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CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA

DE CRECIMIENTO

Chapter January 2007

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2 authors:

Bertha Olivia Arredondo-Vega Domenico Voltolina

Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroe Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroe
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 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR
Mtodos yYHerramientas
TASA DEAnalticas
CRECIMIENTO 21
en la Evaluacin de la Biomasa Microalgal

CAPTULO 2
CONCENTRACIN, RECUENTO
CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
BERTHA OLIVIA ARREDONDO VEGA
Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste, S. C. (CIBNOR). Laboratorio de
Biotecnologa de Microalgas. La Paz, Baja California Sur. Mxico. kitty04@cibnor.mx

DOMENICO VOLTOLINA
Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste, S.C. (CIBNOR). Laboratorio de Estudios
Ambientales UAS-CIBNOR. Mazatln, Sinaloa, Mxico. voltolina@mzt.megared.net.mx

unidades arbitrarias de fluorescencia, volumen de

CONTENIDO las clulas o carbono celular total, calculado para
un perodo de tiempo o una fase de crecimiento
1. INTRODUCCIN especfica (Arredondo-Vega et al., 1997).
2. RECUENTO CELULAR Este incremento puede ser estimado por
2.1 CMARAS DE RECUENTO diferentes mtodos, entre los cuales los ms
2.2 CLCULOS DE RECUENTO CELULAR utilizados en los laboratorios son el recuento
2.3 PROTOCOLO PARA EL RECUENTO celular a travs del microscopio o mediante
CELULAR CON CMARA DE 0.1 mm contadores de partculas (aunque stos son
(NEUBAUER) generalmente costosos, por lo cual su uso estar
3. DENSIDAD PTICA supeditado a la posibilidad de adquirirlos), la
3.1 PROTOCOLO PARA DETERMINAR LA determinacin de los cambios de densidad
DENSIDAD PTICA ptica del cultivo por espectrofotometra o
4. CURVA DE CRECIMIENTO finalmente la cuantificacin de la biomasa en peso
4.1 ECUACIONES QUE DEFINEN EL seco, total u orgnico, o de sus componentes
CRECIMIENTO bioqumicos que son de inters para los fines de
4.2 FASES DE CRECIMIENTO un cultivo en particular (protenas, pigmentos o
4.3 PARMETROS POBLACIONALES cidos grasos, entre otros).
4.4 NMERO TOTAL DE DIVISIONES De estos mtodos, el recuento celular es el
CELULARES ( ) ms utilizado por ser un mtodo sencillo y poco
5. REFERENCIAS costoso, el cual permite adems un mejor
seguimiento del cultivo mediante su inspeccin
Palabras clave: recuento celular, curva de visual. Es necesario remarcar que la
crecimiento, nmero total de divisiones celulares correspondencia entre la concentracin celular y
la informacin proporcionada por los otros
mtodos (como la cantidad de pigmentos o de
1. INTRODUCCIN otros componentes celulares, que son ms
laboriosos y requieren de tiempo, material y
El crecimiento de un cultivo de microalgas se equipamiento ms costoso) no es constante, ya
expresa como el incremento de biomasa ya sea que stos dependen del estado fisiolgico de las
en forma de nmero de clulas (cl/mL), en peso clulas, de la fase de crecimiento y de las
seco (total y/o orgnico), cantidad de protena, condiciones ambientales a las cuales est
de pigmentos, medidos directamente o en sometido el cultivo (Alfonso y Leal, 1998).

