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RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE

Ministre du Commerce

Direction Gnrale du Contrle Economique et de la Rpression des Fraudes

Direction des Laboratoires dEssais et dAnalyses de la Qualit

Sous-Direction des Procdures et Des Mthodes Officielles D'analyses

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES


Physico-Chimiques et Microbiologiques

Janvier 2016
RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE


CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais


et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES


MICROBIOLOGIQUES ET PHYSICHO-CHIMIQUES
RELATIVES AUX LAITS ETPRODUITS DRIVS
Sommaire

Mthodes microbiologiques
1. Arrt du 27 m ars 2004 rendant obl igatoire une m thode de dnombrement des germes
01
totaux 30 C pour les poudres de lait et de lactosrum. (JO n 32 - 2004)
2. Arrt du 27 m ars 2004 r endant obl igatoire un e m thode de c ontrle m icrobiologique
04
pour le lait strilis. (JO n 32 - 2004)
3. Arrt du 27 m ars 2004 r endant obl igatoire un e mthode de d nombrement de s
05
organismes microbiens pour le lait ferment. (JO n 32 - 2004)
4. Arrt du 24 mai 2004 rendant obligatoire une mthode de dnombrement des coliformes
07
dans les laits ferments. (JO n 43 - 2004)
5. Arrt du 24 m ai 2004 rendant obligatoire une mthode de recherche des staphylocoques
09
coagulase positive pour le lait en poudre. (JO n 43 - 2004)

6. Arrt du 24 m ai 2004 rendant obl igatoire un e mthode de d nombrement de s m icro-


organismes caractristiques par un e t echnique d e comtage des colonies 37 C dans l e 11
yaourt. (JO n 43 - 2004)
7. Arrt du 11 s eptembre 2004 r endant obl igatoire une m thode d e p rparation de s
chantillons pour e ssai e t di lutions e n vue de l examen m icrobiologique. 16
(JO n 70 - 2004)
8. Arrt du 11 s empembre 2004 r endant o bligatoire un e m thode de contrle
20
microbiologique pour le lait pasteuris. (JO n 70 - 2004)

9. Arrt du 11 s eptembre 2004 r endant obl igatoire une m thode de d nombrement de s


24
coliformes pour les crmes glaces et les glaces au lait. (JO n 70 - 2004)

10. Arrt du 23 j anvier 2005 r endant obligatoire une mthode de recherche des salmonella
28
dans le lait et les produits laitiers. (JO n 42 - 2005)

11. Arrt du 23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode danalyse microbiologique
39
du beurre. (JO n 42 - 2005)

12. Arrt du 23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode de prlvement dchantillons
43
et danalyse bactriologiques des glaces et crmes glaces. (JO n 42 - 2005)

13. Arrt du 25 s eptembre 2005 rendant obl igatoire une m thode d e r echerche de Listeria
49
monocytognes dans le lait et les produits laitiers. (JO n 03 - 2006)
Mthodes physico-chimiques
14. Arrt du 16 aot 2012 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la teneur en
58
matire sche dans le lait, la crme et le lait concentr non sucr. (JO n 54 - 2013)
15. Arrt du 8 dcembre 2013 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la
61
teneur en matire sche des fromages et des fromages fondus. (JO n 25 - 2014)
16. Arrt du 27 aot 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur en
64
azote protique dans le lait. (JO n 38 - 2014)
17. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur
67
en matire grasse dans le fromage. (JO n 67 - 2014)

18. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur


71
en matire grasse dans le lait. (JO n 74 - 2014)

19. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur


80
en azote dans le lait. (JO n 65 - 2014)

20. Arrt du 18 octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de dtermination pparation de


l'chantillon pour essai en vue de l'analyse physique et chimique du lait. 87
(JO n 58 - 2015)

21. Arrt du 18 octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de dtermination de l'acidit


89
titrable dans le lait sec. (JO n 58 - 2015)
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
Mthode de dnombrement des germe totaux 30 C
Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004
pour les poudres de lait et de lactosrum
rendant obligatoire la mthode de dnombrement
des germes totaux 30 C pour les poudres de
1/ Dfinition :
lait et de lactosrum.

On appelle germes totaux , les germes microbiens
Le ministre du commerce, dnombrs par la prsente mthode. Le rsultat du
dnombrement est exprim en nombre de germes totaux
Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel par gramme de poudre.
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ; 2/ Principe :
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la On procde une srie de dilution de lchantillon
rpression des fraudes ; reconstitu 47 2 C, que lon mlange avec le milieu
prescrit dans des botes de Ptri. Aprs incubation 30 C
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 pendant 72 heures, on compte des colonies.
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; 3/ Appareillage et verrerie :
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414 3.1 Appareils
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ; 3.1.1 Autoclave fonctionnant 120 C
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet 3.1.2 Four air chaud fonctionnant jusqu 170 C.
1994, modifi et complt par larrt interministriel du
25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998 3.1.3 Etuve bactriologique rgle une temprature
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines uniforme de 30 + 1 C
denres alimentaires ; 3.1.4 PH-mtre, avec compensation de temprature.
Arrte : 3.1.5 Loupe, grossissement 2,5.

Article 1er. En application des dispositions de 3.1.6 Appareil de comptage lumineux.


larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 3.1.7 Compteur - enregistreur.
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de 3.1.8 Bain-marie 47 + 2 C.
dnombrement des germes totaux 30 C dans les 3.1.9 Balance.
poudres de lait et de lactosrum.
3.2. Verrerie :
Art. 2. Pour le dnombrement des germes totaux
30 C dans les poudres de lait et de lactosrum, Toute la verrerie doit tre strilisable.
les laboratoires du contrle de la qualit et de la
3.2.1 Rcipient en verre pour la pese du lait en poudre.
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode danalyse microbiologique 3.2.2 Flacons de dilution dune contenance de 150 200
dcrite en annexe. ml, avec bouchons ou capsules vis appropris.

Cette mthode doit tre galement utilise par le 3.2.3 Grands flacons (1000 ml ou plus ) pour la
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. prparation du milieu de culture.
3.2.4 Tubes essai, de 151/15 mm environ, destins
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal contenir le milieu culture.
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. 3.2.5 Pipettes gradues ( 1 et 10 ml )
3.2.6 Bote de Ptri en verre transparent et incolore de
Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 90 mm environ de diamtre intrieur et de 15 20 mm de
2004. hauteur la profondeur intrieure doit tre de 12 mm
minimum. Le fond de cette bote doit tre plat et ne
prsenter ni irrgularits ni renflements. Les couvercles
Noureddine BOUKROUH. doivent sadapter la bote.

01
3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 13
23 mai 2004

On peut utiliser des botes de Ptri en matire 4.2.2.4 Ajuster le milieu un pH de 7,0 - 7,1 en utilisant
plastique et des pipettes pr-strilises destines NaOH (1N) ou HCI (1N).
ntre utilises quune seule fois.
4.2.3 Rpartir par quantits de 10 12 ml dans les tubes
3.2.7 Perles de verres ( voir 6.2.1.4 ). essais.
4.2.4 Striliser pendant 15 minutes dans lautoclave
3.3. Matriels divers :
120 C;
3.3.1 Entonnoirs de filtration pour la prparation des 4.2.5 Vrifier le pH du milieu 45 C (ce pH doit tre
milieux. de 6,9 0,1).
3.3.2 Papiers-filtres rapides sadaptant aux entonnoirs 4.2.6 Le milieu doit tre conserv dans lobscurit,
(3.3.1). une temprature ne dpassant pas 5 C Prendre soin
dviter lvaporation.
3.3.3 Coton non absorbant, non toxique aprs
strilisation. 5/ Diluant :
3.3.4 Ractifs pour ajuster le pH. Tous les produits doivent tre de qualit analytique.

3.3.4.1 NaOH environ 1 N. 5.1 Solution de Ringer non dilue.

3.3.4.2 HCI environ 1 N. Composition :


NaCI.................................................................9,00 g
4/ Milieu de culture :
KCI..................................................................0,42 g
4.1 Composition Ca CI 2 (anhydre)............................................0,24 g
Extrait de levure...................................................... 2,5 g NaHCO3..........................................................0,20 g
Tryptone.................................................................. 5,0 g Eau distille.....................................................1000 ml
Glucose.................................................................... 1,0 g (dans un appareil distiller en verre)
Lait crm en poudre............................................. 1,0 g
On peut utiliser un tampon au citrate ( raison de
Glose................................................................ 10 15 g 15 g de citrate tri-sodique anhydre par 1000 ml) pour
selon les proprits glifiantes de la glose utilise. les poudres faible solubilit.

Eau distille........................................................ 1000 ml On peut galement employer une solution de


(dans un appareil distiller en verre). peptone 0,1 % en lieu et place de la solution de
pH 6,9 0,1. Ringer dilue au quart.

Lextrait de levure, la tryptone, le glucose, le lait 5.2 Prparation :


crm en poudre et la glose doivent tre de qualit
bactriologique. 5.2.1 Prparer la solution non dilue de Ringer en
dissolvant les sels (5.1) dans leau et, avant usage, diluer
Le lait crm en poudre ne contiendra pas de une partie de cette solution avec trois parties deau
substances inhibitrices. distille dans un appareil distiller en verre pour obtenir
une solution de Ringer dilue au quart.
4.2 Prparation
5.2.2 Rpartir la solution dilue de faon obtenir aprs
4.2.1 Prparation partir de milieux en poudre. strilisation des quantits de 90 2 ml dans les flacons de
4.2.1.1 Suivre les instructions du fabriquant mais dilution.
ajouter du lait crm en poudre (cf. 4.1).
On peut prparer le diluant partir de tablettes
4.2.1.2 Si ncessaire, ajuster le pH 7,0 - 7,1 en prtes lemploi.
utilisant NaOH (1 N) ou HCL (1N).
5.2.3 Striliser pendant 15 minutes dans lautoclave
4.2.2 Prparation partir dingrdients spars. 120 C.

4.2.2.1 Dissoudre successivement lextrait de levure, la 6/ Mthode :


tryptone, le glucose et le lait crm en poudre dans leau,
en chauffant si ncessaire. 6.1 Prparation de la verrerie
4.2.2.2 Ajouter la glose et porter bullition jusqu ce 6.1.1 Toute la verrerie doit tre nettoye soigneusement
que la glose soit compltement fondue ou chauffer la avant emploi.
vapeur pendant environ 30 minutes.
6.1.2 Les tubes essais, les pipettes et les flacons
4.2.2.3 Filtrer sur papier filtre. doivent tre bouchs avec du coton avant leur strilisation.

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14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004

Pour la strilisation, on peut galement envelopper les Normalement il suffit de choisir deux dilutions parmi
pipettes dans du papier aluminium ou dans tout autre les dilutions au 1/10, au 1/100 ou au 1/1000, mais si lon
matriau appropri. prvoit une numration trs leve, il faudra procder
dautres dilutions.
6.1.3 La strilisation des pipettes et des boites de Ptri
seffectuera de prfrence dans un four air chaud
6.3.2 Utiliser une nouvelle pipette strile de 1 ml pour
pendant une heure et une temprature comprise entre
ensemencer 1 ml de chaque dilution dans les botes de
165 et 170 C, mais il est galement possible de striliser
Ptri.
ce matriel lautoclave pendant 120 C .
Dans ce dernier cas, ne pas fermer les rcipients dans 6.4. Rpartition de la glose dans les botes de Ptri
lesquels le matriel est strilis.
6.4.1 Faire bouillir le milieu et le refroidir aussi vite
que possible une temprature de 45 47 C.
Scher la verrerie ainsi strilise dans lautoclave ou
dans un four air chaud. 6.4.2 Verser dans chaque bote 10 12 ml du milieu
fondu, refroidir une temprature de 45 47 C
6.2. Prparation des dilutions 6.4.3 Immdiatement aprs avoir vers le milieu, le
mlanger par cinq mouvements de va-et-vient, suivis de
6.2.1 Prparation de dilution au 1/10 (reconstitution de cinq mouvements circulaires dans le sens des aiguilles
la poudre). dune montre suivis de cinq mouvements de va-et-vient
excuts perpendiculairement aux premiers et suivis enfin
6.2.1.1 Rchauffer un flacon contenant 90 ml de diluant de cinq mouvements circulaires dans le sens contraire des
47 2 C au bain-marie. aiguilles dune montre.
6.2.1.2 Peser 10 g de lait en poudre dans un rcipient en 6.4.4 Laisser reposer les botes jusqu la solidification
verre strilis en procdant de faon aseptique. du milieu, les retourner et les placer dans ltuve. Le
temps qui scoule entre la prparation des dilutions, et la
6.2.1.3 Introduire la poudre dans le flacon de dilution rpartition de la glose dans les botes ne doit pas dpasser
contenant le diluant 47 2 C. 15 minutes.
6.2.1.4 Pour dissoudre la poudre, la mouiller en faisant
Il importe que les oprations dcrites aux points 6.2,
tourner lentement puis en secouant doucement le flacon
6.3 et 6.4 soient excutes labri de la lumire.
pendant 10 secondes environ, 25 fois avec un mouvement
dune amplitude de 30 cm environ.
6.5 Incubation des botes de Ptri.
Des perles en verre peuvent contribuer une
Les botes sont mises incuber, leur fond tant tourn
meilleure reconstitution. Si lon y recourt, les ajouter
vers le haut 30 1 C pendant 72 2 heures ; il est
au flacon avant strilisation.
prfrable de ne pas les empiler plus de quatre
6.2.1.5 Remettre le flacon au bain-marie et le maintenir (maximum six).
pendant 5 minutes en agitant de temps autre le contenu.
Les piles de botes ne doivent pas se toucher, ni tre en
6.2.1.6 Agiter une fois et effectuer le dnombrement. contact avec les parois ou la partie suprieure de ltuve.

Le volume final du lait reconstitu est denviron 97,5 6.6 Numration des colonies
ml et non de 100 ml, mais cet cart est ngligeable. 6.6.1 Les colonies doivent tre comptes dans les
6.2.2. Prparation des dilutions au 1/100 et plus. 4 heures qui suivent la fin de la priode dincubation pour
faciliter la numration. Il est recommand dutiliser un
6.2.2.1 A laide dune pipette strile transfrer 10 ml de appareil de comptage lumineux muni dune loupe et dun
lait reconstitu dans 90 ml de diluant strile en veillant compteur-enregistreur.
ne pas enfoncer lextrmit de la pipette de plus dun 6.6.2 Ne tenir compte, pour exprimer les rsultats, que
centimtre au-dessous de la surface. On obtient ainsi la des botes dans lesquelles se sont dveloppes de 20 300
dilution au 1/100. colonies.
6.2.2.2 Mlanger en agitant 25 fois avec un mouvement 6.6.3 Calculer la moyenne arithmtique partir des
dune amplitude de 50 cm environ. chiffres obtenus dans les botes ensemences avec la
mme dilution.
6.2.2.3 On peut poursuivre les dilutions dcimales en
utilisant chaque fois une nouvelle pipette pour passer 6.6.4 Si les botes correspondant plusieurs dilutions
dune dilution lautre comme prvue au 6.2.2.1. donnent des rsultats compris entre ces limites, ne tenir
compte que de la moyenne des rsultats.
6.3. Ensemencement des botes de Ptri.
6.6.5 Si une numration dpasse peine 300 colonies et
si la dilution suivante est peine infrieure 20 colonies,
6.3.1 Prparer au moins deux botes partir de chaque
prendre la moyenne.
dilution choisie de faon obtenir au moins deux botes
comprenant de 20 300 colonies. 6.6.6 Si lcart est important, recommencer lpreuve.

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3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 15
23 mai 2004

6.6.7 Si une bote a plus du quart de sa surface Arrte :


recouvert de colonies envahissantes, elle doit tre carte.
Article 1er. En application des dispositions de
7/ Expression des rsultats. larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
7.1 Nombre de germes par g = nombre de colonies 1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
dtermines selon le processus expos en 6.6 multipli par pour objet de rendre obligatoire une mthode de contrle
linverse de la dilution. Il ny a lieu de tenir compte que microbiologique pour le lait strilis.
de deux chiffres significatifs.
Art. 2. Pour le contrle microbiologique du lait
7.2 Pour un nombre de trois chiffres, arrondir au zro le strilis, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
plus proche. Si le troisime chiffre est 5, arrondir au rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
chiffre infrieur si les deux premiers chiffres sont des doivent employer la mthode danalyse microbiologique
nombres pairs et au chiffre suprieur si les deux premiers dcrite en annexe.
sont des nombres impairs par exemple.
236 240 Cette mthode doit tre galement utilise par le
234 230 laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
235 240
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
225 220 officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
245 240 populaire.
7.3 Si les botes correspondant la dilution la plus Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars
faible contiennent moins de 20 colonies on considrera 2004.
que le nombre de germes est infrieur 20 fois linverse
de cette dilution.
Noureddine BOUKROUH.
Si les botes correspondant la dilution la plus leve
contiennent plus de 300 colonies, on considrera que le
nombre de germes est suprieur 300 fois linverse de ANNEXE
cette dilution.
Mthode de contrle microbiologique
pour le lait strilis
8/ Rptabilit
1/ Objet :
La diffrence entre les rsultats de dnombrement faits
en double (rsultats obtenus simultanment ou rapidement
Cette mthode est applicable tous les types de laits
lun aprs lautre par le mme oprateur) ne doit pas
striliss liquides, entiers, partiellement ou entirement
scarter de plus de 30 % du rsultat le plus bas.
crms et destins la consommation en tant que tels,
(Ces dispositions excluent les laits concentrs, sucrs ou
Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004 non ainsi que les laits aromatiss).
rendant obligatoire la mthode de contrle
microbiologique pour le lait strilis. 2/ Echantillonnage et prparation des chantillons.

2.1 Echantillonnage
Le ministre du commerce,
Lchantillonnage (nombre des chantillons et
Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel frquence) doit tre bas sur des principes statistiques.
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ; A chaque chantillonnage on doit prlever trois
rcipients par chantillon except dans les pays climat
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
tempr o deux rcipients par chantillon suffisent.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
2.2 Prparation des chantillons
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions Les rcipients doivent tre propres et secs avant leur
du ministre du commerce ; ouverture et avant incubation. Avant douvrir le rcipient
son contenu doit tre bien mlang (par inversions
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414 rptes).
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Tous les instruments utiliss pour le prlvement de
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet portions de lait dans les rcipients doivent tre propres et
1994, modifi et complt par larrt interministriel du striles.
25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines Toutes les prcautions normales de laboratoire doivent
denres alimentaires ; tre prises pour viter une contamination des chantillons.

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16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004

3/ Contrle effectuer avant incubation (sur au 6.2.5 Laspect physique doit tre normal, on ne doit
moins un des chantillons ou rcipients). constater aucune trace de coagulation ou de protolyse et
3.1 Test de stabilit lthanol. doit correspondre celui dun lait strilis ayant subi une
incubation prolonge.
Mlanger le volume dune solution aqueuse dthanol
68% (v/v) un volume de lait. Sil ne se forme pas de 7/ Apprciation de la qualit dun lot
prcipit, le lait a satisfait lpreuve de stabilit
lthanol et on doit procder aux tests ci-aprs. 7.1 Cette opration doit se fonder sur une interprtation
statistique des rsultats obtenus sur lchantillon.
3.2 Acidit titrable exprime en g dacide lactique pour
100 ml de lait strilis.
3.3 Examen microscopique direct. Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004
3.4 Examen organoleptique : prsence ou absence de rendant obligatoire la mthode de dnombrement
prcipit, sdiment, odeur ou saveur anormale. des organismes microbiens pour le lait ferment.

4/ Incubation.
Le ministre du commerce,
(si le lait a satisfait au test de stabilit lthanol) Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
4.1 Incuber lun des rcipients non ouverts ou lun des nomination des membres du Gouvernement ;
chantillons 30 1 C pendant 14 jours.
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
4.2 Incuber les rcipients non ouverts ou lchantillon modifi et complt relatif au contrle de la qualit et la
restant 55 1 C pendant 7 jours. rpression des fraudes ;

Dans les climats temprs, lincubation 55 1 C peut Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
tre omise. correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
5/ Contrles effectuer aprs incubation Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
5.1 Test de stabilit lthanol. correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Mlanger un volume dune solution aqueuse dthanol
68% (v/v) un volume de lait. Si le lait satisfait Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
lpreuve de stabilit lthanol on doit procder aux tests 1994, modifi et complt par larrt interministriel du
ci-aprs : 25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines
5.2 Acidit titrable, exprime en g dacide lactique pour denres alimentaires ;
100 ml de lait.
Arrte :
5.3 Dnombrement des colonies linoculum doit tre
quivalent 0,1 ml de lait. Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
5.4 Examen organoleptique; prsence ou absence de 1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
prcipit, sdiment, odeur ou saveur anormale. pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des organismes microbiens pour le lait
6 Exigences imposes pour que lchantillon puisse
tre reconnu satisfaisant ferment.

6.1/ Avant incubation. Art. 2. Pour le dnombrement des organismes


microbiens du lait ferment, les laboratoires du contrle
Lchantillon doit satisfaire lpreuve de lthanol de la qualit et de la rpression des fraudes et les
(3.1) laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe.
6.2 Aprs incubation
Cette mthode doit tre galement utilise par le
6.2.1 Lchantillon doit satisfaire lpreuve de
stabilit lthanol (5.1). laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

6.2.2 La diffrence entre lacidit titrable avant et aprs Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
incubation ne doit pas tre suprieure 0,02 exprime en officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
g dacide lactique pour 100 ml de lait. populaire.
6.2.3 La numration des germes ne devra pas dpasser
10 par inoculum (5.3). Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars
2004.
6.2.4 Lodeur et la saveur de lchantillon ne doivent
pas tre diffrentes de lodeur et de la saveur normales
dun lait strile incub pendant un laps de temps prolong. Noureddine BOUKROUH.

05
3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 17
23 mai 2004

ANNEXE Bicarbonate de sodium (NaHCO3)........................0.20 g

Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml


Mthode de dnombrement des organismes
microbiens dans le lait ferment. Pour lemploi, ajouter une partie de la solution
prcdente trois parties deau distille (dans un appreil
en verre).
1/ Dfinition :
On peut galement employer une solution de
On entend par organismes de contamination tous peptone 0,1 % au lieu et place de la solution de
microorganismes autres que ceux responsables de Ringer dilue au quart.
fermentations spcifiques du type de lait ferment On peut galement prparer le diluant partir de
considr. tablettes prtes lemploi.

Les levures faisant partie de la flore spcifique Tous les ractifs doivent tre de qualit
certains types de laits ferments ne doivent pas tre analytique.
considres comme des organismes de contamination. 6/ Mode opratoire

2/ Principe 6.1 Prparation des dilutions

Un chantillon de lait ferment est ensemenc sur un 6.1.1 Lchantillon sera conserv dans un rfrigrateur
(3 4 C) jusqu lanalyse bactriologique qui sera
milieu rendu exempt de glucides qui est incub deux effectue dans un dlai maximum de 24 h aprs le
reprises; on dnombre ensuite les organismes de prlvement.
contamination.
6.1.2 Prlever, en sentourant des prcautions
3/ Appareillage et verrerie : aseptiques habituelles, un chantillion de 10 g de lait
ferment quon dposera dans un flacon ou rcipient
appropri, ferm vis ou bouch, contenant 90 ml dune
Matriel courant de laboratoire. solution de Ringer au quart et quelques perles de verre.

4/ Milieu de culture : Mlanger soigneusement en agitant le flacon 25 fois


de haut en bas avec une amplitude de 30 cm environ.
Le milieu de culture a la composition suivante :
Le liquide est utiliser pour la numration 1 ml
Glysate (*) ou quivalent........................................7,5 g correspondant 100 mg de lait ferment.

Trypticase (*) ou quivalent.....................................7,5 g 6.1.3 Afin dobtenir la dilution au 1/100, transfrer


aseptiquement 1 ml du liquide (6.1.2) 9 ml de solution
Chlorure de sodium (NaCL).....................................5,0 g de Ringer au quart, en mlangeant. Prparer, si ncessaire,
Glose (*).................................................................4,0 g une srie de dilutions au 1/1000 partir de la dilution au
1/100.
Eau distille.........................................................1000 ml
6.2 Incubation
Le pH du milieu aprs strilisation....................7,6 0,1
On fera incuber les botes de Ptri
(*) rendu exempt de glucides. dabord pendant 48 2 heures 30 1 C;
puis pendant 48 2 heures 20 1 C.
5/ Diluant :
7 Expression des rsultats
Solution de Ringer au quart.
Exprimer le rsultat du dnombrement en nombre de
microorganismes par gramme de lait ferment,
La composition de la solution concentre de Ringer est
cest--dire le nombre de colonies x inverse de la dilution.
la suivante :
Chlorure de sodium (NaCI)....................................9,00 g Dans certains cas, les bactries lactiques donnent
naissance des points de colonies . Ces dernires ne
Chlorure de potassium (KCI).................................0,42 g doivent pas tre comptes comme organismes de
contamination. En cas de doute, effectuer lpreuve de la
Chlorure de calcium anydre (CaCI2).....................0.24 g catalase sur un nombre reprsentatif de colonies.

06
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 7
4 juillet 2004

2/ Principe :
MINISTERE DU COMMERCE Trois sries de dilutions en parallle, obtenues partir
de lchantillon de lait ferment, sont ensemences sur un
Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au milieu slectif au Brillant Green Lactose Bile Broth
24 mai 2004 rendant obligatoire une mthode de dans des tubes essais contenant de petits tubes de
Durham. On incube les tubes pendant 48 heures 37 C.
dnombrement des coliformes dans les laits
A partir des tubes positifs (production de gaz dans les
ferments. cloches de Durham) on dtermine le nombre le plus
probable de bactries coliformes par g de lait ferment en
Le ministre du commerce, se rfrant au tableau NPP (nombre le plus probable) pour
trois sries parallles.
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la 3/ Appareillage et verrerie :
rpression des fraudes ;
Matriel courant de laboratoire.
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions 4/ Milieu de culture :
du ministre du commerce ;
4.1 Composition
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de La composition du milieu Brillant Green Lactose Bile
consommation ; Broth est la suivante :
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications Peptone ou glisate................................................. 10 g
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Lactose.................................................................... 10 g
Arrte :
Bile de buf dshydrate........................................ 20 g
Article 1er. En application des dispositions de Vert brillant........................................................0,0133 g
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a Eau distille (dans un appareil en verre)............ 1000 ml
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des coliformes dans les laits ferments. 4.2 Prparation

Art. 2. Pour le dnombrement des coliformes dans Pour prparer 1000 ml du milieu, dissoudre le peptone
les laits ferments, les laboratoires du contrle de la et le lactose dans environ 500 ml deau distille.
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires Dissoudre 20 g de bile de buf anhydre dans 200 ml
agrs cet effet doivent employer la mthode deau distille. Le pH de cette solution doit tre compris
microbiologique dcrite en annexe. entre 7,0 et 7,5. Mlanger les deux solutions, ajuster le pH
mesur laide dune lectrode de verre, 7,4 ajouter
Cette mthode doit tre galement utilise par le 13,3 ml dune solution aqueuse 0,1% de vert brillant. Le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. volume est complter 1000 ml avec de leau distille.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
Verser 10 ml de milieu dans les tubes essais.
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. Ces tubes sont munis de cloches de Durham. Aprs le
Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au remplissage, striliser pendant 15 minutes dans des
24 mai 2004. autoclaves rgls 121 C. Aprs strilisation, le pH
Noureddine BOUKROUH. mesur laide dune lectrode de verre doit tre de 7,2
0,1.

ANNEXE 5/ Diluant :
Mthode de dnombrement des coliformes dans les Solution de Ringer au quart.
laits ferments
La composition de la solution concentre de Ringer est
1/ Dfinition : la suivante :
Chlorure de sodium (NACL)..................................9,00 g
Aux fins de la prsente mthode la dnomination
coliforme sapplique aux bactries en forme de Chlorure de potassium (KCL)................................0,42 g
bacilles Gram ngatives, arobies et facultativement
Chlorure de calcium anhydre (CaCL2)...................0,24 g
anarobies, non sporules fermentant le lactose avec
formation de gaz et dacide. Bicarbonate de sodium (NaHCO3).........................0,20 g

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16 Joumada El Oula 1425
8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 4 juillet 2004

Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml NOMBRE LE PLUS PROBABLE (NPP) POUR
TROIS SERIES PARALLELES
Pour lemploi, ajouter une partie de la solution
prcdente trois parties deau distille (dans un appareil
en verre). NPP NPP
Index Index
La solution dilue sera strilise par chauffage pendant (pour (pour
Tubes positifs de Tubes positifs de
15 minutes 121 C. 10 g) 10 g)
On peut galement employer une solution de 10 g 1,0 g 0,1 g
10 g 1,0 g 0,1 g
peptone 0,1 % au lieu et place de la solution de
Ringer dilue au quart. 2 3
0 0 0 0 2 4,0
Tous les ractifs doivent tre de qualit 0 0 1 0,3 2 3 0 3,0
analytique. 0 1 0 0,3 2 3 1 3,5
0 1 1 0,6 2 3 2 4,0
6/ Mode opratoire : 0 2 3 0 0 2,5
0 0,6
1 0 0 0,4 3 0 1 4,0
6.1 Prparation des dillutions
1 0 1 0,7 3 0 2 6,5
6.1.1 Lchantillon sera conserv dans un rfrigrateur 1 0 2 1,1 3 1 0 4,5
(3 4 C) jusqu lanalyse bactriologique qui sera 1 1 0 0,7 3 1 1 7,5
effectue dans un dlai maximum de 24 h aprs le 1 1 1 1,1 3 1 2 11,5
prlvement. 1 2 0 1,1 3 1 3 16,0
1 2 1 1,5 3 2 0 9,5
6.1.2 Prlever, en sentourant des prcautions 1 3 0 1,6 3 2 1 15,0
aseptiques habituelles, un chantillon de 10 g de lait 2 0 0 0,9 3 2 2 20,0
ferment que lon dposera dans un flacon ou rcipient 2 0 1 1,4 3 2 3 30,0
appropri, ferm vis ou bouch, contenant 90 ml dune 2 0 2 2,0 3 3 0 25,0
solution de Ringer au quart et quelques perles de verre. 2 1 0 1,5 3 3 1 45,0
Mlanger soigneusement en agitant le flacon 25 fois de 2 1 1 2,0 3 3 2 110,0
haut en bas avec une amplitude de 30 cm environ. 2 1 2 3,0 3 3 3 140,0
2 2 0 2,0
Le liquide est utiliser pour la numration; 1 ml 2 2 1 3,0
correspond 100 mg de lait ferment. 2 2 2 3,5
6.1.3 Afin dobtenir la dilution au 1 /100, transfrer
aseptiquement 1 ml du liquide (6.1.2) 9 ml de solution Le NPP dtermine le nombre de bactries coliformes
de Ringer au quart, en mlangeant. Prparer, si ncessaire, dans la quantit de lait ferment (en rgle gnrale 1 g ou
une srie de dilutions au 1/1000 partir de la dilution au 0,1 g ou 0,01 g) ayant servi ensemencer en parallle
1/100. les trois premiers tubes partir desquels on constitue
lindex.
6.2. Ensemencement du milieu
6.2.1 Ensemencer les tubes de Brillant Green Lactose Le nombre de bactries coliformes sera exprim par le
Bile Broth avec 1 g de lait ferment et avec les dilutions nombre le plus probable (NPP) par g de lait ferment. Si
prpares connues, indiqu en 6.1.3. Mlanger tous les tubes sont positifs, il faut rpter lanalyse en
soigneusement, en vitant dintroduire des bulles dair utilisant des dilutions plus leves (par exemple 0,1 g,
dans les tubes de Durham. 0,01 g et 0,001 g ou encore plus leves).
6.2.2 Ensemencer en parallle dans trois tubes chaque
quantit dchantillon et chaque dilution; effectuer au Si lon trouve un chiffre-index ne figurant pas dans le
moins trois sries, par exemple 1g, 0,1g et 0,01g. En tableau NPP, on peut en conclure quune erreur a t
gnral, on doit prvoir un nombre de dilutions au commise dans le mode opratoire.
dixime suffisant pour rpondre aux exigences du tableau
ci-dessous.
7/ Expression des rsultats
6.3. Incubation
(NPP) Les rsultats sont exprims en tant que nombre le
Incuber les tubes ensemencs pendant 48 heures 2h plus probable de bactries coliformes par g du produit,
30C 1 C; selon les indications du tableau.

6.4. Dtermination du nombre le plus probable de


8/ Rptabilit
bactries coliformes
Le test est considr comme positif lorsquil y a Les diffrences entre les rsultats de dtermination
production visible de gaz dans les tubes de Durham. Le effectues en double (rsultats obtenus simultanment
nombre de tubes positifs est dterminant pour la lecture du ou rapidement lun aprs lautre par le mme analyste)
nombre le plus probable (NPP) de bactries coliformes ne doit pas scarter de plus de 30% du rsultat le
selon le tableau ci-dessous pour trois sries parallles. plus bas.

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16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 9
4 juillet 2004

Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24 2/ Reconstitution du lait en poudre et prparation


mai 2004 rendant obligatoire une mthode de des dilutions.
recherche des staphylocoques coagulase
positive pour le lait en poudre. La reconstitution du lait en poudre et la prparation des
dilutions se font selon les conditions appropries.
Le ministre du commerce,
3/ Formules des milieux et directives pour leur
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, prparation.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 3.1 Milieu de Giolitti et Cantoni
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 3.1.1 Milieu de base
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; Tryptone....................................................................10 g
Extrait de viande..........................................................5 g
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de Extrait de levure..........................................................5 g
consommation ; Chlorure de lithium.....................................................5 g
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet Mannitol....................................................................20 g
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications Chlorure de sodium.....................................................5 g
microbiologiques de certaines denres alimentaires ; Glycine.....................................................................1,2 g
Pyruvate de sodium....................................................3 g
Arrte :
Eau distille.........................................................1000 ml
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche 50-60 C et ajuster le pH 6,9 0,1. Rpartir raison
des staphylocoques coagulase positive pour le lait en de 19 ml dans des tubes de 20 x 200. Autoclaver 20 mn
poudre. 115 C. Avant utilisation, chasser lair par chauffage
100 C pendant 20 mn. Refroidir.
Art. 2. Pour la recherche des staphylocoques
coagulase positive pour le lait en poudre. les laboratoires 3.1.2 Solution de tellurite de potassium
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
Tellurite de potassium.................................................1 g
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe. Eau distille...........................................................100 ml

Cette mthode doit tre galement utilise par le Dissoudre le tellurite de potassium dans leau. Striliser
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. par filtration.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal On devra sassurer au pralable, par des essais
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et bactriologiques, que le tellurite de potassium dont on
populaire. dispose convient pour cet usage. Il est recommand en
toute circonstance de porter grande attention et il faut
Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
souligner limportance dun choix judicieux de ce produit
24 mai 2004.
en ce qui concerne son origine et les garanties quil offre.
Noureddine BOUKROUH.
3.1.3 On prpare en outre une glose 2% (dans leau
distille) que lon strilise laucolave (20 mn 120 C)
ANNEXE et qui sert former un bouchon anarobie au-dessus du
milieu liquide (voir 4.1).
RECHERCHE DES STAPHYLOCOQUES
A COAGULASE POSITIVE DANS LE LAIT 3.1.4 Mode demploi
EN POUDRE
Juste avant lutilisation, chauffer les tubes de milieu de
1/ Principe : base (3.1.1) pendant 20 mn 100 C pour chasser lair.
Refroidir 45 C et ajouter 0,1 ml de la solution de
On inocule le lait reconstitu correspondant 0,1g de tellurite de potassium (3.1.2).
poudre dans des bouillons denrichissement (dans celui de
Giolitti et Cantoni ou, sil sagit de poudres fabriques 3.2 Bouillon sal lactos au rouge de phnol
depuis moins de 15 jours, dans le bouillon sal lactos au
rouge de phnol). Aprs incubation, on repique les tubes Extrait de viande de buf.........................................1,5 g
sur milieu E.T.G.P.A de Baird-Parker (3.3). Les colonies
de staphylocoques qui se dveloppent sur le milieu de Protose-peptone......................................................7,5 g
Baird-Parker sont soumises lpreuve de la coagulase. Chlorure de sodium...................................................75 g

09
16 Joumada El Oula 1425
10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 4 juillet 2004

Lactose.....................................................................7,5 g a) 6,3 ml de la solution de glycine (3.3.2) ;


Rouge de phnol...................................................0,025 g b) 1 ml de la solution de tellurite de potassium (3.3.3) ;
Eau distille.........................................................1000 ml c) 5 ml dmulsion de jaune duf (3.3.4) ;

Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et Bien mlanger les prparations a, b et c dans le milieu
en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir fondu et rpartir immdiatement en botes de Ptri
temprature ambiante et ajuster le pH 7,4 0,1. raison de 15 ml par bote.
Rpartir raison de 9 ml dans des tubes de 18 x 180. Ces botes coules peuvent tre conserves 48 heures
Autoclaver 20 mn 120 C. + 4 C. Immdiatement avant lutilisation, tendre sur la
surface des botes 0,5 ml dune solution 20% (p/v) de
3.3 Milieu E.T.G.P.A. de Baird-Parker pyruvate de potassium strilise par filtration, scher les
botes 50 C en position horizontale, la surface de la
3.3.1 Milieu de base glose en dessus. Inoculer les botes ds quelles sont
Tryptone....................................................................10 g sches.
Extrait de buf............................................................5 g Conserver la solution de pyruvate 3-5 C et la
remplacer chaque mois.
Extrait de levure..........................................................1 g
Chlorure de lithium.....................................................5 g 4/ Mode opratoire
Glose................................................................15 20 g 4.1 Si la fabrication de la poudre de lait a t faite plus
(selon le pouvoir glifiant de la glose utilise) de 15 jours avant lanalyse, ou si elle est de date inconnue
ajouter 1ml de lait reconstitu correspondant 0,1 g de
Eau distille.........................................................1000 ml poudre de lait dans un tube de bouillon denrichissement
de Giolitti et Cantoni (3.1.4).
Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir Bien mlanger linoculum avec le milieu en vitant
50-60 C et ajuster le pH 6,8 0,1. toute introduction dair. On coule ensuite au-dessus du
milieu un bouchon de glose 2% (3.1.3) fondue et on
Rpartir raison de 90 ml dans des flacons col vis laisse solidifier.
bouchs baklite. Autoclaver 15 mn 120 C. 4.2 Sil sagit de poudres fabriques depuis moins de 15
jours ajouter 1 ml de lait reconstitu dans un tube de
3.3.2 Solution de glycine bouillon sal lactose au rouge de phnol (on peut utiliser
galement le milieu de Giolitti et Cantoni comme en 4.1).
Glycine..................................................................... 20 g
4.3 Incuber pendant 24 h 37 C lun et/ou lautre des
Eau distille...........................................................100 ml milieux denrichissement ensemencs (cest--dire 4.1
Aprs complte dissolution, autoclaver 15 mn 120 C. et/ou 4.2).
4.3.1 Repiquer selon 4.6 et 4.7 les tubes de bouillon
3.3.3 Solution de tellurite de potassium denrichissement de Giolitti et Cantoni prsentant un
Tellurite de potassium.................................................1 g noircissement ou un prcipit noirtre.

Eau distille...........................................................100 ml 4.3.2 Repiquer selon 4.7 les tubes de bouillon sal
lactos au rouge de phnol ayant vir au jaune.
Aprs complte dissolution, striliser par filtration. On
devra sassurer au pralable, par des essais 4.4. Incuber les autres tubes 24 h supplmentaires et les
bactriologiques, que le tellurite de potassium dont on repiquer selon 4.6 et 4.7.
dispose convient pour cet usage. Il est recommand en 4.5 Le procd pour repiquer les tubes de bouillon
toute circonstance de porter grande attention et il faut denrichissement aprs leur incubation est donn en 4.6 et
souligner limportance dun choix judicieux de ce produit 4.7.
en ce qui concerne son origine et les garanties quil offre. 4.6 Dans le cas du milieu de Giolitti et Cantoni,
enlvement du bouchon de glose selon la technique
3.3.4 Emulsion de jaune duf suivante :
Tremper des ufs frais une minute environ dans une Avec une spatule, dcouper le bouchon de glose selon
dilution (1+1000) dune solution sature de HgCI2. deux diamtres perpendiculaires et, si ncessaire, passer
ensuite la spatule autour du bouchon.
Briser les coquilles aseptiquement et sparer les jaunes
des blancs. Mlanger les jaunes avec une solution saline Placer le tube sur lagitateur de faon faire tomber les
physiologique (3+7, v/v) pendant 5 secondes environ dans morceaux de bouchon au fond du tube et, en mme temps,
un mlangeur grande vitesse. mettre les bactries en suspension.
4.7 Avec une anse de platine, prlever environ
3.3.5 Mode demploi
0,001 ml de culture dveloppe dans le bouillon
A 90 ml de milieu de base pralablement fondu et denrichissement, taler la surface dune bote
maintenu 45 C 1 C, ajouter aseptiquement les renfermant le milieu E.T.G.P.A. de faon obtenir des
solutions suivantes amenes 45 C : colonies spares.

10
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 11
4 juillet 2004

4.8 Incuber les botes retournes 24 h 37 C 1 C. Arrte :

4.9 Soumettre au moins 3 colonies typiques lpreuve Article 1er. En application des dispositions de
de la coagulase (4.12). Les colonies typiques de larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
staphylococcus aureus sont noires, brillantes avec une 1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
mince bordure blanche et entoures dune zone claire pour objet de rendre obligatoire une mthode de
stendant dans le milieu opaque. dnombrement des micro-organismes caractristiques par
la technique de comptage des colonies 37 C dans le
4.10 Si au bout de 24 h aucun dveloppement ne sest yaourt.
produit ou si lon observe seulement des colonies
atypiques, incuber 24 h supplmentaires 37 C 1 C. Art. 2. Pour le dnombrement des micro-organismes
caractristiques par la technique de comptage des colonies
4.11 Si des colonies se sont dveloppes (daprs 4.10) 37 C dans le yaourt, les laboratoires du contrle de la
en soumettre trois au moins lpreuve de la catalase. qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
Pour cela prendre, avec un fil de platine une partie de agrs cet effet doivent employer la mthode danalyse
chacune de ces colonies et la mlanger sur une lame une microbiologique dcrite en annexe.
goutte deau oxygne 3,0% (10 volumes). Si lon
observe une production de gaz, soumettre la colonie Cette mthode doit tre galement utilise par le
correspondante lpreuve de la coagulase (selon 4.12). laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

4.12 Epreuve de la coagulase Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
4.12.1 Inoculer chaque colonie dans un petit tube populaire.
contenant 0,3 ml de bouillon cur/cervelle strille.
Incuber 20-24 h 37 C 1 C. Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
4.12.2 Ajouter dans un petit tube 0,1 ml de cette culture Noureddine BOUKROUH.
0,3 ml de plasma de lapin additionn de 0,1 %
dE.D.T.A.
ANNEXE
4.12.3 Incuber 37 C 1 C et examiner les tubes en Mthode de dnombrement des micro-organismes
vue de la formation dun coagulum, chaque heure pendant caractristiques par une technique de comptage
4 h, puis aprs 24 h. des colonies 37 C dans le yaourt
5. Conclure la prsence de staphylocoques coagulase Objet et domaine dapplication
positive dans lchantillon de poudre de lait, si trois
colonies au moins obtenues selon 4.9 ou 4.11 coagulent le La mthode est applicable aux yaourts dans lesquels
plasma de lapin. deux micro-organismes caractristiques sont prsents et
vivants.

Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant 1/ Dfinition


au 24 mai 2004 rendant obligatoire une
mthode de dnombrement des micro-organismes 1.1 Lactobacillus bulgaricus : micro-organisme
caractristiques par une technique de comptage thermophile formant des colonies lenticulaires souvent en
des colonies 37 C dans le yaourt. forme dtoile, de 1 3 mm de diamtre, sur milieu MRS
acidifi (selon DeMan, Rogosa et Sharpe)
Aspect microscopique : btonnets gnralement courts,
Le ministre du commerce, mais quelquefois de forme allonge. Ils sont non sporuls,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, grampositifs, non mobiles, catalase ngative.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 1.2 Streptococcus thermophilus : micro-organisme
thermophile formant des colonies lenticulaires de 1 2
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 mm de diamtre sur M 17. Aspect microscopique : cellule
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions sphrique ou ovode (Cocci) (0,7 - 0,9 m de diamtre),
du ministre du commerce ; par paire ou en chanes longues. Elles sont gram
positives-catalase ngatives.
Vu larrt interministriel du 16 Joumada Ethania 1419
correspondant au 7 octobre 1998 relatif aux spcifications 2/ Principe
techniques des yaourts et aux modalits de leur mise la 2.1 Ensemencement des dilutions dcimales de
consommation ; lchantillon dans :
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet milieu MRS acidifi, suivi dune incubation en
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications anarobiose pendant 72 h 37 C, pour le dnombrement
microbiologiques de certaines denres alimentaires ; de L bulgaricus,

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16 Joumada El Oula 1425
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 4 juillet 2004

milieu M 17, suivi dune incubation en arobiose Glucose (c6 H 12 06) .................................................. 20 g
pendant 48 h 37 C, pour le dnombrement de S.
thermophilus. Tween 80 (sorbitanne monolate) ........................... 1 ml
Hydrogno-orthophosphate dipotassique
2.2 Comptage des colonies et confirmation par tests
appropris. (K2HPO4) ................................................................... 2 g

2.3 Calcul du nombre de micro-organismes Actate de sodium, trihydrat


Calcul du nombre de micro-organismes caractristiques (CH3CO2 Na3H2O) ..................................................... 2 g
par gramme dchantillon partir du nombre de colonies
obtenu sur les botes slectionnes des dilutions Citrate dammoniaque (C6H607(NH4)2)..................... 2 g
permettant de donner un rsultat significatif.
Sulfate de magnsium heptahydrat
3/ Diluants, milieux de culture et ractifs (MnSO 47H2o) ........................................................ 0,2 g
3.1 Composants de base Sulfate de manganse ttrahydrat
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est (MnSO 4H20) ...................................................... 0,05 g
recommand dutiliser, pour la prparation du diluant, des
composants de base dshydrats ou une prparation Agar-agar.............................................................. 9-18 g
complte dshydrate.
Eau .................................................................... 1000 ml
Les prescriptions du fabricant doivent tre suivies
scrupuleusement.
Prparation
Les ractifs chimiques doivent tre de qualit analytique
reconnue. Dissoudre les composants dans leau en bullition.

Leau utilise doit tre de leau distille dans le verre ou Laisser refroidir 5 C et ajuster le pH laide dacide
dsionise exempte de substances susceptibles dinfluer actique (3.4.3) en contrlant avec le pH-mtre (4.1.8) de
sur la croissance des micro-organismes dans les sorte quaprs strilisation il soit de 5,4 25 C.
conditions de lessai :
Rpartir le milieu par quantit de 100 ml dans des
il convient de vrifier cet aspect priodiquement, flacons de 150 ml ou par quantit de 200 ml dans des
particulirement dans le cas de leau dminralise, flacons de 250 ml. Striliser 121 C pendant 15 mn.
il convient dutiliser des solutions dhydroxyde de On peut galement utiliser les milieux MRS prts
sodium ou dacide chlorhydrique (environ 0,1 mol/l) afin lemploi, dans ce cas, il faut les contrler avec le milieu
dajuster le pH des diluants, sauf indication contraire. prpar daprs la prsente mthode.
3.2 Diluant Avant de commencer lexamen bactriologique, faire
fondre compltement la quantit ncessaire de milieu
Composition dans un bain-marie en bullition ou en vapeur dans un
Peptone 1 (hydrolysat tryptique de casine) .......... 0,5 g rcipient partiellement ferm. Refroidir le milieu
Peptone 2 (hydrolysat tryptique de viande) ............ 0,5 g fondu dans le bain-marie (4.1.7).
Eau .................................................................... 1000 ml Pour contrler la temprature de la glose, il est
recommand de placer un thermomtre dans un mme
Prparation volume de solution de glose la mme concentration
que celle du milieu, contenue dans un rcipient spar,
Dissoudre les peptones dans leau. Rpartir la solution identique celui utilis pour le milieu. Cette solution
par ml dans des flacons de 150 ml de capacit. servant au contrle de la temprature doit tre
Striliser 121 C pendant 15 mn. soumise aux mmes conditions de chauffage et de
refroidissement que le milieu proprement dit.
On peut employer des polypeptones qui sont des
mlanges de peptone 1 et peptone 2. 3.3.2 Milieu M17

3.3 Milieux de culture 3.3.2.1 Milieu de base

3.3.1 Milieu MRS acidifi Composition


Peptone 1 (hydrolysat trypsique de casine)..........2,50 g
Composition
Peptone 2 (hydrolysat pepsique de viande)............2,50 g
Peptone 1 ................................................................. 10 g Peptone 3 (hydrolysat papaenique de soja)............5,00 g
Extrait de viande ...................................................... 10 g Extrait de levure dshydrate.................................2,50 g
Extrait de levure dshydrat ...................................... 5 g Extrait de viande.....................................................5,00 g

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16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 13
4 juillet 2004

B-glycrophosphate (sel disodique) (C 3H7O6PNa2) 4.1.3 Mlangeur, soit de type pristaltique avec
................................................................................. 19,00 g rcipients striles en plastique, soit de type rotatif,
Sulfate de magnsium heptahydrat (M gSO47H20)
pouvant fonctionner une vitesse minimale de rotation de
................................................................................... 0,25 g 20000 mn avec rcipients en verre ou en mtal de
capacit approprie.
Acide ascorbique (C6H806).......................................50 g
Agar-agar...............................................................9-18 g 4.1.4 Agitateur de tubes essais (par exemple, agitateur
vortex).
Eau........................................................................950 ml
4.1.5 Matriel de comptage de colonies, comportant un
Prparation
systme dclairage avec fond noir, muni dune loupe
Dissoudre les composants dans leau en bullition. grossissant 1,5 fois et dun compteur numrique
Laisser refroidir 50 C et ajuster le pH laide des mcanique ou lectronique.
ractifs (3.4) en contrlant avec le pH-mtre (4.1.8), de
sorte quaprs strilisation, il soit de 7,1 7,2 25 C. 4.1.6 Loupe grossissement 8-10 fois.
Rpartir le milieu par quantit de 95 ml dans des flacons
4.1.7 Bain-marie pouvant tre rgl 45 1 C.
de 150 ml. Striliser 121 C pendant 15mn.
4.1.8 PH-mtre, avec compensation de temprature,
On peut galement utiliser des milieux complets M17 dune prcision de 0,1 unit de pH 25 C.
prts lemploi quil convient de contrler avec le
milieu M17 prpar daprs la prsente mthode. 4.1.9 Fioles de dilution, de capacit de 150 - 250 ml et
tubes essais de 18 mm x 180 mm, munis de dispositifs
3.3.2.2 Solution de lactose de fermeture appropris, capsules ou bouchons en
caoutchouc ou en matire synthtique.
Composition
4.1.10 Pipettes gradues jusqu la pointe, pouvant
Lactose (C12H22O11).................10 g dlivrer 1 ml 0,02 ml ou 10 ml 0,2 ml ou 11 ml 0,2
Eau..........................................100 ml ml.
Prparation 4.1.11 Boites de Ptri fond de diamtre intrieur
Dissoudre le lactose dans leau, striliser 121 C denviron 90 mm. La profondeur intrieure doit tre de 10
pendant 15 mn. mm minimum.

3.3.2.3 Milieu complet Le fond ne doit prsenter aucune irrgularit susceptible


dinfluer sur le dnombrement des colonies.
Composition
4.1.12 Spatules en verre ou en mtal.
Milieu de base (3.3.2.1)..................95 ml
Solution de lactose (3.3.2.2)..................5 ml 5e/ Echantillonnage

Prparation Lchantillonnage se fait dans des conditions


appropries.
Immdiatement avant emploi, faire fondre le milieu de
base (3.3.2.1) dans un bain-marie en bullition et laisser 6e/ Mode opratoire
refroidir 48-50 C. Chauffer la solution de lactose 6.1 Prparation de lchantillon et de la prise dessai
(3.3.2.2) 48-50 C.
Ajouter la solution de lactose au milieu de base et Avant douvrir le pot de yaourt, et afin dliminer toute
source de contamination, prendre soin de nettoyer
mlanger soigneusement par des mouvements rotatifs.
soigneusement la surface extrieure du rcipient autour de
Refroidir le milieu dans le bain-marie (4.1.7).
la zone do sera prlev lchantillon. Le nettoyage peut
3.4 Ractifs pour ajuster le pH tre effectu avec de lthanol 70% (VIV), afin dviter
toute contamination supplmentaire. Ouvrir le pot
3.4.1 Hydroxyde de sodium (NaOH) , solution environ aseptiquement.
0,1 mol/1.
Pendant cette tape, il est important dobtenir non
3.4.2 Acide chlorhydrique (HCI) , solution environ seulement une dilution homogne, mais aussi une
(0,1 mol/1. fragmentation des chanes de streptocoques et de
lactobacilles en cellules isoles ou en chanes courtes,
3.4.3 Acide actique (CH3COOH), 100% (glacial).
de sorte que les rsultats, exprims en nombre total de
4e/ Appareillage et verrerie micro-organismes vivants par gramme de produit
soient reproductibles et reprsentatifs.
4.1 Le matriel de laboratoire microbiologique courant,
matriel requis pour la prparation des chantillons et des 6.1.1 Yaourts sans fruits
dilutions. Mlanger avec soin le contenu du pot de yaourt laide
4.1.1 Incubateur 37 1C. dune spatule strile (4.1.12). Peser 10 0,1 g de
4.1.2 Incubateur anarobie, pouvant tre rgl 37 1 lchantillon de yaourt dans un rcipient appropri (par
C, ou rcipients de culture anarobie, fournissant une exemple un tube de centrifugeuse de 200 ml fond rond
atmosphre de 90% dazote et 10% de dioxyde de en verre renforc, ou le bol du mlangeur, ou encore le
carbone. rcipient en plastique du mlangeur pristatique (4.1.3).

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16 Joumada El Oula 1425
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 4 juillet 2004

6.1.2 Yaourts aux fruits 6.5.5 Incuber les botes de Ptri retournes. Ne pas
empiler plus de 6 botes. Les piles de botes ne doivent pas
Mlanger le contenu total du pot de yaourt pendant 1
se toucher ni tre en contact avec les parois ou la partie
minute laide du mlangeur (4.1.3).
suprieure de lincubateur.
Peser 10 0,1 g de lchantillon de yaourt, comme,
6.5.5.1 Incuber les botes pour le dnombrement de L.
6.1.1.
bulgarius pendant 72 h 37 C dans lincubateur
6.2 Examen microscopique anarobie ou le rcipient de culture en anarobiose (4.1.2).
Effectuer un examen prliminaire de plusieurs champs 6.5.5.2 Incuber les botes pour le dnombrement de S.
microscopiques dun frottis de lchantillon de yaourt, thermophilus pendant 48 h 37 1 C.
pralablement color au bleu de mthylne (par exemple
laide dune solution thanolique de bleu de mthylne de 6.6 Comptage des colonies
6 g/l) afin dapprcier la densit des deux types de
bactries, coques et btonnets, et choisir ainsi la gamme A lissue de la priode dincubation spcifie (6.5.5.1)
approprie de dilutions utiliser pour le dnombrement de et (6.5.5.2), compter les colonies montrant les
chaque type. caractristiques de chacun des 2 micro-organismes (1.1 et
6.3 Prparation de la premire dilution 1.2) sur les botes contenant entre 10 et 300 colonies.
Examiner les botes en lumire tamise. Pour faciliter le
Les oprations dcrites aux paragraphes 6.3 6.5.4 comptage, on peut utiliser un compteur appropri (4.1.5).
ne doivent pas tre ralises la lumire directe du Eviter de confondre des particules non dissoutes
soleil dchantillon ou des matires prcipites avec des
colonies de la taille dune pointe dpingle. Examiner les
Ajouter le diluant (3.2) la prise dessai (6.1.1) jusqu colonies douteuses avec soin, laide dune loupe de
ce que la masse de la prise dessai et du diluant soit de 50 grossissement plus fort si ncessaire, afin de distinguer les
g. Mlanger pendant 1 minute laide du mlangeur colonies des particules trangres. Procder des dilutions
(4.1.3). Complter 100 g avec le mme diluant. Une dans le cas o le nombre de colonies dpasse 300.
dilution 10 -1 est ainsi obtenue.
6.7 Confirmation
6.4 Prparation des dilutions dcimales
Slectionner des colonies partir des botes utilises
Rpartir le diluant (3.2) laide dune pipette gradue pour le dnombrement de telle faon que le nombre
strile. Transfrer 1 ml de cette dilution dans un deuxime retenu soit gal la racine carre du nombre total de
tube, etc.... en sassurant quune nouvelle pipette est colonies.
utilise pour chaque dilution, jusqu ce que la srie de
dilutions ncessaires soit obtenue. Raliser une coloration de Gram sur ces colonies et
confirmer quelles se prsentent sous forme de btonnets
Ne pas plonger la pipette plus de 1 cm au-dessous de non sporuls, Gram positif, catalase-ngative dans les cas
la surface du liquide. Eviter les bulles dair en des cultures sur milieu MRS, et quelles forment des
remplissant la pipette. Pendant le transfert ne pas chanes de coques ou de diplocoques Gram-positif,
plonger la pipette dans le nouveau diluant. catalase-ngative, dans le cas des cultures sur milieu M17.
6.5 Ensemencement et incubation 7/ Expression des rsultats
6.5.1 En oprant en double (pour L. buigaricus et S.
thermophilus), transfrer laide dune pipette strile 1 ml 7.1 Mthode de calcul
de chaque dilution dans les botes de Ptri (4.1.11).
7.1.1 Retenir les dnombrements de botes contenant
6.5.2 Pour L. bulgaricus, verser 12 15 ml du milieu entre 10 et 300 colonies, obtenues en 6.6.
MRS acidifi (3.3.1) fondu et maintenu 45 1 C dans
un bain-marie (4.1.7), dans chaque bote de Ptri. 7.1.2 Pour chaque micro-organisme caractristique, le
nombre de micro-organismes par gramme dchantillon
Le temps qui scoule entre lensemencement des est gal :
dilutions et le remplissage des botes de Ptri avec la C
glose ne doit pas tre suprieur 15 minutes (6.5.2 et
6.5.3). (n1 + 0,1 + n2) d

6.5.3 Pour S. thermophilus, filtrer 12 - 15 ml du milieu C est la somme des colonies comptes sur les botes
M17 (3.3.2), fondu et maintenu 45 C (4.1.7) dans en 7.1.1 ;
chaque bote de Ptri.
n1 est le nombre de botes comptes la dilution la plus
6.5.4 Immdiatement aprs lavoir vers dans les botes, faible ;
mlanger soigneusement linoculum avec le milieu par
rotation des botes. Laisser le mlange se solidifier en n2 est le nombre de botes comptes la dilution la plus
laissant les botes sur une surface frache et horizontale. leve ;

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16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 15
4 juillet 2004

d est la valeur correspondant la dilution partir de C = 295 + 245 + 33 + 40


laquelle les premiers dnombrements ont t retenus. (n1 + 0,1 n2 ) d (2 + 0,1 2 ) 10 -5
Sil y a plus de deux dilutions compter, la formule 613
doit tre modifie pour prendre en compte la dilution = = 278,6 10-5
2,2 10 -5
suivante :
Ainsi pour trois dilutions : Selon 7.1.3 cela correspondant 280 x 10 5
Le nombre estim de L.bulgaricus prsents dans
C lchantillon de yaourt est donc 2,8 x 107/g.
(n1 + 0,1n2 + 0,0 1) d De mme pour S.thermophilus, le nombre estim est de
7.1.3 Arrondir les rsultats obtenus en 7.1.2 deux 4,9 x 108/g de yaourt.
chiffres significatifs. Pour un nombre de 3 chiffres, Ainsi le nombre total de micro-organismes
arrondir le 3me chiffre au zro le plus proche. Si le 3me caractristiques par gramme de yaourt est gal :
chiffre est 5, arrondir au chiffre infrieur dans le cas o les
2 premiers chiffres forment un nombre pair, et au chiffre (2,80 x 107 ) + ( 4,90 x 108 ) = 5,18 x 108
suprieur dans le cas o les 2 premiers chiffres forment un
nombre impair. qui, arrondi selon 7.1.3, donne :
5,20 x 108 /g de yaourt.
par exemple :
pour 234 arrondir 230 7.3 Prcision
235 240 Lexprience montre que si sur deux essais
indpendants, raliss sur le mme chantillon, celui
225 220
donnant les rsultats les plus levs dpasse frquemment
245 240 de 30% celui donnant les rsultats les plus faibles,
lanalyste devra revoir ses conditions opratoires pour
7.1.4 Si tous les dnombrements sont infrieurs 10, dterminer les sources derreurs.
indiquer que le nombre de micro-organismes par gramme
est infrieur 10 x 1/d, d tant la valeur correspondant 8/ Notes sur le mode opratoire
la dilution la plus faible.
Slectivit des milieux de culture
7.1.5 Si tous les dnombrements sont suprieurs 300,
calculer un nombre estim partir des botes ayant un Aucun des deux milieux de culture recommands
nombre de colonies le plus proche de 300 et le multiplier (MRS acidifi et M17) nest entirement slectif. La
par linverse de la valeur correspondant la dilution la plupart des souches de S.thermophilus ne forment pas
plus leve. Donner le rsultat sous la forme : Nombre de colonies visibles sur milieu MRS acidifi aux
estim de micro-organismes par gramme dans le cas le dilutions normalement utilises pour le dnombrement
plus faible. de L. bulgaricus. Toutefois, lorsque le nombre de
lactobacilles dans lchantillon de yaourt est
7.1.6 Le rsultat est exprim par un nombre compris considrablement plus faible que le nombre de
entre1,0 et 9,9 mutipli par 10x, x tant la puissance streptocoques des dilutions faibles doivent tre ralises
approprie de 10. pour le dnombrement de L.bulgaricus.
7.1.7 Le nombre total de micro-organismes Dans ces conditions, quelques S.thermophilus
carctristiques par gramme de yaourt est gal : peuvent former de trs petites colonies ou des colonies de
la taille dune pointe dpingle sur les botes de milieu
NL+ NS MRS acidifi; ces colonies sont faciles distinguer lil
o : nu des colonies de L.bulgaricus qui sont de taille plus
grande.
N L : est le nombre de L. bulgaricus par gramme, Par ailleurs, la plupart des souches de L. bulgaricus
calcul selon 7.1.2. ne forment pas de colonies visibles sur le milieu M17 aux
dilutions normalement utilises pour le dnombrement de
N S : est le nombre de S. thermophilus par gramme, S.thermophilus.
calcul selon 7.1.2. Des souches de L.bulgaricus peuvent cependant
former de petites colonies de la taille dune pointe
7.2 Exemple de calcul dpingle sur le milieu M17, gnralement avec des
chantillons de yaourt ayant un nombre beaucoup plus
Pour un chantillon donn de yaourt, les numrations de lev de lactobacilles que de streptocoques.
L. bulgaricus donnent le rsultat suivant (2 boites de Ptri
par dilution, ont t incubes). Ces petites colonies rugueuses ont gnralement un
aspect laineux ou cotonneux et peuvent facilement tre
Dilution 105 : 295 et 245 colonies ; distingues lil nu (et encore mieux la loupe) des
colonies lisses et lenticulaires de S.thermophilus qui sont
10-6 : 33 et 40 colonies ; plus grandes.

