MICROSCOPIA

Tipos de
microscopios

Mara Luisa Garcia

Depto. de Microbiologa, Escuela de Qumica Biolgica
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, USAC.
 Microscopio
Sistema ptico que produce una imagen
aumentada de un objeto no visible de forma que
sea perceptible por el ojo humano.
(Tamao mas pequeo: 1mm
Distancia 25 cm
Esta ampliacin de la imagen se puede
conseguir de dos formas:
ondas luminosas: Microscopia ptica
Haz de electrones (): Microscopa Electrnica
 Importancia de los
microscopios
La mayor parte de los conocimientos en
Microbiologa se han descubierto con los
microscopios.
Aumenta el tamao de la imagen aparente de
los objetos haciendo ver detalles
estructurales de los microorganismos.
Proporciona datos fundamentales de los
microorganismos para la identificacin,
aislamiento y pureza
Importancia del
Microscopio
i
PRINCIPIOS DE LA
MICROSCOPIA OPTICA
 PROPIEDADES DE LA LUZ
Reflexin: la luz choca con
un objeto y sale en sentido
contrario.
Transmisin: Paso de la luz
a travs del objeto.

Absorcin: la luz es tomada

por el objeto y la transforma
en otra de diferente longitud
de onda.

Refraccin: la luz pasa a

travs de un medio a otro de
diferente densidad,
producindose un ngulo.
 Lentes y desviacin de la luz

Refraccin:
es cuando un rayo de
luz pasa de un medio
a otro.
ndice de refraccin:
Es una medida de
Intensidad con que
una sustancia disminuye
la velocidad de la luz.
Ejemplos: el aire, el vidrio
y el aceite
 Tipos de microscopa

Microscopa Optica

Microscopa Electrnica
Microscopio Binocular de Campo
Claro
 Otros clases de
microscopios opticos
 Microscopio Optico
Usa luz visible para crear una imagen aumentada del objeto.

Consiste de dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular,

montados en extremos opuestos de un tubo cerrado.
El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una
imagen real aumentada del objeto examinado.

Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual

aumentada de la imagen real e invertida.

Todos los microscopios opticos cuentan con tres o ms

objetivos montados en un cabezal mvil que permite variar la
potencia de aumento.
Contina Microscopia ptica
 Definicin de trminos usados en
Microscopa ptica
Aumento total del objeto observado: es el producto
del aumento del lente objetivo por el aumento del
lente ocular.

Parafocal: que el microscopio mantenga la imagen

enfocada al cambiar de objetivo.

Poder de Resolucin (P.R.): es la capacidad de una

lente para separar o distinguir entre objetos
pequeos que estn muy prximos.
Poder de Resolucin de un
microscopio
Poder de Resolucin:
Es la capacidad de una lente
de separar o distinguir entre
dos objetos pequeos muy
prximos.
La mayor resolucin se
obtiene con una longitud de
onda menor: extremo azul
del espectro visible:
450 a 500 nm
i
 Factores que inciden en el
Poder de Resolucin (P.R.)
Poder de resolucin (P.R.) depende de la Longitud
de Onda ()y de la Apertura numrica.

El mayor P.R de microscopio ptico es de 0.2 m.

La resolucin de un microscopio debe crear una

imagen clara, no solo aumentada.

Los lentes de mayor aumento tienen una mayor A. N.

La luz azul tiene una L.O. mas corta que la luz

blanca.
Apertura Numrica: A.N.
Es una medida de la capacidad de la
lente para captar la luz.
AN = n x sen a
a = del ngulo de apertura del
objetivo.
n = ndice de refraccin del medio que se
encuentra entre el objeto y el objetivo.
(Para el aire n = 1 y para el vidrio o
aceite n = 1.51)
 Apertura Numrica:
A.N. = n sen q
En donde:
n = ndice de refraccin del medio que se encuentra
entre el objeto y el objetivo.

(Aire n = 1. Vidrio o aceite n = 1.51)

q = es la mitad del ngulo del mximo cono de luz

que entra al objetivo. s la mitad del ngulo del mximo cono de l
Un objetivo con gran A. N. colecta ms luz, brinda una
imagen ms brillante y es capaz de definir detalles
ms finos.
La A. N. de un objetivo esta impresa en el objetivo.
 Clculo del P.R. Microscopio
Campo Claro
P.R. = longitud de onda/ AN objetivo + AN condensador

Delta = resolucin en micrmetros (m). Tomar en

cuenta que otros autores utilizan una constante que se
multiplica por .
Lambda = L.O. empleada.
ANobjetivo y ANcondensador son iguales, se resume 2AN.
 Microscopio de campo claro
La nica forma de incrementar A.N. del
lente objetivo es igualando el ndice de
refraccin (n) entre la lmina portaobjetos o el
cubreobjetos y el lente objetivo lo que se logra con
el uso de el aceite de inmersin.
Los Microscopios actuales tiene un poder
resolutivo de 0,2 m = unas mil veces la
capacidad del ojo humano.
os
Funcin del aceite de
inmersion
 Uso del Objetivo de
inmersin
Los objetivos con una A.N. elevados, tienen
distancias de trabajo cortas.

