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La etapa S : Duplicacin del ADN

Una de las etapas del ciclo celular es la fase S, donde la clula duplica su material gentico.
Esta etapa es crucial para la reproduccin celular, ya que las clulas hijas deben recibir una
copia exacta del ADN de la clula de cual provienen. Una vez determinado el ADN como el
material hereditario y descifrada su estructura, los cientficos comenzaron a investigar
acerca de los mecanismos a travs de los cuales el
ADN se duplica.

Antes de comenzar a analizar los complejos

mecanismos que involucra de duplicacin del ADN
profundicemos acerca de nuestros conocimientos
sobre la estructura del ncleo celular.

Como se recordar, el ncleo de las clulas est

constituido por una envoltura nuclear, formada por
una doble membrana (bicapa fosfolipdica)
separadas por un espacio, el carioplasma, varias
molculas de ADN (dependiendo de cada especie),
un nucleolo o sector que contiene heterocromatina y
ARN, protenas y enzimas (ver Unidad 5, Envoltura
Nuclear).

La comunicacin entre el ncleo y el citoplasma se

establece a travs de los poros de la envoltura
nuclear. Estos son interrupciones de la doble bicapa, Microfotografa de un ncleo
rodeadas por prote- celular donde se observa la
nas especficas que envoltura nuclear, regiones de
forman el complejo heterocromatina y eucromatina.
del poro. Estas
protenas controlan y regulan el transporte de molculas
entre el ncleo y el citoplasma. Como es lgico, impiden
que el ADN salga del ncleo y evitan el ingreso de cualquier

Micrografa de las protenas

formando el complejo del
poro.

Esquema de la organizacin y ubicacin de las unidades

proteicas que forman el complejo del poro
 1

enzima que pueda daarlo. Sin embargo, cuando el ADN se duplica, necesita que ingresen
al ncleo los nucletidos necesarios para formar la nueva molcula, las enzimas que
catalizan el proceso y las protenas histonas en las cuales de enrolla el ADN. Durante la fase
G1 del ciclo celular los poros regulan el ingreso de ribonucletidos para la trascripcin, las
enzimas que catalizan este proceso y tambin controlan la salida de los ARNs y los
ribosomas. Recordemos que durante toda la interfase el ADN se encuentra en estado de
cromatina (eucromatina y heterocromatina). Esta forma laxa permite copiar su informacin.

Cmo se duplica el ADN?

Ya conocido el modelo estructural de la molcula de ADN, comenzaron a formularse

hiptesis acerca de su duplicacin, hecho fundamental que permite transmitir la informacin
que contiene una clula a las dos clulas hijas resultantes luego de la divisin celular.
Dentro de estas hiptesis que intentaban explicar la duplicacin, mencionaremos tres:
La conservativa, la dispersiva y la semiconservativa.

Segn la hiptesis
conservativa, luego
de la duplicacin se
formaban dos
molculas hijas, una
formada por ambas
hebras de la
molcula original y
otra formada por
ambas hebras Esquemas correspondientes a las tres hiptesis propuestas para
nuevas. explicar el mecanismo de replicacin.

El modelo dispersivo propona el intercambio de fragmentos de ADN entre la molcula

antigua (original) y la molcula nueva (la copia), de forma que a cada clula hija pasaran
molculas formadas por segmentos copia y segmentos originales de la doble hlice de la
clula madre.

La discusin en el mundo
cientfico continu hasta que
Watson y Crick propusieron la
hiptesis semiconservativa,
demostrada ms tarde por
Meselson y Stahl (1957). Segn
esta hiptesis, la molcula
original se abre durante el
proceso de duplicacin, y cada
una de las hebras que la forman
sirve de molde para la sntesis
de una nueva hebra
complementaria. Al finalizar el
proceso, las molculas hijas as
formadas contienen una hebra
de la molcula original (que
sirvi de molde) y una hebra
sintetizada nucletido a
nucletido, es decir, una hebra
completamente nueva.

Esquema de una molcula de ADN

replicndose.
 2

En la hiptesis semiconservativa, la molcula bicatenaria de ADN se abre en forma de

horquilla y se sintetizan dos hebras nuevas. Las hebras nuevas se forman por
complementariedad de bases con la hebra madre u original que estn copiando, lo
cual asegura la preservacin de la informacin gentica. Al final del proceso se
forman dos molculas nuevas, formadas cada una de ellas por una hebra original (de
la molcula vieja) y una hebra nueva. En otras palabras, las hebras existentes sirven
de molde complementario a las nuevas. El nombre de semiconservativa proviene
de que en la molcula recientemente formada se conserva una hebra de la molcula
original.