21
22 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
Para obtener resultados confiables, es
recomendable aplicar algunos mtodos
simultneamente, incluyendo observaciones
microscpicas cualitativas para evitar errores
debido a la contaminacin de los cultivos. En esta
primera seccin se describen las tcnicas de
recuento celular y de determinacin de la
densidad ptica.
2. RECUENTO CELULAR
1.1 Cmaras de recuento
Una de las dificultades para el recuento al
microscopio es obtener una buena
reproducibilidad, por lo cual es importante saber
seleccionar el tamao de la muestra, la dilucin,
el tipo de cmara de recuento, el objetivo del
microscopio y la tcnica de llenado de la cmara.
En algunos casos, puede ser necesario corroborar
el volumen de la cmara que se est utilizando.
Para realizar el recuento celular se han
diseado diferentes cmaras que contienen un
volumen determinado de muestra entre una
lmina y una laminilla rgida (cubreobjeto espe-
cial) colocada sobre plataformas laterales a una
altura establecida (Alfonso y Leal, 1998). La que
se usa con mayor frecuencia para cultivos de
Figura 1. Reglilla de Neubauer de 9 mm2.
microalgas es el hematocitmetro de 0.1 mm de
profundidad con reglilla de Neubauer, que se re-
produce en la Figura 1.
Para microalgas de mayores dimensiones,
como muchos dinoflagelados, los tipos de cmara
que se utilizan ms comnmente son: de
Sedgwick-Rafter o el hematocitmetro de 0.2 mm
de profundidad con reglilla de Fuchs-Rosenthal.
En la Tabla 1 se dan las principales
caractersticas de las cmaras ms comunes y
posteriormente se especifican los clculos para
obtener la concentracin celular.
En la mayora de los laboratorios, la cmara
de recuento que se utiliza es el hematocitmetro
de 0.1 mm de profundidad con reglilla de
Neubauer, la cual consta de 9 cuadrados con
lados de 1 mm (rea total de recuento = 0.9 mm2),
cada uno de los cuales corresponde a un volumen
de 0.1 L. Los cuatro extremos estn subdivididos
en 16 cuadros pequeos. El cuadro central
contiene 25 cuadros, cada uno con un rea de
0.04 mm2 (0.2 mm x 0.2 mm), a su vez divididos
en 16 cuadros ms pequeos (Fig. 1).
Para clulas ms grandes de 6 m y con
cultivos relativamente poco concentrados, se
aconseja que el recuento se haga en los cuatro
cuadros marcados como A, B, C y D, aunque en
varios laboratorios se prefiere contar por lo menos
un cuadro adicional, seleccionado cada vez al
 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 23
Tabla 1. Nombre comercial, volumen til de recuento, profundidad, objetivos usados ms
frecuentemente, tamao de las clulas en la muestra e intervalo de concentraciones aconsejadas
para las cmaras ms comunes utilizadas para el recuento celular de microorganismos (Guillard
y Sierracki, 2005).

Nombre Volumen Profundidad Area Objetivos Tamao celular cl/mL

(L) (mm) (mm2) (m)
Petroff Hauser 0.2 0.02 10 40 -100 0.5 - 5 106 108
Speirs Levy 0.4 0.2 2 10 - 20 5 - 75 104 - 106
Hematocitmetro 0.9 0.1 9 20 - 40 2 - 30 104 - 107
(Neubauer)
Hematocitmetro 3.2 0.2 16 10 - 20 5 - 75 104 106
(Fuchs-Rosenthal)
Palmer Maloney 100 0.4 250 10 - 45 5 - 150 102 105
Sedgwick-Rafter 1000 1 1000 2.5 - 10 50 - 500 30 104

