Citometra de flujo basada en el diagnstico de inmunodeficiencia primaria

enfermedades
Introduccin:
Las enfermedades de inmunodeficiencia primaria (PID) son heterogneas grupo de
trastornos monogenticos del sistema inmunolgico, infecciones recurrentes y / o
graves, autoinmunidad, autoinflamacin, o malignidades. Una cuidadosa historia se
centr en la tipos de agentes infecciosos y otras complicaciones son importantes pistas
para sospechar PID. Las investigaciones de laboratorio incluidas hemograma, los
niveles de inmunoglobulina, los ttulos de anticuerpos, la funcin de los neutrfilos y los
componentes del complemento tambin son importantes herramientas para confirmar el
diagnstico de PID. Como el espectro de PID es En muchas ocasiones es difcil
diagnosticar las IDP basadas en solo los hallazgos convencionales de laboratorio. Lo
ms recientemente disponible la investigacin gentica es una herramienta definitiva
para diagnosticar PIDs; sin embargo, El anlisis de ADN lleva tiempo y es caro. En
contraste, las tecnologas que utilizan las caractersticas fsicas y qumicas las partculas
marcadas fluorescentemente en fase fluida pasan a travs de lseres son ms
complejos que el anlisis de genes, aunque necesitan y los investigadores calificados.
Por lo tanto, la citometra de flujo puede servir como una puente entre las pruebas
inmunolgicas convencionales y el ADN secuenciacin, ofreciendo resultados rpidos y
precisos basados en anlisis.
Aplicacin de citometra de flujo en el diagnstico de
enfermedades de inmunodeficiencia

La citometra de flujo es una herramienta altamente sensible para evaluar y apoyar el

diagnstico de PID. Las aplicaciones de la citometra de flujo en la evaluacin de PID
son multiplex y incluyen la investigacin de poblaciones y subpoblaciones de clulas
especficas, membrana celular especfica, protenas intracelulares e intranucleares,
efectos biolgicos asociados con defectos inmunitarios, y anomalas inmunes
funcionales (Tabla 1) .2

Evaluacin cuantitativa de poblaciones y subpoblaciones celulares es til para el

diagnstico de la agammaglobulinemia ligada al X (XLA) caracterizado por la ausencia
de clulas B en la sangre perifrica. Los pacientes con deficiencia grave de
inmunodeficiencia combinada (SCID) mientras que el impacto en las clulas B y NK es
variable dependiendo de el defecto gentico. Los pacientes con linfoprolifera-
sndrome de tipo 1 (XLP1) tienen una disminucin marcada en invariant natural
asesino T (iNKT) clulas. Sndrome linfoproliferativo autoinmune (ALPS) se caracteriza
por un aumento del receptor de clulas T (TCR) -a /b-positivo negativo doble T (DNT)
clulas. Pacientes con autosomal dominante hiper IgE (HIES), y aquellos con
enfermedad crnica candidiasis mucocutnea (CMCD) presente con disminucin del
nmero de clulas T cooperadoras (Th) 17 circulantes. Como protenas especficas de
la superficie celular se trata, subconjuntos nicos de pacientes con inmunodeficiencia
variable comn (CVID) pueden caracterizado por evaluar las clulas B CD19 +, el factor
activador de clulas B receptor (BAFF-R) en clulas B, y el co-estimulador inducible
(ICOS) en las clulas T activadas. Los pacientes con sndrome de hiper-IgM ligado a X
(XHIGM) no expresan el ligando CD40 (CD40L) sobre clulas T activadas, y
un grupo de pacientes con sndrome autosmico recesivo de hiper IgM carecen de
expresin de CD40 en clulas B. Susceptibilidad mendeliana a la enfermedad
micobacteriana (MSMD) se ha asociado con interfern (IFN) -gR1 expresin en
monocitos o deficientes de IL- 12Rb1 en clulas T activadas. Los pacientes con
leucocitos deficiencia de adhesin tipo 1 (LAD1) se puede identificar por ausencia
expresin de CD18 en granulocitos. Linfocitos de pacientes con X-SCID (X-SCID)
muestran deficientes CD132 (comn g cadena). Los pacientes que sufren de gp91-phox-
y p22- enfermedad granulomatosa crnica deficiente en phox (CGD), carente del el
citocromo b558 unido a la membrana, puede ser anticuerpo monoclonal (mAb) 7D5
frente al citocromo b558 expresada por granulocitos y clulas B. Falta de expresin de
IL-17RA en los linfocitos y los monocitos es tpico para los pacientes con
infeccin mucocutnea por candida y deficiencia de IL-17RA. Un gran nmero de PIDs
puede diagnosticarse mediante el anlisis de la expresin de protenas intracelulares
especficas. Los pacientes con XLA generalmente la expresin de tirosina quinasa de
Bruton (BTK) en monocitos y plaquetas. Los pacientes que padecen el sndrome de
Wiskott-Aldrich (WAS) o trombocitopenia ligada al cromosoma X (XLT) muestran
ausencia o reduccin expresin de la protena WAS (WASp) en linfocitos y mieloides
Clulas. Los pacientes con XLP1 carecen de expresin de SLAM-protena asociada
(SAP) en linfocitos. Linfocitos de pacientes con XLP2 carecen de expresin de la
protena de apoptosis X (XIAP).