Hebra original

Hebra
nueva Esquema de la formacin de la
horquilla de replicacin y la accin de
algunas de las enzimas intervinientes.

La experiencia de Meselson y Stahl

El experimento propuesto por estos cientficos

demostr de manera concluyente que la replicacin
del ADN segua el modelo semiconservativo. En su
experiencia, cultivaron varias generaciones de la
bacteria Escherichia coli en un medio que contena
cloruro amnico como nica fuente de nitrgeno y
cuyo nitrgeno era el istopo pesado N15
(recordemos que para la duplicacin del ADN las
clulas necesitan sintetizar nucletidos y, por
supuesto, bases nitrogenadas). Dado que el istopo
ms frecuente en la naturaleza es el N14, todas las
molculas originales de ADN de estas bacterias
contendran N14, mientras que las que fueran
sintetizadas en este nuevo medio contendran N15.
El peso de las molculas de ADN segn contengan
N14 o N15 puede observarse luego de una
centrifugacin. As, las molculas formadas por N14
son ms livianas que las formadas por N15.

Experiencia de Meselson y Stahl

 3

En el experimento, las clulas que se colocaron en el medio de cultivo con N15 se dejaron
replicar por varias generaciones, para asegurar que todo su material gentico tuviera el
istopo pesado. Luego, se tom una muestra de este cultivo y se coloc en un medio con
N14, dejando que las clulas se dividan (y por lo tanto repliquen su ADN) por varias
generaciones, tomando muestras a distintos intervalos.
Cada muestra era centrifugada. En los resultados se observ que, despus de la primera
generacin de bacterias en el medio con N14, la banda que marcaba el centrifugado de la
muestra corresponda a una molcula semipesada, es decir, que contena N14 y N15.
Este resultado demostraba que la molcula de ADN duplicado contena una hebra original
(con N15) y otra nueva (con N14). En la segunda generacin, siempre utilizando el mismo
medio de cultivo con N14, se obtuvieron, luego de la centrifugacin, molculas livianas y
molculas semipesadas. Las molculas livianas, formadas ntegramente por N14 y las
semipesadas, constituidas por una hebra con N14 y otra con N15.

Muestra de la centrifugacin Muestra de la centrifugacin Muestra de la centrifugacin de la

de la primera generacin.
El ADN presenta
en sus dos hebras
el istopo pesado
de N15. La banda negra
representa el sitio
donde se deposita el
ADN pesado, en el representa la molcula de
sector inferior del tubo
de ensayo.
de la segunda generacin.
Las molculas de ADN
estn formadas
por una hebra
pesada con N15
y otra liviana con N14.
La banda negra, que
diferencian su peso, y,
ADN se deposita ms
Arriba que en el 1 tubo.
tercer generacin. Se observan
Molculas semipesadas y livianas,
estas ltimas
formadas ntegramente
por N14. Aqu, las dos
bandas negras se deposi-
tan en posiciones que
en consecuencia, su
contenido de N14 o N15.

El Proceso de Replicacin
El proceso de replicacin es similar tanto en los organismos procariontes como en los
eucariontes. Es un proceso complejo en el que intervienen ms de 50 protenas distintas
agrupadas en complejos multienzimticos. La replicacin del ADN ocurre una sola vez en
cada generacin celular. La velocidad con que ocurre este proceso es variable; en la
especie Homo sapiens , por ejemplo, se produce a una velocidad de 50 nucletidos por
segundo, mientras que en procariontes la velocidad es de 500 nucletidos por segundo.

Una vez que los mecanismos de regulacin celulares disparan el inicio de la etapa S,
comienzan a actuar sobre la molcula de ADN numerosas enzimas:

Helicasa: rompe los enlaces puente de hidrgeno

entre ambas cadenas complementarias del ADN,
separando sectores de la molcula bicatenaria.
Topoisomerasas: alivian la tensin de la molcula
de ADN evitando su hiper-enrrollamiento.
Para que la ADN-polimerasa
realice su actividad cataltica
es necesario que existan en el
medio iones de Mg2+ y los
cuatro desoxirribonucletidos
trifosfatados (dATP, dGTP,
dCTP y dTTP) que constituyen
la molcula de ADN.
 4

ADN polimerasa: polimeriza los nucletidos utilizando la molcula original de ADN

como molde. Hay tres tipos diferentes de ADN polimerasas llamadas I, II y III. Entre
stas, la ADN polimerasa III es la responsable de la sntesis de ADN.

