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BIOLOGA GENERAL

DEPARTAMENTO ACADMICO DE BIOLOGA

Reporte de prctica N 2

Tema: Determinacin experimental de biomolculas I


Protenas y enzimas
Apellidos y nombres:

- Lipe Luque Giancarla Adelheid 20161138


- Leonardo Villena Kimberly Raquel 20161137
- Hurtado Sanchez Jammie Carolina 20160133
- Jimenez Huamani Alessandra 20161136

Horario de Prctica (Da y Hora): Viernes 2:00pm 4:00pm


Apellidos y nombres del profesor de Laboratorio: Ogata Katy

LA MOLINA, LIMA - PER


2017
DISCUSIONES

1. Desnaturalizacin de protenas
Las protenas presentan diversas estructuras y estas al reaccionar con diversos
factores son afectadas ( se desnaturalizan) rompiendo sus enlaces hasta llegar a la
estructura base constituida por enlace peptdico, en esta experimentacin la albmina
ser sometida a: un aumento de temperatura, acetona, cidos y a una ltima muestra
se dejar tal cual para poder analizar los cambios y comparar.
2. Determinacin de presencia de protenas (reaccin de Biuret)

Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la
valoracin de los mismos, llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus
uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino
formando un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas
para que se forme el complejo coloreado. Esta prueba sirve para la identificacin de
tripptidos en adelante.
Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en medio alcalino se complejan
con los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y oxgeno de los
enlaces de todas las protenas. La cantidad de color producido es proporcional a la
concentracin de protenas y es medida espectrofotomtricamente a 550 nm.

3. Reconocimiento de la Enzima Catalasa


En esta prctica pudimos observar en los 4 tubos de ensayo un burbujeo al aadir el agua
oxigenada, esto de debe a la presencia de la enzima catalasa en los peroxisomas del tejido
tanto animal como vegetal, la catalasa descompone el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno, la rapidez de la reaccin se debe a la distinta concentracin de esta enzima en cada
uno de los componentes.
4. Reaccin Amiloltica.
a. Aqu solo observamos el color caracterstico del lugol.
b. La amilasa que es componente del almidn tiene una estructura lineal con
c. enlaces (1,4), y forma hlices en donde se juntan con las molculas de
yodo (componente del lugol) formando el color azul oscuro.
d. La amilasa que forma parte de la saliva rompe los enlaces entre los azcares
que constituyen el almidn y despus de su accin deja glucosa y maltosa
libres, al aadirle el lugol este ya no reacciona con el almidn y no toma el
color azul oscuro ya que ya no hay almidn, sino se forma el color
amarillento.
e. Al aadirle el cido sulfhdrico a la saliva, cambia su pH y la amilasa solo
acta a un pH y a una temperatura adecuada, entonces al agregarle el
almidn, est ya no lo descompone y el lugol actuara y se dara la coloracin
azul oscura.

RESULTADOS

1. DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

FIG.1 Desnaturalizacin de las protenas


TUBO OBSERVACIN: HA DESNATURALIZACIN
N SOMETER A: CAMBIADO ALGO EN (+) (-) POR QU?
LOS TUBOS DE ENSAYO?

1 BAO MARA Blanco, solidificado + El calor, el aumento de


temperatura.

2 ACETONA Ligero color blanco + Por ser un alcohol


Coloidal

3 CIDO SULFH- Espumoso + espumoso


DRICO Blanco + semi slido (gelatinoso)

4 NaCL translcido, transparente + pequeas lineas lquidps


+ para solidificarse

5 HNO3 Amarillento + pequeos grumos de


slido

6 Control control control


2. DETERMINACIN DE PRESENCIA DE PROTENAS (REACCIN DE BIURET)

MUESTRA OBSERVACIN REACCIN


(POSITIVA O NEGATIVA)

ALBMINA Tras echarle en NaOH la La reaccin es positiva ya que se


albmina fue desnaturalizada torn violenta por la presencia del
por la variacin de su pH por cobre.
la base fuerte.

AGUA por la falta de alguna protena reaccin negativa y de color celeste.


esta muestra no hubo una
reaccin positiva

Fig.2 Muestras de reaccin


Fig.3y4 Pruebas realizadas en papa, frijol, carne e hgado.

3. RECONOCIMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA

ACTIVIDAD CONTENIDO DEL TUBO

MUY BUENA Hgado


ACTIVIDAD (3s)

BUENA ACTIVIDAD Carne


(5s)

POCA ACTIVIDAD frejol


(15s)

MUY POCA papa


ACTIVIDAD (38s)

COMPLETAR LA ECUACIN:

H2O2 + CATALASA H2O2 + O2 + CATALASA


Fig.4 Reaccin amiloltica

4. REACCIN AMILOLTICA

MUESTRA OBSERVACIN DE EXPLICACIN


S LA COLORACIN

A naranja 4 gotas de lugol y apareci el color naranja


porque el lugol solo no reaccionaba.

B violeta oscuro 15 gotas de almidn + 2gotas de lugol


por la accin del yodo ( lugol) ms el
almidn provocando que el yodo se
introduce en la estructura del almidn
provocando la coloracin violeta

C naranja con destellos 15 gotas de almidn + 2gotas de lugol +10


amarillentos por el gotas de saliva
borde el almidn es hidrolizado por la amilasa
presente en la saliva y luego cuando se le
echa el lugol este ya no acta
completamente pues ya fue hidrolizado
anteriormente y no tiene a dnde
incorporarse provocando que no se ponga
una coloracin completa de violeta

D violeta oscuro 10 gotas de almidn + 2gotas de lugol + 10


gotas de saliva + 10 gotas de ac. sulfrico
el cido sulfrico inhibe la accin de la
amilasa salival provocando que esta ltima
no hidroliza el almidn para luego cuando se
le agrego lugol este si pudo unirse
completamente.