15
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 15
7 novembre 2004

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE ANNEXE

METHODE DE PREPARATION
Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au DES ECHANTILLONS POUR ESSAI
11 septembre 2004 rendant obligatoire une ET DILUTIONS
mthode de prparation des chantillons pour EN VUE DE L'EXAMEN MICROBIOLOGIQUE
essai et dilutions en vue de lexamen
microbiologique. 1. Dfinition

Pour les besoins de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes s'appliquent.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, 1.1 Dilution primaire (suspension mre) Suspension,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et solution ou mulsion obtenue aprs qu'une quantit pese
la rpression des fraudes ; ou mesure du produit analyser (ou de l'chantillon pour
essai prpar partir de ce produit) ait t mlange, si
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 ncessaire en utilisant un homognisateur et en observant
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions des prcautions appropries (6), avec neuf fois la mme
du ministre du commerce ; quantit de diluant (3), en laissant les grosses particules se
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414 dposer, si elles existent.
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux Il peut tre ncessaire dans certains cas notamment pour
spcifications et la prsentation de certains laits de les produits donnant une suspension mre 1 + 9 visqueuse
consommation ; ou trop paisse, d'ajouter davantage de diluant. Dans
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au d'autres cas, pour les rsultats d'essai en rapport avec
23 juillet 1994, modifi et complt, relatif aux certains critres de spcification, une dilution primaire
spcifications microbiologiques de certaines denres plus concentre que 1 + 9 peut tre demande. Il devra
alimentaires ; tre tenu compte de ce facteur dans la suite des oprations
et/ou dans l'expression des rsultats.
Arrte :
1.2 Dilutions dcimales suivantes : Suspensions,
Article 1er. En application des dispositions de mulsions ou solutions obtenues en mlangeant un
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier volume dtermin de la dilution primaire (1.l), avec neuf
1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour fois le mme volume de diluant appropri et en rptant
objet de rendre obligatoire une mthode de prparation cette opration sur chaque dilution ainsi prpare jusqu'
des chantillons pour essai et dilutions en vue de lexamen obtention d'une gamme de dilutions dcimales approprie
microbiologique. pour l'ensemencement des milieux de culture.

Art. 2. Pour la prparation des chantillons pour 2. Principe


lessai et les dilutions en vue de lexamen
microbiologique, les laboratoires du contrle de la Prparation de la dilution primaire (suspension mre)
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires (1.1) et, si ncessaire, des dilutions dcimales suivantes
agrs cet effet doivent employer la mthode dcrite en (1.2) en vue de rduire le nombre de micro-organismes
annexe. par unit de volume, pour faciliter l'examen
microbiologique.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. 3. Diluants
3.1 Composants de base
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et Pour amliorer la fidlit des rsultats, il est
populaire. recommand d'utiliser, pour la prparation du diluant, des
composants de base dshydrats ou une prparation
Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au complte dshydrate. Les prescriptions techniques
11 septembre 2004. doivent tre suivies scrupuleusement.
Les produits chimiques doivent tre de qualit
Noureddine BOUKROUH. analytique reconnue.

16
24 Ramadhan 1425
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

L'eau utilise doit tre de l'eau distille avec un Prparation


appareillage en verre, ou de l'eau dminralise. Elle doit
tre exempte de substances susceptibles d'inhiber la Dissoudre le sel dans 500 ml d'eau. Ajuster le pH de
croissance des micro-organismes dans les conditions de sorte qu'aprs strilisation, il soit de 7,2 0,l 25 C,
l'essai. Ceci doit tre contrl priodiquement en l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium ou d'acide
particulier dans le cas de l'eau dminralise. chlorhydrique 1 mol/1.

Des solutions d'hydroxyde de sodium ou d'acide Diluer 1000 ml avec de l'eau. Conserver cette solution
chlorhydrique ( 0,l mol/ l environ) doivent tre utilises mre au rfrigrateur.
pour ajuster le pH des diluants, sauf spcifications Avant emploi, ajouter 1 ml de cette solution mre
contraires. ( 20C) 1000 ml d'eau pour l'utiliser en tant que diluant.

3.2 Diluants pour emploi gnral 3.3 Diluants pour emplois particuliers
3.2.1 Solution peptone - sel 3.3.1 Solution de citrate de sodium (pour fromage,
fromage fondu et lait sec Hatmaker)
Composition
Peptone.....1,0 g Composition
Chlorure de sodium (NaCI).........8,5 g Citrate trisodique dihydrat (Na3C6H5O72H20).20,0 g
Eau..........1000 ml Eau ........................ 1000 ml

Prparation Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant, Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant entre 45 C
si ncessaire. et 50C.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation. il soit de Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,l 25C. 7,5 0,l 25C.

3.2.2 Solution de Ringer dilue au quart 3.3.2 Solution de monohydrogno-phosphate de


potassium (pour le fromage, le fromage fondu, la casine
Composition acide, les poudres de casine lactique, les casinates, les
Chlorure de sodium (NaCI).......2,25 g poudres de lactosrum acides et les acides et la crme
aigre).
Chlorure de potassium (KCI)..............0,105 g
Chlorure de calcium anhydre (CaCI2)..........0,06 g Composition
Hydrognocarbonate de sodium (NaHCO3)......0,05 g Monohydrogno-phosphate de potassium
Eau......1000 ml K2HPO4.........20,0 g
Eau .................1000 ml
Prparation
Dissoudre les sels dans l'eau. Prparation
Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant entre 45 C et
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
50C.
6,9 0,1 25C.
Ajuster le pH. Pour la dilution primaire de la casine
3.2.3 Solution de peptone acide, de la casine lactique et de la poudre de lactosrum
acide, le pH aprs strilisation doit tre de 8,4 0,1
Composition 25C. Pour les casinates, les fromages, les fromages
Peptone............1, 0 g fondus et la crme aigre, il doit tre de 7,5 0,1.

Eau......1000 ml 3.4 Rpartition, strilisation et conservation du


diluant
Prparation
Rpartir le diluant (3.2 ou 3.3) dans des fioles (4.4) pour
Dissoudre la peptone dans l'eau. la dilution primaire et dans des tubes essai (4.5) pour
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit les dilutions dcimales (3.2) en quantits telles
7,0 0,1 25C. qu'aprs strilisation, chaque fiole (4.4) contienne 9,0 ml
(ou d'autres quantits demandes) et chaque tube essai
3.2.4 Solution tampon de phosphate (4.5) contienne 9,0 ml de diluant ou un multiple de 9,0 ml
(ou autres quantits demandes).
Composition de la solution mre
Boucher les tubes et les fioles.
Dihydrognophosphate de potassium
Striliser l'autoclave 121 C1 pendant 15 minutes
(KH2PO4)..... 42,5 g (un temps plus long peut tre ncessaire pour des volumes
Eau..... 1000 ml plus importants).

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Si le diluant n'est pas utilis extemporanment le 4.4 Fioles, ayant une capacit suffisante pour
conserver l'obscurit entre 0 C et 5 C, pendant 1 mois contenir en laissant un espace libre suffisant pour
au maximum dans des conditions vitant toute permettre l'agitation 90 ml de diluant utilis pour la
modification de son volume ou de sa composition. suspension mre, ou des multiples de 90 ml.
Si l'on doit dnombrer plusieurs groupes de
micro-organismes en utilisant des milieux de cultures 4.5 Tubes essai, ayant une capacit suffisante pour
diffrents, il peut-tre ncessaire de rpartir tous les contenir, en laissant un espace libre suffisant pour
diluants (ou quelques-uns) en quantit suprieure 9,0 ml. permettre l'agitation, 10 ml (ou un multiple de 10 ml, si
La dimension des tubes essai et des fioles (4.5 et 4.4) ncessaire) de l'chantillon pour essai (s'il est liquide) ou
doit tre prvue en consquence. de la dilution primaire (autres cas), ou des dilutions
dcimales suivantes.
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Le matriel usage unique est acceptable au mme titre 4.6 Pipettes (bouches avec du coton), ayant une
que la verrerie rutilisable, si ses spcifications sont capacit nominale de 1 ml et une ouverture d'coulement
similaires. La verrerie doit pouvoir rsister des de 1,75 mm 3 mm de diamtre.
strilisations rptes et tre chimiquement inerte. N'utiliser que des pipettes non brches et, quand cela
est ncessaire, avec des graduations bien marques pour
Matriel courant de laboratoire de microbiologie,
les distinguer nettement du contenu.
notamment :

4.1 Appareils pour la strilisation en chaleur sche 4.7 Pipettes gradues (bouches avec du coton), de
(four) ou en chaleur humide (autoclave) (autoclave isol relativement grande capacit, par exemple de 10 ml ou
ou intgr dans un systme de prparation et de rpartition 20 ml.
de milieux). 4.8 Billes de verre, d'environ 6 mm de diamtre.
Le matriel destin entrer en contact avec le diluant,
l'chantillon pour essai, les dilutions, sauf s'il est livr 4.9 pH-mtre, compensation de temprature, prcis
strile (appareillage en plastique) doit tre strilis. 0,1 unit de pH.

a) soit au four, en le maintenant une temprature de 4.10 Balance, de porte suffisante et prcise 1 % de
170C 175C pendant au moins 1 heure. la masse nette pese.
b) soit l'autoclave, en le maintenant une temprature 4.11 Bain d'eau, rglable 45 C 1.
de 121C 1 pendant au moins 20 minutes.
4.12 Bain d'eau, rglable 37 C 1.
Cependant, les pipettes ne doivent pas tre strilises
l'autoclave, car l'humidit se condense sur les parois
internes lors du refroidissement et affecte la prcision du 5. ECHANTILLONNAGE
volume dlivr.
Lchantillonnage se fait dans des conditions
4.2 Appareillage pour l'homognisation appropries.

Un des appareils suivants doit tre utilis :


6. MODE OPERATOIRE
a) homognisateur rotatif, dont la frquence de rotation
est comprise entre 8000 min-1 et 45000 min-1, avec bols Pour certaines recherches spcifiques (par exemple,
en verre ou en mtal, muni de prfrence de couvercles, et Salmonella), des techniques spciales ou des prcautions
rsistant aux conditions de strilisation ; peuvent tre ncessaires. Pour ces cas des techniques
particulires sont mentionnes dans la mthode en
b) homognisateur de type pristaltique (stomacher), question.
avec des sacs striles en matire plastique.
Les oprations dcrites en 6.1.1 et 6.1.2 ne doivent
Les bols, les sacs en plastique ( type sac stomacher)
pas tre effectues la lumire directe du soleil.
doivent avoir une capacit suffisante pour permettre de
mlanger correctement l'chantillon avec la quantit Il convient de prendre les prcautions normales
approprie de diluant. En gnral, le volume du rcipient d'asepsie.
doit tre gal environ deux fois le volume de
lchantillon pour lessai avec le diluant.
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai et de la
4.3 Agitateur, capable de mlanger 1 ml ou 2 ml de dilution primaire
l'chantillon pour essai (cas des produits liquides) ou des
dilutions dcimales dans un tube de dimensions Pour viter d'endommager les micro-organismes par de
suffisantes, avec 9 ml ou 18 ml de diluant, afin d'obtenir brusques changements de temprature, la temprature du
une suspension homogne et dont le principe est bas sur diluant, pendant les oprations dcrites ci-dessous, doit
un mouvement de rotation excentr du contenu des tubes tre du mme ordre que celle de l'chantillon pour essai,
essai (par exemple, agitateur Vortex). sauf spcifications contraires.

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6.1.1 Lait et produits laitiers liquides Lors de l'utilisation de l'homognisateur rotatif ou de


Agiter vigoureusement l'chantillon pour essai afin l'homognisateur de type pristaltique, ajouter 90 ml de
d'assurer une rpartition aussi uniforme que possible des diluant (3.2), (3.3.1) ou (3.3.2) pH 7,5 0,1.
micro-organismes, en inversant rapidement 25 fois le Mlanger jusqu' ce que le produit soit compltement
rcipient contenant l'chantillon. Il faut viter la formation dispers (1 minute 3 minutes). Dans le cas de
de mousse ou bien la laisser se disperser. L'intervalle l'homognisateur rotatif, oprer pendant un temps
entre le mlange et le prlvement de la prise d'essai ne suffisant pour obtenir un total de 15 000 rvolutions
doit pas dpasser 3 minutes. 20 000 rvolutions.
Prlever 1 ml de l'chantillon pour essai l'aide d'une Mme avec l'homognisateur rotatif le plus lent, ce
pipette strile (4.6) et rajouter 9 ml de diluant (3.2) (ou temps ne doit pas excder 2,5 minutes. L' idal est que la
10 ml d'chantillon pour essai 90 ml de diluant ou 11 ml temprature de dispersion ne dpasse pas 40 C, et en
99 ml). aucun cas elle ne doit tre suprieure 45 C. Laisser la
Agiter cette dilution primaire (par exemple, 25 fois avec mousse se disperser.
un mouvement de 300 mm en 7 secondes). On obtient Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
alors la dilution 10-1.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2. 6.1.4 Casine acide, casine lactique et poudre acide
de lactosrum
6.1.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en
poudre et lactose Peser 10 g d'chantillon pour essai dans une capsule.

Mlanger soigneusement le contenu du rcipient ferm Les placer dans une fiole de dilution munie de billes de
en le secouant de faon rpte par inversion. verre (4.8) contenant 90 ml de diluant
d'hydrognophosphate dipotassique (3.3.2) pH 8,4 0,l
Si l'chantillon pour essai enferm dans son emballage
pour les casines acide et lactique.
d'origine est trop plein pour permettre un mlange
vigoureux, le transfrer dans un rcipient plus grand. Laisser pendant 15 minutes temprature ambiante,
Mlanger. Ouvrir le rcipient, prlever la prise d'essai puis lever la temprature 37 C 1 au bain d'eau
demande l'aide d'une spatule en procdant comme (4.12).
indiqu ci-dessous.
Refermer immdiatement le rcipient. Garder les fioles 37 C pendant 15 minutes et secouer
vigoureusement par intervalles.
Chauffer au bain d'eau (4.11) une fiole contenant 90 ml
d'un diluant adquat (3.2) ou, si ncessaire, pour la Eviter l'emploi d'un homognisateur rotatif (4.2 a) ou
poudre de lait Hatmaker (3.3.1) un pH 7,5 0,1 d'un homognisateur de type pristaltique (4.2 b) cause
45C 1. de la formation de mousse.
Peser 10 g de d'chantillon pour essai dans un rcipient Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
de verre appropri (par exemple, un bcher) et verser
lentement la poudre dans la fiole de dilution contenant le 6.1.5 Casinates
diluant choisi. Sinon, peser 10 g de lchantillon pour
essai directement dans la fiole avec le diluant. Soit peser 10 g d'chantillon pour essai dans une
Afin de dissoudre, tourner lentement pour hydrater la capsule et les placer dans le rcipient de
poudre, puis agiter 25 fois la fiole pendant environ 10 l'homognisateur rotatif (4.2a) ou de l'homognisateur
secondes avec un mouvement d'environ 300 mm. On peut de type pristaltique (4.2b), soit peser 10 g dchantillon
utiliser un homognisateur de type pristaltique (4.2 b) pour essai directement dans le rcipient. Ajouter 90 ml de
comme autre moyen d'agitation. diluant d'hydrognophosphate dipotassique (3.3.2) pH
7,5 0,l temprature ambiante.
Replacer la fiole dans le bain d'eau pendant 5 minutes
agiter occasionnellement. Mlanger pendant environ 2 minutes. Dans le cas de
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2. l'homognisateur rotatif, oprer pendant un temps
suffisant pour obtenir un total de 15000 rvolutions
Dans le but d'avoir une meilleure reconstitution, en 20000 rvolutions. Mme avec l'homognisateur rotatif
particulier pour la poudre de lait hatmaker, il peut tre le plus lent, ce temps ne doit pas excder 2,5 minutes.
utile de se servir de billes de verre (4.8). Dans ce cas, il
conviendra de les mettre dans les fioles avant Elever la temprature 37 C 1 au bain d'eau (4.12).
strilisation.
Transfrer dans une fiole dilution strile, dans le cas
6.1.3 Fromage et fromage fondu de l'homognisateur rotatif.
Soit peser 10 g de l'chantillon pour essai dans une Garder 37 C 1 pendant 15 minutes.
capsule et les placer dans le rcipient de
l'homognisateur rotatif (4.2 a) ou de l'homognisateur Laisser la mousse se disperser avant de poursuivre.
de type pristaltique (4.2 b), soit peser directement 10 g
d'chantillon pour essai dans le rcipient. Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.

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6.1.6 Beurre Si de plus grands volumes doivent tre utiliss,


introduire 10 ml de la dilution primaire dans une fiole
Peser 10 g d'chantillon pour essai dans un rcipient et contenant 90 ml de diluant strile (3.2) ou 11 ml de la
le placer dans le bain deau (4.11) 45 C 1. Garder le dilution primaire 99 ml de diluant strile (3.2).
rcipient dans l'eau jusqu' ce que l'chantillon soit juste
fondu. Dans la pratique courante, quand on exige une dilution
10-3, 1 ml de la dilution primaire devrait tre rajout 99
Ajouter 90 ml de diluant (3.2). ml de diluant strile (3.2).
Mlanger. Cette opration est plus facilement ralise Mlanger soigneusement, soit par aspiration refoulement,
dans l'homognisateur de type pristaltique (4.2b). 10 fois, avec une nouvelle pipette, soit en utilisant un
agitateur mcanique (4.3) pendant 5 10 secondes pour
On peut galement travailler uniquement sur la phase obtenir la dilution 10-2.
aqueuse pour la dilution, comme suit :
La vitesse de rotation doit tre choisie de sorte que le
Prendre une prise de 50 g contenant environ 8 ml d'eau liquide tournoyant affleure 2 3 cm du bord du
et ajouter 42 ml de diluant (3.2.3) rchauff 45 C. rcpient.
Placer le rcipient dans un bain d' eau (4.11) Si ncessaire, rpter ces oprations avec le diluant
45C1 jusqu' ce que le beurre soit fondu. Bien strile (3.2) en utilsant la dilution 10 -2 et les suivantes
mlanger et laisser sparer pendant 15 min. au maximum. pour obtenir les dilutions 10 -3, 10 -4, etc... jusqu
obtention du nombre appropri de micro-organismes par
Si ncessaire, pour sparer les phases, placer millilitre (voir 2).
l'chantillon pour lessai fondu dans un tube centrifuger
strile (ou faire fondre l'chantillon pour essai directement Lorsque 10 ml plus 90 ml ou 11 ml plus 90 ml ont t
prlevs, ajouter manuellement comme indiqu en 6.1.1.
dans le tube), et centrifuger une frquence de rotation de
1000 min-1 2000 min-1.
6.3 Dure des oprations
Prlever strilement la phase grasse (suprieure) avec Le temps qui scoule entre la fin de la prparation de la
un tube strile reli une pompe vide. Prlever la dilution primaire et le mlange des dilutions et des
couche infrieure. milieux (dcrit selon les mthodes spcifiques) ne doit pas
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2. tre suprieur 15 minutes.

6.1.7 Produits laitiers congels (y compris les glaces
de consommation) Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au 11
septembre 2004 rendant obligatoire une mthode
Procder comme indiqu pour le beurre (6.1.6) de contrle microbiologique pour le lait
(premire alternative), mais en utilisant un bain d'eau pasteuris.
(4.12) 37 C 1 au maximum.
La temprature de l'chantillon pour essai ne doit pas Le ministre du commerce,
dpasser la temprature de ce bain d'eau. Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2. modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
6.1.8 Flans, desserts, lait fermet et crme Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
Peser 10g dchantillon pour essai dans une fiole (4.4) correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
contenant des billes de verre (4.8) du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
Pour les flans, les desserts et la crme douce ajouter correspondant au 18 aot 1993 relatif aux
90 ml de diluant (3.2) et agiter pour disperser. spcifications et la prsentation de certains laits de
Pour le lait fermet et la crme acide utiliser le diluant consommation ;
3.3.2 pH 7,5 0,1. On peut utiliser un homognisatur Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23
de type pristalique (4.2 b). juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
spcifications microbiologiques de certaines denres
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2. alimentaires ;
6.2 Dilutions dcimales suivantes : Arrte :
Dans le cas de la recherche de la prsence ou de Article 1er. En application des dispositions de
labsence dun micro-organisme dans 0,1ml ou 0,1 g de larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
produit, il nest pas ncessaire de prparer les dilutions 1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
dcimales. pour objet de rendre obligatoire une mthode de contrle
microbiologique pour le lait pasteuris.
Introduire avec une nouvelle pipette 1 ml de la dilution
primaire (par exemple 6.1.1 ou 6.1.2) dans un nouveau Art. 2 Pour le contrle microbiologique du lait
tube contenant 9 ml de diluant strile (3.2) en vitant le pasteuris, les laboratoires du contrle de la qualit et de
contact de la pipette avec le diluant. Utiliser une nouvelle la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
pipette pour chaque dilution. effet doivent employer la mthode dcrite en annexe.

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Cette mthode doit tre galement utilise par le Mlanger soigneusement chacune des dilutions pendant
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. 5 10 secondes au moyen d'un agitateur mcanique
mouvement de rotation excentr au moment de leur
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal prparation et avant les ensemencements.
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. 3. Dnombrement des micro-organismes arobies
30 C.
Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004. Glose pour dnombrement
Noureddine BOUKROUH
3.1 Composition
Peptone pancratique de casine (tryptone)........5,0 g
ANNEXE Extrait de levure dshydrate...................2,5 g
METHODE DE CONTROLE MICROBIOLOGIQUE Glucose anhydre...................................1,0 g
POUR LE LAIT PASTEURISE Lait crm en poudre(exempt de substances
inhibitrices)...................................................................10 g
1. Prparation de l'chantillon pour essai Ou lait crm (exempt de substances inhibitrices) 10 ml
Il est ncessaire de rendre l'chantillon homogne avant Agar-agar...........................................12 18 g
chaque analyse, par exemple, agiter soigneusement en Eau distille.............................................1000 ml
inversant rapidement 25 fois le premballage, ou
appliquer des techniques appropries donnant des rsultats 3.2 Prparation
identiques.
Faire dissoudre les composants ou le milieu complet
Ouvrir aseptiquement le premballage aprs avoir dshydrat dans l'eau en portant bullition. Si
nettoy l'thanol la surface d'ouverture. ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il
Procder l'analyse bactriologique dans un dlai soit de 7 0,l 25 C.
n'excdant pas trois minutes. Rpartir raison de 100 ml dans des flacons de
Jusqu'au moment de l'analyse, conserver l'chantillon capacit approprie ou de 12 15 ml dans des tubes de
6 C. 18 x 180 mm ou 20 x 200 mm.
2. Dilutions dcimales Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant 20 minutes.
Le milieu peut tre conserv trois mois au maximum et
La prparation des dilutions dcimales est effectue l'obscurit entre 0C et 5C.
avec le diluant suivant.
3.3 Mode opratoire
2.1 Composition
Transfrer en double 1 ml des dilutions retenues (2.3)
Peptone pancratique de casine (tryptone)........1 g dans des botes de Ptri striles de 90 ou 100 mm de
Chlorure de sodium..............................................8,5 g diamtre. Couler 12 15 ml de milieu, fondu au pralable
Eau distille.....................................................1000 ml et refroidi dans un bain d'eau 45 C 0,5 (le maintien
dans le bain d'eau ne doit pas excder trois heures).
2.2 Prparation Mlanger soigneusement l'inoculum au milieu.
Faire dissoudre les composants dans l'eau en chauffant Laisser solidifier en posant les botes sur une surface
lgrement. Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs frache et horizontale.
strilisation il soit de 7 0,l 25 C. Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
Rpartir, par exemple, raison de 100 ml dans des 30C 1 pendant 72h 2 h..
flacons de capacit approprie. Le dlai entre la prparation des dilutions et
Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant vingt l'introduction de la glose dans les botes ne doit pas
minutes. excder 15 minutes.

2.3 Prparation des dilutions dcimales 3.4 Expression des rsultats


Au moment de l'emploi, distribuer aseptiquement le Retenir pour comptage, les botes de Ptri contenant un
diluant raison de 9 ml dans des tubes striles de nombre de colonies compris entre 10 et 300. Utiliser, si
20 x 200 mm. Pour la prparation des dilutions, utiliser le ncessaire, une loupe d'un grossissement de 1,5 au
diluant temprature ambiante. maximum.
Une dilution au 1/10 est obtenue en transfrant 3.5 Mode de calcul
aseptiquement 1 ml de lait l'aide d'une pipette de 1 ml Calculer le nombre de micro-organismes par millilitre
strile dans 9 ml de diluant (2.1.). Une dilution au 1/100 de lait l'aide de la formule suivante :
est obtenue en transfrant 1 ml de la dilution au 1/10
l'aide d'une nouvelle pipette de 1 ml strile dans un second Nombre/ml = Nombre total de colonies comptes
tube de diluant. Volume ensemenc de lchantillon
Procder de manire identique pour les dilutions ou c
suivantes. (n1 + 0,1 n2) d

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o : 4.2 Prparation
c : Somme totale des colonies comptes.
La prparation est extemporane. Prparer la quantit
nl : Nombre de botes comptes dans la premire ncessaire ne pas striliser l'autoclave.
dilution.
n2 : Nombre de botes comptes dans la seconde Faire dissoudre les composants ou le milieu
dilution. complet dshydrat dans l'eau en portant bullition.
Refroidir le milieu en le maintenant dans un bain d'eau
d : Facteur de dilution partir duquel les premiers 45 0,5 C.
comptages ont t obtenus.
Exemple : Dilution 10-2 278 et 290 colonies. Eviter de surchauffer le milieu : un chauffage prolong
ou des chauffages rpts diminuent son pouvoir slectif
Dilution 10-3 33 et 28 colonies.
et nuisent la spcificit de l'preuve.
Nombre/ml : 278 + 290 + 33 + 28 629
= = 28590 4.3 Mode opratoire
(2 + 0,1 x 2) 10-2 0,022
Transfrer en double 1 ml de lait et 1 ml d'une
Pour exprimer le nombre de microorganismes, arrondir
dilution au 1/10 (2.3) dans les botes de Ptri striles de
le nombre deux chiffres significatifs.
90 ou 100 mm de diamtre.
Quand le chiffre qui doit tre arrondi est 5, arrondir de
manire que la valeur indique immdiatement gauche Couler 12 ml de glose au dsoxycholate et mlanger
soit paire. linoculum avec le milieu. Laisser solidifier en posant les
botes sur une surface frache et horizontale. Lorsque le
Dans l'exemple, le rsultat devra tre arrondi 29 000 milieu est solidifi, couler environ 4 ml de milieu non
ou ensemenc. Laisser solidifier nouveau.
2,9 x 10 4 si les botes contiennent moins de 10 colonies
donner le nombre de micro-organismes par millilitre sous 4.3.1 Coliformes 30 C
la forme moins de 10 x d, d tant l'inverse du facteur
de dilution le plus faible. Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
30C 1C pendant 24 heures 2 h.
Si les botes contiennent plus de 300 colonies, faire une
estimation partir des botes ayant un comptage proche de 4.3.2 Coliformes fcaux
300 colonies. Donner le rsultat avec l'indication Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
nombre estim de micro-organismes par millilitre .
44 C 1 C pendant 24 heures 2 h.
Le rsultat peut-tre exprim par un nombre compris
entre 1 et 9,9 multipli par 10x, x tant la puissance de 4.4 Expression des rsultats
10 approprie.
4.4.1 Slection des botes
L'exprience montre que si le rsultat le plus lev de Retenir pour comptage, les botes de Ptri contenant
deux essais indpendants sur le mme chantillon dpasse moins de 150 colonies caractristiques rouge fonc dun
frquemment le rsultat le plus bas de 30 %, l'analyste diamtre dau moins 0,5 mm.
doit exprimer son mode opratoire afin de dterminer les
sources d'erreurs. 4.4.2 Mode de calcul
4. Dnombrement des coliformes 30 C et des Donner le rsultat des coliformes par millilitre de lait
coliformes fcaux. aprs avoir effectu la moyenne arithmtique des colonies
comptes sur botes ensemences par le mme volume de
Utiliser la glose lactose 0,5 de dsoxycholate de l'chantillon. Le rsultat peut tre obtenu galement
sodium partir de la moyenne arithmtique entre les valeurs
obtenues par l'examen de 1 ml de lait et dilution dcimale,
4. 1 Composition sauf lorsque le rapport de la valeur la plus faible est
Peptone......................................................10 g suprieur 2; dans ce cas, retenir comme rsultat la valeur
la plus faible.
Lactose..............................................................10 g
Si les valeurs sont obtenues depuis une dilution
Dsoxycholate de sodium............................0,5 g
dcimale, multiplier par l'inverse du facteur de dilution.
Chlorure de sodium.............................................5 g
Le rsultat peut tre exprim par un nombre compris
Citrate de sodium................................................2 g entre 1 et 9,9 multipli par10x x tant la puissance de
10 approprie.
Agar agar ..............................................12 15 g
Rouge neutre..........................................0,03 g 5. Dnombrement de staphylococcus
Eau distille ............................................1000 ml Utiliser la glose BAIRD PARKER.

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22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

5.1 Composition Botes de 140 mm : laide d'un taleur en verre strile,


Peptone pancratique de casine (tryptone)..........10 g taler la surface du milieu la totalit du volume.
Extrait de levure......................................................1 g Botes de 90 ou 100 mm : distribuer 1 ml la surface du
Extrait de viande.....................................................5 g milieu de trois botes de Ptri sous forme de trois fractions
sensiblement gales, puis taler en utilisant le mme
Glycine .................................................................12 g
taleur pour les trois boites.
Chlorure de lithium.................................................5 g
Agar-agar ..................................................12 20 g Attendre 15 minutes avant de placer les botes de Ptri
retournes dans une tuve 37 1 C pendant 24
Eau..................................................................1000 ml 48 heures.
Faire dissoudre les composants dans de l'eau en portant
bullition. Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs 5.3.2 Slection des botes et choix des colonies
strilisation il soit de 7,2 0,l 25 C. Aprs 24 et 48 heures d'incubation, marquer sur le fond
Rpartir le milieu raison de 90 ml dans des flacons de des botes les colonies caractristiques et/ou non
capacit approprie. caractristiques.
Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant 15 minutes. Colonies caractristiques : Colonies noires, brillantes,
Le milieu de base peut tre conserv un mois entre convexes, entoures d'une zone transparente qui peut tre
0 et + 5 C. translucide. Aprs 24 heures, peut apparatre dans cette
zone transparente un anneau opalescent immdiatement au
5.2 Milieu complet et prparation des botes contact des colonies.
Au moment de l'emploi, aprs fusion du milieu de
Colonies non caractristiques : Colonies noires,
base (5.1) faire refroidir dans un bain d'eau 50 C et
brillantes convexes ou gris noirtre ayant parfois un aspect
ajouter 90 ml :
mat et une texture sche, dpourvues de zone transparente
Solution aqueuse 1 % de tellurite de potassium : 1 ml ; (exceptes certaines colonies gris noirtre).
Solution aqueuse 20 % de pyruvate de sodium : 5 ml ; Retenir pour comptage, les botes contenant moins de
Emulsion de jaune duf, concentration environ 250 colonies caractristiques et/ou non caractristiques
20 % : 5 ml. par bote de 140 mm; 150 colonies caractristiques et/ou
non caractristiques par boite de 90 ou 100 mm.
Mlanger soigneusement entre chaque addition et
couler le milieu raison de 28 1 ml dans des boites de Prlever en vue de l'preuve de la coagulase un nombre
Ptri de 140 mm de diamtre ou de 15 ml ou 20 ml dans maximum de cinq colonies caractristiques et/ou non
des botes de Ptri de 90 mm ou 100 mm de diamtre caractristiques en tenant compte de leur nombre
respectivement. respectif.
Laisser solidifier, puis scher les botes en les plaant De manire identique, dix colonies au maximum seront
retournes couvercles largement ouverts, dans une tuve prleves dans le cas d'un volume rparti en trois fractions
entre 45 C et 53 C durant 30 minutes. ou en double.
Procder aux ensemencements dans les 30 minutes qui
suivent la fin du schage. 5.3.3 Epreuve de la coagulase
Les botes contenant la glose Baird Parker non Ensemencer la colonie dans un bouillon cur et incuber
sches peuvent tre utilises pendant 24 heures dans une tuve 37 C durant 20 24 heures.
entre 0C et +5 C.
Pour l'preuve de la coagulase, utiliser un plasma de
Si l'on suspecte la prsence de Proteus, il est conseill lapin contenant de l'E.D.T.A. (acide thylne diamine
d'ajouter une solution de sulfamzathine. ttra-actique), dfaut ajouter une solution d'E.D.T.A. de
Sulfamzathine.....................................0,2 g sorte que la concentration finale dans le plasma rhydrat
soit de 0,l %.
Solution d'hydroxyde de sodium 0,l mol/1.........10 ml
Eau Q.S.P..............................................100 ml Lpreuve est reconnue positive lorsque le coagulum
occupe plus des trois quarts du volume initial.
Dissoudre la sulfamzathine dans la solution
d'hydroxyde de sodium, complter 100 ml avec de l'eau. 5.4 Expression des rsultats
Striliser cette solution par filtration sur membrane.
Si au moins 80 % des colonies examines sont
Au moment de l'emploi, aprs fusion de la glose, coagulase positive, considrer que la totalit des colonies
ajouter 27,5 ml de cette solution 100 ml de milieu de dnombres correspond Staphylococcus aureus , sinon,
base. exprimer le rsultat global en tenant compte des
proportions (colonies caractristiques et colonies non
5.3 Mode opratoire caractristiques).
5.3.1 Ensemencement
Le rsultat peut tre exprim par un nombre compris
Selon le format des botes de Ptri, l'ensemencement de entre 9,9 multipli par 10 x, x tant la puissance de 10
1 ml de lait sera pratiqu de la manire suivante : approprie.

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24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 23
7 novembre 2004

6. Recherche des Salmonella Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au


6.1 Utiliser les milieux complets dshydrats 23 juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
correspondant aux indications donnes ci-dessous. spcifications microbiologiques de certaines denres
alimentaires ;
6.2 Mode opratoire
6.2.1 Prenrichissement Arrte :
Afin de rduire la charge de travail, prlever Article 1er. En application des dispositions de
aseptiquement de chacune des cinq units, 250 ml de larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
lait et les rassembler dans un rcipient strile de 1,5 2 1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour
litres. objet de rendre obligatoire une mthode de dnombrement
Abandonner la temprature ambiante pendant 1 heure, des coliformes pour les crmes glaces et les glaces au
si ncessaire, ajuster le pH 6,8 environ. Introduire lait.
aseptiquement 2,25ml d'une solution aqueuse 1 % de
vert brillant. Mlanger soigneusement. Art. 2. Pour le dnombrement des coliformes dans
les crmes glacs et les glaces au lait , les laboratoires du
Incuber l'tuve 37 C pendant 20h 2 heures.
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
6.2.2 Enrichissement laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Introduire 10 ml de lait prenrichi dans 100 ml de
bouillon Muller Kauffmann au ttrathionate et au vert Cette mthode doit tre galement utilise par le
brillant ; faire incuber dans un bain d'eau 43 C 1 laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
pendant quarante-huit heures. Et dans 100 ml de bouillon
au slnite-cystine, faire incuber l'tuve 37 C 1 Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
pendant quarante-huit heures. officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
6.2.3 Isolement
Aprs l'incubation, pratiquer partir de chaque bouillon Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au
des isolements. Effectuer les isolements la surface de 11 septembre 2004.
deux milieux slectifs solides couls de prfrence dans Noureddine BOUKROUH.
des botes de Ptri de 140 mm.
Utiliser la glose au vert brillant et au rouge de phnol, ANNEXE
et la glose au sulfate de bismuth.
En raison de l'existence possible de Salmonella METHODE DE DENOMBREMENT
atypiques, lactose +, on peut substituer la glose au vert DES COLIFORMES DANS LES CREMES
brillant et au rouge de phnol par un autre milieu slectif, GLACEES ET LES GLACES AU LAIT
par exemple : la glose XLD, la glose Hektoen.
Retourner les botes ltuve 37 C pendant dix huit 1. DEFINITION
vingt heures. Si le dveloppement est insuffisant,
poursuivre lincubation. On appelle coliformes, les bactries en forme de
btonnets, Gram ngatives, arobies et facultativement
Soumettre aux preuves biochimiques classiques un
anarobies, non sporules, qui fermentent le lactose avec
nombre suffisant de colonies caractristiques ou
formation de gaz et d'acide.
douteuses.

2. PRINCIPE DE LA METHODE
Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004 rendant obligatoire une 2.1 Mthode de rfrence
mthode de dnombrement des coliformes pour Trois sries de dilutions en parallle obtenues partir de
les crmes glaces et les glaces au lait. l'chantillon du produit servant ensemencer le milieu
liquide slectif Vert Brillant lactos la bile de buf
Le ministre du commerce, dans des tubes essai contenant de petits tubes de
Durham. On incube les tubes pendant 48 heures + 2 h
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, 30C 1.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ; Les tubes positifs (production de gaz dans les tubes de
Durham) seront soumis confirmation par repiquage
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
d'une ose dans un nouveau tube du mme milieu. A partir
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
des tubes pour lesquels le test est positif, aprs
du ministre du commerce ;
confirmation, on dtermine le nombre le plus probable de
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414 bactries coliformes par g du produit en se rfrant au
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications tableau du nombre le plus probable (NPP) pour trois sries
et la prsentation de certains laits de consommation ; parallles.

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24 Ramadhan 1425
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

2.2 Mthode de routine 3.2.3 A ces 10 g (ou un poids voisin de ces 10 g)


ajouter dans le flacon contenant des perles de verre, 90 ml
On ensemence le milieu solide Rouge Violet Bile (ou 9 fois le poids voisin de 10 g exactement connu),
Agar coul en botes de Ptri, avec une srie de d'une solution de Ringer au quart pralablement chauffe
dilutions de l'chantillon du produit. Aprs une incubation 45 C. Aprs avoir bouch le flacon, agiter le contenu
de 22h 2 h. 30 C 1, on compte le nombre de vingt fois par des mouvements d'une amplitude de 30 cm
colonies rouges caractristiques. Ce nombre, aprs avoir environ.
t multipli par le facteur de dilution, exprime le nombre
de bactries coliformes par g du produit. 4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
(La mthode au vert brillant figurant au paragraphe 2.1 Matriel courant de laboratoire.
peut galement, aprs modification, tre utilise en tant
que mthode de routine. Dans ce cas, on omettra 5. MILIEUX DE CULTURE
l'ensemencement en sries parallles ncessaires
l'utilisation du tableau du NPP et la confirmation des 5.1 La composition du milieu Vert Brillant lactos la
tubes positifs). bile de buf est la suivante :
3. ECHANTILLONNAGE Peptone..............................................................10 g
Lactose .............................................................10 g
3.1 Echantillonnage de laboratoire Bile de buf dshydrate..............................20 g
3.1.1 Dans le cas des crmes glaces ou glaces au lait se Vert brillant........................................0,0133 g
prsentant sous la forme de petits emballages, on Eau distille (dans un appareil en verre)....1000 ml
prlvera des units compltes dans leur emballage
d'origine. 5.2 Pour prparer 1000 ml du milieu, dissoudre peptone
et lactose dans environ 500 ml d'eau distille. Dissoudre
3.1.2 Dans le cas de crmes glaces et de glaces au lait 20 g de bile de buf anhydre dans 200 ml d'eau distille.
en vrac (pour la vente dans les tea-rooms, dans les Le pH de cette solution doit tre compris entre 7,0 et 7,5.
restaurants, ou par distributeurs automatiques pour self Mlanger les deux solutions; ajuster le pH, mesur l'aide
service, etc.) ; et en grands emballages, on prlvera, en d'une lectrode en verre 7,4; ajouter 13,3 ml d'une
s'entourant de prcautions aseptiques, 30 50 grammes du solution aqueuse 0,l% de vert brillant. Le volume est
produit au total en procdant par sondage des endroits complter 1000 ml avec de l'eau distille.
aussi varis que possible. Ces chantillons seront
conservs -5 C dans des flacons large col, munis de 5.3 Verser 10 ml du milieu (5.2) dans les tubes essai.
couvercle vis. Ces tubes sont munis de tubes de Durham. Aprs le
3.1.3 Les chantillons (3.1.1 et 3.1.2) devront tre remplissage, striliser pendant 15 minutes dans des
maintenus congels avant l'analyse. Ils seront transports autoclaves rgls 121 C. Aprs strilisation, le pH doit
au laboratoire pour analyse, dans des rcipients rfrigrs. tre de 7,2 0,1.
L'analyse devra de prfrence tre effectue Pour les ensemencements de 10 g, les constituants du
immdiatement. milieu doivent tre augments de 100% et les tubes essai
munis de tubes Durham doivent recevoir 10 ml du milieu.
Dans le cas contraire, conserver les chantillons dans
une enceinte rfrigre -15 C maximum.
5.4 La composition du milieu Rouge Violet Bile
Agar suivante :
3.2 Prparation des chantillons
Extrait de levure..................................................3 g
3.21 Avant ensemensement du milieu, les chantillons
seront liquifis de la faon suivante : Peptone ...................................................................7 g
Sels biliaires.........................................................1,5 g
Dans le cas des chantillons prlevs selon 3.11 : ter
lemballage et disposer les chantillons dans un rcipient Lactose .....................................................10 g
strile en verre que lon refermera. Chlorure de sodium.....................................5 g
Dans le cas des chantillons prlevs selon 3.12 : les Rouge neutre..........................................0,03 g
maintenir dans les flacons. Cristal violet.........................................0,002 g
Ces deux types d'chantillons seront liqufis, dans les Glose....................................................10 15 g
rcipients ou les flacons, en les plaant, juste le temps (en fonction des proprits glifiantes de la glose
ncessaire leur fusion, au bain-marie ou dans un utilise).
incubateur, 45C 1.
5.5 Dissoudre les ingrdients dans de l'eau distille ;
3.2.2 Mlanger intimement les chantillons liqufis et laisser reposer pendant quelques minutes ; mlanger
prlever, en s'entourant de prcautions aseptiques, 10 ensuite nergiquement et ajuster le pH 7,4 en le
grammes (ou un poids voisin exactement connu) dans un mesurant l'aide d'une lectrode de verre. Porter
flacon cylindre - conique contenant des perles de verre. bullition en agitant de temps en temps; laisser bouillir
On pourra se servir cet effet d'une cuillre ou d'une pendant deux minutes. Refroidir le milieu 45 C environ
pipette, en fonction de la consistance du produit. et en couler 10 ml par bote de Ptri.

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24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 25
7 novembre 2004

5.6 Le milieu doit tre prpar peu avant l'utilisation et 7.2 Ensemencement du milieu
ne doit pas tre strilis l'autoclave, ce qui attnuerait sa
slectivit. Le milieu doit tre employ, si possible, dans 7.2.1 Ensemencement des tubes avec le Vert Brillant
les trois heures suivant sa prparation. lactos la bile de buf :

5.7 Il est recommand d'utiliser pour ces milieux (5.1 et Ensemencer les tubes avec la quantit dsire de
5.4) une prparation anhydre prte lemploi. Dans ce l'chantillon et les dilutions correspondantes l'aide d'une
cas, les prescriptions techniques doivent tre suivies pipette strile. Mlanger soigneusement, en vitant
scrupuleusement et on prparera toujours un tmoin. d'introduire des bulles d'air dans les tubes de Durham;

Ensemencer en parallle dans trois tubes chaque


6. DILUANT quantit d'chantillon et chaque dilution et oprer au
Solution de Ringer au quart. La composition de la moins sur trois dilutions par exemple 1g ; 0,l g et 0,01 g.
solution concentre est la suivante :
En gnral, on doit prvoir un nombre de dilutions
Chlorure de sodium (NaCI)...............................9,00 g suffisant pour que les trois tubes parallles de la dilution
la plus leve demeurent ngatifs. Ce n'est que par ce
Chlorure de potassium (KCI)............................0,42 g
moyen que les rsultats les plus exacts peuvent tre
Chlorure de calcium anhydre (CaCI2)..........0,24 g obtenus.
Bicarbonate de sodium (NaHCO3)................0,20 g 7.2.2 Ensemencement des botes de Ptri
Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml
Introduire dans les botes 1 ml de l'chantillon, et 1 ml
Pour l'emploi, ajouter une partie de la solution des autres dilutions dsires;
prcdente, trois parties d'eau distille. La solution
Dans chaque bote, verser 10 ml du milieu
dilue est strilise par chauffage pendant 15 minutes
Rouge Violet Bile Agar fondu, amen une
120 C.
temprature de 45 C.
On peut galement employer une solution de peptone
0,1% en lieu et place de la solution de Ringer dilue au Immdiatement aprs avoir vers le milieu, le mlanger
quart. l'inoculum par cinq mouvements de va-et-vient, suivis
de cinq mouvements circulaires dans le sens des aiguilles
On peut galement utiliser des pastilles prtes d'une montre, puis de cinq mouvements de va-et-vient
lemploi reprsentant une dose toute prpare. excuts perpendiculairement aux premiers, et enfin de
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique. cinq mouvements circulaires en sens contraire des
aiguilles dune montre. Aprs glification, recouvrir la
surface de la bote de 4 ml de milieu encore liquide et
7. MODE OPERATOIRE laisser glifier.
7.1 Prparation des dilutions
7.3 Incubation des tubes et des botes de Ptri
7.1.1 Pour l'ensemencement direct du milieu nutritif
Cas de la mthode de rfrence (2.1) : on introduit 7.3.1 Les tubes (par. 7.2) seront incubs pendant 48 h.
1 ml de l'chantillon dans chacun des trois tubes contenant 2 h 30C 1.
10 ml de vert brillant lactos la bile de buf et un tube
de Durham, et on mlange soigneusement cette portion de 7.3.2 Les botes de Ptri prpares comme dcrit
l'chantillon avec le milieu nutritif en vitant toutefois la au paragraphe 7.2.2 ci-dessus sont incubes pendant 22 h.
formation de bulles d'air dans le tube de Durham. 2 h. 30C 1.
La dure d'incubation doit tre respecte
Cas de la mthode de routine (2.2) : on procde de la scrupuleusement.
mme faon que ci-dessus mais on n'ajoute 1 ml de
l'chantillon qu' un seul tube ( au lieu de trois ). 7.4 Dnombrement des bactries coliformes
Si on utilise le milieu Rouge violet Bile Agar , on
introduit directement 1 ml de l'chantillon dans une bote 7.4.1 Cas de la mthode de rfrence (2.1)
de Ptri.
Le test est considr comme positif lorsqu'il y a
7.1.2 On procdera comme suit pour les autres dilutions production visible de gaz dans les tubes de Durham. Le
nombre de tubes positifs confirms (2.1) est dterminant
Inoculer 1 ml du mlange (3.2.3) directement dans pour la lecture du nombre le plus probable (NPP) de
le milieu nutritif ou dans les botes de Ptri. On obtient bactries coliformes selon le tableau ci-dessous, pour trois
ainsi la dilution 10-1. sries parallles.
10 ml du mlange (3.2.3) sont ajouts 90 ml d'une Le NPP dtermine le nombre de bactries coliformes
solution de Ringer au quart et on inocule 1 ml de ce dans le volume de crme glace ou de glace au lait, en
mlange dans les milieux nutritifs ou dans les botes de rgle gnrale 1g ou 0,l g ou 0,01 g avec lequel on a
Ptri. On obtient ainsi la dilution 10-3. On poursuivra de ensemenc en parallle les 3 premiers tubes partir
la mme faon pour les autres dilutions. desquels on constitue l'index.

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26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

Le nombre de bactries coliformes sera exprim par le 8. EXPRESSION DES RESULTATS


nombre le plus probable (NPP) par 1 g de crme glace ou
glace au lait. 8.1 Mthode de rfrence (2.1)

Si tous les tubes sont positifs, il faut rpter Nombre le plus probable par g selon le tableau
l'analyse en utilisant des dilutions plus leves ci-dessous.
(par exemple 0,l g - 0,01 ou 0,001 g ou encore plus
leves). Si l'on trouve un chiffre index ne figurant pas 8.2 Mthode de routine (2.2)
dans le tableau, on peut conclure qu'une erreur a t
8.2.1 Nombre de colonies par g = nombre de colonies
commise dans les manipulations.
dfini sous 7.4.2.1 multipli par l'inverse de la dilution.
7.4.2 Cas de la mthode de routine (2.2) 8.2.2 Si l'on utilise la mthode simplifie (2.2) indiquer
7.4.2.1 Aprs la dure d'incubation prescrite ci-dessus, le nombre de coliformes positifs dans 1g, 0,lg ou 0,01 g
compter lil nu, les colonies rouges caractristiques etc.
des bactries coliformes;
9. REPETABILITE
7.4.2.2 Au cas o la mthode simplifie (par 2.2)
faisant appel au Vert Brillant lactos la bile de buf, est 9.1 Mthode de rfrence (2.1)
utilise, il faudra dterminer jusqu quelle dilution on La diffrence entre les rsultats de dterminations
peut dceler une formation de gaz dans les tubes de effectues en double (rsultats obtenus simultanment ou
Durham. Une formation positive de gaz indique dans rapidement l'un aprs l'autre par le mme analyste) ne doit
quelle portion de l'chantillon on peut trouver des pas s 'carter de plus de 30 % du rsultat le plus bas.
coliformes.
9.2 Mthode de routine (3.2)
Les rsultats feront donc tat de la dtection de
bactries coliformes dans 1 g ou 0,l g ou 0,01 g etc. Une seule dtermination suffit.

Tableau : NOMBRE LE PLUS PROBABLE (NPP) POUR TROIS SERIES PARALLELES

INDEX NPP INDEX NPP


TUBES POSITIFS DE : (pour 1 g) TUBES POSITIFS DE : (pour 1 g)

1g 0,1 g 0,01 g 1 g 0,1 g 0,01 g

0 0 0 0 2 2 3 4,0
0 0 1 0,3 2 3 0 3,0
0 1 0 0,3 2 3 1 3,5
0 1 1 0,6 2 3 2 4,0
0 2 0 0,6 3 0 0 2,5
1 0 0 0,4 3 0 1 4,0
1 0 1 0,7 3 0 2 6,5
1 0 3 1,1 3 1 0 4,5
1 1 0 0,7 3 1 1 7,5
1 1 1 1,1 3 1 2 11,5
1 2 0 1,1 3 1 3 16,0
1 2 1 1,5 3 2 0 9,5
1 3 0 1,6 3 2 1 15,0
2 0 0 0,9 3 2 2 20,0
2 0 1 1,4 3 2 3 30,0
2 0 2 2,0 3 3 0 25,0
2 1 0 1,5 3 3 1 45,0
2 1 1 2,0 3 3 2 110,0
2 1 2 3,0
2 2 0 2,0
2 2 1 3,0
2 2 2 3,5

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 7

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions


de larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche
des salmonella dans le lait et les produits laitiers.

Art. 2. Pour la recherche des salmonella dans le lait


et les produits laitiers, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode danalyse
microbiologique dcrite en annexe. Cette mthode doit
tre galement utilise par le laboratoire lorsquune
expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.

Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant


au 23 janvier 2005.
Noureddine BOUKROUH

ANNEXE
METHODE DE RECHERCHE DES SALMONELLA
MINISTERE DU COMMERCE DANS LE LAIT ET LES PRODUITS LAITIERS

1. DEFINITIONS :
Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au
23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode Dans le cadre de la prsente mthode, les dfinitions
de recherche des salmonella dans le lait et suivantes sont applicables.
les produits laitiers.
1.1 SALMONELLA
Le ministre du commerce, Micro-organisme formant des colonies typiques sur des
Vu le dcret prsidentiel n 04-138 du 6 Rabie El Aouel milieux slectifs solides et possdant des caractristiques
1425 correspondant au 26 avril 2004 portant nomination biochimiques et srologiques dcrites lorsque les essais
des membres du Gouvernement ; sont effectus conformment la prsente mthode.
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, 1.2 RECHERCHE DES SALMONELLA
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ; Dtermination de la prsence ou de l'absence de ces
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 micro-organismes dans une masse ou un volume
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions dtermin de produit, lorsque l'essai est excut selon la
du ministre du commerce ; prsente mthode.

Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux 2. PRINCIPE :


spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ; En gnral, la recherche des salmonella ncessite 4
phases successives telles qu'indiques de 2.1 2.4
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications (Voir galement le schma du mode opratoire dans
microbiologiques de certaines denres alimentaires ; l'annexe).