ARN polimerasa o primasa: sintetiza pequeos fragmentos de ARN que se utilizan

como cebadores.
Ligasa: Cataliza la formacin de enlaces fosfodister entre nucletidos de distintos
fragmentos (de Okasaki, ver ms adelante).

La ADN-polimerasa es tambin
La replicacin comienza en sitios especficos llamados autocorrectora ya que despus
sitios de origen de la replicacin. A partir de este sector de unir cada nucletido
(que est determinado por una combinacin especfica de comprueba si se han producido
nucletidos) actan las enzimas helicasas separando errores antes de incorporar el
ambas hebras de la molcula. De este modo se forma un nucletido siguiente. Si detecta
rea conocida como "burbuja de replicacin". En este un error, elimina el ltimo
punto actan protenas desestabilizadoras de la hlice nucletido colocado y lo
o protenas de unin de una sola cadena, que se acoplan sustituye por el correcto.
a las hebras de ADN para mantenerla recta y abierta.

Esquema del origen de la replicacin

en una molcula de ADN

Una vez que la ADN-polimerasa localiza el

nucletido complementario, cataliza su
A partir de esta accin, la ADN polimerasa es
hidrlisis separando un grupo pirofosfato
capaz de reconocer las bases libres y colocar
(P-P) y uniendo el resto
el nucletido con su correspondiente base
(desoxirribonucletido-monofosfato) a la
complementaria (recordemos que Adenina se
cadena de ADN que se est formando
combina con Timina y Citocina con Guanina).
mediante un enlace fosfodister. La energa
De esta forma se sintetiza una nueva hebra
necesaria para esta unin se obtiene de la
utilizando como molde cada una de las
hidrlisis del grupo pirofosfato. sta es la
cadenas originales. La enzima ADN polimerasa
funcin polimerizadora de la ADN-
efecta los enlaces fosfodister entre los
polimerasa.
nucletidos de la cadena nueva.

Es importante notar que en la molcula de ADN ambas hebras son antiparalelas (una se
ubica en sentido 53 y la otra en sentido 35 ) y que las hebras nuevas, sintetizadas
nucletido a nucletido, se ubican tambin en forma antiparalela a la hebra que estn
utilizando de molde.
 5

En organismos procariotas, el inicio Considerando un solo origen de la replicacin y la

de la replicacin se produce en un
extremo de la molcula de ADN, por
lo que se forma una horquilla de
replicacin que avanza desde un
extremo al otro de la molcula. En
eucariotas, se abren varias burbujas
de replicacin, lo que genera varios
sitios de origen de la replicacin por
cada molcula. El ADN se replica en
toda su longitud por confluencia de
estas "burbujas".
velocidad de este proceso, un cromosoma humano
tardara unas 800 horas en replicarse, pero esto no
ocurre. Se ha comprobado que el ADN de clulas
eucariontes posee varios sitios de origen de la
replicacin y a cada una de estas regiones se las
denomina replicn. Los replicones tienden a formar
grupos denominados unidades de replicacin (20-
80 replicones). A lo largo de la fase S del ciclo
celular, a medida que unas unidades de replicacin
van finalizando la replicacin, se activan otras
nuevas, siempre por grupos, hasta que todo el DNA
se haya replicado.

Esquema de una
horquilla de
replicacin.

En este sector ambas hebras de ADN se separan y se inicia la sntesis de una nueva hebra
complementaria. Es importante notar que una de las hebras crece en la direccin de
apertura de la horquilla (cadena adelantada), mientras que la otra lo hace en direccin
opuesta (cadena atrasada).
La enzima ADN polimerasa posee algunas
restricciones para poder cumplir con su actividad Como se muestra en el esquema, la
cataltica. Una de ellas es que slo es capaz de sntesis de ADN avanza de manera
realizar la sntesis de ADN en el sentido 53, continua sobre la hebra molde que tiene
motivo por el cual opera en direcciones opuestas libre el extremo 3. La hebra molde
en cada hebra. complementaria, que posee libre su
extremo 5, inicia su sntesis en sentido
opuesto a la apertura de la horquilla de
replicacin. Esta ltima, llamada hebra
rezagada, se sintetiza por fragmentos.
Cada vez que la horquilla de replicacin
separa un tramo de la molcula de
ADN, se inicia una nueva cadena ,
siempre utilizando la direccin de
sntesis 53. De este modo, se produce
una hebra lder o continua que avanza
en el sentido que avanza la horquilla de
replicacin y una hebra discontinua o
rezagada, formada por fragmentos y
tambin sintetizada en sentido 53.
Estos fragmentos se denominan
Fragmentos de Okasaki en honor al
Direccin de las cadenas lder y rezagada cientfico que las descubri.
 6