azar. Cuando las clulas son pequeas y la
concentracin de los cultivos es muy alta, es
preferible utilizar cinco cuadros menores del
cuadro central marcado con X.
1.2 Clculos de recuento celular
Si se contaron todas las clulas presentes en
los 4 cuadros de 1 mm2 marcados como A, B, C y
D, la concentracin celular se calcula de acuerdo
a la frmula:
C = N 104 dil
En donde:
C = cl/mL
N = promedio de clulas presentes en 1 mm2
(0.1 L)
dil = factor de dilucin (cuando se consider
necesario diluir la muestra. Es importante aclarar
que si se us 1 mL de muestra y 9 mL de agua
sin clulas, el volumen total es 10 mL y el factor
de dilucin es = 10. Esta dilucin se define como
uno en diez -1:10-. NOTA: Esta aclaracin se debe
a nuestra observacin que frecuentemente se
agregan 10 mL de agua a 1 mL de muestra y se
usa 10 como factor de dilucin lo que esto no es
correcto).
104 = factor de conversin de 0.1 L a 1 mL
Si las clulas se contaron en el cuadro cen-
tral (25 cuadros) considerando solo los 5 cuadros
menores del cuadro central marcado con X, la
concentracin celular se calcula de acuerdo a la
siguiente frmula:
C = [ (N / 4) / 10-6 ] dil.
En donde:
C = cl/mL
N = promedio de clulas presentes en los 5
cuadros pequeos del cuadro central
4 x 10 -6 = corresponde al volumen de la
muestra expresado en cm3 (mL) sobre el rea de
los cuadros pequeos la cual equivale a 0.004
mm3 (0.004 L) (0.2 x 0.2 x 0.1)
dil = factor de dilucin
Para el caso del hematocitmetro de 0.2 mm
de profundidad, los clculos son los mismos pero,
considerando que la profundidad es doble, es
decir, 1 mm2 corresponde a un volumen contado
de 0.2 L y el factor de conversin de L a mL es
5 103.
La cmara Sedgwick-Rafter consta de un
portaobjetos con un marco rectangular de 50 x
20 mm y 1 mm de profundidad. Con el fin de
facilitar el recuento, los modelos actuales tienen
una reglilla con 20 columnas y 50 lneas. Para un
cultivo muy concentrado de una especie unicelular
se sugiere diluir, como por ejemplo 1:1000 y contar
toda la cmara. En este caso, los clculos para
determinar la concentracin celular (cl/mL) es:
24 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
C = N dil
En donde:
C = cl/mL
N = clulas contadas en toda la cmara
dil = factor de dilucin
Es necesario recordar que independien-
temente del tipo de cmara, la precisin de los
recuentos depende de la distribucin al azar de
las partculas (clulas) sedimentadas. Por este
motivo, en el caso de especies que forman
cadenas se deben contar las cadenas (que son
las que se distribuyen al azar) y posteriormente
determinar el promedio del nmero de clulas por
cadena, con el cual se puede calcular el nmero
total de clulas de esa especie presente en la
muestra.
1.3 Protocolo para el recuento celular con
cmara de 0.1 mm (Neubauer)
a) Agitar el cultivo para permitir que las clulas
tengan una distribucin homognea.
b) Tomar una muestra de 1 mL y colocarla en un
tubo previamente lavado y seco. Agregar una
gota de lugol para fijar las clulas. (Solucin
A: pesar 10 g de KI y disolver en 100 mL de
agua destilada. Solucin B: pesar 5 g de I2
cristalino y disolver en 10 mL de CH3COOH.
Mezclar ambas soluciones (A+B), agitar bien
y mantener en frasco mbar).
c) Cuando el cultivo est muy concentrado (>106
cl/mL) se diluye la muestra con agua de mar
o destilada (segn sea el caso). NOTA:
Generalmente una dilucin 1:10 es suficiente,
pero es necesario verificar que la
concentracin resultante sea suficiente para
obtener una precisin adecuada, la cual
depende del nmero de clulas presentes en
promedio en 1 mm2, de acuerdo con la frmula
= x 2 x en la cual es la media
poblacional, calculada a partir del estimador
x el cual es el promedio de clulas contadas
en 1 mm2 (Lund et al., 1958). Por lo anterior,
si se cuentan en promedio 25 clulas en 1
mm2, la precisin de ese recuento es 25
2 25 = 25 10.
d) El tubo se agita y se succiona una muestra
con una pipeta Pasteur.
e) Se llena la cmara con el cubreobjeto ya
puesto, colocando la punta de la pipeta Pas-
teur en la muesca en forma de V que tiene la
cmara, cuidando que el volumen depositado
sea suficiente para que una parte llegue hasta
los canales laterales, pero sin inundarlos
completamente. Si esto sucede, se seca y
limpia la parte inferior de la cmara y se
observa al microscopio para verificar que las
clulas tengan una distribucin adecuada (no
agrupada). Para los modelos que no tienen
muesca, colocar la gota cerca del margen del
cubreobjetos, procurando que no se expanda
a la parte superior del mismo. Una alternativa
aceptable es colocar la gota en uno de los
canales laterales, verificando que el exceso
llegue hasta el otro canal lateral.
f) Generalmente se enfoca la cmara con el
objetivo 10X aunque en ocasiones cuando se
trata de clulas pequeas se utiliza el de 40X.
Esto facilita la identificacin de las clulas,
discriminando los residuos y dems objetos
con tamao similar a la especie que se est
cultivando.
g) El registro se hace contando las clulas que
quedan dentro de cada una de las cuadrculas
marcadas como A, B, C y D indicadas en la
Figura 1. En el caso de las clulas que tocan
las lneas de demarcacin entre cuadros, se
