DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS

RESUMEN

Determinacin de carbohidratos. Los carbohidratos tambin llamados glcidos, hidratos

de carbono o sacridos, son elementos principales en la alimentacin, que se
encuentran principalmente en azcares, almidones y fibra. La funcin principal de los
carbohidratos es el aporte energtico. Son una de las sustancias principales que
necesita nuestro organismo, junto a las grasas y las protenas; Los glcidos cumplen un
papel muy importante en nuestro organismo, que incluyen las funciones relacionadas
con el tema energtico, el ahorro de las protenas, la regulacin del metabolismo de las
grasas y el tema estructural. En el laboratorio se realizaron cinco prcticas, la primera
fue la prueba de Molish, donde en seis tubos de ensayo se agreg 1ml de carbohidratos
(glucosa, sacarosa, maltosa, galactosa, almidn y fructosa) respectivamente, seguido
de esto se adicion 0.5ml de reactivo de molish y 0.5ml de H2SO4 y observando que al
aadirse el cido sulfrico se form un anillo de color verde en la parte superior de la
reaccin. En la segunda experiencia tena como objetivo determinar que azcares eran
reductores, en cada tubo de ensayo se agreg 0.5ml Fehling A + 0.5ml Fehling B y
luego cuatro gotas de cada carbohidrato, llevndolo a bao mara por ocho minutos,
obteniendo as, que cuatro de los reactivos viraron a color rojo ladrillo concluyendo que
son reductores (glucosa, fructosa, maltosa y galactosa), los que no cambiaron su
coloracin son azcares no reductores como el almidn y la sacarosa. La prueba de
seliwanoff fue el tercer paso, en cada tubo de ensayo se aadi 1 ml de reactivo de
seliwanoff y 0.5ml de carbohidrato correspondiente, los seis azcares fueron sometidos
a calor para disminuir el contenido a la mitad, teniendo como resultado que el almidn
tom una coloracin naranja porque se cristaliza.

PALABRAS CLAVE:

Carbohidratos, azcares reductores, viraje, reactivos, cido sulfrico.

ABSTRACT

Determination of carbohydrates. Carbohydrates also called sugars , carbohydrates or

saccharides, are key elements in food, which are mainly in sugars , starches and fiber.
The main function of carbohydrates is energy intake . They are one of the major
substances that our body needs , along with fats and proteins ; Carbohydrates will play
a very important role in our body, including the functions related to the energy issue ,
saving proteins , regulating metabolism fat and structural issue. In the laboratory were
performed five practices , the first test was Molish , where in six test tubes was added 1
ml of carbohydrates (glucose , sucrose, maltose , galactose, fructose and starch )
respectively , followed by 0.5ml of this was added Molish reagent and 0.5ml of H2SO4
and noting that the addition of sulfuric acid green ring at the top of the reaction is
formed. In the second experiment aimed to determine which were reducing sugars in
each test tube was added 0.5ml 0.5ml Fehling Fehling A + B and then four drops of

1
each carbohydrate , taking a bath for eight minutes , thus obtaining four reagent red
brick tacked to concluding that are reducing ( glucose , fructose, maltose and galactose
) , which did not change its color are non-reducing sugars such as starch and sucrose.
Seliwanoff test was the third step, in each test tube was added 1 ml of reagent and
0.5ml Seliwanoff corresponding carbohydrate six sugars were subjected to heat to
reduce the content in half , resulting in the starch took an orange tint because it
crystallizes.

KEYWORDS: Carbohydrates , reducing sugars, shift reagents , sulfuric acid.