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8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

2.1 PRE-ENRICHISSEMENT DANS UN MILIEU 3.2 MILIEUX DE CULTURE


LIQUIDE
3.2.1 MILIEU DE PRE-ENRICHISSEMENT
Ensemencement de la prise d'essai dans le milieu de
EAU PEPTONEE TAMPONNEE.
pr-enrichissement appropri, puis incubation 37 C
durant 16h 20h. COMPOSITION :

2.2 ENRICHISSEMENT DANS DES MILIEUX Peptone ..................................................... 10,0 g


LIQUIDES SELECTIFS Chlorure de sodium ................................ 5,0 g
Ensemencement d'un milieu au ttrathionate et d'un Hydrogno-orthophosphate disodique
milieu slnite-cystine avec la culture obtenue (2.1) Dodcahydrat (Na2HP04, 12H20).................. 9,0 g
Incubation du milieu au ttrathionate 43 C et Dihydrogno-orthophosphate de potassium
incubation du milieu slnite cystine 37 C durant (KH2PO4 )................................................ 1,5 g
2 priodes de 18h 24h. Eau............................................................. 1000 ml

2.3 ISOLEMENT ET IDENTIFICATION PREPARATION :


A partir des cultures obtenues (2.2), ensemencement des Dissoudre les composants dans l'eau en portant
2 milieux slectifs solides glose au rouge de phnol et au bullition.
vert brillant et glose au sulfite de bismuth.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
Incubation 37 C et examen aprs 20h 24h,
7,0 0,1.
et si ncessaire, aprs 40h 48h, pour contrler s'il y a
prsence de colonies, prsumes tre des salmonella en Rpartir le milieu, par quantits de 225 ml, dans des
raison de leurs caractristiques. flacons de 500 ml de capacit ( ou des multiples
de 225 ml dans des flacons de capacit adquate).
2.4 CONFIRMATION
Repiquage des colonies prsumes de Salmonella (2.3) Striliser le milieu durant 15 min. 121 1 C.
et confirmation au moyen des essais biochimiques et
srologiques appropris. 3.2.2 MILIEU D'ENRICHISSEMENT SELECTIF
Bouillon au ttrathionate (Muller - Kauffmann)
3. MILIEUX DE CULTURE, REACTIFS ET
SERUMS Vert brillant ............................................................ 0,5 g
Eau .............................................................. 100 ml
3.1 COMPOSANTS DE BASE
3.2.2.1 MILIEU DE BASE
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est
recommand d'utiliser, pour la prparation des milieux de COMPOSITION :
culture, des composants de base dshydrats ou des
milieux complets dshydrats. Extrait de viande ............................................. 5,0 g
Peptone ......................................................... 10,0 g
Les produits chimiques utiliss pour la prparation des Chlorure de sodium .................................... 3,0 g
milieux de culture et des ractifs doivent tre de qualit
Carbonate de calcium ............................... 45,0 g
analytique reconnue.
Eau ............................................................ 1000 ml
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou
dminralise, et tre exempte de substances susceptibles PREPARATION :
d'inhiber la croissance des micro-organismes dans les
Ajouter les composants de base dshydrats ou le
conditions de l'essai.
milieu de base complet dshydrat l'eau, en portant
Lorsque la glose est spcifie, la quantit utilise doit bullition jusqu' dissolution complte des composants
varier conformment aux prescriptions indiques pour solubles.
donner des milieux d'une fermet approprie. Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1
Les mesurages de pH doivent tre effectus l'aide d'un
pH-mtre, ces mesurages se rfrant une temprature de Striliser le milieu de base durant 15 min.
25C. Les ajustements ventuels sont faits par addition, 121 1C.
soit d'une solution d'acide chlorhydrique 1 mol/l, soit
d'une solution d'hydroxyde de sodium 1 mol/l. 3.2.2.2 SOLUTION DE THIOSULFATE DE
SODIUM
Les milieux de culture prpars et les ractifs ne sont
pas utiliss extemporanment, ils doivent, sauf COMPOSITION :
spcifications contraires, tre conservs l'obscurit, Thiosulfate de sodium pentahydrat
une temprature de 4 1C pendant 1 mois au maximum,
dans des conditions qui vitent toute modification de leur (Na2S203, 5H2O) .................................................. 50,0 g
composition. Eau, quantit suffisante pour ...................... 100 ml

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PREPARATION : PREPARATION :
Dissoudre le thiosulfate de sodium dans une partie Ajouter aseptiquement au milieu de base les autres
de l'eau. composants dans l'ordre donn ci-dessus. Bien mlanger
les liquides aprs chaque addition.
Complter au volume final. Rpartir strilement le milieu complet, par quantits
Striliser la solution durant 15 min. 121 1C. de 100 ml, dans des flacons striles de 500 ml de
capacit.
3.2.2.3 SOLUTION D'IODE Conserver 0,5 C l'obscurit mais utiliser dans la
semaine qui suit la prparation.
COMPOSITION :
Iode ....................................................................... 20,0 g 3.2.3 PREMIER MILIEU D'IDENTIFICATION :
Iodure de potassium ............................................. 25,0 g Glose au rouge de phnol et au vert brillant
Eau, quantit suffisante pour ....................... 100 ml (Edel & Kampelmacher)

PREPARATION : 3.2.3.1 MILIEU DE BASE

Dissoudre liodure de potassium dans un petit COMPOSITION :


volume d'eau et ajouter l'iode. Extrait de viande en poudre ............................ 5,0 g
Agiter jusqu' dissolution complte. Peptone ..........................................................10,0 g
Complter au volume final. Extrait de levure en poudre ............................ 3,0 g
Conserver la solution dans un rcipient opaque Hydrogno-orthophosphate disodique
compltement ferm. (Na2HPO4) ...........................................................1,0 g
Dihydrogno-orthophosphate de sodium
3.2.2.4 SOLUTION DE VERT BRILLANT (NaH2PO4).............................................................. 0,6 g
COMPOSITION : Agar-agar ................................................... 12,0 18,0 g
Eau .................................................................. 900 ml
Vert brillant ................................................ 0,5 g
Eau .......................................................... 100 ml PREPARATION :
Dissoudre les composants de base dshydrats ou le
PREPARATION : milieu de base complet dshydrat dans l'eau, en portant
bullition.
Ajouter le vert brillant l'eau.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il
Conserver la solution au moins une journe soit de 7,0 0,1.
l'obscurit pour permettre l'autostrilisation. Rpartir le milieu de base dans des tubes ou des
flacons striles de 500 ml de capacit maximale.
3.2.2.5 SOLUTION DE BILE DE BUF
3.2.3.2 SOLUTION DE SUCRE AU ROUGE DE
COMPOSITION : PHENOL
Bile de buf dessche ................................ 10,0 g COMPOSITION :
Eau ...............................................................100 ml Lactose ................................................................. 10,0 g
Saccharose ............................................................ 10,0 g
PREPARATION : Rouge de phnol ............................................... 0,09 g
Dissoudre la bile de buf dessche dans l'eau en Eau, quantit suffisante pour ............................... 100 ml
portant bullition ;
PREPARATION :
Striliser la solution durant 15 min. 121 1C. Dissoudre les ingrdients dans l'eau.
Chauffer au bain d'eau durant 20 min 70 C.
3.2.2.6 MILIEU COMPLET Refroidir 55 C et utiliser immdiatement.
COMPOSITION : 3.2.3.3 MILIEU COMPLET
Milieu de base (3.2.2.1) .............................. 900 ml
COMPOSITION :
Solution de thiosulfate de sodium (3.2.2.2) .... 100 ml
Solution d'iode (3.2.2.3) .................................... 20 ml Milieu de base (3.2.3.1) .................................. 900 ml
Solution de vert brillant (3.2.2.4) ........................ 2 ml Solution de sucres au rouge de phnol (3.2.3.2)..100 ml
Solution de bile de buf (3.2.2.5) ............. 50 ml Solution de vert brillant. (3.2.2.4).... 1 ml

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10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
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PREPARATION : PREPARATION :
Ajouter aseptiquement la solution de vert brillant la Dissoudre les composants dshydrats du milieu ou
solution de sucres au rouge de phnol refroidie 55 C. le milieu complet dshydrat dans l'eau, en portant
Ajouter au milieu de base fondu et maintenu bullition.
de 50 55 C et mlanger. Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1.
3.2.3.4 PREPARATION DES BOITES Rpartir le milieu de culture dans des tubes ou des
Rpartir le milieu complet refroidi 45 C, par flacons striles de 500 ml de capacit maximale.
quantits d'environ 15 ml, dans des botes de Ptri striles Striliser le milieu durant 20 minutes 121 1C.
de 90 mm de diamtre et laisser se solidifier.
Juste avant l'emploi, scher soigneusement les botes PREPARATION DES BOITES DE GELOSE
de milieu glos, de prfrence aprs avoir retir NUTRITIVE
les couvercles et retourn les botes, dans une tuve ou un Verser environ 15 ml du milieu fondu dans des botes
incubateur rgl 50 5 C durant 30 minutes. de Ptri striles (de 90 mm de diamtre) et procder
Les botes de milieu glos non sches ne doivent comme spcifi en (3.2.3.4).
pas tre conserves plus de 4 h la temprature
du laboratoire ou plus de 24h de 0 5 C. 3.2.6 GELOSE AU CITRATE DE FER ET AUX
TROIS SUCRES (GELOSE TSI)
3.2.4 SECOND MILIEU D'IDENTIFICATION: COMPOSITION
GELOSE AU SULFITE DE BISMUTH
Extrait de viande ........................ 3,0 g
COMPOSITION : Extrait de levure ..................... 3,0 g
Peptone ................................................. 10,0 g Peptone ..................................... 20,0 g
Extrait de buf ....................... 5,0 g Chlorure de sodium .................... 5,0 g
Glucose ................................... 5,0 g Lactose ............................................. 10,0 g
Hydrogno-orthophosphate disodique ....... 4,0 g Saccharose ................................ 10,0 g
Sulfate de fer (II) .................................... 0,3 g Glucose ............................... 1,0 g
Citrate de bismuth ammoniacal ................ 1,85 g Citrate de fer (III) .................. 0,3 g
Sulfite de sodium ...................................... 6,15 g Thiosulfate de sodium ............ 0,3 g
Agar-agar............................................... 20,0 g Rouge de phnol ..................... 0,024 g
Vert brillant .................................... 0,025 g Agar-agar .................................. 12,0 g
Eau ................................................................ 1000 ml Eau ................................................. 1000 ml
PREPARATION :
PREPARATION :
Dissoudre les ingrdients dans l'eau, en portant
bullition durant environ 1 min. Dissoudre les composants du milieu dshydrat ou le
milieu complet dshydrat dans l'eau, en portant
Ajuster le pH 7,7 0, 1. bullition.
Refroidir entre 45 C et 50 C en agitant doucement
le prcipit en suspension. Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,4 0,1.
Ne pas striliser le milieu.
Rpartir le milieu, par quantits de 10 ml, dans des
Rpartir le milieu, par quantits de 20 ml, dans des tubes de 17 mm 18 mm de diamtre.
botes de Ptri striles ( de 90 mm de diamtre) et laisser
se solidifier. Striliser le milieu durant 10 min 121 1 C.
Juste avant l'emploi, scher soigneusement les botes Laisser reposer en position incline de faon
de milieu glos, de prfrence aprs avoir retir les cou- obtenir un culot de 2,5 cm de profondeur et une pente de
vercles et retourn les botes, dans une tuve ou un incu- 4 cm 5 cm.
bateur rgl 50 5 C durant 30 minutes.
Utiliser les botes sches entre 24 et 48 h aprs leur 3.2.7 GELOSE POUR LA RECHERCHE A
prparation. Les conserver l'obscurit. L'UREASE (CLIRISTENSEN)

3.2.5 GELOSE NUTRITIVE 3.2.7.1 MILIEU DE BASE


COMPOSITION : COMPOSITION :
Extrait de viande ............................................. 3,0 g Peptone ............................................... 1,0 g
Peptone ........................................................... 5,0 g
Agar-agar ...................................................... 12,0 g Glucose ....................................................... 1,0 g
Eau ........................................................ 1000 ml Chlorure de sodium............................. 5,0 g

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Dihydragno-orthophosphate de potassium Rpartir le milieu, par quantits de 5 ml, dans des


tubes de culture d'environ 8 mm de diamtre et 160 mm
(KH2PO4) ............................................................... 2,0 g
de longueur. Striliser le milieu durant 10 minutes
Rouge de phnol ................................. 0,012 g 121 1C.
Agar - agar............................................................. 15,0 g
3. 3 REACTIFS
Eau ........................................................ 1000 ml
3. 3.1 SOLUTION SALINE
PREPARATION :
COMPOSITION :
Dissoudre les composants de base dshydrats ou le
milieu de base complet dshydrat dans l'eau, en portant Chlorure de sodium ................................ 8,5 g
bullition.
Eau ................................................ 1000 ml
Ajuster le pH si ncessaire, de sorte qu'aprs
strilisation, il soit de 6,8 0,1. PREPARATION :
Striliser le milieu de base durant 15 min Dissoudre le chlorure de sodium dans l'eau, en
121 1C. portant bullition.
3.2.7.2 SOLUTION D'UREE Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1.
COMPOSITION :
Rpartir la solution dans des flacons ou dans des
Ure ................................................... 400 g tubes, de sorte qu'aprs strilisation, ils contiennent 90
Eau, quantit suffisante pour ..................1000 ml 100 ml de solution.
Striliser la solution durant 15 minutes 121 1C.
PREPARATION :
Dissoudre l'ure dans l'eau. 3. 3. 2 REACTIFS POUR LA RECHERCHE
DE -GALACTOSIDASE
Striliser par filtration et contrler la strilit. ( selon
la technique de strilisation par filtration). 3. 3. 2.1 TOLUENE

3.2.7.3 MILIEU COMPLET 3. 3. 2. 2 SOLUTION TAMPON

COMPOSITION : COMPOSITION :

Milieu de base (3.2.7.1) .................. 950 ml Dihydrogno-orthophosphate de sodium


Solution d'ure (3.2.7.2) .................... 50 ml (NaH2PO4.) ..................................................... 6,9 g
PREPARATION : Hydroxyde de sodium, Sol. 0, 1 mol/l ............ 3 ml
Ajouter strilement la solution d'ure au milieu de Eau, quantit suffisante pour...............50 ml
base pralablement fondu puis refroidi 45 C.
Rpartir le milieu complet, par quantits de 10 ml, PREPARATION :
dans des tubes striles. Dissoudre le dihydrogno-orthophosphate de sodium
Laisser reposer en position incline. dans environ 45 ml d'eau.

3.2.8 MILIEU DE DECARBOXYLATION A LA Ajuster le PH 7,0 0,l avec environ 3 ml de la


LYSINE solution d'hydroxyde de sodium.

COMPOSITION : Complter 50 ml avec de l'eau.


Monohydrochlorure de L-lin ...................... 5,0 g 3.3.2.3 SOLUTION dOrthonitrophnyl - - D -
Extrait de levure ......................................... 3,0 g galactopyranoside (ONPG)
Glucose ............................................... 1,0 g
COMPOSITION :
Pourpre de bromocrsol ....................................... 0,015 g
Eau ........................................................ 1000 ml (ONPG) .... 0,08 g
Eau ........................................................ 15 ml
PREPARATION :
Dissoudre les composants dans l'eau, en portant PREPARATION :
bullition.
Dissoudre l'ONPG dans l'eau 50 C.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1. Refroidir la solution.

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3. 3. 2. 4 REACTIF COMPLET PREPARATION :


Dissoudre l'hydroxyde de potassium dans l'eau.
COMPOSITION :
Solution tampon (3.3.2.2) ............................. 5 ml 3.3.4 REACTIFS POUR LA REACTION DE
L'INDOLE
Solution d'ONPG (3.3.2.3) ........................ 15 ml
3.3.4.1 MILIEU TRYPTONE - TRYPTOPHANE
PREPARATION : ( DE L - JUTOV )
Ajouter la solution tampon la solution d'ONPG. COMPOSITION :
3.3.3 REACTIFS POUR LA REACTION DE Tryptone .. 10 g
VOGES-PROSKAUER (VP). Chlorure de sodium ... 5 g
(METHODE RAPIDE DE BARRY ET FEENEY) DL-Tryptophane .... 1 g
Eau ........ 1000 ml
3.3.3.1 MILIEU VP
PREPARATION :
COMPOSITION :
Dissoudre les composants dans l'eau, en portant
Peptone ................................................... 7,0 g
bullition, et filtrer.
Glucose ........................................... 5,0 g Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation il soit de
Hydrogno-orthophosphate dipotassique ............... 5,0 g 7,5 0,1.
(K2HPO4)
Rpartir 5ml de milieu dans chacun des tubes.
Eau ........................................................ 1000 ml Striliser 1e milieu durant 15 min 121 + 1 C.
PREPARATION : 3.3.4.2 REACTIF DE KOWACS
Dissoudre les composants dans l'eau.
COMPOSITION :
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation , il soit Dimthylarnino-4 benzaldhyde,... 5 g
de 7,0 0 ,1.
Acide chlorhydrique, 1,18 1, 19 g/ml ......... 25 ml
Rpartir 3 ml de milieu dans chacun des tubes. Mthyl - 2 butanol - 2 ........................................... 75 ml
Striliser le milieu durant 15 minutes au maximum,
1211 C. PREPARATION :
Mlanger les composants.
3. 3. 3. 2 SOLUTION DE CREATINE
COMPOSITION : 3.3.5 GELOSE NUTRITIVE SEMI-SOLIDE
Cratine monohydrate (N-amidinosarcosine) 0,5 g COMPOSITION :
Eau .................................................. 100 ml Extrait de viande .... 3,0 g
Peptone ....... 5,0 g
PREPARATION : Agar-agar..4 9 g
Dissoudre la cratine monohydrate dans l'eau. Eau.1000 ml

3.3.3.3 SOLUTIO ETHANOLIQUE DE NAPHTOL-1 PREPARATION :


COMPOSITION : Dissoudre les composants de base dshydrats dans
Naphtol-1 ....................................................... 6 g l'eau, en portant bullition.
Ethanol, 96 % (V/V) ..................... 100 ml Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1
PREPARATION :
Rpartir le milieu dans des flacons de 500 ml de
Dissoudre le naphtol-1 dans l'thanol. capacit maximale.
Striliser le milieu durant 15 minutes 121 1C.
3.3.3.4 SOLUTION D'HYDROXYDE DE
POTASSIUM
PREPARATION DES BOITES DE GELOSE
COMPOSITION :
Rpartir le milieu complet, rcemment prpar, dans
Hydroxyde de potassium ..... ............... 40 g des botes de Ptri par quantit denviron 15 ml. Les
Eau ................................................. 100 ml botes ne doivent pas tre sches.

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3.4 SERUMS 4.2 VERRERIE


Il existe plusieurs srums anti-salmonella contenant un La verrerie doit pouvoir rsister des strilisations
ou plusieurs groupes "O" (dnomms anti- srums O rptes.
monovalents ou polyvalents), des anti-srums Vi et des 4.2.1 Flacons de culture , pour la strilisation et la
anti-srums contenant des anticorps pour un ou plusieurs conservation des milieux de culture et l'incubation des
facteurs H (dnomms anti-srums H monovalents). milieux liquides.
Pour chaque srum, suivre les instructions d'utilisation .
4.2.2 Tubes de culture , de 8 mm de diamtre et 160
mm de longueur, pour le milieu de dcarboxylation la
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE lysine.
Matriel courant de laboratoire de microbiologie, et 4.2.3 Eprouvettes gradue s, pour la prparation des
notamment : milieux complets.
4.1 APPAREILLAGE 4.2.4 Pipettes gradues en verre de 25 ml, 10 ml et 1
ml, gradues respectivement en 0,5 ml et 0,1 ml.
4.1.1 APPAREILS POUR LA STERILISATION EN
CHALEUR SECHE (FOUR) OU EN CHALEUR 4.2.5. Botes de Ptri.
HUMIDE (AUTOCLAVE).
5. ECHANTILLONNAGE
Le matriel en contact avec les milieux de culture, le
Lchantillonnage se fait dans des conditions
diluant et l'chantillon, sauf s'il est livr strile et
appropries.
particulirement celui en plastique, doit tre strilis :
soit au four en le maintenant une temprature 6. PREPARATION DE LECHANTILLON POUR
comprise entre 170 C et 175 C durant au moins 1 heure; ESSAI.
soit l'autoclave en le maintenant une temprature 6.1 LAIT
de 121 1C durant au moins 20 minutes. Agiter vigoureusement l'chantillon pour essai afin
Un autoclave est galement ncessaire pour la d'assurer une rpartition aussi uniforme que possible des
strilisation des milieux de culture et des ractifs. Il doit micro-organismes , en inversant rapidement 25 fois le
tre rglable 121 1C. rcipient avec l'chantillon. Il faut viter la formation de
mousse ou bien la laisser se disperser.
4.1.2 Enceinte de schage : tuve ou incubateur, L'intervalle entre le mlange et le prlvement de
ventil(e) (permettant de scher la surface des milieux l'chantillon pour essai ne doit pas dpasser 3 minutes.
gloss couls en botes), rglable 50 5C.
6.2 LAIT SEC, POUDRE DE LACTOSERUM,
4.1.3 Incubateur, rglable 37 1C. BABEURRE EN POUDRE , LACTOSE , CASEINE
4.1.4 Incubateur, rglable 43 0,5C. Mlanger soigneusement le contenu du rcipient
ferm en secouant manuellement et en inversant de faon
4.1.5 Bains marie. rglables 45 1C et 37 1C. rpte. Si le rcipient est trop rempli pour permettre une
4.1.6 Homognisateurs. agitation vigoureuse, prendre un rcipient plus grand pour
mlanger.
L'un des appareils suivants doit tre utilis : 6.3 BEURRE
a) homognisateur rotatif, fonctionnant une Faire fondre l'chantillon dans un rcipient strile
frquence de rotation comprise entre 8000 t/min. dans un bain-marie maintenu 45 C 1 (4.1.5.).
et 45000 t/min , avec des rcipients en verre ou en mtal, Agiter lorsqu'on fait fondre et retirer le rcipient
munis de prfrence de couvercles et rsistant aux immdiatement du bain-marie lorsque l'chantillon vient
conditions de strilisation ; d'tre fondu.
b) Homognisateur de type pristaltique, avec des sacs 6.4 FROMAGE
en plastique striles.
Habituellement, un (1) chantillon pour laboratoire
Les rcipients ou les sacs en plastique doivent tre de constituera l'chantillon pour essai. Procder alors
capacit suffisante pour permettre le mlange correct de comme au point (7.1.5).
l'chantillon pour essai avec le diluant. En gnral, le 6.5 GLACES DE CONSOMMATION
volume du rcipient doit tre gal environ deux fois le
volume de l'chantillon et du diluant. Procder comme dans le cas du beurre (6.3) mais en
utilisant un bain-marie maintenu 37 C (4.1.5), de faon
4.1.7 Anses boucles, en platine ou en nickel-chrome, que l'chantillon ne doit pas dpasser cette temprature.
d'environ 3 mm de diamtre.
6.6 LAITS FERMENTES, YAOURTS, CREMES-
4.1.8 pH-mtre (permettant de mesurer le pH des DESSERT
milieux et ractifs prpars), avec une prcision de
rglage de 0,1 unit de pH 25 C. Mlanger le contenu du rcipient ferm, en secouant
manuellement et en inversant de faon rpte, et ouvrir le
4.1.9 Rfrigrateur (permettant de conserver les rcipient et mlanger le contenu aseptiquement l'aide
milieux et ractifs prpars), rglable 0 - 5 C d'une spatule ou d'une cuillre strile.

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14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
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7. MODE OPERATOIRE 7.1.7 PRODUITS LAITIERS CONGELES


(y compris les glaces de consommation).
7.1 PRISE D'ESSAI ET PREENRICHISSEMENT
Introduire, l'aide d'une pipette, 25 ml de l'chantillon
Introduire la prise d'essai dans le milieu de pour essai fondu, dans un flacon contenant 225 ml du
pr-enrichissement et oprer comme dcrit en (7.1.1) milieu de pr-enrichissement (3.2.1). Mlanger.
(7.1.7).
7.1.8. LAITS FERMENTES, YAOURTS, CREMES-
Pour une rcapitulation des modes opratoires de DESSERT
pr-enrichissement et d'enrichissement, se reporter au
tableau 1. Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch contenant des billes de verre et
7.1.1 LAIT 225 ml du milieu de pr-enrichissement (3.2.1) et agiter
pour disperser.
Un pr-enrichissement n'est pas ncessaire, se reporter
(7.2) en utilisant 25 ml de l'chantillon pour essai et Sauf spcifications contraires, contrler le pH de la
225ml du milieu d'enrichissement, respectivement. suspension et l'ajuster , si ncessaire, 7,0.

7.1.2 LAIT SEC 7.1.9 INCUBATION

Prparer un flacon bouch contenant 225 ml d'eau Incuber les flacons prpars conformment (7.1.2)
distille strile et 1 ml de la solution de vert brillant jusqu' (7.1.8), 37 C durant 16 h. 20 heures.
(3.2.2.4). Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour 7.2 ENRICHISSEMENT
essai et le verser la surface du liquide dans le flacon.
7.2.1 Transfrer, l'aide d'une pipette, 10 ml du milieu
Boucher le flacon, mais ne pas l'agiter. Laisser de pr-enrichissement incub (7.1) dans un flacon
reposer la temprature ambiante durant 60 10 minutes contenant 100 ml du milieu d'enrichissement slectif au
avant incubation. L'ajustement du pH n'est pas ncessaire. ttrathionate (3.2.2).
Si aprs 3 heures d'incubation, le lait sec n'est pas Dans le cas du lait, transfrer aseptiquement 25 ml de
encore dissout, mlanger le contenu du flacon par l'chantillon pour essai dans 225 ml du milieu au
ttrathionate (3.2.2).
agitation.
7.2.2 Incuber le milieu au ttrathionate inocul durant
7.1.3 LAIT SEC. BABEURRE SEC 18 h. 24 heures 43 C 0,5.
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai 7.3 ENSEMENCEMENT ET IDENTIFICATION
dans un flacon bouch contenant 225 ml d'eau distille
strile. 7.3.1 Ensemencer avec une anse, partir de la culture
du milieu d'enrichissement, la surface d'une bote de
Agiter jusqu' dissolution et ajouter 1 ml de la glose au vert brillant et au rouge de phnol (3.2.3) et
solution de vert brillant (3.2.2.4). d'une bote de glose au sulfite de bismuth (3.2.4), de
faon permettre le dveloppement de colonies bien
7.1.4 LACTOSE isoles.
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai Remettre le milieu d'enrichissement en incubation
dans un flacon bouch contenant 225 ml du milieu de (voir 7.3.3).
pr-enrichissement (3.2.1) et agiter jusqu' dissolution. 7.3.2 Incuber les botes (retournes) 37 1C durant
20 h. 24 heures.
7.1.5 CASEINE FROMAGE
7.3.3 Aprs incubation des flacons durant encore 18 h.
24 heures, rpter les oprations d'ensemencement et
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
d'incubation dcrites en (7.3.1) et (7.3.2).
dans le rcipient strile d'un homognisateur grande
vitesse ou de type pristaltique (4.1.6) et ajouter 225 ml 7.3.4 Examiner les botes (7.3.2) et (7.3.3) aprs
du milieu de pr-enrichissement (3.2.1) 45 C. incubation afin de rechercher la prsence de colonies
typiques de salmonella. Si le dveloppement est faible, et
s'il n'y a pas de colonies typiques de salmonella, incuber
Mlanger jusqu' ce que la prise d'essai soit nouveau les botes 37 1C durant 18 h. 24 heures et
totalement disperse (1 3 minutes). rexaminer les botes pour rechercher la prsence de
colonies typiques de salmonella.
S'assurer que la temprature de dispersion ne dpasse
7.3.5 Les colonies typiques de salmonella peuvent tre
pas 45C.
caractrises comme suit :
7.1.6 BEURRE sur glose au vert brillant / rouge de phnol (3.2.3),
les colonies typiques de salmonella sont roses bordes de
Agiter l'chantillon pour essai fondu, et l'aide d'une rouge.
pipette, porter environ 45 C, en introduire 25 ml dans sur glose au sulfite de bismuth (3.2.4), les colonies
un flacon contenant 225 ml du milieu de typiques de salmonella sont brunes ou noires avec un clat
pr-enrichissernent (3.2.1). Mlanger. mtallique. Certaines souches donnent des colonies vertes.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
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Tableau 1 Rcapitulation des modes opratoires de pr-enrichissement et denrichissement

Taille de Milieu Mthode Milieu


Produit de prparation d'enrichissement
l'chantillon de pr-enrichissement*

Lait 50 ml Nant Mlanger 225ml de ttrathionate


(2x25ml)
Lait sec 25 g Eau distille plus solution de vert Imprgner pendant 60 100ml de ttrathionate
brillant 10 mn ne pas mlanger * *
Lacto-srum sec 25 g Eau distille plus solution de vert Mlanger 100ml de ttrathionate
Babeurre sec brillant
Lactose 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Casine, Fromage 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 45C max. 100ml de ttrathionate
Beurre 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Produits 25 ml 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
laitiers
congels
Laits ferments 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Yaourts, Crmes
dessert

(*) Lorsque le milieu de pr-enrichissement est utilis, Pente


aprs incubation de 20 h 37 C, repiquer 10 ml de Jaune ..... : lactose et/ou saccharose
lchantillon incub, mlanger au milieu de pr- positifs (fermentation du
enrichissement dans le milieu denrichissement. lactose et/ou du saccharose)
(**) Si aprs 3 h d'incubation, le lait sec n'est pas encore Rouge ou inchang. : lactose et saccharose ngatifs
dissous, mlanger le contenu des flacons par agitation. (pas de fermentation du lactose
7.4 CONFIRMATION ni du saccharose)
7.4.1 CHOIX DES COLONIES POUR LES 7.4.3.2 GELOSE POUR LA RECHERCHE
CONFIRMATIONS A 1'UREASE (3.2.7)
A partir de chaque bote de chacun des milieux slectifs Ensemencer par des stries la pente de la glose.
(7.3.5), prlever 5 colonies typiques ou suspectes ou, s'il y Incuber durant 24 h 37 C 1.
a moins de 5 colonies typiques ou suspectes, les prlever
toutes pour confirmation. La prsence d'urase produit un dgagement
d'ammoniac faisant virer le rouge de phnol au rose puis
7.4.2 INCUBATION au rouge fonc lorsque la raction est positive.
Ensemencer les colonies slectionnes sur la surface des 7.4.3.3 MILIEU DE DECARBOXYLATION A LA
botes de glose nutritive (3.2.5) de faon permettre le LYSINE (3.2.8)
dveloppement de colonies bien isoles et incuber les Ensemencer le milieu juste au-dessous de la surface
botes 37 1 C durant 18 h. 24 heures. du liquide.
Aprs incubation, retenir les colonies pures bien isoles Incuber durant 24 h 37 1C.
pour les confirmations biochimiques et srologiques.
Une couleur violette, aprs incubation indique une
7.4.3 CONFIRMATION BIOCHIMIQUE raction positive.
A l'aide d'un fil ensemencement, ensemencer les Une couleur jaune indique une raction ngative.
milieux suivants avec les colonies pures.
7.4.3.4 REACTIF POUR LA RECHERCHE DE LA
7.4.3.1 GELOSE TSI (3.2.6)
GALACTOSIDASE (3.3.2)
Ensemencer la pente de la glose par des stries et le
culot par piqre. Mettre en suspension une anse de la colonie suspecte
dans un tube contenant 0,25 ml de la solution saline
Incuber durant 24 h 37 1C. (3.3.1).
Interprter les modifications du milieu de la faon Puis ajouter une goutte de tolune et agiter le tube.
suivante :
Mettre le tube au bain marie 37 1C durant
Culot plusieurs minutes.
Jaune ....................... : glucose positif Puis ajouter 0,25 ml du ractif pour la recherche de
(fermentation du glucose) la b-galactosidase et mlanger.
Rouge ou inchang .. : glucose ngatif Replacer le tube dans le bain marie 37 1C
(pas de fermentation du glucose) durant 24 heures.
Noir ......................... : formation de sulfure d'hydrogne Une couleur jaune indique une raction positive.
Bulles ou fissures .... : formation de gaz partir du
glucose La raction est souvent visible au bout de 20 minutes.

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16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

7.4.3.5 MILIEU POUR LA REACTION DE INTERPRETATION DES ESSAIS BIOCHIMIQUES


VOGES - PROSKAUER ( V.P) (3.3.3) : Interprter les rsultats selon le tableau 2.
Ensemencer deux tubes par suspension d'une anse de
la colonie suspecte dans 0,2 ml du milieu VP (3.3.3.1) TABLEAU 2
dans chaque tube. INTERPRETATION DES RESULTATS
Incuber un tube la temprature ambiante et lautre (Voir tableau 2).
37 C durant 24 heures.
(1) Les salmonella du sous-genre III (Arizona) donnent
Aprs incubation, ajouter chaque tube 2 gouttes de la une raction positive ou ngative au lactose mais toujours
solution de cratine (3.3.3.2), 3 gouttes de la solution une raction positive la galactosidase.
thanolique naphtol-1 (3.3.3.3), puis 2 gouttes de la
solution dhydroxyde de potassium (3.3.3.4); agiter les (2) Les salmonella du sous-genre II donnent une
deux tubes aprs avoir ajout chaque ractif. raction ngative au lactose, mais peuvent donner une
raction positive la galactosidase.
Un virage du rose au rouge vif dans un dlai de 15
minutes indique une raction positive. 7.4.4 SYSTEMES DE DIAGNOSTIC RAPIDE
7.4.3.6 MILIEU POUR LA REACTION DE Les systmes de diagnostic rapide (3.1) peuvent tre
L'INDOLE (3.3.4) : utiliss la place des oprations dcrites en (7.4.3) pour la
Ensemencer avec une partie de la colonie un tube confirmation biochimique des colonies typiques ou
contenant 5 ml du milieu tryptone-tryptophane (3.3.4.1). suspectes.
Incuber durant 24 h. 37 1 C. Dans ce cas, les instructions dutilisation doivent tre
scrupuleusement suivies.
Aprs incubation, ajouter 2 3 gouttes du ractif
Kowacs (3.3.4.2). 7.4.5 CONFIRMATION SEROLOGIQUE
La formation d'un anneau rouge indique une raction La dtection de la prsence des antignes O, Vi et H des
positive. salmonella est effectue par une agglutination sur lame
avec des srums appropris, sur des colonies pures (7.4.1)
Un anneau jaune - brun indique une raction ngative. aprs l'limination des souches auto-agglutinables.
7.4.5.1 ELIMINATION DES SOUCHES AUTO -
AGGLUTINABLES
TABLEAU 2 Dposer sur une lame de verre parfaitement propre
INTERPRETATION DES RESULTATS une goutte de la solution saline (3.3.1).
Disperser dans cette goutte, une partie de la colonie
Pourcentage (7.4.2) essayer afin d'obtenir une suspension homogne
Essais Raction de souches et trouble.
de positive de salmonella
confirmation ou ngative prsentant Faire osciller la lame durant 30 secondes 60
la raction secondes.
Observer les rsultats sur fond noir, de prfrence
Glucose TSI + 100 avec l'aide d'une loupe.
(Formation dacide) (7.4.3.1) Les souches sont considres comme
Glucose TSI (Formation de auto-agglutinables si les bactries ont flocul en amas
+ 91,9 plus ou moins distincts. La confirmation srologique de
gaz) (7.4.3.1) ces souches auto-agglutinables par les modes opratoires
Lactose TSI (7.4.3.1) - (1) 99,2 spcifis en (7.4.5.2), (7.4.5.3) et (7.4.5.4) est impossible.
Saccharose TSI (7.4.3.1) - 99,5 7.4.5.2 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES O
Sulfure d'hydrogne TSI + 91,6 Utiliser des souches pures (7.4.2) non
(7.4.3.2.) auto-agglutinables (7.4.5.1).
Dcomposition de l'ure Oprer comme en (7.4.5.1), mais utiliser une goutte
- 100 d'anti-srum O (3.4) la place de la solution saline.
(7.4.3.2)
Dcarboxylation la lysine Utiliser les srums mono ou polyvalents l'un aprs
+ 94,6 l'autre.
(7.4.3.3)
7.4.5.3 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES Vi
Raction de la - (2) 98,5 Oprer comme en (7.4.5.2), mais utiliser une goutte
galactosidase (7.4.3.4) d'anti-srum Vi (3.4) la place de la solution saline.
7.4.5.4 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES H
Raction de Voges-Proskauer - 100 Ensemencer la glose nutritive semi-solide (3.3.5)
(7.4.3.5) avec une souche pure non auto-agglutinable (7.4.5.1).
Raction de l'indole - 98,9 Incuber le milieu durant 18 h. 24 heures
(7.4.3.6) 37 1C.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 17

Utiliser cette culture pour l'examen des antignes H en 7.4.6.3 Les souches ne sont pas considres comme
oprant comme en 7.4.5.2, mais en utilisant une goutte de tant des salmonella si elles ne prsentent pas de ractions
lanti-srum H (3.4) la place de la solution saline. biochimiques typiques (7.4.3) et ne donnent pas de
ractions srologiques positives suivants (7.4.5).
7.4.5.5 INTERPRETATION DES REACTIONS
7.4.7 CONFIRMATION DEFINITIVE
SEROLOGIQUES
Pour les souches considres comme tant des
Sil y a agglutination, les ractions sont considres salmonella (7.4.6.1) ou pouvant ltre (7.4.6.2), une
comme positives. identification doit tre effectue en vue dune
dtermination dfinitive du srotype .
7.4.6 INTERPRETATION DES REACTIONS 8. CULTURES DE CONTROLE
BIOCHIMIQUES ET SEROLOGIQUES
Pour vrifier la capacit des milieux d'enrichissement et
7.4.6.1. Les souches sont considres comme tant des d'identification de supporter le dveloppement de
salmonella si elles prsentent des ractions biochimiques salmonella, une souche de rfrence isole nouvellement
typiques (7.4.3) et donnent des ractions srologiques doit tre utilise pour contrler les milieux
positives suivant (7.4.5). d'enrichissement (7.2).

7.4.6.2 Les souches qui prsentent des ractions Les oprations de contrle doivent alors suivre celles
des cultures du matriau d'essai pour montrer qu'on
biochimiques typiques (7.4.3) mais qui ne donnent pas de retrouve la culture contrle positive.
ractions srologiques positives suivant (7.4.5), les
souches qui ne prsentent pas de ractions biochimiques 9. EXPRESSION DES RESULTATS
typiques (7.4.3), mais donnent des ractions srologiques
Selon les rsultats de l'interprtation, indiquer la
positives suivant (7.4.5), et les souches auto-agglutinables
prsence ou l'absence de salmonella dans la prise d'essai,
qui prsentent des ractions biochimiques typiques (7.4.3) en prcisant la masse, en grammes, ou le volume, en
peuvent tre des salmonella. millilitres, de l'chantillon analys.

Schma du mode opratoire
Prise d'essai : 25 g ou ml
botes de Ptri
Milieu de pr-enrichissement : eau peptone
tamponne ou eau distille plus solution
de vert brillant, 225 ml
Incubation 37 C durant 16h 18h

Enrichissement en milieu
liquide slectif

10 ml de culture ou 25 ml chantillon pour essai, dans le cas du lait

Milieu au ttrathionate, 2 priodes de 18h 24 h


Incubation 37C

Isolement sur milieux slectifs


1er milieu en botes de Ptri 2me milieu
(glose ou rouge de phnol (glose au sulfite
et au vert brillant) de bismuth)
Incubation 37 C durant
20h 24 h (40 h 48 h, si ncessaire)

Cinq colonies caractristiques


(pour chaque bote)

Ensemencement sur glose nutritive


Confirmation biochimique Incubation 37 C durant 18 h 24 h Confirmation srologique

Interprtation des rsultats

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- Poids unitaire suprieur 1 kg : partir de 5


Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au 23 premballages, prlever chacun 5 morceaux de 200 g
janvier 2005 rendant obligatoire une mthode environ. Le prlvement sera ralis au moyen d'une
danalyse microbiologique du beurre. sonde beurre. Ou prlever d'une manire aseptique par
premballage, l morceau de 300 g 400 g de produit de
Le ministre du commerce ; forme pyramidale.

Vu le dcret prsidentiel n 04-138 du 6 Rabie El Aouel Ce nombre de premballages examiner concerne les
1425 correspondant au 26 avril 2004 portant nomination beurres et les corps gras base de matire grasse
des membres du Gouvernement ; butyrique.

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Pour le beurre concentr, le contrle sera effectu sur
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et un chantillon reprsentatif de l'unit de fabrication ,le
la rpression des fraudes ; prlvement sera pratiqu selon les modes dcrits.
Les prlvements seront transports et conservs
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 jusqu'au moment de l'analyse une temprature positive
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les n'excdant pas + 6 C.
attributions du ministre du commerce ;
2- Prparation de l'chantillon pour essai
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de 2.1 Unit premballe :
consommation ;
Dvelopper soigneusement le papier d'emballage et
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 d'une manire aseptique sans liminer la couche
juillet 1994, modifi et complt, relatif aux superficielle, transfrer 50 g de produit dans un godet de
spcifications microbiologiques de certaines denres centrifugation capsule visse strile.
alimentaires ; 2.2 Prlvement opr par sonde beurre
Vu larrt du 21 Chabane 1419 correspondant au 10 Transfrer d'une manire aseptique 50 g de produit dans
dcembre 1998 relatif aux spcifications techniques des le godet de centrifugation.
beurres et modalits de leur mise la consommation ;
2.3 Prlvement sous forme d'une masse pyramidale
Arrte :
A l'aide d'un couteau nettoy l'alcool et flamb,
Article. 1er En application des dispositions de enlever la couche superficielle sur 1cm environ
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier d'paisseur et introduire aseptiquement 50 g de produit
1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour dans le godet de centrifugation.
objet de rendre obligatoire une mthode danalyse Conservation au rfrigrateur entre 0 C et + 5 C,
microbiologique du beurre. jusqu'au moment de la prparation de la phase aqueuse.
Art. 2. Pour lanalyse microbiologique du beurre, les 3 - Prparation de la phase aqueuse, dilution
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression primaire
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode danalyse microbiologique dcrite 3.1 Beurre cru et beurre pasteuris :
en annexe.
Dans le godet de centrifugation contenant 50 g de
Cette mthode doit tre galement utilise par le beurre, transfrer 42 ml de solution 2% de phosphate
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. dipotassique , pH 7,5 0,1 strile (4).

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal officiel Faire fondre dans un bain-marie n'excdant pas 45 C.
de la Rpublique algrienne dmocratique et populaire. Ds la fusion du beurre, centrifuger 1000-2000 t/min.
pendant 1 2 minutes. Disposer le godet sur un portoir.
Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant
au 23 janvier 2005. Eliminer la matire grasse par aspiration, pour cela
utiliser une pipette courte ou un embout en matire
Noureddine BOUKROUH. synthtique strile fixe l'extrmit d'un tube de
caoutchouc reli un ballon deux tubulures
communiquant une fiole vide (pige), elle-mme relie
ANNEXE une trompe eau.
Mthode danalyse microbiologique du beurre Changer de pipette ou d'embout entre chaque
chantillon. Effectuer l'analyse bactriologique sans
1- Echantillonnage
tarder.
Le contrle doit porter sur 5 premballages issus d'un
3.2 Corps gras base de matire grasse butyrique :
lot de mme fabrication.
Le mode de prparation de la dilution primaire est
Selon la masse conditionne dans un premballage, le
semblable celui dcrit en (3.1); toutefois, la quantit de
prlvement sera constitu de la manire suivante :
solution 2% de phosphate dipotassique pH 7,5 0,l
- Poids unitaire infrieur 1 kg : 5 premballages sera calcule selon la teneur en lipides du produit, par
intacts de 125 g 250 g. exemple :

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 19

Produit dont la teneur en lipides est comprise entre 5.1 Micro-organismes arobies 30 C dits de
38 g % et 41 g% utiliser 20 ml de diluant. contamination
Produit dont la teneur en lipides est suprieure ou Ce dnombrement est appliqu aux beurres pasteuriss
infrieure 38 g% et 41 g% : pour 50 g de produit, et concerne les micro-organismes provenant de
utiliser un volume de diluant gal la moiti de la contaminations diverses qui peuvent se produire au cours
quantit des lipides prsents dans 100 g de produit. de la fabrication du beurre. La flore lactique qui a pu tre
3.3 Beurre concentr ensemence dans la crme selon la technologie employe,
doit tre exclue de ce dnombrement.
Le mode de prparation de la dilution primaire est
semblable celui dcrit en (3.1). mais utiliser comme 5.1.1 Milieu utilis
diluant la solution de tryptone-sel (se reporter 4) raison
de 50 ml. Composition :
En se basant sur la composition type de chaque produit, Gelysate.................................7,5 g
admettre de manire conventionnelle que 1 ml de la phase Trypticase ou Tryptone ........7,5 g
aqueuse, dilution primaire, reprsente 1 g. de produit.
4 - Diluants et prparation des dilutions dcimales Chlorure de sodium......................5 g

4.1 Diluants Glose (exempte d'hydrates de carbone).4 g


Deux diluants sont utiliss, pour des raisons pratiques, Eau distille..........................1000 ml
distribuer les diluants, solution 2% de phosphate
Ajuster le pH de sorte, qu'aprs strilisation, il soit de
dipotassique pH 7,5 0,1 et solution de tryptone sel (ou
7,6 0,l 25 C.
solution de Ringer) de telle sorte qu'aprs strilisation, le
volume soit de 50 ml. Striliser l'autoclave 121C pendant 15 minutes.
4.2 Dilutions dcimales
Conserver au rfrigrateur pendant 1 mois au
Au moment de lemploi, distribuer la solution de maximum.
tryptone-sel (ou solution de Ringer) raison de 9 ml dans
des tubes de 20 mm x 200 mm striles. 5.1.2 Ensemencement :
Mlanger convenablement la dilution primaire par Dposer en double dans des botes de Ptri 1ml de la
aspiration et refoulement une dizaine de fois l'aide dilution 10-1, 1 ml de la dilution 10 -2 et ventuellement 1
d'une pipette de 1 ml strile, puis introduire 1 ml dans un ml de la dilution 10 -3. Couler 12 15 ml de milieu puis
tube contenant 9 ml de solution de tryptone-sel strile afin mlanger soigneusement l'inoculum avec le milieu.
d'obtenir une dilution au 1/10.
Laisser refroidir et aprs solidification mettre incuber
Mlanger soigneusement pendant 5 10 secondes au 30 C pendant 48 h puis 20 C 1 C pendant 48 h.
moyen d'un agitateur mouvement de rotation excentr.
De manire identique, prparer une dilution au 1/100 et 5.1.3 Lecture des botes :
une dilution au 1/1000.
Retenir pour comptage les botes contenant entre 10 et
5 - Expression des rsultats 300 colonies. Dnombrer toutes les colonies en vitant
Afin que les rsultats de l'analyse bactriologique d'inclure dans le comptage les colonies en pointe
puissent permettre une valuation significative de la d'pingle qui reprsentent une flore lactique.
qualit hyginique des fabrications de beurres crus, Nanmoins, certaines souches d'espces lactiques
beurres pasteuriss, corps gras base de matire grasse peuvent se dvelopper convenablement et l'attention doit
butyrique et beurres concentrs, il y a lieu de se tre retenue par la rgularit de l'aspect morphologique,
conformer au protocole dcrit afin de restreindre un colonies lenticulaires ou rondes ; il est alors conseill
minimum les divergences d'ordre technique. d'effectuer l'preuve de la catalase, celle-ci doit tre
Dure de l'examen bactriologique : le temps qui ngative pour les espces lactiques.
s'coule entre la fin de la prparation de la dilution
primaire et celui du mlange des dilutions avec le milieu 5 1.4 Expression des rsultats :
de culture ne doit pas excder 15 minutes.
Calculer le nombre de micro-organismes de
Temprature d'incubation et refroidissement des contamination par millilitre de dilution primaire,
milieux : tous les appareils utiliss, tuves, bains-marie, c'est--dire par gramme de beurre selon le mode de calcul
doivent tre vrifis priodiquement (au moins deux fois suivant :
par mois).
Lecture des rsultats : selon les indications donnes. Cas o seuls les comptages d'une dilution sont
Cependant, lorsque les rsultats ne peuvent tre exprims retenus :
correctement, recommencer l'analyse en examinant une
gamme plus tendue de dilutions. Si l'examen se situe effectuer la moyenne arithmtique.
au-del des dlais de consommation (limite ou optimale),
le mentionner sur le bulletin d'analyse. Cas o les comptages de deux dilutions successives
sont retenus : appliquer la formule suivante :
Qualit des milieux de culture : d'une manire
gnrale, il est recommand d'utiliser des milieux c
complets dshydrats. (n1 + 0,1n2) d

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20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

O c : somme totale des colonies comptes. 5.3.4 Expression des rsultats


n1 : nombre de botes comptes dans la premire Calculer le nombre de coliformes par millilitre de
dilution. dilution primaire, C'est--dire par gramme de produit
n2 : nombre de botes comptes dans la seconde selon le mode de calcul dcrit en (5.1.4).
dilution.
Tolrance analytique 3 m pour les beurres pasteuriss et
d : facteur de dilution partir duquel les premiers les corps gras base de matire grasse butyrique soit 30 :
comptages ont t obtenus. absence de tolrance pour le beurre concentr, plan deux
Tolrance analytique : 3 m soit 3x10 3 classes.
5.2 Microorganismes arobies 30 C : 5.4 Staphylococcus aureus :
Ce dnombrement est appliqu au beurre concentr. 5.4.1 Milieu glose Baird Parker, (E.T.G.P.A).
5.2.1 Milieu : utiliser le milieu dit Plate Count Agar Couler le milieu complet raison de 15 ml 20 ml dans
additionn de lait. des botes de Ptri de 90 mm ou 100 mm de diamtre
5.2.2 Ensemencement : dposer en double dans des respectivement.
botes de Ptri 1 ml de la phase aqueuse dilution primaire Aprs solidification, faire scher les botes retournes,
et ventuellement 1 ml de la dilution 10 -1 Couler 12 15 couvercle entrouvert dans une tuve entre 45 C et 55 C
ml de milieu, puis mlanger soigneusement l'inoculum pendant 30 min. (ou temprature ambiante pendant 2
avec le milieu. Laisser refroidir et aprs solidification, heures). Pour les botes de Ptri de 140 mm, couler 28 ml
mettre incuber 30 C pendant 72 h. glose Baird Parker.
5.2.3 Lecture des botes : Si l'on suspecte la prsence de Proteus, il est conseill
Retenir pour comptage les botes contenant entre 10 et d'ajouter une solution de sulfamzathine
300 colonies. Dnombrer toutes les colonies en utilisant si Sulfamzathine...............................................0,2 g
ncessaire une loupe d'un grossissement de 1,5 au
maximum. Solution d'hydroxyde de sodium (0,1 mol)............10 ml
Eau qsp......................................................100 ml
5.2.4 Expression des rsultats :
Calculer le nombre de micro-organismes arobies par Avant rpartition et strilisation de la glose Baird
millilitre de dilution primaire, cest dire par gramme de Parker, ajouter par litre de milieu 27,5 ml de la solution de
beurre concentr (5.1.4). sulfamzathine.

Tolrance analytique : 3 m soit 1,510-3 5.4.2 Ensemencement

5.3 Bactries coliformes 30 C Distribuer 1 ml de la phase aqueuse la surface de la


glose Baird Parker d'une bote de Ptri de 140 mm, ou de
5.3.1 Milieu : glose au dsoxycholate 3 botes de Ptri de 90 mm 100 mm sous forme
Composition : de 3 fractions sensiblement gales, puis taler sans tarder
l'aide d'un taleur en verre strile. Laisser imprgner
Protose peptone...........................10 g pendant 15 minutes temprature ambiante. Mettre
Lactose..............................................10 g incuber 37 C pendant 24 h. et 48 heures.
Dsoxycholate de sodium.........0,5 g
5.4.3 Lecture des botes et choix des colonies
Chlorure de sodium.........................5 g
Citrate de sodium........................2 g Aprs 24 heures et 48 heures d'incubation, marquer sur
Agar...................................................15 g les fonds des botes les colonies caractristiques et/ou non
caractristiques :
Rouge - neutre................................0,03 g
Eau distille.............................1000 ml Colonies caractristiques : colonies noires, brillantes
Prparer le milieu juste avant l'emploi : ne pas striliser. convexes, entoures d'une zone transparente qui peut tre
translucide. Aprs 24 heures, peut apparatre dans cette
5.3.2 Ensemencement zone transparente un anneau opalescent immdiatement au
Dposer en double dans des botes de Ptri, 1 ml de la contact des colonies.
phase aqueuse, dilution primaire et ventuellement 1 ml
Colonies non caractristiques : colonies noires,
de la dilution 10 -1. Couler le milieu raison de 15 ml
brillantes, convexes ou gris noirtre ayant parfois un
environ. Mlanger soigneusement l'inoculum avec le
aspect mat et une texture sche, dpourvues de zone
milieu. Laisser refroidir puis couler une seconde couche
transparente (except certaines colonies gris noirtre).
avec 4 ml 5 ml de milieu non ensemenc. Aprs
solidification, mettre en incubation 30 C pendant 22 h Retenir pour le dnombrement les botes qui renferment
24 heures. 150 colonies au maximum, caractristiques et/ou non
5.3.3 Lecture des botes caractristiques. Dnombrer les colonies suivant leur
aspect.
Retenir pour comptage les botes contenant 150
colonies maximum et dnombrer les colonies rouges Prlever en vue de l'preuve de la coagulase
typiques d'au moins 0,5 mm de diamtre ; lorsque le (ventuellement de la thermonuclase) un nombre de
diamtre est difficile estimer, repiquer la colonie dans un colonies caractristiques et/ou non caractristiques gal
tube de bouillon lactos bili au vert brillant et porter la racine carre du nombre total des colonies prsentes
l'tuve 30C pendant 24 h. 48 heures afin d'observer la dans une bote ou trois botes de Ptri, en tenant compte
fermentation du lactose. de leur nombre respectif.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 21

Lorsque le volume est rparti dans une bote de Ptri de Afin d'viter des effets dfavorables au dveloppement
140 mm, 5 colonies au minimum doivent tre examines des salmonella par certaines gloses slectives, se
et si leur nombre est infrieur 5, les prlever toutes ; conformer aux recommandations suivantes :
dans le cas o le volume est rparti sous 3 fractions, 10
colonies au minimum seront examines et si leur nombre les gloses slectives doivent tre utilises aprs 24
est infrieur, toutes les colonies seront prleves. heures, soit au plus tard dans la journe qui suit leur
prparation.
5.4.4 Expression des rsultats la strilisation des milieux doit tre vite.
Calculer le nombre de staphylococcus aureus par les botes prpares seront sches de prfrence
millilitre de dilution primaire, c'est--dire par gramme de temprature ambiante, par exemple 2 h 25 C; les
produit en interprtant les rsultats obtenus de la manire conserver l'obscurit la mme temprature ou au
suivante : rfrigrateur.
les rsultats douteux l'preuve de la coagulase seront 5.5.2 Pr-enrichissement (Jour A)
considrs comme positifs si l'preuve de la
thermonuclase est positive. Afin de rduire la charge de travail, prlever depuis
chacun des cinq godets de centrifugation contenant la
Si au moins 80 % des colonies examines sont phase aqueuse 25 ml de celle-ci et les rassembler dans un
coagulase positive, considrer que le nombre prsum, rcipient de 2 litres contenant 1125 ml de bouillon lactos
donn par le comptage reprsente le nombre de au pourpre de bromocrsol.
staphylococcus aureus sinon exprimer le rsultat global en Mlanger soigneusement. Abandonner 1 heure
tenant compte des proportions de colonies caractristiques temprature ambiante.
et de colonies non caractristiques, qui sont coagulase ou
thermonuclase positive. Incuber 37 C pendant 22 h 2 heures.

Lorsque plusieurs dilutions ont t examines, appliquer Lecture aprs 18 h. 20 heures ; si le dveloppement
le mode de calcul dcrit en (5.1.4). est insuffisant, incuber nouveau pendant 20 h. 24
heures.
Tolrance analytique :
5.5.3 Techniques d'enrichissement et d'isolement
3 m pour le beurre cru, les beurres pasteuriss et les Oprer selon le schma suivant :
corps gras base de matire grasse butyrique.
Jour A + 24 h
Absence de tolrance pour le beurre concentr, plan
Enrichissement
2 classes.
5.5 Recherche des salmonella par ensemencement de 10 ml de la culture pr- enrichie
dans
5.5.1 Prenrichissement :
Bouillon lactos au pourpre de bromocrsol :
Rpartir le bouillon raison de 1125 ml dans des - 100ml de milieu au
rcipients de 2 litres large ouverture. ttrationate de sodium
incub au bain marie 43C
Striliser l'autoclave 121C pendant 15 minutes pendant 24 h et 48 h.
Enrichissement :
Emploi dun milieu rparti raison de 100 ml dans des
rcipients de capacit approprie ; le prparer juste avant Jour A + 48 h Isolement
l'emploi.
- Bouillon au ttrathionate de sodium (Muller et d'une anse boucle sur 2 gloses slectives :
Kauffmann) additionn ventuellement de novobiocine,
concentration finale 40 g/ml de milieu; ne pas striliser. 1 - glose au vert brillant et rouge de phnol ou glose
au bismuth de sulfite
Isolement :
Les gloses slectives suivantes sont recommandes : 2 - glose XLD ou glose Hektoen

Glose au vert brillant et au rouge de phnol (Edel et Jour A + 72 h


Kampelmacher)
Rpter les isolements tels que dcrits Jour A + 48 h.
Glose au sulfite de bismuth (Wilson Blair)
Incuber les gloses slectives 37 C.
Glose xylose lysine dcarboxylase(XLD) : utiliser
les milieux qui autorisent l'bullition. Effectuer une premire lecture aprs 18 h. 20 heures ;
si le dveloppement est insuffisant, incuber nouveau
Glose Hektoen. pendant 20 h. 24 heures.

42
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

5.5.4 Choix des colonies confirmation Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Se rfrer aux indications donnes dans la mthode
relative la recherche des salmonella. Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
5.5.5 Dtermination srologique populaire.
Les souches rpondant aux caractristiques Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant
biochimiques des Salmonella, ou suspectes, seront au 23 janvier 2005.
soumises la confirmation srologique.

