PRACTICA N 13.

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA DE LAS TRANSAMINASAS EN SUERO
TRANSAMINASAS. Las transaminasas TGO (Transaminasa Glutmico Oxalactica o AST) y TGP
(Transaminasa Glutmico Pirvica o ALT) son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con
elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos. La actividad
srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos
conduce a un aumento en los niveles sricos. Luego de un infarto de miocardio se produce en suero
un marcado aumento de la actividad de TGO (abundante en msculo cardaco). En hepatitis virales
y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular, predominar la actividad
srica de TGP (abundante en tejido heptico). Una elevada actividad de transaminasas puede
detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicos y en distrofias musculares o miositis.

FUNDAMENTOS DEL METODO.

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato), reacciona con la 2,4-
dinitrofenilhidracina, en medio alcalino y produce un compuesto coloreado que se mide a 505 nm.

VALORES DE REFERENCIA. Se consideran valores normales de transaminasas hasta 12 U/l.

EQUIPOS: Espectrofotmetro, bao mara.

MATERIALES: Sueros humanos con valores normales y patolgicos, micropipetas,

cronmetro, tubos de ensayo 13x100, puntas amarillas y azules

REACTIVOS: A1. (Para TGO) l-aspartato 100 mM y -cetoglutarato 2 mM. A2. (Para TGP): l-
alanina 200 mM y -cetoglutarato 2 mM. B. Reactivo B: 2,4-dinitrofenilhidracina (2,4-DNFH)
1 mmol en cido clorhdrico. C. Hidrxido de sodio 0.44 mol/l.
PROCEDIMIENTO.

1. En cuatro tubos marcados del 1 al 4, colocar:

1 2 3 4
Reactivo A1 (ml) 0.5 0.5
Reactivo A2 (ml) 0.5 0.5
2. Incubar 3 minutos a 37C y adicionar
Suero (ml) 1 1
Agua destilada (ml) 1 1
3. Mezclar e incubar 30 minutos a 37C y adicionar
Reactivo B (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5
4. Mezclar e incubar 10 minutos a 37C y adicionar
Reactivo C (ml) 5 5 5 5
5. Retirar del bao. Leer a 505 nm en espectrofotmetro llevando a cero con agua destilada.
CALCULO DE RESULTADOS.
Para TGO: A (tubo 1) A (tubo 2) Para TGP: A (tubo 3) A (tubo 4)
La actividad enzimtica de la TGO y TGP se obtiene de la siguiente tabla de conversin
ABSORBANCIA TGO ABSORBANCIA TGP
0.034 5 0.034 5
0.047 7 0.061 9
0.061 10 0.100 14
0.080 14 0.129 18
0.100 19 0.164 23
0.115 23 0.196 27
0.129 26 0.224 32
0.146 31 0.254 37
0.164 36 0.284 42
0.180 41 0.314 47
0.196 46 0.340 52
0.210 50 0.364 57
0.224 55 0.389 62
0.239 61 0.415 68
0.254 67 0.442 74