Otra restriccin de la enzima

ADNpolimerasa es que no puede
iniciar la sntesis de las nuevas hebras
si no cuenta con un extremo 3 libre.
Por esta razn es necesario que,
antes del inicio de cada hebra nueva,
acte otra enzima, la ARN polimerasa
o primasa, que sintetiza un corto
fragmento de ARN que acta como
cebador.
De este modo, antes del inicio de
cada hebra rezagada se sintetiza un
pequeo fragmento de ARN cebador o
primer. Luego, la ADN polimerasa
contina la sntesis de ADN.
El ARN cebador o primer, corta molcula de ARN (10
pares de bases) hace que empiece a actuar la ADN
polimerasa. El ARN cebador es generado por la
enzima ARN primasa. Esta enzima se une
directamente a la ADN helicasa, formando un
complejo llamado primosoma, que se va desplazando
con la cadena en formacin. A medida que se
producen fragmentos de cadena abiertos de suficiente
longitud, se va sintetizando la cadena discontinua
formando pequeos fragmentos, Fragmentos de
Okazaki, cada uno de unos 1000 nucletidos. Se
utiliza un ARN cebador por cada fragmento de
Okazaki. La ARN primasa, sintetiza los ARN
cebadores que son incorporados a la copia en el
inicio de cada fragmento de Okazaki.

Caractersticas de la duplicacin
La sntesis de ADN presenta las siguientes caractersticas:

Semiconservativa: las molculas nuevas conservan una de las hebras de la

molcula original.
Bidireccional: a partir de un punto de origen, la molcula se duplicar en ambas
direcciones.

Discontnua: la sntesis se produce a travs de fragmentos en la hebra rezagada.

En sntesis, la replicacin del ADN consta de los siguientes pasos:

Desenrrollamiento y apertura de la doble hlice de ADN. La separacin de las
cadenas comienza en puntos concretos llamados puntos de iniciacin. A partir de
ellos se van separando las dos hebras de ADN formando la burbuja de replicacin.
Los dos extremos de la burbuja por donde continua la separacin reciben el nombre
de horquillas de replicacin.
La sntesis de las cadenas complementarias comienza con la sntesis del ARN
cebador que es una corta cadena de ARN con una secuencia complementaria de una
de las porciones de las hebras del ADN. En la hebra que tiene el sentido 3'--5' la
ADN-polimerasa va colocando nucletido tras nucletido a continuacin del ARN
cebador. Esta hebra complementaria que va creciendo en sentido 5'--3' es la hebra
adelantada o lder. En la hebra opuesta del ADN original, a continuacin del ARN
cebador, se coloca un fragmento de Okasaki y, despus de ste, un nuevo ARN
cebador seguido de otro fragmento de Okasaki.
Luego, acta una ribonucleasa que elimina el ARN cebador que est entre dos
fragmentos de Okasaki. El sector que ocupaba el ARN cebador es rellenado por la
ADN-polimerasa, que ubica desoxiribonucletidos complementarios.
 7

Sntesis de la hebra lder

Sntesis de la hebra rezagada

Direccin de crecimiento
de la burbuja

Cadenas hijas

Fragmentos de Okasaki

Sntesis de nuevas hebras de ADN y crecimiento de la burbuja de replicacin

Cmo sintetiza la ADN polimerasa ambas hebras de forma

conjunta?
El ADN sintetizado en la cadena retrasada y su cadena molde sufren un plegamiento, esto
posibilita que la ADN polimerasa pueda formar un complejo nico y as sintetizar ambas
hebras de ADN (la adelantada y la rezagada). Las topoisomerasas mantienen esta
estructura y evitan que el ADN se sper enrolle, cortando un enlace fosfodister (a este
corte se lo denomina nick). Adems, existe una protena llamada SSB, que estabiliza la
forma monocatenaria de la hebra que se est replicando, para que no se pliegue y acople
 8

por complementariedad de bases con ella misma. Luego actan las enzimas ligasas, que
reparan los nicks en el momento en el que se sustituye el ARN cebador y se unen los
fragmentos de Okasaki.

Esquema de la duplicacin del ADN que muestra a accin de cada enzima.