Pacientes con linfocitosis hemofagoctica familiar el tipo 2 (FHL2) se puede identificar

por ausencia de expresin de perforina en clulas T CD8 + y clulas NK. Los pacientes
con FHL3 reduccin de la expresin de Munc13-4 en las plaquetas. Los pacientes con
la cadena z asociada protena quinasa de deficiencia de deficiencia de 70 kDa (ZAP70)
expresin de ZAP70 en linfocitos. Neutrfilos de pacientes con CGD ligados al X
carecen de gp91-phox, y los de pacientes con autosmica recesiva CGD debido a la
mutacin p47-phox y p67-phox carecen de expresin proteica relevante. La mayora de
los pacientes con la deficiencia de citocinesis 8 (DOCK8) carece de expresin de
DOCK8 en linfocitos. Tanto la protena citotxica asociada a linfocitos T 4 (CTLA4)
haploinsuficiencia y lipopolisacrido-respuesta y beige-como protena de anclaje (LRBA)
deficiencia tienen en comn bajo CTLA4 en las clulas T reguladoras CD4FOXP3.
La mayora de los pacientes presentndose con desregulacin inmune,
poliendocrinopata, enteropata, El sndrome de herencia ligada al cromosoma X (IPEX)
tiene baja o ausencia nuclear de la caja de PKP3 (FOXP3) expresin por CD4CD25
las clulas T reguladoras.

Actualmente se dispone de tcnicas de citometra de flujo para evaluar efectos de los

genes mutados, y los resultados pueden utilizarse diagnstico de las PID pertinentes.
La mayora de los pacientes con CVID o hiper IgM los sndromes han disminuido las
clulas B de memoria conmutada. Sndrome de Omenn y la mayora de los sndromes
hipomrficos SCID se caracterizan por un repertorio de clulas T oligoclonales. La
introduccin de pruebas funcionales mediante citometra de flujo una herramienta
poderosa para evaluar las vas importantes de inmunidad cognata e innata. Pacientes
con MSMD debido a mutaciones en los genes de la va IL12 / 23-IFNg puede ser
identificado por demostrando una fosforilacin reducida del transductor de seal y
activador de la transcripcin (STAT) 1 expresin en respuesta a la estimulacin
con citoquinas. Las clulas mononucleares de sangre perifrica (PBMCs) de pacientes
con CMCD responden con fosforilacin reducida de STAT1 cuando se estimul con IFN-
g. Los pacientes con FHL3 / 4/5, sndrome de Chediak-Higashi y Gricelli redujo la
expresin de CD107a en clulas NK en reposo y en clulas T citotxicas linfocitos (CTL).
Los monocitos de pacientes con XLP2 responden educcin del factor de necrosis
tumoral (TNF) -una produccin por monocitos en respuesta al dipptido de muramilo.
Pacientes con CGD, independientemente defecto molecular muestra dihidrorhodamina
reducida o ausente (DHR) 123 en los granulocitos, monocitos y clulas B. Los pacientes
con X-SCID y Janus kinase 3 (JAK3) - SCID deficiente demuestran fosforilacin reducida
de STAT3 y STAT5 en respuesta a citoquina-estimulacin. La quinasa 4 asociada al
receptor de IL - 1 (IRAK4) y diferenciacin mieloide respuesta primaria gen 88 (MyD88)
de- pueden identificarse mediante la reduccin de la produccin de TNF-a en monocitos
en respuesta al lipopolisacrido (LPS). Los pacientes con La deficiencia del receptor de
IL-10 demuestra una fosforilacin STAT3 reducida cuando se estimulan con IL-10.
Multisistema de inicio infantil enfermedad autoinmune 1, causada por ganancia de
funcin heterozigtica mutacin en STAT3, se asocia tpicamente con aumento STAT3
fosforilacin por linfocitos no estimulados.

