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Rueda Hernndez Diana Katherine - 2140323

Vera Vega Mara de los ngeles - 2140077

INFORME PRCTICA:
Determinacin de carbohidratos

DOCENTE:
Marlon Yesid Cceres Ortiz

Febrero 11 del 2016.

Universidad industrial de Santander (UIS)


Facultad de Salud
Microbiologa & bioanlisis.
Laboratorio bioqumica I
Segundo semestre acadmico del 2015
1. OBJETIVOS DE LA PRCTICA:

Determinar la presencia de carbohidratos en una muestra problema


Identificar azcares reductores en una muestra problema
Hallar la concentracin de glucosa en sangre.

2. MARCO TEORICO

Los carbohidratos son compuestos orgnicos formados por Hidrogeno, Carbono &
Oxigeno, son tambin llamados glcidos, azcares, hidratos de carbono o sacridos,
posee la frmula qumica ((CH2O)n), donde n puede ser de 3 a 9.
Despus del agua, los carbohidratos hacen parte de las biomolculas ms abundantes de
la naturaleza, siendo el principal componente de los alimentos, cuyas funciones
principales son la energa y la estructura de los seres vivos.

La glucosa y el glucgeno son las formas biolgicas primarias de almacenamiento y


consumo de energa; la celulosa cumple con una funcin estructural al formar parte de
la pared de lasclulas vegetales, mientras que la quitina es el principal constituyente
del exoesqueleto de los artrpodos.

Los carbohidratos generalmente se clasifican en cuatro grupos:

Monosacridos o azucares sencillos, que pueden ser aldosas (compuestos por


un grupo aldehdo) cetosas (compuesto por el grupo cetona)
Ejemplos: triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas

Disacridos formados por dos monosacridos que se encuentran unidos entre s


por enlaces glucosidicos.
Ejemplos: sacarosa (glucosa+fructosa), lactosa (galactosa+glucosa), maltosa
(glucosa+glucosa) y celobiosa

Oligosacridos formados entre tres y diez monosacridos que se encuentran


unidos entre s por enlaces glucosdicos.

Polisacridos son cadenas ramificadas o no formadas por ms de 10


monosacridos relacionados con estructura y almacenamiento.
Ejemplo: almidn (forma de almacenamiento en plantas) glucgeno (forma de
almacenamiento en animales) celulosa y quitina (estructurales: forma la pared
celular de plantas y animales.
Existen mtodos cualitativos (son pruebas especficas para identificar su presencia
en una muestra determinada) y cuantitativos (mediante la reaccin de color para
medir la concentracin de ciertas sustancias qumicas) basados en las
propiedades fsicas y qumicas de los carbohidratos, para identificar la presencia
de los mismos en diferentes sustancias.

Determinacin de carbohidratos reductores

Ensayo Benedict: Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de


carbohidratos es la reaccin de Benedict, al igual que el reactivo de felhing, el de
benedict contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta oxido cuproso
en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetalico libre.

Mtodo de la glucosa oxidasa: esta tcnica es la ms utilizada actualmente ya que


es una tcnica enzimtica con mucha mayor especificidad. La glucosa oxidas
(GOD) cataliza la oxidacin de glucosa segn la siguiente reaccin.

Glucosa oxidasa
Glucosa + 02 + H2O Glucnico + H2O2

Peroxidasa
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + fenol Quinonaimina + a H2O

Reaccin

La cantidad de colorante formado (quinonaimina) es proporcional a la cantidad de


glucosa en la muestra problema. La muestra puede ser suero, plasma o sangre
con heparina o EDTA.