Aceite de inmersin lquido incoloro que tiene un n

= portaobjetos de vidrio y del lente de inmersin

Para aumentar la resolucin y la A.N. de un objetivo

es aumentar el n con uso del aceite de inmersin,
que evitan la reflexin y refraccin de muchos rayos
de luz.
 Microscopia de Campo claro:
Frotis de sangre, coloracin de Wright,
Plasmodium malarie (inmersin, 100X)
Muestra heces en fresco: Trofozoitos de
Entamoeba histolytica con eritrocitos
ingeridos por fagocitosis (100X)
Microfotografa: Lic. Gustavo Gini
 Clases de Microscopios
pticos
Campo Luminoso o Claro
Campo oscuro
Fluorescencia
Contraste de fases
Confocal de barrido lser
Fuerza atmica
Contraste de interferencia diferencial
 Microscopa de campo oscuro

Fondo negro. Objetos iluminados

La luz que incide es la dispersada por la muestra.
Condensador especial.
Propiedades de la luz: refraccin y reflexin.
Objetos brillantes en fondo oscuro.
Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar
elementos biolgicos transparentes y sin manchas,
invisibles con iluminacin normal.
Valiosa porque se pueden observar Microorganismos
vivos y sin teir.
Microscopio de Campo
oscuro
Campo oscuro: sedimento de
orina, cristales de cido rico
Campo oscuro Microcopia electrnica
 Fluorescencia
Proceso de interaccin entre la
radiacin y la materia en el cual un
materia absorbe radiacin de una
fuente especfica y muy rpidamente
emite luz cuya energa es menor
(mayor L.O.) que la de la radiacin que
ha absorbido
Microscopio de Fluorescencia

.
Contina Microcoscopia de
Fluorescencia
Las muestras se tien con fluorocromos
Algunos M.O.O. son autofluorescentes
Actualmente se usa para el estudio de la
Ecologa microbiana para la
identificacin de microorganismos vivos
y muertos.
Microscopio de
Fluorescencia
 Microscopio de Fluorescencia
Leptospiras causantes de
la leptospirosis Diagnstico Clinico
Usando anticuerpos
fluorescentes se puede
evidenciar la presencia de
microorganismos
causantes de
enfermedades por ejemplo
la tuberculosis:
Mycobacterium tuberculosis
y de la Sfilis:
Treponema pallidum
 MICROSCOPIO DE
CONTRASTE DE FASES
 Microscopa de contraste
de Fases
El principio de esta microscopia es convertir
pequeas diferencias en el ndice de
refraccin y la densidad celular en
variaciones de intensidad de luz que se
pueden detectar.
Microscopia excelente para la observacin de
clulas vivas.
Condensador especial con un diafragma
anular que tiene un disco opaco con un anillo
transparente
Campo oscuro Campo claro Contraste de
fases
Microcospia de Contraste de
Fases
Huevo de Ascaris
lumbricoides Huevo Trichiuris trichiura
 Microscopa de contraste de
interferencia diferencial (DIC)

Emplea una fuente de luz polarizada

Pasa a travs de un prisma (2 haces)
Los dos rayos no estn en la misma
fase
Efecto de interferencia
Tridimensional
Microscopa de fuerza atmica (AFM)

Tridimensional
Aguja como sonda
cerca de la muestra
Fuerzas atmicas
dbiles de repulsin
Informacin digital
Microscopa confocal de
barrido con lser (CSLM)
Combina el
microscopio de
fluorescencia con
imagen electrnica y
puntos de luz
suministrados que
permite obtener
imgenes en tres-
dimensiones sobre
el objeto deseado.
 Objetos observados con
microscopia confocal con lser
Virus del Papiloma
humano Staphyloccocus aureus
 Microscopa electrnica

Estudio detallado de estructuras

celulares
P.R. 100 veces mayor que el microscopio
ptico
Aumento de un milln de veces
Se basa en las ondas de electrones y
campos magnticos para producir la imagen
 Microscopio electrnico de
transmisin (MET)
Utiliza electrones en
vez de rayos de luz
Lentes electro-
magnticos
Electrones con escaso
poder de penetracin
Cortes ultrafinos de la
muestra con un
micrtomo
 Microscopa electrnica
de barrido
Para observar
estructuras externas
Muestra se cubre con
una capa de metal
pesado como el oro
Electrones barren la
superficie de la muestra
Electrones recogidos y
proyectados en una
pantalla