MICROBIOLOGIA GENERAL Y DE ALIMENTOS 1

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. OBJETIVO:

Los alumnos deben de conocer los principales principios para la

preparacin de los medios de cultivo.

II. EQUIPOS Y MATERIALES:

Autoclave
Cocinas
Bao Maria
Balanza y Estufa
Material de vidrio: (Balones, placas Petri, tubos de ensayo, pipetas y
matraces).
Cocinas
Balanza y estufa
Agares y medios de cultivo

III. FUNDAMENTO:
Para obtener colonia de microorganismos es necesario utilizar determinados
sustratos nutritivos (medios de cultivo) en los cuales los microorganismos
pueden desarrollar todos sus procesos vitales.
Los medios de cultivo deben de reunir los siguientes requisitos:

Deben de contener Nitrgeno, Carbono, Oxgeno, Hidrgeno; Sales

Minerales (sodio, potasio, etc.); (Fe, Cu, Cr, Zn, etc.) y factores de
crecimiento (vitaminas, hormonas, etc.) todas las sustancias deben ser
fcilmente asimilables por los microorganismos.
Todos tienen un PH especfico
La presin osmtica en el medio debe ser igual que dentro de la clula
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microbiana.
Los medios de cultivo deben ser esterilizados.

Actualmente existen medios de cultivo desecados, los cuales se almacenan en

recipientes bien cerrados en lugares oscuros y a una temperatura de 15-30C y
son hidroscpicos Tienen un tiempo de duracin de 5 aos desde su fecha de
fabricacin.

Los medios pueden ser especficos como el caldo de tretrationato para

bacterias por ejemplo o el caldo de selenito de lehithon para salmonella y
shigella.

Los medios selectivos tienen consistencia solida son coloreados y muy

llamativos. Ejm: pueden tornarse de un color naranja a un color fosforescente.

IV. CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Segn su estado fsico
Lquidos
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los
nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones con un
elevado nmero de microorganismos. Ej. Caldo nutritivo.

Slidos
Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los
cuales se les aaden agentes solidificantes como agar, gelatina o
slica gel. Se utilizan con frecuencia en el aislamiento y
mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. Ej.
Agar nutritivo
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Segn la naturaleza de sus constituyentes

Medios naturales o complejos
Estn constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el aadido de minerales y otras sustancias.
No se conocen todos los componentes del medio de cultivo, ni las cantidades
exactas en que estn presentes. Ej. Extracto de carne, extracto de levaduras.
Medios sintticos
Se preparan a partir de ingredientes qumicamente puros y por lo tanto
se puede conocer exactamente su composicin cualitativa y cuantitativa. Por
su costo slo se emplean en procedimientos especiales.

Segn sus propsitos de uso

Medios de enriquecimiento
Se llama enriquecimiento a cualquier cultivo en
medio lquido que resulte en un incremento en el
nmero de un tipo dado de microorganismo en
relacin con el nmero de otros tipos de
microorganismos que puedan estar en el inculo.

Un medio de enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el

crecimiento del microorganismo que nos interesa o que inhiban el crecimiento
de los otros tipos de microorganismos presentes. La selectividad de un cultivo
de enriquecimiento no est determinada nicamente por la composicin
qumica del medio usado, sino que en un medio dado puede ser variada
significativamente modificando otros factores tales como: temperatura, pH,
fuerza inica, iluminacin, aireacin etc. Ej. Caldo tetrationato utilizado para
el enriquecimiento de las especies del gnero Salmonella provenientes de
muestras de heces, orina, agua o alimentos.
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Medios selectivos
Son bsicamente iguales a los de
enriquecimiento, se diferencian por ser medios
slidos y estn diseados para el aislamiento de
microorganismos especficos. Ej. Agar desoxicolato
citrato utilizado para el aislamiento de patgenos
entricos.
Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de
muchos tipos de microorganismos, pero si contienen indicadores de productos
derivados de la actividad metablica de los microorganismos sobre algunos de
los componentes del medio. Se utilizan para la identificacin de los
microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar
fermentacin de carbohidratos.
Medios selectivos diferenciales
A veces se combinan en un mismo medio las caractersticas de ser
selectivo y diferencial. Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene
sales biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram
positivas. Pero como tambin contiene lactosa y un indicador de pH permite
distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.