Como se expresara anteriormente, existen tres tipos de ADN-polimerasa. Entre ellas, la

ADN polimerasa I es la encargada de reparar la hebra, degradando el cebador, por lo que
acta como una enzima exonucleasa. Esta enzima es capaz de agregar o sustituir bases.
La ADN polimerasa III es la que realiza la sntesis propiamente dicha con la accin conjunta
de la enzima ADN polimerasa II.

En el siguiente esquema se puede observar la secuencia de pasos de la duplicacin del

ADN. Observe la sntesis continua en la hebra lder, catalizada por la ADN polimerasa III. En
la hebra rezagada se indican con nmeros las diferentes etapas de la sntesis.
 9

Duplicacin del ADN. Las helicasas y topoisomerasas se asocian en un extremo de la horquilla de

replicacin, separando las hebras complementarias. Las protenas SSB impiden que ambas hebras se
replieguen sobre s mismas.
1. La primasa sintetiza el cebador.
2. La ADN polimerasa III sintetiza la hebra complementaria al molde, originando la cadena lder y
los fragmentos de Okasaki (en la hebra rezagada).
3. La ADN polimerasa I elimina el cebador (actividad de exonucleasa) y completa el sector con
nucletidos de ADN en la cadena rezagada.
4. La ligasa une finalmente los fragmentos de Okasaki.

En qu momento se organizan los nucleosomas?

Recordemos que el ADN eucarionte est asociado a protenas histnicas formando los
nucleosomas. Existe evidencia experimental para inferir que las histonas se acoplan a las
nuevas molculas de ADN a medida que se va replicando. Estas protenas son las nicas
que son sintetizadas en la etapa S del ciclo celular y se asocian rpidamente a la hlice en
crecimiento.
 10

En el esquema se observa cmo el

octmero de histonas se asocia a la
molcula bicatenaria que se est
sintetizando, formando los
nucleosomas. Se propone que las
histonas pertenecientes a la molcula
original pasan a formar parte de la
molcula sobre la que se forma la
hebra lder o continua. Sobre la otra
hebra del ADN, donde se sintetiza la
hebra rezagada o discontinua, se
asocian histonas nuevas.

La replicacin llevada a cabo por la

ADN-polimerasa es un proceso muy
exacto, sobre todo por su actividad
autocorrectora. Sin embargo, an as
se produce un error de apareamiento
por cada 107 pares de bases. En una
bacteria esto podra resultar suficiente
debido a que su cromosoma slo
posee 3103 pares de bases. Sin
embargo en el ADN humano existen
3109 pares de bases y durante el
desarrollo embrionario, a partir del
zigoto, el ADN humano se duplica
1015 veces, por lo que la informacin
gentica pronto se perdera.

Esquema de la horquilla de replicacin de una

molcula de ADN perteneciente a un organismo
eucarionte.

Para aumentar ms todava la perfeccin de la replicacin del ADN existe un complejo

enzimtico que detecta el nucletido cuya base no est correctamente apareada, lo elimina
y regenera la secuencia correcta. De este modo se logra bajar esta tasa de errores en uno
por cada 1010 pares de bases. Este proceso se conoce con el nombre de correccin
postreplicativa.

Cundo comienza la etapa S?

El control de la fase S y el inicio de la replicacin

Los mecanismos de replicacin del material gentico y su
regulacin presentan factores que determinan su inicio y Estas secuencias fueron
control. identificadas en S. cerevisiae y
El Modelo del Replicn, inicialmente propuesto para la se conocen como Secuencias de
bacteria Escherichia coli, propone la existencia de Replicacin Autnoma (SRA),
secuencias de ADN que determinan el inicio de la las cuales coinciden con los
replicacin. orgenes de replicacin.
 11

Los cromosomas de eucariontes son demasiado largos para ser replicados a partir de un
solo sitio de origen (como ocurre en procariontes) por lo que contienen varios puntos de
origen de la replicacin.

Las protenas que indican el sitio de origen de la

Los trabajos de Bell y Stillman
replicacin (CRO) permanecen unidas a los orgenes
de 1993 describieron un
de replicacin durante todo el ciclo celular, pero el
complejo de 6 protenas que
resto de las protenas iniciadoras forman o no parte
reconocen los orgenes de
del complejo, dependiendo de la etapa del ciclo
replicacin, denominado
celular.
Complejo de Reconocimiento del
Origen (CRO). Estas protenas
De este modo, se determina un estado post- son esenciales para la viabilidad
replicativo durante las fases S, G2 y M (slo celular y necesarias para iniciar
permanecen unidas a los orgenes las protenas la replicacin del ADN.
CRO nicamente) y un estado pre-replicativo, Posteriormente, se han
durante G1 (cuando el resto de las protenas descubierto otras protenas
iniciadoras forman parte del complejo). El inicio de la iniciadoras.
replicacin del material gentico marca la transicin
entre el estado de complejo pre-replicativo (pre-RC) a complejo post-replicativo (post-RC).