Los siguientes son ejemplos que ilustran la aplicacin del flujo citometra para el
diagnstico de PIDs molecularmente definidas.

Inmunodeficiencia combinada severa

Los trastornos de SCID, las formas ms severas de PID, son generalmente
caracterizado por la ausencia completa de inmunidad mediada por clulas T y deterioro
de la funcin de las clulas B. Los pacientes con SCID se pueden clasificar por
caractersticas inmunofenotpicas basadas en citometra de flujo. TBNK SCID incluye
disgenesis reticular y adenosina desaminasa (ADA). TBNK SCID sugiere mutaciones
que afectan a los genes de activacin de recombinacin (RAG) 1 y RAG2,Artemis, ADN
ligasa IV y Cernunnos. El fenotipo TBNK es caracterstica para la deficiencia de X-
SCID y JAK3. TBNK SCID incluye IL-7Ra, CD3d, CD3 y CD3z. En X-SCID,
representando cerca de la mitad de todos los pacientes SCID, 4 T y NK clulas estn
ausentes mientras que los recuentos de clulas B son normales o altos (Figura 1A). El
gen responsable para X-SCID es IL2RG, que codifica para la cadena g comn (CD132).
Por lo tanto, la ausencia de CD132 por citometra de flujo sugiere fuertemente X-SCID
(Fig. 1B], aunque algunos pacientes con mutaciones en el dominio citoplasmtico de la
IL2RG puede expresar CD132 normal. Dado que la cadena g comn es tambin parte
de IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, y los receptores de IL-21, estas citoquinas constituyen los
ligandos especficos para todas las vas que dependen de una cadena g comn
funcional. La fosforilacin de STATs intracelulares puede evaluarse mediante flujo
citometra usando mAbs que reconocen slo STATs que estn fosforilados. Como se
muestra en la Figura 1C, D, los pacientes con X-SCID han alteracin de la fosforilacin
de tirosina de STAT5 y STAT3 en respuesta a la estimulacin con IL-2 e IL-21,
respectivamente. Este ensayo tambin identifica la deficiencia de JAK3 porque JAK3
interacta intracelularmente con la cadena g comn. La deficiencia de ZAP70 es una
forma de SCID caracterizado por carencia de CD8; pacientes con deficiencia de ZAP70
carecen de expresin de ZAP70 en clulas T.
Agammaglobulinemia ligada al cromosoma X

