Ao del Buen Servicio Al ciudAdAno

INTERPRETACIN DE Anlisis Clnicos

INFORME N7
TEMA:
PRUEBAS SEROLGICAS: DETERMINACIN DE FIEBRE
TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS.

ALUMNOS:
Chepe Cueva, Freddy Jess M.

DOCENTE:
Q.F. Dr. Juan Manuel Parreo Tipian.

SECCIN:
FB6M2 / Prctica B

LIMA PERU

2017
 PRACTICA No 7: PRUEBAS SEROLGICAS: DETERMINACIN
DE FIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS
A. AGLUTINACIONES
La reaccin de aglutinacin fue desarrollada hacia finales del siglo pasado por Durham
en esta reaccin el antgeno siempre est en suspensin, pues se trata de partculas;
para que la reaccin de aglutinacin ocurra se requiere los siguientes componentes:
Antgeno en suspensin, Sistema buffer y Dilucin de anticuerpos.
La reaccin puede utilizarse como prueba directa o indirecta El mecanismo de esta
reaccin es simple: si en un sistema buffer, usualmente solucin salina buffer, se coloca
una apropiada dilucin de un suero que contenga anticuerpos especficos contra
determinados grupos antignicos del antgeno en suspensin, las molculas de
anticuerpos reaccionan con los grupos antignicos de las partculas del antgeno y
actan como puente produciendo grumos fcilmente visibles.
Las Salmonellas se consideran patgenos entricos obligados. Los alimentos y el agua
contaminados son los mecanismos de transmisin. La enfermedad puede presentarse
como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos rganos o fiebre tifoidea. La
Brucelosis se presenta en la mayora de los casos con anorexia, fiebre, decaimiento y
escalofros, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes como son las seas
y neuropsquicas. A pesar de que el mtodo definitivo para establecer la etiologa de
estas enfermedades es a travs del aislamiento del agente patgeno, esto resulta difcil
debido a que la investigacin se realiza frecuentemente en perodos tardos de la
enfermedad y luego de una terapia antibitica. Por este motivo es de gran importancia
diagnstica la deteccin de los anticuerpos especficos producidos en el curso de cada
una de estas patologas. Una prueba aislada es de escaso valor, siendo necesarias 2 o
ms pruebas seriadas a fin de poner en evidencia cambios en el ttulo de anticuerpos.

RESULTADOS:
FUNDAMENTO
El suero del paciente se pone en contacto con antgenos especficos. En este caso se
utilizan suspensiones de Salmonellas o Brucellas muertos. Si la muestra contiene los
anticuerpos correspondientes se producir una aglutinacin visible macroscpicamente.
REACTIVOS PROVISTOS
Antgenos Febriles Salmonella: suspensin en solucin salina con conservantes
apropiados, conteniendo los siguientes antgenos bacterianos:
Antgenos Paratyphoid A (Salmonella, antgeno flagelar a).
Antgenos Paratyphoid B (Salmonella, antgeno flagelar b).
Antgenos Typhoid H (Salmonella, antgeno flagelar d).
Antgenos Typhoid O (Salmonella, antgeno somtico D).
Antgenos Febriles Brucella: suspensin de antgenos bacterianos.