Complejo post-replicativo (CRO)

Complejo pre-replicativo

Esquema de los complejos post-replicativos (arriba) y pre-replicativo (abajo).

 12

Relacin entre el inicio de la fase S y el ciclo celular

Los procesos de fosforilacin de las diferentes protenas que se unen al ADN para regular su
duplicacin, y la actividad de diferentes ciclinas, controlan la expresin de los genes
necesarios para la replicacin. Por otro lado, la conversin de complejos post-replicativos a
pre-replicativos ocurre en la transicin entre la divisin celular y la etapa G1.

Durante la etapa G1, todo el complejo de protenas reguladoras se encuentra unido al

ADN impidiendo su replicacin. Cuando estas protenas se separan y solo permanece
el CRO unido al ADN, comienza la etapa S. Cuando el complejo proteico vuelve a
unirse al CRO, se reinicia la etapa G1.

Enrollamiento del ADN eucarionte

En las clulas eucariontes, el ADN se encuentra

asociado a molculas proteicas, las histonas, formando
los nucleosomas (ver Unidad 8, Ciclo Celular, Interfase).

Durante la interfase, el ADN unido a las histonas se

presenta como largos y delgados filamentos, de aspecto
difuso y granulado, formando la cromatina.
Una vez concluida la fase S, el ADN duplicado (y unido a
las histonas) se condensa gradualmente y comienza a
formar estructuras ms compactas, de menor longitud,
que pueden observarse al microscopio ptico: los
cromosomas.
ADN asociado a histonas
 13

Existen sucesivos niveles de enrollamiento del ADN que culminan con la formacin de los
cromosomas observables durante la etapa de divisin celular (mitosis o meiosis).

Solenoide
(30 nm de dimetro)

La molcula de ADN se
enrolla alrededor de las
histonas y forma los
nucleosomas.
Despus de la etapa S, el
enrollamiento contina,
formando estructuras cada
vez ms compactas y de
mayor dimetro.
Finalmente, la molcula
super-enrollada forma una
cromtida.
Cromosoma Como el ADN se ha
duplicado en la etapa S, la
cromtida, con su duplicado,
forma el cromosoma,
observable durante la
divisin celular.
 14

Durante las etapas G1 y S, el ADN permanece enrollado a nivel de nucleosomas, y es el

estado en el cual son posibles los procesos de Trascripcin y de Replicacin.

El enrollamiento permite que grandes cantidades de ADN puedan caber en el pequeo

espacio que posee el ncleo.

El empaqueta-miento del ADN tiende a impedir la expresin de la informacin gentica pues,

ya a nivel de los nucleosomas, las histonas deben aflojar el paquete para que pueda
producirse la trascripcin.

Las clulas pueden hacer uso de niveles ms altos de empaquetamiento para la inactivacin
de lo genes a largo plazo. La cromatina altamente compactada, no solamente se encuentra
en los cromosomas durante la divisin celular, sino tambin en diversas regiones del
material gentico en interfase y, por lo tanto, no se expresa.

Un caso interesante lo constituyen las hembras

Los distintos niveles de empaquetamiento
del ADN reciben nombres diferentes. El
primer nivel, como ya se ha indicado, lo
constituyen los nucleosomas, las unidades
de enrolamiento de la cromatina. Estn
formados por un centro o core de histonas
H2A, H2B, H3 y H4, y poseen dos copias
de cada una. Alrededor de ese centro se
enrollan dos vueltas de ADN. Una quinta
histona, la H1, sella la unidad y permite la
conexin entre nucleosomas formando una
estructura conocida como fibra de 11 nm.
de los mamferos, donde en cada clula
somtica el cromosoma X (cromosoma sexual)
est altamente compactado y se encuentra casi
en su totalidad inactivo, incluso durante la
interfase. Esta desactivacin del cromosoma X
se inicia en etapas tempranas del desarrollo
embrionario, cuando en cada clula uno de los
dos cromosomas X, de manera aleatoria, se
desactiva.

