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ELECTROPHORSE
Techniques manuelles
1. ACCESSOIRES (ncessaires) :
2. RACTIFS (ncessaires) :
1. Tampon sroprotines Simacel N. Rf :60010015.
2. Tampon lipoprotines Simacel N. Rf :60010015. plus additif. Rf :60010020
3. Tampon hmoglobines Simacel Hb. Rf :60010040.
4. Colorant Rouge Ponceau S, pour Sero et Hb. Rf :60010030.
5. Colorant Noir Soudan + sol Alc, pour lipo. Rf :60010046.
6. Solution colorante et dcolorante pour sero et Hb. Rf :60010035.
7. Membranes dactate de cellulose sches. Rf :60010061, (ou humides).
8. SERACARD, 4 traces. Rf :30100045. ou 8 traces. Rf :30100040.
9. Papier buvard feuilles 75x155 mm. Rf :30100015
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Electrophorse : Techniques manuelles.
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Electrophorse : Techniques manuelles.
ATTENTION : Avant de commencer effectuer les dpts, tenir compte que ceux-ci
seffectuent toujours du cot de la cuve signal par le signe moins (cathode).
5. Faire un premier dpt dessai sur la SERACARD en dehors des cellules ou sur un
morceau de papier buvard.
6. Effectuer un second prlvement du mme srum et le dposer sur la membrane,
en positionnant lapplicateur dans les cannelures du pont et en laccompagnant
doucement jusqu' son contact avec la membrane.
7. Laisser lapplicateur en contact avec la membrane environ 10 secondes. ( si lon
utilise des membranes de type humides, effectuer 2 dpts successifs ).
8. Procder de la mme manire pour toutes les autres membranes.
9. A la fin de lopration, ter lapplicateur et fermer la chambre avec son couvercle.
10. Connecter la chambre au gnrateur de courant.
11. Le temps de migration : est denviron 20 25 minutes pour les mthodes MICRO
et, de 25 30 minutes pour les mthodes SEMIMICRO.
12. Le voltage : est de 250 Vdc.
3.4. Coloration
3. 5. Dcoloration Transparisation :
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Electrophorse : Techniques manuelles.
4. Disposer les membranes ainsi prpares sous une lampe I. R. ou mieux dans une
tuve sec ( poupinel), env.5 10 minutes 120 160C.
ATTENTION : une temprature trop leve ou un temps dexposition trop long la chaleur
entranent le dcollement de la membrane de la lame de verre. En effet, pour faciliter la
lecture la membrane doit rester colle sur la lame de verre.
Aprs complte transparisation, laisser refroidir les membranes sur leur plaques de
verre avant la lecture.
3. 6. Lecture :
IMPORTANT :
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Electrophorse : Techniques manuelles.
4. 1. Prparation du tampon
1. Ajouter le contenu dun petit flacon Additif pour tampon 1000 mL de tampon
SIMACEL N et agiter jusqu complte dissolution.
Conserver 2-8C
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Electrophorse : Techniques manuelles.
ATTENTION : Avant de commencer effectuer les dpts, tenir compte que ceux-ci
seffectuent toujours du cot de la cuve signal par le signe moins (cathode).
5. Faire un premier dpt dessai sur la SERACARD en dehors des cellules ou sur un
morceau de papier buvard.
6. Effectuer un second prlvement du mme srum et le dposer sur la membrane,
en positionnant lapplicateur dans les cannelures du pont et en laccompagnant
doucement jusqu' son contact avec la membrane.
7. Laisser lapplicateur en contact avec la membrane environ 10 secondes. ( si lon
utilise des membranes de type humides, effectuer 2 dpts successifs ).
8. Procder de la mme manire pour toutes les autres membranes.
9. A la fin de lopration, ter lapplicateur et fermer la chambre avec son couvercle.
10. Connecter la chambre au gnrateur de courant.
11. Le temps de migration : est denviron 35 40 minutes pour les mthodes MICRO
et, de 40 45 minutes pour les mthodes SEMIMICRO.
12. Le voltage : est de 200 Vdc.
4.5. Coloration
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Electrophorse : Techniques manuelles.
4. 6. Dcoloration :
Sortir les membranes du bain de coloration et les rincer leau courante en les
lissant bien avec les doigts pour liminer les rsidus de colorant prcipits.
4. 7. Lecture :
IMPORTANT :
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Electrophorse : Techniques manuelles.
5. 1. Prparation de lhmolysat.
HMOLYSE effectue avec de lEAU DISTILLE (Mthode Quantitative).
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Electrophorse : Techniques manuelles.
ATTENTION : Avant de commencer effectuer les dpts, tenir compte que ceux-ci
seffectuent toujours du cot de la cuve signal par le signe moins (cathode).
5. Faire un premier dpt dessai sur la SERACARD en dehors des cellules ou sur un
morceau de papier buvard.
6. Effectuer un second prlvement du mme srum et le dposer sur la membrane,
en positionnant lapplicateur dans les cannelures du pont et en laccompagnant
doucement jusqu' son contact avec la membrane.
7. Laisser lapplicateur en contact avec la membrane environ 10 secondes. ( si lon
utilise des membranes de type humides, effectuer 2 dpts successifs ).
8. Procder de la mme manire pour toutes les autres membranes.
9. A la fin de lopration, ter lapplicateur et fermer la chambre avec son couvercle.
10. Connecter la chambre au gnrateur de courant.
11. Le temps de migration : est denviron 30 35 minutes pour les mthodes MICRO
et, de 35 40 minutes pour les mthodes SEMIMICRO.
12. Le voltage : est de 300 Vdc.
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Electrophorse : Techniques manuelles.
5. 6. Coloration
5. 7. Dcoloration et transparisation.
ATTENTION : une temprature trop leve ou un temps dexposition trop long la chaleur
entranent le dcollement de la membrane de la lame de verre. En effet, pour faciliter la
lecture la membrane doit rester colle sur la lame de verre.
Aprs complte transparisation, laisser refroidir les membranes sur leurs plaques de verre
avant la lecture.
5. 8. Lecture
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Electrophorse : Techniques manuelles.
IMPORTANT :
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