cuentan solamente las que tocan dos de los
cuatro lados, seleccionados al azar.
h) Para tener un recuento ms preciso, se usan
tres o ms submuestras de cada muestra y
con stas se calcula la concentracin media.
Para calcular la concentracin celular (cl/mL)
se utiliza la frmula indicada anteriormente.
i) Con los datos de concentracin celular (cl/
mL) de cada recuento en tiempos sucesivos
(generalmente a intervalos de 24 h) se obtiene
la curva de crecimiento graficando en el eje
de las Y los valores de concentracin y en
el eje de las X el tiempo (en das). Tambin
es importante determinar la tasa de
crecimiento (), el tiempo de generacin (tg) y
el nmero de duplicaciones (n) (Schoen,
1998).
 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 25
espectrofotmetro, usando la longitud de onda
3. DENSIDAD PTICA seleccionada. Previamente, el equipo se
calibra con agua destilada o de mar (aunque
La concentracin celular puede ser estimada en general hay diferencias mnimas entre los
indirectamente usando la densidad ptica del dos tipos de agua), dependiendo si la
cultivo, que es una tcnica menos precisa del microalga es de agua dulce y/o marina.
recuento directo, pero permite una evaluacin 3) Con los datos de densidad ptica se obtiene
rpida de la concentracin microalgal, en espe- la curva de crecimiento graficando los valores
cial si se cuenta con una curva de calibracin entre de densidad ptica (DO) en el eje de las Y
la concentracin celular de una especie con el tiempo en el eje de las X, recordando
determinada, evaluada directamente, y las que cuando se usa la transmitancia (T = % de
lecturas de densidad ptica de uno o ms cultivos la luz incidente recibida por el fotodetector),
de esa especie. Uno de sus inconvenientes es es necesario utilizar la transformacin: DO =
que la contaminacin bacteriana y/o de otro tipo 100 - T
(basura, residuos), dar lecturas errneas, por lo
que hay una tendencia a evitarla.
La mencionamos en este captulo, ya que
4. CURVA DE CRECIMIENTO
todava se usa en algunos laboratorios para
reconocer rpidamente las fases de crecimiento
De la misma manera que bacterias y
de los cultivos, por lo cual permite tomar
levaduras, las microalgas se reproducen
decisiones inmediatas sobre los tiempos de
principalmente por divisin celular, que es binaria
cosecha o de dilucin. Algunos autores proponen
en la mayora de los casos, por lo cual presentan
el uso de una longitud cercana al pico de
un crecimiento rpido cuando se inoculan en un
absorcin de la clorofila (675 nm), lo cual
medio de cultivo no limitante y se mantienen en
permite obtener una lectura an cuando la
condiciones adecuadas.
concentracin celular es baja, mientras que para
En general, las condiciones ambientales
otros sta se debe acercar al mnimo de
cambian con la edad del cultivo, por lo cual cam-
absorcin. Esto se debe al hecho de que el
bia tambin la velocidad de crecimiento
contenido celular de clorofila puede variar de
poblacional. Esto permite reconocer diferentes
acuerdo a la cantidad de luz disponible, la cual
fases de crecimiento, que sirven para describir la
cambia de acuerdo a las condiciones
forma en la cual cambia la concentracin celular
experimentales y a la edad del cultivo por lo cual,
o de biomasa.
como nosotros, sugieren leer a 550 nm.
Para esto se utilizan principalmente los
parmetros poblaciones definidos como velocidad
3.1 Protocolo para determinar la densidad
especfica de crecimiento, tambin conocida como
ptica
tasa de crecimiento () y el tiempo de duplicacin
o de generacin (tg).
1) Agitar el cultivo ya sea recin inoculado y/o
en la fase de crecimiento que se haya
4.1 Ecuaciones que definen el crecimiento
seleccionado, para permitir que las clulas se
(Guillard, 1973)
distribuyan homogneamente.
2) Colocar el volumen necesario de muestra (en
La velocidad especfica de crecimiento o tasa
el caso que el cultivo est muy concentrado,
de crecimiento () est definida por la siguiente
hacer una dilucin) en una celda de volumen
ecuacin:
y camino ptico apropiados, dependiendo del
= dx / dt 1/x
tipo de instrumento del cual se disponga en
el laboratorio, agitar nuevamente y medir
En donde:
rpidamente la transmitancia o la absorbancia
x = concentracin de la biomasa (nmero de
(densidad ptica) en el colormetro o
cl/mL)
26 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
t = tiempo en das
En una curva de crecimiento como la que se
presenta en la Figura 2 se pueden reconocer las
diferentes fases (Vonshak y Maske, 1982), las
cuales se definen a continuacin:
4.2 Fases de crecimiento
1. Fase lag: o fase de adaptacin: el
comportamiento inicial depende de las
condiciones de las clulas del inculo, de las
cuales depende tambin el xito del nuevo cultivo.
Cuando las clulas del inculo no se encuentran
en condiciones metablicas adecuadas se
presenta una fase de retardo del crecimiento, por
lo cual el cultivo no ser exitoso. Los cambios de
las condiciones ambientales como temperatura,
iluminacin y pH tambin pueden causar un
retardo del crecimiento en la fase inicial de un
cultivo.
2. Fase de aceleramiento: en esta fase,
diferentes componentes estructurales se
incrementan secuencialmente, iniciando con el