INTRODUCCIN azucares, almidones y fibras, razn por

Los hidratos de carbono constituyen el
grupo de biomolculas ms abundantes
en la naturaleza, representando
aproximadamente el 75% de la materia
orgnica terrestre. Estas biomolculas
son denominadas tambin
carbohidratos, azucares, sacridos y
glcidos. Todos son trminos histricos
que hacen referencia a su sabor dulce,
o que poseen la composicin Cn (H2O)n
ya que estructuralmente tienen una
cadena hidrocarbonada polialcohlica
que suele tener en uno de sus carbonos
un grupo carbonilo. Su grupo oxidado
puede situarse en el extremo de la
cadena (aldehdo) o en el interior de la
misma cadena (cetona).
Un carbohidrato es considerado como
fuente inmediata de energa para las
clulas precursora para la formacin de
biomolculas, reserva energtica en
tejidos como el hgado y los msculos y
juega un papel estructural en tejidos
como el conjuntivo.
Estas biomolculas abarcan gran
cantidad de tamaos y se clasifican en
mono, di, oligo y polisacridos. Adems,
los podemos encontrar en forma de
la cual es uno de los tres
macronutrientes esenciales (los otros
dos son grasas y protenas)6 los
carbohidratos se encuentran tanto en
alimentos de origen animal (leche y sus
derivados) como en los de origen
vegetal (legumbres, cereales, harinas,
verduras y frutas), es decir, que la mitad
total de las caloras que se consumen a
diario provienen de esta biomolculas
ya que son indispensables para nuestro
organismo incluyendo rganos vitales
como el cerebro y el hgado.
De la tcnica, utilizada en la primera
parte, con el reactivo de Molish
podemos decir que los monosacridos,
en caliente y medio sulfrico
concentrado, sufren una deshidratacin
que conduce a un anillo pentagonal de
furfural o hidroximetilfurfural, segn se
parta de pentosas o hexosa.
En el caso de oligo- y polisacridos,
estas reacciones son tambin vlidas
porque el medio cido produce una
hidrlisis previa del enlace glucosdicos.
Los furfurales formados se conjugan
fcilmente con diversos fenoles y