5.5.6 Expression des rsultats


Noureddine BOUKROUH.
Lorsque lchantillon compos est exempt de
salmonella, le produit est conforme au critre requis.
ANNEXE
Si l'chantillon compos prsente des salmonella, il peut
tre conseill de rexaminer sparment les 5 units. METHODE DE PRELEVEMENT ET DANALYSE
BACTERIOLOGIQUES DES GLACES
Pour les salmonella, le plan 2 classes est appliqu sans ET CREMES GLACEES
tolrance analytique.
1. PRELEVEMENTS DES GLACES ET CREMES
GLACEES
Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au 23 A. Matriel utiliser
janvier 2005 rendant obligatoire une mthode de 1. Bocaux de 350 ml large ouverture en verre
prlvement dchantillons et danalyse borosilicat genre pyrex bouchs avec couvercle vis
bactriologiques des glaces et crmes glaces.
mtallique possdant un intermdiaire qui sera chang

chaque strilisation. Ces bocaux contiendront des billes
Le ministre du commerce , de verre genre pyrex. Ils seront prpars et striliss au
laboratoire.
Vu le dcret prsidentiel n 04 -138 du 6 Rabie
El Aouel 1425 correspondant au 26 avril 2004 portant 2. Caisses glacires
nomination des membres du Gouvernement ;
3. Matriel de prlvement
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Cuillres mtalliques striles long manche; tubes
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et mtalliques striles, genre sonde fromage mandrin
la rpression des fraudes ; formant piston pntrant dans le tube.
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 4. Lampe butane (type lampe souder)
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les
attributions du ministre du commerce ; 5. Neige carbonique ou mlange de glace pile
et de sel
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et Ce mlange de glace pile et de sel sera mis dans des
la prsentation de certains laits de consommation ; sachets en matire plastique, parfaitement clos.
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
B. Technique de prlvements
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
1. Quantit de produit prlever : 100 grammes
environ.
Arrte :
2. Techniques de prlvements
Article 1 er. En application des dispositions de Les prlvements de glaces et crmes glaces doivent
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
tre effectus en prenant toutes les prcautions dasepsie,
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de notamment en ce qui concerne l'ouverture et la fermeture
prlvement dchantillons et danalyse bactriologiques des bocaux.
des glaces et crmes glaces.
a) Glaces et crmes glaces conditionnes
Art. 2. Pour le prlvement et lanalyse Dans les emballages en papier
bactriologiques des glaces et des crmes glaces, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression Dvelopper le papier et faire glisser la glace dans le
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent bocal sans toucher avec les mains. S'il s'agit de glace
employer la mthode danalyse microbiologique dcrite sucette, couper le btonnet aseptiquement au ras de la
en annexe. glace.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 23

Dans les emballages en carton Aprs leur dconglation, les glaces sont
homognises par une agitation nergique dans le bocal
Mettre la veille les bocaux prlvements dans la caisse de prlvement pendant deux trois minutes, mme s'il
glacire, avec les sachets contenant de la glace s'agit de glaces aux fruits et aux amandes.
rafrachir. Au moment du prlvement sortir
aseptiquement la crme glace de l'emballage en carton et Pour les crmes glaces ou glaces enrobes de
la mettre directement dans les bocaux. Remplacer les chocolat, liminer l'enrobage la pince ou au couteau
sachets par de la neige carbonique ou par d'autres sachets strilis et n'examiner que la glace.
contenant le mlange glace plus sel.
Pour les glaces et crmes glaces qui foisonnent :
b) Glaces et crmes glaces servies par le vendeur dtruire la mousse sous vide selon la technique
la cuillre ci-dessous :
Utiliser les instruments du vendeur sans les flamber. Description de l'appareil : Un flacon avec un bouchon
perc de 2 trous. Dans un des trous, une pipette Pasteur.
c) Glaces et crmes glaces vendues au demi-litre ou L'orifice extrieur de la pipette est obtur par un tampon
au litre de coton. Dans l'autre trou, un tube de verre dont l'orifice
Utiliser une cuillre mtallique flambe. extrieur est obtur par un tampon de coton et reli au
vide.
d) Glaces et crmes glaces vendues au moyen
d'appareils distributeurs Le tube o est plac le doigt sert diminuer ou
augmenter le vide pour viter le passage de la crme
Prendre l'chantillon directement au bec de glace dans le tube reli la trompe ou la pompe vide.
l'appareil.
Manipulation : Boucher la pipette Pasteur avec le
e) Glaces et crmes glaces surgeles doigt. Faire le vide. De temps en temps, laisser passer
Utiliser le tube mtallique formant la sonde. Celui-ci l'air. Agiter le flacon en mme temps. On ne supprime
sera flamb trs lgrement au moment du prlvement pas toute la mousse, mais c'est une amlioration.
(ne pas dpasser 50 C). Avec le mandrin formant piston, 2. Technique d'examen bactriologique
pousser la glace pour la mettre dans le bocal.
A. Prparation des dilutions
Pour l'ouverture et la fermeture des bocaux de
prlvements, les prcautions d'usage en matire de Faire les dilutions jusqu 1/100.000 avec une solution
bactriologie doivent tre prises notamment : ouverture du tryptone sel.
bocal au dernier moment. Mais partir de la dilution 1/100 on fera une dilution au
Flambage de l'orifice du bocal et de la partie infrieure 1/200 ainsi que la dilution 1/1000.
du couvercle juste avant l'introduction du prlvement et Cette dilution au 1/200 servira dnombrer 200
au moment de la fermeture du bocal. coliformes par 1 ml.
Il. ANALYSE BACTERIOLOGIQUE DES Formule
GLACES ET CREMES GLACEES Tryptone......................1 g
l) Prparation des chantillons Chlorure de sodium.................8 g
a) Premier procd Eau distille........................1000 ml
Les bocaux sortis de la neige carbonique ou de la glace pH : 7 - 7,2
sont mis l'tuve ou au bain-marie 37 C, au maximum Rpartir en tubes ou en flacons. Autoclaver 20 minutes
pendant 1 heure. Ce temps ne doit pas tre dpass, sinon 120 C. Vrifier la strilit du milieu avant de
on aborderait le dbut de la phase logarithmique de l'employer.
croissance. Dans la pratique, ce rchauffement 37C doit
tre surveill et arrt le plus rapidement possible. Chaque dilution est agite soit la main au moins 30
fois, ou mieux l'agitateur mcanique, pendant 2 minutes
Si la glace a t reue dans la neige carbonique, le au moins, avant de passer la dilution suivante. Chaque
laboratoire doit se dbarrasser de cette neige carbonique dilution est effectue avec une pipette gradue strile
immdiatement, l'extrieur du laboratoire. distincte.
Faire les dilutions jusqu' 1/100.000 avec une solution B. Recherches effectuer
de tryptone - sel.
En tryptone extrait de levures agar pendant 72 h 2
Mais partir de la dilution au 1/100, on fera une heures.
dilution au 1/200 ainsi que la dilution au 1/1000.
Formule de la tryptone extrait de levures Agar
b) Deuxime procd Tryptone..........................................6 g
Les produits sont placs dans un rfrigrateur + 4 Extrait de levure..........................3 g
C/ + 6 C jusqu'au moment de la dconglation. Agar en poudre..................................15 g
Eau distille.................................1000 ml
Cette mthode parat plus favorable que le premier
procd pour les petits chantillons (100 200 g) car la pH : 7
dconglation est rapide et ne favorise pas la Rpartir en tubes de 20 x 200 mm raison de 20 ml
multiplication des psychrotrophes. par tube. Autoclaver 20 minutes 115 C.

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24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

Ensemencer: Test de Mackenzie


1 ml de la dilution au 1/1.000 Pour chaque tube de bouillon lactos bili au vert
brillant qui contient des gaz 30 C. on utilise :
1 ml de la dilution au 1/10.000
1 ml de la dilution au 1/100.000 Un tube de bouillon lactose bili au vert brillant
(mme formule que ci-dessus).
0,l ml de la dilution au 1/100.000
Un tube deau peptonne simple dont voici la
Pour faciliter le dnombrement et viter l'envahissement mthode :
du milieu par certaines colonies envahissantes utiliser la
technique suivante dite des deux couches : 1 ml du Peptone..........................................10 g
produit ou des diverses dilutions et port en botes de Chlorure de sodium.........................5 g
Ptri.
Eau distille.............................1000 ml
Le milieu qui a t pralablement fondu et ramen
45- 50C et vers dans la bote. Ne pas attendre plus de pH : 7,2
cinq minutes pour couler le milieu. Mlanger. Laisser
solidifier sur une surface frache et parfaitement Autoclaver 121 C pendant 20 minutes.
horizontale.
Une anse boucle de chaque tube de bouillon lactos
Quand la prparation est solidifie verser en surface une bili au vert brillant, gazogne, aprs agitation soigneuse
mince couche de glose blanche (2 mm d'paisseur et inocule dans un tube de bouillon lactose bili au vert
environ), pralablement fondue et ramener 45 C. brillant.

Laisser solidifier avant de mettre l'tuve. Une autre anse boucle du mme tube de bouillon
lactose bili au vert brillant, gazogne, aprs agitation
Formule de la glose blanche soigneuse et inocule dans un tube d'eau peptone simple.
Glose ......................20 g Les deux tubes sont ports au bain-marie 44 C 0,5
Eau distille ...1000 ml pendant 48 heures. Pour conclure la prsence
d'Eschrichia Coli, il faut la fois que le tube de bouillon
pH : 7 lactose bili au vert brillant port au bain-marie 44 C
soit gazogne, et que la recherche de l'indole soit positive
Rpartir en tubes. Autoclaver 20 min. 120 C. dans le tube d'eau peptone simple qui a t port 44 C.
La recherche de l'indole s'effectue l'aide de l'acide
3. Dnombrement des bactries coliformes avec nitrique nitreux en prsence d'alcool amylique. L'indole
idenification d'Eschrichia Coli se recherche au bout de 24 heures et 48 heures.

En bouillon lactos bili au vert brillant. 4. Recherche et dnombrement des staphylocoques


pathognes
Formule du milieu.
Premire technique : Sur milieu de Chapman
Bactopeptone.................................10 g mannit :
Lactose......................................10 g
Formule du milieu
Eau distille...........................786 ml
Bile de buf frache ou solution 10% de bile Bactopeptone...................................2 g
dshydrate.......200 ml Extrait de viande............................. 1 g
pH : 7,2
Protose peptone.............................9 g
Ajouter alors 13,3 ml d'une solution aqueuse 1/1000 Chlorure de sodium...................................................75 g
de vert brillant. Rpartir en tubes munis d'une cloche (10
ml par tube de l60 x l6 mm ) . Striliser 20 min. Mannitol................................................................10 g
120 C. Bacto agar.............................................................15 g
Ensemencer 2 fois. Rouge de phnol......................0,025 g
1 ml de la dilution au 1/10 Eau distille.............................1000 ml
1 ml de la dilution au 1/100 pH final : 7,4 - 7,5
1 ml de la dilution au 1/200
1 ml de la dilution au 1/1000 Rpartir en tubes de 200 x 22 mm raison de 25 ml par
tube.
Les milieux ensemencs sont mis l'tuve 30 C
pendant 48 heures. Les tubes de milieu gazogne sont Autoclaver 20 min. 120 C. Au moment de l'emploi
considrs comme contenant des bactries coliformes. couler le milieu en botes de Ptri. Laisser solidifier.
Les Eschrichia Coli sont identifis par le test de
Mackenzie. Faire scher l'tuve 37C.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 25

Ensemencer sur deux botes diffrentes : Porter l'bullition pour dissoudre.


0,l ml du produit non dilu
Ajuster pH 7,2 - 7,4 avec de la lessive de soude au
0,l ml de la dilution au 1/10
1/10. Faire bouillir.
Etaler la surface du milieu d'une faon homogne.
Porter l'tuve 37 C. Examiner aprs 24 heures et 48 Filtrer. Rpartir en tubes de 8 ou 9 x 180 mm, sur une
heures. hauteur de 8 cm. Striliser 115 C maximum, pendant
30 minutes.
On retiendra les colonies blanches ou jaunes entoures
d'un halo jaune (mannitol +). B. Mise en vidence de la phosphatase
L'identification des colonies de staphylocoques
pathognes se fera par la mise en vidence de la coagulase Faire un ensemencement en glose incline partir de
libre et ventuellement par la mise en vidence de la la culture en bouillon. Une anse de la culture en bouillon
phosphatase complte par la recherche de l'arobiose est tale sur la surface de la glose. Porter l'tuve 37
anarobiose. En effet, on peut avoir : C pendant 24 heures.
Coagulase + Staphylocoque pathogne 1. Avec la culture obtenue , on fait une forte mulsion
Phosphatase + du germe, pour cela on met 20 gouttes d'eau sale dans un
Coagulase + Staphylocoque pathogne (6% des cas) tube hmolyse. On porte la culture obtenue en glose
dans cette eau physiologique jusqu' obtention d'une
Phosphatase - mulsion dense.
Coagulase - Staphylocoque pathogne (4% des cas)
Phosphatase + ou Micrococcus. Dans un autre tube hmolyse contenant 0,25 ml de
solution de paranitro phnylphosphate disodique, ajouter
Dans ce dernier cas, il faut complter par la recherche 0,25 ml d'une solution d'actate de sodium. Mlanger le
de l'arobiose anarobiose, car certains micrococci contenu des 2 tubes et incuber 37C pendant 20 minutes.
possdent une phosphatase. Mais les micrococci sont Si on a une coloration jaune franc : prsence de
arobies stricts. Les staphylocoques sont arobies phosphatase.
anarobies.
A. Mise en vidence de la coagulase libre Faire en mme temps un tmoin sans mulsion de
staphylocoque.
Prlever quelques colonies suspectes. Inoculer chacune
d'elles dans un tube de bouillon diffrent. Porter 24 (solution de paranitrophnylphosphate disodique 4%
heures l'tuve 37 C. dans l'eau distille).
A partir des cultures en bouillon : Rechercher la
coagulase et faire un tube tmoin. (solution d'actate de sodium 2,025 g dans 250 ml
d'eau distille).
Surveiller toutes les heures. Au cas o la coagulase ne
serait positive qu'au bout de 24 heures, refaire un examen Certains staphylocoques pathognes peuvent perdre leur
sur d'autres colonies. coagulase, mais si on a une phosphatage positive et un
Si la coagulase est ngative : Faire la recherche de germe arobie anarobie, conclure staphylocoque
l'arobiose anarobiose. pathogne.

Rechercher la phosphatase. 2. Autre technique de mise en vidence de la


phosphatase
Recherche de l'arobiose anarobiose :
Prlever de la culture en bouillon avec une pipette Premire technique : Mettre 0,50 ml d'eau distille
Pasteur ferme. L'inoculer sur toute la .hauteur d'un tube dans un tube hmolyse, pulvriser avec un agitateur de
de milieu V.L. pralablement fondu, rgnrer, et ramener verre un comprim de substrat l'a-naphtylphosphate
48C - 50 C. acide sodique.
Dans cette suspension faire une mulsion partir de la
Mettre 24 heures l'tuve 37 C aprs culture obtenue sur glose.
refroidissement.
Formule du milieu V.L Milieu l'extrait de viande Incuber 37 C pendant 30 minutes.
et de levure
Introduire alors un comprim d'orthodiamine bis azote
Peptone trypsique.............................10 g pralablement pulvris.
Chlorure de sodium...........................5 g
En prsence de phosphatase on a une coloration rouge
Extrait de viande................................4 g grenat produite par l'a-naphtol libr. Quand la raction
Extrait de levure....................................5 g est ngative la teinte jaune initiale persiste.
Chlorydrate de cystine................0,30 g
Glucose..................................................2 g L'identification du caractre pathogne doit porter sur
un nombre suffisant de colonies : 5 colonies et plus, s'il y
Agar en poudre...................................6 g a 50 colonies suspectes sur la bote; 10 colonies et plus,
Eau distille................................1000 ml s'il y a plus de 50 colonies suspectes sur la bote.

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26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

Deuxime technique : Pour la recherche et le Les botes inocules sont incubes 37 C et examines
dnombrement du staphylocoque pathogne. aprs 24 heures, puis 48 heures.
Utilisation du milieu de Baird-Parker la
Les staphylocoques pathognes forment des colonies
sulfamzathine.
noires entoures d'une zone d'claircissement du jaune
duf.
Formule du milieu
Cet aspect est caractristique et spcifique.
a) Milieu de base
Les Proteus Hauseri donnent des colonies identiques,
Tryptone........................................................10 g
mais la sulfamzathine inhibe leur dveloppement.
Extrait de viande de buf................................5 g
Extrait de levure..............................................1 g Le milieu complet ne se conserve que 24 heures.
Chlorure de lithium.........................................5 g Confirmation du caractre pathogne du
Agar...............................................................20 g staphylocoque par la recherche de la phosphatase :
Solution de sulfarmzathine 0,2%.............25 ml
On utilise le ractif nitrophnylphosphate-disodique
Eau distille.........................................1000 ml 20 gamma par millilitre, en solution dans un tampon pH
Tris 8 :
Prparation de la solution de sulfamzathine
Tampon Tris: triphosphate de sodium pur : 121 g/l .
Dissoudre 0,5 g de sulfamzathine dans 25 ml de soude
N/10 et complter 250 ml avec de l'eau distille. On verse le ractif la surface du milieu Baird Parker
sur lequel les colonies caractristiques se sont
Cette solution peut s'ajouter dans le milieu avant ou dveloppes.
aprs l'autoclavage.
On incube 30 C pendant une demi (1/2) heure.
Le milieu de base doit tre autoclav 20 minutes
120C. Les staphylocoques pathognes, phosphatase + donnent
autour de la colonie une coloration jaune qui se trouve
Le pH final de la base doit tre ajust 7,2. l'intrieur de la zone d'claircissement.
Rpartir 20 ml par tube de 20 X 200 mm. On vite ainsi la recherche de la coagulase.
Au moment de l'emploi, faire fondre le milieu de base 5. Recherche des salmonelles
au bain-marie bouillant, puis refroidir 45C- 48C.

Ajouter alors les solutions suivantes, filtres et chaudes Effectuer cette recherche sur 25 ml de produit.
par 20 ml de base.
a) Pr-enrichissement.
b) Glycine 20%....................................1,2 ml
25 ml de produit sont ports dans 75 ml de bouillon
c) Tellurite de potassium 1%...............0,2 ml
ordinaire (double concentration).
d) Pyruvate de sodium 20%...............1 ml
Formule du bouillon ordinaire (double
e) Emulsion de jaune duf......................1 ml
concentration).
Les solutions b, c et d sont prpares dans de l'eau
Extrait de viande de buf....................2 g
distille puis strilises par passage sur filtre Seitz ou sur
bougie Chamberland L 3. Protose peptone............................20 g
Emulsion du jaune d'uf. Chlorure de sodium................................................10 g
Diluer 5 ml de jaune duf strile prlevs Eau - distille...............................1000 ml
aseptiquement dans 95 ml d'eau sale, strile.
Rpartir dans des flacons de 150 ml, 75 ml du milieu
Vrifier la strilit par culture en bouillon nutritif
double concentration. Autoclaver 20 min. 120 C pH
ordinaire incuber 30 C pendant 3 jours au moins.
7,2.
Le milieu complet ainsi obtenu est coul en botes de Dans un flacon contenant 75 ml de bouillon ordinaire,
Ptri. mettre 25 ml de glace ou de crme glace. Incuber 37C
Quand le milieu est froid et sec, il est ensemenc avec : pendant 18 h. 24 heures.
Le pr-enrichissement en bouillon ordinaire doit tre
0,l ml de produit non dilu,0,l ml de la dilution au 1/10. utilis obligatoirement pour tous les produits surgels.

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8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 27

b) Enrichissement.
1 ml du contenu de ce flacon est inocul dans un tube
de milieu au slnite, plus cystine.

Incuber 37C, ou mieux 40C pendant 24 heures.

Formule du milieu au slnite plus cystine


Tryptone..........................................................5 g
Lactose............................................................4 g
Phosphate disodique..........................10 g
Slnite acide de sodium.................4 g
Cystine........................................0,01 g
Eau distille.............................1000 ml
PH final 7
Ne pas autoclaver. Rpartir raison de 20 ml par tube
de 200 x 20 mm.

Chauffer en vapeur fluente pendant 30 minutes


conserver au rfrigrateur.

C. Isolement

L'isolement se fait sur glose au dsoxycholate citrate,


lactose, formule de Leifson, modifie par Hynes.
On incube l'tuve 37C pendant 24 h. 48 h.

Les colonies suspectes, quand elles ont t parfaitement


isoles, sont repiques sur milieu de Kligler.

On procde ensuite l'identification.

48
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 7
18 janvier 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 21 Chabane 1426 correspondant au


25 septembre 2005 rendant obligatoire la
mthode de recherche de Listeria monocytogenes
dans le lait et les produits laitiers.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de recherche
de Listeria monocytogenes dans le lait et les produits
laitiers.
Art. 2. Pour la recherche de Listeria monocytogenes
dans le lait et les produits laitiers, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Chabane 1426 correspondant
au 25 septembre 2005.
Lachemi DJAABOUBE

49
8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006

ANNEXE

METHODE DE RECHERCHE DE LISTERIA MONOCYTOGENES


DANS LE LAIT ET LES PRODUITS LAITIERS

1. Dfinitions 2.1 Enrichissement primaire en milieu slectif


Pour les besoins de la prsente mthode les dfinitions liquide
suivantes s'appliquent. Prise d'essai de 25 gr ou 25 ml d'chantillon dans le
milieu slectif Fraser au demi. Incubation 30 C pendant
1.1 Listeria spp : 18 24 h
Microorganismes formant des colonies typiques sur un 2.2 Enrichissement secondaire et isolement primaire.
milieu slectif solide et possdant les caractristiques Aprs la priode dincubation du milieu (2.1) procder :
morphologiques, physiologiques et biochimiques dcrites * dune part, lenrichissement secondaire dans du
quand les essais sont effectus selon la prsente mthode. bouillon Fraser en tubes raison de 0,1 ml de la solution
obtenue en (2.1), incuber 37C pendant 24h,
1. 2 Listeria monocytogenes :
* et dautre part, lisolement primaire par stries sur
Espce type de Listeria pathogne et qui peut tre une plaque de glose Oxford ou Palcam. Lincubation se
diffrencie des autres espces car elle prsente des fera 37C pendant 24 48 heures.
caractristiques biochimiques spcifiques. 2.3 Confirmation
1.3 Recherche de Listeria monocytogenes Aprs la priode dincubation des milieux (2.2)
procder :
Dtermination de la prsence ou de l'absence de ce
microorganisme, dans une masse ou un volume * dune part, lisolement secondaire par stries sur une
dtermin, quand les essais sont effectus selon la plaque de glose Oxford ou Palcam, partir du bouillon
prsente mthode. denrichissement secondaire. Lincubation se fera 37C
pendant 24 48 heures,
2. Principe * et dautre part, la lecture des plaques de glose
En gnral, la recherche de Listeria monocytogenes, Oxford ou Palcam. Observer les colonies caractristiques,
ncessite au moins quatre tapes successives telles que et repiquer trois cinq dentre elles sur milieu TSYEA en
dcrites de ( 2.1) (2.4). Et tel quillustr galement par vue dune purification. Lincubation des plaques de glose
la reprsentation schmatique du mode opratoire TSYEA se fera 37C pendant 24 48 heures.
suivant : 2.4 Identification biochimique
Aprs la priode dincubation, procder dabord :
Figure 1
* lidentification du genre Listeria base sur laspect
Reprsentation schmatique morphologique des colonies, la coloration de Gram et sur
du mode opratoire la raction Catalase,
* puis lidentification de lespce Listeria
Enrichissement primaire (25 gr ou 25 ml dans 225 ml monocytogenes, base essentiellement sur lhydrolyse de
de milieu Fraser au 1/2) lesculine, la mobilit 22-25C, les ractions (Vauges
Incubation 30 C pendant 18 24 h Prauskawer VP) et du rouge de mthyle, lhmolyse ou le
Camp-Test, la fermentation du glucose sans gaz, le type
Ensemencement secondaire 0,1ml sur Fraser respiratoire.
en tubes de 10 ml, et 3. Milieux de culture et ractifs
Isolement en stries sur glose Oxford ou Palcam 3. 1 Milieux de culture
Incubation 37 C pendant 24 48 h 3.1.1 Bouillon denrichissement primaire : milieu de
base.
Slection de trois cinq colonies caractristiques
Composition :
et isolement en stries sur une autre plaque
de glose Oxford ou Palcam Peptone de protase......... 5,0 g
Incubation 37 C pendant 24 48 h Tryptone ...... 5,0 g
Extrait de viande de buf ... 5,0 g
Purification sur glose TSYEA Extrait de levure .......... 5,0 g
NaCl ................... 20,0 g
Incubation 37 C pendant 24 h Na2HPO42H2O ............ 12,0 g
(ou plus, si ncessaire) KH2PO4 .......... 1,35 g
Esculine ... 1,0 g
Examens complmentaires Chlorure de lithium . 3,0 g
Eau....... 1000ml

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Prparation : Prparation :
Faire dissoudre les composants dans de leau, puis Dissoudre les ingrdients solides dans le mlange
chauffer modrment jusqu dissolution complte. thanol/ eau. Striliser par filtration.
Ajuster le pH 7,2. Au moment de lemploi faire fondre le milieu puis le
Rpartir ensuite le milieu raison de : refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Ajouter par
la suite 2,25 ml du supplment slectif Oxford reconstitu.
225 ml par flacon qui serviront aux enrichissements
Homogniser et couler en botes de Ptri striles.
primaires ;
Laisser solidifier sur paillasse puis les scher l'tuve.
10 ml par tube qui serviront aux enrichissements
secondaires. Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
conserves +4C pendant 4 5 jours.
Striliser ensuite le milieu 121C pendant 15 minutes.
3.1.5. Milieu d'isolement (glose Palcam) milieu de base
3.1.2 Supplment slectif pour Bouillon Fraser
Composition :
Au moment de lutilisation du bouillon Fraser au demi
Peptone ................................................................. 23,0 g
tout comme le bouillon Fraser, ils doivent tre
Amidon ................................................................... 1,0 g
additionns de leur supplment dont la formule est la Agar - Agar ........................................................... 20,0 g
suivante : Chlorure de sodium ................................................ 5,0 g
Acide nalidixique ...... 22,5 mg D(-) mannitol ........................................................ 10,0 g
Acriflavine . 28,125 mg Ammonium de fer III citrate .................................. 0,5 g
Esculine .................................................................. 0,8 g
Citrate de Fer (III) ammoniacal ... 1,125 mg Glucose ................................................................... 0,5 g
Chlorure de lithium .............................................. 15,0 g
Reconstituer strilement un flacon de supplment par Rouge de Phnol ................................................... 0,08 g
22,5 ml dun mlange 1/1 eau/thanol strile (soit 11,25 Eau .................................................................... 1000 ml
ml deau distille strile et 11,25 ml dthanol ).
Dissoudre les composants dans de leau, puis chauffer
Mlanger doucement pour dissoudre. modrment jusqu dissolution complte. Ajuster le pH
Ajouter ensuite aseptiquement : 7,2 25C. Rpartir ensuite le milieu raison de 225 ml
par flacon puis striliser 121C pendant 15 minutes.
* 2,25 ml de la solution ainsi prpare, 225 ml de
bouillon Fraser au demi ; Prparation :
* 0,10 ml de la solution ainsi prpare, 10 ml de Au moment de lemploi faire fondre le milieu puis le
bouillon Fraser. refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Ajouter par
Bien mlanger avant d'introduire linoculum. la suite 2,25 ml du supplment Palcam reconstitu.
Une fois reconstitu, le supplment doit tre Homogniser et couler en botes de Ptri striles.
maintenu + 4C, labri de la lumire et ne doit pas Laisser solidifier sur paillasse puis les scher l'tuve.
dpasser les 8 jours. Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
conserves +4C pendant 4 5 jours.
3.1.3. Milieu d'isolement (glose Oxford) milieu de
base 3.1.6 Milieu de culture glos : Tryptone soja extrait
Composition : de levure (TSYEA)
Glose Columbia...................39 g Composition :
Esculine...........................1 g Bouillon tryptone soja .......................................... 30,0 g
Citrate de fer(3+) ammoniacal.........0,5 g Extrait de levure ..................................................... 6,0 g
Chlorure de lithium...............15 g Agar Agar (1) ................................................. 9 18,0 g
Eau..........................1000 ml Eau .................................................................... 1000 ml
Digestat enzymatique de casene .......................... 17,0 g
Prparation Digestat enzymatique de farine de soja .................. 3,0 g
Dissoudre les composants dans de leau, puis Chlorure de sodium ................................................ 5,0 g
chauffer modrment jusqu dissolution complte. Hydrognophosphate dipotassique ......................... 2,5 g
Ajuster le pH 7,2 25C. Rpartir ensuite le milieu Glucose ................................................................... 2,5 g
raison de 225 ml par flacon puis striliser 121C Dissoudre les composants dans de leau, puis chauffer
pendant 15 minutes. modrment jusqu dissolution complte. Ajuster le pH
7,3 25C. Rpartir ensuite le milieu raison de 225 ml
3.1.4 Supplment slectif pour glose Oxford. par flacon puis striliser 121C pendant 15 minutes.
Composition : Au moment de lemploi, faire fondre le milieu puis le
Cycloheximide ................................................... 200 mg refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Couler en
Sulfate de colistine.........................10 mg botes de Ptri, laisser solidifier sur paillasse puis les
Acriflavine.................................2,5 mg scher l'tuve.
Cfottan......................................1 mg
Fosphomycine......................................5 mg Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
Ethanol...............................................2,5 ml conserves +4C pendant 4 5 jours.
Eau.............................................2,5 ml (1) selon le pouvoir glifiant de lAgar-Agar

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3.1.7 Glose au sang 3.1.9 Milieu de mobilit


Base de glose au sang n 2 (1)................................ 40 g Composition :
Eau ........ 1000 ml
Peptone de casine ............................................... 20,0 g
Composition : Peptone de viande ................................................... 6,1 g
Peptone de protose ................................................. 15 g Agar-agar ................................................................ 3,5 g
Digestat de foie ....................................................... 2,5 g Eau .................................................................... 1000 ml
Extrait de levure ................................................ 5 g
Chlorure de sodium ................................................... 5 g Prparation
Agar-Agar (selon le pouvoir glifiant de l'agar) 12 18 g Dissoudre les composants dans l'eau en portant
bullition.
Prparation Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
Dissoudre la base de glose au sang dshydrate strilisation il soit de 7,3 25 C.
dans l'eau, en portant bullition. Rpartir dans des tubes par quantits d'environ 5 ml.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121C
strilisation il soit de 7,0 25 C. pendant 15 minutes.
Rpartir la base dans des flacons de 500 ml de
capacit maximale. 3.1.10 Essai de CAMP (Christie, Atkins, Munch-
Striliser lautoclave (4.1.1.2) rgl 121 C Petersen)
pendant 15 minutes. Les botes de glose au sang (3.1.7) peuvent convenir
Refroidir le milieu 45 C. Ajouter le sang dfibrin pour cet essai, mais il est prfrable d'utiliser des botes de
et bien mlanger. Ptri trs minces couches de glose au sang de mouton
Rpartir le milieu par quantits d'environ 20 ml dans (3.1.10.3).
des botes de Ptri striles et le laisser se solidifier.
3.1.10.1 Base
3.1.8. Base
Composition :
Protose peptone ..................................................... 10 g
Base de glose au sang n 2 (voir 3.1.7) ................. 40 g
Extrait de buf .......................................................... 1 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Chlorure de sodium ................................................... 5 g
Pourpre de bromocrsol ....................................... 0,02 g
Prparation
Eau .................................................................... 1000 ml
Dissoudre la base dshydrate dans l'eau en portant
3.1.8.1 Prparation bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
Dissoudre les composants dans leau en portant
strilisation, il soit de 7,0 25 C.
bullition.
Rpartir dans des tubes ou des flacons par quantits
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
de 100 ml.
strilisation il soit de 6,8 25 C.
Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121 C pendant
Rpartir dans des tubes par quantits telles qu'aprs 15 min. Laisser refroidir 45 C.
il reste 9 ml.
Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121C 3.1.10.2 Milieu au sang
pendant 20 minutes.
Composition :
3.1.8.2 Solutions d'hydrates de carbone Couche de base (3.1.10.1) ................................... 100 ml
Composition : Sang dfibrin de cheval ou de mouton .................. 7 ml
Hydrate de carbone (2) .............................................. 5 g
Prparation
Eau ...................................................................... 100 ml
Ajouter le sang dfibrin la base fondue et strilise
Prparation (3.1.10.1).
Dissoudre sparment chaque hydrate de carbone.
3.1.10.3 Milieu complet
3.1.8.3 Milieu complet Rpartir la base (3.1.8.1) dans des botes de Ptri
Pour chacun des hydrates de carbone, ajouter striles par quantits d'environ 10 ml et laisser se
aseptiquement 1 ml de solution (3.1.8.2) 9 ml milieu de solidifier. Verser une trs fine couche du milieu de sang
base (3.1.8.1). (3.1.10.2) en utilisant des quantits n'excdant pas 3 ml
par boite.
Si de plus petits volumes de milieu de base ont t
prpars, ajouter alors galement de plus petits volumes Laisser se solidifier en une pellicule uniforme. Si le
de solution dhydrate de carbone. sang est ajout des botes contenant la base prpare
l'avance, il peut s'avrer ncessaire de chauffer les botes
(1) Composition de la base de glose au sang n 2. pendant 20 min. en les plaant dans une tuve rgle
37C avant de verser la pellicule de sang.
(2) 100 ml de solution de L-raminose et 100 ml de
solution de D-xylose sont ncessaires. Scher les botes avant l'emploi.

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3.1.10.4 Cultures de raction CAMP 4.1.8 Fil d'ensemencement, en platine/iridi, en


nickel-chrome ou en matire plastique.
Une souche faiblement -hmolytique de
Staphylococcus aureus (par exemple, NCTC 1803) et une 4.1.9 pH-mtre temprature compense pour
souche de Rhodococcus equi (par exemple, NCTC 1621) mesurer le pH des milieux prpars et des ractifs, prcis
sont ncessaires pour raliser l'essai de CAMP. Toutes les 0,l unit de pH 25 C.
souches de Staphylococcus aureus ne se prtent pas 4.1.10 Rfrigrateur pour conserver les milieux
l'essai de CAMP. prpars et les ractifs, pouvant fonctionner une
Conserver les cultures de S. aureus, R. equi, L. temprature comprise entre +2 C et +5 C.
monocytogenes, L. innocua et L. ivanovii en ensemenant
4.1.11 Faisceau de lumire blanche
les tubes inclins de TSYEA (3.1.6), et en incubant 37
C pendant 24 h 48 h, ou jusqu' ce qu'une croissance se 4.1.12 Miroir, plat ou concave.
produise, et les conserver au rfrigrateur (4.1.10) 4 C. 4.1.13 Trpied, pour clairer les botes de Ptri.
Repiquer les cultures au moins 1 fois par mois. 4.1.14 Microscope contraste de phase, avec objectif
immersion l'huile.
3.2 Ractif-Solution de proxyde d'hydrogne, 3%
(V/V) 4.2 Verrerie
La verrerie doit rsister des strilisations rptes.
4. Appareillage et verrerie
4.2.1 Flacons de culture, pour la strilisation et la
Striliser tous les appareils qui entreront en contact avec conservation de milieux de culture et l'incubation de
les milieux de culture, le liquide de dilution ou milieux liquides.
l'chantillon, sauf s'il s'agit d'appareils livrs en condition 4.2.2 Tubes de culture, de 16 mm de diamtre et125
strile (en particulier les appareils en matire plastique). mm de longueur. (Des tubes couvercle mtallique
peuvent tre utiliss).
4.1 Appareillage
4.2.3 Eprouvettes gradues, pour la prparation des
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en milieux complets.
particulier, ce qui suit.
4.2.4 Pipettes gradues, de 25 ml, 10 ml et 1 ml de
4.1.1 Appareils pour la strilisation en chaleur sche capacit, gradues respectivement en 0,5 ml, 0,5 ml et
(four) ou en chaleur humide (autoclave). 0,l ml.

4.1.1.1 Four, rglable 173 C 3. 4.2.5 Botes de Ptri striles.


4.1.1.2 Autoclave, rglable 121 C 1. 4.2.6 Lames pour microscope.
4.2.7 Billes en verre.
4.1.2. Etuve, rglable 30 C 1.
5. Echantillonnage
4.1.3 Etuve, rglable 37C 1.
4.1.4 Etuve, rglable 25 C 1. Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
4.1.5 Bains d'eau, rglables 45 C 1 ou 37 C 1. du transport et de l'entreposage.
4.1.6 Appareillage pour l'homognisation
Il convient de suivre les instructions pour
Utiliser l'un des appareils suivants : l'chantillonnage des fins microbiologiques.

a) homognisateur rotatif, dont la frquence de 6. Prparation de l'chantillon


rotation est comprise entre 8000 tours/ min et 45000 tours/
min, avec des bols en verre ou en mtal, munis de 6.1 Lait
couvercles rsistant aux conditions de strilisation; ou Agiter soigneusement l'chantillon afin d'assurer une
rpartition aussi uniforme que possible des
b) homognisateur de type pristaltique microorganismes, en retournant rapidement 25 fois le
(stomacher), avec des sacs striles en matire rcipient contenant l'chantillon. Il faut viter la
plastique. formation de mousse ou bien la laisser se disperser si elle
Les bols ou les sacs en matire plastique doivent avoir se forme. L'intervalle de temps entre le mlange et le
une capacit suffisante pour permettre de mlanger prlvement de la prise d'essai ne doit pas dpasser 3 min.
correctement la prise d'essai avec la quantit approprie
de diluant. En gnral, le volume du rcipient doit tre 6.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en
environ le double du volume de la prise d'essai poudre, lactose, casine, casinate
additionne du diluant. Mlanger soigneusement le contenu du rcipient ferm
en secouant et en retournant manuellement de faon
4.1.7 Anses boucles, en platine/iridi ou en rpte. Si le rcipient est trop rempli pour permettre une
nickel-chrome, ou en matire plastique, d'environ 3 mm bonne agitation, transfrer dans un rcipient plus grand,
de diamtre. puis mlanger.

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6.3 Beurre 7.l.4 Beurre


Faire fondre l'chantillon dans un rcipient strile dans Agiter l'chantillon pour essai fondu, puis l'aide d'une
un bain d'eau (4.1.5) maintenu 45 C. Agiter pendant la pipette chauffe environ 45C, transfrer 25 ml dans un
fusion et retirer immdiatement le rcipient du bain d'eau flacon contenant 225 ml de milieu d'enrichissement
ds que l'chantillon est juste fondu. (3.1.1). Mlanger soigneusement.

6.4 Fromage 7.1.5 Fromage

Normalement, l'chantillon pour laboratoire peut tre Peser 25 g de l'chantillon pour essai dans le
compos de la pte et de la crote. Les portions du rcipient strile de l'homognisateur,(4.1.6).
fromage constituant l'chantillon pour essai devront Ajouter 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1)
faire l'objet d'un accord entre les parties intresses prchauff 37 C environ. Mlanger soigneusement la
concernes. prise d'essai par homognisation.
Oprer comme dcrit au point (7.1.5).
7.1.6 Produits laitiers congels (y compris les glaces
de consommation)
6.5 Glaces de consommation
Transfrer 25 g de l'chantillon pour essai fondu l'aide
Procder comme dans le cas du beurre (6.3) mais d'une pipette dans un flacon contenant 225 ml de milieu
utiliser un bain d'eau (4.1.5) maintenu une temprature d'enrichissement (2.1) et mlanger.
infrieure 37 C, ne doit pas dpasser cette temprature.
7.1.7 Laits ferments, yaourts, crmes et desserts
6.6 Laits ferments, yaourts, crmes desserts
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
Mlanger le contenu du rcipient ferm en secouant et dans un flacon bouch et contenant des billes en verre
en retournant manuellement de faon rpte, ou ouvrir le (4.2.7) et 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1).
rcipient et mlanger le contenu aseptiquement en Mlanger en agitant.
utilisant une spatule ou une cuillre strile.
Si l'on examine des chantillons basse valeur de pH,
7. Mode opratoire vrifier aseptiquement le pH de la suspension avec un
papier indicateur color et, si ncessaire, l'ajuster 7,0
7.1 Ensemencement du milieu d'enrichissement 0,5 25 C.
Pour examiner plus d'une prise d'essai de 25 g d'un lot 7.2 Incubation
spcifi de lait ou de produit laitier et que l'on peut
prouver que le groupement (mise en commun des diverses Incuber le milieu d'enrichissement ensemenc pendant
prises d'essai) n'affectera pas le rsultat pour le lait ou les 48 h dans l'tuve (4.1.2) rgle 30 C.
produits laitiers, les prises d'essai peuvent tre regroupes.
Par exemple, s'il faut examiner 10 prises d'essai de 25 g, 7.3 Isolement et identification prsume
on pourra regrouper les 10 units pour former une seule 7.3.1 Ensemencer en stries avec une anse (4.1.7) partir
prise d'essai de 250 g et la dissoudre ou la mlanger dans du milieu d'enrichissement la surface d'une bote de glose
2,25 l de milieu d'enrichissement. d'Oxford (3.1.3) pour obtenir des colonies bien isoles.
Ajouter une prise d'essai au milieu d'enrichissement 7.3.2 Retourner la bote et la placer dans l'tuve (4.1.3)
(3.1.1) comme dcrit de (7.1.1) (7.1.7). rgle 37 C pendant 48 h.
7.3.3 Examiner la bote pour vrifier la prsence de
7.1.1 Lait colonies typiques de Listeria spp. (colonies entoures par
Ajouter 25 ml de la prise d'essai 225 ml de milieu des halos bruns foncs ou noirs).
d'enrichissement (3.1.1) et mlanger.
7.4 Confirmation
7.1.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en 7.4.1 Slection de colonies pour confirmation
poudre et casinate
A partir de chaque bote de milieu d'isolement (glose
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai d'Oxford),(3.1.3), slectionner cinq colonies typiques ou
dans un flacon bouch contenant 225 ml de milieu suspectes ou, s'il y a moins de cinq colonies, slectionner
d'enrichissement (3.1.1). Dissoudre en agitant. toutes les colonies pour confirmation.

7.l.3 Casine 7.4.2 Incubation


Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai Ensemencer en stries les colonies slectionnes sur la
dans le rcipient strile de l'homognisateur (4.l.6) et surface des botes par (TSYEA) (7.3.2) d'une faon
ajouter 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1) 45 C. permettant aux colonies bien isoles de se dvelopper.
Placer les botes dans l'tuve (4.1.3) rgle 37 C
Dissoudre soigneusement la prise d'essai par pendant 24 h ou jusqu' ce que la croissance soit
homognisation (1 min 3 minutes). satisfaisante.

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L'paisseur du milieu de glose (15 ml/bote) est 7.4.5 Hmolyse


importante pour une bonne illumination de Henry (voir Si les caractristiques morphologiques et
ci-dessous). physiologiques et la raction par catalase indiquent la
Examiner les botes l'aide d'un faisceau de lumire prsence de Listeria spp., ensemencer les botes de glose
blanche (4.1.11), suffisamment puissante pour bien au sang (3.1.7) pour dterminer la raction hmolytique.
clairer les botes et orient de faon clairer le fond de Bien scher la surface de glose avant l'utilisation.
la bote sous un angle de 45 (voir figure 2). Tracer une grille sur le fond de la bote pour dfinir une
trame de 20 25 espaces par bote.
Lorsquon examine sous cette lumire en clairage
oblique (illumination de Henry) en regardant le dessus de Prendre une colonie typique partir de la bote
la bote, les colonies de Listeria spp. sont de couleur (TSYEA) et inoculer un espace pour chaque culture
bleue, et prsentent une surface granuleuse. l'aide d'un fil d'ensemencement (4.1.8).
Piquer simultanment des cultures de contrle
Si les botes (TSYEA) ne prsentent pas de grandes positives et ngatives (L. monocytogenes, L. ivanovii et
colonies typiques bien isoles, il convient d'ensemencer L. innocua).
nouveau en stries une colonie et de procder comme dcrit
prcdemment. Aprs incubation 37 C pendant 48 h dans l'tuve
(4.1.3), examiner les souches d'essai et les cultures de
7.4.3 Raction par catalase contrle.
Prlever une colonie typique et la mettre en suspension Les L. monocytogenes prsentent des zones claires
dans une goutte de solution de proxyde d'hydrogne troites et lgres (l-hmolyse); les L. innocua ne doivent
3% (3.2) sur une lame. prsenter aucune zone claire autour du point de piqre.
Les L. ivanovii prsentent habituellement des zones
La prsence de Listeria spp. positives par catalase est
larges et bien dlimites de fi-hmolyse. Maintenir les
dmontre par la formation de bulles de gaz. botes sous une lumire vive pour comparer les cultures en
essai avec des cultures de contrle.
7.4.4 Morphologie et proprits de coloration
7.4.4.1 Prparer une culture dans le milieu (TSYEA) 7.4.6 Confirmation biochimique
(3.1.6)correspondant une colonie typique utilise dans la Pour ces essais, utiliser une culture dans du TSYEA
raction hmolytique (7.4.5). (7.4.4.1).
Choisir une colonie typique et la mettre en suspension 7.4.6.1 Utilisation d'hydrate de carbone
dans un tube contenant du TSYEA. Incuber dans l'tuve
(4.1.4) rgle entre 20 C et 25 C jusqu' l'apparition d'un Ensemencer chacun des bouillons de fermentation
trouble important (entre 8 h et 24 h). d'hydrate de carbone (3.1.8.2) avec le contenu d'une anse
ou 0,l ml de culture (TSYEA) (7.4.6).
Examen des botes pour dceler des colonies suspectes Incuber 37 C dans l'tuve (4.l.3) pendant 7 jours.
Raliser une prparation humide en utilisant une anse Toutefois, les ractions positives (formation d'acide)
remplie de culture incube et l'examiner au microscope sont rvles par une coloration jaune et se produisent
(4.1.4). Les Listeria spp. se prsentent sous forme de gnralement dans un dlai de 24 h 48 h.
minces btonnets courts ayant une mobilit lente en
pirouette. 7.4.6.2 Essai de CAMP
Ensemencer en stries les cultures de S. aureus et R. equi
Des cultures dveloppes une temprature suprieure en lignes simples en travers de la bote de glose au sang
25 C peuvent ne pas prsenter cette mobilit. Il faut (3.1.7 ou 3.1.10) de telle sorte que les 2 cultures soient
toujours comparer avec une culture connue. Les cocci, les parallles et diamtralement opposes (voir figure 3).
grands btonnets ou les btonnets prsentant une mobilit
rapide ne sont pas des Listeria spp. Il est ncessaire d'avoir un inoculum fin et gal. Ceci
peut tre obtenu en utilisant une aiguille d'ensemencement
Un essai complmentaire de contrle de la mobilit peut (4.1.8) ou une anse (4.1.7) maintenue angle droit par
tre effectu en ensemenant, avec un fil rapport la glose.
ensemencement (4.l.8), le milieu de mobilit (3.1.9) par
Ensemencer en stries la souche d'essai de faon
piqres avec une culture prleve partir d'une colonie
similaire angle droit par rapport ces cultures de telle
typique de (TSYEA) (7.4.2) et incuber dans l'tuve (4.1.4)
sorte que la culture d'essai et les cultures de raction ne se
rgle 25 C pendant 48 h.
touchent pas mais soient distantes d'environ 1 mm 2 mm
Examiner la croissance autour des piqres. Les en leur cart le plus proche.
Listeria spp. sont mobiles et produisent un motif de Plusieurs souches d'essai peuvent tre ensemences en
croissance typique en ombrelle. stries sur la mme bote.
En cas de rsultat ngatif, incuber pendant 5 jours Simultanment, ensemencer en stries les cultures de
supplmentaires et observer nouveau les piqres. contrle de L. monocytogenes, L. innocua et L. ivanovii.
Si la glose au sang (3.1.7) est utilise incuber les boites
7.4.4.2 Effectuer un essai sur une colonie typique sur 37 C pendant 18 h 24 h, dans l'tuve (4.1.3). Si des
(TSYEA) (7.4.2) pour la raction de Gram. Les Listeria boites double souches sont utilises incuber 37C
spp. sont des germes Gram positif. pendant 12 h 18 h, dans l'tuve (4.1.3).

55
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006

Considrer la raction comme positive s'il y a une zone Lorsque le bouillon d'enrichissement a t incub
dveloppe de fi-hmolyse l'intersection de la souche pendant 48 h, puis aprs 7 jours, il convient d'ensemencer
d'essai et de la culture de S. aureus une raction positive. les botes de milieu d'isolement.
La raction positive avec R. equi se traduit par la Il est possible d'utiliser la mthode pour la dtection
prsence d'une large tte de flche (5 mm 10 mm) de L. moncytogenes dans des chantillons prlevs sur les
d'hmolyse. sites de production. Toutefois, aucun essai en commun
n'a encore t entrepris pour savoir si cet organisme est
Ceci se traduit par une petite zone arrondie d'hmolyse retrouv dans ces chantillons.
dveloppe, s'tendant seulement sur environ 2 mm
partir de la souche d'essai et l'intrieur de la zone 7.7 Cultures de contrle
faiblement hmolytique due la croissance de la culture Afin de s'assurer que les milieux d'enrichissement et
de S. aureus. Une raction similaire peut tre observe d'identification sont capables de permettre la croissance
l'intrieur de la culture d'essai avec R. equi, mais elle est des L. monocytogenes, introduire une dilution de la culture
considre comme ngative. de rfrence de souches rcemment isoles, dans un
flacon de contrle du milieu d'enrichissement (voir 7-2).
Il n'apparat pas de grandes zones d'hmolyse autour de Ajouter 10 100 cellules de L. monocytogenes par flacon.
la culture S. aureus. Procder avec les flacons de contrle de la mme faon
qu'avec les cultures d'essai pour dmontrer que la culture
7.5 Interprtation des proprits morphologiques et de contrle positive est retrouve.
physiologiques et de la raction biochimique
(voir tableau 1) 8. Expression des rsultats
Toutes les Listeria spp. se prsentent sous forme de Selon l'interprtation des rsultats qui a t faite
petits btonnets Gram positifs (uniquement avec les signaler la prsence ou l'absence de L. monocytogenes
cultures de 24h) qui prsentent une mobilit l'tat frais et dans la prise d'essai, en spcifiant la masse en grammes ou
dans le milieu de mobilit. le volume en millilitres de l'chantillon soumis l'essai.

Elles sont positives la catalase. Les L. monocytogenes 9. Rapport d'essai


utilisent la rhamnose mais pas la xylose.
Le rapport d'essai doit indiquer la mthode selon
Les L. monocytogenes, L. ivanovii et L. seeligeri laquelle l'chantillonnage a t effectu, si elle est connue,
(raction faible) produisent une a-hmolyse dans les la mthode utilise, le rsultat d'essai obtenu, et si la
ensemencements sur la glose au sang. rptabilit a t vrifie, le rsultat final cit qui a t
obtenu.
Retirer la colonie pour examiner l'hmolyse en dessous Il doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires
de la colonie. Sur les trois Listeria spp. hmolytiques, non prvus dans la prsente mthode, ou facultatifs, ainsi
seule la L. monocytogenes n'utilise pas la xylose et s'avre que les incidents ventuels susceptibles d'avoir agi sur le
positive pour ce qui concerne l'utilisation de rhamnose. rsultat d'essai.
L. monocytogenes et L. seetigeri (ractions faibles) Le rapport d'essai doit donner tous les renseignements
prsentent une raction positive l'essai de CAMP avec S. ncessaires l'identification complte de l'chantillon.
aureus mais pas avec R. equi.
Tableau 1 Raction pour lidentification
L. ivanovii ragi avec R. equi mais pas avec S. de Listeria spp
aureus. Les autres Listeria spp. prsentent des ractions
ngatives l'essai de CAMP avec les deux cultures de Production Essai
raction. dacide de CAMP

7.6 Confirmation dfinitive Espce Raminose Xylose S. aureus R. qui


Les souches qui sont considres comme tant des L. monocytognes + +
Listeria spp. (7.5) peuvent tre confirmes par une L. innocua V
identification dfinitive. L. ivanovii + +
Avec le lait cru, il a parfois t observ, qu'en L. seeligeri + (+)
procdant un repiquage du bouillon d'enrichissement L. welshimeri V +
aprs incubation pendant 24 h et 48 h, on pouvait L. grayi
amliorer la sensibilit de la mthode. L. murrayi V

On a observ que la mthode est moins sensible pour V = raction


certains fromages crote lave et certains fromages variable
persills que pour d'autres produits (ainsi, la sensibilit de
la mthode pour le fromage Limburger est plus faible (+) = raction faible
des concentrations de L. monocytogenes infrieures deux + = raction
par gramme environ). Pour certains types de fromages, positive
l'incubation du bouillon d'enrichissement doit tre tendue = pas de raction
7 jours.

56
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 15
18 janvier 2006

Observateur regardant perpendiculairement

Faisceau de lumire blanche

Bote

45

Trpied
45

miroire plan

Figure 2- Examen des botes pour dceler des colonies suspectes

R S

Bande troite de-hmolyse L-monocytognes

................................
................................................................................
Pas dhymolyse L-innocua

Large bande de -hmolyse L-ivanovii

Figure 3- Ensemensement des botes pour lessai de CAMP


Remarques

1- Ensemensement de fines botes de glose au sang comme illustr sur le diagramme.


Les lignes verticales reprsentent les stries de s. aureus (S). Les lignes horizontales reprsentent les
stries des cultures dessai les parties hachures indiquent les zones dhmolyse dveloppe.
2- La partie en pointills dlimite la zone dinfluence de la culture de S. aureus.

57
22 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54 25
27 octobre 2013

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
Mthode de la dtermination de la teneur en matire
sche dans le lait, la crme
Arrt du 28 Ramadhan 1433 correspondant au 16 et le lait concentr non sucr
aot 2012 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en matire sche dans La prsente mthode prescrit la technique pour la
le lait, la crme et le lait concentr non sucr. dtermination de la matire sche du lait, de la crme et
du lait concentr non sucr.

Le ministre du commerce, 1. TERMES ET DFINITIONS

Vu le dcret prsidentiel n10-149 du 14 Joumada Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant dfinitions suivantes sappliquent.
nomination des membres du Gouvernement ;
Matire sche : Fraction massique des substances
Vu le dcret excutif n90-39 du 30 janvier 1990, restant aprs la dessiccation complte spcifie dans la
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et prsente mthode.
la rpression des fraudes ;
Note La matire sche est exprime en pourcentage
Vu le dcret excutif n02-453 du 17 Chaoual 1423
en masse.
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
2. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Une prise dessai est pr-sche sur un bain deau
lvaluation de la conformit ; bouillante et leau restante est par la suite vapore dans
une tuve une temprature de 102C 2C.
Vu larrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418
correspondant au 10 aot 1997 relatif aux spcifications 3. APPAREILLAGE ET MATRIAUX
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux
conditions et modalits de leur prsentation ; Sauf indication contraire, utiliser uniquement de leau
distille ou dminralise ou de leau de puret
Vu larrt interministriel du 13 Chabane 1419 quivalente.
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des laits en poudre et aux Matriel courant de laboratoire et en particulier, ce qui
conditions et modalits de leur prsentation ; suit.

Arrte : 3.1 Balance analytique

Article 1er. En application des dispositions de 3.2 Dessiccateur, muni dun dshydratant efficace (par
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier exemple gel de silice rcemment sch, avec un indicateur
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a hygromtrique).
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en matire sche dans le lait, la 3.3 Bain deau bouillante, muni douverture de
crme et le lait concentr non sucr. dimensions rglables.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire 3.4 Etuve, ventile, thermorgule, pouvant tre
sche dans le lait, la crme et le lait concentr non sucr, maintenue 102C 2C dans tout lespace de travail.
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent 3.5 Capsules fond plat, de 20 mm 25 mm de
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt. hauteur, de 50 mm 75 mm de diamtre, constitues dun
matriau appropri (par exemple, acier inoxydable, nickel
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire ou aluminium), munies de couvercles bien ajusts et
lorsquune expertise est ordonne. pouvant tre ts aisment .

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.6 Bains deau.


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. 3.6.1 Bain deau, rglable entre 35C et 40C.

Fait Alger, le 28 Ramadhan 1433 correspondant au 3.6.2 Bain deau, rglable entre 40C et 60C.
16 aot 2012.
3.7 Homognisateur, lhomognisateur est facultatif
Mustapha BENBADA. (5.1).

58
22 Dhou El Hidja 1434
26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54 27 octobre 2013

4. ECHANTILLONNAGE Chauffer le rcipient ferm dans un bain deau (3.6.2)


entre 40C et 60C. Toutes les 15mn, sortir le rcipient du
Lchantillonnage se fait dans des conditions bain et lagiter fortement. Au bout de 2h, retirer le
appropries. rcipient et le refroidir une temprature de 20C 25C.
Enlever le couvercle et bien mlanger en remuant
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon lchantillon avec une cuillre ou une spatule.
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport ou de lentreposage. Note - Si la matire grasse se spare, on ne peut pas
esprer obtenir des rsultats corrects.
5. PREPARATION DE LECHANTILLON POUR
LESSAI 6. MODE OPERATOIRE

5.1 Lait 6.1 Prparation de la capsule

Amener lchantillon une temprature de 20C Chauffer une capsule (3.5) avec son couvercle pos
25C. Mlanger soigneusement afin dobtenir une ct, dans ltuve (3.4) pendant au moins 1h. Mettre le
prparation homogne de la matire grasse dans couvercle sur la capsule et la placer immdiatement dans
lchantillon. Ne pas agiter trop vigoureusement afin le dessiccateur (3.2).
dviter la mousse ou le barattage de la matire grasse.
Sil est difficile de disperser la couche de crme, chauffer Laisser refroidir temprature ambiante (au moins
lentement une temprature de 35C 40C, sur un 30 min) et peser 0,1mg prs.
bain deau (3.6.1), en mlangeant soigneusement de faon
incorporer la crme qui adhre au rcipient. 6.2 Prise dessai
Refroidir lchantillon rapidement une temprature de
20C 25C. Peser rapidement, 0,1mg prs, 1 g 5 g (suivant la
teneur estime en matire sche) de lchantillon prpar,
Un homognisateur peut tre utilis pour faciliter la dans la capsule prpare (6.1). Dans le cas du lait ou de la
dispersion de la matire grasse. crme, incliner la capsule de faon taler la prise dessai
uniformment au fond de la capsule. Dans le cas du lait
concentr non sucr, ajouter 3 ml 5 ml deau distille ou
Note - Des rsultats corrects ne peuvent tre obtenus si
deau de puret au moins quivalente, incliner la capsule
lchantillon contient de la matire grasse liquide
de faon mlanger et taler la prise dessai
apparente, ou si des particules blanches, de forme
uniformment au fond de la capsule.
irrgulire, sont visibles et adhrent aux parois du
rcipient.
6.3 Dtermination
5.2 Crme
6.3.1 Placer la capsule, sans le couvercle, sur le bain
deau (3.3) maintenu vigoureusement lbullition, de
Chauffer lentement lchantillon une temprature de
sorte que le fond de la capsule soit expos de faon
35C 40C, sur un bain deau (3.6.1). Mlanger ou
maximale la vapeur et directement chauff par celle-ci.
remuer la crme avec prcaution et ne pas agiter trop Laisser la capsule pendant 30 min.
vigoureusement afin dviter la mousse ou le barattage.
Refroidir rapidement lchantillon une temprature de 6.3.2 Retirer la capsule du bain deau et la chauffer,
20C 25C. Afin de rduire au minimum lvaporation avec son couvercle pos ct, dans ltuve (3.4) pendant
de leau pendant le mlange, il convient que le rcipient 2h. Mettre le couvercle sur la capsule et la placer
reste dcouvert aussi brivement que possible. immdiatement dans le dessiccateur (3.2).
Note - Des rsultats corrects ne peuvent tre obtenus si 6.3.3 Laisser refroidir la capsule temprature ambiante
le mlange de lchantillon nest pas homogne ou si (au moins 30 min) et peser 0,1 mg prs.
lchantillon prsente un dbut de barattage ou dautres
indices anormaux. 6.3.4 Chauffer nouveau la capsule avec son couvercle
pos cot dans ltuve pendant 1h.
5.3 Lait concentr non sucr
Mettre le couvercle sur la capsule et la placer
Bien agiter le rcipient en le retournant frquemment. immdiatement dans le dessiccateur. Laisser refroidir
Ouvrir le rcipient et verser le lait lentement dans un autre comme en (6.3.3) et peser 0,1 mg prs.
rcipient en verre ou autre matriau appropri, pourvu
dun couvercle tanche, en prenant soin dincorporer 6.3.5 Rpter les oprations spcifies en (6.3.4)
lchantillon la matire grasse ou les autres constituants jusqu ce que la diffrence de masse entre deux peses
pouvant adhrer la paroi du premier rcipient. Agiter successives ne dpasse pas 1mg. Relever la masse la plus
vigoureusement et fermer le rcipient. faible.

59
22 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54 27
27 octobre 2013

7. EXPRESSION DES RESULTATS

7.1 Mode de calcul

La matire sche, exprime en pourcentage en masse est


gale :

m2 - m0
x 100
m1 - m 0

m0 est la masse, en grammes, de la capsule et du


couvercle (6.1) ;

m1 est la masse, en grammes, de la capsule, du


couvercle et de la prise dessai (6.2) ;

m2 est la masse, en grammes, de la capsule, du


couvercle et de la prise dessai sche (6.3.5).

Arrondir la valeur obtenue 0,01% (fraction massique)


prs.

7.2 Fidlit

Note - Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit


sont exprimes au niveau de probabilit 95% et
proviennent des rsultats dun essai interlaboratoires.

7.2.1 Rptabilit

La diffrence entre deux rsultats individuels, obtenus


sur un produit identique soumis essai par le mme
analyste utilisant le mme appareillage dans un court
intervalle de temps, nexcdera pas les valeurs suivantes
de matire sche pour 100 g de produit, en moyenne plus
dune fois sur 20 dans lapplication normale et correcte de
la mthode :
pour le lait 0,10 g ;
pour la crme 0,20 g ;
pour le lait concentr non sucr 0,30 g.

7.2.2 Reproductibilit

La diffrence entre deux rsultats individuels et


indpendants, obtenus par deux oprateurs travaillant dans
des laboratoires diffrents sur un produit identique,
nexcdera pas les valeurs suivantes de matire sche pour
100 g de produit, en moyenne plus dune fois sur 20 dans
lapplication normale et correcte de la mthode.
pour le lait 0,20 g ;
pour la crme 0,35 g ;
pour le lait concentr non sucr 0,50 g.

