CITOMETRA DE FLUJO

La citometra de flujo representa un mtodo rpido objetivo y cuantitativo de anlisis de

clulas, ncleos, cromosomas, mitocondrias u otras partculas en suspensin.
El principio en el que se basa esta tecnologa es simple: hacer pasar clulas u otras
partculas en suspensin alineadas y de una en una por delante de un haz luminoso. La
informacin producida puede agruparse en dos tipos fundamentales: la generada por la
dispersin de la luz y la relacionada con la emisin de luz por los fluorocromos presentes en
la clula o partcula al ser excitados por el rayo luminoso. Las seales luminosas detectadas
se transforman en impulsos elctricos que se amplifican y se convierten en seales digitales
que son procesadas por una computadora.

Es una tcnica que permite obtener informacin sobre poblaciones celulares a partir de un
estudio individualizado de un gran nmero de clulas (habitualmente entre 5000 y 10000)
que por tanto sern una muestra lo suficientemente representativa del conjunto poblacional.
La suspensin de clulas en solucin isotnica se hace pasar a travs de un pequeo
orificio de modo que cuando salen lo hacen una a una (en fila india) formando parte de una
corriente continua o flujo cilndrico.
Sobre esta corriente de clulas se hace incidir un haz de luz lser, cuya dispersin y
reflexin son analizados en duracin, intensidad y espectro, los datos obtenidos
almacenados en memoria de ordenador y desde all pasados a archivos binarios que
posteriormente pueden ser analizados con detenimiento.

Anlisis multiparamtrico
Anlisis de gran nmero de clulas
Mltiples procesos funcionales analizables
Integracin de respuestas y mecanismos
Resolucin de heterogeneidad celular
Seleccin fenotpica de subpoblaciones

Protenas extracelulares Secuencias de ADN o ARN libres Complejos inmunes

circulantes Viriones individuales Liposomas Cromosomas aislados Orgnulos aislados
Ncleos aislados Bacterias Hongos unicelulares Clulas humanas y animales
Protoplastos vegetales Hibridomas y fusiones celulares Esferoides Organismos
pluricelulares
Esta tcnica posee una sensibilidad superior a 1 10-4, es decir, es capaz de detectar una
clula tumoral entre 10 000 clulas normales. Entre sus desventajas se puede mencionar: la
incapacidad para diferenciar las clulas normales de los blastos leucmicos en muestras
que contienen un nmero reducido de clulas y que el anlisis requiere necesariamente el
uso de una suspensin celular

TRATAMIENTO A LA MUESTRA

Para la obtencin fsica de las poblaciones celulares, es necesario que las clulas vayan en
gotas aisladas y con un marcaje que permita distinguir y separar una poblacin de otra.
Cuando una clula atraviesa el rayo lser, se ilumina por varios microsegundos y durante
ese tiempo emite un pulso fluorescente. Si este pulso cae en los lmites de amplitud
predeterminados, se genera elctricamente un pulso cargado.

BARRERA RAMREZ, LOURDES MARA, DRAGO SERRANO, MA. ELISA, PREZ RAMOS, JULIA,
SAINZ ESPUES, TERESITA DEL ROSARIO, ZAMORA, ANA CECILIA, GMEZ ARROYO, FABIOLA,
& MENDOZA PREZ, FELIPE. (2004). CITOMETRA DE FLUJO: VNCULO ENTRE LA
INVESTIGACIN BSICA Y LA APLICACIN CLNICA. Revista del Instituto Nacional de Enfermedades
Respiratorias, 17(1), 42-55. Recuperado en 06 de febrero de 2017, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-75852004000100007&lng=es&tlng=es.