TIPO PA PB TH TO B

MUESTRA

No hay No hay No hay No hay No hay

RESULTADO
aglutinacin aglutinacin aglutinacin aglutinacin aglutinacin
CUESTIONARIO
1. Cul es la importancia clnica de la determinacin de las aglutinaciones?
Las reacciones febriles son pruebas que han venido a caer en desuso, sin embargo en
muchos paises en vas de desarrollo se siguen utilizando por ser pruebas baratas y
rpidas, pero en paises desarrollados son cada vez menos utilizadas por su poco valor
diagnstico. Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del
paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettsia (reaccin cruzada con Proteus OX-
19). Las Salmonellas se consideran patgenos entricos obligados. Los alimentos y el
agua contaminados son los mecanismos de transmisin. La enfermedad puede
presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos rganos o fiebre
tifoidea. La Brucelosis se presenta en la mayora de los casos con anorexia, fiebre,
decaimiento y escalofros, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes como
son las seas y neuropsquicas. A pesar de que el mtodo definitivo para establecer la
etiologa de estas enfermedades es a travs del aislamiento del agente patgeno, esto
resulta difcil debido a que la investigacin se realiza frecuentemente en perodos tardos
de la enfermedad y luego de una terapia antibitica.
Por este motivo es de gran importancia diagnstica la deteccin de los anticuerpos
especficos producidos en el curso de cada una de estas patologas. Una prueba aislada
es de escaso valor, siendo necesarias 2 o ms pruebas seriadas a fin de poner en
evidencia cambios en el ttulo de anticuerpos.

2. Cmo se relacionan los valores positivos de las aglutinaciones con el

Hemograma de Schilling?
Generalmente ttulos de 1:40 1:80 son sospechosos de enfermedad. Slo ttulos
mayores de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnstico de enfermedad
cuando estn acompaados de la sintomatologa clnica. Ttulos mayores de 1:320, son
concluyentes.

3. Qu es desviacin a la izquierda y que es desviacin a la derecha?

La desviacin a la izquierda se debe a las formas inmaduras, mientras que en la
desviacin a la derecha se incluye a los linfocitos y a los monocitos, no slo a los
linfocitos.
Cualquier infeccin o estrs repentino ocasiona un aumento en la produccin de
leucocitos, que generalmente lleva a un incremento en el nmero de clulas y en el
porcentaje de clulas inmaduras en la sangre (principalmente de clulas en banda). Este
cambio se conoce como "desviacin a la izquierda".
Se habla de "desviacin a la derecha" cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se
haya acrecentado en relacin a los granulocitos, es decir, a con respecto a los
neutrfilos, eosinfilos y basfilos.

B. DIAGNSTICO DE SIFILIS
La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual (ETS), que ha afectado al hombre
durante siglos. Fue en 1905, que se descubri que era producida por un espiroqueta, el
Treponema pallidum, a la que originalmente se le denomin Spirochaeta pallida. El
gneros Treponema tiene tres especies, el T pallidum que produce la sfilis, el T
pertenece que produce el plan y el T endemicum que produce el bejel.
La primera prueba diagnstica para esta enfermedad, fue el test de Wassermann, que
se desarroll en 1906, valindose de una extraccin alcohlica a partir de tejidos
sifilticos. Lo que se pretenda demostrar con esta prueba, era la presencia de
anticuerpos sricos mediante una tcnica de fijacin de complemento, ms tarde se
demostr que estas reacciones eran inespecficas y se producan con extractos de otros
tejidos. Aos despus se purific dos sustancias reactivas, a partir de msculo de
corazn de vacunos, la cardiolipina y la lecitina, lo cual condujo a la obtencin de un
antgeno ms especfico, que es utilizado desde 1946 en la prueba de VDRL Venereal
Disease Research Laboratory.
Para el diagnstico de la sfilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas.
Por examen directo mediante microscopa en campo oscuro y por fluorescencia directa,
mediante serologa y por cultivo en clulas epiteliales de conejo. Por serologa se tienen
dos tipos de pruebas, las pruebas no treponmicas como VDRL y RPR (Rapid plasma
reagin) y las pruebas treponmicas como FTAABS (Fluorescent treponemal antibody
absorption) o como MHA-TP (Microhemaglutinacin para T pallidum)1.
Las nuevas pruebas diagnsticas para la sfilis, incluyen enzimo inmunoensayo (ELISA),
Western bloty Reaccin en cadena a la polimerasa (PCR).

RESULTADOS
A. MTODO DE VDRL
FUNDAMENTO
Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero
por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si la muestra
contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una floculacin visible en
microscopio. Las reacciones inespecficas se evitan con el empleo de antgeno
altamente purificado y el agregado de cloruro de colina caracterstica de la tcnica USR
(Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.