60
4 Rajab 1435
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25 4 mai 2014

Annexe
Mthode de dtermination de la teneur totale en
matire sche des fromages et des fromages fondus

La prsente mthode constitue la rfrence pour la


dtermination de la teneur totale en matire sche des
fromages et des fromages fondus.

1. DEFINITION

Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition


suivante s'applique.

Teneur totale en matire sche du fromage

Fraction massique de substances, dtermine selon le


MINISTERE DU COMMERCE mode opratoire spcifi dans la prsente mthode.
Note - La teneur totale en matire sche est exprime en
Arrt du 5 Safar 1435 correspondant au 8 dcembre pourcentage de la masse (fraction massique).
2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur totale en matire sche 2. PRINCIPE
des fromages et des fromages fondus.
Schage d'une prise d'essai pese et mlange avec du
sable par chauffage dans une tuve rgle 102C.
Le ministre du commerce ;
Pese de la prise d'essai sche afin de dterminer la
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou El Kaada perte de masse.
1434 correspondant au 11 Septembre 2013 portant
nomination des membres du Gouvernement ; 3. REACTIFS
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la Sauf spcification contraire, utiliser exclusivement des
rpression des fraudes ; ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
ou dminralise ou de l'eau de puret au moins
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 quivalente.
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; 3.1 Solution d'acide chlorhydrique (HCL), avec une
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada fraction massique de 25 %.
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif 3.2 Sable de quartz ou sable de mer
l'valuation de la conformit ;
3.2.1 Le sable doit prsenter une granulomtrie lui
Arrte : permettant de passer au travers d'un tamis en toile
mtallique dont la maille est de 600 m tout en tant
Article 1er. En application des dispositions de retenu par un tamis dont la maille est de 150 m.
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
Le sable doit satisfaire aux exigences de l'essai
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet d'acceptation spcifi en (3.2.2).
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur totale en matire sche des fromages et des 3.2.2 Dposer environ 20 g de sable dans une capsule
fromages fondus. fond plat (4.4) munie d'une baguette d'agitation (4.5).
Chauffer la capsule ouverte contenant le sable ainsi que
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur totale en son couvercle et la baguette d'agitation dans l'tuve (4.3)
matire sche des fromages et des fromages fondus, les rgle 102C pendant au moins 2 h. Remettre le
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression couvercle sur la capsule et laisser cette dernire refroidir
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent dans le dessiccateur (4.2) jusqu' la temprature de la salle
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt. de pese. Peser la capsule avec son couvercle en place 1
mg prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne. Enlever le couvercle de la capsule et humidifier le sable
avec environ 5 ml d'eau. Mlanger l'eau au sable l'aide
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal de la baguette d'agitation. Chauffer la capsule ouverte, son
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et couvercle et la baguette d'agitation dans l'tuve (4.3)
populaire. rgle 102C pendant, au moins, 4 h. Remettre le
couvercle sur la capsule et la laisser refroidir dans le
Fait Alger, le 5 Safar 1435 correspondant au 8 dessiccateur (4.2) jusqu' la temprature de la salle de
dcembre 2013. pese. Peser la capsule avec son couvercle en place 1 mg
prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales. L'cart
Mustapha BENBADA. entre les deux peses ne doit pas dpasser 1 mg.

61
4 Rajab 1435
4 mai 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25 23

3.2.3 Si cette exigence n'est pas satisfaite, traiter le Broyer ou rper l'chantillon pour essai en utilisant un
sable de la manire suivante : appareil pour broyer ou rper appropri (4.6). Mlanger
immerger le sable dans une solution d'acide rapidement la masse moulue ou rpe et, si ncessaire
chlorhydrique (3.1) et l'y laisser pendant trois jours, en pour les fromages pte dure ou semi-dure, la broyer une
remuant de temps autre. Dcanter autant que faire se seconde fois et mlanger de nouveau soigneusement. Dans
peut le liquide surnageant. Laver le sable l'eau jusqu' le cas des fromages pte dure et pte semi-dure, les
disparition de la raction acide du liquide surnageant. couper de prfrence en cubes d'environ 15 mm de ct.
Chauffer le sable environ 160C pendant, au moins, 4 h.
Renouveler ensuite l'essai d'acceptation dcrit en (3.2.2). Mlanger les cubes en les secouant dans un rcipient.
Broyer ou rper l'chantillon pour essai comme indiqu
4. APPAREILLAGE prcdemment. Nettoyer l'appareil aprs la prparation de
chaque chantillon.
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit : Si l'chantillon ne peut tre ni broy ni rp, le
4.1 Balance analytique, capable de peser 1 mg prs mlanger soigneusement par malaxage approfondi, par
et avec une prcision de lecture de 0,1 mg. exemple dans un mortier l'aide d'un pilon. Prendre garde
d'viter toute perte d'humidit.
4.2 Dessiccateur, rempli d'un dshydratant appropri
(par exemple du gel de silice frachement sch contenant Conserver l'chantillon prpar dans un rcipient
un indicateur hygromtrique). hermtique l'air jusqu'au moment de l'analyse, laquelle
doit tre effectue dans les plus brefs dlais aprs le
En alternative, il est possible d'utiliser une plaque en broyage.
mtal ou en verre convenant un schage rapide des
capsules. Cette plaque doit tre installe dans une armoire Cependant, si un dlai est invitable, prendre toutes
ferme au travers de laquelle passe un flux d'air sec.
prcautions pour assurer une conservation adquate de
4.3 Etuve ventile, chauffage lectrique, munie l'chantillon. En cas de rfrigration, ramener l'chantillon
d'oues de ventilation compltement ouvertes, rglable temprature ambiante. Mlanger soigneusement
(l02 2) C et maintenant une temprature uniforme en l'chantillon pour pallier le transfert d'humidit dans le
tous points de l'espace de travail. L'tuve doit tre dote fromage qui se produit au cours du refroidissement et du
d'un thermomtre appropri. rchauffement. S'assurer que toute condensation la
surface interne du rcipient est convenablement et
4.4 Capsules fond plat, en matriau adquat (par uniformment rincorpore dans l'chantillon pour essai.
exemple acier inoxydable, nickel ou aluminium), de 20
mm 25 mm de hauteur, de diamtre compris entre 60 Ne pas analyser de fromage broy prsentant un
mm et 80 mm et dotes de couvercles parfaitement dveloppement de moisissure non dsir ou des signes de
adapts et faciles enlever. dtrioration.
4.5 Baguettes d'agitation, en verre ou en mtal, avec
une extrmit aplatie et d'une longueur suffisante pour que 7. MODE OPERATOIRE
la baguette d'agitation repose contre la paroi interne de la
capsule en formant un angle avec celle-ci juste en dessous 7.1 Essai blanc
du bord.
4.6 Appareil pour broyer ou rper, facile nettoyer et Paralllement la dtermination de la prise d'essai
appropri pour la prparation de l'chantillon pour essai. (7.3), effectuer un essai blanc selon le mme mode
opratoire que pour la prparation de la capsule (7.2) et la
5. ECHANTIOLLONNAGE dtermination (7.3), mais sans la prise d'essai.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon 7.2 Prparation de la capsule
rellement reprsentatif, non endommag ni modifi lors
du transport et de l'entreposage. 7.2.1 Chauffer la capsule (4.4) ouverte contenant
L'chantiollonnage se fait selon une mthode environ 20 g de sable (3.2) ainsi que son couvercle et la
approprie. baguette d'agitation (4.5) dans l'tuve (4.3) rgle
102C. Laisser le contenu de la capsule atteindre 102C,
Conserver les chantillons pour essai a une temprature puis scher le contenu pendant, au moins, 1 h.
comprise entre 0 C et 20 C depuis l'chantillonnage
jusqu'au dbut du mode opratoire. La composition des La priode de schage indique en (7.2.1), (7.3.3) et
chantillons ne doit pas tre affecte au cours de (7.3.6) commence lorsque le contenu de la capsule atteint
l'entreposage. la temprature de 102C. Le temps ncessaire pour
atteindre cette temprature dpend de la puissance, de la
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
frquence, de ventilation et de la taille de l'tuve. Cette
ESSAI
dure de monte en temprature est galement fonction du
Avant l'analyse, enlever la crote, la morge ou la nombre de capsules places dans l'tuve, de leur masse et
surface moisie du fromage de manire obtenir un du matriau les constituant. Il convient que cette
chantillon reprsentatif du fromage tel qu'il est dure de monte en temprature soit dtermine
habituellement consomm. exprimentalement.

62
4 Rajab 1435
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25 4 mai 2014

7.2.2 Remettre le couvercle sur la capsule et la mettre o :


immdiatement dans le dessiccateur (4.2). Laisser
refroidir la capsule jusqu' temprature ambiante dans le m0 : est la masse, en grammes, de la capsule prpare
dessiccateur. Une fois la capsule refroidie, la sortir du (7.2.2);
dessiccateur et la peser avec son couvercle et la baguette
d'agitation 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre m1 : est la masse, en grammes, de la prise d'essai et de
dcimales. la capsule avant dessiccation (7.3.1);

La priode de refroidissement indique en (7.2.2), m2 : est la masse, en grammes, de la prise d'essai et de


(7.3.4) et (7.3.5) dpend de la capacit de refroidissement la capsule aprs dessiccation (7.3.6);
du dessiccateur mais aussi du nombre de capsules places m3 : est la masse, en grammes, de la capsule utilise
dans le dessiccateur, de leur masse et du matriau les pour l'essai blanc (7.1), pour le mme temps de
constituant. dessiccation (7.3.6) que m2;
Il convient que cette priode de refroidissement soit m4 : est la masse, en grammes, de la capsule prpare
dtermine exprimentalement. (7.2.2) utilise pour l'essai blanc (8.1).
7.3 Dtermination
8.2 Expression des rsultats
7.3.1 Pencher la capsule pour faire glisser le sable d'un
ct de celle-ci. Placer environ 3 g d'chantillon pour Exprimer les rsultats obtenus avec deux dcimales.
essai (6) sur une surface de la capsule exempte de sable, 9. FIDELITE
peser la capsule ainsi que son couvercle et la baguette
d'agitation 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre 9.1 Rptabilit
dcimales.
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
7.3.2 Mlanger soigneusement la prise d'essai et le sable individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
et rpartir le mlange de manire homogne sur le fond de mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
la capsule. Laisser l'extrmit aplatie de la baguette mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
d'agitation dans le mlange, l'autre extrmit s'appuyant appareillage dans un court intervalle de temps, n'excdera
sur la paroi de la capsule. 0,35 % (en masse) que dans 5 % des cas au plus. .
Note - Il peut tre plus facile de mlanger le sable des 9.2 Reproductibilit
fromages pte dure en ajoutant environ 3 ml d'eau afin
de saturer le sable. La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus laide de la mme mthode sur un
7.3.3 Chauffer la capsule, avec son couvercle plac matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
ct d'elle, dans l'tuve (4.3) rgle 102C. Laisser le diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
contenu de la capsule atteindre 102C, puis scher le appareillages diffrents, n'excdera 0,55 % (en masse) que
contenu pendant, au moins, 3 h. dans 5 % des cas au plus.
7.3.4 Remettre le couvercle sur la capsule. Laisser
celle-ci refroidir dans le dessiccateur (4.2) jusqu'
temprature ambiante. Peser la capsule avec son couvercle
1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales.
7.3.5 Chauffer de nouveau la capsule avec son
couvercle comme indiqu en (7.3.3), mais pendant 1 h au
lieu de 3 h. Remettre le couvercle sur la capsule et la
laisser refroidir jusqu' la temprature ambiante dans le
dessiccateur (4.2). Peser de nouveau la capsule avec son
couvercle 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre
dcimales.
7.3.6 Renouveler le mode opratoire dcrit en (7.3.5)
jusqu' observer, entre deux peses successives, une
diminution de masse infrieure ou gale 2 mg ou une
augmentation de masse. Enregistrer la masse minimale de
la capsule.

8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS


8.1 Calcul
Calculer la teneur totale en matire sche de
l'chantillon pour essai, wt, exprime en pourcentage de la
masse, l'aide de l'quation suivante:

(m2 - m0) - (m3 - m4)


Wt = x 100 %
m1 - m0

63
24 Chabane 1435
22 juin 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38 9

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
METHODE DE DETERMINATION DE LA
TENEUR EN AZOTE PROTEIQUE DANS LE LAIT
Arrt du 20 Chaoual 1434 correspondant au 27 aot
La prsente mthode spcifie une technique pour la
2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination directe de la teneur en azote protique du
dtermination de la teneur en azote protique
lait liquide, entier ou crm.
dans le lait.
1. DEFINITION
Le ministre du commerce ; Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique :
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination Teneur en azote protique :
des membres du Gouvernement ;

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Rapport de masse des substances, dtermin
directement ou indirectement par le mode opratoire
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
dcrit dans la prsente mthode.
rpression des fraudes ;
Note - La teneur en azote protique est exprime sous
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 forme de pourcentage en masse.
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; 2. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
Prcipitation des protines d'une prise d'essai par
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
addition de solution d'acide trichloroactique, de sorte que
l'valuation de la conformit ;
la concentration finale de l'acide trichloroactique dans le
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414 mlange soit d'environ 12%. Sparation du prcipit de
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et protines par filtration (le filtrat contient l'azote non
la prsentation de certains laits de consommation ; protique), dtermination de la teneur en azote du filtrat
par le mode opratoire dcrit dans la mthode de
Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418 dtermination de la teneur en azote dans le lait.
correspondant au 10 Aot 1997 relatif aux spcifications
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux 3. REACTIFS
conditions et modalits de leur prsentation ;
Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
Arrte : ou dminralise, ou de l'eau de puret au moins
quivalente. Les ractifs utiliser sont ceux spcifis pour
Article ler. En application des dispositions de le dosage de l'azote total selon la mthode de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 3 Rajab 1410 dtermination de la teneur en azote dans le lait, et les
correspondant au 30 janvier 1990, modifi et complt, ractifs numrs ci-aprs :
susvis, le prsent arrt a pour objet de rendre obligatoire
la mthode de dtermination de la teneur en azote 3.1 Solution d'acide trichloroactique (CC13COOH).
protique dans le lait.
Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre 15,0 g
d'acide trichloroactique dans de l'eau et diluer jusqu'au
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote repre. Ne pas utiliser de concentrations d'acide
protique dans le lait, les laboratoires du contrle de la trichloroactique et de volumes de solutions diffrents de
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires ceux spcifis.
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt. Les performances de la mthode en ce qui concerne la
valeur moyenne et les caractristiques de performances
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire interlaboratoires seront diffrentes en cas d'utilisation
lorsqu'une expertise est ordonne. d'autres concentrations d'acide trichloroactique ou
d'autres volumes de solutions.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.2 Solution volumtrique standard d'acide
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et chlorhydrique c(HCl) = (0,1 0,0005) mol/I.
populaire.
4. APPAREILLAGE
Fait Alger, le 20 Chaoual 1434 correspondant au
27 aot 2013. Matriel courant de laboratoire, ainsi que, le matriel
utilis dans la mthode de dtermination de la teneur en
Mustapha BENBADA. azote dans le lait et en particulier, le matriel suivant :

664
24 Chabane 1435
10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38 22 juin 2014

4.1 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une Immdiatement aprs avoir vers le mlange et pour ne
temprature de 38 C 2 C ; pas laisser une partie du prcipit le temps de scher sur
le col du ballon ou du tube, ajouter, l'aide d'une pipette
4.2 Pipette, d'une capacit de 5 ml ; automatique (4.5), 10 ml de la solution d'acide
trichloroactique (3.1).
4.3 Entonnoir de filtration, en verre, de 75 mm de
diamtre ; Utiliser galement cette solution pour rincer tout rsidu
4.4 Papier-filtre, exempt d'azote, de 15 cm de de prcipit restant sur le col, en laissant couler le liquide
diamtre ; de rinage au fond du ballon ou du tube.

4.5 Pipette automatique ou pipette piston, Agiter par un mouvement de rotation pour mlanger le
permettant d'obtenir des doses de 10 ml. contenu. Verser le contenu ainsi obtenu du ballon ou du
tube au travers du mme papier-filtre. Ajouter ce filtrat
5. ECHANTILLONNAGE celui qui a t recueilli auparavant dans la fiole conique.
Une nouvelle fois, rincer immdiatement le col du ballon
L'chantillonnage se fait dans des conditions ou du tube avec une nouvelle dose de 10 ml de solution
appropries. d'acide trichloroactique et agiter pour mlanger le
contenu. Verser pour la troisime fois le contenu du ballon
6. PRPARATION DE L'ECHANTILLON POUR ou du tube au travers du mme papier-filtre, en ajoutant le
ESSAI filtrat celui qui a t recueilli auparavant dans la fiole
conique.
Chauffer l'chantillon pour essai dans le bain d'eau (4.1)
rgl 38 C 2 C. Bien mlanger, mais dlicatement, Le filtrat obtenu doit tre transparent et exempt de
au moyen de retournements rpts du rcipient, sans particules de matire. ce stade, le filtrat n'est plus
causer ni mousse ni barattage. Laisser refroidir ncessaire et peut tre mis au rebut de manire
l'chantillon temprature ambiante immdiatement avant approprie.
de peser la prise d'essai (7.1).
Si l'on doit effectuer des essais rpts du mme
7. MODE OPRATOIRE chantillon pour essai, deux oprations distinctes de
prcipitation et de filtration doivent tre effectues avec
7.1 Prise d'essai chaque chantillon pour essai.

Pipeter environ 5,0 ml 0,1 ml de l'chantillon pour 7.2.2 Prparation du filtrat


essai prpar (6) dans un ballon de Kjeldahl ou dans un
tube de minralisation propre et sec, pralablement pes En portant des gants, retirer doucement le papier-filtre
0,1 mg prs. Peser l'chantillon 0,1 mg prs. Ajouter de lentonnoir de filtration et plier le papier pour enfermer
immdiatement 5 ml 0,1 ml d'eau au ballon ou au tube le prcipit. Sil subsiste une trace de prcipit sur la lvre
et rincer tout rsidu d'chantillon restant sur le col en intrieure ou extrieure du ballon de Kjeldahl ou du tube
faisant couler l'eau de rinage au fond du ballon ou du de minralisation, essuyer ces rsidus avec le papier filtre
tube. repli, de faon que tout rsidu de prcipit adhre au
papier, puis dposer le papier-filtre son tour dans le
Note - L'utilisation d'un ballon de Kjeldahl ou d'un tube ballon de Kjeldahl ou dans le tube de minralisation.
de minralisation est fonction de la mthode choisie par le
laboratoire. 7.2.3 Minralisation et distillation
7.2 Dtermination directe Ajouter la quantit approprie de corps facilitant
l'bullition, de sulfate de potassium, de solution de sulfate
7.2.1 Prcipitation et filtration de cuivre et d'acide sulfurique au ballon de Kjeldahl ou au
tube de minralisation et poursuivre le processus de
Ajouter 40 ml 0,5 ml de solution d'acide minralisation et de distillation selon le mode opratoire
trichloroactique (3.1) au ballon de Kjeldahl ou au tube de dcrit, respectivement dans la mthode de dtermination
minralisation contenant la prise d'essai (7.1) et agiter de la teneur en azote dans le lait.
pour mlanger le contenu.
7.2.4 Essai blanc
Laisser reposer le ballon ou le tube pendant 5 min
environ pour permettre au prcipit de se dposer. Filtrer
le contenu du ballon ou du tube au travers d'un Raliser un essai blanc en remplaant la prise d'essai
papier-filtre (4.4) plac dans un entonnoir de filtration par un papier-filtre (4.4) lav avec une solution d'acide
(4.3). trichloroactique (3.1) et en procdant comme dcrit en
(7.2.1) (7.2.3). Toujours titrer les prises d'essai blanc
Recuillir le filtrat dans une fiole conique propre. Une avec le mme ractif et le mme appareillage que pour les
partie du prcipit restera dans le ballon de Kjeldahl ou prises d'essai.
dans le tube de minralisation et une autre partie sera
recueillie sur le papier-filtre. Il n'est pas ncessaire de Consigner les valeurs blanc. Si ces valeurs varient,
retirer tout le prcipit du ballon ou du tube. identifier la cause de ce changement.

6655
24 Chabane 1435
22 juin 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38 11

7.3 Dtermination indirecte C'est galement le cas lorsque les valeurs servent de
rfrence pour l'talonnage d'un instrument (par exemple
En alternative la dtermination directe (7.2), la teneur un analyseur de lait infrarouge), o les valeurs
en azote protique d'un chantillon pour essai peut tre concernant plusieurs chantillons seront utilises pour un
calcule en ayant recours une dtermination indirecte calcul de rgression simple ou multiple.
classique.
Dans ces cas-l, il convient de ne pas arrondir les
rsultats obtenus avant de les utiliser pour les calculs
Cela se fait en soustrayant la teneur en azote non
ultrieurs.
protique de la teneur en azote total du mme chantillon
pour essai, dtermin selon la mthode de dtermination 8.2 Calcul de la teneur en protines vraies
de la teneur en azote dans le lait.
8.2.1 Calculer la teneur en protines vraies de
Pour exprimer la teneur en protines vraies, le rsultat l'chantillon pour essai, Wp, l'aide de l'quation
obtenu pour la teneur en azote protique est multipli par suivante:
6,38. Wp = Wpn x 6,38

8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS O

8.1 Calcul de la teneur en azote protique Wp: est la teneur en protines vraies de l'chantillon
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en
8.1.1 Calculer la teneur en azote protique de masse ;
l'chantillon pour essai, wpn, laide de l'quation
suivante : Wpn : est la teneur en azote protique de l'chantillon
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en masse,
1,4007 (Vs - Vb) Mr quatre dcimales prs (8.1 ) ;
wpn = 6,38 : est le coefficient multiplicateur gnralement
m admis pour exprimer la teneur en azote en tant que teneur
en protines vraies.
O
8.2.2 Exprimer les rsultats obtenus pour la teneur en
protines vraies trois dcimales prs, si c'est ncessaire
Wpn : est la teneur en azote protique de l'chantillon pour des calculs ultrieurs. S'il s'agit de rsultats finaux
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en (8.1), deux dcimales suffisent.
masse ;
9. FIDELITE
Vs : est la valeur numrique du volume, en millilitres,
de l'acide chlorhydrique (3.2) utilis dans la 9.1 Essai interlaboratoires
dtermination, exprime 0,05 ml prs ;
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont
Vb : est la valeur numrique du volume, en millilitres, issues des rsultats d'un essai interlaboratoires. Les
de l'acide chlorhydrique (3.2) utilis dans l'essai blanc, valeurs drives de cet essai peuvent ne pas tre
exprime 0,05 ml prs ; applicables aux plages de concentration et matrices autres
Mr : est la valeur numrique de la molarit exacte de que celles indiques.
l'acide chlorhydrique (3.2), exprime quatre dcimales 9.2 Rptabilit
prs ;
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
m : est la valeur numrique, en grammes, de la masse de individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
la prise d'essai (7.1), exprime 0,1 mg prs. mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
8.1.2 Exprimer les rsultats obtenus quatre dcimales appareillage dans un court intervalle de temps, n'excdera
prs, si c'est ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il que dans 5 % des cas au plus les valeurs suivantes :
s'agit de rsultats finaux, exprimer la teneur en azote 0,0038 % pour la teneur en azote protique ;
trois dcimales prs et la teneur en protines deux
dcimales. 0,024 % pour la teneur en protines vraies.

Il convient de ne pas arrondir les rsultats avant 9.3 Reproductibilit


l'utilisation finale de la valeur d'essai. La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
Note - Cela est particulirement vrai lorsque les valeurs matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
sont appeles tre utilises pour des calculs ultrieurs. diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
C'est le cas, par exemple, lorsque les valeurs d'essai appareillages diffrents, n'excdera que dans 5 % des cas
individuelles obtenues partir de l'analyse de plusieurs au plus les valeurs suivantes :
chantillons sont utilises pour calculer les statistiques de
performance de la mthode concernant les variations 0,0092 % pour la teneur en azote protique ;
intralaboratoires et interlaboratoires. 0,059 % pour la teneur en protines vraies.

6666
19 Moharram 1436
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67 12 novembre 2014

Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada


1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;

Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en matire grasse dans le fromage.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire


grasse dans le fromage, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 14 Safar 1435 correspondant au
17 dcembre 2013.
Mustapha BENBADA.

ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN MATIERE GRASSE
DANS LE FROMAGE

La prsente mthode dite (Van Gulik) spcifie une


technique pour la dtermination de la teneur en matire
grasse dans les fromages (fraction massique).

Cette mthode est applicable tous les types de


fromages. Cependant, elle peut ne pas donner entirement
satisfaction lorsqu'elle est applique des fromages
moisissures internes (fromages bleus).
MINISTERE DU COMMERCE
1. DEFINITIONS

Arrt du 14 Safar 1435 correspondant au 17 Pour les besoins de la prsente mthode, les dfinitions
dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de suivantes s'appliquent :
dtermination de la teneur en matire grasse
dans le fromage. 1.1 Mthode Van Gulik

Technique conventionnelle qui, applique un fromage,
Le ministre du commerce, donne une teneur en matire grasse, exprime en grammes
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou pour 100 g de fromage.
EL Kaada 1434 correspondant au 11 septembre 2013
portant nomination des membres du Gouvernement ; 1.2 Teneur en matire grasse du fromage
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
Fraction massique de substances dtermine selon le
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; mode d'emploi spcifi dans la prsente mthode.

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 Note - La teneur en matire grasse est exprime en
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions grammes pour 100 g, numriquement quivalent une
du ministre du commerce ; fraction massique en pourcentage.

6677
19 Moharram 1436
12 novembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67 23

2. PRINCIPE 3.2.6 Essai de conformit


Aprs dissolution des protines du fromage au moyen Un alcool iso-amylique peut satisfaire aux exigences de
d'acide sulfurique, il est procd la sparation de la (3.2.1 3.2.5) et n'tre pas utilisable pour la mthode Van
matire grasse par centrifugation dans un butyromtre de Gulik. En consquence, vrifier, avant utilisation,
Van Gulik (4.1), la sparation tant favorise par l'aptitude l'emploi de l'alcool iso-amylique, au moyen
l'addition d'une petite quantit d'alcool iso-amylique. des essais comparatifs suivants effectus avec un alcool
Obtention de la teneur en matire grasse par lecture iso-amylique talon.
directe sur l'chelle du butyromtre.
3.2.6.1 Alcool iso-amylique talon
3. REACTIFS
Distiller un alcool iso-amylique satisfaisant aux
exigences de (3.2.1 3.2.5), avec une colonne de
Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique fractionnement convenable, en prenant une fraction dans
reconnue et de l'eau distille ou dminralise ou de l'eau un intervalle de 2 C entre 128 C et 131,5 C (3.2.5).
de puret quivalente.
Effectuer les essais suivants sur cette fraction :
3.1 Acide sulfurique
a) Lorsqu'on la contrle par chromatographie
L'acide sulfurique doit avoir une masse volumique, gaz-liquide, elle doit tre compose d'au moins 99 %
20 C, de (1,522 0,005) g/ml, ce qui correspond une (fraction volumique) de mthyl-3 butanol-l et de mthyl-2
fraction volumique de 61,72 % 62,63 % de H2S04. butanol-l.Les impurets autres que le mthyl-2 propanol-l
L'acide doit tre incolore ou peine ambr, et ne contenir et le butanol-l ne doivent tre prsentes qu' l'tat de
aucune impuret pouvant agir sur les rsultats. traces.
b) Lorsqu'elle est distille par fractionnement, les
3.2 Alcool iso-amylique
premiers 10 % par volume et les derniers 10 % par
volume recueillis lorsqu'ils sont compars au moyen du
3.2.1 Composition mode opratoire dcrit en (3.2.6.2), doivent donner des
Une fraction volumique d'au moins 99% d'alcool teneurs en matire grasse du lait ne diffrant pas de plus
iso-amylique doit tre compose des alcools primaires de 0,015 % par masse.
3-mthylbutane-l-ol et 2-mthylbutane-1-ol, les seules
Si la fraction satisfait ces deux essais, elle peut tre
impurets notables tolres tant le 2-mthylpropane-l-ol
considre comme alcool iso-amylique talon. L'alcool
et le butane-1-ol. Il doit tre exempt de pentanols
iso-amylique talon peut tre utilis pendant plusieurs
secondaires, de 2-mthylbutane-2- 01, furane-2-al annes, pour autant qu'il soit conserv dans un endroit
(furfural,furane- 2-carboxaldhyde, 2-furaldhyde), sombre et frais.
d'essence et de drivs du benzne. Seules des traces d'eau
peuvent tre tolres. 3.2.6.2 Mode opratoire pour les essais comparatifs
3.2.2 Aspect Dterminer en double, par la mthode Gerber , la teneur
en matire grasse de quatre chantillons de lait entier
L'alcool iso-amylique doit tre clair et incolore. ayant une teneur moyenne en matire grasse, en se servant
du butyromtre dont l'erreur de graduation a t
3.2.3 Masse volumique dtermine, et l'acide sulfurique de qualit convenable.
L'alcool iso-amylique doit avoir une masse volumique Dans un chantillon de chaque paire, utiliser 1 ml
20 C de 0,808 g/ml 0,818 g/ml. d'alcool iso-amylique soumis vrification et, dans l'autre,
1 ml d'alcool iso-amylique talon (3.2.6.1).
3.2.4 2- Furaldhyde et autres impurets organiques
Conserver les butyromtres placs au hasard partir de
Un mlange de 5 ml d'alcool iso-amylique et de 5 ml l'agitation jusqu' la fin de l'opration. Effectuer les
d'acide sulfurique (3.1) doit avoir au plus une couleur lectures (par deux personnes au moins) 0,02% par masse
jaune ou lgrement brune. de matire grasse prs, et les corriger ensuite pour tenir
compte des erreurs d'chelles des butyromtres.
3.2.5 Intervalle de distillation
La teneur moyenne en matire grasse des quatre
Quand l'alcool iso-amylique est distill sous une chantillons de lait, obtenue avec l'alcool iso-amylique
pression de 101,3 kPa, une fraction volumique d'au moins vrifier, ne doit pas diffrer de plus de 0,015 % par masse
98% doit tre distill au-dessous de 132 C et une fraction de matire grasse de la valeur moyenne obtenue avec
volumique de pas plus de 5 % en dessous de 128 C. l'alcool iso-amylique talon.
L'alcool ne doit laisser aucun rsidu aprs distillation.
Au lieu de l'alcool iso-amylique spcifi, on peut
Si, au cours de la distillation, la pression atmosphrique utiliser un alcool iso-amylique artificiel ou de
est infrieure ou suprieure 101,3 KPa, il est remplacement, ventuellement color, pourvu qu'il soit
recommand respectivement d'abaisser ou d'lever les reconnu satisfaisant aux essais selon le mode opratoire
tempratures indiques de 3,3 C/ KPa. dcrit dans le prsent paragraphe.

68
19 Moharram 1436
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67 12 novembre 2014

4. APPAREILLAGE Note - L'acclration centrifuge relative obtenue dans


une centrifugeuse est donne par la formule suivante :
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit:
1,12 r n2 x 10-6
4.1 Butyromtre Van Gulik ;
4.2 Systme de pesage, adaptable au gros bouchon du O
butyromtre. Une capsule ou une feuille de matire
plastique peut galement tre utilise ; r : est le rayon horizontal effectif, en millimtres ;

4.3 Pipette ou appareillage de mesurage n : est la frquence de rotation, en tours par minute.
automatique, permettant de dlivrer l'acide sulfurique
(3.1) ; 4.7 Bain d'eau, pour les butyromtres, pouvant tre
maintenus la temprature de (65 2) C et permettant de
4.4 Pipette ou appareillage de mesurage maintenir les butyromtres (4.1) en position verticale, les
automatique, permettant de dlivrer (1 0,05) ml chelles tant entirement immerges ;
d'alcool iso-amylique (3.2) ;
4.8 Thermomtre, appropri, destin vrifier la
4.5 Balance analytique, pouvant peser 0,001 g prs ; temprature du bain d'eau (4.7) ;

4.6 Centrifugeuse, dans laquelle les butyromtres 4.9 Rpe, ou autre appareil pour broyer le fromage.
peuvent tre placs, munie d'un indicateur de frquence de
rotation gradu en nombre de tours la minute, avec une 5. ECHANTILLONNAGE
tolrance maximale de 50 r/min et de prfrence
chargement vertical plutt qu' chargement horizontal.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
La centrifugeuse, lorsqu'elle est charge, doit tre rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
capable d'exercer en 2 min une acclration centrifuge du transport et de l'entreposage.
relative de (350 50) g l'extrmit du bouchon du
butyromtre. 6. MODE OPERATOIRE
Une telle acclration centrifuge peut tre obtenue avec
des centrifugeuses ayant le rayon effectif suivant (distance 6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
horizontale entre l'axe de la centrifugeuse et l'extrmit
extrieure des bouchons des butyromtres) et fonctionnant Retirer la crote ou la partie superficielle tache ou
la frquence de rotation indique dans le tableau moisie du fromage, de faon obtenir un chantillon
suivant : reprsentatif du fromage, tel qu'il est consomm. Broyer
l'chantillon avec un broyeur appropri (4.9). Mlanger
Rayon effectif de centrifugeuse et frquence de
rotation pour produire une acclration centrifuge de rapidement la partie broye et, si possible, broyer et
(350 50) g mlanger soigneusement une seconde fois.

Si l'chantillon (par exemple du fromage pte molle)


Rayon effectif Frquence de rotation ne peut pas tre broy, le mlanger avec soin en le
mm 70 r/min
ptrissant nergiquement.
240 1140 Transfrer immdiatement l'chantillon prtrait, ou une
245 1130 portion reprsentative de celui-ci, dans un rcipient muni
d'un couvercle tanche l'air.
250 1120
Effectuer l'analyse, le plus tt possible aprs broyage et
255 1110
mlange. Si un dlai est invitable, prendre toutes les
260 1100 prcautions pour conserver l'chantillon de faon
convenable et pour viter la condensation de la vapeur
265 1090 d'eau l'intrieur du rcipient.
270 1080
Il est recommand de ne pas analyser des fromages
275 1070 broys ou mlangs montrant la pousse de moisissures
non dsires ou les signes d'un dbut d'altration.
300 1020
Nettoyer le dispositif aprs avoir broy chaque
325 980
chantillon.

69
19 Moharram 1436
12 novembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67 25

6.2 Prise d'essai 6.3.8 Placer le butyromtre, col en bas, dans le bain
d'eau durant 5 min, le niveau de l'eau tant maintenu
Peser, 0,005 g prs, 3 g de l'chantillon pour essai au-dessus du sommet de la colonne de matire grasse dans
(6.1) dans un systme de pesage adapt un bouchon le butyromtre.
appropri (4.2) ou dans une capsule, ou sur une feuille de
matire plastique. 6.3.9 Retirer le butyromtre du bain d'eau, ajuster le
gros bouchon de faon amener la colonne de matire
6.3 Dtermination grasse dans la partie gradue, et centrifuger le butyromtre
une acclration centrifuge relative de (350 50) g
6.3.1 Si l'on utilise un systme de pesage adapt un durant 10 min.
bouchon, fermer le col du butyromtre (4.1) avec ce 6.3.10 Placer le butyromtre, col en bas, dans le bain
bouchon muni du systme de pesage contenant la prise d'eau durant 5 min, le niveau de l'eau tant maintenu
d'essai et ajouter de l'acide sulfurique (3.1) par l'ouverture au-dessus du sommet de la colonne de matire grasse dans
troite jusqu' ce que le niveau de l'acide atteigne une le butyromtre.
hauteur d'environ les deux tiers de la chambre du
butyromtre et que le systme de pesage soit 6.3.11 Retirer le butyromtre du bain d'eau et ajuster
compltement recouvert d'acide sulfurique. soigneusement le gros bouchon afin d'amener l'extrmit
infrieure de la colonne de matire grasse, en la dplaant
Si l'on n'utilise pas le systme de pesage, fermer au minimum, un trait repre et, de prfrence, un trait
l'ouverture troite du butyromtre (4.1) avec le petit repre chiffr. Oprer de prfrence en tirant lgrement
bouchon et introduire l'acide sulfurique par le col jusqu' sur le bouchon et non en l'enfonant de force dans le col.
ce que le niveau de l'acide atteigne une hauteur d'environ
Noter le trait repre concidant avec l'extrmit
la moiti de la chambre.
infrieure de la colonne de matire grasse, puis, en ayant
soin de ne pas bouger celle-ci, noter aussi rapidement que
Transvaser le fromage dans le butyromtre. Dans le cas
possible le trait repre concidant avec le point le plus bas
d'utilisation d'une feuille de matire plastique, introduire
du mnisque situ au sommet de la colonne de matire
le fromage avec la feuille. Fermer le col avec le gros
grasse ; cette lecture doit tre faite la moiti du
bouchon, retourner le butyromtre et enlever le petit
plus petit chelon prs (0,25 %).
bouchon.
Pendant les lectures, le butyromtre doit tre tenu
verticalement et l'il doit tre au niveau du point de
6.3.2 Placer le butyromtre, col en bas (c'est--dire lecture.
large ouverture) durant 5 min, dans le bain d'eau (4.7),
(65 2) C. Note - Si la matire grasse est trouble ou de couleur
fonce, ou s'il y a un dpt noir ou blanc au bas de la
6.3.3 Retirer le butyromtre du bain d'eau et l'agiter colonne de matire grasse, la valeur obtenue pour la
nergiquement durant l0 s. teneur en matire grasse ne sera pas exacte.
6.3.4 Rpter les oprations dcrites en (6.3.2) et (6.3.3) 7. EXPRESSION DES RESULTATS
jusqu' ce que les protines soient compltement
dissoutes. En gnral 1 h est ncessaire pour atteindre ce 7.1 Mode de calcul
rsultat. Poursuivre ces oprations durant 15 min aprs
que les protines ont t dissoutes. La teneur en matire grasse, exprime en grammes pour
100 g de fromage, est gale
Note - Il est possible d'utiliser un appareil d'agitation
mcanique pour autant qu'il donne les mmes rsultats BA
qu'avec l'agitation manuelle spcifie ci-dessus. O

6.3.5 Retirer le butyromtre du bain d'eau et, aprs avoir A: est la lecture faite l'extrmit infrieure de la
soigneusement agit, ajouter 1 ml d'alcool iso-amylique colonne de matire grasse ;
(3.2) par l'ouverture troite. Agiter immdiatement durant
au moins 3 s. B : est la lecture faite l'extrmit suprieure de la
colonne de matire grasse.
6.3.6 Ajouter de l'acide sulfurique par l'ouverture troite
jusqu' ce que le niveau atteigne le trait repre 35 % de 7.2 Rptabilit
l'chelle. Fermer immdiatement avec le petit bouchon et
retourner le butyromtre. La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
6.3.7 Agiter le butyromtre nergiquement durant 10 s mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
ds que la matire grasse est monte dans la chambre du mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
butyromtre. Retourner nouveau de faon que l'acide appareillage et dans un court intervalle de temps, ne
s'coule de la tige. Rpter deux fois les oprations de dpassera pas une valeur correspondant un chelon
retournement et d'agitation. (0,5%).

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3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 15

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 26 Ramadhan 1434 correspondant au 4 aot


2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en matire grasse dans
le lait.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;

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3 Rabie El Aouel 1436
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 25 dcembre 2014

Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418 Teneur en matire grasse du lait : fraction massique
correspondant au 10 aot 1997 relatif aux spcifications de substances, dtermine par la prsente mthode et
techniques des laits concentrs non sucrs et exprime comme fraction massique et en pourcentage.
sucrs et aux conditions et modalits de leur
prsentation ; 2. PRINCIPE

Vu l'arrt interministriel du 13 Chabane 1419 Une solution ammoniaco-thanolique d'une prise d'essai
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux est extraite au moyen d'oxyde dithylique et d'ther de
spcifications techniques des laits en poudre et aux ptrole. Les solvants sont limins par distillation ou
conditions et modalits de leur prsentation ; vaporation, puis la masse des substances extraites est
Vu l'arrt du 17 Rajab 1420 correspondant au 27 dtermine.
octobre 1999, modifi et complt, relatif aux
spcifications du lait en poudre industriel et aux 3.RACTIFS
conditions et modalits de sa prsentation, son utilisation
et sa commercialisation ; Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
Arrte : ou dminralise, ou de l'eau de puret, au moins,
quivalente.
Artticle 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Les ractifs ne doivent pas laisser de rsidu apprciable
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet lorsque la dtermination est effectue selon la mthode
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la spcifie (7.2.2).
teneur en matire grasse dans le lait.
3.1 Hydroxyde d'ammonium, solution contenant une
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire fraction massique NH3 d'environ de 25 % ( 20 = 910
grasse dans le lait, les laboratoires du contrle de la g/l).
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en Note - Si l'on ne dispose pas d'une solution d'hydroxyde
annexe du prsent arrt. d'ammonium cette concentration, une solution plus
concentre, de concentration connue, peut tre utilise
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire (7.4.1).
lorsqu'une expertise est ordonne.
3.2 thanol (C2H5OH), ou thanol dnatur par du
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal mthanol, contenant une fraction volumique d'thanol d'au
officiel de la Rpublique algrienne amocratique et moins, 94% (A.5).
populaire.
3.3 Solution de rouge-Congo
Fait Alger, le 26 Ramadhan 1434 correspondant au 4
aot 2013. Dans une fiole jauge de 100 ml (4.14), dissoudre dans
de l'eau 1 g de rouge-Congo. Ajuster au trait avec de l'eau.
Mustapha BENBADA.
Note - L'utilisation de cette solution, qui permet de
mieux voir l'interface entre le solvant et la couche
ANNEXE aqueuse, est facultative (7.4.2). D'autres solutions
Mthode de dtermination de la teneur aqueuses de colorants peuvent tre utilises pourvu
en matire grasse dans le lait qu'elles ne modifient pas le rsultat de la dtermination.
mthode gravimtrique (mthode de rfrence)
3.4 Oxyde dithylique (C2H5OC2H5), exempt de
proxydes (A.3) et ne contenant pas plus de 2 mg/kg
La prsente mthode spcifie une technique de d'antioxydants, et conforme aux spcifications de l'essai
rfrence pour la dtermination de la teneur en matire blanc (7.2.2, A.l) et (A.4).
grasse du lait de bonne qualit physicochimique. La
mthode est applicable au lait cru de vache, de brebis et de Note - L'utilisation d'oxyde dithylique comporte des
chvre, au lait allg en matire grasse, au lait crm, au risques. Des tudes sont en cours en vue de remplacer
lait conserv chimiquement et au lait liquide ayant subi un l'oxyde dithylique par un autre ractif, condition que
traitement. Elle n'est pas applicable lorsqu'une plus grande celui-ci ne modifie pas le rsultat final de la
prcision est demande pour le lait crm, par exemple dtermination.
pour connatre l'efficacit de l'opration d'crmage.
3.5 Ether de ptrole, ayant un point dbullition compris
Note - Cette mthode est habituellement dite entre 30 C et 60 C, en alternative, pentane
Rose-Gottlieb. (CH3 [CH2]3 CH3) ayant un point dbullition de 36 C,
conforme aux spcifications de lessai blanc (7.2.2, A.1
1. DEFINITION et A.4).

Pour les besoins de la prsente mthode, le terme et la Note - Il est recommand d'utiliser le pentane car il est
dfinition suivants s'appliquent. d'une puret plus leve et de qualit constante.

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25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 17

3.6 Mlange de solvants, peu de temps avant l'emploi, 4.9 Rcipients pour la rcupration de la matire
mlanger des volumes gaux d'oxyde dithylique (3.4) et grasse, par exemple fioles bullition (fioles fond plat)
d'ther de ptrole (3.5). de l25 ml 250 ml de capacit. fioles coniques de 250 ml
de capacit ou capsules mtalliques.
4. APPAREILLAGE
Si l'on utilise des capsules mtalliques, elles doivent
Note - La dtermination impliquant l'utilisation de tre de prfrence en acier inoxydable, fond plat et avoir
solvants volatiles inflammables, l'appareillage lectrique un diamtre de 80 mm 100 mm et une hauteur d'environ
utilis doit tre conforme la lgislation concernant les 50 mm.
risques d'utilisation de ces solvants.
4.10 Rgularisateurs d'bullition, exempts de matire
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit. grasse, en porcelaine non poreuse ou en carbure de
silicium (facultatif si l'on utilise des capsules mtalliques).
4.1 Balance analytique, capable de peser 1 mg prs
et avec une prcision d'indication de 0,1 mg. 4.11 Eprouvettes gradues, de 5 ml et 25 ml capacit.

4.2 Centrifugeuse, dans laquelle les fioles ou les tubes 4.12 Pipettes, gradues, de 10 ml de capacit.
d'extraction (4.6) peuvent tre soumis une rotation avec
une frquence de 500 tr/min 600 tr/min, afin de produire 4.13 Pinces mtalliques, appropries pour tenir les
une acclration radiale de 80 g 90 g l'extrmit fioles, les bchers ou les capsules.
extrieure des fioles ou des tubes.
4.14 Fioles jauges, un trait, de 100 ml de capacit.
Note - L'utilisation d'une centrifugeuse est facultative
mais recommande (7.4.5). 5. CHANTILLONNAGE
4.3 Appareil de distillation ou d'vaporation,
permettant de distiller les solvants et l'thanol des fioles, L'chantillonnage se fait dans des conditions
ou de les vaporer des bchers et des capsules (7.4.12) appropries.
une temprature n'excdant pas 100 C.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
4.4 tuve dessiccation, chauffage lectrique, munie rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
d'oues de ventilation compltement ouvertes et rglable du transport et de l'entreposage.
une temprature de 102 C 2 C dans l'espace utilis.
Conserver tous les chantillons liquides, visqueux ou
L'tuve doit tre munie d'un thermomtre appropri. pteux une temprature comprise entre 2 C et 6 C
partir du moment de l'chantillonnage jusqu'au
4.5 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une commencement du mode opratoire.
temprature comprise entre 35 C et 40 C.
6. PRPARATION DE L'CHANTILLON POUR
4.6 Fioles d'extraction de la matire grasse, type
ESSAI
Mojonnier.

Note - On peut galement utiliser des tubes d'extraction Amener l'chantillon pour essai une temprature de
de la matire grasse munis d'un siphon ou d'un dispositif 38 C 2 C, en utilisant le bain d'eau (4.5). Bien
de lavage, mais le mode opratoire est alors diffrent et mlanger l'chantillon, mais doucement, au moyen de
est dcrit la note B. retournements rpts du rcipient, sans causer de mousse
ou de barattage, puis refroidir rapidement l'chantillon
Les fioles doivent tre munies de bouchons en lige de pour essai environ 20 C 2 C. Ne pas refroidir les
bonne qualit, ou en une autre matire inaltrable aux chantillons de lait baratt, car ceux-ci doivent tre pess
ractifs utiliss [par exemple, caoutchouc silicon ou une temprature situe entre 30 C et 40 C (7.1).
polyttrafluorothylne (PTFE)]. Les bouchons en lige
doivent tre lavs l'oxyde dithylique (3.4), maintenus S'il est possible d'obtenir un chantillon pour essai
dans l'eau 60 C ou plus durant au moins 15 min et homogne sans prchauffage une temprature de 38 C
ensuite mis refroidir dans l'eau de faon en tre
2 C (par exemple pour les chantillons de lait crm),
imprgns au moment de l'emploi.
il convient de suivre le mode opratoire suivant.
4.7 Support, pour maintenir les fioles (ou les tubes)
d'extraction de la matire grasse (4.6). Amener la temprature de lchantillon pour essai
20 C 2 C. Mlanger soigneusement afin dassurer une
4.8 Flacon de lavage, appropri l'utilisation avec le rpartition homogne de la matire grasse dans
mlange de solvants (3.6). lchantillon pour essai. Ne pas agiter trop vigoureusement,
afin de ne pas causer de mousse de lait ni de barattage de
Ne pas utiliser de flacon de lavage en plastique. la matire grasse.

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3 Rabie El Aouel 1436
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 25 dcembre 2014

Note - Il ne faut pas s'attendre avoir une valeur 7.2.2 Essai blanc pour les ractifs
correcte de la teneur en matire grasse :
Pour vrifier la qualit des ractifs, effectuer un essai
a) si le lait est baratt ; blanc comme mentionn en (7.2.1). En outre, pour les
b) quand une odeur distincte d'acides gras libres est contrles de masses, utiliser un rcipient de rcupration
perceptible ; de la matire grasse vide, prpar comme spcifi en
(7.3). Les ractifs ne doivent pas laisser de rsidus
c) si pendant ou aprs la prparation de l'chantillon suprieur 1,0 mg (A.1).
pour essai, des particules blanches sont visibles sur les
parois du rcipient de l'chantillon ou si des gouttelettes Si les rsidus des ractifs de l'essai blanc complet sont
de matire grasse flottent la surface de l'chantillon. suprieurs 1,0 mg, dterminer les rsidus des solvants
sparment en distillant respectivement 100 ml d'oxyde
7. MODE OPERATOIRE dithylique (3.4) et d'ther de ptrole (3.5). Utiliser un
rcipient de contrle vide pour obtenir la masse relle de
Note 1 - S'il est demand de vrifier que l'on satisfait rsidus qui ne doit pas tre suprieure 1,0 mg.
aux exigences donnes en ce qui concerne la limite de
rptabilit (9.2), effectuer deux dterminations spares Il peut arriver que les ractifs contiennent des matires
conformment (7.1) (7.4). volatiles qui sont fortement retenues dans la matire
grasse. S'il y a des indications de la prsence de telles
Note 2 - Un autre mode opratoire utilisant des tubes substances, effectuer des essais blanc sur tous les
d'extraction de la matire grasse munis de siphon ou de ractifs et pour chaque solvant, en utilisant pour chacun
dispositif de lavage (la note en 4.6) est dcrit dans la note un rcipient pour la matire grasse, avec environ 1 g de
B. matire grasse du beurre anhydre. Si ncessaire, distiller
nouveau les solvants en prsence de 1 g de matire grasse
7.1 Prise d'essai du beurre anhydre pour 100 ml de solvant. Utiliser les
solvants juste aprs redistillation.
Mlanger l'chantillon pour essai (point 6) en retournant
doucement le rcipient trois ou quatre fois. Peser Remplacer les ractifs ou solvants non satisfaisants, ou
immdiatement, 1 mg prs, directement ou par redisliller les solvants.
diffrence, dans une fiole d'extraction (4.6), 10 g 11 g de
l'chantillon pour essai. 7.3 Prparation du rcipient pour la rcupration de
la matire grasse
La prise d'essai doit tre place aussi compltement que
Scher, pendant 1 h, un rcipient (4.9) avec quelques
possible dans le bulbe infrieur (troit) des fioles
rgularisateurs dbullition (4.10) ltuve (4.4) rgle
d'extraction.
102 C 2 C.
7.2 Essais blanc
Note 1 - Les rgularisateurs d'bullition sont
recommands pour permettre une bullition modre au
7.2.1 Essai blans pour la mthode
cours de l'limination ultrieure des solvants, notamment
dans le cas de rcipients en verre; leur utilisation est
Effectuer un essai blanc simultanment avec la facultative dans le cas de capsules mtalliques.
dtermination, en utilisant le mme mode opratoire et les
mmes ractifs, mais en remplaant la prise dessai Protger le rcipient des poussires et le laisser refroidir
indique en 7.4.1 par 10 ml d'eau (A.2). la temprature de la salle des balances (rcipients en
verre pendant au moins 1 h, capsules mtalliques pendant
Lorsqu'un lot d'chantillons pour essai est analys, le au moins 30 min).
nombre de cycles de schage peut varier entre des
chantillons diffrents. Si un chantillon blanc est utilis Note 2 - Pour viter un refroidissement insuffisant ou
pour le lot entier, s'assurer que la valeur blanc utilise des priodes de refroidissement exagrment prolonges,
dans le calcul de la teneur en matire grasse d'un il convient que le rcipient ne soit pas plac dans un
chantillon individuel a t obtenue dans les mmes dessiccateur.
conditions que l'chantillon pour essai individuel.
A l'aide de pinces (4.13), placer le rcipient sur la
Si la valeur obtenue pour l'essai blanc dpasse balance. Peser, 1,0 mg prs, le rcipient pour la
rgulirement 1,0 mg, vrifier les ractifs si cela n'a pas rcupration de la matire grasse.
t fait rcemment (7.2.2). Les corrections faites pour des
valeurs suprieures 2,5 mg doivent figurer dans le Note 3 - Il convient d'utiliser de prfrence des pinces
bulletin d'analyse. pour viter, en particulier, des variations de temprature.

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25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 19

7.4 Dtermination de rinage coulent dans la fiole. Si l'interface se situe


au-dessous du fond du col de la fiole, la faire monter ce
7.4.1 Dbuter la dtermination dans un dlai de 1 h niveau en ajoutant doucement de l'eau par le ct de la
suivant le pesage de l'chantillon. fiole (Figure 1), afin de permettre la dcantation du
solvant.
Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium
(3.1) la prise d'essai (7.1) se trouvant dans la fiole Note - Dans les Figures 1 et 2, il a t choisi l'un parmi
d'extraction, ou un volume quivalent d'une solution plus les trois types de flacons spcifis selon les standards
internationaux.
concentre (note 3.1). Mlanger vigoureusement avec la
prise d'essai dans le bulbe troit de la fiole.
7.4.7 Tenir la fiole dextraction par le bulbe troit,
dcanter avec soin le plus possible de la couche
7.4.2 Ajouter 10 ml d'thanol (3.2). Mlanger
surnageante dans le rcipient prpar, destin la
doucement, mais fond, en laissant le contenu de la fiole rcupration de la matire grasse (7.3), contenant
aller et venir entre les deux bulbes. viter d'amener le quelques rgularisations dbullition (4.10) dans le cas des
liquide trop prs du col de la fiole. fioles (facultatif avec les capsules mtalliques). Eviter de
Ajouter, si ncessaire, 2 gouttes de solution de dcanter une partie quelconque de la couche acqueuse
rouge-Congo (3.3). Si ncessaire, refroidir de nouveau la (figure 2).
fiole la temprature ambiante.
7.4.8 Rincer l'extrieur du col de la fiole d'extraction
7.4.3 Ajouter 25 ml d'oxyde dithylique (3.4), Boucher avec un peu de mlange de solvants (3.6). Recueillir les
la fiole avec un bouchon en lige satur deau, ou avec un liquides de rinage dans le rcipient pour la rcupration
bouchon dune autre matire (4.6), mouill avec de l'eau. de la matire grasse. Prendre soin que le mlange de
Agiter la fiole vigoureusement pendant 1 min, mais sans solvants ne soit pas projet sur l'extrieur de la fiole
excs afin dviter la formation dmulsions persistantes. d'extraction. Si ncessaire, liminer le solvant totalement
ou partiellement du rcipient par distillation ou
Lors de l'agitation, maintenir la fiole en position vaporation comme dcrit en (7.4.12).
horizontale, le bulbe troit tant en haut, en laissant de
temps en temps le liquide du bulbe large passer dans le 7.4.9 Ajouter 5 ml d'thanol (3.2) au contenu de la fiole
d'extraction. Utiliser de l'thanol pour rincer l'intrieur du
bulbe troit. Si ncessaire, refroidir la fiole l'eau
col de la fiole et mlanger comme dcrit en (7.4.2).
courante jusqu' temprature ambiante. Retirer avec
prcaution le bouchon en lige ou le dispositif de
7.4.10 Effectuer une seconde extraction en
fermeture et le rincer, ainsi que le col de la fiole, avec une
recommenant les oprations dcrites de 7.4.3 7.4.7
petite quantit de mlange de solvants (3.6). Utiliser un inclus, mais en utilisant au lieu de 25 ml, seulement
flacon de lavage (4.8), de faon que les liquides de rinage 15 ml d'oxyde dithylique (3.4) et 15 ml d'ther de
coulent dans la fiole. ptrole (3.5). Utiliser galement l'oxyde dithylique
pour rincer l'intrieur du col de la fiole
7.4.4 Ajouter 25 ml d'ther de ptrole (3.5). Boucher la d'extraction.
fiole avec le bouchon en lige rhumidifi, ou l'autre
bouchon rhumidifi (en le trempant dans l'eau), et agiter Si ncessaire, faire monter l'interface au milieu du col
nouveau doucement la fiole pendant 30 s comme dcrit de la fiole d'extraction en ajoutant doucement de l'eau par
en (7.4.2). Poursuivre en agitant comme dcrit en (7.4.3). le col de la fiole (Figure 1) pour permettre la dcantation
finale des solvants d'tre aussi complte que possible
7.4.5 Centrifuger (4.2) la fiole bouche pendant 1 min (Figure 2).
5 min avec une acclration radiale de 80 g 90 g. Si l'on
ne dispose pas de centrifugeuse, laisser la fiole bouche 7.4.11 Effectuer une troisime extraction, sans addition
reposer sur le support (4.7) pendant, au moins, 30 min, d'thanol, en rptant de nouveau les oprations dcrites
jusqu' ce que la couche surnageante soit claire et de (7.4.3) (7.4.7) inclus, mais en utilisant de nouveau
nettement spare de la couche aqueuse. Si ncessaire, seulement 15 ml d'oxyde dithylique (3.4) et 15 ml d'ther
refroidir la fiole l'eau courante jusqu' temprature de ptrole (3.5). Utiliser l'oxyde dithylique pour rincer
l'intrieur du col de la fiole d'extraction.
ambiante.
Si ncessaire, faire monter l'interface au milieu du col
7.4.6 Enlever avec prcaution le bouchon en lige ou le
de la fiole d'extraction en ajoutant doucement de l'eau par
dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que l'intrieur du le col de la fiole ( Figure 1) pour permettre la
col de la fiole, avec un peu de mlange de solvants (3.6). dcantation finale des solvants d'tre aussi complte que
Utiliser un flacon de lavage (4.8) de faon que les liquides possible (Figure 2).

75
3 Rabie El Aouel 1436
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 25 dcembre 2014

Figure 1 - Avant dcantation Si la matire grasse est claire, protger le rcipient


collecteur de la poussire et le laisser refroidir (pas dans
un dessiccateur) la temprature de la salle des balances
(rcipient en verre pendant, au moins, 1 h, capsule
mtallique pendant au moins 30 min).

Ne pas essuyer le rcipient juste avant la pese. Placer


le rcipient sur la balance au moyen d'une paire de pinces
(4.13). Peser le rcipient pour la rcupration de la
matire grasse 1,0 mg prs.