Mtodo de Fenol/ Sulfrico: la reaccin de color para medir la concentracin de


carbohidratos solubles por espectrofotometra se basa en la utilizacin del mtodo
colorimtrico del fenol_sulfrico que depende de la deshidratacin de los sacridos
derivados de la hidrlisis a furfural. Los derivados del furfural con las formas del
fenol coloreado absorben la luz en el rango visible a una longitud de onda de
490 m

Hexosas: Hidroximetilfurfural
Pentosas: Metilfurfural

FENOL + H2SO4 (Concentrado) + Carbohidrato HMF (Amarillo naranja)

http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/mmedina/archivos/Practica14.pdf
http://es.scribd.com/doc/126121136/Determinacion-de-Carbohidratos-Practica-
1#scribd
http://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-de-mtodos-generales-para-
determinacin-de-carbohidratos
3. PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA

1. Parte: Determinacin de carbohidratos reductores

2. Parte: Mtodo Glucosa oxidasa


3. Parte: Mtodo de fenol/ sulfrico:

4. RESULTADOS DE LA PRCTICA

1. Parte: Determinacin de carbohidratos reductores


Jugo
Sinttico

Jugo
Natural
Jugo
Sinttico
Jugo
Natural

Antes del caletamiento posterior al calentamiento

MUESTRA PRE- POS- RESULTADO


CALENTAMIENTO CALENTANMIENTO
Jugo natural Azul verdoso anaranjado positivo (++++)
(fresa) dosificable
Jugo sintetico (hit) azul marino amarillo Positivo(+++)
Dosificable pero
menor que el
anterior

2. Parte: Mtodo Glucosa oxidasa

MUESTRA ABSORBANCIA
BLANCO (reactivo A) 0,00
PATRON 1,81
MUESTRA 1(suero) 1,36

.
= , =
.
Muestra 1.
,
=
,

,
,
= ,
a 4,1697 mmol/L

3. Parte: Mtodo de fenol/ sulfrico

curva de calibracin

Absorbancia Concentracin
(mg/mL)
0,032 0,12
0,128 0,24
0,24 0,49
0,331 0,98
0,426 1,95
0,537 3,91
0,618 7,81
0,724 15,63
0,824 31,25

1
0.9
0.8
0.7
Absorbancia

0.6
0.5
Series1
0.4
Linear (Series1)
0.3
0.2
y = 0,0213x + 0,2811
0.1
R = 0,6771
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Concentracion

Muestras Absorbancia
Base (Tubo 1) 0,00
Muestra 1 (Tubo 2) 0,465
Muestra 2 (Tubo 3) 0,389
ECUACIN DE LA RECTA
= +
Clculos para la muestra 1 (jugo natural)

,,
= = ,
,
Clculos para la muestra 2 (jugo sintetico)

,,
= = ,
,

4. ANLISIS DE RESULTADOS

En la primera parte del ensayo se realiz la determinacin de azucares con


grupos reductores libre (C=O), mediante el ensayo de Benedict que utiliza
el reactivo Benedict, siendo este una solucin muy estable y compuesta
por: Citrato de sodio que acta como secuestrante del Cu+2 presente en el
reactivo; Carbonato de sodio quien mantienes el pH del medio alcalino y
sulfato de cobre que en presencia del azcar reductor se convierte en
Cu+1.2 Es este el nico reactivo al que se le agregaron 3 gotas de las
muestras problemas trabajadas.
Este reactivo presenta una acidificacin bastante lo cual ocasiona que solo
pueda ser reducido por monosacridos3. Los resultados obtenidos en la
prctica fueron, para el tubo que contena la muestra de jugo natural de
fresa preparado en casa y reactivo de Benedict, en el momento de adicionar
la muestra presento una coloracin diferente, a la del reactivo sin adicionar
la muestra, posterior al calentamiento su coloracin nos indic un resultado
positivo con cuatro cruces, presentando coloracion anarajada y con
presencia de presipitado color rojo ladrillo de xido cuproso, segn la
literatura. En el caso de la muestra de jugo sinttico la reaccin solo fue
evidente despus del calentamiento, siendo positiva pero en menor grado
(+++) y con una precipitacin menor de xido cuproso.
Concluyendo que la muestra con mayor concentracion de azucares con
grupos reductores es la de jugo natural, concluyendo que este presenta una
mayor cantidad es azucares que puede utilizarse de manera energtica,
mientras el jugo sinttico muy probablemente estar endulzado con
azucares artificiales de difcil procesamiento, incurriendo en enfermedades
como la obesidad, y la diabetes.
Todos los disacridos tienen un grupo reductor libre. Los disacridos
lactosa y maltosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los
posee. Es debido a que la unin de la glucosa y la fructuosa tiene lugar
mediante carbonos anomericos estos son ismeros de un monosacrido de
ms de 5 tomos de carbono que contiene un grupo hidroxilo -OH y un
residuo alcxido -OR unidos a un mismo tomo de carbono lo que le
permite tomar una estructura cclica y determinar dos posiciones diferentes
para el grupo hidroxilo y en este caso ambos carbonos tienen la propiedad
de perder sus propiedades reductoras al estar implicadas en este enlace
glucosdicos. La sacarosa es un disacrido que no tiene poder reductor
sobre el reactivo de Fehling y el reactivo de Tollens, esto se debe a que no
cede electrones a un agente oxidante
En la segunda parte del ensayo se determin la presencia de azucares por
el mtodo de la Glucosa- oxidasa , que se basa en la oxidacin de la
glucosa por parte de la glucosa oxidasa originando cido glucnico y H2O2
(Perxido de Hidrogeno) que reacciona con un cromgeno (fenol/4-
aminoantipirina) originando una quinona que absorbe entre 592 y 596 nm,
por tanto la intensidad de luz generada es directamente proporcional a la
concentracion de glucosa en la muestra problema trabajada.
Los resultados que obtuvimos mediante la espectrofotometra UV y
posteriores clculos nos permitieron determinar que la concentracion de