RNA (por sus iniciales en ingls cido
ribonucleico), seguido de las protenas y del peso
individual. La concentracin celular es
generalmente la ltima que muestra este incre-
mento.
Figura 2. Curva de crecimiento tpica, en la cual se
muestran las diferentes fases, marcadas como: 1 fase
lag; 2 fase de aceleramiento; 3 fase exponencial; 4
fase de desaceleracin del crecimiento; 5 fase
estacionaria; 6 fase de muerte.
3. Fase exponencial: durante este periodo
la velocidad de crecimiento adquiere su valor
mximo y, en vista de la falta de factores
limitantes, permanece aproximadamente
constante. Por este motivo, la concentracin
celular aumenta rpidamente, aunque en general
no se alcanzan valores muy elevados.
4. Fase de desaceleracin: en esta fase se
empieza a notar el efecto de una menor
disponibilidad de uno de los factores que regulan
el crecimiento, por lo cual las condiciones de
cultivo son sub-ptimas. En consecuencia, la tasa
de divisin celular disminuye aunque, en vista del
alto nmero de clulas, la concentracin celular
alcanza su mximo valor. En este periodo la
composicin bioqumica de la biomasa cambia de
manera opuesta a la mencionada para la fase de
aceleracin.
5. Fase estacionaria: durante esta fase las
condiciones de cultivo son limitantes y la natalidad
es igual a la mortalidad, por lo cual la
concentracin celular y los componentes de la
biomasa permanecen sin cambios relevantes.
Este comportamiento se debe a la baja
concentracin de algn nutriente esencial o al alto
valor del pH, con consiguiente poca disponibilidad
de sustrato fotosinttico, o a una excesiva
concentracin de oxgeno, aunque con frecuencia
el motivo ms importante es la pobre penetracin
de la luz causada por la alta concentracin celular
(efecto de autosombreado). Otro factor que
puede limitar el crecimiento es la excrecin de
productos catablicos al medio de cultivo.
6. Fase de muerte: la tasa de mortalidad es
superior a la de natalidad, por lo cual la
concentracin disminuye. Adems se registra una
disminucin de la biomasa unitaria como resultado
de un incremento en la proporcin entre
respiracin y fotosntesis y a la ausencia de
nutrientes, que conlleva a la muerte o lisis celular.
4.3 Parmetros poblacionales
Independientemente de la fase de crecimiento
en la cual se pueda encontrar, los cambios de
 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
concentracin celular o de biomasa de un cultivo
son una funcin del valor registrado en la
evaluacin anterior (es decir, se trata de una vari-
able concentracin-dependiente), por lo cual su
crecimiento poblacional puede ser descrito
mediante la ecuacin:
Nt1 = Nt0 K [(N-M) t]
En donde:
Nt0 y Nt1 = son los valores de concentracin
celular registrados al inicio y al final del intervalo
de tiempo que pas entre dos tiempos sucesivos
de evaluacin de la velocidad de crecimiento (t =
t1 - t0)
N y M = son las tasas de natalidad y de
mortalidad, cuya diferencia describe globalmente
la tasa de crecimiento poblacional (N M = )
K = base de los logaritmos usados para re-
solver la ecuacin la cual, utilizando logaritmos
naturales (base e), se despeja como sigue:
e = (ln X2 ln X1) / (t2 t1)
En donde:
X2 y X1 = concentracin determinada en los
tiempos t2 y t1
De acuerdo a las propiedades de los
logaritmos, la ecuacin anterior se puede escribir:
e = ln (X2 / X1) / (t2 t1)
En vista de que la mayora de las microalgas
se reproduce mediante divisin binaria, la tasa
de crecimiento se puede obtener directamente en
nmero de divisiones celulares o de duplicaciones
diarias de biomasa, utilizando en la ecuacin an-
terior logaritmos en base 2 de acuerdo a la
frmula:
2 = [ln (X2 / X1) / ln2] / (t2 t1)
El tiempo de duplicacin y/o de generacin
(tg), es el tiempo necesario para que se duplique
la poblacin. Cuando se usan logaritmos natu-
rales, el tiempo de duplicacin puede ser
calculado como:
tg = ln 2 / e = 0.693 / e
27
O si se usaron logaritmos en base 2:
tg = 1 / 2
Como se mencion, cuando se experimenta
con cultivos de microalgas, es importante conocer
su curva de crecimiento en las condiciones en
las cuales se est trabajando, ya que este dato
podr ser utilizado para establecer los tiempos
en los cuales es necesario cosechar la biomasa,
lo cual permite comparar organismos en fases
de crecimiento conocidas. Por lo tanto, diferencias
en su composicin o en sus caractersticas de
calidad pueden ser atribuidas al tipo de
tratamiento que se utiliz en ese experimento en
particular.
Un ejemplo de una curva de crecimiento
obtenida en nuestro laboratorio en condiciones
controladas, se muestra en la Figura 3 y una forma
sencilla y rpida de reconocer las fases de
crecimiento de un cultivo se ilustra en la Tabla 2.
4.4 Nmero total de divisiones celulares
( )
Uno de los objetivos principales en
experimentos de crecimiento de cultivos de
microalgas es demostrar que un determinado
tratamiento rendir mayor concentracin que el
procedimiento estndar, lo cual implica
seleccionar el momento ms adecuado para la
cosecha.
Figura 3. Curva de crecimiento de Prorocentrum lima
cultivada en medios diferentes: K ,S
f/2 (Heredia-Tapia, 2005).
28 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO

Tabla 2. Recuento celular, ln de la concentracin celular,

tasa de crecimiento (2, calculada a partir de log2) y
tasa de crecimiento acumulada ( 2) de un cultivo de
Pavlova lutheri (Hernndez-Espinosa, 1999) cultivada
en un sistema batch (por lote) a 125 mol quanta m-2 s-
1
en medio f/2 (Guillard y Ryther, 1962).

Tiempo N Ln N 2 2
(das) (cl/mL)
0 16,670 9.721 --
1 75,000 11.225 2.1696 2.1696
2 320,000 12.676 2.0931 4.2627
3 1,321,650 14.094 2.0461 6.3088
4 3,625,806 15.104 1.4560 7.7648
5 4,480,622 15.315 0.3054 8.0702 Figura 4. Crecimiento de un cultivo de Pavlova lutheri
6 4,805,000 15.385 0.1008 8.1710 en cl/mL y como suma progresiva de duplicaciones
celulares (Hernndez-Espinosa 1999).

Para esto, es necesario determinar con Universidad de La Habana. Habana, Cuba.

seguridad el inicio y el final de cada fase de
crecimiento, que no es fcil reconocer utilizando
las curvas de dispersin de concentracin celular
graficada contra el tiempo. Para facilitar esta
seleccin, sugerimos graficar contra el tiempo la
suma progresiva de las tasas de crecimiento diario
( ), ya que cualquier cambio de la pendiente de
esta nueva curva de dispersin indica una
variacin de la velocidad de duplicacin.
Para ejemplificar lo anterior, en la Tabla 2 se
indican los datos correspondientes a un cultivo
de Pavlova lutheri, y en la Figura 4 se dan las
grficas de dispersin contra el tiempo de la
concentracin celular y de la suma progresiva de
las tasas de divisin. La segunda indica que el
crecimiento exponencial termin a partir del da
3, despus del cual la pendiente de la
disminuy, como consecuencia de la menor
velocidad de divisin celular (fase de
desaceleracin), mientras que la falta de aumento
del valor de la en los das siguientes indica
que en esos das los cultivos ya se encontraban
en la fase estacionaria.
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