7.4.14 Chauffer pendant 30 min supplmentaires, dans


l'tuve dessiccation (4.4) rgle 102 C 2 C, le
rcipient pour la rcupration de la matire grasse, la fiole
Lgende tant place en position incline afin de permettre aux
1 : Solvants vapeurs de solvants de s'chapper. Rpter les oprations
2 : A la seconde et troisime extraction de pese dcrites en (7.4.13), jusqu' ce que la masse du
rcipient d'extraction de la matire grasse diminue de 1,0
3 : A la premire extraction mg ou moins, ou augmente, entre deux peses
4 : Interface successives. Noter la masse minimale comme tant la
masse du rcipient d'extraction de la matire grasse et de
5 : Couche aqueuse la matire extraite.
Note - La troisime extraction nest pas ncessaire pour
du lait ayant une teneur en matire grasse infrieure 8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS
0,5 %.
8.1 Calcul
7.4.12 liminer les solvants (thanol compris) aussi
compltement que possible par distillation si l'on utilise Calculer la teneur en matire grasse de lchantillon
une fiole, ou par vaporation si l'on utilise un bcher ou laide de lquation suivante :
une capsule (4.3). Rincer l'intrieur du col de la fiole avec
un peu de mlange de solvants (3.6) avant de commencer
la distillation. (m1 - m2)-(m3 - m4)
Wf = x 100 %
7.4.13 Chauffer pendant 1 h, dans l'tuve dessiccation m0
(4.4) rgle 102 C 2 C, le rcipient pour la
rcupration de la matire grasse, la fiole tant place en O
position incline afin de permettre aux vapeurs de solvants
de s'chapper. Enlever le rcipient pour la rcupration de Wf : est la fraction massique, en pourcentage, de la
la matire grasse de l'tuve et vrifier immdiatement si la
matire grasse est claire ou non. Si la matire grasse n'est matire grasse dans lchantillon ;
pas claire on peut supposer qu'il y a prsence d'une
matire grasse trangre et l'ensemble de la dtermination m0 : est la masse, en grammes, de la prise dessai (7.1) ;
doit tre refait.
m1 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la
Figure 2 - Aprs dcantation rcupration de la matire grasse et de la matire extraite
dtermine en (7.4.14) ;

m2 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la


rcupration de la matire grasse (7.3) ;

m3 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la


rcupration de la matire grasse utilis pour lessai
blanc (7.2) et de la matire extraite, dtermine en
(7.4.14) ;

m4 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la


Lgende
rcupration de la matire grasse (7.3) utilis pour lessai
1: A la seconde et troisime extraction blanc (7.2).
2: la premire extraction
8.2 Expression des rsultats
3: Couche aqueuse
Arrondir le rsultat deux dcimales.
4: Interface

76
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 21

9 Fidlit de la matire grasse utilis pour l'essai blanc. Par


consquent, le changement de masse apparente du
9.1 Essai interlaboratoires rcipient de rcupration de la matire grasse, corrig du
changement apparent de masse du rcipient de contrle,
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont ne doit pas tre suprieur 1,0 mg.
exprimes au niveau de probabilit de 95 % et peuvent ne
pas s'appliquer aux plages de concentrations ou matrices Il peut arriver que les solvants contiennent des matires
autres que celles donnes. volatiles qui sont fortement retenues dans la matire
grasse. S'il y a des indications de la prsence de telles
9.2 Rptabilit substances, effectuer des essais blanc sur tous les
ractifs et pour chaque solvant, en utilisant pour chacun
La diffrence absolue entre deux rsultats dessai un rcipient pour la matire grasse, avec environ 1 g de
individuels indpendants, obtenus laide de la mme matire grasse du beurre anhydre. Si ncessaire, distiller
mthode sur un matriau identique soumis lessai dans nouveau les solvants en prsence de 1 g de matire grasse
le mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le du beurre anhydre pour 100 ml de solvant. Utiliser les
mme appareillage dans un court intervalle de temps, solvants juste aprs redistillation,
nexcdera que dans 5 % des cas, au plus, les valeurs
suivantes relatives la fraction massique de matire A.2 Essai blanc effectu en mme temps que la
grasse : dtermination (7.2.1)
0,031 % pour le lait de vache crm ;
La valeur obtenue dans l'essai blanc, effectu
0,036 % pour le lait de vache allg en matire paralllement la dtermination, permet de corriger la
grasse ; masse apparente des substances extraites partir de la
0,043 % pour le lait de vache entier ; prise d'essai (ml - m2) par rapport aux matires non
volatiles venant des ractifs et galement des changements
0,030 % pour le lait de chvre ; de conditions atmosphriques de la salle des balances et
0,069 % pour le lait de brebis. des diffrences de tempratures entre le rcipient de
matire grasse et la salle des balances, lors des deux
9.3 Reproductibilit peses (7.4.14) et (7.3).

La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai Dans les conditions favorables (valeur faible dans l'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme blanc sur les ractifs, temprature stable de la salle des
mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans balances, temps de refroidissement suffisant pour le
des laboratoires diffrents par des oprateurs diffrents rcipient de matire grasse), la valeur sera gnralement
utilisant des appareillages diffrents, n'excdera que dans infrieure 1,0 mg et pourra alors ne pas tre prise en
5 % des cas, au plus, les valeurs suivantes relatives la compte dans le calcul, dans le cas de dterminations de
fraction massique de matire grasse: routine. On rencontre assez souvent des valeurs (positives
et ngatives) lgrement suprieures jusqu' 2,5 mg.
0,043 % pour le lait de vache crm ;
0,042 % pour le lait de vache allg en matire Aprs correction de ces valeurs, les rsultats seront
grasse ; encore prcis. Quand les corrections d'une valeur
suprieure 2,5 mg sont appliques, il convient d'en faire
0,056 % pour le lait de vache entier ; mention dans le bulletin d'analyse.
0,052 % pour le lait de chvre ;
Si la valeur obtenue dans l'essai blanc dpasse
0,096 % pour le lait de brebis. rgulirement 1,0 mg, il convient de contrler les ractifs
si cela n'a pas t fait rcemment. Il convient que les
NOTE A ractifs impurs ou ayant des traces soient remplacs ou
Indication sur les modes opratoires purifis (7.2.2) et (A. 1 ).

A.1 Essai blanc pour contrler les ractifs (7.2.2) A.3 Contrle pour vrifier la prsence de peroxydes

Dans cet essai blanc, un rcipient de contrle de la Pour vrifier la prsence de peroxydes, ajouter 1 ml
masse doit tre utilis de faon que les changements des d'une solution d'iodure de potassium 100 g/l rcemment
conditions atmosphriques de la salle des balances ou les prpare, 10 ml d'oxyde dithylique, dans une petite
effets de la temprature du rcipient de rcupration de la prouvette munie d'un bouchon en verre, et pralablement
matire grasse ne rvlent pas faussement la prsence ou rince avec un peu d'oxyde dithylique. Agiter et laisser
l'absence des matires non volatiles dans l'extrait des reposer pendant 1 min. Il convient qu'aucune coloration
ractifs. Ce rcipient peut tre utilis comme un jaune ne soit constate dans l'une ou l'autre des deux
contrepoids dans le cas d'une balance plateaux. Par couches.
ailleurs, il convient que les carts de la masse apparente
(m3 - m4 en 8.1) du rcipient de contrle soient retenus D'autres mthodes peuvent tre utilises pour contrler
lors du contrle de la masse du rcipient de rcupration la prsence de peroxydes.

77
3 Rabie El Aouel 1436
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 25 dcembre 2014

Pour tre sr que l'oxyde dithylique est exempt de B.2 Mode opratoire
peroxydes, et en reste exempt, traiter l'oxyde dithylique
comme ci-dessous, au moins, 3 jours avant son utilisation. B.2.1 Prparation de l'chantillon pour essai (6).

Couper du zinc en feuille, en bandes pouvant atteindre, B.2.2 Prise d'essai


au moins, le milieu du rcipient contenant l'oxyde
dithylique, en utilisant, environ, 80 cm2 de feuille de zinc Procder comme spcifi en (7.1), mais en utilisant les
par litre d'oxyde dithylique. tubes d'extraction de la matire grasse (note en 4.6) et
(Figure B.1).
Avant utilisation, immerger totalement les bandes
pendant 1 min dans une solution contenant 10 g de sulfate La prise d'essai doit tre transfre aussi compltement
de cuivre(II) pentahydrat (CuS04,5H20) et 2 ml/1 d'acide que possible au fond du tube d'extraction.
sulfurique concentr (fraction massique de 98 %).
B.2.3 Essai blanc (7.2) et (A.2).
Laver doucement et avec soin les bandes l'eau,
introduire les bandes humides traites au cuivre dans le B.2.4 Prparation du rcipient pour la rcupration
rcipient contenant l'oxyde dithylique et laisser les de la matire grasse (7.3).
bandes dans le rcipient.
B.2.5 Dtermination
D'autres mthodes peuvent tre utilises pourvu qu'elles
ne modifient pas le rsultat de la dtermination. B.2.5.1 Effectuer la dtermination sans attendre.
Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium (3.1)
A.4 Oxyde dithylique contenant des antioxydants la prise d'essai (B.2.2) se trouvant dans le tube d'extraction
de matire grasse, ou un volume quivalent d'une solution
L'oxyde dithylique contenant environ 1 mg/kg plus concentre (note 3.1). Mlanger vigoureusement avec
d'antioxydants est disponible dans certains pays, en la prise d'essai dans le fond du tube.
particulier pour des dterminations de matire grasse.
Cette teneur n'exclut pas son emploi titre de rfrence. B.2.5.2 Ajouter 10 ml d'thanol (3.2). Mlanger
doucement mais compltement avec le mlange au fond
Dans d'autres pays, l'oxyde dithylique pourra avoir des du tube. Ajouter, si on le dsire, 2 gouttes de solution
teneurs plus leves en antioxydants, par exemple jusqu' rouge-Congo (3.3).
7 mg/kg. Dans ce cas, il ne sera utilis que pour des
dterminations de routine, avec un essai blanc B.2.5.3 Ajouter 25 ml d'oxyde dithylique (3.4). Fermer
obligatoire effectu simultanment avec les le tube avec un bouchon en lige satur d'eau, ou avec un
dterminations, afin de corriger les erreurs systmatiques bouchon d'une autre matire (4.6), mouill avec de l'eau.
dues aux rsidus d'antioxydants. Agiter le tube vigoureusement, mais sans excs, afin
d'viter la formation d'mulsions persistantes par des
Sil est employ titre de rfrence, il devra toujours retournements rpts pendant 1 min. Si ncessaire,
tre distill avant lemploi. refroidir le tube l'eau courante jusqu' temprature
ambiante. Retirer avec prcaution le bouchon en lige ou
A.5 Ethanol le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que le col du
tube, avec une petite quantit de mlange de solvants
Lthanol dnatur autrement que par ajout de mthanol (3.6). Utiliser le flacon de lavage (4.8) de faon que les
peut tre utilis, pourvu que lagent dnaturant naffecte liquides de rinage coulent dans le tube.
pas les rsultats de la dtermination.
B.2.5.4 Ajouter 25 ml d'ther de ptrole (3.5). Fermer le
NOTE B tube avec le bouchon en lige rhumidifi ou avec l'autre
Autre mode opratoire utilisant des tubes dextraction bouchon rhumidifi (en le trempant dans l'eau). Agiter
de la matire grasse munis dun siphon ou dun doucement le tube pendant 30s, comme dcrit en
dispositif de lavage (B.2.5.3).

B.I Gnralits B.2.5.5 Centrifuger (4.2) le tube ferm pendant 1 min


5 min avec une acclration radiale de 80 g 90 g. Si l'on
Si l'on emploie des tubes d'extraction de la matire ne dispose pas de centrifugeuse, laisser le tube bouch
grasse munis d'un siphon ou d'un dispositif de lavage, reposer sur le support (4.7) pendant, au moins, 30 min,
utiliser le mode opratoire spcifi dans la prsente jusqu' ce que la couche surnageante soit claire et
annexe. Les tubes doivent tre munis de bouchons en lige nettement spare de la couche aqueuse. Si ncessaire,
de bonne qualit ou de bouchons tels que spcifis pour refroidir le tube l'eau courante jusqu' temprature
les fioles en (4.6) (Figure B.l). ambiante.

78
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25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 23

B.2.5.6 Retirer avec prcaution le bouchon en lige ou B.2.5.11 Effectuer une troisime extraction, sans
le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que le col du addition d'thanol, en rptant nouveau les oprations
tube, avec une petite quantit de mlange de solvants dcrites de (B.2.5.3) (B.2.5.8), mais en utilisant de
(3.6). Utiliser le f1acon de lavage (4.8) de faon que les nouveau seulement 15 ml d'oxyde dithylique et 15 ml
liquides de rinage coulent dans le tube. d'ther de ptrole et en rinant la longue tubulure situe
l'intrieur du dispositif, comme dcrit en (B.2.5.10).
B.2.5.7 Introduire un siphon ou un dispositif de
lavage dans le tube. Enfoncer la longue tubulure Note - La troisime extraction n'est pas ncessaire pour
l'intrieur jusqu' ce que l'orifice soit environ 4 mm du lait ayant une teneur en matire grasse infrieure
0,5 %.
au-dessus de l'interface des couches. La tubulure
intrieure doit tre parallle l'axe central du tube
B.2.5.12 Poursuivre la dtermination comme dcrit de
d'extraction. (7.4.12) (7.4.14).

Transvaser avec prcaution la couche surnageante du


tube dans le rcipient pour la rcupration de la matire Figure B.1 - Exemples de tubes dextraction pour
grasse (7.3) contenant quelques rgularisateurs matire grasse
d'bullition (4.10) dans le cas des fioles (facultatif avec les
capsules mtalliques). viter de dcanter une partie a) avec siphon b) avec systme
quelconque de la couche aqueuse. Rincer l'orifice avec daspiration par le vide
une petite quantit de mlange de solvants, en recueillant
les liquides de rinage dans le rcipient pour la
rcupration de la matire grasse.

Note - La couche surnageante peut tre transfre du


e
e

tube d'extraction de la matire grasse, en utilisant, par


xt.
xt.

4
4

exemple, un bulbe en caoutchouc reli la tige courte afin


0,4
0,4

d'assurer la pression.

B.2.5.8 Desserrer le dispositif du col du tube. Le


soulever lgrement et rincer la partie infrieure de la
longue tubulure interne avec un peu de mlange de 1
solvants (3.6). Abaisser et rintroduire le dispositif et
transvaser les liquides de rinage dans le rcipient de
rcupration de la matire grasse.

Rincer l'orifice externe du dispositif avec un peu de


200 5

200 5

mlange de solvants et recueillir les liquides de rinage 2


dans le rcipient. Si on le dsire, le solvant ou une partie
du solvant peut tre enlev du rcipient, par distillation ou
vaporation, comme dcrit en (7.4.13).

B.2.5.9 Desserrer de nouveau le dispositif du col. Le


soulever lgrement et ajouter 5 ml dthanol dans le tube.
Utiliser lthanol pour rincer la longue tubulure interne. int. 26 1 int. 26 1
Mlanger comme dcrit en (B.2.5.2).

B.2.5.10 Effectuer une seconde extraction en rptant


les oprations dcrites de (B.2.5.3) (B.2.5.8), mais en Lgende
utilisant seulement 15 ml d'oxyde dithylique (3.4)
et 15 ml d'ther de ptrole (3.5). Utiliser l'oxyde 1. Capacit maximale, avec siphon ou systme
dithylique pour rincer la longue tubulure interne pendant daspiration par le vide retir, 105 ml 5 ml.
que l'on retire le dispositif du tube aprs l'extraction
2. Epaisseur de la paroi 1,5 mm 0,5 mm.
prcdente.

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6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 15

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN AZOTE DANS LE LAIT
Arrt du 20 Chaoual 1434 correspondant au 27 aot
2013 rendant obligatoire la mthode de La prsente mthode spcifie une technique pour la
dtermination de la teneur en azote dans le lait. dtermination de la teneur en azote du lait liquide, entier
ou crm, selon le principe de (kjeldahl).
Le ministre du commerce,
1. DEFINITION
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433 Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination suivante s'applique :
des membres du Gouvernement ;
Teneur en azote :
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la Rapport de masse dazote dtermin par le mode
rpression des fraudes ; opratoire dcrit dans la prsente mthode.

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 Note - La teneur en azote est exprime sous forme de
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions pourcentage en masse.
du ministre du commerce ;
2. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Minralisation d'une prise d'essai avec un mlange
l'valuation de la conformit ; d'acide sulfurique concentr et de sulfate de potassium, en
utilisant du sulfate de cuivre (II) (3.2) comme catalyseur
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414 pour convertir ainsi l'azote organique prsent en sulfate
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et d'ammonium. (La fonction du sulfate de potassium est
la prsentation de certains laits de consommation ; d'lever le point d'bullition de l'acide sulfurique et de
permettre d'obtenir un mlange oxydant plus fort pour
Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418 la minralisation). Addition d'hydroxyde de sodium
correspondant au 10 Aot 1997 relatif aux spcifications excdentaire au minralisat refroidi pour librer de
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux l'ammoniac. Distillation de l'ammoniac libr dans un
conditions et modalits de leur prsentation ; excdent de solution d'acide borique, puis titrage en
utilisant de l'acide chlorhydrique. Calcul de la teneur en
Arrte : azote partir de la quantit d'ammoniac produite.
Article ler. En application des dispositions de
3. REACTIFS
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
teneur en azote dans le lait. ou dminralise, ou de l'eau de puret, au moins,
quivalente.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote
dans le lait, les laboratoires du contrle de la qualit et de 3.1 Sulfate de potassium (K2SO4), exempt dazote.
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode jointe en annexe du 3.2 Solution de sulfate de cuivre (II), c (CuSO4) =
prsent arrt. 5,0 g par 100 ml.

Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre 5,0 g de
lorsqu'une expertise est ordonne. sulfate de cuivre (Il) pentahydrat (CuSO4,5H2O) dans de
l'eau. Diluer jusqu'au repre avec de l'eau, puis mlanger.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.3 Acide sulfurique (H2SO4), avec un rapport de
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et masse compris entre 95 % et 98 %, sans azote (P20 =
populaire.
environ 1,84 g/ml).
Fait Alger, le 20 Chaoual 1434 correspondant au 3.4 Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH),
27 aot 2013. exempte d'azote, contenant 50 g d'hydroxyde de sodium
Mustapha BENBADA. par 100 g de solution.

80
6 Rabie El Aouel 1436
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 28 dcembre 2014

3.5 Solution indicatrice 3.10 Saccharose, dont la teneur en azote est infrieure
0,002 % (fraction massique).
Dissoudre 0,1 g de rouge de mthyle dans de l'thanol
95 % (rapport de volume) et diluer 50 ml avec de Ne pas scher la saccharose dans une tuve avant
l'thanol. Dissoudre 0,5 g de vert de bromocrsol dans de l'emploi.
l'thanol 95 % (rapport de volume) et diluer 250 ml
avec de l'thanol. Mlanger une dose de la solution de
rouge de mthyle cinq doses de la solution de vert de 4. APPAREILLAGE
bromocrsol ou combiner et mlanger l'ensemble des deux
solutions. Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit.
3.6 Solution d'acide borique, c(H3BO3)= 40,0 g/l.
Dans une fiole jauge de 1000 ml, dissoudre 40,0 g 4.1 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une
d'acide borique dans 1 litre d'eau chaude. Laisser refroidir temprature de 38C 2 C.
la fiole et son contenu 20 C. Complter au volume avec
de l'eau, ajouter 3 ml de la solution indicatrice (3.5) et 4.2 Ballons de Kjeldahl, d'une capacit de 500 ml ou
mlanger. 800 ml.
Remarque
4.3 Balance analytique, permettant de peser 0,1 mg
Conserver la solution, qui doit tre orange clair, dans prs.
une bouteille en verre de borosilicate. Durant le stockage,
protger la solution de la lumire et des sources de 4.4 Corps facilitant lbullition, par exemple pierre
vapeurs d'ammoniac. ponce incandescente, poussire de zinc, pices de
En cas de titrage lectronique du pH avec point final, porcelaine dures ou granules d'alundon amphotres
l'ajout de la solution indicatrice la solution d'acide (carbarundum) lisses, d'une puret leve et d'une taille de
borique peut tre omis. D'autre part, le changement de mailles de 10.
couleur peut aussi servir contrler le mode opratoire de
titrage. Ne pas rutiliser ces corps.

3.7 Solution volumtrique standard d'acide Note- Des billes de verre d'environ 5 mm de diamtre
chlorhydrique, c(HCI) = (0,1 0,000 5) mol/l. sont parfois utilises, mais celles-ci peuvent tre moins
efficaces pour l'bullition que les granules d'alundon, et
Il est recommand d'acheter ce matriau dj
des problmes de formation de mousse pendant la
prnormalis, rpondant ces spcifications.
minralisation risquent davantage de se poser avec les
Note - Souvent, les erreurs systmatiques (qui peuvent billes de verre.
tre vites) introduites par un analyste qui dilue un acide
concentr, puis dtermine la molarit de l'acide, peuvent 4.5 Burette ou pipette automatique, permettant
diminuer la reproductibilit de la mthode. d'obtenir des doses de 1,0 ml de solution de sulfate de
cuivre (Il) (3.2).
Il convient que l'analyste n'utilise pas de solution de
titrage de concentration suprieure 0,1 mol/l car cela
rduirait le volume total de titrage par chantillon, et 4.6 Eprouvettes gradues, d'une capacit de 50 ml,
l'incertitude de lecture de la burette reprsenterait un 100 ml et 500 ml.
pourcentage plus lev de la valeur.
4.7 Appareil de minralisation, pour maintenir
Cela aura un impact ngatif sur la rptabilit et la les ballons de Kjeldahl (4.2) en position incline
reproductibilit de la mthode. Les mmes problmes se ( environ 45), pourvu de rsistances lectriques ou de
posent, avec le risque d'erreurs supplmentaires, lorsqu'un becs gaz ne chauffant pas les ballons au-del du niveau
autre acide (par exemple l'acide sulfurique) est substitu de leur contenu, ainsi que d'un systme d'vacuation des
l'acide chlorhydrique, Ces substitutions ne sont donc pas fumes.
recommandes.
Il convient que la source chauffante soit rglable pour
3.8 Sulfate d'ammonium [(NH4)2 SO4)], ayant une permettre de contrler le rglage maximal de l'lment
puret minimale de 99,9 % (rapport de masse) sur matire chauffant appliquer durant la minralisation. Prchauffer
sche. la source chauffante au rglage de l'lment chauffant
valuer.
Immdiatement avant l'emploi, scher le sulfate
d'ammonium 102C 2C pendant, au moins, 2 h. La dure de prchauffage doit tre de 10 min dans le cas
Laisser refroidir temprature ambiante dans un d'un bec gaz et de 30 min dans le cas d'un lment
dessiccateur. chauffant lectrique. Dterminer, pour chacun des
lments chauffants, le rglage qui permet de porter
3.9.Tryptophane (C11H12N2O2) ou hydrochlorure bullition 250 ml d'eau et 5 10 corps facilitant
de lysine (C6H15CIN2O2), ayant une puret minimale de l'bullition (en partant d'une temprature initiale de 25C)
99,9 % (rapport de masse). en 5 min 6 min. Ce rglage correspond au rglage
Ne pas scher ces ractifs dans une tuve avant maximal de l'lment chauffant appliquer durant la
lemploi. minralisation.

81
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 17

4.8 Appareil de distillation, en verre de borosilicate ou 7.2 Dtermination


autre matire approprie, pouvant tre quip d'un ballon
de Kjeldahl (4.2), se composant d'une tte anti projections 7.2.1 Minralisation
efficace, reli un condenseur efficace avec tube intrieur
droit et un tube d'coulement fix son extrmit Brancher le systme d'vacuation des fumes de
infrieure. l'appareil de minralisation (4.7) avant de commencer la
minralisation. Chauffer le ballon de Kjeldahl et son
Le tubage de connexion et le (s) bouchon (s) doivent contenu (7.1) sur l'appareil de minralisation en rglant
tre tanches et de prfrence en noprne. l'lment chauffant sur une temprature suffisamment
basse pour que le minralisat brl ne dborde pas en
4.9 Fioles coniques, d'une capacit de 500 ml, gradues moussant par le col du ballon de Kjeldahl. Effectuer la
tous les 200 ml. minralisation ce rglage de l'lment chauffant jusqu'
ce que de la fume blanche apparaisse dans le ballon au
4.10 Burette, d'une capacit de 50 ml, gradue, au bout d'environ 20 min. Augmenter le rglage de l'lment
moins, tous les 0,01 ml. chauffant jusqu' une position correspondant la moiti
du rglage maximal dtermin en (4.7) et continuer le
Il est galement possible d'utiliser une burette chauffage pendant 15 min. Au terme des 15 min,
automatique satisfaisant aux mmes exigences. augmenter le chauffage jusqu'au rglage maximal
dtermin en (4.7). Une fois que le minralisat s'est
4.11 Dispositif de titrage automatique pourvu d'un clairci (il devient transparent avec une coloration bleu
pH-mtre. clair vert), continuer faire bouillir le contenu pendant
1 h 1 h 30 min au rglage maximal. Si le liquide ne bout
Il convient que le PH-mtre soit correctement talonn pas, il est possible que le rglage final du bec gaz soit
dans la gamme de pH 4 PH 7 selon les mthodes trop faible. La dure totale de la minralisation sera
normales dtalonnage de PH en laboratoire comprise entre 1 h 48 min et 2 h 15 min.
5. ECHANTILLONNAGE Pour dterminer le temps d'bullition spcifique
ncessaire pour les conditions d'analyse du lait dans un
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon laboratoire particulier utilisant un ensemble bien dfini
rellement reprsentatif et n'ayant pas t endommag ou d'appareils. Slectionner un chantillon de lait haute
modifi durant le transport ou le stockage. teneur en protines et en matires grasses et dterminer sa
L'chantillonnage se fait selon une mthode approprie. teneur en protines en appliquant diffrents temps
d'bullition (de 1 h 1 h 30 min) aprs l'claircissement.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI Le rsultat moyen de la teneur en protines augmente
avec le temps d'bullition, se stabilise, puis diminue quand
Chauffer l'chantillon pour essai dans le bain d'eau (4.1) le temps d'bullition est trop long. Choisir le temps
rgl 38 C 2 C. Bien mlanger, mais dlicatement, d'bullition qui permet d'obtenir la teneur maximale en
au moyen de retournements rpts du rcipient, sans protines.
causer ni mousse ni barattage. Laisser refroidir
l'chantillon temprature ambiante immdiatement avant Au terme de Ia minralisation, le minralisat doit tre
de peser la prise d'essai (7.1). transparent et exempt de matire non digre. Laisser
refroidir le minralisat temprature ambiante dans des
Note - Si l'on souhaite appliquer cette mthode des flacons ouverts pendant environ 25 min. Si les ballons
produits laitiers autres que le lait, voir la remarque refroidissent sur les becs encore chauds, le temps pour
annexe la prsente mthode pour des recommandations atteindre la temprature ambiante sera plus long. A la fin
sur la taille de l'chantillon pour essai. de cette priode de refroidissement de 25 min, il convient
que le minralisat refroidi soit compltement liquide ou
7. MODE OPERATOIRE liquide avec quelques petits cristaux au fond du ballon. Ne
pas laisser le minralisat non dilu dans les ballons
7.1 Prise d'essai et prtraitement pendant toute une nuit. En effet, le minralisat non dilu
peut se cristalliser lors de cette priode et il sera ensuite
Introduire dans le ballon de Kjeldahl (4.2) propre et sec trs difficile de le remettre en solution.
de 5 10 corps facilitant l'bullition (4.4), 15,0g de sulfate
de potassium (3.1), 1,0 ml de solution de sulfate de cuivre Note - La cristallisation excessive au bout de 25 min est
(II) (3.2), environ 5 ml 0,1 ml de l'chantillon pour le rsultat d'une perte d'acide trop importante au cours de
essai prpar (6), pes 0,1 mg prs, et 25 ml d'acide la minralisation et risque de donner des valeurs d'essai
sulfurique (3.3). A cet effet, utiliser l'acide sulfurique pour faibles. Cette perte d'acide est cause par une aspiration
entraner tout rsidu de la solution de sulfate de cuivre excessive des fumes ou par une minralisation trop
(II) (3.2), du sulfate de potassium ou de la prise d'essai longue due un rglage maximal incorrect du bec.
restant sur le col du ballon.
Ajouter 300 ml d'eau dans les ballons de Kjeldahl de
S'il reste un peu de minralisat brl sur le col, rincer 500 ml, ou 400 ml d'eau dans les ballons de Kjeldahl de
avec une petite quantit d'eau. Mlanger doucement le 800 ml, en utilisant galement l'eau pour liminer tout
contenu du ballon de Kjeldahl. rsidu sur le col des ballons.

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6 Rabie El Aouel 1436
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 28 dcembre 2014

Mlanger compltement le contenu en s'assurant que Il est galement possible de titrer le contenu de la fiole
tous les cristaux qui se sont forms sont dissous. Ajouter conique (7.2.2) avec l'acide chlorhydrique (3.7) au
de 5 10 corps facilitant l'bullition (4.4). Laisser le moyen d'un dispositif de titrage automatique talonn
mlange refroidir temprature ambiante avant de quip d'un pH-mtre (4.11). Le point final de titrage est
procder la distillation. Les minralisats dilus peuvent atteint au pH 4,6, qui correspond au point le plus haut de
tre conservs dans des fioles bouches et utiliss la courbe de titrage (point d'inflection). Lire la quantit de
ultrieurement pour la distillation. solution titre utilise sur le dispositif de titrage
automatique.
7.2.2 Distillation
Note 1- La premire trace de rose est observe entre pH
4,6 et pH 4,3 pour le systme indicateur et la solution
Faire circuler l'eau du condenseur pour l'appareil
d'acide borique 4 % spcifie dans la prsente mthode.
distillation (4.8). Ajouter 75 ml de solution d'hydroxyde
En pratique, la variation du pH en fonction de l'ajout
de sodium (3.4) au minralisat dilu (7.2.1) en versant
d'acide chlorhydrique 0,1 mol/l est trs rapide dans cette
dlicatement la solution dans le col inclin du ballon de
gamme de pH. Il faut environ 0,05 ml d'acide
Kjeldahl, de faon former une couche au fond du bulbe
chlorhydrique 0,1 mol/l pour changer le pH de 0,3 unit
du ballon, il convient que linterface entre les deux
dans la gamme de pH comprise entre 4,6 et 4,3 dans ce
solutions soit nette. Pour les deux solutions soit nette.
systme.
Pour rduire le risque de perte dammoniac, relier le
ballon de Kjeldahl l'appareil de distillation (4.8)
immdiatement aprs l'adjonction de la solution Note 2- Les statistiques intralaboratoires et
d'hydroxyde de sodium dans le ballon. La pointe du tube interlaboratoires concernant cette mthode ont t
d'coulement du condenseur est plonge dans 50 ml de la dtermines l'aide d'un titrage point final
solution d'acide borique (3.6) contenue dans une fiole colorimtrique. La comparaison entre les rsultats d'essai,
y compris ceux des essais blanc, obtenus avec un point
conique (4.9). Agiter vigoureusement par un mouvement
final de pH 4,6 et les rsultats d'un titrage point final
de rotation le ballon de Kjeldahl jusqu' ce qu'il n'y ait
colorimtrique a montr que, statistiquement, aucune
plus de couches de solution spares visibles dans le
diffrence significative n'tait dmontrable entre ces
ballon. Placer le ballon sur le bec et mettre en marche le
rsultats.
bec un rglage suffisamment lev pour porter le
mlange bullition. Continuer la distillation jusqu' ce
7.3 Essai blanc
qu'une bullition irrgulire (bullition pulsatoire)
commence, puis dconnecter immdiatement le ballon de Titrer les prises d'essai blanc en utilisant toujours le
Kjeldahl et arrter le chauffage. Arrter l'eau du mme acide chlorhydrique (3.7) et la mme burette (4.5)
condenseur. Rincer l'eau l'intrieur et l'extrieur de ou le mme dispositif de titrage automatique quip dun
l'extrmit du tube d'coulement, recueillir l'eau de pH-mtre (4.11) que pour les prises dessai. Raliser un
rinage dans la fiole conique et mlanger. essai blanc en suivant le mode opratoire dcrit-en (7.1)
(7.2.3), en remplaant la prise d'essai par 5 ml d'eau
Le dbit de distillation doit permettre de recueillir avec environ 0,85 g de saccharose (3.10).
environ 150 ml de distillat avant que ne commence
l'bullition irrgulire (bullition pulsatoire). Le volume
Consigner les valeurs blanc. Si ces valeurs varient,
total contenu dans la fiole conique sera d'environ 200 ml.
identifier la cause de ce changement.
Si le volume de distillat recueilli est infrieur 150 ml, il
est probable qu'une quantit d'eau infrieure 300 ml ait
t ajoute pour diluer le minralisat. L'efficacit du Note 1- Dans une prise d'essai blanc ou un talon de
condenseur doit tre telle que la temprature du contenu rcupration, la saccharose est utilise comme matire
de la fiole conique ne dpasse pas 35C pendant la organique pour consommer, lors de la minralisation, une
distillation en cas d'utilisation d'un point final de titrage quantit d'acide sulfurique pratiquement quivalente
colorimtrique. celle ncessaire pour une prise d'essai. Si la quantit
d'acide sulfurique libre restant la fin de la minralisation
est insuffisante, la rcupration de l'azote dtermine
7.2.3 Titrage
suivant les essais de rcupration en (7.4.2) et (7.4.3) sera
faible. Cependant, s'il reste, la fin de la minralisation,
Titrer le contenu de la fiole conique (7.2.2) avec l'acide
une quantit suffisante d'acide sulfurique libre pour retenir
chlorhydrique (3.7) l'aide d'une burette (4.5). Le point
tout l'azote, mais que les conditions de temprature et de
final de titrage est atteint la premire trace de rose dans
dure de la minralisation ont t insuffisantes pour
le contenu. Estimer la lecture de la burette 0,05 ml prs. librer totalement l'azote de l'chantillon, sa rcupration
Une plaque agitatrice magntique claire peut faciliter la en (7.4.2) sera acceptable tandis qu'elle sera faible en
visualisation du point final de titrage. (7.4.3).

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6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 19

Il convient que la quantit de solution titre utilise Dans ce cas, les causes peuvent tre les suivantes :
pour la prise d'essai blanc soit toujours suprieure
zro. Il convient que les prises d'essai blanc ralises a) le sulfate d'ammonium est contamin;
dans le mme laboratoire soient stables dans le
temps. Les valeurs-types de blanc sont infrieures ou b) la normalit relle de la solution titre est infrieure
gales 0,2 ml. sa valeur fixe ;

Note 2 - Si la prise d'essai blanc est dj rose avant le c) l'talonnage de la burette pour la solution titre est
dbut du titrage, cela n'est pas normal. En gnral, dans ce erron ;
cas, les fioles coniques ne sont pas propres ou l'eau
contenue dans l'air humide pouvant se condenser d) la temprature de la solution titre est suprieure la
l'extrieur de l'appareil condenseur est entre dans la fiole temprature d'talonnage de la burette ;
de rcupration, entranant sa contamination.
e) l'coulement de solution titre l'extrieur de la
7.4 Essais de rcupration burette dpasse la vitesse maximale laquelle l'talonnage
de la burette est valable.
7.4.1 Il convient de vrifier rgulirement la prcision
7.4.3 Vrifier l'efficacit du mode opratoire de
du mode opratoire par les essais de rcupration suivants,
minralisation en utilisant 0,16 g d'hydrochlorure de
raliss conformment au mode opratoire dcrit en (7.1)
(7.2.3). lysine (3.9) ou 0,18 g de tryptophane (3.9) avec 0,67 g de
saccharose (3.10).
7.4.2 Vrifier qu'il ne se produit aucune perte Un rapport de masse d'au moins 98 % de l'azote doit
d'azote en utilisant une prise d'essai de 0,12 g de tre rcupr. Si la rcupration est infrieure 98 %
sulfate d'ammonium (3.8) avec 0,85 g de saccharose
aprs avoir obtenu une rcupration de 99 % 100 % du
(3.1 0).
sulfate d'ammonium, la temprature ou le temps de
minralisation est insuffisant (e) (suivre le mode
Note - La vrification de la rcupration du sulfate opratoire donn en (7.2.1), premier alina et note 1), ou
d'ammonium ne donne aucune indication sur la capacit alors une partie de l'chantillon n'est pas digre ( savoir
des conditions de minralisation librer l'azote li aux brle) l'intrieur du ballon de Kjeldahl. L'valuation
structures protiques. finale des performances est meilleure si elle est ralise
dans le cadre d'un programme d'essais de performances,
Le pourcentage d'azote rcupr doit tre compris dans lequel les paramtres statistiques intralaboratoires et
entre 99 % et 100 % pour toutes les positions de interlaboratoires sont calculs sur la base d'une analyse
l'appareil. Pour les rcuprations infrieures 99 %, la d'chantillons de lait.
normalit de la solution titre est suprieure la
valeur fixe, o une perte d'azote peut avoir eu lieu 7.4.4 Des rsultats infrieurs obtenus dans l'un ou l'autre
lors de l'tape de minralisation ou de distillation. des essais de rcupration (ou suprieurs 100 % en
Il est possible d'utiliser un mlange de sulfate (7.4.2)) indiquent qu'il y a des erreurs dans le mode
d'ammonium et une petite quantit d'acide sulfurique opratoire et/ou des imprcisions de concentration de la
(la quantit rsiduelle la fin de la minralisation) dans un solution d'acide chlorhydrique (3.7).
ballon de Kjeldahl.

8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS


Diluer avec un volume normal d'eau, ajouter la quantit
normale d'hydroxyde de sodium, puis distiller. Si la
rcupration d'azote est toujours faible dans les mmes 8.1 Calcul de la teneur en azote
proportions, la perte d'azote survient dans l'appareil de
distillation et non pas dans celui de minralisation. La 8.1.1 Calculer la teneur en azote de l'chantillon pour
cause en est probablement la fuite d'un tube dans un essai, WN , l'aide de l'quation suivante :
systme traditionnel ou le fait que les pointes du
condenseur ne sont pas immerges totalement dans l'acide 1,4007 (Vs - Vb) Mr
borique ds le dbut de la distillation. Il convient que WN =
l'appareil soit soumis cet essai avant que la rcupration m
ne soit vrifie suivant le mode opratoire donn en
(7.4.3). O

Si les rcuprations d'azote sont suprieures 100 %, WN est la teneur en azote de l'chantillon pour essai,
aucune perte d'azote ne peut tre constate. exprime sous forme de pourcentage en masse ;

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6 Rabie El Aouel 1436
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 28 dcembre 2014

Vs est la valeur numrique du volume, en millilitres, de 8.2.2 Exprimer les rsultats obtenus pour la teneur en
l'acide chlorhydrique (3.7) utilis dans la dtermination matire azote totale trois dcimales prs, si c'est
(7.2.3), exprime, au moins, 0,05 ml prs ; ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il s'agit de
rsultats finaux (8.1), deux dcimales suffisent.
Vb est la valeur numrique du volume, en millilitres, de
l'acide chlorhydrique (3.7) utilis dans l'essai blanc 9. FIDELITE
(7.3), exprime, au moins, 0,05 ml prs ;
9.1 Essai interlaboratoires
Mr est la valeur numrique de la molarit exacte de
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont
l'acide chlorhydrique (3.7), exprime quatre dcimales issues des rsultats dun essai interlaboratoires. Les
prs ; valeurs drives de cet essai peuvent ne pas tre
applicables aux plages de concentration et matrices autres
m est la valeur numrique, en grammes de la masse de que celles indiques.
la prise d'essai (7.1), exprime 0,1 mg prs.
9.2 Rptabilit
8.1.2 Exprimer les rsultats obtenus quatre dcimales
prs, si c'est ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
s'agit de rsultats finaux (8.1), exprimer la teneur en azote individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
trois dcimales prs et la teneur en matire azote totale mthode sur un matriau identique soumis l'essai
deux dcimales. Il convient de ne pas arrondir les dans le mme laboratoire par le mme oprateur
rsultats avant l'utilisation finale de la valeur d'essai. utilisant le mme appareillage dans un court intervalle
de temps, n'excdera 0,006 % pour la teneur en azote
Note - Cela est particulirement vrai lorsque les valeurs (0,038 % pour la teneur en matire azote totale) que dans
5 % des cas au plus.
sont appeles tre utilises pour des calculs ultrieurs.
C'est le cas, par exemple, lorsque les valeurs dessai
9.3 Reproductibilit
individuelles obtenues partir de l'analyse de plusieurs
chantillons sont utilises pour calculer les statitistiques La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
de performance de la mthode concernant les variations individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
intralaboratoires et interlaboratoires. Cest galement le matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
cas lorsque les valeurs servent de rfrence pour diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
l'talonnage d'un instrument (par exemple un analyseur de appareillages diffrents, n'excdera 0,0077 % pour la
lait infrarouge), o les valeurs concernant plusieurs teneur en azote (0,049 % pour la teneur en matire azote
chantillons seront utilises pour un calcul de rgression totale) que dans 5 % des cas au plus.
simple ou multiple. Dans ces cas, il convient de ne pas
arrondir les rsultats obtenus avant de les utiliser pour les
calculs ultrieurs. REMARQUE
Mode opratoire pour l'analyse dautres produits
8.2 Calcul de la teneur en matire azote totale laitiers lorsqu'une mthode particulire n'existe
pas pour ces produits
8.2.1 Calculer la teneur en matire azote totale de
l'chantillon pour essai, Wp, l'aide de l'quation 1. Gnralits
suivante :
Le mode opratoire dcrit dans la prsente mthode a
t optimis et ses performances ont t values pour
Wp = WN x 6,38 l'analyse du lait bovin. S'il n'existe aucune mthode
particulire pour le produit concern, un laboratoire peut
O souhaiter utiliser le mme mode opratoire, avec des
modifications mineures, pour la dtermination de la teneur
Wp est la teneur en matire azote totale de en azote d'une srie de produits laitiers.
l'chantillon pour essai, exprime sous forme de
pourcentage en masse ; Il convient cependant de noter que le mode opratoire et
ses performances n'ont pas t valids pour ce type
Wn est la teneur en azote de l'chantillon pour essai, d'application.
exprime sous forme de pourcentage en masse, quatre
dcimales prs (8.1) ; 2. Mode opratoire

Peser 0,1 mg prs, la masse approprie de prise d'essai


6,38 est le coefficient multiplicateur gnralement
extraite d'un chantillon pour essai correctement prpar,
admis pour exprimer la teneur en azote en tant que teneur
comme dcrit ci-aprs. Dterminer la teneur en azote en
en matire azote totale. suivant la mthode dcrite en (7.1) (7.4).

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6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75 21

Il convient de ne pas modifier les quantits d'acide de matires grasses, 1,9 % de protines et 2,9 % de
sulfurique (3.3) et de solution d'hydroxyde de sodium lactose. Pour obtenir 0,15 g de protines dans le ballon de
(3.4) utilises dans les processus de minralisation et de Kjeldahl (4.2), il convient d'utiliser une prise d'essai de
distillation. La modification du rapport entre la quantit 7,89 g. Cette prise d'essai contient alors 3,16 g de matires
d'acide et les autres composants en augmentant la quantit grasses, qui consomment dj elles-mmes 56,9 g
d'acide fait diminuer le point d'bullition initial du (environ 30,9 ml) d'acide sulfurique lors de la
mlange dans la minralisation et n'est donc pas minralisation, sans tenir compte de la perte d'acide
recommande. sulfurique par vaporation (en supposant que 1 g de
matire grasse consomme 18 g d'acide sulfurique au cours
Il convient d'utiliser un effectif appropri de prise
de la minralisation). C'est un exemple de cas o la
d'essai en travaillant avec les ractifs spcifis dans la
quantit de prise d'essai doit tre rduite afin d'obtenir une
prsente mthode. L'effectif appropri de prise d'essai
quantit rsiduelle suffisante d'acide sulfurique la fin de
peut tre estim comme suit pour tout chantillon pour
essai. la minralisation. Dans le cas d'une matire telle que la
crme, il convient d'utiliser une solution titre de
La quantit optimale de protines par ballon de Kjeldahl concentration infrieure (par exemple 0,01 mol/1). Dans
(4.2) doit tre comprise entre 0,15 g et 0,30 g par ballon de tels cas, il est ncessaire de rduire la quantit de
pour tout chantillon. Ainsi, si un chantillon moyen de prise d'essai pour qu'il reste une quantit suffisante
Cheddar contient 24,00 % de protines, il convient que la d'acide sulfurique au terme de la minralisation.
masse de la prise d'essai soit comprise entre 0,625 g et
1,25 g. La quantit de saccharose requise pour un essai blanc
ou pour les talons de rcupration des produits autres que
Le choix d'utiliser des masses de prise d'essai qui
le lait bovin peut tre dtermine comme suit :
avoisinent la limite infrieure ou la limite suprieure de la
plage dpend de la quantit d'acide qui sera consomme
par les autres composants de l'chantillon lors de la Il faut tout dabord raliser une estimation des teneurs
minralisation (c'est--dire les matires grasses et les approximatives en matires grasses, en protines et en
hydrocarbures). hydrocarbures pour le type d'chantillon pour essai
concern et de l'effectif approximatif de la prise d'essai
La prsente mthode dcrit l'ajout de 25 ml (environ utilise dans la minralisation.
46 g) d'acide sulfurique la prise d'essai dans le ballon de
Kjeldahl. la fin de la minralisation, il doit rester
Ensuite, lors de la minralisation, 1 g de matire grasse
environ 15 g d'acide sulfurique dans le ballon pour retenir
consommera environ 18 g d'acide sulfurique ; 1 g de
tout l'azote.
protines consommera environ 9 g d'acide sulfurique ; et
1 g d'hydrocarbures consommera environ 7 g d'acide
Il convient de noter qu'une quantit d'acide sulfurique sulfurique.
est consomme par la prise d'essai et galement perdue
par vaporation au cours de la minralisation. La perte par Sur la base de ces informations, il est possible de
vaporation peut tre gale la quantit consomme par calculer la quantit d'acide consomme par une prise
les matires organiques dans une prise d'essai. La quantit
d'essai et la quantit de saccharose ncessaire pour
finale d'acide rsiduel sera fonction de ces deux processus.
consommer la mme quantit d'acide lors de la
Si les pertes d'acide par vaporation sont trs importantes
minralisation. Il convient que la quantit calcule
(en raison d'une aspiration excessive des fumes au cours
de la minralisation ou du fait que le col des ballons est de saccharose soit utilise pour la prise d'essai
trop chaud), il se peut qu'il reste trop peu d'acide au terme blanc et pour l'talon de rcupration du sulfate
de la minralisation, mme si la prise d'essai tait de taille d'ammonium.
suffisante.
Pour l'talon de rcupration d'azote des acides amins
(7.4.3), rduire la quantit de saccharose de l'quivalent
Une quantit rsiduelle d'acide insuffisante conduira
correspondant l'acide qui sera consomm (calcul sous
la cristallisation du minralisat au bout de 25 min
de refroidissement et une faible rcupration forme de protines) par l'hydrochlorure de lysine ou le
d'azote. tryptophane. On prend pour hypothse que la rcupration
d'azote lors de la minralisation pour l'appareil utilis est
La crme contenant 40 % de matires grasses est un la mme pour les chantillons autres que le lait, sans
exemple de produit dlicat. Dans ce cas, la teneur en raliser d'autres expriences de rcupration pour obtenir
protines ou en azote de l'chantillon est faible et la teneur des conditions permettant d'atteindre des niveaux
en matires grasses est leve. On prend pour hypothse similaires d'acide sulfurique rsiduel la fin de la
qu'un chantillon moyen de crme contient environ 40 % minralisation.

86
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 15

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


MINISTERE DU COMMERCE officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Arrt du 4 Moharram 1437 correspondant au 18
octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de Fait Alger, le 4 Moharram 1437 correspondant au 18
prparation de l'chantillon pour essai en vue de
octobre 2015.
l'analyse physique et chimique du lait.
Bakhti BELAB.

Le ministre du commerce,

Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436 ANNEXE


correspondant au 14 mai 2015, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ; METHODE DE PREPARATION DE
L'ECHANTILLON POUR ESSAI EN VUE DE
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, L'ANALYSE PHYSIQUE ET CHIMIQUE DU LAIT
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 1. Objet et domaine d'application :
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions La prsente mthode a pour objet de dfinir les
du ministre du commerce ; directives gnrales pour la prparation des chantillons
en vue des prises d'essais utilises pour l'analyse physique
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kada et chimique du lait.
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ; 2. Principe :
Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou El Kada
1434 correspondant au 26 septembre 2013 fixant les Homognisation mcanique ou manuelle de
conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au l'chantillon pour essai, conditionnement une
titre de la protection du consommateur et de la rpression temprature de 20 C 5 C et ralisation des prises
des fraudes ; d'essais.

Vu l'arrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux 3. Appareillage et verrerie :


spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation.
3.1 Bchers de capacit 400 ml ;

Arrte : 3.2 Baguette en verre d'environ 20 cm de longueur et 8


mm de diamtre, lgrement recourbe l'une des
Article. 1er. En application des dispositions de extrmits et revtue d'un embout en caoutchouc ;
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet 3.3 Homognisateur appropri de nettoyage facile,
de rendre obligatoire la mthode de prparation de muni d'un systme permettant le chauffage et le maintien
l'chantillon pour essai en vue de l'analyse physique et
du lait une temprature d'environ 40 C.
chimique du lait.

Art. 2. Pour la prparation de l'chantillon pour essai A dfaut de cet appareil (3.3), utiliser ce qui suit :
en vue de l'analyse physique et chimique du lait, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression 3.4 Ensemble pour l'homognisation manuelle ;
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe. 3.4.1 Bain marie rgl 40 C ;

Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire 3.4.2 Tamis en mtal inoxydable dont les ouvertures
lorsqu'une expertise est ordonne. de mailles ne dpassent pas 0,5 mm ;

87
21 Moharram 1437
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 4 novembre 2015

3.4.3 Entonnoir d'un diamtre lgrement suprieur 4.1.2 Homognisation manuelle :


celui du tamis.
4.1.2.1 Agiter l'chantillon par retournements successifs
4. Mode opratoire : rpts et le ramener une temprature d'environ 25 C.

4.1 Homognisation de l'chantillon : Note :

Si l'analyse aura lieu immdiatement aprs le Cette agitation ne doit pas tre violente, puisque le
prlvement ou au plus tard dans les deux (2) ou trois (3) flacon est plein ou presque plein. Il faut absolument viter
heures qui suivent, une simple agitation de l'chantillon de provoquer la formation d'une mulsion d'air dans le
par retournements successifs du flacon suffit rendre le lait, pour ne pas fausser les prlvements. Cette premire
contenu homogne. agitation n'a pas pour objet de rendre l'chantillon
homogne, mais seulement de dtacher la matire grasse
Dans le cas contraire o l'analyse n'aura lieu que le des parois du flacon et de la rompre en un trs grand
lendemain du prlvement ou quelques jours plus tard ou nombre de menus fragments.
aprs un dlai plus long, la matire grasse du lait se
rassemble et prend en masse tout le long de la paroi du 4.1.2.2 Verser au dessus du tamis (3.4.2) une partie de
flacon ou sous le bouchon. l'chantillon maintenu 25 C environ et la recueillir dans
un bcher (3.1) . Dilacrer les grumeaux l'aide de la
Il faut donc remettre la matire grasse en suspension baguette (3.2) en utilisant le reste de l'chantillon.
homogne dans la totalit de l'chantillon, soit en utilisant Transvaser plusieurs reprises dans les bchers (3.1) afin
un appareil mcanique condition qu'il ne modifie en rien que l'homognisation soit complte . Si la matire grasse
la composition du lait ni de point de vue qualitatif ni de n'est pas convenablement incorpore au lait, rchauffer
point de vue quantitatif, soit manuellement et ce, dfaut l'chantillon au bain marie (3.4.1) et renouveler les
de cet appareil (3.3). oprations dcrites en (4.1.2).

4.1.1 Homognisation mcanique : 4.1.3 Cas particuliers :

Le mode opratoire dpend de l'appareil dont on 4.1.3.1 Il peut arriver que l'chantillon est baratt au
dispose. Dans tous les cas, il est indispensable de cours du transport, ou instantanment sous l'action de
rcuprer la totalit des dpts qui adhrent aux parois du l'agitateur et que les grumeaux de matire grasse recueillis
flacon de prlvement ou au bouchon. sur la passoire soient dj constitus par de vritables
amas de beurre.
Il est avantageux de porter l'chantillon une
temprature de 40 C 45 C de manire faire fondre la Il convient, dans ce cas, de rchauffer l'chantillon
matire grasse qui doit tre liquide pour raliser 40 C, sous l'action combine du filet de lait chaud et de
convenablement l'mulsion. l'agitateur, ces amas fondent et se divisent en traversant la
passoire.
Note :
Rpter l'opration une ou deux fois, puis refroidir
Utiliser l'appareil (3.3) selon les spcifications fixes l'chantillon . Dans ce cas, il est prciser que, la matire
par le fabricant et veiller en particulier : grasse n'est pas finement rincorpore au lait. Le
prlvement correct en vue du dosage de la matire grasse
ne rien introduire dans l'chantillon ; sera difficile. ce titre, l'homognisation mcanique est
recommande.
ne rien soustraire de l'chantillon durant tout le
mcanisme, soit par rtention de la matire grasse ou de la
casine coagule, soit par perte du srum de lait avant 4.1.3.2 Dans le cas ou les grumeaux de crme
l'incorporation des caillots ; adhraient fortement au bouchon, dbarrasser celui-ci de
la matire grasse l'aide de l'agitateur caoutchout, le
viter la formation de mousse ou d'mulsion d'air, rincer sous le filet de lait et le laisser dans la passoire ou il
dont la prsence interdit toute mesure valable de la masse subira d'abondants lavages au cours des transvasements
volumique ou toute prise d'essais en volume. successifs.

88
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 17

4.2 temprature de conditionnement : Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou El Kada


1434 correspondant au 26 septembre 2013 fixant les
Le matriel de prlvement tant jaug pour une conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au
temprature de 20 C et des dterminations titre de la protection du consommateur et de la rpression
physico-chimiques tant effectues cette temprature, il des fraudes ;
convient que le local, les ractifs et le lait lui-mme soient
Vu l'arrt interministriel du 13 Chabane 1419
une temprature de 20 C 5 C.
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des laits en poudre et aux
Il convient galement, d'amener le lait cette conditions et modalits de leur prsentation ;
temprature le plus rapidement possible.
Vu l'arrt du 17 Rajab 1420 correspondant au 27
4.3 Prises d'essais : octobre 1999, modifi et complt, relatif aux
spcifications du lait en poudre industriel et aux
Aprs prparation de l'chantillon en vue de l'analyse conditions et modalits de sa prsentation, sa dtention,
physique et chimique, les prises d'essais devront tre son utilisation et sa commercialisation ;
effectues immdiatement . Il est recommand d'effectuer
sans interruption toutes les prises d'essais ncessaires aux Arrte :
divers dosages.
Article 1er. En application des dispositions de
Dans tous les cas, procder une ultime agitation
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
mnage de l'chantillon avant chaque prlvement.
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
Effectuer les prises d'essais soit par pese, soit en
l'acidit titrable dans le lait sec.
volume. L'expression des rsultats en volume de lait ou en
masse de lait se fera en connaissant la masse volumique
de l'chantillon de lait. Art. 2. Pour la dtermination de l'acidit titrable dans
le lait sec, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
Toutes les prises d'essais en volume doivent tre rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet,
effectues 20 C avec de la verrerie convenable gradue doivent employer la mthode jointe en annexe.
cette temprature.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.

Arrt du 4 Moharram 1437 correspondant au 18


Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
dtermination de l'acidit titrable dans le lait sec.
populaire.

Le ministre du commerce, Fait Alger, le 4 Moharram 1437 correspondant au 18


octobre 2015.
Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436
correspondant au 14 mai 2015, modifi, portant Bakhti BELAB.
nomination des membres du Gouvernement ;

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, ANNEXE


modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; METHODE DE DETERMINATION
DE L'ACIDITE TlTRABLE DANS LE LAIT SEC
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; 1. Objet et domaine d'application :

Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kada La prsente mthode a pour objet de dfinir une
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif technique pratique de dtermination de l'acidit titrable
l'valuation de la conformit ; dans tous les types de lait sec.

89
21 Moharram 1437
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 4 novembre 2015

2. Dfinition : 5.2 Burette, gradue 0,1 ml, avec une prcision de


0,05 ml.
Acidit titrable du lait sec : nombre de millilitres d'une
solution d'hydroxyde de sodium 0,1 mol/l ncessaire 5.3 Pipettes, de 2 ml de capacit.
pour neutraliser, en prsence de phnolphtaline, une
quantit de lait reconstitu correspondant 10g de solide
5.4 Eprouvettes gradues, de 50 ml de capacit.
non gras, jusqu' apparition d'une coloration rose.

5.5 Fioles coniques, col rod, de 100 ml ou de 150 ml


3. Principe :
de capacit. munies de bouchons en verre rods.

Prparation du lait reconstitu par addition d'eau une


prise d'essai de lait sec correspondant exactement 5 g de 6. chantillonnage :
solide non gras. Titrage avec une solution d'hydroxyde de
sodium 0,1 mol/l, en utilisant de la phnolphtaline L'chantillonnage se fait dans des conditions
comme indicateur et du sulfate de cobalt (II) comme appropries.
solution colore de rfrence. Multiplication du nombre
de millilitres utiliss pour le titrage par le facteur 2, de
7. Mode opratoire :
faon obtenir le nombre de millilitres pour 10g de solide
non gras.
La quantit de solution d'hydroxyde de sodium 7.1 Prparation de l'chantillon pour essai :
ncessaire est en fonction de la quantit de substances
tampons prsente l'tat naturel dans le produit et de Transvaser l'chantillon dans un rcipient propre et sec
l'acidit ou de l'alcalinit apparue ou ajoute. (muni d'un couvercle tanche l'air), d'une capacit
d'environ le double du volume de l'chantillon.
4. Ractifs :
Fermer immdiatement le rcipient et mlanger
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique soigneusement le contenu au moyen d'agitations et de
reconnue. L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou retournements rpts du rcipient. Eviter autant que
dminralise, dbarrasse du dioxyde de carbone par possible d'exposer l'chantillon l'air au cours de ces
bullition durant 10 min avant l'utilisation. oprations, afin de rduire le plus possible l'adsorption
d'eau.

4.1 Hydroxyde de sodium, solution titre, c(NaOH) =


0,1 0,000 2 mol/l. 7.2 Prise d'essai :

4.2 Solution colore de rfrence, Prendre deux fioles coniques (5.5) et introduire, dans
chacune d'elles, (500/a ) 0,01g de l'chantillon pour
essai (7.1).
Dissoudre 3g de sulfate de cobalt (II) heptahydrat
(CoSO4 . 7H2O) dans de l'eau et complter 100 ml.
a tant la teneur de l'chantillon en solide non gras,
4.3 Solution de phnolphtaline, exprime en pourcentage avec deux dcimales.

Dissoudre 2g de phnolphtaline dans 75 ml d'thanol Note - La teneur de l'chantillon en solide non gras peut
95 % (V/V) et ajouter 20 ml d'eau. Ajouter de la solution tre calcule en soustrayant de 100 la teneur en matire
d'hydroxyde de sodium (4.1) jusqu' ce qu'une goutte grasse et la teneur en eau.
provoque une faible coloration rose, et complter 100 ml
avec de l'eau. 7.3 Dtermination :

5. Appareillage : 7.3.1 Prparer le lait reconstitu en ajoutant 50 ml d'eau,


environ 20 C la prise d'essai (7.2) et en agitant
5.1 Balance analytique, vigoureusement. Laisser reposer environ 20 min.

90
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 19

7.3.2 Ajouter l'une des fioles coniques, 2 ml de la


solution colore de rfrence (4.2) pour avoir un tmoin
de couleur, et mlanger par agitation lgre.

