. coli dans un milieu
contenant lisotope lourd de lazote (15N).
- Cet isotope sera insr dans les bases azotes qui seront
ensuite incorpores dans les brins dADN nosynthTss.
- Aprs un grand nombre de divisions cellulaires en prsence de
15N, tout lADN de ces cellules sera marqu par lisotope lourd.
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Les cellules ont t ensuite reTres du milieu avec
15N et transfres sur un milieu avec 14N.

A prs respecAvement une et deux divisions


cellulaires, des chanTllons ont t prlevs et
lADN a t isol parAr de chacun deux.
LADN ainsi extrait a t enn soumis une
centrifugaAon en gradient de chlorure de csium
(CsCl).

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Rsultats de lexprience:
Meselson et Stahl ont observ quune gnraTon
aprs le transfert des molcules lourdes sur le milieu
14N, lADN forme une seule bande de densit

intermdiaire (entre les densits des tmoins lourd


et lger).
Aprs deux gnraTons dans le milieu au 14N, lADN
forme deux bandes lune situe une posiAon
intermdiaire, lautre la posiAon de la bande
lgre.
Ce rsultat tait celui prdit par le modle de la
rplicaAon semi- conservaAve.
(les rsultats prvus par le modle conservaTf et le
modle dispersif nont pas t obtenus)
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Conclusion:
L ADN se rplique selon un modle semi-
conservaAf, cest--dire que la molcule dADN
parentale souvre en deux brins et chaque brin
sert de modle (on dit aussi matrice) la
synthse dun nouveau brin (= le brin ls).
Le brin ls est complmentaire et anTparallle
au brin parental.
On obTent ainsi 2 molcules dADN lles
idenTques entre elles et la molcule
parentale.
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La fourche de rplicaAon
D ans lexprience de Meselson et Stahl, les
molcules dADN avaient t casses en morceaux
lors de lextracTon: ce qui donnait la composiTon en
matriel parental et noform de peAts fragments
de lADN chromosomique.
Grce aux expriences ralises par John Cairns en
1963 (non dcrites dans ce cours), on a pu
comprendre comment se droule la rplicaTon du
chromosome bactrien considr dans son
ensemble: un chromosome bactrien en cours de
rplicaAon possde deux fourches de rplicaAon.
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On sait prsent que :
La rplicaTon commence au niveau de sites prcis sur
le chromosome appels : origines de rplicaAon.
Chez les Procaryotes: il y a une origine de rplicaAon
unique ( appele OriC chez E.coli).
La rplicaTon commence parTr de ceYe origine xe
et se poursuit dans les deux sens jusqu ce que les
deux fourches se rejoignent : on dit que la
rplicaAon est bi-direcAonnelle.

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La synthse des nouveaux brins dADN au niveau
dune fourche de rplicaAon en croissance:
Cest une ADN polymrase (ADN pol III chez E.coli)
qui assure la synthse des deux brins ls : ceYe
enzyme foncTonne dans le sens 5 vers 3 en uTlisant
comme matrice un brin dADN parental.
Il en dcoule que pour lun des brins ls, la
synthse se fera dans le sens du dplacement de la
fourche de rplicaTon: il sagit du brin avanc (ou brin
prcoce) alors que pour lautre brin ls, la synthse se
fera dans le sens oppos celui du dplacement de la
fourche de rplicaTon: il sagit du brin retard .
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Pour le brin avanc, la synthse se fait donc de faon conAnue
au fur et mesure du dplacement de la fourche.
Par contre pour le brin retard, la synthse va tre eectue
par peTts fragments appels fragments dOkasaki.
Par ailleurs, lADN polymrase tant incapable de commencer
une chane (elle ne peut quallonger une chane dj existante
en ajoutant des dsoxyribonucloTdes son extrmit 3), la
synthse du brin prcoce et de chaque fragment dOkasaki
doit dbuter par une amorce.
CeYe amorce est consTtue par un court fragment dARN
synthTs par une enzyme appele: Primase

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L ADN POLYMERASE ajoute des nucloTdes lextrmit 3 dune
chaine en cours dlongaTon. Ses substrats sont les formes
triphosphates des dsoxyribonucloTdes: dATP, dGTP, dCTP et dTTP.
Fragment
dOkazaki
Nous avons vu le rle de lADN polIII et de la Primase
mais il faut savoir que plusieurs autres enzymes et
protines sont ncessaires au bon droulement de la
rplicaAon de lADN; parmi les plus importantes, on peut
citer:
Les protines de reconnaissance reconnaissent les sites
diniTaTon de la rplicaTon.
Les hlicases droulent la double hlice par rupture des
liaisons hydrognes prsentes entre les deux brins de
lADN.
Les protines SSB (pour single-strand binding) se xent
lADN simple brin an de le stabiliser et empcher le
duplex de se reformer.
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Les topoisomrases relchent les contraintes de torsion
de lADN (exemple: lADN-gyrase de E.coli).
lADN pol I reTre les amorces dARN et les remplace par
de lADN.
Les ADN ligases catalysent la formaTon de la liaison
phosphodiester entre une extrmit 3 OH et une
extrmit 5P. Elles sont charges de souder les
fragments dOkasaki.
Lensemble des protines et enzymes ncessaires la
rplicaTon forme un gros complexe appel Rplisome.
(On connait de nos jours au moins 13 composants du rplisome
dE.coli)

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hYps://www.youtube.com/watch?v=JZXT2uOcD2w
II-5-2 La replicaAon chez les Eucaryotes
Comme chez les Procaryotes, la rplicaTon de lADN chez les
Eucaryotes se fait selon le modle semi-conservaAf et
comporte la synthse dun brin avanc et dun brin retard.
Il existe des centaines dorigines de rplicaAon prsentes sur
chacun des longs chromosomes linaires Eucaryotes
(Procaryotes: une seule origine).
Comme chez les Procaryotes, la rplicaAon est
bidirecAonnelle: parTr dune origine de rplicaTon, elle se
droule dans les deux sens.
Le Rplisome Eucaryote remplit les mmes foncTons que le
Rplisome Procaryote mais il comporte plus de composants
car sa tche est plus complexe (il doit, par exemple, dissocier
et reformer les complexes ADN-Protines du nuclosome).
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II-6 APPLICATION DE LA REPLICATION IN-
VITRO: LA PCR ( Polymerase Chain ReacTon )
Principe de la PCR:
La PCR (RacTon en chane par polymrase) est une
technique damplicaTon de lADN in vitro . Elle
permet dobtenir un trs grand nombre de copies
dune squence dADN choisie.
Une srie de racTons, permeYant la rplicaTon
dune matrice dADN double-brin, est rpte
plusieurs fois.

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Chaque cycle comprend 3 tapes:
- DnaturaAon de lADN par chauage
- HybridaAon des amorces aux extrmits 3 de la
squence amplier
- ElongaAon de lamorce grce lacTon dune ADN
polymrase.
Ce cycle est donc rpt un grand nombre de fois
pour obtenir une mulTplicaTon exponenTelle de la
squence dADN cible.
n cycles de PCR permeYent en thorie de produire 2n
copies de la squence cible: il est ainsi possible
dobtenir plus dun million de copies de la squence
dADN, en une vingtaine de cycles.
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