glucosa en suero sanguneo fue de , 4,1697
mmol/Lcomparando este valor con el rango normal de la glucosa en suero y
plasma que paciente presenta un nivel de gluca entre los rangos normales
que son de 70- 105 mg/dL = 3,89 5,83 mmol/L. Esta prueba me permite
calcular los niveles de glicemia en suero o en plasma sanguineo, evaluando
direstamente el funcionamiento de las homonas encargadas del
metabolismo de los carbohidratos en el organismo, esta son la insulina
(hipoglucemiante) y el glucagn ( hiperglicemiante), las cuales se encargan
de mantener los niveles de glicemia estables a pesar de la ingesta continua
de carbohidratos, estas pueden actuar en un rago de 1,5 a 2 horas en el
proceso de digestion y normalisacin. El incremento de los valores de
glicemia infiere una alteracion de las hormonas.
En la ltima parte de la prctica se realiz el ensayo de fenol/sulfrico, que
se basa en la valoracin colorimtrica que depende de la deshidratacin de
los sacridos que se tornan principalmente hidroximetilfulfural (HMF)
(hexosas) o metilfurfural (F) (pentosas), que posteriormente se determinan
leyendo la absorbancia a 490 nm4 . Este ensayo se aplic a las muestras
de jugo natural y jugo sinttico, obteniendo absorbancias de 0,465 y 0,389
respectivamente, posteriormente a ello se realizo una curva de calibracion
para poder realizar el calculo de la concentracion apartir de la ecuacion de
la recta obtenida (y = 0,0213x + 0,2811).
La concentracion obtenida para el jugo natural fue de 8,6338 mg/mL y para
el jugo sintetico fue de 5,0657 mg/mL pudiendo inferir que el jugo natural
presenta una mayor concentracion de carbohidratos totales No
estructurales, basndose en su contenido de almidones hidrolizables y
azcares solubles5, segn la literatura. En este ensayo se incurrieron
algunos errores analticos y procedimentales al momento de la lectura de
las absorbancias y la construccin de la curva de calibracin.

5. ANEXO (ACTIVIDADES)

Por qu algunos carbohidratos reducen ciertos iones metlicos?

Se debe a que los carbohidratos poseen el grupo carbonilo que tiene carcter reductor
principalmente en las aldosas (grupos aldehdos) y cetosas (cetonas) puede reducir
oxidantes que al calentar ciertas soluciones de azcares, en presencia de determinados
iones metlicos, el grupo carbonilo se oxida y se precipita, generando una cloracin
positiva a la reaccin que ocurre y el in metlico se reduce, esto se debe a la presencia
de la estructura abierta en el equilibrio de la ciclacin.

Ilustracin 1 http://docentes.educacion.navarra.es/metayosa/bach2/2biogluci2.html
Por Que la sacarosa es un disacrido no reductor?