B. MTODO DE RPR
FUNDAMENTO
En la prueba rpida para reaginas plasmticas (RP R), las"reaginas" presentes en el
suero de individuos infectados con Treponema pallidum, se detectan por accin de las
mismas con antgeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partculas de
carbn. La reaccin produce una aglutinacin visible macroscpicamente, favorecida
por las partculas de carbn. Las reacciones inespecficas se evitan con el empleo de
antgeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no es
necesario inactivar la muestra.
CUESTIONARIO
1. En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?
VDRL
Esta prueba se puede realizar en lmina y ser
observada al microscopio como un
precipitado de partculas finas (floculacin), o
se puede realizar en un tubo de ensayo y ser
leda macroscpicamente.
Los resultados de VDRL en lmina son
comunicados como no reactivos (no hay
floculacin, dbilmente reactivos (ligera
floculacin, y reactivos floculacin definitiva.
Todos los sueros reactivos se diluyen
seriadamente, a cada dilucin se le realiza la
prueba de VDRL y se registra el titulo mximo
obtenido. Rara vez se tiene un paciente con
ttulo elevado en las diluciones y con VDRL no
reactivo en la muestra sin diluir (fenmeno de
prozona), si ocurriera es ms frecuente en la
sfilis secundaria. Se obtiene falsos negativos
en ciertas condiciones, tales como fenmeno
de prozona, bajo ttulo de anticuerpos,
presencia de sustancias inhibidoras en el
suero del paciente, VIH, la temperatura
ambiental fuera del rango de 23-29 C o error
tcnico.
RPR
El RPR es una prueba diseada para detectar
reagina en el suero de manera rpida, no
requiere inactivacin por calor
La muestra se mezcla con una suspensin
que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en
partculas de carbn. Si la muestra es positiva
se observa pequeos grumos negros
(floculacin).
El resultado se reporta como reactivo o no
reactivo; todos aquellos reactivos deben ser
diluidos seriadamente para realizar la
titulacin, y se reporta la dilucin ms alta que
exhibe reaccin.
Los falsos negativos se pueden producir por
errores tcnicos y los falsos positivos son los
mismos que para la prueba de VDRL.

2. Cules son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo?

Las pruebas treponmicas, en cambio, detectan especficamente los anticuerpos de
Treponema pallidum y su utilidad en el laboratorio est orientada a confirmar los
resultados arrojados por las pruebas no treponmicas. Las pruebas treponmicas ms
conocidas son: FTA-Abs (Inmunofluorescencia indirecta con absorcin del suero), FTA-
Abs 200DS (Inmunofluorescencia indirecta con absorcin y doble tincin), TPHA (Micro
hemaglutinacin), Captia syphilis M (ELISA de captura anti cadena pesada), ELISA IgG,
y WESTERN BLOT, las cuales tienen muy bajo ndice de falsos resultados, tanto
positivos como negativos.

