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Laboratorio N 01:
Estudio de la Divisin Celular: Mitosis

I. OBJETIVOS
- Familiarizarse con el esquema del ciclo mittico.
- Familiarizarse con el desarrollo divisionario en clulas somticas de la cebolla y/o ajos
(allium sativum).

II. MARCO TEORICO


La divisin mittica de una clula da lugar a dos clulas hijas, cada una de las cuales es idntica
genticamente a la clula madre. El intervalo entre cada divisin mittica se conoce como ciclo
celular.

Es interesante el estudio de la mitosis, ya que ello nos permite observar de forma directa los
cromosomas o base fsica de la herencia y la forma de su transmisin de una clula a otra.
Asimismo es interesante por su aplicacin en Citotaxonoma y Evolucin ya que por medio de dicho
estudio podemos observar la morfologa, tamao y nmero de los cromosomas, permitindonos de
este modo clasificar una especie, adems de por rasgos morfolgicos, por caractersticas
cariolgicas. Estos estudios permiten determinar los cambios cromosmicos (duplicaciones,
inversiones, cambios Robertsonianos etc.) que han intervenido en la evolucin y separacin de
especies.

El proceso de divisin nuclear se denomina mitosis. Mediante este proceso una clula da lugar a dos
clulas hijas, cada una con una dotacin cromosmica idntica a la de la clula original,
manteniendo el nmero cromosmico de la clula parental prexistente.

La mitosis, comprende 2 mecanismos: La cariocinesis, es decir, la divisin del ncleo, que asegura
el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis, que reparte los orgnulos y
componentes citoplasmticos a las clulas hijas, separndolas e independizndolas.

Normalmente, la cariocinesis y la citocinesis son mecanismos sincronizados en ese orden,


constituyendo juntos el proceso de divisin celular, aunque no siempre se produce esa
sincronizacin.

Para dividirse la clula, primeramente es necesario que se duplique su material gentico contenido
en el ncleo, para luego repartirlo en partes iguales a las clulas hijas, aumentando su contenido
citoplasmtico para poderlo repartir entre las dos nuevas clulas. Sin embargo, la divisin del
citoplasma no es tan exacta o equitativa como la del ncleo.

La mitosis es un proceso continuo, la separacin en distintas fases. Una clula que no est en
mitosis se dice que est en interfase, no es una fase de la mitosis, es el perodo entre dos mitosis
sucesivas. En este periodo, se distingue el ncleo con la cromatina y los nuclolos; se produce una
gran actividad metablica, ya que es cuando los genes entran en accin, aunque no todos,
nicamente lo harn aquellos cuyos productos sean necesarios para cada clula en particular, de
acuerdo con su funcin.

Luego tiene lugar el proceso de duplicacin de los cromosomas, quedando cada uno de ellos
compuesto por dos cromtidas idnticas. A este periodo durante el cual ocurre este proceso de
sntesis de ADN se llama S (periodo de sntesis). Este periodo est precedido por un periodo G1,
anterior a la duplicacin de la cromatina suele ser la fase ms larga de todo el ciclo celular durante
esta etapa las clulas crecen y se restaura a lo normal el volumen celular, que se haba reducido al
dividirse la clula a la mitad durante la mitosis; y seguido de un periodo G2, fase posterior a la
duplicacin de la cromatina y anterior al inicio de la siguiente mitosis periodo relativamente corto,
durante el cual las clulas se preparan para la actividad mittica, acumulando energa y sintetizando
las protenas esenciales para la misma.

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Si designamos a la mitosis como M, el ciclo celular es una secuencia que se puede representar como
sigue:
G1 S G2 M

Normalmente M es la etapa ms corta. G1, S y G2 constituyen la interfase. Este ciclo se repite


cuando las clulas estn proliferando. La duracin relativa de G1, S y G2 vara de una especie a
otra y depende as mismo de la clula de la que se trate. Durante estos 3 perodos se produce la
sntesis de protenas. La sntesis de ARN se produce sobre todo en los periodos G1 y G2. Cuando
una clula no va a dividirse de nuevo y el ncleo interfsico no entra en el perodo S se dice que la
clula se halla en perodo G0.