XLA se caracteriza por la ausencia de clulas B circulantes y severa de todas las

inmunoglobulinas sricas debido a mutaciones el gen BTK. El nmero de clulas B
ausente o marcadamente reducido, determinado por citometra de flujo basada en la
falta de CD19- y / o CD20- que expresan las clulas, son tpicas para todas las formas
de agammaglobulinemia
(Figura 2A). Por lo tanto, la evaluacin de BTK es obligatoria para el diagnstico
de XLA.6 Debido a que los pacientes con XLA no tienen clulas B, las clulas
intracelulares La expresin de BTK debe evaluarse en monocitos o plaquetas (Fig. 2B)
.7,8 Esta tcnica tambin puede utilizarse para la deteccin de XLA portadores Ausencia
de reduccin de la expresin de BTK sugiere fuertemente XLA, pero la cantidad normal
de BTK no descarta el diagnstico, como algunos pacientes con XLA expresan una
cantidad normal de Los pacientes con deficiencia de clulas B con BTK de tipo salvaje
pueden tener agammaglobulinemia autosmica recesiva y anlisis de secuencias de m
de cadena pesada, Iga, Igb, l5, BLNK, E47 o PI3KR1.

Sndromes Hiper IgM

Los sndromes HIGM son un grupo de trastornos genticos que molculas involucradas
en la recombinacin del conmutador de clase de clulas B y la hipermutacin
somtica.10 Los pacientes afectados presentan aumento de la IgM srica y bajos
niveles de IgG e IgA. Mientras que las mutaciones en varios genes se han asociado con
HIGM, la mayora El gen frecuentemente afectado es CD40L con herencia recesiva
ligada a X. Los pacientes deficientes en CD40L desarrollan no slo bacterias sino
tambin infecciones oportunistas y neoplasias malignas, lo que papel de CD40L en la
funcin de clulas T. CD40L (CD154) expresin por las clulas T CD4 + activadas estn
ausentes o reducidas cuando se evalan mediante antiCD40L mAbs especficos en la
mayora pero no en todos los pacientes con HIGM (Fig. 3], ya que algunas mutaciones
resultan en protenas no funcionales que sin embargo pueden unirse a los mAbs
neutrales epitpicos.11 En contraste, slo el CD40L funcional puede unirse a la
construccin de CD40-Ig, proporcionar un ensayo funcional basado en citometra de
flujo para anlisis X-linked HIGM.12 Deficiencia de CD40, una de varias HIGM
autosmica recesiva sndromes, es una fenocopia de la deficiencia de CD40L que puede
ser identificada mediante la evaluacin de la expresin de CD40 en clulas B, monocitos
o dendrticos A excepcin de la deficiencia de CD40L y CD40, ninguna de las otro
sndrome HIGM puede ser identificado por citometra de flujo.
Inmunodeficiencia variable comn
CVID es un grupo heterogneo de trastornos caracterizados por
hipogammaglobulinemia, produccin defectuosa de anticuerpos especficos y una
mayor susceptibilidad a infecciones recurrentes y crnicas, y con frecuencia a la
autoinmunidad, trastornos linfoproliferativos y Los pacientes con CVID tienen un nmero
normal o bajo de clulas B. Las clulas B se pueden subdividir en nave
(CD27IgDIgM), la memoria IgM (CD27IgDIgM) y memoria conmutada
(CD27IgDIgM) B basadas en la expresin de CD27 e IgD / IgM15. La mayora de los
pacientes con CVID muestran un nmero disminuido de clulas B de memoria
conmutada. Se observa tambin una disminucin del nmero de clulas B de memoria
conmutada en los sndromes HIGM. Un pequeo subconjunto de CVID son causados
por mutaciones en ICOS, CD19 y BAFFR (TNFRSF13C). Estos pacientes pueden ser
examinados por citometra de flujo. Se inform que los pacientes con deficiencia de
ICOS up-regulacin de ICOS por clulas T activadas.17 BAFFR es constitutivamente
expresado en clulas B, y los pacientes con mutaciones BAFFR muestran reduce la
expresin de esta protena.18 CD19 forma complejos con CD21, CD81 y CD225 que
colaboran con el receptor de clulas B tras el reconocimiento del antgeno. La ausencia
de expresin de CD19 en clulas B observado en pacientes con deficiencias de CD19
y CD81.