(GLUCOSA+ FRUCTOSA)

Todos los disacridos tienen un grupo reductor libre. Los disacridos lactosa y maltosa
tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee.
Es debido a que la unin de la glucosa y la fructuosa tiene lugar mediante carbonos
anomericos, estos son ismeros de un monosacrido de ms de 5 tomos de
carbono que contiene un grupo hidroxilo -OH y un residuo alcxido -OR unidos a un
mismo tomo de carbono lo que le permite tomar una estructura cclica y determinar dos
posiciones diferentes para el grupo hidroxilo (2) en el caso de la glucosa no es as, no
contiene ningn tomo de carbono libre, porque los carbonos anomericos de sus dos
unidades de monosacridos se hallan unidos entre s, de manera covalente por enlace O-
glucosdicos.
Por esta razn, la sacarosa no es un azcar reductor y tampoco posee un extremo
reductor.

Qu otras pruebas permiten determinar azcares reductores?

Reaccin de Molisch:
La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de
Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato. Se basa
en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono.
En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la
muestra y la deshidratacin afurfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las
hexosas).Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch
(reaccin de Molisch) dando un producto coloreado

Reaccin de Benedict
Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin
de Benedict. Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres
(C=O).Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa
y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se
pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada. Se basa en
la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu+2 en un medio alcalino. Este Cu+1 se
oxida y precipita en forma de CuO2, lo que proporciona la coloracin positiva de la
reaccin. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez
de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de
la coloracin

Reaccin de Seliwanoff
Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las cetosas en el
carbono 2 tienen una funcin cetona, que en presencia de un cido fuerte producen
rpidamente derivados furfricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que
est contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa (un disacrido formado por
glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacrido de la fructosa) dan positiva la reaccin,
ya queel HCl del reactivo provoca en caliente la hidrlisis del compuestoliberando fructosa
(responsable de la reaccin positiva).

Reactivo de tollens:
El complejo diamina-plata (I) es un agente oxidante, reducindose a plata metlico, que
en un vaso de reaccin limpio, forma un "espejo de plata". ste es usado para verificar la
presencia de aldehdos, que son oxidados a cidos carboxlicos.
Una vez que ha sido identificado un grupo carbonilo en la molcula orgnica usando 2,4-
dinitrofenilhidrazina (tambin conocido como el reactivo de Brady o 2,4-DNPH), el reactivo
de Tollens puede ser usado para discernir si el compuesto es una cetona o un aldehdo.
Al agregar el aldehdo o la cetona al reactivo de Tollens, ponga el tubo de ensayo en
un bao Mara tibio. Si el reactivo es un aldehdo, el test de Tollens resulta en un espejo
de plata. En otro caso, puede formarse o no un espejo amarillento.
El reactivo de Tollens es tambin un test para alquinos con el enlace triple en la posicin.
En este caso se forma un precipitado amarillo de carburo de plata.

La Reaccin de Barfoed :
Es un ensayo qumico utilizado para identificar azcares reductores adems se la utiliza
tambin para diferenciar a los azcares monosacridos de los disacridos mediante el
tiempo de aparicin del precipitado rojo ladrillo (Cu2O).

0 - 5 min Azcar Monosacrido


5 - 30 min Azcar Disacrido

-Se basa en la reduccin del cobre II (en forma de acetato) a cobre I (en forma de xido).

La composicin del reactivo de Barfoed se prepara mediante el siguiente procedimiento:


Aadiendo 2.5 ml de cido actico al 38% en agua a 100 ml de acetato cprico al 6.6% en
agua o se compone de una solucin de 0.33 molarde acetato de cobre neutro en una
solucin de 1% de cido actico. No es recomendable guardar el reactivo previamente a
su uso.

Los disacridos tambin pueden reaccionar pero de forma ms lenta, el grupo aldehdo
perteneciente al monosacrido que se encuentra en forma hemiacetal se oxida pasando a
cido carboxlico; varias sustancias como por ejemplo el cloruro de sodio que puede
interferir en la prueba o a su vez en el tamao molecular aunque se pueden ver
implicados en ciertos factores tales como una interaccin compleja con los anillos
monosacridos.