Note - Si l'on a une srie de dterminations effectuer


sur des produits similaires, ce tmoin de couleur pourra
tre utilis pour toute la srie. Cependant, il ne doit pas
tre utilis plus de 2 h aprs sa prparation.

7.3.3 Ajouter la seconde fiole conique, 2 ml de la


solution de phnolphtaline (4.3) et mlanger par agitation
lgre.

7.3.4 Titrer le contenu de la seconde fiole conique par


addition, l'aide de la burette (5.2), en agitant, de la
solution d'hydroxyde de sodium (4.1), jusqu' obtention
d'une faible couleur rose semblable celle du tmoin de
couleur et persistant durant environ 5 secondes. La dure
du titrage ne doit pas dpasser 45 secondes.

Noter le volume de la solution d'hydroxyde de sodium


utilis en millilitres 0,05 ml prs.

8. Expression des rsultats :

8.1 Mode de calcul et formule :

L'acidit titrable est gale :

2xV

o V est le volume, en millilitres, de la solution


d'hydroxyde de sodium (4.1), utilis pour le titrage
(7.3.4).

Exprimer le rsultat avec une dcimale.

8.2 Rptabilit :

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,


effectues simultanment ou rapidement l'une aprs l'autre
par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0,4 ml de
solution d'hydroxyde de sodium 0,1 mol/l pour 10g de
solide non gras.

91
RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE


CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais


et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES


PHYSICO-CHIMIQUES RELATIVES AUX VIANDES
ET PRODUITS CARNS
Sommaire
1. Arrt du 19 Octobre 2005 rendant obligatoire une mthode de Dtermination
01
de l'humidit de la viande et des produits de la viande. (JO n 01 - 2006)

2. Arrt du 15 Janvier 2006 rendant obligatoire une mthode de mesurage du pH


04
de la viande et des produits de la viande. (JO n 23 - 2006)

3. Arrt du 25 Dcembre 2005 rendant obligatoire une mthode dchantillonnage


et de prparation de lchantillon pour lessai de la viande et des produits de la 07
viande. (JO n 27 - 2006)

4. Arrt du 21 Fvrier 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la


teneur en phosphore totale de la viande et des produits de la viande. (JO n 27 - 2006) 09

5. Arrt du 26 Avril 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de


la teneur en matire grasse totale de la viande et des produits de la viande. 12
(JO n 33 - 2006)

6. Arrt du 26 Avril 200 6 rendant obligatoire une mthode de dtermination de


la teneur en azote totale de la viande et des produits de la viande. (JO n 37 - 2006) 15

7. Arrt du 29 Mars 2006 r endant obl igatoire une mthode de dtermination de l a


19
teneur en nitrate dans la viande et les produits de la viande. (JO n 43 - 2006)

8. Arrt du 29 Mars 200 6 r endant obl igatoire une m thode de d termination de l a


teneur en nitrites dans la viande et les produits de la viande. (JO n 43 - 2006) 23

9. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la


teneure en azote basique volatil total dans les produits de la pche. 26
(JO n 58 - 2006)

10. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la


teneur en histamine dans les produits de la pche par chromatographie liquide 28
haute performance. (JO n 58 - 2006)

11. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de recherche


et didentification des substances anabolisantes dans la viande et les produits de la 30
viande. (JO n 59 - 2006)

12. Arrt du 12 Novembre 2014 rendant obligatoire la mthode de dtermination de


la teneur en hydroxyproline dans les viandes et les produits base de viande. 33
(JO n 69 - 2014)
13. Arrt du 23 N ovembre 2014 rendant obl igatoire la mthode d e r echerche des
37
polyphosphates dans les viandes et les produits base de viande. (JO n 12 - 2015)

14. Arrt du 25 Mars 2014 r endant obl igatoire la m thode de d tection des agents
colorants dans les viandes et les produits base de viande par chromatographie en 40
couche mince. (JO n 22 - 2015)
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 8 Dhou El Hidja 1426
8 janvier 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 16 Ramadhan 1426 correspondant au 19


octobre 2005 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de lhumidit de la viande et des
produits de la viande.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie El
Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de lhumidit de la viande et des produits
de la viande.
Art. 2 Pour la dtermination de lhumidit de la
viande et des produits de la viande, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3 Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 16 Ramadhan 1426 correspondant au
19 octobre 2005.
Lachemi DJAABOUBE.

01
8 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 13
8 janvier 2006

ANNEXE 6. MODE OPERATOIRE


METHODE DE DETERMINATION 6.1 Prparation de l'chantillon
DE LHUMIDITE DE LA VIANDE
ET DES PRODUITS DE LA VIANDE Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
broyages dans le hachoir (4.1) et en le mlangeant.
1. DEFINITION Introduire l'chantillon dans un flacon tanche rempli
compltement et le conserver de faon viter sa
Humidit des viandes et produits base de viande :
dtrioration et tout changement dans sa composition.
perte de masse obtenue conformment aux conditions
Analyser l'chantillon aussi rapidement que possible, mais
opratoires dcrites ci-aprs. L'humidit s'exprime en
toujours dans les 24 heures.
pourcentage en masse.

2. PRINCIPE 6.2 Prise d'essai


Aprs formation d'un mlange homogne de la prise
Scher la capsule (4.2) contenant une quantit de sable
d'essai avec du sable et de l'thanol, et prsechage de ce
(3.1) gale trois ou quatre fois la masse de la prise
mlange sur un bain d'eau, dessiccation 103 2 C
d'essai et la baguette en verre (4.3) pendant 30 min dans
jusqu' masse constante.
l'tuve (4.4) rgle 103 2 C.
3. REACTIFS
Aprs refroidissement de l'ensemble dans le
3.1 Sable. Utiliser la fraction de sable qui passe dessiccateur (4.6) jusqu' la temprature ambiante, peser
travers un tamis de 1,4 mm d'ouverture de maille, et qui 0,001 g prs.
reste sur un tamis de 250 m.
Laver le sable l'eau courante, puis le faire bouillir dans Transvaser de 5 10 g de l'chantillon dans la capsule
de l'acide chlorhydrique, 20 = 1,19 g/ml, dilu (1+1), et peser nouveau 0,001 g prs.
pendant 30 min, en remuant continuellement. Rpter
cette opration avec une nouvelle portion d'acide, jusqu' 6.3 Dtermination
ce que l'acide ne vire plus au jaune aprs bullition.
Laver alors le sable avec de l'eau distille jusqu' ce que Ajouter 5 10 ml d'thanol (3.2), selon la masse de la
la recherche des chlorures donne un rsultat ngatif. prise d'essai, et remuer la masse au moyen de la baguette
Scher le sable une temprature comprise entre 150 et en verre (4.3).
160 C et le conserver dans un flacon hermtiquement
ferm. Placer la capsule et son contenu sur le bain d'eau (4.5),
3.2 Ethanol , au moins 95% (V/V). rgl une temprature comprise entre 60 et 80 C, de
manire viter les projections, et maintenir le chauffage
4. APPAREILLAGE jusqu' ce que l'thanol se soit vapor ; agiter de temps
en temps.
4.1 Hachoir viande, type de laboratoire, muni d'une
plaque dont les trous ont un diamtre n'excdant pas 4 Chauffer la capsule et son contenu pendant 2 h dans
mm. l'tuve (4.4) rgle 103 2 C. Retirer la capsule et son
4.2 Capsule plate, en porcelaine ou en mtal (par contenu de l'tuve et la placer dans le dessiccateur (4.6).
exemple, en nickel, en aluminium ou en acier inoxydable),
de 60 mm de diamtre minimal et d'environ 25 mm de Laisser refroidir la capsule et son contenu jusqu' la
hauteur. temprature ambiante et peser 0,001 g prs.
4.3 Fine baguette en verre, aplatie une extrmit et
de longueur lgrement suprieure au diamtre de la Rpter les oprations de chauffage en tuve, de
capsule. refroidissement et de pese jusqu' ce que les rsultats de
deux peses conscutives, spares par un chauffage de 1
4.4 Etuve, chauffage lectrique, rglable 103 2 C. h, ne diffrent pas de plus de 0,l % de la masse de la prise
d'essai.
4.5 Bain d'eau.
4.6 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
efficace. prpar.
4.7 Balance analytique.
7. EXPRESSION DES RESULTATS
5. ECHANTILLON
7.1 Mode de calcul et formule
5.1 Utiliser un chantillon reprsentatif initial d'au
moins 200g, prlev selon la mthode dchantillonnage L'humidit de l'chantillon w en pourcentage en
et de prparation de lchantillon pour lessai de la viande masse, est gale :
et des produits de la viande.
m1m2
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter sa w= x 100%
dtrioration et tout changement dans sa composition. m1 m0

02
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 8 Dhou El Hidja 1426
8 janvier 2006

O :

m0 est la masse, en grammes, de la capsule, de la


baguette et du sable;

m1 est la masse, en grammes, de la capsule, de la


baguette, du sable et de la prise d'essai, avant schage;

m2 est la masse, en grammes, de la capsule, de la


baguette, du sable et de la prise d'essai, aprs schage.

Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des


deux dterminations, si les conditions de rptabilit (voir
7.2) sont remplies.

Noter le rsultat avec une dcimale.

7.2 Rptabilit

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,


effectues simultanment, ou rapidement l'une aprs
l'autre par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
0,5g d'humidit pour 100 g d'chantillon.

03
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23 13 Rabie El Aouel 1427
18 12 avril 2006

MINISTERE DU COMMERCE Note :

Arrt du 15 Dhou El Hidja 1426 correspondant au 15 Du fait du taux excessivement lev dlectrolytes dans
janvier 2006 rendant obligatoire la mthode de la phase acqueuse de nombreux produits base de viande,
mesurage du PH de la viande et des produits de et du fait que, dautre part, le PH-mtre est talonn avec
la viande. des solutions tampons faible taux dlectrolytes, la
valeur mesure ne peut pas, en gnral, tre considre
comme la valeur thorique du PH.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie 2. PRINCIPE
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant Mesurage de la diffrence de potentiel entre une
nomination des membres du Gouvernement ; lectrode en verre et une lectrode de rfrence plonges
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, dans un chantillon de viande ou de produit base de
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la viande.
rpression des fraudes ;
3. LIQUIDES DE NETTOYAGE
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions 3.1 Ethanol, 95% (V/V).
du ministre du commerce ;
3.2 Oxyde dithylique , satur deau.
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
3.3 Eau distille ou de puret quivalente.
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au 4. APPAREILLAGE
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la 4.1 PH-mtre, gradu en 0,1 unit PH ou en units plus
consommation des produits carns cuits ; petites, et permettant les lectures avec une prcision de
0,05 unit PH. Si le PH-mtre nest pas quip dun
Arrte : systme de correction de la temprature, lchelle doit
sappliquer des mesurages 20 C.
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier Lappareil doit tre suffisamment protg des effets
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a induits provenant des charges lectriques externes pendant
pour objet de rendre obligatoire la mthode de mesurage les mesurages.
du PH de la viande et des produits de la viande.
4.2 Electrode en verre, on peut utiliser des lectrodes
Art. 2 Pour le mesurage du PH de la viande et des en verre de diffrentes formes gomtriques : sphriques,
produits de la viande, les laboratoires du contrle de la coniques, cylindriques ou en forme daiguilles.
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires Conserver llectrode en verre dans leau de telle faon
agrs cet effet doivent employer la mthode dcrite en que sa membrane soit immerge.
annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le 4.3 Electrode de rfrence, par exemple lectrode au
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. calomel ou lectrode au chlorure dargent contenant une
solution sature de chlorure de potassium.
Art. 3 Le prsent arrt sera publi au Journal A dfaut dinstructions particulires, conserver
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et llectrode en verre dans une solution sature de chlorure
populaire.
de potassium.
Fait Alger, le 15 Dhou El Hidja 1426 correspondant
Note :
au 15 janvier 2006.
Lachemi DJAABOUBE. On peut runir llectrode en verre et llectrode de
rfrence en un systme dlectrodes associes. A dfaut
dinstructions particulires, conserver celles-ci dans de
ANNEXE leau distille.
METHODE DE MESURAGE DU PH DE LA
4.4 Hachoir viande, type de laboratoire, muni d'une
VIANDE ET DES PRODUITS DE LA VIANDE
plaque perfore dont les trous ne dpassent pas 4 mm de
diamtre.
1. DEFINITION
5. ECHANTILLON
PH des viandes et produits base de viande :
Rsultat des mesurages effectus selon la mthode 5.1 Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
dcrite ci-dessous. moins 200g.

04
13 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23
12 avril 2006 19

5.2 dterminer immdiatement le PH ou conserver Exprimer le PH moyen 0,1 unit de PH prs.


lchantillon de manire rduire au minimum toute
variation de son PH. 6.7.2 Rptabilit :

6. MODE OPERATOIRE DES PRODUITS QUI La diffrence entre les valeurs extrmes rsultant des
ONT ETE HOMOGENEISES trois mesurages ne doit pas dpasser 0,15 unit de PH.

6.1 Prparation de l'chantillon pour essai 7. MODE OPERATOIRE POUR LES PRODUITS
Except dans les cas dessais non destructifs, NON HOMOGENEISES :
homogniser lchantillon de laboratoire en le faisant
passer deux fois dans le hachoir viande (4.4) et mlanger 7.1 Prise dessai :
(voir 6.6).
Prlever une quantit de lchantillon pour laboratoire
6.2 Prise d'essai suffisante pour permettre de mesurer le PH en plusieurs
points.
Prlever une quantit de lchantillon pour essai,
suffisamment pour immerger ou enrober les lectrodes. 7.2 Etalonnage du PH-mtre :
6.3 Etalonnage du PH-mtre Voir (6.3).
Etalonner le PH-mtre en utilisant une solution tampon
de PH exactement connu et aussi proche que possible du 7.3 Mesurage :
PH de la solution dterminer (voir 8) la temprature de
mesurage. 7.3.1 Lorsquil sagit dune prise dessai de consistance
ferme, mnager une cavit lendroit o est effectu le
Si le PH-mtre ne comprend pas de systme de mesurage, de faon pouvoir introduire llectrode en
correction de temprature, la temprature de la solution verre sans la casser.
tampon doit tre amene 20 2 C.
7.3.2 Reprendre les mmes oprations telles que
6.4 Mesurage : dcrites aux points (6.4.1) et (6.4.2).
6.4.1 Introduire les lectrodes dans la prise dessai et
rgler le systme de correction de la temprature du 7.3.3 Recommencer le mesurage au mme endroit.
PH-mtre la temprature de la prise dessai. Sil nexiste
pas de systme de correction de temprature, la 7.3.4 Sil est jug utile de connatre les diffrences de
temprature de la prise dessai doit tre amene 20 2 PH entre plusieurs points dun produit, recommencer les
C. mesurages en des points diffrents, dont le nombre doit
tre en fonction de la nature et de la taille de lchantillon.
6.4.2 Mesurer en suivant la technique propre au
PH-mtre utilis. Lire le PH directement sur lchelle de 7.4 Nettoyage des lectrodes
lappareil, 0,05 unit PH prs, lorsquune valeur
constante a t obtenue. Voir (6.5)
6.4.3 Effectuer trois dterminations sur le mme
chantillon pour essai. 7.5 Expression des rsultats

6.5 Nettoyage des lectrodes : 7.5.1 Calcul


Nettoyer les lectrodes en les essuyant successivement
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
avec des morceaux douate imbibs doxyde dithylique
deux valeurs obtenues en un mme point, si les conditions
(3.2), puis dthanol (3.1).
de rptabilit (7.5.2) sont remplies. Exprimer le PH
Enfin, les laver leau (3.3) et les conserver selon les moyen pour chaque point 0,1 unit de PH prs.
indications donnes en (4.2) et (4.3).
7.5.2 Rptabilit :
6.6 Remarque sur le mode opratoire :
La diffrence entre les deux valeurs obtenues en un
Les chantillons de produits trs secs peuvent, en plus,
mme point ne doit pas dpasser 0,15 unit de PH.
du traitement normal (voir 6.1), tre homogniss avec
une masse deau gale dans un appareil mlangeur pour
laboratoire, avant de procder au mesurage du PH. 8. NOTE SUR LE MODE OPERATOIRE

6.7 Expression des rsultats : Les solutions tampons suivantes peuvent tre utilises
pour ltalonnage.
6.7.1 Calcul :
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des Pour la prparation de ces solutions, tous les ractifs
trois valeurs, si les conditions de rptabilit (voir 6.7.2) doivent tre de qualit analytique. Utiliser de leau
sont remplies. distille ou de leau de puret quivalente.

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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23 13 Rabie El Aouel 1427
20 12 avril 2006

8.1 Solution tampon PH 4,00 20 C, prpare


comme suit :

Peser, 0,001 g prs, 10,211 g dhydrognophtalate de


potassium KHC6 H4 (COO)2 sch pralablement
125 C jusqu masse constante, et le dissoudre dans
leau.
Complter 1.000 ml.
Cette solution a un PH de 4,00 10 C et de 4,01
30 C.

8.2 Solution tampon PH 5,45 20 C, prpare


comme suit :
Mlanger 500 ml dune solution aqueuse 0,2 N dacide
citrique avec 375 ml dune solution aqueuse dhydroxyde
de potassium 0,2 N.
Cette solution a un PH de 5,42 10 C et de 5,48
30 C.

8.3 Solution tampon PH 6,88 20 C, prpare


comme suit :

Peser, 0,001 g prs, 3,402 g de dihydrognophosphate


de potassium (KH2 PO4) et 3,549 g
dhydrognophosphate disodique (Na2 HPO4) et les
dissoudre dans leau, complter 1.000 ml.
Cette solution a un PH de 6,92 10 C et de 6,85
30 C.

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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27 27 Rabie El Aouel 1427
12 26 avril 2006

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423


correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions de


larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode
dchantillonnage et de prparation de lchantillon pour
MINISTERE DU COMMERCE lessai de la viande et des produits de la viande.

Arrt du 23 Dhou El Kaada 1426 correspondant au Art. 2. Pour lchantillonnage et la prparation de


25 dcembre 2005 rendant obligatoire la mthode lchantillon pour lessai de la viande et des produits de la
dchantillonnage et de prparation de viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
lchantillon pour lessai de la viande et des rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
produits de la viande. doivent employer la mthode dcrite en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
Le ministre du commerce, laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
nomination des membres du Gouvernement ; populaire.

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Fait Alger, le 23 Dhou El Kaada 1426 correspondant
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la au 25 dcembre 2005.
rpression des fraudes ; Lachemi DJAABOUBE.

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27 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
26 avril 2006 13

ANNEXE 2.1.2 Matriel et rcipients pour les units


chantillonner en vue de lanalyse chimique.
Mthode dchantillonnage et de prparation
des chantillons pour lessai de la viande
Le matriel dchantillonnage et les rcipients pour
et des produits de la viande
lunit chantillonner doivent tre secs et propres et ne
doivent pas influencer la composition chimique du
1. Domaine dapplication
produit.
1.1 La prsente mthode donne des instructions
gnrales et spcifie les techniques suivre pour effectuer 2.1.3 Matriel et rcipients pour les units
un prlvement lmentaire partir de viande et produits chantillonner en vue de lanalyse sensorielle.
base de viande.
Le matriel dchantillonnage et les rcipients pour
1.2 Une distinction est faite entre les mthodes lunit chantillonner doivent tre secs et propres, et ne
dchantillonnage, selon les catgories de produits doivent pas transmettre de got ou dodeur au produit.
suivantes :

a) produits ou lots de viande et produits base de 2.2 Nombre dunits chantillonner prlever :
viande prpars et emballs en units de dimensions
quelconques ou viande en morceaux ne pesant pas plus de Le nombre dunits chantillonner de faon obtenir
2 kg ; un chantillon lmentaire, aussi reprsentatif que
possible du lot, doit tre en accord avec le plan
b) carcasses, pices de carcasses (par exemple, dchantillonnage spcifi dans le contrat ou bien accept
morceaux de viande frais ou congels, viande dsosse par les parties concernes.
frache ou congele, ctes de buf ou quartiers, carcasses
de mouton) et viande dcoupe mcaniquement.
Si diffrents types dessais ( savoir chimiques,
physiques et sensoriels) doivent tre raliss, des units
1.3 Le volume et la valeur commerciale de ces produits
dchantillonnage spares doivent tre prleves pour
peuvent ncessiter lemploi dunits secondaires
chaque type dessai.
chantillonner, en utilisant seulement une (des) partie(s)
de chacune des units chantillonner, en tenant compte
du but pour lequel ces units sont dmandes. 2.3 Mthode dchantillonnage :

2. Mthodes dchantillonnage
2.3.1 Viande ou produits base de viande prpars
ou emballs en units de dimensions quelconques ou
2.1 Matriel dchantillonnage et rcipients pour
viande en morceaux ne pesant pas plus de 2 kg :
unit chantillonner :
Prlever des units ou morceaux entiers constituant des
2.1.1 Conditions gnrales :
units lmentaires chantillonner. Prlever le nombre
requis dunits lmentaires chantillonner partir de
Les matriaux des rcipients entrant directement en
chaque lot selon le plan dchantillonnage indiqu au
contac avec les units chantillonner doivent tre
point 2.2.
tanches leau et la graisse, insolubles et non
absorbants.
2.3.2 Carcasses, viande en morceaux pesant plus de 2
Les rcipients doivent tre de capacit et de forme
kg et viande dcoupe :
adaptes la taille des units chantillonner qui doivent
tre prleves.
Prlever le nombre requis dunits lmentaires
Si lon utilise des flacons, ceux-ci doivent tre bien chantillonner partir du lot, selon le plan
ferms laide dun bouchon en caoutchouc ou en matire dchantillonnage indiqu au point (1.2) et mettre celles-ci
plastique convenable, ou dun bouchon neuf de lige, ou de ct, soit pour prlever des units secondaires
par une capsule mtallique ou en matire plastique qui se chantillonner en vue dessais destructifs en laboratoire
visse. (par exemple examen chimique) soit pour des examens
non destructifs (par exemple examen visuel, sensoriel, au
Les bouchons doivent tre recouverts dune feuille en moyen de tampon douate).
matire inerte avant dtre adapts au rcipient qui
contient lchantillon. Les capsules qui se vissent doivent Un seul chantillon prlev partir dune carcasse ou
avoir un revtement en matire inerte tanche aux dune autre unit de viande de gros volume ne peut tre
liquides. reellement reprsentatif de la totalit. De mme, il est
Les matriaux et le matriel ne doivent pas influencer impossible danalyser lunit de viande entire. Par
les rsultats des examens effectus et doivent en consquent, la finalit pour laquelle les units
particulier rpondre aux spcifications appropries chantillonner (lementaires ou secondaires) sont
mentionnes aux points (2.1.2) (2.1.3.) Il peut tre prleves dterminera la technique suivre. Ainsi, en
ncessaire de diminuer laction de la lumire et/ou de gnral, des chantillons doivent tre prlevs comme
loxygne. suit :

08
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27 27 Rabie El Aouel 1427
14 26 avril 2006

a) les units secondaires chantillonner dcoupes, de Arrt du 22 Moharram 1427 correspondant au


masse comprise entre 500g et 1kg, et destines un 21 fvrier 2006 rendant obligatoire la mthode
examen chimique de laboratoire, doivent tre prleves, de dtermination de la teneur en phosphore total
quand cela est possible, partir dune surface dj coupe de la viande et des produits de la viande.
et de manire ne causer quun minimum de dommages ;
b) les units de matire grasse chantillonner (par Le ministre du commerce,
exemple, pour valuer les composs solubles dans les
matires grasses, tels que certains pesticides) doivent tre, Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
dans toute la mesure du possible, prleves partir de la El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005
matire grasse du rein ; portant nomination des membres du Gouvernement ;
c) les units chantillonner partir de lexsudat, par Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
exemple, pour les viandes rfrigres emballes sous vide, modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
doivent tre prleves soigneusement travers la pellicule la rpression des fraudes ;
ou aprs ouverture de lemballage, en utilisant des
seringues striles et des fioles ou flacons. Si la viande est
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
replace dans le lot, la remettre dans un nouvel emballage
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
sous vide.
du ministre du commerce ;
2.3.3 Temprature :
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
Relever la temprature dans chacun des lots correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
chantillonns dans la mesure o cette opration est prparation et de commercialisation des merguez ;
possible.
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethannia
2.4 Emballage des units chantillonner : 1420 correspondant au 29 septembre 1999 fixant les
rgles de prparation et de mise la consommation des
2.4.1 Viande ou produits base de viande prpars viandes haches la demande ;
ou emballs en units de dimensions quelconques, ou
viande en morceaux pesant moins de 2 kg : Vu larrt du 24 Rabie Ethanni 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
Si les units sont emballes dans un rcipient tanche applicables la composition et la consommation des
lair, aucun emballage complmentaire nest ncessaire. produits carns cuits ;
Sil nen est pas ainsi, emballer chaque unit
chantillonner dans un rcipient appropri qui est ensuite Arrte :
soigneusement ferm et scell.

2.4.2 Carcasses, pices de carcasses en morceaux Article 1er. En application des dispositions de
pesant plus de 2 kg et viande dcoupe : larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
Emballer chaque unit chantillonner dans un sac en pour objet de rendre obligatoire une mthode de
matire plastique appropri, qui est ensuite soigeusement dtermination de la teneur en phosphore total de la viande
ferm et scell. et des produits de la viande.

2.5 Transport et stockage des units Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en


chantillonner : phosphore total de la viande et des produits de la viande,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
Les units chantillonner doivent tre expdies au
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
laboratoire le plus rapidement possible aprs
employer la mthode dcrite en annexe du prsent arrt.
lchantillonage, tout en tant maintenues, durant ce
temps, la temprature de conservation du produit
concern. Toutefois, les units chantillonner de Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
produits qui ont t entreposs au froid doivent tre lorsquune expertise est ordonne.
transportes :
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
une temprature de 0 C 2 C si lon estime officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
quelles seront examines dans les 24 h ; populaire.
ou congeles une temprature infrieure 24C
dans les autres cas. Fait Alger, le 22 Moharram 1427 correspondant
au 21 fvrier 2006.
Des prcautions doivent tre prises pour viter une
exposition directe la lumire solaire pendant le transport.
Les units chantillonner doivent arriver au laboratoire
non endommages, avec des scells en bon tat. Lachemi DJAABOUBE.

09
27 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
26 avril 2006 15

ANNEXE 4. APPAREILLAGE :
METHODE DE DETERMINATION
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
DE LA TENEUR EN PHOSPHORE TOTAL
DE LA VIANDE ET DES PRODUITS
DE LA VIANDE. 4.1 Hachoir viande, du type laboratoire, muni d'une
plaque perfore dont les trous ont un diamtre maximal de
4 mm.
1 . DEFINITION :
4.2 Balance analytique de prcision 0,001g.
On entend par teneur en phosphore total des viandes
et produits base de viande la quantit de phosphore 4.3 Ballon de Kjeldahl, 250 ml ou fiole col long et
dtermine conformment la mthode dcrite ciaprs. fond rond.

La teneur en phosphore s'exprime en pourcentage en 4.4 Systme de chauffage, permettant de chauffer le


masse de pentoxyde de phosphore. ballon de Kjeldahl (4.3) en position incline de telle
manire que la source de chaleur n'atteigne que la partie
du ballon situe au-dessous du niveau du liquide.
2. PRINCIPE :

Minralisation de la prise d'essai par de l'acide 4.5 Dispositif d'aspiration des vapeurs d'acide libres
sulfurique et de l'acide nitrique. pendant l'attaque chimique.

Prcipitation du phosphore sous forme de 4.6 Filtre en verre fritt ( 10 16 m).


phosphomolybdate de quinoline. Schage et pese du
prcipit. 4.7 Etuve chauffage lectrique, munie d'un rglage de
temprature, capable de maintenir une temprature de
260C 20C.
3. REACTIFS :

Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique. 4.8 Fiole filtrer, 500 ml.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de l'eau de
puret quivalente. 4.9 Dessiccateur, garni d'un dshydratant efficace.

3.1 Acide sulfurique (P20 = 1,84 g/ml). 4.10 Pipette Pasteur.

3.2 Acide nitrique (P20 = 1,40 g/ml). 4.11 Rfrigrant eau.

3.3 Ractif prcipitant.


4.12 Bcher ou fiole conique de 250 ml
3.3.1 Dissoudre 70g de molybdate de sodium dihydrat
(Na2MoO4, 2H2O) dans 150 ml d'eau. 5. MODE OPERATOIRE :

3.3.2 Dissoudre 60g d'acide citrique monohydrat [CH2 5.1 Prparation de lchantillon pour essai :
(CO2H).COH(CO2H).CH2(CO2H).H2O] dans 150 ml
d'eau et ajouter 85 ml d'acide nitrique (3.2). Oprer partir d'un chantillon reprsentatif de 200 g
au minimum. Le rendre homogne en le mlangeant aprs
3.3.3 Ajouter progressivement, en agitant, la solution au moins deux passages dans le hachoir (4.1).
(3.3.1) la solution (3.3.2).
L'introduire dans un flacon tanche, que l'on remplit
3.3.4 A 100 ml d'eau, ajouter 35 ml d'acide nitrique compltement, et assurer sa conservation de faon viter
concentr (3.2), puis 5 ml de quinoline distille. sa dtrioration et tout changement dans sa composition.
Ajouter progressivement cette solution au mlange
(3.3.3) en agitant. Laisser reposer pendant 24 h la Analyser l'chantillon aussi vite que possible, mais
temprature ambiante. toujours dans les 24 h.
Filtrer, ajouter 280 ml d'actone et complter
1000 ml avec de l'eau distille. 5.2 PRISE D'ESSAI :

Conserver le ractif l'obscurit dans un flacon en Peser, 0,001 g prs, dans le ballon de Kjeldahl (4.3),
matire plastique bien bouch. environ 5 g de l'chantillon prpar.

10
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27 27 Rabie El Aouel 1427
16 26 avril 2006

5.3 Minralisation : Note :


Dans le cas o la masse du prcipit serait au moins
Ajouter 20 ml d'acide nitrique (3.2) et quelques billes de
gale 25 mg, recommencer les oprations avec une prise
verre ou rgulateurs d'bullition.
d'essai moindre.
Placer le ballon de Kjeldahl en position incline ( un Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
angle d'environ 40 par rapport la verticale) sur le prpar.
systme de chauffage (4.4). Chauffer pendant 5 mn,
laisser refroidir, puis ajouter 5 ml d'acide sulfurique (3.1). 5.5 Essai blanc :

Chauffer d'abord doucement jusqu' cessation de la Effectuer un essai blanc en suivant le mme mode
formation de mousse. Chauffer ensuite un peu plus fort. opratoire et en employant les mmes quantits de tous les
Ds que la carbonisation commence se produire, ajouter ractifs, l'exclusion de la prise d'essai.
encore un peu d'acide nitrique l'aide dune pipette
Pasteur (4.11) et continuer le chauffage. Recommencer 6.EXPRESSION DES RESULTATS
cette opration jusqu' cessation de la production de
fumes brunes. 6.1 Mode de calcul et formule

Enfin, chauffer le liquide jusqu' apparition de fumes La teneur en phosphore total de l'chantillon, en
blanches. pourcentage en masse de pentoxyde de phosphore est
gale :
Refroidir, ajouter avec prcaution 15 ml d'eau et faire
100 M
bouillir doucement pendant 10 mn, en rduisant autant 0,03207 x M x = 3,207
que possible l'vaporation de l'eau (par exemple, en E E
plaant sur l'orifice du ballon de Kjeldahl un morceau de
O :
verre piriforme).
E : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
Le volume total doit tre alors de 50 ml.
M : est la masse, en grammes, du prcipit de
Transvaser quantitativement le liquide dans un bcher phosphomolybdate de quinoline (5.4).
ou une fiole conique de 250 ml (4.12). Rincer le ballon de
Kjeldahl plusieurs reprises avec de l'eau. Joindre les Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
liquides de lavage au contenu de la fiole. Ajouter 10 ml deux dterminations, si les conditions de rptabilit sont
d'acide nitrique. remplies (6.2).

5.4 Dtermination : Exprimer le rsultat avec deux dcimales.

Ajouter au liquide contenu dans la fiole conique ou le 6.2 Rptabilit :


bcher 50 ml du ractif prcipitant (3.3).

Recouvrir la fiole avec un verre de montre et laisser La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
bouillir une minute sur une plaque chauffante, place sous effectues simultanment. ou rapidement l'une aprs
l'appareil d'aspiration (4.5). l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0,02 g
de pentoxyde de phosphore pour 100 g d'chantillon.
Laisser refroidir temprature ambiante en agitant trois
quatre fois au cours du refroidissement. 7. NOTE SUR LE MODE OPERATOIRE :

Filtrer quantitativement sous pression rduite sur un La minralisation peut tre effectue par incinration en
filtre en verre fritt (4.6), pralablement sch modifiant en consquence les paragraphes (5.2) et (5.3) et
pendant 30 mn une temprature de 250C puis peser 1 en reprenant les cendres par 15 ml d'acide nitrique
mg prs, aprs refroidissement dans le dessiccateur (4.9). concentr (3.2). Utiliser un agitateur pour faciliter la
dissolution. Transvaser quantitativement le liquide dans
Laver le prcipit cinq fois sur le filtre avec des une fiole conique de 250 ml. Laver la capsule et l'agitateur
portions de 25 ml d'eau distille. plusieurs reprises avec de l'eau. Joindre les liquides de
lavage au contenu de la fiole. Complter 50 ml.
Scher dans l'tuve (4.7) une temprature de 260C
20C pendant 1 heure.
Adapter sur la fiole un rfrigrant ascendant (4.10) et
Laisser refroidir dans le dessiccateur (4.9), puis maintenir bullition pendant 1/2 h. Laisser refroidir et
effectuer la pese, 0,001 g prs. procder selon le paragraphe (5.4).

11
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33 23 Rabie Ethani 1427
30 21 mai 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant


au 26 avril 2006 rendant obligatoire la mthode
de dtermination de la teneur en matire grasse
totale de la viande et des produits de la viande.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en matire grasse totale de la
viande et des produits de la viande.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur de la


matire grasse totale de la viande et des produits de la
viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode dcrite en annexe.

Cette mthode doit tre galement utilise par le


laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant
au 26 avril 2006.
Lachemi DJABOUBE.

12
23 Rabie Ethani 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33
21 mai 2006 31

ANNEXE 4.8 Etuve chauffage lectrique, rglable 103 2C.


4.9 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant
METHODE DE DETERMINATION
efficace.
DE LA TENEUR EN MATIERE GRASSE
TOTALE DE LA VIANDE ET DES PRODUITS 4.10 Balance analytique de prcision 0,001 g.
DE LA VIANDE
4.11 Papier filtre plis, filtration moyenne.
1. DEFINITION
5. ECHANTILLON
La teneur en matire grasse totale des viandes et
produits base de viande s'exprime en pourcentage en 5.1 Utiliser un chantillon reprsentatif initial d'au
masse. moins 200 g.
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter sa
2. PRINCIPE dtrioration et tout changement dans sa composition.
Traitement de l'chantillon avec de l'acide
chlorhydrique dilu bouillant pour librer les fractions 6. MODE OPERATOIRE
lipidiques incluses et lies. 6.1 Prparation de l'chantillon
Filtration de la masse rsultante et, aprs schage, Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
extraction, au moyen de n-hexane ou d'ther de ptrole, de broyages dans le hachoir (4.1) et en le mlangeant.
la matire grasse retenue sur le filtre. Introduire l'chantillon dans un flacon tanche rempli
compltement et le conserver de faon viter sa
3. REACTIFS dtrioration et tout changement dans sa composition ;
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique Analyser l'chantillon aussi rapidement que possible,
reconnue. L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de mais toujours dans les 24 h. qui suivent
l'eau de puret au moins quivalente. lhomognisation.

3.1 Solvant d'extraction, n-hexane ou ther de ptrole, 6.2 Prise d'essai


distillant entre 40C et 60C et ayant un indice de brome
infrieur 1. Le rsidu d'vaporation complte, dans le Selon la teneur en matire grasse suppose, peser
cas des deux solvants, ne doit pas dpasser 0,002g pour 0,001 g prs, de 3 5 g de l'chantillon broy et les
100 ml. introduire dans la fiole conique de 250 ml (4.2).

3.2 Acide chlorhydrique, solution 4 N environ. 6.3 Dtermination

Diluer 100ml d'acide chlorhydrique concentr Scher pendant 1 h l'tuve (4.8) rgle 103 2C, la
(p20 = 1,19g/ml) avec 200 ml d'eau, et mlanger. fiole de l'appareil d'extraction (4.6) contenant des
rgularisateurs d'bullition (3.4). Laisser refroidir la fiole
3.3 Papier de tournesol bleu. jusqu' la temprature ambiante dans le dessiccateur
(4.9) et peser 0,001 g prs.
3.4 Rgularisateurs d'bullition.
Ajouter, la prise d'essai, 50 ml d'acide chlorhydrique
4. APPAREILLAGE (3.2) et couvrir la fiole conique (4.2) avec un petit verre
de montre. Chauffer la fiole conique jusqu' ce que le
Matriel courant de laboratoire, et notamment : contenu commence bouillir; maintenir l'bullition
pendant 1 h et agiter de temps en temps. Ajouter 150 ml
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni d'eau chaude.
d'une plaque dont les trous ont un diamtre n'excdant pas
4 mm. Mouiller le papier filtre (4.11 ) dans un entonnoir avec
de l'eau et verser le contenu chaud de la fiole conique sur
4.2 Fiole conique, capacit 250 ml. le filtre. Bien laver la fiole et le verre de montre trois fois
avec de l'eau chaude et les scher l'tuve (4.8). Laver le
4.3 Verre de montre ou bote de Ptri, de 80 mm de papier filtre avec de l'eau chaude jusqu' ce que les
diamtre minimal. liquides de lavage ne modifient pas la couleur d'un papier
de tournesol bleu (3.3). Mettre le papier filtre sur un verre
4.4 Cartouche d'extraction, en papier filtre dgraiss. de montre ou dans une bote de Ptri (4.3) et scher
pendant 1 h l'tuve rgle 103 2C. Laisser refroidir.
4.5 Coton dgraiss. Rouler le papier filtre et l'insrer dans la cartouche
d'extraction (4.4). Enlever toute trace de matire grasse du
4.6 Appareil d'extraction continue ou semi-continue, verre de montre ou de la boite de Ptri en utilisant du
par exemple de type Soxhlet, avec une fiole d'extraction coton (4.5) humidifi avec le solvant d'extraction (3.1) et
d'environ 150 ml. mettre galement le coton dans la cartouche d'extraction.
Disposer la cartouche dans l'appareil d'extraction. Le
4.7 Bain de sable ou bain d'eau, chauff papier filtre doit tre manipul soit avec des pincettes
lectriquement, ou appareil similaire appropri. susceptibles d'tre rinces, soit avec les doigts gants de

13
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33 23 Rabie Ethani 1427
32 21 mai 2006

papier. Verser le solvant d'extraction dans la fiole sche 7 . EXPRESSION DES RESULTATS
de l'appareil d'extraction. Laver l'intrieur de la fiole
conique utilise pour l'attaque avec l'acide chlorhydrique, 7.1 Mode de calcul et formule
et le verre de montre la couvrant, avec une portion du
solvant d'extraction et l'ajouter dans la fiole d'extraction. La teneur en matire grasse totale de l'chantillon, en
La quantit totale de solvant doit tre d une fois et demie pourcentage en masse, est gale :
deux fois la capacit du tube d'extraction de l'appareil.
Adapter la fiole l'appareil d'extraction. Chauffer la fiole = (m2 m1) x 100
sur le bain de sable, le bain d'eau ou un appareil similaire m0
(4.7) pendant 4 h. o :
Aprs extraction, prendre la fiole contenant le liquide m0 est la masse, en grammes, de la prise d'essai ;
provenant de l'appareil d'extraction et liminer le solvant
par distillation, en utilisant par exemple le bain de sable ml est la masse, en grammes, de la fiole et des
ou le bain d'eau. rgularisateurs d'bullition ;
Laisser vaporer les dernires traces du solvant au bain m2 est la masse, en grammes, de la fiole des
d'eau en utilisant, si ncessaire, un courant d'air. rgularisateurs d'bullition et de la matire grasse aprs
Scher la fiole pendant 1 h I'tuve rgle 103 2C schage.
et, aprs refroidissement la temprature ambiante dans le
dessiccateur, peser 0,001 g prs. Rpter cette opration Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
jusqu' ce que les rsultats de deux peses successives, deux dterminations, si les conditions de rptabilit, (7.2)
spares par un chauffage dune heure, ne diffrent pas de sont remplies.
plus de 0,1% de la masse de la prise d'essai.
Noter le rsultat avec une dcimale.
S'assurer que l'extraction est acheve en prenant une
seconde fiole d'extraction et en procdant une extraction 7.2 Rptabilit
pendant une nouvelle priode de 1 h avec une portion
frache de solvant. L'accroissement de masse ne doit pas La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
excder 0,l % de la masse de la prise d'essai. effectues simultanment, ou rapidement l'une aprs
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon l'autre, par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
prpar. 0,5 g de matire grasse totale pour 100 g d'chantillon.

14
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37 8 Joumada El Oula 1427
18 4 juin 2006

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
METHODE DE DETERMINATION
Arrt du 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant DE LA TENEUR EN AZOTE TOTAL DE LA
au 26 avril 2006 rendant obligatoire la mthode VIANDE ET DES PRODUITS DE LA VIANDE
de dtermination de la teneur en azote total de la
viande et des produits de la viande.
1. DEFINITION
Le ministre du commerce,
Teneur en azote des viandes et des produits base
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant de viande : Quantit dazote correspondant lammoniac
nomination des membres du Gouvernement ; produit et dtermine dans les conditions spcifies
ci-aprs.
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 2. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions Attaque dune prise dessai par lacide sulfurique
du ministre du commerce ; concentr qui transforme lazote organique en ions
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417 ammonium, en prsence de sulfate de cuivre (II) comme
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de catalyseur; alcalinisation, distillation de lammoniac libr
prparation et de commercialisation des merguez ; dans un excs de solution dacide borique, titrage de
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420 lammoniac combin avec lacide borique par lacide
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de chlorhydrique et calcul, partir de lammoniac produit, de
prparation et de mise la consommation des viandes la teneur en azote de lchantillon.
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
3. REACTIFS
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
produits carns cuits ;
reconnue. Leau utilise doit tre de leau distille ou de
Arrte : leau de puret au moins quivalente.
Article 1er. En application des dispositions de
3.1 Sulfate de cuivre (II) pentahydrate (CuSO4.5H2O)
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de 3.2 Sulfate de potassium ( K2SO4 ) anhydre.
dtermination de la teneur en azote total de la viande et
des produits de la viande. 3.3 Acide sulfurique, p20 1,84 g/ml.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote 3.4 Hydroxyde de sodium, solution exempte de
total de la viande et des produits de la viande, les
carbonate, contenant environ 33 g dhydroxyde de sodium
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent (NaOH) pour 100 g de solution.
employer la mthode dcrite en annexe.
Dissoudre 500 g d'hydroxyde de sodium dans
Cette mthode doit tre galement utilise par le 1000 ml d'eau.
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.5 Acide borique, solution.
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. Dissoudre 40 g d'acide borique (H3BO3) dans de
l'eau et complter 1000 ml.
Fait Alger, le 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant
au 26 avril 2006. 3.6 Acide chlorhydrique, solution titre 0,l N, la
Lachemi DJAABOUBE. normalit tant connue avec quatre dcimales.

15
8 Joumada El Oula 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37
4 juin 2006 19

3.7 Indicateur, solution : indicateur mixte (rouge de 4.8 Balance analytique.


mthyle-bleu de mthylne), prpar par dissolution de
2g de rouge de mthyle et de 1g de bleu de mthylne 5. ECHANTILLON
dans 1000 ml d'thanol 95 % (V/V).
5.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins
Le changement de couleur de la solution d'indicateur a 200g.
lieu pour un pH de 5,4.
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter toute
Conserver la solution d'indicateur dans une bouteille dtrioration et tout changement dans sa composition. Les
fonce dans un endroit sombre et frais. agents de conservation, s'il y en a, ne doivent pas contenir
de composants azots en quantits mesurables.
3.8 Rgularisateurs d'bullition.
6. MODE OPERATOIRE
3.8.1 Pour l'attaque chimique
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Billes en verre, carbure de silicium ou clats de
porcelaine dure. Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger.
Garder l'chantillon dans un flacon ferm, tanche et
3.8.2 Pour la distillation
rempli compltement, et le conserver de faon viter
toute dtrioration et tout changement dans sa
Carbure de silicium ou morceaux de pierre ponce composition. Analyser l'chantillon ds que possible aprs
rcemment incinrs. l'homognisation, mais toujours dans les 24 h.

4. APPAREILLAGE 6.2 Prise d'essai

Matriel courant de laboratoire, et notamment : Placer quelques rgularisateurs d'bullition (3.8) dans le
matras de Kjeldahl (4.4), puis ajouter environ 15g du
4.1.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni d'une sulfate de potassium anhydre (3.2) et 0,5 g du sulfate de
plaque perfore dont les trous ont un diamtre ne cuivre(Il) (3.1).
dpassant pas 4 mm.
Peser, 0,001g prs, environ 2 g (ou 1,5g dans le cas
d'un chantillon trs gras) de l'chantillon pour essai (6.1)
4.1.2 Homognisateur.
sur un morceau de papier sulfuris (4.2).

4.2 Papier sulfuris, d'environ 9 cm x 6 cm. Introduire le papier sulfuris et la prise d'essai dans le
matras de Kjeldahl.
4.3 Burette, de 50 ml de capacit.
6.3 Dtermination
4.4 Matras de Kjeldahl, de 800 ml de capacit
maximale, muni, si ncessaire, d'un bouchon en verre Ajouter, dans le matras de Kjeldahl, 25 ml de l'acide
piriforme s'adaptant librement au sommet du col. sulfurique (3.3). Mlanger doucement la solution par
rotation. Le cas chant, un bouchon piriforme en verre
peut tre introduit dans le col du matras, l'extrmit effile
4.5 Appareil d'entranement par la vapeur, ou, en tant dirige vers le bas.
variante, appareil de distillation ordinaire.
Placer le matras en position incline (inclinaison
d'environ 40 par rapport la verticale) sur le dispositif
4.6 Dispositif de chauffage, sur lequel le matras
de chauffage (4.6). Le chauffer d'abord doucement,
de Kjeldahl peut tre chauff en position incline de
jusqu' ce que la formation de mousse cesse et que le
manire que la source de chaleur n'atteigne que la partie
contenu se soit compltement liqufi. Puis attaquer en
de la paroi du matras situe au-dessous du niveau du
chauffant vigoureusement et en faisant tourner
liquide.
priodiquement le matras, jusqu' ce que le liquide soit
compltement limpide et de teinte claire bleu-vert.
4.7 Dispositif d'aspiration, pour les vapeurs d'acide
libres pendant l'attaque chimique. Maintenir le liquide bullition durant encore 90 min.

16
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37 8 Joumada El Oula 1427
20 4 juin 2006

La totalit de l'attaque chimique doit s'effectuer en un Dans les deux cas, juste avant la fin de la distillation,
minimum de 2 h. Prendre soin qu'aucun liquide condens abaisser la fiole conique afin que l'extrmit de l'allonge
ne coule sur la paroi extrieure du matras. Eviter que trop soit au-dessus du niveau du liquide. Rincer l'extrmit de
d'acide sulfurique ne s'chappe par suite d'une surchauffe l'allonge au-dessus du liquide ( l'intrieur et l'extrieur)
pendant l'attaque chimique, ce qui risquerait d'entraner avec un peu d'eau. Vrifier que la distillation de
une perte d'azote. l'ammoniac est acheve, au moyen d'un papier de
tournesol rouge, humect avec de l'eau distille ; sa
Refroidir environ 40 C et ajouter, avec prcaution, couleur ne doit pas tre modifie par le liquide provenant
environ 50 ml d'eau. Mlanger et laisser refroidir. du rfrigrant. Arrter le chauffage. Si la distillation se
rvle tre incomplte, effectuer une nouvelle
Verser, au moyen d'une prouvette gradue, 50 ml de dtermination en se conformant soigneusement aux
la solution d'acide borique (3.5) dans une fiole conique indications.
d'environ 500 ml de capacit, ajouter 4 gouttes de la
solution d'indicateur (3.7), mlanger et placer la Titrer le contenu de la fiole conique avec la solution
fiole sous le rfrigrant de l'appareil de distillation (4.5) d'acide chlorhydrique (3.6). Noter le volume de solution
de faon que l'extrmit de l'allonge plonge dans le d'acide chlorhydrique ncessaire, en l'estimant 0,02 ml
liquide. prs.

Effectuer deux dterminations sur des prises d'essais


Oprer sur le contenu du matras de Kjeldahl selon l'une provenant du mme chantillon pour essai.
des deux techniques suivantes :
6.4 Essai blanc
a) En cas d'entranement par la vapeur
Effectuer toujours un essai blanc (en double) lorsque
Transvaser le contenu du matras de Kjeldahl dans de nouveaux lots de ractifs ou des solutions
l'appareil de distillation et rincer le matras avec frachement prpares sont utiliss. Il est recommand
environ 50 ml d'eau. Ajouter, au moyen d'une prouvette d'effectuer priodiquement un essai blanc pour les
gradue, 100 ml de la solution d'hydroxyde de sodium ractifs et les solutions qui ont dj t utiliss depuis
(3.4), en les versant avec soin le long du col inclin du quelques temps.
matras, afin que les deux couches ne se mlangent pas
dans le matras. Relier immdiatement le matras la tte Effectuer cet essai blanc selon (6.3) en prenant
distiller de l'appareil de distillation. Chauffer le liquide uniquement un morceau de papier sulfuris (4.2).
alcalin en le faisant traverser par la vapeur jusqu'
bullition et maintenir celle-ci durant 20 mn. Chauffer 7. EXPRESSION DES RESULTATS
d'abord lentement afin de rduire un minimum la
formation de mousse. Le volume de distillat recueilli doit 7.1 Mode de calcul et formule
tre d'au moins 150 ml.
La teneur en azote, exprime en pourcentage en masse,
b) En cas de distillation ordinaire est gale :

Diluer, avec prcaution, le contenu du matras de 0,0014 x (V1 V0) x 100


Kjeldahl avec 300 ml d'eau et agiter par rotation. m
Transvaser, si ncessaire, dans une fiole de 1 litre. Aprs O
environ 15 mn, ajouter, au moyen d'une prouvette
gradue, 100 ml de la solution d'hydroxyde de sodium V0 : est le volume, en millilitres, de solution d'acide
(3.4), en les versant avec soin le long du col inclin du chlorhydrique 0,l N, utilis pour l'essai blanc ;
matras, afin que les deux couches ne se mlangent pas
dans le matras. Relier immdiatement le matras la tte V1 : est le volume, en millilitres, de solution d'acide
distiller de l'appareil de distillation. chlorhydrique 0,l N, utilis pour la dtermination ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
Distiller au moins 150 ml du liquide, mme si le
mlange prsente des soubresauts irrguliers. Poursuivre
Note :
la distillation jusqu' ce que le mlange commence
prsenter des soubresauts ou jusqu' l'obtention de 250 ml Si la solution titre d'acide chlorhydrique utilise n'a pas
de distillat. S'assurer que le distillat est effectivement exactement la concentration prvue en (3.6), un facteur de
refroidi et viter que la solution d'acide borique ne correction appropri doit tre utilis pour le calcul du
s'chauffe. rsultat.

17
8 Joumada El Oula 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37
4 juin 2006 21

Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des


deux dterminations si les conditions de rptabilit (7.2)
sont remplies.

Exprimer le rsultat 0,0lg prs d'azote pour 100g


d'chantillon.

7.2 Rptabilit

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations


effectues presque simultanment ou rapidement l'une
aprs l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser
0,10g d'azote pour 100g d'chantillon.

8. REMARQUES

8.1 La dtermination doit tre effectue dans une pice


exempte de vapeur d'ammoniac.

8.2 Il est galement possible d'effectuer le dosage sur


une partie aliquote du contenu du matras de Kjeldahl.
Dans ces conditions, des modifications appropries
doivent tre apportes l'appareillage et au mode
opratoire (quantits et concentrations des ractifs utiliss,
temps de distillation, volume de distillat.

8.3 L'azote provenant de composs organiques non


protiques sera inclus dans la dtermination, et ainsi des
rsultats inexacts de teneur en protines seront obtenus si
la teneur en protines est calcule partir de la teneur en
azote.

Si, outre le rsultat en azote, on veut exprimer le


rsultat en protines, il faut indiquer le coefficient utilis.

18
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
14 28 juin 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars


2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en nitrates dans la
viande et les produits de la viande.

Le ministre du commerce,

Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie El


Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,


modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423


correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;

19
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006 15

Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417 3. REACTIFS


correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
prparation et de commercialisation des merguez ;
Leau utilise doit tre de leau distille ou de puret au
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420 moins quivalente.
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes 3.1 Solutions utilises pour la prcipitation des
haches la demande ; protines.
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au 3.1.1 Ractif I
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles Dissoudre 106g d'hexacyanoferrate de potassium
applicables la composition et la consommation des trihydrat (K4Fe(Cn)6,3H20) dans de leau et complter
produits carns cuits; 1000 ml.
Arrte :
3.1.2 Ractif II
Article 1er. En application des dispositions de
Dissoudre 220g d'actate de zinc, dihydrat
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier [ZN(CH3COO)2,2H20] et 30 ml dacide actique
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a cristalisable dans de leau et complter 1000 ml.
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en nitrates dans la viande et les 3.1.3 Solution sature de borax
produits de la viande.
Dissoudre 50g de ttraborate de sodium dcahydrat
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en nitrates (Na2B4O7,10H2O) dans 1000 ml deau tide et laisser
dans la viande et les produits de la viande, les laboratoires refroidir la temprature du laboratoire.
du contrle de la qualit, et de la rpression des fraudes et 3.2 Zinc en baguettes, denviron 15 cm de longueur et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la 5 7 mm de diamtre.
mthode dcrite en annexe.
3.3 Sulfate de cadmium, solution 30 g/l.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. Dissoudre 37g de sulfate de cadmium (3CdSO4,8H2O)
dans de leau et complter 1000 ml.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.4 Acide chlorhydrique, solution environ 0,IN.
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. Diluer 8 ml dacide chlorhydrique concentr
(p20 = 1,19 g/ml) dans de leau et complter 1000 ml.
Fait Alger, le 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars
3.5 Solution tampon ammoniacale, pH 9,6 et 9,7.
2006.
Diluer 20 ml dacide chlorhydrique concentr
Lachemi DJAABOUBE. (p20 = 1,19 g/ml) avec 500 ml deau. Mlanger, ajouter
10g de sel disodique dihydrat de lacide thylne diamine
ttraactique [CH2-N (CH2-COOH) CH2-COONa]2,
ANNEXE 2H2O et 55 ml dhydroxyde dammonium concentr
(p20 = 0,88 g/ml). Complter 1000 ml avec de leau et
METHODE DE DETERMINATION mlanger. Contrler le pH.
DE LA TENEUR EN NITRATES DANS LA
VIANDE ET LES PRODUITS DE LA VIANDE 3.6 Nitrite de sodium, solutions talons.
Dissoudre 1,000g de nitrite de sodium (NaNO2) dans de
1. DEFINITION leau et complter 100 ml dans une fiole jauge.
Transfrer, la pipette, 5 ml de cette solution dans une
On entend par teneur en nitrates des viandes et produits fiole jauge de 1000 ml. Ajuster au trait repre.
base de viande la teneur en nitrates dtermine suivant le
mode opratoire dcrit ci-aprs et exprime en Prparer une srie de solutions talons en transfrant
milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme la pipette 5, 10 et 20 ml de cette solution dans des fioles
(parties par million). jauges de 100 ml et en compltant au trait repre avec de
leau. Ces solutions talons contiennent respectivement
2. PRINCIPE 2,5, 5,0 et 10,0g de nitrite de sodium par millilitre.

Extraction leau chaude de la viande ou du produit 3.7. Solutions pour le dveloppement de la


base de viande, prcipitation des protines et filtration. coloration.

Rduction des nitrates extraits dans le filtrat en nitrites 3.7.1 Solution I


par du cadmium mtallique. Obtention dune coloration Dissoudre par chauffage au bain deau 2g de
rouge par addition de chlorure de sulfanilamide et de sulfamilamide (NH2-C6H4-SO2-NH2-) dans 800 ml
chlorure de naphtyl-thilne-diamine du filtrat et deau. Refroidir et filtrer si ncessaire, et ajouter, en
mesurage photomtrique une longueur donde de agitant, 100 ml dacide chlorhydrique concentr (p20 =
538 mm. 1,19 g/ml). Complter 1000 ml avec de leau.

20
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
16 28 juin 2006

3.7.2 Solution II Note :


Dissoudre, dans leau, 0,1g de chlorure de N Dans le cas des produits non cuits, analyser
naphtyl-1-thylnediamine : (C10H7-NH-CH2-CH2-NH2, lchantillon immdiatement aprs homognisation.
2HC). Complter 100 ml avec de leau.
5.2 Prparation de la colonne de cadmium
3.7.3 Solution III 5.2.1 Placer 3 5 baguettes de zinc (3.2) dans la
solution de sulfate de cadmium (3.3) contenue dans un
Complter 1000 ml, avec de leau 445 ml dacide bcher (1 litre de solution de sulfate de cadmium suffit
chlorhydrique (p20 = 1,19 g/ml). pour prparer une colonne de cadmium).
Garder ces solutions dans des flacons brun fonc, bien Enlever, toutes les 1 ou 2 h, le cadmium mtallique
ferms et les conserver au rfrigrateur, une semaine au spongieux dpos sur les baguettes de zinc, en remuant
maximum. celles-ci dans la solution ou en les frottant lune contre
3.8 Nitrate de potassium, solutions talons. lautre.

Dissoudre 1,465g de nitrate de potassium (KNO3) dans 5.2.2 Finalement, aprs 6 8 h, dcanter la solution et
de leau et complter 100 ml dans une fiole jauge. laver le dpt deux fois avec 1 litre deau distille, en
Transfrer, la pipette, 5 ml de la solution dans une autre prenant soin que le cadmium soit continuellement
fiole jauge de 1000 ml et ajuster au trait repre. recouvert dune couche de liquide.
Cette solution contient 73,25 g/ml de nitrate de Transvaser le dpt de cadmium au moyen de 400 ml
potassium. de solution dacide chlorhydrique (3.4) dans un appareil
mlangeur pour laboratoire et mlanger pendant 10
Cette solution talon doit tre prpare le jour mme secondes.
de son utilisation.
Remettre le contenu du mlangeur dans le bcher.
4. APPAREILLAGE Agiter de temps en temps le dpt de cadmium laide
Matriel courant de laboratoire, et notamment : dune baguette de verre. Laisser reposer pendant une nuit
dans la solution dacide chlorhydrique.
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni dune
plaque dont les trous ont un diamtre ne dpassant 5.2.3 Remuer encore une fois, afin dliminer toutes les
pas 4 mm. bulles dair du cadmium.
4.2 Balance analytique. Dcanter la solution et laver la bouillie de cadmium
deux fois avec 1 litre deau chaque fois.
4.3 Fioles jauges, 100 ml, 200 ml et 1000 ml.
Adapter un tampon en fibre de verre au fond de la
4.4. Pipettes jauges un trait, de 20 ml, 10 ml et si colonne en verre destine contenir le cadmium.
ncessaire, dune autre capacit, selon le prlvement
aliquote (5.8.1). Transvaser et laver la cadmium dans la colonne en verre
en utilisant de leau jusqu ce que la hauteur de cadmium
4.5 Bain deau bouillante. atteigne environ 17 cm. Vider la colonne de temps en
temps pendant le remplissage, mais en prenant soin que le
4.6 Papier filtre plis, de 15 cm de diamtre environ, niveau du liquide ne tombe pas au dessous du
exempt de nitrites et de nitrates. sommet du lit de cadmium. Eliminer les inclusions de gaz
4.7 Appareil en verre, destin la rduction des (par exemple laide dune aiguille tricoter), le liquide
nitrates (voir figure). doit scouler avec une vitesse maximale de 3 ml/min.