Sndrome de Wiskott-Aldrich y trombocitopenia ligada al cromosoma X

WAS es un trastorno poco frecuente asociado a la X caracterizado por
microtrombocitopenia, eccema, inmunodeficiencia celular y humoral, y un mayor riesgo
de enfermedad autoinmune y hematolgica malignidad22. El WAS es causado por
mutaciones en el WAS gen que codifica WASp; este gen tambin es responsable de
XLT y Neutropenia ligada al cromosoma X. Los anticuerpos monoclonales contra WASp
son til para el cribado de pacientes sospechosos de tener WAS o XLT (Fig. 4) .23,24
Esta tcnica tambin tiene valor en la evaluacin de quimerismo tras el trasplante de
clulas madre hematopoyticas y mosaicismo de reversin del gen WAS.
Sndrome linfoproliferativo ligado al cromosoma X
XLP, un PID raro con susceptibilidad a la infeccin por el virus EpsteineBarr, se
caracteriza clnicamente por linfohistiocitosis hemofagoctica e hipogammaglobulinemia,
con o sin linfoma. XLP se clasifica en el tipo 1 (XLP1) causado por mutaciones en el
SH2D1A gen que codifica SAP y tipo 2 (XLP2) causado por mutaciones en el gen XIAP
o BIRC4 que codifica XIAP. Deteccin de citometra de flujo de protenas intracelulares
de SAP y XIAP son pruebas de cribado tiles para la identificacin de los pacientes con
XLP1 y XLP2, respectivamente mientras que los pacientes con XLP1 han reducido
extremadamente nmero de clulas iNKT, los pacientes con XLP2 tienen un bajo
nmeros de clulas iNKT. La citometra de flujo tambin es til para identificar casos
atpicos de XLP incluyendo el mosaicismo de reversin somtica de XLP1, y femenino
XLP2.29,30 Porque XIAP juega un papel esencial en protena de dominio de
oligomerizacin de unin a nucletidos (NOD) la citometra de flujo de la produccin
de TNF-a por monocitos en respuesta a la estimulacin NOD2 por muramil dipeptide es
un enfoque funcional til para diagnosticar la deficiencia de XIAP. TNFa la produccin
se encontr ser severamente disminuida en todos los pacientes con deficiencia de XIAP
estudiada.

Linfocistiosis hemofagoctica familiar

FHL es un grupo de trastornos genticamente determinados, que amenazan la
vidaasociada con la proliferacin incontrolada de linfocitos y histiocitos que secretan
grandes cantidades de Los defectos genticos que afectan a los la citotoxicidad est
asociada con FHL, incluyendo perforina (FHL2), Munc13 - 4 (FHL3), sintaxina 11 (FHL4)
y Munc 18 - 2 (FHL5) ficidades. La FHL2 se puede evaluar evaluando la expresin de
perforina en CD56CD16 las clulas NK y las clulas T CD8 ((figura 6A), 33 y FHL3
pueden ser detectados mediante la deteccin de la expresin Munc13-4 en plaquetas
(Fig. 6B) .34 Evaluacin de la liberacin de grnulos citolticos por medir la expresin
superficial de CD107a por NK o clulas T citotxicas es til para el diagnstico de
FHL3,35,36. Este ensayo tambin se ha sugerido para el diagnstico de FHL 4, FHL5,
sndrome de Chediak-Higashi y el sndrome de Griscelli, todos los cuales tienen defectos
comunes en los vas citotxicas.

