DESARROLLO Y VALIDACIN DE UN MTODO DE CROMATOGRAFA LQUIDA

DE ALTA RESOLUCIN PARA LA DETERMINACIN Y CUANTIFICACIN DE

CLENBUTEROL EN HGADO DE BOVINO

OBJETIVO

Evaluar la determinacin y cuantificacin de clenbuterol en hgado de bovino mediante

el desarrollo y validacin del empleo de un mtodo de cromatografa liquida de alta
resolucin

RESUMEN

Se desarroll una metodologa para controlar la determinacin de clenbuterol que es

una sustancia donde su uso como aditivo alimenticio en la engorda de ganado genera
un efecto anablico en hgado de bovino por la tcnica de cromatografa liquida de alta
resolucin. Para el desarrollo de sus resultados se obtuvo un extracto que se analiz
por medio de una columna de fase reversa de la mima cromatografa con un detector
de UV, obteniendo un pH de 3.0. Despus de saber el (clenbuterol) los lmites de
deteccin de cuantificacin y las medidas de recuperacin de clenbuterol para tres
niveles de concentracin preparados, los cuales se consideran adecuados para el
mtodo propuesto.

Para una precisin ms exacta del mtodo se midi por la desviacin estndar
relativa, donde se analizaron 17 muestras de hgado comprados en mercados
pblicos, de los cuales 11 de ellos presentaron concentraciones de clenbuterol. Este
mtodo de control es exacto y confiable debido a su linealidad, lmite de deteccin y de
cuantificacin, grado de separacin cromatografa, precisin, exactitud.

Palabras clave: clenbuterol, HPLC, validacin, hgado de bovino.

INTRODUCCION

El clenbuterol es una sustancia donde su uso como aditivo alimenticio en la engorda

de ganado genera un efecto anablico(1,2,3). Se le denomina agente de reparticin
en virtud de que reduce la grasa a la vez que fomenta la sntesis protenica.

Tericamente, la utilizacin de estas sustancias presenta una serie de ventajas

relacionadas no slo con la mejora de productividad, sino tambin de la calidad de la
carne (4). Sin embargo, a finales de la dcada de los 80's, se empez a descubrir que
tambin tena efectos secundarios en los consumidores de la carne y vsceras de
animales expuestos al clenbuterol, causando intoxicaciones agudas (5), con presencia
de sntomas como la aparicin brusca de temblores musculares, palpitaciones,
taquicardia, nerviosismo, cefaleas y mialgias; dichos sntomas tienen una duracin de
40 h. (6, 7).

MATERIALES Y MTODOS

- Reactivos. El estndar de clorhidrato de clenbuterol, Acetonitrilo e isopropanol.

- Solucin estndar. Se prepar una solucin madre de clorhidrato de
clenbuterol disolviendo una cantidad apropiada del reactivo en agua ultrapura.
 - Procedencia de las muestras. Las muestras de hgado de bovino fueron
colectadas de mercados pblicos de la ciudad de Mxico durante los meses de
julio y agosto de 2012. Las muestras se mantuvieron en congelacin a -20C
hasta su anlisis.
- Extraccin. Se pesaron 5 g de hgado homogeneizado. Se agregaron 4 mL de
acetonitrilo y 2 mL de isopropanol y licuaron por 30 segundos. La mezcla se
coloc en un tubo de centrfuga de 50 mL y se agregaron 1.2 g de NaCl,
finalmente se centrifugo durante 15 min.
- Aparatos y equipos. Se emple un cromatgrafo de lquidos de alta resolucin
- Condiciones cromatogrficas. El anlisis mediante HPLC se llev a cabo
usando el sistema Hitachi Elite LaChrom. Donde utiliza un software EZChrom
Elite 3.3.2 SP2 como sistema de adquisicin de los datos. La separacin
cromatogrfica se ejecut en una columna analtica Restek Ultra C18 (250mm x
4.6mm I.D., 5 m)(pH 3.0) y su tasa de flujo fue establecido a 1.0 mL/min. La
longitud de onda del detector se estableci a 214 nm. La temperatura de la
columna se mantuvo a 25C. La importancia de la cromatografa fue tener los
objetivos claros de esta investigacin para el establecimiento y estandarizacin
de las tcnicas y poder determinar el clenbuterol, as como para hacer tambin
un diagnstico de su presencia en el tejido heptico del ganado bovino.

SU APLICACIN EN IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DEL CLENBUTEROL

Para el establecimiento del procedimiento se evaluaron los indicadores de:

especificidad, linealidad de la curva de calibracin, lmite de deteccin (LD) y de
cuantificacin (LC), exactitud y precisin.

- Especificidad: Se realiz el proceso de extraccin donde el cromatograma fue

guardado y comparado con las correspondientes a dos muestras de hgado
fortificadas y hubo desventaja.
- Linealidad, lmite de deteccin y de cuantificacin: La linealidad del mtodo,
present un coeficiente de determinacin y determino la ecuacin de la recta
de mejor ajuste de la curva de calibracin del estndar.
- Exactitud: La recuperacin media del clenbuterol fue para los tres niveles
probados. Estos valores se consideran aceptables, lo cual fue una ventaja muy
importante.
- Precisin: Muestras de hgado de tres lotes diferentes fueron extradas y
analizadas por triplicado, bajo condiciones de igualdad del equipo, analista y
lotes de reactivos idnticos.

CONCLUSIONES

Se colectaron 17 muestras de hgado de bovino, se trataron de acuerdo a la

metodologa para la extraccin del clenbuterol y se analizaron mediante HPLC.

De acuerdo a la metodologa establecida en esta investigacin, en 11 muestras de

hgado de bovino se detectaron niveles superiores de clenbuterol a los LMR (Lmite
Mximo de Residuos) establecidos por el Codex Alimentarius de la FAO, para hgado.

BIBLIOGRAFIA

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