2
aminas, dando reacciones coloreadas
como las descritas anteriormente.
La reaccin de Molish se basa en que
cuando el anillo de furfural, o de
hidroximetil furfural, condensa con a-
naftol, se forma una sustancia de color
prpura.
El reactivo de Benedict utilizado en la
segunda parte, la prueba para azucares
reductores, es efectiva ya que el
reactivo de Benedict contiene cobre y
este se reduce en presencia de
azucares reductores, durante esta
reaccin el azcar se oxida. Esta
reaccin se conoce como una reaccin
oxidacin-reduccin, porque la
oxidacin del azcar sucede
simultneamente con la reaccin de
reduccin del cobre.
El grupo carbonilo de los hidratos de
carbono es fcilmente oxidable por
diversos reactivos, aunque el poder
reductor de estos compuestos depende
de la entidad que el grupo tenga en la
molcula, o sea, de la naturaleza mono-,
di- o poli- sacrida del azcar y la
posicin en que se encuentren los
posibles enlaces glucosdicos. El agente
oxidante suave ms empleado en este
tipo de reacciones es el catin Cu (II),
cuyas sales son de coloracin azul. En
todos los casos, este in se reduce a Cu
(I), formndose xido cuproso, lo que
origina turbidez en el medio de reaccin,
que concluye con la aparicin de un
precipitado marrn-rojizo. Es esta
aparicin la que indica que el glcido
tiene carcter reductor.
La prueba de Seliwanoff que se utiliz
en la cuarta parte del laboratorio, se
utiliza para distinguir entre el aldehdo y
las hexosas de la cetona (carbohidratos
que contienen 6 tomos del carbn). Un
hexosa de la cetona, tambin llamado
un ketohexose, formar un color rojo
profundo cuando est reaccionado con
el reactivo de Seliwanoff. Una hexosa
del aldehdo, tambin llamado una
aldohexosa, demostrar un color rosado
ligero que tome un tiempo ms largo
para convertirse cuando est
reaccionado con el reactivo de
Seliwanoff.
Estas reacciones de colores se deben
principalmente a que las cetosas en el
carbono 2 tienen una funcin cetona,
que en presencia de un cido fuerte
producen rpidamente derivados
furfricos que reaccionan con un difenol
llamado resorcina que est contenido en
el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa
(un disacrido formado por glucosa y
fructosa) y la fructosa dan positiva la
reaccin, ya que el HCl del reactivo
provoca en caliente la hidrlisis del
compuesto liberando fructosa
(responsable de la reaccin positiva).
La prueba de yodo de la quinta parte,
se usa para detectar almidn, el almidn
es un polmero de glucosa producido
por las plantas y es una fuente
importante de energa almacenada, Las
muchas unidades de glucosa ligadas
juntas para formar las molculas del
almidn atrapan las molculas del yodo
y producen un complejo azul-negro
3
oscuro debido a la marcada presencia
del almidn.
MATERIALES Y MTODOS
Tubos de ensayo de 7 mL
Pipetas graduadas de 5, 1, y 0,1
mL.
Gradillas para tubos de ensayo
Pinzas de madera
Bao de agua de termostato
Glucosa al 5% p/v
Almidn 5% p/v
Lactosa 5% p/v
Fructosa 5% p/v
Sacarosa 5% p/v
Galactosa 5% p/V
Lugol
Reactivo de benedict
Reactivo de molish: solucin
alcohlica de naftol %% y cido
sulfrico concentrado
Reactivo de Selwanoff: 50 mg
resorcinol en 3,3 mL HCL
concentrado y enrasado a 100 Ml
con agua
PROCEDIMIENTO
PRIMERA PARTE: PRUEBA DE
MOLISH.
1. Tomamos 1 ml de cada una de las
soluciones de azucares y adicionamos
cada una a tubos de ensayo
independientes, luego mezclamos con
0,5 mL de reactivo de Molish.
2. Luego adicionamos a cada tubo 0,5
mL de cido sulfrico.
3. Se observaron los cambios.
SEGUNDA PARTE: PRUEBA DE
AZUCARES REDUCTORES.
1. Adicionamos en 6 tubos de ensayo
un volumen de 1 mL de reactivo
Benedict, seguidamente aadimos a
cada tubo 4 gotas de cada una de las
soluciones de los glcidos as:
TUBO 1: 1 ml de Benedict + 4
gotas de glucosa al 5% p/v
TUBO 2: 1 ml de Benedict + 4
gotas de fructosa al 5% p/v
TUBO 3: 1 ml de Benedict + 4
gotas de galactosa al 5% p/v
TUBO 4 : 1 ml de Benedict + 4
gotas de sacarosa al 5% p/v
TUBO 5: 1 ml de Benedict + 4
gotas de lactosa al 5% p/v
TUBO 6: 1 ml de Benedict + 4
gotas de almidn al 5% p/v
2. Se calentaron los tubos en bao de
agua en ebullicin hasta que
observamos cambios en las muestras.
TERCERA PARTE: PRUEBA
SEMICUANTITATIVA DE GLUCOSA.
1. Se prepararon 10 mL de una solucin
de glucosa al 2% p/v a partir de una
solucin de glucosa al 5 % p/v
2. A partir de la solucin de 2% p/v
preparamos 2mL de disoluciones de
esta con las concentraciones en
unidades de % v/v: 0.0%, 0,3%, 1,0% y
1,5%
3. Se realiz una prueba de azucares
reductores.
4
 CUARTA PARTE: PRUEBA DE 1. Adicionamos 3 gotas de lugol a 0,5 Ml
SELIWANOFF PARA LA FRUCTOSA. de cada una de las soluciones de
azucares en forma independiente.
1. Adicionamos 1 mL de reactivo de 2. Observamos la coloracin que toma
Seliwanoff de 0,5 ml de las muestras de
la solucin al contacto con el lugol.
azucares, en tubos independientes.
3. Calentamos cada uno de los tubos
2. Hirvieron y tomamos anotaciones.
en un bao de agua a ebullicin.
QUINTA PARTE: PRUEBA DE YODO
PARA ALMIDN.