Sndrome linfoproliferativo autoinmune

ALPS es un trastorno de la homeostasis de linfocitos caracterizado por linfoproliferacin
crnica no maligna, manifestaciones autoinmunes (principalmente citopenia
autoinmune) y una mayor incidencia de las neoplasias linfoides.38 La mayora de los
pacientes con ALPS albergan mutaciones en los genes que regulan el Fas-mediada
extrnseca programado va de muerte celular (FAS, FASLG y CASP10). Un
inmunolgico de este sndrome es el aumento del nivel de las clulas T TCR-a /
bCD4CD8 en circulacin, denominadas clulas DNT (Figura 1A suplementaria).
Mientras que las clulas T de control apoptosis como se muestra por anexina V-clulas
positivas despus de la estimulacin con el anticuerpo anti-FAS, las clulas T del
paciente ALPS no Fig. 1B).
Sndrome de IPEX
El sndrome de IPEX, un trastorno autoinmune raro asociado a X causado por
mutaciones en el gen FOXP3, se caracteriza por enteropata grave, endocrinopatas
(diabetes y / o tiroiditis) y eccematosas dermatitis.39 FOXP3 desempea un papel crtico
en el desarrollo y la funcin de CD4CD25 regulador T (Treg) clulas. La mayora de
IPEX pacientes carecen o tienen un nmero reducido de CD4CD25FOXP3 o
CD4CD25CD127low Clulas Treg. Curiosamente, un nmero suficiente de clulas
CD4 + CD25 CD127 se observaron en pacientes con hipomorfo FOXP3 mutaciones.
40 Porque CD25 (una cadena de la IL-2 receptor) y STAT5b afectan el desarrollo y la
funcin de Treg, los pacientes con mutaciones CD25 o STAT5b presentes con un IPEX-
LIKE. Aunque se redujeron en nmero, las clulas Treg de estos pacientes expresan
FOXP3.
CTLA4 haploinsuficiencia y LRBA deficiencia
CTLA4 es una molcula coestimuladora expresada por clulas T activadas, y, similar a
la molcula co-estimuladora de clulas T CD28, se une a B7- 1 (CD80) y B7-2 (CD86)
en la superficie del antgeno-presentacin Clulas. CTLA4 transmite una seal
inhibidora a las clulas T, mientras que CD28 transmite una seal estimuladora. Prdida
de funcin heterozigtica se han identificado mutaciones en el gen CTLA4 en pacientes
con CVID con fenotipo tipo IPEX, incluyendo enteropata y autoinmune Los pacientes
con haploinsuficiencia de CTLA4 muestran reduccin de la expresin de CTLA4 en
clulas T CD4FOXP3 activadas (Figura 2). Mutaciones biallicas de prdida de
funcin en LRBA fueron identificados en pacientes con diagnstico clnico de CVID con
manifestaciones similares a ALPS o IPEX.45,46 Un denominador comn es temprana
de autoinmunidad severa, frecuentemente asociada con infecciones y enfermedades
linfoproliferativas con mayor riesgo linfoma Debido a LRBA colocalizes con CTLA4 en
endosomal vesculas, la deficiencia de LRBA aumenta el volumen de negocios CTLA4,
reduccin de los niveles de protena CTLA4 en FOXP3 regulador y activado
convencionales.47 La similitud fenotpica entre LRBA y Las deficiencias de CTLA4
pueden ser explicadas por este defecto CTLA4 expresin.
Deficiencia de IRAK4 y MyD88
IRAK4 es una quinasa que desempea un papel crucial en el receptor Toll-like (TLR) y
la sealizacin del receptor de IL-1. Ligando que se une a estos receptores
desencadena el reclutamiento de las protenas adaptadoras MyD88, IRAK4 y IRAK1, lo
que resulta en la transduccin de la seal aguas abajo. Autosmico la IRAK4 recesiva
y la deficiencia de MyD88 alteran el TLR y la mediada por el receptor de IL-1 inmunidad,
resultando en bacterias invasivas, especialmente infecciones neumoccicas.48 La
produccin intracelular de TNF-a en monocitos en respuesta a LPS (un ligando TLR4)
se ensay por flujo citometra y se encontr disminuido en pacientes con IRAK4
deficiencia (figura 3). Este ensayo tambin puede ser til para el cribado de pacientes
con deficiencia de MyD88.
La susceptibilidad mendeliana a la enfermedad micobacteriana
MSMD representa un grupo de PID caracterizados por la vulnerabilidad a la infeccin
por micobacterias dbilmente virulentas y Salmonella.Los pacientes afectados pueden
tener mutaciones en los genes implicados en la IL- 12/23-IFN-g. Los pacientes con IL-
12Rb1 e IFNgR1 de- se pueden detectar por citometra de flujo. La mayora de los
pacientes con IL- 12Rb1 y autosmica recesiva IFNgR1 deficiencias demuestran
ausencia de protena de la superficie celular. En contraste, la expresin de IFNgR1 fue
aumentado en un paciente con la forma autosmica dominante de IFNgR1 deficiencia
debido a la sobreexpresin de la cadena anormal IFNgR1.
Candidiasis mucocutnea crnica
CMCD se caracteriza por persistentes o recurrentes C. albicans infecciones de la piel,
las uas y las membranas mucosas.51 CMCD se refiere a una grupo heterogneo de
PID incluyendo autosmica dominante HIES asociado con la mutacin heterocigtica
STAT3, la deficiencia de IL-12p40, La deficiencia de IL-12Rb1, y la poliendocrinopata
autoinmune-candidiasiseectodermal distrofia / displasia (APECED). Los pacientes con
CMCD a menudo tienen niveles disminuidos de clulas Th17, al igual que HIES.52
Aquellos con APECED pueden desarrollar autoanticuerpos neutralizantes frente a IL-
17A, IL-17F, y / o IL-22, explicando el desarrollo de CMCD. De los recin descubiertos
autosmica recesiva IL-17RA y autosmica dominante IL-17F deficiencias asociadas
con CMCD, la deficiencia de IL-17RA puede ser fcilmente diagnosticada ausencia de
IL-17RA en la superficie de los linfocitos circulantes y monocitos.54 La causa ms
comn de CMCD es la heterocigoto mutaciones de ganancia de funcin en STAT1.
Anlisis de flujo fcilmente reconoce niveles elevados de STAT1 fosforilado que
persisten despus de la estimulacin con IFN-g de monocitos de pacientes con STAT1
mutaciones de ganancia de funcin (Figura 5) .57 En contraste con control, el inhibidor
de la tirosina quinasa, la estaurosporina, no reducir la fosforilacin STAT1 en monocitos
obtenidos de pacientes con mutaciones de ganancia de funcin STAT1.