Las histonas H1 contribuyen a mantener

juntos a los nucleosomas, formados por dos
copias de histonas H2A, H2B, H3 y H4
(octmero) y dos vueltas de ADN cada uno.
 15

El siguiente nivel de empaquetamiento lo constituyen los solenoides o fibras de 30 nm que

se distribuyen alrededor de un eje imaginario.

El nivel que
sigue es el de 1
los bucles o
lazos, que
consiste en una
serie de asas
de unos 300 nm
de dimetro. 2
Finalmente,
stos se super-
enrollan y
forman los
cromosomas,
que consisten
en dos 3
molculas de
ADN (idnticas,
ya que ocurri
la replicacin en
la etapa S),
unidas por una
estructura
llamada
centrmero o 4
constriccin
primaria. En
algunos
cromosomas
pueden
observarse
otras
constricciones
que unen una
pequea
porcin del
5
cromosoma
llamada
satlite,
relacionada con
las regiones
donde se forma 6
el nucleolo
(organizadores
nucleolares). Niveles de enrollamiento de la cromatina.
Un fragmento de ADN (1) se enrolla alrededor de histonas y forma
nucleosomas (2). Luego, stos se organizan en solenoides (3), que se
compactan en lazos o bucles (4) y, finalmente, forman un cromosoma.
 16

No todas las molculas de ADN tienen el mismo nmero de nucletidos, y por lo tanto, no
todos los cromosomas alcanzarn el mismo tamao. Adems, la posicin del centrmero
puede variar en los distintos cromosomas. De acuerdo con estas variables, se utiliza una
clasificacin de cromosomas. As, los cromosomas pueden agruparse en:

- metacntricos: el centrosoma se encuentra en la mitad del cromosoma,

determinando brazos de igual longitud. El brazo es la porcin de cada cromtide
que se extiende desde el centrmero hasta la regin terminal del cromosoma,
llamada telmmero.
- submetacntricos: un par de brazos es ligeramente ms corto que el otro
- acrocntricos: un par de brazos es mucho ms corto que el otro
- telecntricos: el centrmero se encuentra totalmente desplazado hacia un extremo,
observndose un solo par de brazos.

Tipos de Cromosomas
Segn la posicin del
centrmero, los cromosomas
se clasifican en distintos
grupos.
Obsrvese que la
constriccin primaria es el
centrmero, pero puede
haber constricciones
secundarias, que determinan
porciones cromosmicas
llamadas satlites,
relacionadas con la
organizacin del nucleolo.
 17

En la naturaleza, cada especie posee, en sus clulas somticas, un nmero caracterstico

de cromosomas de diferentes tipos. La representacin grfica de ese nmero se llama
cariotipo. El anlisis del cariotipo constituye una de las tcnicas utilizadas en la
investigacin cientfica y en el diagnstico de enfermedades genticas humanas.

Para realizar el cariotipo, se procede a teir clulas y, como

resultado de esa tincin, pueden observarse bandas en los
cromosomas, que corresponden a regiones ricas en pares
Adenina-Timina. Dichas regiones de color oscuro se
denominan bandas G y son caractersticas de cada
especie.
En 1968 se obtuvo el primer xito en el
intento de visualizar diferencias de
tincin en los cromosomas. Esta tcnica,
denominada bandeo, fue desarrollada
por Casperson en la dcada de 1970, y
demostr que los cromosomas se tien a
lo largo de manera irregular. Existen
distintos tipos de bandeo segn el
colorante y el procedimiento empleado .
Mediante esta tcnica se pueden
Bandas en un cromosoma distinguir la eucromatina y la
heterocromatina, y otras caractersticas
estructurales.

Cariotipo
Cariotipo de un individuo humano de sexo masculino (contiene un cromosoma Y). Consta de
23 pares de cromosomas. Los pares 1 a 3 son metacntricos; el 4 y 5 submetacntricos; el 6 a
12 y el X, submetacntricos; el 13 a 15, acrocntricos; el 16 a 18 submetacntricos a
acrocntricos; el 19 y 20 submetacntricos y el 21, 22 y el Y, acrocntricos.
 18

Los cromosomas de un cariotipo humano se obtienen a partir de clulas de la mdula sea,

fibroblastos o glbulos blancos, que, con la droga colchicina, son bloqueadas durante la
divisin celular, el perodo de la metafase. Luego se analizan las clulas en el microscopio
ptico y se las fotografa, recorta y ordenan los cromosomas de a pares segn su tamao.
Tambin se pueden obtener cromosomas del lquido amnitico del tero para realizar un
diagnstico prenatal.