3. Cmo se relaciona el Hemograma de Schilling con un VDRL positivo?

El VDRL es una prueba ms simple y es usada como rastreo. El resultado es dado en
formas de dilucin, o sea, un resultado 1/8 significa que el anticuerpo fue identificado
hasta 8 diluciones; un resultado 1/64 muestra que podemos detectar anticuerpos
inclusive despus de diluir la sangre 64 veces. Cuanto mayor es la dilucin en que se
detecta el anticuerpo, ms positivo es el resultado.
Si la explicacin anterior te has confundido, solamente sepa que el VDRL = 1/2 es un
ttulo ms bajo que 1/4, que es ms bajo que 1/8 y as sucesivamente. Cuanto ms alto
es el ttulo, ms positiva es la prueba
Como el VDRL puede estar positivo en otras enfermedades que no la sfilis, como lupus,
enfermedades del hgado, mononucleosis, lepra, varicela, artritis reumatoide, etc.,
consideramos solamente valores mayores de 1/32 como confiables para el diagnstico.
El VDRL tambin puede presentar falso positivo en personas ancianas.
El VDRL suele permanecer positivo entre 4 y 6 semanas despus de la contaminacin.
Generalmente sus valores comienzan a subir una a dos semanas despus de la
aparicin del chancro duro. Por lo tanto, si la prueba es hecha uno o dos das despus
de la aparicin de la lesin de la sfilis, el VDRL puede dar falso negativo.
4. Qu es el fenmeno de prozona?
El fenmeno de zona, conocido tcnicamente como fenmeno de prozona, es la
ausencia de aglutinacin o presencia de aglutinacin completa en las diluciones altas.
Todas las pruebas no treponmicas pueden presentar fenmenos de prozona - falsos
negativos - cuando las muestras son fuertemente reactivas, por lo que es conveniente
titularlas siempre. Esto es especialmente cierto cuando la prueba se realiza con muestra
no diluida y con un procedimiento incorrecto (como dispensar el antgeno sobre la
muestra no extendida en el crculo de reaccin). La temperatura de los reactivos es
igualmente importantsima en relacin con la sensibilidad. Tambin puede obtenerse un
resultado negativo en las fases muy tempranas del perodo primario, incluso cuando la
visualizacin de los treponemas es positiva.
Otro problema que podemos encontrar es el fenmeno de prozona. Consiste en un
resultado negativo o positivo dbil que se observa hasta en un 2% de los infectados,
especialmente en la fase de sfilis secundaria. Para solventar estas situaciones, hay que
realizar diluciones sricas mayores cuando existe sospecha fundada, como ocurre en
las embarazadas, usuarios de drogas por va parenteral o pacientes con otras
enfermedades de transmisin sexual.

C. ANTIESTREPTOLISINAS O (ASTO o AS0)

El ttulo de antiestreptolisinas ASLO es la medicin de anticuerpos anti-Estreptococo
betahemolticos del tipo A. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O,
que puede destruir los hemates y el cuerpo reacciona contra ella produciendo
anticuerpos especficos antiestreptolisina O. La medicin de estos anticuerpos es lo que
refleja el anlisis de antiestreptolisinas O ASLO.
La presencia de ttulos altos de antiestreptolisinas O ASLO, indican una infeccin por
la bacteria Estreptococo betahemolticos del tipo A, que puede producir una
glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o una escarlatina.
La elevacin de ASLO aparece a la semana de la infeccin por el estreptococo, los
valores ms elevados se dan en la tercera semana de la infeccin y es cuando pueden
aparecer las enfermedades secundarias a esta infeccin (glomerulonefritis, una fiebre
reumtica, una endocarditis bacteriana o una escarlatina) pero no son especficos de
ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una de ellas por la clnica o por otros
estudios diagnsticos.
El ASLO pueden mantenerse elevado a los 6 meses en el 30% de los casos. La
antiestreptolisina O es una prueba que a menudo se designa con el nombre de ASTO,
es til para el diagnstico y tratamiento de la fiebre reumtica , la glomrulo nefritis
aguda y otras infecciones por estreptococo beta hemoltico del grupo A.
Valores normales de ASLO
Los valores normales de ASLO son los inferiores a 200 UI/ml
Causas de ASLO alto (ASLO elevado)
Faringitis estreptococica La causa mas comun de la elevacion de asto es la
faringitis estreptococica, cuyos sintomas son fiebre, dolor abdominal e inflamacin
de las amgdalas.
Endocarditis bacteriana. Es una infeccin de las paredes internas del corazn,
causada por los estreptococos del grupo A.
Glomerulonefritis. Infeccin del rin causada principalmente por Streptococcus
pyogenes que causa la aparicin de protenas y sangre en la orina, as como la
reduccin de la capacidad de filtrado del rin.
 Fiebre reumtica. Enfermedad inflamatoria autoinmune producida por algunas
personas en respuesta al contacto con el estreptococo beta hemoltico. Puede
afectar a las articulaciones y al corazn.
Escarlatina. Es una enfermedad infecciosa producida por Streptococcus pyogenes
del grupo A que afecta sobre todo a nios. En Espaa fue erradicada, pero vuelven
a aparecer casos con la llegada de inmigrantes.