Enfermedad granulomatosa crnica

CGD es un PID genticamente heterogneo que afecta a bactericida funcin de los
fagocitos y se caracteriza por bacterias recurrentes y infecciones fngicas. La CGD es
causada por defectos en la NADPH oxidasa complejo, que es responsable de la rfaga
respiratoria de fagocitos conduciendo a la generacin de superxido y otros reactivos
de oxgeno especies. Las mutaciones en cinco componentes (gp91phox, p22phox,
p47phox, p67phox y p40phox) del complejo NADPH representan el complejo Xlinked y
formas autosmicas recesivas de CGD. Diagnstico de laboratorio de CGD se realiza
mediante la medicin de la produccin de superxido, y se evala por citometra de flujo
usando oxidacin DHR123 (Figura 7). Este mtodo permite la distincin entre enlaces
X y autosmica recesiva CGD, y la deteccin de los portadores de X-linked CGD.58 Los
subtipos de CGD pueden determinarse tanto por factores genticos como anlisis de
citometra de flujo. El mAb 7D5 reconoce la superficie componentes de NADPH oxidasa,
y los pacientes con gp91phox y p22phox deficiencias pueden ser diagnosticadas
utilizando este anticuerpo (Fig. 7) .59 Los pacientes con deficiencias de p47phox y
p67phox pueden ser identificados con tincin intracelular usando anticuerpos anti-
p47phox y p67phox especficos anticuerpos monoclonales, respectivamente60. Todos
los protocolos de tincin estn disponibles en Mtodos.
Conclusin
La citometra de flujo es una herramienta instrumental para la diagnstico de PID. El
uso de la citometra de flujo proporciona resultados rpidos ya menudo sugiere el
diagnstico correcto. Mientras que el anlisis gentico diagnstico definitivo, la
citometra de flujo juega un papel importante papel en la evaluacin costo-efectiva de
los pacientes sospechosos de tener PID.