El medio alcalino facilita que el azcar est de forma lineal, puesto que el azcar en
solucin forma un anillo de piransico o furansico. Una vez que el azcar est lineal, su
grupo aldehdo puede reaccionar con el ion cprico en solucin.
En esta imagen podemos observar la formacin del precipitado xido cuproso (Cu2O) la
cual nos da una coloracin roja.
Ilustracin2

https://lh4.googleusercontent.com/8r2PAouPibtIirQAKPCbdK8Ivg8pqj3_Kbw9k58xpITbtQ9wAeeOdrHU4DyWJT1U8uG
4hffjNyhymCkUx4n2eUH38qr1CpYGRedqEerVIzi_-9-fhjc898VoAFT0Y6RTbA

CONCLUSIONES

En la elaboracin de esta prctica se incurrieron en varios errores de


carcter sistemtico y aleatorio que se pueden ver reflejados en los
resultados en algunos de los ensayos.
En el ensayo de Benedict se evidencia la presencia de azucares reductores
gracias a un cambio en la coloracin dada por la reaccin dada por la
reduccin del Cobre +2 presentes en el reactivo a Cobre+1, y
presentndose un precipitado de xido cuproso.
El jugo natural (Fresa) presenta una mayor concentracion de azucares
reductores, un tipo de estos azucares (azcares fosfato) son de gran
importancia intracelular ya que poseen mayor capacidad glucosilante que la
glucosa.
Los azucares reductibles tambin puede provocar alteraciones proteicas
mediante la reaccin de glucosilacin no enzimtica implicadas en los
procesos de envejecimiento celular y en el desarrollo de las complicaciones
crnicas de la diabetes.
El ensayo de Benedict no solo es positivo para reacciones con cambio de
calor a rojo o anaranjado, existen unas gamas de colores donde se puede
informar la presencia de azucares reductoras en menor proporcin.
En el ensayo de la glucosa oxidasa los resultados obtenidos se encuentran
entre los rangos normales de presencia de glucosa en suero y plasma
sanguneo.
Una utilidad bastante interesante del ensayo de glucosa oxidasa es el poder
determinar indirectamente el funcionamiento hormonal de la Insulina y el
glucagn, y la regulacin homeosttica de azcar en el cuerpo humano.
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Definicin de carbohidratos. Citado el 10 de febrero del 2016 DISPONIBLE


EN <https://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%BAcido>

2. Citado el 10 de febrero del 2016 DISPONIBLE EN:


<http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CARBOHIDRATOS_21119.pdf>
3. Citado el 11 de febrero del 2016 DISPONIBLE EN :
<http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp06.pdf>
4. Citado el 11 de febrero del 2016 DISPONIBLE EN:
<https://analisisinstrumentalmeh.files.wordpress.com/2011/04/analisis-de-
carbohidratos.pdf>
5. Citado el 11 de febrero del 2016 DISPONIBLE EN:
<http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001/BM_UNAD_LAB_CNE.pdf >
6. ANEXOS. Citado el 11 de febrero del 2016. DISPONIBLE EN:
<http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/mmedina/archivos/Practica14.
pdf>
7. ANEXOS. Citado el 11 de febrero del 2016. DISPONIBLE EN:
<http://es.scribd.com/doc/126121136/Determinacion-de-Carbohidratos-
Practica-1#scribd>
8. ANEXOS. Citado el 11 de febrero del 2016. DISPONIBLE EN:
<http://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-de-mtodos-generales-para-
determinacin-de-carbohidratos>
9. ANEXOS. Citado el 11 de febrero del 2016. DISPONIBLE EN: <
http://es.scribd.com/doc/23351531/Reacciones-de-Identificacion-Para-Los-
Carbohidratos#scribd >
10. Nathaly Ivonne Lpez Bustamante y estudiantes, UNIVERSIDAD NACIONAL
DEL SANTA FACULTAD DE CIENCIAS, BIOLOGIA GENERAL Y CELULAR,
Nuevo Chombote 2013. PDF.
<http://www.academia.edu/7027023/UNIVERSIDAD_NACIONAL_DEL_SA
NTA_FACULTAD_DE_CIENCIAS>
11. Citado el 11 de febrero del 2016 DISPONIBLE EN:
<https://analisisinstrumentalmeh.files.wordpress.com/2011/04/analisis-de-
carbohidratos.pdf >