V. TIPOS DE AGARES Y CALDOS DE CULTIVO:

Agar Nutritivo
Composicin:
Extracto de carne, 3g
Peptona, 5g
Agar,15 g
Agua destilada hasta 1000 ml
Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayora de los
microorganismos poco exigentes.
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Preparacin: Se disuelven 20g de extracto de carne y peptona en 1 Lt de agua

por calentamiento hasta que la solucin sea transparente. Aadir a
continuacin el agar y el agua restante agitando hasta ebullicin. Ajustar el pH
a 7 y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121 C. A continuacin se
distribuye en placas Petri.

Rojo De Metilo Y Voges Proskauer

Composicin:
Caldo R.M.V.P.
Polipeptona 7,0 g
Glucosa 5,0 g
Fosfato dipotsico 5,0 g
Agua destilada 1000,0 mL
pH 6,9

Preparacin: Disuelva los ingredientes en agua destilada, distribuya en tubos y

esterilice en autoclave por 15 minutos a 121C. Solucin Indicadora de Rojo de
Metilo Se prepara disolviendo 0,1 g de este indicador en 300 mL de etanol al
95% y diluyendo luego con agua hasta 500 mL
Agar BAIRD-PARKER (Agar selectivo para estafilococos segn BAIRD-PARKER DE

58 g; 500 g)
Composicin: (g. por litro)
Extracto de carne 5,0
Peptona de casena 10,0
Extracto de levadura 1,0
Piruvato sdico 10,0
Glicocola 12,0
Cloruro de litio 5,0
Agar-Agar 15,0
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Preparacin: 58 g del producto se suspenden en 1 litro de agua recin destilada

o desmineralizada y se dejan remojar 15 minutos. A continuacin, se hierve
hasta solucin completa. La esterilizacin, se realiza en autoclave (15 minutos
a 121 C). Valor del pH del medio de cultivo listo para el uso, a 37 C: 6,8 0,2.
Tras enfriamiento hasta unos 50 C, se aaden 50 ml de una emulsin de yema
de huevo

Interpretacin
Colonias (Microorganismos)
Negras, lustrosas, (Staphylococcus aureus)
Arqueadas, de 1 a 1,5 mm de dimetro, con un delgado borde blanco,
rodeadas de un halo claro de 2 a 5 mm de anchura. Dentro del halo
claro se observa (no antes de 48 horas de incubacin) la presencia de
anillos opacos.
Negras, lustrosas, pero de (Staphylococcus epidennidis). Forma
irregular. Halos claros, pero despus de 24 horas, se presentan zonas
opacas alrededor de las colonias.

Agar Chapman:
Composicin por Litro:
Extracto de carne - 1g
Peptona trpsica de casena- 5g
Peptona de carne- 5g
Cloruro sdico- 75g
D-manitol- 15g
Rojo fenol- 25g
Agar- 15g

Medio para la deteccin de Staphylococcus patgenos en muestras de

alimentos y otros materiales mediante la tcnica de filtracin por membrana.
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Agar Papa Dextrosa:

omposicin por Litro:
Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusin papa - 4g

Medio para el cultivo y enumeracin de levaduras y mohos a partir de

alimentos y otros materiales. Los hidratos de carbono y la infusin de papa
favorecen el crecimiento de levaduras y hongos, en tanto que por el bajo rango
de pH, la flora acompaante se reduce significativamente.

Agar Salmonella-Shigella:
Composicin por Litro:
Peptona de casina y carne- 5g
Extracto de carne de buey- 5g
Lactosa- 10g
Citrato sdico- 8.5g
Tiosulfato sdico- 8.5g
Citrato de hierro- 1g
Sales Biliares- 8.5g
Rojo neutro- 0.025g
Agar- 15g
Verde brillante- 0.3mg

Medio para el aislamiento de salmonelas y de Shigella de heces, de

comestibles y de otros materiales.

Agar para clostridios 50.g; 500 g

Composicin (g. por litro)
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Extracto de levadura 3,0

Extracto de carne 10,0
Peptona de casena 10,0
D(+)-Glucosa 5,0
Almidn 1,0
Cloruro sdico 5,0
Acetato sdico 3,0
Cloruro de L( 4-)-cisterna 0,5
Agar-Agar 12,5