Tubo Color Cantidad de Concentracin %

precipitado v/v
1 Azul a verde 0 0,0
2 Verde + 0,3
precipitado RESULTADOS
amarillo
3 Verde oliva ++ 0,5
precipitado
CARBOHIDRATO GLUCOSA SACAROSA XILOSA LACTOSA ALMIDON FRUCTOSA
naranjado
PRUEBA
4 Naranja +++ 1,5
parduzco
MOLISH POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO
5 Rojo ladrillo ++++ 2,0
AZUCARES REDUCTORES POSITIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO
SEMICUANTITATIVA DE POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO
LA GLUCOSA
SELIWANOFF POSITIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO NEGATIVO
DE YODO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO
la presencia de carbohidratos en la
muestra.
DISCUSIN
Para nuestra prueba de Molish todos dio
PRUEBA DE MOLISH PARA positivo para todas las muestras de
CARBOHIDRATOS carbohidratos afirmando la presencia de
estos en los tubos de ensayo.
Normalmente es la primera prueba
realizada para la identificacin de los PRUEBA DE AZUCARES
REDUCTORES

Los monosacridos y la mayora de los

carbohidratos, al hacer la mezcla del
disacridos poseen poder reductor, que
carbohidrato con el reactivo de Molish,
deben al grupo carbonilo que tienen en
el reactivo causa hidrlisis de los
su molcula. Este carcter reductor
enlaces glucosdicos del disacrido o
puede ponerse de manifiesto por medio
polisacrido presente, La aparicin de
de una reaccin redox llevada a cabo
un anillo de rojo violeta es indicativo de
entre ellos y el sulfato de Cobre. Las

5
soluciones de esta sal tienen color azul.
Tras la reaccin con el glcido reductor
se forma xido de Cobre de color rojo.
De este modo, el cambio de color indica
que se ha producido la citada reaccin y
que, por lo tanto, el glcido presente es
reductor.
Los monosacridos reaccionan de
acuerdo a los grupos hidroxilo y
carbonilo que poseen.
Los disacridos y los polisacridos se
pueden hidrolizar para producir
monosacridos.
Los azcares que dan resultados
positivos con las soluciones de Tollens,
Benedict Fehling se conocen como
azcares reductores, y todos los
carbohidratos que contienen un grupo
hemiacetal o hemicetal dan pruebas
positivas. Los carbohidratos que solo
contienen grupos acetal o cetal no dan
pruebas positivas con estas soluciones
y se llaman azcares no reductores.
La glucosa es el azcar reductor ms
abundante en el organismo. Su
concentracin en la sangre est
sometida a un cuidadoso mecanismo de
regulacin en individuos sanos y, en
personas que padecen diabetes,
aumenta sustancialmente.
Para nuestra prueba de azucares
reductores nos arroj negativo para la
sacarosa y el almidn debido a que La
sacarosa es un disacrido que no posee
carbonos anomricos libres por lo que
carece de poder reductor y la reaccin
con el licor de Fehling A y B es negativa.
PRUEBA SEMICUANTITATIVA DE LA
GLUCOSA
Tomando tubos de ensayo con
diferentes concentraciones de glucosa,
se puede determinar
semicuantitativamente el porcentaje de
glucosa en la solucin, luego de
adicionarle unas gotas de cada
concentracin de glucosa a o,5 de
felling A y B y precipitarlo con ayuda de
una centrifuga, debido a que la glucosa
es un azcar reductor una vez se
reduce despus de determinado tiempo
tiende a precipitar, pero con la ayuda de
la centrifuga este proceso se realiza en
cuestin de minutos y de esta manera
se cuantifica porcentualmente que
cantidad de glucosa se halla en una
solucin, esta prueba es utilizada
comnmente para determinar la
cantidad de azcar que posee una
persona en su organismo, por medio del
anlisis de la orina.
Toma de concentraciones de glucosa
A partir de una disolucin de 10 ml
glucosa en agua destilada a una
concentracin del 2%, se prepararon las
siguientes concentraciones:
Glucosa al 0,0% V1= 0,1%. 2 ml / 2
ml= 0,0 ml + 2 mil de agua destilada
Glucosa al 0,3% V1= 0,3%. 2 ml / 2
ml= 0,3 ml + 1,7 ml de agua destilada
Glucosa al 0,5% V1= 0,5%. 2 ml / 2
ml= 0,5 ml + 1,5 ml de agua destilada
Glucosa al 1,0% V1= 1,0%. 2 ml / 2
ml= 0,1 ml + 1 ml de agua destilada
6
Glucosa al 1,5% V1= 1,5%. 2 ml / 2
ml= 1,5 ml + 0,5 ml de agua destilada PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