RESULTADOS
PRUEBA ASTO O ASLO
FUNDAMENTO
Los anticuerpos antiestreptolisina presentes en la muestra, son capaces de
aglutinar las partculas de ltex recubiertas con estreptolisina O. La turbidez
causada por la aglutinacin de las partculas de ltex es proporcional a la
concentracin de antiestreptolisina O (ASO) en la muestra y puede ser medida
espectrofotomtricamente.
PRUEBA Reactive (+) MUESTRA Non-reactive (-) RESULTADO

Artritest
Negativo
directo

ASO
Negativo
latex

PCR-
latex
directo
Negativo

CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento de la prueba de ASTO?
El ASLO-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta para la deteccin
directa y la semi-cuantificacin de niveles clnicamente significativos de anticuerpos anti-
estreptolisina O (ASLO) en suero. La determinacin se efecta ensayando una
suspensin de partculas de ltex recubierto con estreptolisina frente a los sueros
problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia
o ausencia de ASLO en las muestras ensayadas a niveles significativos.

2. Mencionar los estados fisiolgicos y medicamentos que interfieran con la

prueba de antiestreptolisina.
Factores que interfieren en la prueba. En portadores sanos se pueden encontrar ttulos
elevados de antiestreptolisina.
Pacientes bajo tratamiento antimicrobiano (Cefaclor, Azitromicina, Cefuroxima,
Penicilina benzatina, Clindamicina) y corticosteroides (Dexametasona, Prednisona)
suprimir la respuesta del anticuerpo antiestreptolisina.
Aumentos considerables en la Beta-lipoprotena inhiben a estreptolisina O, dando por
ende resultados falsos en el ttulo de antiestreptolisina.

3. Cmo se determinan las pruebas de PCR y LATEX?

La prueba de PCR: El anlisis de sangre de protena C reactiva (PCR) se utiliza
para identificar inflamaciones e infecciones del organismo.
Poco despus del inicio de una infeccin o inflamacin, el hgado libera la protena
C reactiva en la sangre. La PCR es un indicador temprano de estos problemas y su
nivel puede elevarse rpidamente. La determinacin se efecta ensayando una
suspensin de ltex recubierto con anticuerpos anti-PCR, frente a los sueros
problema. La presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel de
PCR por encima del lmite superior del intervalo de referencia de las muestras
ensayadas
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS R CONTROL + CONTROL - Reactivo PCR-
Ltex. Suspensin estabilizada y tamponada de partculas de ltex recubiertas con
anticuerpos especficos anti-PCR humana.
Aglutinacin en ltex: Es un mtodo de laboratorio para examinar ciertos
anticuerpos o antgenos Los anticuerpos o antgenos conocidos son unidos a
partculas de ltex, con el objeto de facilitar la visualizacin de la prueba. Se pueden
emplear otras partculas insolubles como el poliestireno o la bentonita.

4. Qu importancia clnica tienen las determinaciones de PCR y LATEX?

La determinacin de PCR se solicita a personas con signos y sntomas de infeccin
bacteriana o con signos y sntomas de una enfermedad inflamatoria crnica (como la
artritis reumatoide). Su demostracin en sangre refleja la presencia de inflamacin,
infecciosa o no infecciosa. Son tiles para el pronstico y comprobar la eficacia de un
tratamiento.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana;
1999.
2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed.
Barcelona: Masson; 2005.
3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid:
Masson; 2005.
4. Martnez V. Manual de Biometra Hemtica. Mxico. 2012.
5. Miale, J. Hematologa: medicina de laboratorio. Editorial Reverte. 1985.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed.
Madrid. Editorial Elsevier-Masson. 2006