Los cromosomas humanos se clasifican en seis grupos segn el alfabeto, de A a G, de

acuerdo con su tamao y la ubicacin del centrmero.

GRUPO CROMOSOMAS N TAMAO

A 1a3 GRANDE
B 4-5 GRANDE
C 6 a 12 y X MEDIANO
D 13 a 15 MEDIANO
MEDIANO -
E 16 a 18
PEQUEO
F 19 20 PEQUEO
G 21 22 - Y PEQUEO

EI cariotipo tambin permite reconocer anormalidades en el nmero de cromosomas, como

excesos o defectos. Un ejemplo de exceso en el nmero de cromosomas se manifiesta en el
Sndrome de Down, donde los individuos que presentan un cromosoma de ms en el par 21,
sufren retraso mental, entre otras anomalas.
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El Proyecto Genoma: la investigacin del ADN humano

El proyecto GENOMA HUMANO tiene como objetivo ltimo la determinacin de la secuencia

de todos los nucletidos que componen el genoma de la especie humana. Este proyecto,
iniciado en el ao 1990, se dividi en tres subproyectos especficos. El primero de dichos
subproyectos fue el mapa gentico humano, consistente en la obtencin de marcadores o
variables en la poblacin, regularmente espaciados a lo largo de los distintos cromosomas.
El segundo fue la obtencin del mapa fsico humano o coleccin ordenada de clones de
ADN (copias de fragmentos genmicos) que abarcaran todos y cada uno de los
cromosomas. El tercero y ltimo subproyecto consista en la secuenciacin del genoma
humano y caracterizacin estructural de todos los genes que lo componen. Los mapas
gentico y fsico han sido realizados de acuerdo a los objetivos inicialmente propuestos. No
obstante, el mapa fsico completo, si bien ha proporcionado una coleccin de secuencias
nicas que constituyen excelentes marcas genmicas, consta de clones no aptos para su
secuenciacin directa debido a su gran tamao y a la presencia de deleciones en los
mismos. Por ello, la secuenciacin del genoma humano se inici a partir de clones ms
pequeos (llamados csmidos) de localizacin conocida, pero ha sido slo tras el desarrollo
de unos nuevos vectores, denominados cromosomas artificiales de bacteria (BACs), y se
prev la finalizacin de este objetivo ltimo para el ao 2005. Asimismo, se ha llevado a
cabo un proyecto encaminado a determinar la totalidad de las secuencias de ADN
expresadas (ESTs), lo que ha permitido marcar los genes humanos y estimar su nmero. La
informacin proporcionada por el proyecto GENOMA HUMANO permitir abordar el estudio
de las distintas funciones del ADN, y, en particular de todos sus genes.

Estos proyectos no slo son importantes en el estudio biolgico de dichos organismos, sino
que adems permitirn acelerar el anlisis de la funcin de genes humanos. Asimismo, cabe
destacar los proyectos de secuenciacin de determinados virus por su contribucin al
desarrollo de terapias y al conocimiento del sistema inmune. La aplicacin por excelencia
del proyecto GENOMA HUMANO se encuentra dentro del campo de la Medicina.
Consideremos, por ejemplo, una familia en la que algunos de sus miembros padecen o
presentan predisposicin a cierta enfermedad. La existencia del mapa gentico humano
proporciona la herramienta necesaria para asociar el fenotipo de la enfermedad con un
marcador polimrfico y determinar la regin genmica donde se encuentra el gen
responsable de la alteracin gentica observada. El conocimiento de los genes existentes
en esa regin, obtenido tras la secuenciacin del genoma, permitir disponer de genes
candidatos, entre los cuales se podr distinguir fcilmente el causante de la enfermedad;
una vez determinado dicho gen, se podr llevar a cabo el diagnstico inequvoco de la
enfermedad asociada, as como analizar la funcin del gen para futuros ensayos de terapia
farmacolgica y gnica.

Independientemente de su contribucin a los campos biolgico y clnico, este proyecto ha

impulsado el desarrollo de una serie de tecnologas y programas informticos que permiten
la generacin y anlisis de un gran nmero de datos con la precisin y eficacia requeridas.
En este sentido, cabe destacar la creacin de secuenciadores automticos, estaciones
robticas, ordenadores y, recientemente, equipos que cuantifican la expresin gnica. Esto
ha desembocado en la puesta a punto de Servicios de Secuenciacin de ADN y Anlisis
Genticos, que realizan de forma rutinaria una serie de tcnicas de gentica y biologa
molecular, facilitando as la labor de la comunidad cientfica y mdica.