COMPLETAR LA ECUACIN DE LA REACCIN

ALMIDN + AMILASA C6H12O6 + Amilasa

CONCLUSIONES

1. El cambio de color y textura en las muestras demuestra la presencia de protenas que


sometidas a ciertos factores se desnaturalizan.

2. Las enzimas se desnaturalizan por un cambio de PH, temperatura

3. Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones


qumicas que tienen lugar en la clula. Son capaces de aumentar la velocidad de las
reacciones qumicas mucho ms que cualquier catalizador artificial conocido, y adems
son altamente especficos ya que cada uno de ellos induce la transformacin de un
slo tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el medio de reaccin.
4. En el primer experimento pudimos observar la desnaturalizacin de la albmina y como
est presentaba cambios fsicos al tener contacto con ciertos cambios de temperatura,
pH,etc. en el segundo experimento reconocimos la presencia de protenas en ambas
muestras, en el tercer experimento medimos los tiempos de la reaccin por cada tubo
de ensayo para poder determinar la rapidez de la accin de la enzima catalasa y
observamos que el hgado tena menor tiempo por lo tanto era ms eficaz por la gran
cantidad de enzima catalasa. en el cuarto experimento observamos que el lugol tiene
la capacidad de unirse a la estructura del almidn pero que con la presencia del la
saliva causa la hidrlisis del almidn inhibe la accin del lugon con el almidn, pero si
se le agregara el cido este le cambia el pH a la enzima amilasa causando su
desnaturalizacin y as el lugol actuaria con el almidn.

BIBLIOGRAFA
Rivera, E. I. (2005). PRCTICAS DE BIOQUMICA DESCRIPTIVA. MEXICO: UNISON.
Bioqumica mdica. John W. Baynes, Marek H. Dominiczak. Edit. Elsevier Espaa (2007).
Biologa Molecular de la Clula. Alberts y col. Edit. Omega. Espaa (2004).

CUESTIONARIO

1. Cul es el fundamento terico de la reaccin de Biuret?


El Biuret es un reactivo de sulfato de cobre diluido en un lcali fuerte. Es un reactivo muy
bueno para demostrar presencia de protenas e incluso cuantificarlas. La prueba la dan
positiva todos los componentes que tengan dos o ms uniones peptdicas, por lo cual es
propia para protenas y pptidos.
La intensidad del color de la reaccin es proporcional a la cantidad de protena en la muestra.
El color azul morado de la reaccin positiva se debe a un complejo de coordinacin entre el
catin divalente de cobre y de cuatro tomos de nitrgeno, dos de cada cadena peptdica. Los
dipptidos y los aminocidos no dan positiva la reaccin, excepto la treonina y serina. Esta
reaccin requiere relativamente grandes cantidades de protena, de 1 a 5 miligramos, para la
formacin del color (Rivera,2005).
2. Describir las diferentes estructuras de las protenas.

Estructura Descripcin

Primaria Secuencia lineal de los aminocidos en la cadena polipeptdica.

Secundaria Formados por interacciones entre los aminocidos que componen


la columna polipeptdica central. Son dos la estructura secundaria
hlices alfa y lminas beta.

Terciaria Se forma a partir de la compactacin de las estructuras


secundarias ya mencionadas. Siendo as la conformacin de una
cadena polipeptdica individual, conocida como subunidad
proteica.

Cuaternaria Es la asociacin de varias subunidades proteicas.

https://es.slideshare.net/Bioestelles/tema-4-las-proteinas

3. Cul es la diferencia entre las Fuerzas de Van Der Waals y las atracciones
hidrofbicas?
FUERZAS DE VAN DER WAALS INTERACCIONES HIDROFBICAS

De naturaleza puramente electrosttica Dependen del elevado grado de


(atraccin o repulsin de cargas desorden del agua, (es decir, de su
elctricas), aunque en las ltimas elevada entropa) y son caractersticas
participan molculas neutras, de aquellas molculas que no pueden
interaccionando bien con otras interaccionar fcilmente con el agua.
molculas neutras o con iones.

http://sebbm.es/BioROM/contenido/JCorzo/temascompletos/InteraccionesNC/agua/hi
drofobicos.htm

4. Qu es energa de activacin?
Es la energa necesaria para que la reaccin se efecte con la mnima cantidad de energa,
mientras ms baja es la energa, ms elevada ser la velocidad de la misma.
Una reaccin es llamada exotrmica cuando provee para el medio ms de la energa
necesaria para alcanzar el complejo activado.
Y es endotrmica cuando provee para el medio menos energa de la necesaria para
alcanzar el complejo activado.

5. Qu es el sitio activo de las enzimas y cules son sus caractersticas?


Tambin llamado centro activo, es la zona de la enzima a la cual se le une el sustrato para
que se pueda producir la reaccin.
Caractersticas:
Tiene un conjunto de grupos qumicos ordenados de tal manera que el sustrato pueda unirse
fuertemente.
Es tridimensional.
Est situado superficialmente en la enzima, permite el fcil acceso al sustrato.
Los grupos que intervienen en la formacin del centro activo realizan diferentes funciones.

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