Preparacin: 50 g del producto se suspenden en 1 litro de agua recin destilada

o desmineralizada, se dejan remojar 15 minutos y se hierven hasta solucin
completa. La esterilizacin se efecta en autoclave (15 minutos a 121 C). Valor
del pH del medio de cultivo listo para el uso, a 37 C: 6,8 0,2 El medio de
cultivo se distribuye en tubos, a razn de 9 ml, o se vierte en placas. Para la
inhibicin de la flora acompaante gram-negariva pueden mezclarse al medio
de cultivo enfriado a 50 C despus de la esterilizacin, 15 a 20 mg de
polimixina B por litro de medio c cultivo.
Agar Sangre:
Composicin por Litro:
Digestivo pancretico de casena -15g
Peptona de soja - 5g
Cloruro sdico-5g
Agar-15g
Medio de propsito general para el cultivo de una gran variedad de
microorganismos incluyendo los exigentes. Al aadirle sangre, puede
utilizarse para la determinacin de las reacciones hemolticas. El medio esta
libre de azucares reductores, ya que estos influiran de forma adversa en
reacciones hemolticas.
Caldo Nutriente:
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Composicin por Litro:

Digestivo pancretico de casena- 17g
Digestivo papaico de harina de soja- 3g
Dextrosa- 2.5g
Cloruro sdico- 5g
Fosfato Dipotsico- 2.5g

Medio de uso general, utilizado para el crecimiento de microorganismos

exigentes as como para los no exigentes. Clostridios y anaerobios pueden
crecer tambin cuando se incuban bajo condiciones de anaerobiosis.

Caldo-prpura de bromocresol-azida
Composicin: (g. por litro)
Peptona de casena 10,0
Estracto de levadura 10,0
D(+)-Glucosa 5,0
Cloruro sdico 5,0
Hidrogenofosfato dipotsico 2,7
Dihidrogenofosfato potsico 2,7
Azida sdica 0,5
Prpura de bromocresol 0,032

La presencia de enterococos se manifiesta por crecimiento (turbidez

progresiva) as como por viraje hacia amarillo del medio de cultivo
primitivamente de color prpura.

Caldo SBM
Composicin (g por litro)
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Peptona especial 5,0

Extracto de levadura 5,0
D-Manita 5,0
Selenito sdico 4,0
Taurocolato sdico 1,0
Verde brillante 0,005
Dihidrogenofosfato potsico 3,4
Hidrogenofosfato dipotsico 4,35
(Caldo de enriquecimiento selenito-verde brillante-manita segn STORES y
OSBORNE)

VI. PREPARACIN:
Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua limpia destilada
neutra. Los recipientes que se utilizaran se lavaran esmeradamente con el fin
de eliminar cualquier sustancia extraa.
En lo posible se prepara mximo 2 Lts. por recipiente en la balanza digital
calcular el peso por regla de tres.
Se preparan segn las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio
de cultivo.
Los medios que contienen Agar o gelatina deben ser calentados para obtener
su disolucin.
Con cuidado los medios que no contienen Agar ni gelatinas se pueden
disolver por lo general en agua fra o bajo ligero calentamiento.
Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en
porciones ms pequeas como (tubos , balones etc), si las normas indicadas
en el envase nos indican otra cosa.
La esterilizacin de los medios de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 121C
durante 15 minutos.
Distribuir en recipientes como placas de petri, tubos, etc.
Luego se coloca un algodn y papel antes de esterilizar para evitar la
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contaminacin al trasladarlo del autoclave al lugar de trabajo

VII. CONCLUSIONES:
En dicha prctica se puede llegar a concluir que existen diferentes tipos de
agares y caldos de cultivo utilizados como medios de cultivo para la gran
gama de microorganismos.
As vez la identificacin de los microorganismos nos lleva a la conclusin de
que cada microorganismo puede tener uno varios medios de cultivo
especficos en el mercado que aparte de favorecer a un determinado
microorganismo puede favorecer a otro con similares propiedades, lo que
conlleva a un crecimiento de ambos..
Tambin se dice que cuando un microorganismo posee propiedades
especificas solo un tipo de cultivo ser beneficioso par asu crecimiento, estos
medios especficos tienen nutrientes que facilitan el desarrollo del
microorganismo inhiben el desarrollo de otros microorganismo en el mismo
medio de cultivo.

VIII. BIBLIOGRAFA:
E. MERCK. manual de microbiologa DARMASTACH (R.F. de ALMANIA)
GARCA GARIBAY. QUINTEROS RAMREZ. LPEZ MUNGUIA/
BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA/ Editorial - Limusa S.A./Edicin - Primera/
Espaa - 1998/ Pg.170 - 171.
PEARSON, D. 1986. Tcnicas de laboratorio para el anlisis de alimentos. Editorial
Acribia. Espaa
AGURTO, T. 1989. Manual de tcnicas de Microbiologa. Editorial La Pluma Fuente
S.A. Per.
http://www.merck.com.ar/MQA/SITE/wmsp.nsf/vstRefConPorTit/Microbiolog%C3
%ADa%20-%20Inicial?opendocument