La MITOSIS (periodo M) es un proceso continuo que se divide en varias fases, y que requiere de la
presencia de un aparato mittico, formado por un huso de micro tbulos dispuestos
longitudinalmente y dispuestos entre un par de centriolos. La mitosis consta de las siguientes
fases:

1. Mitosis o cariocinesis
Profase: se caracteriza por la condensacin gradual y enrollamiento progresivo de los cromosomas,
que se hacen visibles al microscopio como estructuras filamentosas. Cada cromosoma consta de dos
rplicas que permanecen juntas y unidas por el centrmero las cuales se denominan crmatidas
hermanas que son, gentica y morfolgicamente idnticas.

Otros sucesos caractersticos de la profase son la desaparicin gradual del nuclolo, cuyos
componentes se dispersan por el ncleo. Mientras la membrana nuclear est intacta y el o los
nuclolos sean visibles, se dice que la clula est en profase. En la mayora de los organismos la
membrana nuclear empieza a desintegrarse durante esta etapa.

Mientras tanto, en el citoplasma, los centriolos se han duplicado y cada diplosoma (par de
centriolos), ha emigrado a un polo de la clula. Entre ambos se forma y se extiende el huso
acromtico o mittico, constituido por filamentos (fibras del ster), en los que se insertan los
cromosomas por el centrmero y comienzan a emigrar hacia la placa ecuatorial. Este perodo desde
que desaparece la membrana nuclear hasta que los cromosomas se localizan en el plano ecuatorial
se denomina pro metafase.

Metafase: la membrana nuclear desaparece,


dejando los cromosomas libres en el citoplasma,
alcanzado su mximo grado de espiralizacin. Estos
se unen por sus centrmeros a las fibras del huso
mittico, quedando dispuestos en la placa
ecuatorial, con cada cromtida hacia un polo
celular. Esta orientacin asegura la correcta
separacin en la fase siguiente.

En las clulas animales el huso mittico est formado por los centriolos, orgnulos citoplasmticos
que actan como punto de atraccin de los cromosomas en su migracin a los polos, y una serie de

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fibras del huso que los unen con los centrmeros, Hay evidencia de que es el propio centrmero el
que forma las fibras del huso, aunque no se descarta la posibilidad de que se originen tambin
fuera de l y luego se asocien a la regin centromrica.

En algunas plantas inferiores existen centriolos que se unen a las fibras del huso. Sin embargo, en
plantas superiores estos orgnulos no existen pero siempre se forma el huso mittico.

Anafase: es, en general, la etapa ms corta de la mitosis. En esta fase las cromtidas de cada
cromosoma se separan y emigran hacia los polos, de manera que a cada uno van 2n cromtidas.

Este movimiento se realiza gracias al huso acromtico. Como ambas cromtidas son idnticas,
porque se formaron por duplicacin de la fase S de la interfase, los polos celulares reciben,
exactamente el mismo material gentico. La anafase concluye cuando todos los cromosomas han
alcanzado los polos.

Telofase: Las dotaciones de cromosomas se agrupan en polos opuestos del huso, donde empiezan
a desespirilizarse y a volver a la forma relajada de los cromosomas en interfase. La membrana
nuclear se reconstruye alrededor de las cromtidas, los nuclolos vuelven a formarse y las
cromtidas se desespiralizan volviendo a formar la cromatina. Se han formado dos ncleos hijos.

2. Mitosis o Citocinesis
La citocinesis es el proceso por el cual el citoplasma de la clula madre queda distribuido entre las
dos clulas hijas y stas se independizan por la formacin de la membrana celular. La separacin de
las dos clulas hijas es diferente en clulas animales y vegetales.

En las clulas animales se produce la plasmocinesis, en la que a partir de la periferia de la clula el


citoplasma se va estrangulando hasta que las clulas hijas se ponen en contacto.

Mientras, que en las clulas vegetales se forman vesculas membranosas en la zona comprendida
entre los ncleos hijos. Estas vesculas se fusionan unas con otras dando origen a la membrana
plasmtica, quedando entre las membranas el contenido de las vesculas que constituir la pared
celular.

III. PROTOCOLO
3.1 MATERIALES
- Pinzas de punta aguda
- Microscopio
- Bistur
- Mechero de alcohol
- Vidrio de reloj
- Papel absorbente (filtro)
- Alcohol cido
- Agua destilada
- Colorante orceina actica 1%
- Muestra biolgica: Para el estudio de la mitosis se han de emplear tejidos que estn en divisin
celular activa, En animales se usa tejido de mdula sea de huesos largos (fmur), tejido del
bazo, ciegos gstricos y cultivo de tejidos con clulas en divisin (sanguneo, etc.) en medios
especiales. En plantas el material ms comnmente utilizado es el extremo apical de la raz
(pice). Tambin se pueden utilizar pices de hojas, as como los ovarios de las flores.