4.8 Colorimtre photolectrique ou spectrophotomtre 5.3 PRISE DESSAI


avec cuves de 1 cm de parcours optique.
Peser, 0,001g prs, 10g de lchantillon pour essai.
4.9 Fiole conique, de 300 ml.
5.4 Dprotination
5. MODE OPERATOIRE
Transvaser quantitativement la prise dessai dans la
5.1 Prparation de lchantillon pour essai fiole conique (4.9) et ajouter, successivement, 5 ml de
solution sature de borax (3.1.3) et 100 ml deau une
Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
temprature minimale de 70C.
moins 200g.
Rendre lchantillon homogne par au moins deux Chauffer la fiole pendant 15 min au bain deau
passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger. bouillante (4.5) et agiter plusieurs reprises.
Le conserver au froid dans un flacon tanche rempli Laisser refroidir la temprature ambiante la fiole et
compltement. son contenu et ajouter successivement 2 ml du ractif I
Analyser lchantillon pour essai le plus rapidement (3.1.1) et 2 ml du ractif II (3.1.2). Mlanger
possible, mais toujours dans les 24 h. soigneusement aprs chaque addition.

21
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006 17

Transvaser dans une fiole jauge de 200 ml (4.3). 5.8.3 Ajouter 2ml de solution II (3.7.2.) mlanger et
Laisser reposer pendant 30 minutes la temprature laisser la solution pendant 3 minutes la temprature
ambiante. Complter jusquau trait-repre avec de leau. ambiante et lobscurit. Complter au trait repre avec
de leau.
Mlanger soigneusement le contenu de la fiole jauge et
filtrer sur un papier filtre plis (4.6). 5.8.4 Mesurer l'absorbance de la solution au colorimtre
photolectrique ou au spectrophotomtre (4.8) dans une
5.5 Prtraitement de la colonne de cadmium cuve de 1cm de parcours optique longueur d'onde
d'environ 538 nm.
Laver la colonne de cadmium successivement avec
25ml de solution d'acide chlorhydrique (3.4), 50ml d'eau Note
et 25 ml de la solution tampon ammoniacale (3.5) dilue
1 + 9. viter que le niveau du liquide dans l'entonnoir ne Si l'absorbance de la solution colore obtenue partir de
tombe au-dessous du sommet du tube adducteur capillaire la prise d'essai est suprieure celle de la solution talon
de la colonne. la plus concentre, recommencer la dtermination en
diminuant la quantit d'luat prleve la pipette en
5.6 Contrle du pouvoir rducteur de la colonne de (5.8.1).
cadmium
5.8.5 Effectuer deux dterminations sur le mme
5.6.1 Prlever 20ml de solution talon de nitrate de
chantillon pour essai.
potassium (3.8) avec une pipette, les verser dans le
rservoir au sommet de la colonne, et ajouter, 5.9 Courbe dtalonnage
immdiatement aprs, 5ml de la solution tampon
ammoniacale (3.5). Recueillir l'effluent dans une fiole Transfrer, la pipette, respectivement dans quatre
jauge de 100ml (4.3). fioles jauges de 100 ml (4.3), 10ml d'eau et 10ml de
chacune des trois solutions talons de nitrite de sodium
5.6.2 Lorsque le rservoir est presque vide, laver les (3.6), reprsentant 0g - 2,5g - 5,0g et 10,0 g de
parois avec environ 15ml d'eau et rpter la mme nitrites par millilitre.
opration avec une autre fraction de 15ml d'eau. Dans chaque fiole, ajouter de l'eau pour obtenir un
Lorsque cette fraction s'est coule dans la colonne, volume de 60ml environ, et procder comme dcrit en
remplir le rservoir compltement avec de l'eau. (5.8.2) (5.8.4).

5.6.3 Aprs avoir recueilli presque 100ml de liquide, Tracer la courbe d'talonnage en portant les
enlever la fiole de la colonne. Ajuster au trait-repre avec absorbances mesures en fonction des concentrations, en
de l'eau. microgrammes par millilitre de solution talon de nitrite
de sodium.
5.6.4 Introduire, la pipette, 10ml d'luat dans une fiole
jauge de 100ml (4.3) et poursuivre selon les indications 6. EXPRESSION DES RESULTATS
de (5.8.2 5.8.4).
Calculer la teneur en nitrate de l'chantillon, exprime
5.6.5 Si la concentration de l'luat en nitrites, en milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme,
dtermine partir de la courbe d'talonnage (5.9), est au moyen de la formule :
infrieure 0,9 g de nitrate de sodium par millilitre
10000
(c'est--dire 90% de la valeur thorique), la colonne de
cadmium ne peut tre utilise. KNO3 = 1,465 (cx - NaNO2)
mxV
5.7 Rduction des nitrates en nitrites o:
Introduire, la pipette, dans le rservoir situ au m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
sommet de la colonne, 20ml du filtrat (5.4) et, en mme
temps ou immdiatement aprs, 5ml de solution tampon V : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote
ammoniacale (3.5). d'luat (5.8.1),
Recueillir l'effluent de la colonne dans une fiole jauge
de 100 ml (4.3). c : est la concentration de nitrite de sodium, en
Procder comme spcifi en (5.6.2) et (5.6.3). microgrammes, par millilitre, lue sur la courbe
d'talonnage, correspondant l'absorbance de la solution
5.8 Dtermination prpare partir de la prise d'essai (5.8.4),
5.8.1 Introduire, la pipette, dans une fiole jauge de NaNO2 : est la teneur en nitrite de l'chantillon,
100ml (4.3), une partie aliquote de l'luat (5ml) ne exprime en milligrammes de nitrite de sodium par
dpassant pas 25ml et ajouter de l'eau de faon obtenir kilogramme.
un volume de 60ml environ.
5.8.2 Ajouter 10 ml de solution 1 (3.7.1 ) puis 6ml de Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
solution III (3.7-3), mlanger et laisser la solution pendant deux dterminations si les conditions de rptabilit (6.1)
5 minutes la temprature ambiante et l'obscurit. sont remplies. Noter le rsultat 1mg prs.

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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
18 28 juin 2006

6.1 Rptabilit Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en nitrites


dans la viande et les produits de la viande, les laboratoires
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
effectes simultanment ou rapidement lune aprs lautre, les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure 10 % mthode dcrite en annexe.
de la teneur en nitrates.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
Rservoir
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
(Capacit maximale 45-50 ml)
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
Solution officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
int 1,0 1,5 mm
Fait Alger, le 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars
2006.
Bouchon en caoutchouc Lachemi DJAABOUBE.

colonne de cadmium Effluent ANNEXE


int 12 14 mm METHODE DE DETERMINATION
ext 7 8 mm DE LA TENEUR EN NITRITES DANS LA VIANDE
Laine de verre
ET LES PRODUITS DE LA VIANDE
Joint de caoutchouc int 0,4 0,6 mm
1. DEFINITION
Figure - Appareil de rduction des nitrates
Teneur en nitrites des viandes et produits base de
viande : la teneur en nitrites dtermine suivant le mode
opratoire dcrit ci-aprs et exprime en miligrammes de
Arrt du 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars nitrite de sodium par kilogramme (parties par million).
2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en nitrites dans la 2. PRINCIPE
viande et les produits de la viande.
Extraction leau chaude de la viande ou du produit
base de viande, prcipitation des protines et filtration.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie En prsence des nitrites, il y a obtention dune
El Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant coloration rouge par addition de sulfanilamide et de
nomination des membres du Gouvernement ; chlorure de naphtyl-l-thylne-diamine du filtrat et
mesurage photomtrique une longueur donde de
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, 538 nm.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 3. REACTIFS
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
Leau utilise doit tre de leau distille ou de leau de
du ministre du commerce ;
puret au moins quivalente.
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de 3.1 Solutions utilises pour la prcipitation des
prparation et de commercialisation des merguez ; protines.
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
3.1.1 Ractif I
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes Dissoudre 106g d'hexacyanferrate de potassium
haches la demande ; trihydrat (K4Fe(Cn)6,3H20) dans de leau et complter
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au 1000 ml.
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des 3.1.2 Ractif II
produits carns cuits ; Dissoudre 220 g d'actate de zinc, dihydrat
Arrte : [ZN(CH3COO)2,2H20] et 30 ml dacide actique
cristalisable dans de leau et complter 1000 ml.
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 3.1.3 Borax, solution sature
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de Dissoudre 50g de ttraborate disodique dcahydrat
dtermination de la teneur en nitrites dans la viande et les [Na2B4O7,10H20] dans 1000 ml deau tide et laisser
produits de la viande. refroidir la temprature du laboratoire.

23
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006 19

3.2 Nitrite de sodium : solutions talons. 5. ECHANTILLON


Dissoudre 1,000g de nitrite de sodium (NaNO2) dans de
5.1 Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
leau et complter 100 ml dans une fiole jauge.
moins 200 g.
Transfrer, la pipette, 5 ml de cette solution dans 5.2 Prparer immdiatement lchantillon pour essai
une autre fiole jauge de 1000 ml. Complter au trait (6.1). Si cela nest pas possible, conserver lchantillon,
repre. une temprature comprise entre 0 et 5C, durant 4 jours au
maximum.
Prparer une srie de solutions talons en transfrant,
la pipette 5, 10 et 20 ml de cette solution dans des fioles
6. MODE OPERATOIRE
jauges de 100 ml et en compltant au trait repre avec de
leau. Ces solutions talons contiennent respectivement
2,5g, 5,0g et 10,0g de nitrite de sodium par millilitre. 6.1. Prparation de lchantillon pour essai
Rendre lchantillon homogne par au moins deux
Les solutions talons, ainsi que la solution (0,05 g/l) passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger. Le
de nitrite de sodium dont elles proviennent, doivent tre conserver au froid dans un flacon tanche rempli
prpares le jour de leur utilisation. compltement.
3.3 Solutions pour le dveloppement de la coloration Analyser lchantillon pour essai le plus rapidement
3.3.1 Solution I possible, mais toujours dans les 24 h.

Dissoudre par chauffage au bain deau 2g de Note :


sulfanilamide (NH2-C6H4-SO2-NH2) dans 800 ml deau.
Refroidir et filtrer si ncessaire, et ajouter, en agitant, 100 Dans le cas de produits non cuits, analyser lchantillon
ml dacide chlorihydrique concentr (P20 = 1,19 g/ml). immdiatement aprs homognisation.
Complter 1000 ml avec de leau.
6.2 Prise dessai
3.3.2 Solution II Peser, 0,001g prs, environ 10g de lchantillon pour
Dissoudre, dans leau, 0,25g de chlorure de essai.
N naphtyl-l-thylne-diamine :
(C10H7-NH-CH2-CH2-NH2,2HCI). Complter 250 ml 6.3 Dprotination
avec de leau.
6.3.1 Transvaser quantitativement la prise dessai dans
3.3.3 Solution III la fiole conique (4.8) et ajouter, successivement, 5 ml de
solution sature de borax (3.1.3) et 100 ml deau une
Complter 1000 ml, avec de leau, 445 ml dacide
temprature minimale de 70C.
chlorhydrique (p20 = 1,19 g/ml)
Garder ces solutions dans des flacons brun fonc, bien 6.3.2 Chauffer la fiole pendant 15 min au bain deau
ferms et les conserver au refrigrateur, une semaine au bouillante (4.5) et agiter plusieurs reprises.
maximum.
6.3.3 Laisser refroidir la temprature ambiante la fiole
4. APPAREILLAGE et son contenu. Ajouter successivement 2 ml du ractif I
Matriel courant de laboratoire, et notamment : (3.1.1) et 2 ml du ractif II (3.1.2). Mlanger
soigneusement aprs chaque addition.
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni dune
plaque dont les trous ont un diamtre ne dpassant pas 4 6.3.4 Transvaser dans une fiole jauge de 200 ml (4.3).
mm.
Complter jusquau trait repre avec de leau et
4.2 Balance analytique. mlanger.
4.3 Fioles jauges, 100 ml, 200 ml et 1000 ml. Laisser reposer pendant 30 minutes la temprature
ambiante.
4.4. Pipettes un trait, de 10 ml, et, si ncessaire,
dune autre capacit, selon le prlvement aliquote (6.4.1). 6.3.5 Laisser dcanter soigneusement le liquide
surnageant et filtrer sur le papier filtre plis (4.7), de
4.5 Bain deau bouillante.
faon obtenir une solution limpide.
4.6 Colorimtre photolectrique ou spectrophotomtre
avec cuves de 1 cm de parcours optique. 6.4 Colorimtrie

4.7 Papier filtre plis, de 15 cm de diamtre environ, 6.4.1 Prlever la pipette une partie aliquote du filtrat
exempt de nitrites. (5 ml) mais pas plus de 25 ml, lintroduire dans une fiole
jauge de 100 ml (4.3) et ajouter de leau pour obtenir un
4.8 Fiole conique, de 300 ml. volume denviron 60 ml.

24
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
28 juin 2006

6.4.2 Ajouter 10 ml de la solution I (3.3.1) puis 6 ml V : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote de
de la solution III (3.3.3.), mlanger et laisser la solution filtrat (6.4.1) prleve pour la dtermination
durant 5 min la temprature ambiante et lobscurit. photomtrique ;
c : est la concentration en nitrite de sodium, exprim en
6.4.3. Ajouter 2 ml de la solution II (3.3.2), mlanger et
microgrammes par millilitre, lue sur la courbe
laisser la solution durant 3 10 min la temprature
dtalonnage et correspondant labsorbance de la
ambiante, lobscurit. Complter au trait repre avec de
solution prpare partir de la prise dessai (6.4.4).
leau.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique de
6.4.4 Mesurer labsorbance de la solution colore au
rsultats des deux dterminations, si les conditions de
colorimtre photolectrique ou au spectrophotomtre
rptabilit (7.2) sont remplies. Exprimer le rsultat, 1
(4.6), dans une cuve de 1 cm de parcours optique une
mg prs, par kilogramme de produit.
longueur donde denviron 538 nm.
7.2. REPETABILITE
Note :

Si labsorbance de la solution colore obtenue partir La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
de la prise dessai est suprieure celle de la solution effectues simultanment ou rapidement lune aprs
talon la plus concentre, recommencer les oprations lautre par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
dcrites en (6.4) en diminuant la quantit de filtrat 10 % de la valeur moyenne.
prleve la pipette (6.4.1).

6.5 Nombre des dterminations

Effectuer deux dterminations spares en partant de


prises dessai prleves sur le mme chantillon pour
essai.

6.6. Courbe dtalonnage

6.6.1 Transfrer la pipette respectivement dans quatre


fioles, jauges de 100 ml (4,3), 10 ml deau et 10 ml de
chacune des trois solutions talons de nitrite de sodium
(3.2), reprsentant 2, 5, 5,0 et 10,0 g de nitrite par
millilitre.

6.6.2 Dans chaque fiole, ajouter de leau pour obtenir


un volume de 60 ml environ et procder comme dcrit de
(6.4.2) (6.4.4).

6.6.3 Tracer la courbe dtalonnage en portant les


absorbances mesures en fonction des concentrations, en
microgrammes par millilitre des solutions talons.

7. EXPRESSION DES RESULTATS

7.1 Mode de calcul et formule

Calculer la teneur en nitrites de lchantillon, exprime


en milligrammes de nitrites de sodium par kg laide de
la formule.
2000
NaNO2 = c x
mxV

o :

m : est la masse, en gramme, de la prise dessai ;

25
27 Chabane 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
20 septembre 2006 17

DECISIONS INDIVIDUELLES

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,


modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au la rpression des fraudes ;
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur de lazote basique Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
volatil total dans les produits de la pche. correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;

Le ministre du commerce, Vu le dcret excutif n 04-189 du 19 Joumada El Oula


1425 correspondant au 7 juillet 2004 fixant les mesures
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani dhygine et de salubrit applicables aux produits de la
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination pche et de laquaculture ;
des membres du Gouvernement ;

26
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 27 Chabane 1427
18 20 septembre 2006

Arrte : 4.4 Actate de zinc 30 % dans l'eau.


Article 1er. En application des dispositions de 4.5 Solution de phnol-phtaline 2 % dans l'alcool
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 90.
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de 4.6 Solution de carbonate de lithium saturation
(environ 8 %).
dtermination de la teneur de lazote basique volatil total
dans les produits de la pche. 4.7 Solution aqueuse d'alizarine sulfonate de sodium
0,5%.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur de lazote
basique volatil total dans les produits de la pche, les 4.8 Solution 0,1 N d'acide sulfurique.
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent 5. MODE OPERATOIRE
employer la mthode dcrite en annexe.
Peser 10 g du produit analyser. S'il s'agit d'un produit
Cette mthode doit tre galement utilise par le ayant sjourn dans l'huile (sardines en botes) ou dans un
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. liquide (thon au naturel) avoir soin de l'essorer entre des
feuilles de papier filtre.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal mettre dans un flacon cylindrique de 250 ml ( large
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et ouverture) avec 50 ml d'eau distille ;
populaire.
broyer avec un mixer rapide ;
Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant
au 8 juillet 2006. verser le broyat dans le ballon de l'appareil
Lachemi DJAABOUBE. distiller ;
rincer le flacon et la tige du broyeur avec 50 ml
ANNEXE d'eau.

METHODE DE DETERMINATION Verser les eaux de rinage dans le ballon. Puis ajouter
DE LA TENEUR EN AZOTE BASIQUE VOLATIL successivement en agitant chaque fois
TOTAL DANS LES PRODUITS DE LA PECHE 3 gouttes de Rhodorsil ;
1. DEFINITION 1 ml de solution de ferrocyanure de potassium ;
La dnomination Azote Basique Volatil Total (ABVT) 1 ml de solution d'actate de zinc ;
s'applique l'ensemble form par l'ammoniac et les 5 gouttes de solution de phnol-phtaline ;
amines volatils. 20 ml de solution de carbonate de lithium.
La quantit dABVT est, pour une denre, directement
fonction du niveau de sa dgradation protique. Cette dernire adjonction s'accompagne d'un virage au
rouge franc de la phnol-phtaline.
2. PRINCIPE DE DOSAGE :
Relier aussitt le ballon au rfrigrant descendant dont
L'ABVT dplac par le carbonate de lithium (base l'extrmit aboutira dans un bcher de 100 ml contenant
faible n'hydrolysant ni l'ure, ni les protides et acides 20 ml d'eau distille et 5 gouttes d'alizarine. Le distillat
amins) est entran par la vapeur d'eau. Le distillat est doit tomber directement dans ce mlange, la partie
titr par l'acide sulfurique. infrieure du rfrigrant tant immerge.

3. MATERIEL Chauffer le ballon bullition et lorsque le virage au


violet de l'alizarine est amorc, poursuivre encore la
ballon Pyrex de 500 ml ;
distillation pendant 10 minutes.
rfrigrant ;
systme de raccordement tube de rfrigrant Sparer le ballon du rfrigrant.
droit ; Rincer l'appareil de distillation et recueillir les eaux de
bcher de 100 ml. lavage dans le bcher.

L'exprience montre qu'il y a intrt utiliser un Doser l'A.B.V.T. l'aide de la solution d'acide
montage avec rodages sphriques maintenus par pinces, sulfurique 0,1 N par le virage au jaune paille de l'alizarine.
qui se dmontent facilement mme chaud et assurent
une tanchit suffisante.

4. REACTIFS (*) Le produit base de silicone vitant la


formation gnante de mousse permet un chauffage rapide,
4.1 Eau frachement distille. le ferrocyanure de potassium et lactate de zinc ralisent
une dfcation qui assure le blocage des protides.
4.2 Silicone Rhodorsil (antimousse ). (*)
En outre ladjonction de quelques fragments de pierre
4.3 Ferrocyanure de potassium 15 % dans l'eau. ponce sulfurique rgularise lbullition.

27
27 Chabane 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
20 septembre 2006 19

6. EXPRESSION DES RESULTATS ANNEXE


METHODE DE DETERMINATION DE LA TENEUR
L'ABVT. est exprim en ammoniac (NH3 = 17). Le EN HISTAMINE DANS LES PRODUITS
rsultat est rapport 100 g de produit. Soit n le nombre DE LA PECHE PAR CHROMATOGRAPHIE
de ml d'acide sulfurique 0,1 N utilis pour la LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE
neutralisation.

On a : 1. OBJET
ABVT (mg/100g) = 1,7 x n x 10 = 17n Cette mthode dcrit le dosage de lhistamine dans le
thon, la sardine, le maquereau, les anchois ou tout produit
de la mer ltat frais, congel, fum, sch, appertis ou
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au ayant subi tout autre traitement.
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de Lhistamine est une amine provenant de la dgradation
dtermination de la teneur en histamine dans les de lhistidine par dcarboxylation. Sa prsence, des
produits de la pche par chromatographie liquide teneurs suprieures 10 mg/100g dans des poissons, est
haute performance. susceptible de provoquer des phnomnes dintoxication.

2. PRINCIPE
Le ministre du commerce,
Lhistamine est solubilise dans de lacide
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani trichloroactique, complexe avec lortho-phtalaldhyde,
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination spare par chromatographie liquide haute performance
des membres du Gouvernement ; (CLHP) sur phases inverses, puis dtecte par
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, fluoromtrie.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ; 3. APPAREILLAGE

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 broyeur ;


correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions balance ;
du ministre du commerce ;
pompe isocratique pour chromatographie liquide ,
Vu le dcret excutif n 04-189 du 19 Joumada El Oula injecteur type RHEODYNE avec boucle dinjection
1425 correspondant au 7 juillet 2004 fixant les mesures de 20 l ;
dhygine et de salubrit applicables aux produits de la
pche et de laquaculture ; colonne C18 (20 cm x 4 mm) : silice sphrique 5 m
greffe C18 avec ventuellement une pr-colonne ;
Arrte : dtecteur fluoromtrique flux continu avec une
cellule de 20 l ;
Article 1er. En application des dispositions de
enregistreur intgrateur ;
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a utilisation ventuelle dun auto-prparateur -
pour objet de rendre obligatoire la mthode de injecteur automatique.
dtermination de la teneur en histamine dans les produits
de la pche par chromatographie liquide haute 4. REACTIFS
performance. solution dacide trichloroactique 20% (TCA 20%) ;
dichlorhydrate dhistamine (184,07 mM) ;
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
solution dhistamine 3,33 mg/ml.
histamine dans les produits de la pche par
chromatographie liquide haute performance, les Dissoudre 165,6 mg de dichlorhydrate dhistamine dans
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression 100 ml de TCA 10 %.
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe. Diluer au 1/3 puis au 1/100 :
Cette mthode doit tre galement utilise par le solution dorthophtalaldhyde (OPA) 10 mg/ml
laboratoire lorsquune expertise est ordonne. dans du mthanol ;
solution de soude 2 N ;
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
solution dacide chlorhydrique 3 N ;
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. actonitrile pour CLHP ;
solution 1 mM de di-potassium hydrogno-phosphate
Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant (K2HPO4).
au 8 juillet 2006.
Dissoudre 174,2 mg de K2HPO4 dans un litre deau
Lachemi DJAABOUBE. ultra pure :

28
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 27 Chabane 1427
20 20 septembre 2006

solution luante pour la chromatographie : 40 % 200 l NaOH 2N ;


dactonitrile et 60 % de solution 1 mM de K2HPO4 ;
100 l OPA 10 mg /ml, attendre 4 minutes;
filtre 5 m ;
150 l HCl 3N, passage en CLHP.
papier filtre pliss n 127.
Les 20 l injects renferment 4,6 mg dhistamine.
5. MODE OPERATOIRE
Si la teneur en histamine est faible, faire la raction de
5.1 Prparation du dfcat trichloroactique complexation sur le dfcat TCA non dilu, ou faiblement
dilu, par contre, si celle-ci est leve, diluer le dfcat de
Broyer et homogniser un chantillon reprsentatif de sorte obtenir une lecture chromatographique proche de
200 g environ et prlever immdiatement la prise dessai. la solution talon.
5.1.1 Cas des poissons frais et congels
Effectuer deux dterminations sur le mme dfcat
Homogniser 100 g dchantillon avec 50 ml deau prpar.
dans un broyeur puis ajouter 50 ml de solution TCA
20 %, mlanger de nouveau et filtrer sur filtre en papier 6. EXPRESSION DES RESULTATS
pliss n 127.
6.1 Calcul
5.1.2 Cas des poissons en conserve
Mme procd avec 50 g de chair goutte, 50 ml deau La teneur en histamine exprime en mg pour 100 g
et 50 ml de solution TCA 20 %. dchantillon est :

5.1.3 Cas des semi-conserves H = 6,66 x A poisson frais ou congel



Mme procd avec 40 g de chair, 100 ml deau et 50 As
ml de solution TCA 20 %.
H = 10 x A poisson en conserve
5.2 Raction de complexation avec lOPA
Diluer au 1/10 dans de leau dminralise une fraction As
aliquote du filtrat et filtrer sur filtre de 5 m.
H = 15,83 x A poisson semi-conserve
La suite de la raction peut se faire manuellement ou

laide dun auto-prparateur-injecteur.
As
Prlever 100 l de la solution au 1/10, ajouter 900 l o :
deau ultra-pure, alcaniser avec 200 l de NaOH (2N)
puis ajouter 100 l de solution dOPA (10 mg/ml), As = aire du pic dhistamine de lchantillon standard ;
attendre quatre minutes puis bloquer la raction en A = aire du pic dhistamine de lchantillon
ajoutant 150 l dHCl (3N). analyser.
Bien agiter le tube aprs addition de chaque ractif et Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
respecter rigoureusement les quatre minutes de temps de deux dterminations si les conditions de rptabilit sont
complexation. remplies.
5.3 Passage en chromatographie Exprimer le rsultat :
dbit : 1 ml/min ; - 0,5 mg prs (valeur absolue) pour des teneurs
solvant dlution : 40 % dactonitrile et 60 % de infrieures 10 mg/100g ;
solution 1 mM de K2HPO4 ; - 1 mg prs (valeur absolue) pour des teneurs
volume inject : 20 l ; suprieures 10 mg/100g ;
dtection fluoromtrique : longueur donde
dexcitation 360 nm et longueur donde dmission 6.2 Rptabilit
450 nm ;
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
enregistrement et intgration des aires des pics effectues par le mme analyste ne doit pas excder 5% en
dhistamine ; valeur relative.
le temps dlution est denviron 6 minutes.
6.3 Seuil de dtection
Etalonnage externe (avec auto-prparateur)
- Poisson frais ou congel : 0, 5 mg/100g ;
100 l dune solution dhistamine 3,33. 10-3
mg/ml ; - Poisson en conserve: 0, 75 mg/100g ;
900 l deau ; - Poisson semi-conserve:1 mg/100g.

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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59 Aouel Ramadhan 1427
20 24 septembre 2006

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions de


larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche
et didentification des substances anabolisantes dans la
viande et les produits de la viande.

Art. 2. Pour la recherche et lidentification des


substances anabolisantes dans la viande et les produits de
la viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode dcrite en annexe.

Cette mthode doit tre galement utilise par le


laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.

Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant


au 8 juillet 2006.

Lachemi DJAABOUBE.

ANNEXE

MINISTERE DU COMMERCE METHODE DE RECHERCHE


ET DIDENTIFICATION DES SUBSTANCES
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au ANABOLISANTES DANS LA VIANDE
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de ET LES PRODUITS DE LA VIANDE
recherche et didentification des substances
anabolisantes dans la viande et les produits de la 1. DOMAINE D'APPLICATION
viande.
Cette mthode permet de rechercher et d'identifier des
substances anabolisantes (liste I) dans la viande et les
Le ministre du commerce, produits de la viande.
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani 2. PRINCIPE
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination
des membres du Gouvernement ; La chromatographie en couche mince est utilise pour
sparer les diffrents constituants qui sont ensuite rvls
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, sous la forme de taches diversement colores. La position
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et relative et la coloration de ces taches en permettent
la rpression des fraudes ; l'identification. Cet examen est exclusivement qualitatif.
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 3. REACTIFS
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; 3.1 Cristaux de standards de rfrence

Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417 3.1.1 Solution de travail dans du mthanol


correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de (50 ng/l) conservation 4C au rfrigrateur pendant 3
prparation et de commercialisation des merguez ; mois.
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de 3.2 Solvants d'entranement (produits purs pour analyse)
prparation et de mise la consommation des viandes Chloroforme/mthanol (98 + V/V)
haches la demande ;
Prparation de la cuve 3 h avant le dpt conservation
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au maximum 48 h.
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des 3.3 Rvlateur aprs migration - mlange acide
produits carns ; sulfurique/thanol (50 + 50 : V/V).

30
Aouel Ramadhan 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59
24 septembre 2006 21

Conservation temprature ambiante. Liste I


3.4 Plaques CCM 20 X 20 cm ou HPTLC 10 X 10 cm. Substances anabolisantes recherches
Chlormadinone actate
4. APPAREILLAGE
Diethylstilboestrol (D.E.S)
4.1 Hotte aspirante
4.2 Etuve 100 C D.E.S dispropionate

4.3 Source d'air chaud Dienestrol


4.4 Pulvrisateur Dienestrol diacetate
4.5 Transilluminateur Nexoestrol
4.6 Cuve chromatographie Nydroxyprogestrone heptanoate
4.7 Seringues 5 l.
Ndroxyprogestrone
5. MODE OPERATOIRE Ndroxyprogestrone actate
Nortestostrone
5.1 Extraction
Nortestostrone propionate
Gnralement par du mthanol (V/V) ou de l'ther
thylique (V/V). Pour les zones d'injection, aprs le Nortestostrone dcanoate
broyage de la zone suspecte, une centrifugation ou une
filtration est conseille. Nortestostrone laurate

5.2 Dpt sur plaque chromatographique (3.4) Oestradiol 17 oc


5.2.1 Dpt prliminaire dun aliquote de la solution Oestradiol diactate
d'origine ( 1 l ) et de l'extrait (10 l).
Oestradiol dipropionate
5.2.2 Selon rsultats (5.2.1) . Dpt des standards,
suspects et de l'chantillon diffrentes concentrations Oestradiol benzoate
(une vaporation pralable peut tre envisage). Oestradiol thinyl
5.3 Migration sur 7 cm dans une cuve sature contenant
50 ml mlange chloroforme/mthanol (3.2). Progestrone
Testostrone
Laisser scher l'air libre.
5.4 Vaporisation avec une solution d'acide sulfurique Testostrone propionate
50 % dans l'thanol (3.3). Testostrone nanthate
Noter les taches colores. Testostrone (mthyl)

Placer dans une tuve 100C pendant 10 minutes. Trenbolone actate


Zranol.
5.5 Lecture sous transilluminateur.

5.6 Identification Liste II

Par comparaison la couleur des taches (des traces) Standards de rfrence


apparues dans l'extrait et les standards de rfrence
(liste II). Oestradiol -1
5.7 Confirmation
+ testostrone -2
5.7.1 Co-Chromatographie
Actate de trenbolone -2
Ajouter au dpt de l'chantillon 1 l de la solution du
standard correspondant. + D.E.S -1

Poursuivre (5.2), (5.3), (5.4) et (5.5). Mthyl testostrone -1

Vrifier aprs rvlation, passage sous transilluminateur + progestrone -2


qu'aucune nouvelle tache n'est apparue, que seule la tache
prsume soit intensifie. Mdroxy progestrone actate -1

31
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59 Aouel Ramadhan 1427
22 24 septembre 2006

+ propionate de testostrone-2

Nandrolone dcanoate

Nandrolone -1

+ D.E.S dipropionate -2

Oestradiol benzoate

Cholestrol -2

+ thylne oestradiol -1

32
10 Safar 1436
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69 3 dcembre 2014

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

Arrte :
MINISTERE DU COMMERCE
Article. 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
Arrt du 19 Moharram 1436 correspondant au 12 modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
novembre 2014 rendant obligatoire la mthode de rendre obligatoire une mthode de dtermination de la
de dtermination de la teneur en hydroxyproline teneur en hydroxyproline dans les viandes et les produits
dans les viandes et les produits base de viande. base de viande.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
Le ministre du commerce, hydroxyproline dans les viandes et les produits base de
viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435 rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet,
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
membres du Gouvernement ; arrt.

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la lorsqu'une expertise est ordonne.
rpression des fraudes ;
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423 officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions populaire.
du ministre du commerce ;
Fait Alger, le 19 Moharram 1436 correspondant au
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada 12 novembre 2014.
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Amara BENYOUNES.
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania ANNEXE
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les conditions
et les modalits d'utilisation des additifs alimentaires METHODE DE DETERMINATION
dans les denres alimentaires destins l'alimentation DE LA TENEUR EN HYDROXYPROLINE
humaine ; - Viandes et produits base de viande -

Vu l'arrt interministriel du 19 Chaoual 1417 La prsente mthode dcrit une technique pour la
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de dtermination de la teneur en hydroxyproline de toutes
prparation et de commercialisation des merguez ; sortes de viandes et produits base de viande, y compris
la volaille.
Vu l'arrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles La mthode est applicable aux viandes et produits
applicables la composition et la mise la base de viande ne contenant pas plus de 0,5% (m/m)
consommation des produits carns cuits ; d'hydroxyproline.

33
10 Safar 1436
3 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69 23

1. DEFINITION Cette solution doit tre prpare le jour de son


utilisation.
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique. S'il est ncessaire de purifier le p-
dimthylamino-benzaldhyde (voir note 3 en 7.4), oprer
Teneur en hydroxyproline des viandes et produits comme suit :
base de viande : Teneur en hydroxyproline dtermine
selon le mode opratoire dcrit dans la prsente mthode. Prparer, chaud, une solution sature de p-
Elle est exprime en pourcentage en masse. dimthylamino-benzaldhyde dans de l'thanol 70 %
(VIV). Refroidir d'abord la temprature ambiante et
2. PRINCIPE enfin dans un rfrigrateur. Aprs environ 12 h, filtrer sur
un entonnoir de Buchner.
Hydrolyse d'une prise d'essai par l'acide sulfurique
105 C. Filtration, puis dilution de l'hydrolysat. Laver avec un peu d'thanol 70 % (V/V). Dissoudre
Oxydation de l'hydroxyproline par la chloramine T, de nouveau chaud, dans de l'thanol 70 % (V/V).
puis formation d'un compos de couleur rouge avec le p- Ajouter de l'eau glace et agiter soigneusement.
dimthylamino-benzaldhyde. Mesurage photomtrique Poursuivre ces oprations jusqu' l'obtention d'une
la longueur d'onde de 558 nm. quantit suffisante de cristaux blanc laiteux. Laisser une
nuit au rfrigrateur. Filtrer sur l'entonnoir de Buchner,
3. REACTIFS laver avec de l'thanol 50 % (V/V), puis scher sous
pression rduite en prsence d'oxyde de phosphore(V).
Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique
reconnue et de l'eau distille ou dminralise ou de l'eau
3.5 Hydroxyproline, solutions talons.
de puret, au moins, quivalente.

3.1 Acide sulfurique, solution c(H2S04) 3 mol/l. Dans une fiole jauge de 100 ml, prparer une
solution mre en dissolvant 50 mg d'acide
Ajouter 750 ml d'eau dans une fiole jauge de 2 L. hydroxypyrrolidine-carbonique (hydroxyproline) dans de
Ajouter lentement, en agitant, 320 ml d'acide sulfurique l'eau. Ajouter 1 goutte de la solution d'acide sulfurique
concentr (P 20 = 1,84 g/ml). Refroidir temprature (3.1) et complter au trait repre avec de l'eau. Cette
ambiante et complter au trait repre avec de l'eau. solution reste stable durant au moins 1 mois 4 C.

3.2 Solution tampon, pH = 6,8 compose de : Le jour de l'emploi, introduire dans une fiole jauge de
500 ml, 5 ml de la solution mre et complter au trait
26 g d'acide citrique monohydrat (C6H807,H20) ;
repre avec de l'eau. Prparer ensuite quatre (4) solutions
14 g d'hydroxyde de sodium ; talons en prlevant 10 ml, 20 ml, 30 ml et 40 ml
de cette solution et en compltant 100 ml avec de
78 g d'actate de sodium anhydre [Na(CH3C02)].
l'eau, afin d'obtenir respectivement des concentrations en
Dissoudre les ractifs dans 500 ml d'eau, et les hydroxyproline de 0,5 g/ml, 1 g/ml, 1,5 g/ml et 2
transfrer quantitativement dans une fiole jauge de 1 L. g/ml.
Ajouter 250 ml de propanol-l et ajuster au trait avec de
l'eau. 4. APPAREILLAGE

Cette solution reste stable durant plusieurs semaines, si Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
elle est conserve 4 C l'abri de la lumire. suit.
3.3 Ractif la chloramine T
4.1 Hachoir lectrique viande, lames horizontales
rotation rapide.
Dissoudre 1,41 g de N-chloro-p-tolune sulfonamide,
sel de sodium trihydrat (chloramine T) dans 100 ml de la
solution tampon (3.2). 4.2 Ballon hydrolyse, fond rond ou fond plat,
col large, d'environ 200 ml de capacit.
Cette solution doit tre prpare immdiatement avant
utilisation. 4.3 tuve de schage, rglable 105C 1C.

3.4 Ractif colorimtrique 4.4 Disques de papier filtre, de 12,5 cm de diamtre.

Dissoudre 10 g de p- dimthylamino-benzaldhyde dans 4.5 pH-mtre.


35 ml d'une solution d'acide perchlorique [60 % (m/m)],
puis verser lentement 65 ml de propanol-2. 4.6 Feuilles d'aluminium ou de plastique opaques.

34
10 Safar 1436
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69 3 dcembre 2014

4.7 Bain d'eau, rglable 60 C 0,5 C. 6.2 Viandes cuites et produits base de viande cuite

4.8 Spectromtre, permettant des mesurages une Homogniser l'chantillon dans le hachoir viande
longueur d'onde de 558 nm 2 nm, ou colorimtre (4.1). Garder l'chantillon homognis dans un flacon
photolectrique, quip d'un fitre interfrentiel avec ferm, tanche et rempli compltement, et le conserver de
absorption maximale 558 nm 2 nm. faon viter toute dtrioration et tout changement dans
sa composition. Analyser l'chantillon ds que possible,
4.9 Cuves en verre, de 10 mm de parcours optique. mais toujours dans les 24 h.

4.10 Balance analytique, prcise 0,001 g prs. 7. MODE OPERATOIRE

4.11 Fioles jauges, de 250 ml de capacit. 7.1 Prise d'essai

4.12 Verres de montre, de 5 6 cm de diamtre. Peser 0,001 g prs, dans le ballon hydrolyse (4.2),
environ 4 g de l'chantillon pour essai. S'assurer qu'il ne
5. ECHANTILLONNAGE reste pas de produit adhrant la paroi latrale du ballon.

Il est important que le laboratoire reoive un chantillon 7.2 Hydrolyse


rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage. 7.2.1 Ajouter 30 ml 1 ml de solution d'acide
sulfurique (3.1) dans le ballon. Le recouvrir avec un verre
Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins de montre (4.12) et placer l'ensemble dans l'tuve (4.3)
200 g. pendant 16 h (une nuit) 105 C.

Conserver l'chantillon de faon viter toute 7.2.2 Filtrer l'hydrolysat encore chaud sur un disque de
papier filtre (4.4), en recueillant le filtrat dans une fiole
dtrioration et tout changement dans sa composition.
jauge de 250 ml (4.11). Laver le papier filtre et le ballon
trois (3) fois avec des fractions de 10 ml de la solution
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
d'acide sulfurique (3.1) chaude, et ajouter les liquides de
ESSAI
lavage l27 1'hydrolysat. Complter au trait repre avec
de l'eau et mlanger.
6.1 Viandes crues et produits base de viande crue
7.3 Dveloppement de la coloration et mesurage de
Au moyen d'un couteau bien aiguis, dcouper la viande
l'absorbance
en petits cubes (d'environ 0,5 cm3 de volume, c'est--dire
d'environ 8 mm de ct) alors qu'elle est encore froide 7.3.1 l'aide d'une pipette, introduire, dans une fiole
(trs lgrement en dessous de 0 C). jauge de 250 ml (4.11), un volume V de l'hydrolysat
(7.2.2) permettant d'obtenir, aprs dilution 250 ml, une
Placer l'chantillon dans un rcipient que l'on bouchera concentration en hydroxyproline comprise entre 0,5 g/ml
hermtiquement, ou bien l'emballer sous pression rduite et 2 glml. Ajuster au trait repre avec de l'eau.
dans un sac en plastique thermorsistant. Chauffer ensuite
le rcipient et l'chantillon de manire maintenir une Note 2 - Dans la plupart des cas, V sera de l'ordre de 5
temprature minimale de 70 C pendant au moins 30 min. ml 25 ml, selon la quantit de tissu conjonctif prsente
Laisser refroidir et oprer comme en (6.2). dans l'chantillon.

Au cours des tapes suivantes de la prparation de 7.3.2 Introduire 4 ml de cette solution (7.3.1) dans un
l'chantillon pour essai et de la pese de la prise d'essai, tube essais, puis ajouter 2ml du ractif la chloramine T
s'assurer que l'chantillon reste bien mlang, et, en (3.3). Mlanger et laisser la temprature ambiante durant
particulier, que la graisse et les portions fluides soient 20 min 1 min.
rgulirement rparties.
7.3.3 Ajouter 2 ml du ractif colorimtrique (3.4),
Note 1 - Ce traitement par la chaleur permet d'attendrir mlanger soigneusement et coiffer le tube avec une feuille
le tissu conjonctif cru et de le rendre moins rsistant d'aluminium ou de plastique (4.6).
l'opration d'homognisation au moyen du hachoir.
7.3.4 Porter rapidement le tube dans le bain d'eau (4.7)
Cependant, ce traitement peut galement provoquer la rgl 60 C, et chauffer pendant 20 min exactement.
sparation d'un liquide contenant de la glatine. La
prsence de graisse peut demander galement une 7.3.5 Refroidir le tube pendant au moins 3 min l'eau
attention particulire lors de la prparation d'un courante, et le laisser la temprature ambiante pendant
chantillon homogne. 30 min.

35
10 Safar 1436
3 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69 25

7.3.6 Mesurer l'absorbance 558 nm 2 nm par rapport 9.1 Rptabilit


l'eau dans une cuve en verre (4.9), au moyen du
spectromtre ou du colorimtre photolectrique quip La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
d'un filtre interfrentiel (4.8). indpendants, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
7.3.7 Soustraire l'absorbance mesure partir de l'essai matriau identique soumis l'essai dans le mme
blanc (7.4) et lire la concentration en hydroxyproline de laboratoire et par le mme oprateur utilisant le mme
l'hydrolysat dilu sur la courbe d'talonnage obtenue appareillage et dans un court intervalle de temps, ne
comme dcrit en (7.5). doit pas tre suprieure la valeur de r donne par la
formule :
7.4 Essai blanc

Effectuer, en double, les oprations dcrites de (7.3.2) r = 0,0131 + 0,0322 wh
(7.3.7), mais en remplaant l'hydrolysat dilu par de l'eau.
O
Note 3 - Si l'absorbance de l'essai blanc dpasse 0,04,
prparer un nouveau ractif colorimtrique (3.4) et, si
ncessaire, purifier le p- dimthylaminobenzaldhyde wh : est la moyenne des deux rsultats d'essai, pour la
(3.4). teneur en hydroxyproline, exprime en pourcentage en
masse.
7.5 Courbe d'talonnage
Rejeter les deux rsultats si la diffrence dpasse la
7.5.1 Reprendre le mode opratoire dcrit de (7.3.2) valeur indique ci-dessus, et raliser deux nouvelles
(7.3.7) inclus, mais avec 4 ml de chacune des quatre dterminations.
solutions talons dilues d'hydroxyproline (3.5) au lieu de
1'hydrolysat dilu.
9.2 Reproductibilit
7.5.2 Porter sur un graphique les valeurs des
absorbances mesures et corriges pour l'essai blanc, en La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
fonction des concentrations correspondantes des solutions individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
talons d'hydroxyproline. Runir les points et l'origine en matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
traant une courbe aussi droite que possible.
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
Etablir une nouvelle courbe d'talonnage pour chaque appareillages diffrents, ne doit pas tre suprieure la
srie d'analyse. valeur de R donne par la formule :
8. Calcul
R = 0,0195 + 0,0529 wh
Pour chaque prise d'essai, calculer la teneur en
hydroxyproline, en pourcentage en masse, l'aide de la O
formule :
wh est la moyenne des deux rsultats d'essai, pour la
6,25 c teneur en hydroxyproline, exprime en pourcentage en
wh = masse.
mxV

wh : est la teneur en hydroxyproline, exprime en


pourcentage en masse, obtenue partir de la formule ;
c : est la concentration en hydroxyproline, en micro-
grammes par millilitre, de l'hydrolysat dilu, lue sur la
courbe d'talonnage ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai (7.1) ;
v : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote de
l'hydrolysat prleve pour la dilution 250 ml (7.3.1).
Exprimer le rsultat 0,01 % prs.

9. Fidlit

La fidlit de cette mthode a t tablie par un essai


interlaboratoires.
Le niveau de probabilit de 95 % a t retenu pour
obtenir les valeurs de rptabilit et de reproductibilit.

36
17 Joumada El Oula 1436
8 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12 17

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 30 Moharram 1436 correspondant au
23 novembre 2014.
Amara BENYOUNES.

ANNEXE
Mthode de recherche des polyphosphates
Arrt du 30 Moharram 1436 correspondant au 23 Viandes et produits base de viande
novembre 2014 rendant obligatoire la mthode
de recherche des polyphosphates dans les viandes La prsente mthode spcifie un mode opratoire pour
et les produits base de viande. la recherche des polyphosphates linaires condenss dans
les viandes et les produits base de viande, aprs
sparation par chromatographie en couche mince.
Le ministre du commerce, Etant donn que les phosphates sont progressivement
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435 hydrolyss par les enzymes prsents dans les viandes ou
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des les produits base de viande et au cours du traitement par
membres du Gouvernement ; la chaleur des viandes ou des produits base de viande, la
prsente mthode s'applique uniquement la recherche
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, des polyphosphates ajouts qui sont encore prsents dans
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la l'chantillon au moment de la recherche.
rpression des fraudes ;
1. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions Extraction des viandes ou des produits base de viande
du ministre du commerce ; par l'acide trichloractique. Dfcation du srum obtenu
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada au moyen d'un mlange thanol/oxyde dithylique.
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Sparation des phosphates par chromatographie en couche
l'valuation de la conformit ; mince. Recherche des polyphosphates par pulvrisation
avec des ractifs pour le dveloppement de la couleur.
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les conditions 2. REACTIFS
et les modalits d'utilisation des additifs alimentaires dans
les denres alimentaires destines l'alimentation Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
humaine ; reconnue. L'eau doit tre distille ou une eau de puret, au
moins, quivalente.
Vu l'arrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de Pour les besoins de cette mthode les ractifs suivants
prparation et de commercialisation des merguez ; sont utiliss :
Vu l'arrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au 2.1 Acide trichloractique.
26 juillet 2000 relatif aux rgles applicables la 2.2 Oxyde dithylique.
composition et la mise la consommation des produits
carns cuits ; 2.3 Ethanol, 95 % (V/V).
2.4 Cellulose en poudre, de qualit pour
Arrte : chromatographie en couche mince.
Article 1er. En application des dispositions de 2.5 Amidon soluble.
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, 2.6 Mlange de rfrence
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode de recherche des Dissoudre, dans 100 ml d'eau :
polyphosphates dans les viandes et les produits base de 200 mg de dihydrognophosphate de sodium
viande. monohydrat (NaH2PO4.H2O),

Art. 2. Pour la recherche des polyphosphates dans les 300 mg de diphosphate ttrasodique dcahydrat
(Na4P2O7.10H20),
viandes et les produits base de viande, les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et 200 mg de triphosphate pentasodique (Na5P3O10), et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la 200 mg d'hexamtaphosphate de sodium
mthode jointe en annexe du prsent arrt. (NaPO3) x [x > 10].
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire Le mlange de rfrence reste stable 4 C durant, au
lorsqu'une expertise est ordonne. moins, 4 semaines.

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17 Joumada El Oula 1436
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12 8 mars 2015

2.7 Solvant de dveloppement 3.8 Cuve de dveloppement, de dimensions


appropries, avec couvercle fermant bien, en vue du
Mlanger 140 ml d'alcool isopropylique, 40 ml d'une dveloppement du chromatogramme en couche mince.
solution d'acide trichloractique 135 g/l et 0,6 ml de
solution d'hydroxyde d'ammonium, P20 = 0,90 g/ml, 3.9 Sche-cheveux, pouvant produire soit un courant
environ 25 % (m/m). d'air la temprature ambiante, soit un courant d'air
tide.
Conserver le solvant dans un flacon hermtiquement
clos. 3.10 Pulvrisateur.

2.8 Ractif de pulvrisation I 3.11 Etuve, rglable 60 C.


Mlanger des volumes gaux d'une solution
de molybdate d'ammonium ttrahydrat 4. ECHANTILLON
[(NH4)6MO7O24.4H2O] 75 g/l et d'acide nitrique
concentr, P20 = 1,40 g/ml dissoudre 10g d'acide tartrique 4.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins
dans 100 ml de ce mlange. 200 g.

Prparer le ractif le jour de son utilisation. 4.2 Prparer l'chantillon pour essai le jour de son
arrive au laboratoire.
2.9 Ractif de pulvrisation II
5. MODE OPERATOIRE
Dissoudre 0,5 g d'acide amino-1 naphtol-2 sulfonique-4
dans un mlange form de 195 ml d'une solution di sulfite 5.1 Prparation des plaques couche mince
de sodium ( mtabisulfite de sodium ; Na2 S2O5) 150 g/l
et 5 ml d'une solution de sulfite de sodium (Na2SO3) Dissoudre 0,3 g d'amidon (2.5) dans 90 ml d'eau
200 g/l dissoudre 40 g d'actate de sodium trihydrat bouillante. Refroidir, ajouter 15 g de poudre de cellulose
(NaOOCCH3.3H2O) dans ce mlange. (2.4) et homogniser dans le mlangeur de laboratoire
(3.3) durant 1 min.
Conserver le ractif au rfrigrateur dans un flacon brun
hermtiquement clos. Jeter cette solution aprs une Appliquer ce mlange sur des plaques de verre (3.1) au
semaine. moyen du dispositif de pulvrisation (3.2) et ajuster afin
d'obtenir une couche de 0,25 mm.
Note- Observer toutes les prcautions appropries la
Scher les plaques au moyen d'un courant d'air durant
mise en uvre du mode opratoire spcifi dans la
60 min la temprature ambiante sans les dplacer et
prsente mthode.
ensuite les chauffer durant 10 min 100 C.
3. APPAREILLAGE Conserver les plaques dans le dessiccateur (3.4).
Matriel courant de laboratoire, et notamment : Il est galement possible d'utiliser des plaques prtes
l'utilisation en couche mince (3.2).
3.1 Plaques de verre, soigneusement dgraisses,
10 cm x 20 cm. 5.2 Prparation de l'chantillon pour essai
3.2 Dispositif de pulvrisation, pour la prparation de Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
couches de 0,25 mm d'paisseur. Si un tel dispositif n'est passages dans le hachoir viande (3.5) et par mlange.
pas disponible, des plaques prtes l'utilisation en couche Garder l'chantillon dans un flacon ferm, tanche et
mince de 0,25 mm d'paisseur peuvent tre utilises rempli compltement, et le conserver, si ncessaire, au
condition que l'amidon soit utilis comme liant. Des rfrigrateur. Analyser l'chantillon ds que possible aprs
plaques contenant du gypse (sulfate de calcium) ne homognisation, mais toujours dans les 5 h.
conviennent pas.
5.3 Prparation du srum
3.3 Mlangeur de laboratoire.
5.3.1 Ptrir 50 g de l'chantillon pour essai (5.2) avec 15
3.4 Dessiccateur. ml d'eau entre 40 et 60 C dans un bcher, au moyen d'une
spatule ou d'un agitateur aplati, jusqu' l'obtention d'une
3.5 Hachoir mcanique viande, type de laboratoire, masse homogne, mais en tout cas en moins de 5 min.
muni d'une plaque perfore dont les trous ont un diamtre
ne dpassant pas 4 mm. 5.3.2 Ajouter 10 g d'acide trichloractique (2.1) et
ensuite mlanger soigneusement.
3.6 Papier filtre pliss, de 15 cm de diamtre.
5.3.3 Placer immdiatement au rfrigrateur et l'y
3.7 Micropipette, de 1 1, ou microseringue avec vis laisser durant 1 h, puis rassembler, sur papier filtre pliss
micromtrique et bout courb en verre. (3.6), le srum qui s'est spar par dcantation.

38
17 Joumada El Oula 1436
8 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12 19

5.3.4 Si le filtrat est trouble, agiter une fois avec un gal 5.5.3 Laisser refroidir la plaque la temprature
volume d'oxyde dithylique (2.2). Eliminer la couche ambiante et la replacer ensuite sous la hotte. Pulvriser la
thre au moyen d'une pipette troite et ajouter, la plaque lgrement, mais de faon uniforme, au moyen du
phase aqueuse, un gal volume d'thanol (2.3). Agiter ractif de pulvrisation II (2.9).
durant 1 min. Laisser reposer le mlange durant quelques
Des taches bleues apparaissent immdiatement.
minutes et filtrer sur papier filtre pliss (3.6).
Note- La pulvrisation avec le ractif II n'est pas
5.4 Sparation par chromatographie absolument ncessaire. Cependant, les taches d'un bleu
intense produites par ce ractif amliorent
5.4.1 Verser le solvant de dveloppement (2.7) dans la considrablement la dtection.
cuve de dveloppement (3.8) jusqu' une hauteur de 5 10
mm au-dessus du fond et fermer la cuve avec son 6. INTERPRETATION
couvercle. Laisser reposer durant, au moins, 30 min
Comparer les distances de migration des taches de
temprature ambiante, l'abri de la lumire solaire et des phosphate obtenues partir de l'chantillon avec celles
courants d'air. des phosphates du mlange de rfrence.

5.4.2 Appliquer 3 1 du srum, ou 6 1 si le mode Une tache d'ortophosphate est toujours prsente. Si
opratoire de (5.3.4) a t utilis pour obtenir un mlange l'chantillon contient des phosphates condenss, une tache
de diphosphate et/ou des taches de phosphates plus haut
limpide, la couche de cellulose (5.1) sur une ligne trace
degr de polymrisation sont visibles.
au crayon environ 2 cm de l'extrmit. Obtenir des
taches troites en appliquant 1 1 la fois. Les valeurs du RF des phosphates dans le mlange de
rfrence sont :
Utiliser, pour le schage, un courant d'air tide produit orthophosphate de 0,80 0,90 ;
par le sche-cheveux (3.9).
diphosphate (pyrophosphate) de 0,50 0,60 ;
Note- Eviter l'air chaud en raison du risque d'hydrolyse triphosphate de 0,25 0,35 ;
des phosphates. hexamtapolyphosphate (sel de Graham) 0.

5.4.3 Dans les mmes conditions, appliquer 3 l du En gnral, les valeurs du RF des polyphosphates dans
les extraits de viandes et de produits base de viande sont
mlange de rfrence (2.6) sur la plaque, une distance de
quelque peu infrieures.
1 1,5 cm partir de la tache de l'chantillon, mais
exactement la mme distance de l'extrmit. Note- Les corrections pour les diffrences dans les
valeurs du RF des phosphates dans l'chantillon extrait et
5.4.4 Retirer le couvercle de la cuve et, rapidement mais dans le mlange de rfrence peuvent tre obtenues en
avec prcaution, placer la plaque de cellulose dans la plaant, sur la mme plaque, un extrait de l'chantillon de
cuve. Remettre immdiatement le couvercle. Dvelopper viande frache. Etant donn que la viande frache contient
la plaque la temprature ambiante, l'abri de la lumire uniquement des monophosphates, le pourcentage de
solaire et des courants d'air. correction peut tre obtenu en comparant les distances de
migration de cette tache talant avec la tache
correspondante du mlange de rfrence.
5.4.5 Poursuivre le dveloppement jusqu' ce que le
solvant ait effectu une ascension d'environ 10 cm partir
du trait de crayon. Retirer la plaque de la cuve et laisser
scher soit durant 10 min l'tuve (3.11) rgle 60 C,
soit durant 30 min la temprature ambiante, soit au
moyen d'un courant d'air.

5.5 Recherche des phosphates

5.5.1 Placer la plaque verticalement sous une hotte et


pulvriser la plaque lgrement, mais de faon uniforme,
au moyen du ractif de pulvrisation I (2.8).

5.5.2 Scher la plaque au moyen d'un courant d'air tide


produit par le sche-cheveux. Chauffer ensuite durant, au
moins, 1h dans une tuve rgle 100 C en vue
d'liminer les dernires traces d'acide nitrique. Retirer la
plaque de l'tuve et vrifier l'absence de l'odeur piquante
de l'acide nitrique.

39
9 Rajab 1436
6 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 22 29 avril 2015

Art. 2. Pour la dtection des agents colorants dans


les viandes et les produits base de viande par
chromatographie en couche mince, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet, doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal


officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 23 Joumada El Oula 1435 correspondant
au 25 mars 2014.
MINISTERE DU COMMERCE Mustapha BENBADA.

Arrt du 23 Joumada El Oula 1435 correspondant au
25 mars 2014 rendant obligatoire la mthode de ANNEXE
dtection des agents colorants dans les viandes
et les produits base de viande par METHODE DE DETECTION DES AGENTS
chromatographie en couche mince. COLORANTS DANS LES VIANDES ET LES
PRODUITS A BASE DE VIANDE PAR
CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE
Le ministre du commerce,
1. DOMAINE D'APPLICATION
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou El Kaada
1434 correspondant au 11 septembre 2013 portant La prsente mthode spcifie une technique de
nomination des membres du Gouvernement ; dtection des agents colorants synthtiques solubles dans
l'eau, dans les viandes et produits base de viande par
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, chromatographie en couche mince.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; Les agents colorants suivants peuvent tre dtects avec
cette mthode :
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
Tartrazine
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; Jaune de quinoline

Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada Jaune-orange FCF


1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Amarante
l'valuation de la conformit ; Ponceau 4R
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania Erythrosine
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les modalits Bleu Patent V
d'utilisation des additifs alimentaires dans les denres
alimentaires destins l'alimentation humaine ; Bleu indigo