PRUEBA DE SELIWANOFF 1. Reporte los cambios que observaron

El reactivo consiste en resorcinol y cido
clorhdrico concentrado:
La hidrlisis cida de polisacridos y
oligosacridos da azcares simples
en cada una de las pruebas con cada
uno de los azucares ensayados.
R/ Prueba de Molish:
Lactosa: precipitado violeta.

Entonces la cetosa deshidratada Glucosa: precipitado violeta.

reacciona con el resorcinol para
producir un color rojo. Es posible que
las aldosas reaccionen produciendo Prueba de Benedict:
un leve color rosa.
Glucosa: cambio a naranja.
PRUEBA DE YODO
Sacarosa: azul no cambio.
Esta reaccin es el resultado de la
Xilosa: cambio.
formacin de cadenas de poliyoduro a
partir de la reaccin del almidn con
Almidn: cambio.
el yodo presente en la solucin de
un reactivo llamado Lugol. La amilosa, Lactosa: cambio.
el componente del almidn de cadena
lineal, forma hlices donde se juntan las Fructosa: cambio.
molculas de yodo, formando un color
azul oscuro a negro. La amilopectina, el En esta prueba todos dieron reductores
componente del almidn de cadena excepto la sacarosa.
ramificada, forma hlices mucho ms
cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un Prueba de yodo:
color entre naranja y amarillo. Al
romperse o hidrolizarse el almidn en El almidn tomo una coloracin oscura,
unidades ms pequeas de como gris.
carbohidrato, el color azul-negro
desaparece. En consecuencia, esta
prueba puede determinar el final de una 2. Cules de estos azucares son
hidrlisis, cuando ya no hay cambio de
reductores? En qu consiste su
color constituyendo una evidencia
experimental ampliamente utilizada. capacidad reductora?

La solucin de yodo tambin reacciona R/ Encontramos que todos los azucares

con el glucgeno, aunque el color son reductores debido a que poseen un
producido es ms castao y mucho OH libre en su estructura, que les
menos intenso.
posibilita formar complejos con otras
molculas. En el laboratorio

7
encontramos que al realizar las
diferentes pruebas el nico azcar que
nos result reductor fue la sacarosa, sin
embargo, a nivel terico se sabe que el
almidn no es azcar reductor, ya que
los polisacridos ninguno es reductor.
Desconocemos, o ignoramos el
resultado del almidn como azcar
reductor.
Tales estructuras pueden ser
representadas por los diagramas Fisher
o Haworth. La numeracin de los
carbonos en los carbohidratos procede
desde el carbono carbonilo, para las
aldosas, o a partir del carbn ms
cercano al carbonilo, para las cetosas.
Glucosa

3. Cules de los azucares dieron

positivo a las pruebas de Seliwanoff?
Cul es el fundamento de la prueba?

R/ La fructosa y la sacarosa porque la

fructosa es una cetosa y la sacarosa
Lactosa
contienen fructosa.

La prueba de Seliwanoff es una

reaccin para diferenciar cetosas de
aldosas; aunque ambas dan la reaccin,
las cetosas la dan rpidamente y las
aldosas lentamente. Fructosa
Est basada en la formacin de durfural
o en un derivado de ste y su posterior
condensacin con el resorcinol dando
un color rojo fuego para cetosas y rosa
para aldosas.

El resorcinol condensa con los furfurales

derivados de cetosas originando un Sacarosa
color rojo intenso. Este fenmeno es
desencadenado porque las cetosas se
deshidratan a mayor velocidad que las
aldosas.

4. Escriba la estructura de Fischer y la

estructura de Haworth de los azcares
ensayados.

8
Almidn
Xilosa
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