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3.2 TCNICA
Obtencin del material: Se cortan races jvenes de cebolla, aproximadamente unos 20mm,
comprobando que conservan el pice radicular, que se distinguir por el cambio de color.
Fijacin; su principal propsito es coagular los contenidos celulares, de tal forma que retengan
su forma, estructura y posicin. Por lo tanto, el fijador ha de ser un fluido que penetre
rpidamente en los tejidos. Uno de los ms utilizados es el fijador Carnoy (3:1), que est
compuesto por 3 partes de alcohol (etanol absoluto) y 1 parte de cido actico glacial. Una
variante de este usada en plantas por su mayor penetrabilidad en las mismas, es el compuesto
por cloroformo-alcohol-actico (4:3:1), deben estar al menos 2-3 horas. Existen diversos
fijadores: 3 Metanol: 1 Actico; 7 Metanol: 3 Actico: 3 Metanol: 1 Propinico y segn el fijador
utilizado, el tiempo y temperatura de la fijacin vara.
Conservacin; se lava el material varias veces con la mezcla fijadora y se conserva a 4C.
Hidrlisis, que se realiza en ClH 1 N. a 60 C, durante 5 minutos. La accin de la hidrlisis
consiste en aadir molculas de agua en lugares especficos, de modo que la estructura del
ADN se relaje y permita que colorantes bsicos como la orcena, en nuestro caso, o cualquier
otro reaccionen con los grupos aldehdos del azcar desoxirribosa, que se ponen as de
manifiesto. La hidrlisis se detiene por medio de la adicin de agua destilada al tubo donde se
lleva a cabo sta.
Tincin; transcurridos los 10 minutos de la hidrlisis, se lavan las raicillas en agua destilada y se
colocan las raicillas sobre una gota de orcena actica o de orcena lactopropinica al 1% para
su tincin, durante 10 a 15 minutos.
Preparacin.

3.3 PROCEDIMIENTO
La primera parte de la prctica se llevar a cabo en la casa de uno de los integrantes del equipo
una semana antes de asistir a la sesin de laboratorio:
- En un frasco o vaso con agua colocar una cebolla y7o cabeza de ajo, de tal manera que solo las
races o lo que fueran las races de la cebolla tengan contacto con el agua y esperar que
transcurra una semana. Procura cambiar el agua sin moverla durante ese tiempo y que el resto
de la cebolla no est en contacto con el agua, ya que la cebolla se pudre.

La segunda parte del desarrollo de la prctica se llevar a cabo en el laboratorio:


- Con las pinzas se toma una raicilla, colcalas sobre un vidrio portaobjetos y con la ayuda de la
lupa corta el pice radicular con un bistur, ste pice radicular se corta a su vez en 4
fragmentos, un corte longitudinal y otro transversal dos races (siempre por el extremo cortado y
no por la punta)
- Colcalas en un vidrio de reloj que contenga alcohol cido actico (aproximadamente 5 ml.) y
djalas de 10 a 20 minutos, evita que la preparacin se evapore.
- Seca las races con un trozo papel filtro y colcalas en porta objetos.
- Agrega una gota de colorante de tincin. Con el pulgar presiona sobre la parte superior del porta
objetos. Con el papel absorbente, retira el exceso de colorante. Levanta cuidadosamente el porta
objetos superior y agrega otra gota de colorante colocando el cubre objetos.

3.4 OBSERVACIN
Se observa al microscopio empezando con el objetivo de menor aumento. No es necesario
utilizar el objetivo de inmersin. Se deben distinguir y dibujar, tal y como se ven, todas las fases
de la mitosis.

IV. RESULTADOS

TIPO DE MUESTRA:_____________________ OBJETIVO: ________________

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TIPO DE MUESTRA:_____________________ OBJETIVO: ________________

V. CONCLUSION

VI. CUESTIONARIO
1. Cul es el rol que juega la mitosis en la gentica?, De qu factores depende la duracin de
la mitosis?
2. En qu nivel se realizan los anlisis genticos y por qu?
3. La cebolla Allium cepa es una especie vegetal con 2n=16 cromosomas Cuntas cromtidas
recibe cada polo en anafase? Cuntas cromtidas tiene uno de los cromosomas de cebolla
en telofase?
4. Existe alguna diferencia entre endomitosis y endorreduplicacin?

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