Escola Superior de Sade

40114 BIOQUMICA E BIOFSICA

Aulas Prticas de Bioqumica

MANUAL DE LABORATRIO

Licenciatura em Enfermagem

1 SEMESTRE

2017/2018
 Docentes
Graa Rocha (grrocha@ua.pt)
Mrio Simes (msimoes@ua.pt)

Calendarizao
DATA Sumrio
Apresentao do mdulo de Bioqumica (aulas prticas).

Regras de segurana no Laboratrio de Qumica.

25 e 29 de Breve anlise dos trabalhos prticos.

Setembro O caderno de laboratrio.

Avaliao das aulas prticas.

Formao de grupos.

02 Out. e 06 Out. Trabalho 1. Preparao de solues por dissoluo e por diluio

09 Out. e 13 Out. Trabalho 2. Determinao de Vitamina C num comprimido comercial

16 Out. e 20 Out. Discusso de resultados

23 Out. e 27 Out. Trabalho 3. Propriedades qumicas de alguns hidratos de carbono

30 Out. e 03 Nov. Trabalho 4. Dilise de uma mistura de amido e de glucose

06 Nov. e 10 Nov. Trabalho 5. Aminocidos: propriedades qumicas

Discusso de resultados.
13 Nov. e 17 Nov.
Preparao para o teste escrito sobre a componente prtica.

20 Nov. Teste escrito sobre os trabalhos prticos

MTODOS DE ENSINO APRENDIZAGEM

Aulas prticas
Os trabalhos prticos so realizados em grupos de 2 estudantes.
Cada trabalho prtico planeado e executado pelos estudantes durante o tempo estabelecido para
o efeito (2 horas).

Manual de laboratrio
Cada estudante dever munir-se do Manual de Laboratrio Aulas prticas de Bioqumica
2017/2018, disponvel na plataforma de e-learning da UA, onde so apresentados os trabalhos
prticos.

2
Caderno de laboratrio
Nas aulas prticas, cada estudante dever ter um caderno de laboratrio (CL).
O CL serve para organizar/estruturar o plano de cada trabalho prtico.
O CL dever ser ainda o caderno onde regista todas as suas observaes e resultados no decurso
da realizao de cada trabalho prtico.

Avaliao
A avaliao das aulas prticas do tipo contnuo e inclui diversos momentos de avaliao:
(A) Assiduidade, pontualidade, desempenho, participao e preparao da aula e registos
efetuados;
(B) Teste escrito sobre os trabalhos prticos a realizar no dia 20 de Novembro de 2017.

A nota das aulas prticas calculada da seguinte forma:

Nota da prtica = (A x 0,60) + (B x 0,40)

As respostas aos questionrios, entregues no final de cada aula, sero classificadas na escala de
0-20 valores.

De acordo com o Regulamento de Estudos da Universidade de Aveiro os estudantes dos cursos

de licenciatura tm que assistir a pelo menos 80% das aulas da componente prtica.

Notas
1- A aprovao UC exige uma nota mnima de 9,5 valores na componente prtica (que
normalmente se guarda para o ano letivo seguinte, em caso de reprovao UC).
2- A primeira aula, de apresentao e de formao de grupos, ocorrer de acordo com a seguinte
distribuio:
- As turmas C e Z tero aula de apresentao s 09:30 horas no dia 25 de Setembro;
- As turmas D e Y tero aula de apresentao s 11:00 horas no dia 25 de Setembro;
- As turmas A e B tero aula de apresentao s 15:00 horas no dia 25 de Setembro;

3- As aulas prticas da componente Bioqumica decorrem nos Laboratrios do Complexo

pedaggico, cientfico e tecnolgico: Laboratrios 23.3.25; 23.3.26.

3
 REGRAS GERAIS DE SEGURANA NO LABORATRIO
Conduta geral
No deve correr nem brincar no laboratrio.
No caso de ocorrer um acidente fundamental que mantenha a calma e saiba qual a primeira
atitude a tomar.
Uma vez tomadas as primeiras medidas de segurana (descritas ao longo deste texto), informe
imediatamente o docente do ocorrido.

Higiene laboratorial
No permitido comer, beber ou fumar no laboratrio.
Deve lavar as mos frequentemente sempre que trabalhe com produtos qumicos e, em
particular, se derramar algum produto sobre a pele.

Proteo corporal
obrigatrio o uso de bata e culos de segurana no laboratrio.
Deve usar luvas de proteo e utilizar o nicho sempre que manipular substncias
1
potencialmente perigosas .

Preveno contra incndios

Tenha particular ateno ao manuseamento de substncias inflamveis. Nunca aquea
2
solventes inflamveis em placas de aquecimento; use sempre banho de gua para esse fim .
Conhea a localizao e modo de funcionamento do extintor do laboratrio. No se esquea
que, em caso de incndio, deve dirigir o jacto do extintor para a base das chamas.
Conhea a localizao da manta que serve para extinguir incndios no vesturio.

Comportamento em caso de alarme de incndio

O sistema de deteo e alarme de incndios acionado automaticamente atravs dos sensores
distribudos pelo edifcio. Quando o alarme for acionado proceda do seguinte modo:

1 Consulte sempre os rtulos dos frascos; em caso de dvida, coloque a questo ao docente.
2 Trata-se apenas de uma regra geral. No entanto, h que ter em ateno que determinados reagentes inflamam (ou
explodem) em contacto com a gua, com outros reagentes especficos ou mesmo com o ar, pelo que fundamental a
leitura atenta do rtulo de um produto desconhecido.
4
i) Desligue todos os aparelhos eltricos e coloque em segurana todo o material que estiver a
utilizar. Estas tarefas devem ser efetuadas o mais rapidamente possvel mas sem pnico, de
modo a no causar mais acidentes.
ii) Dirija-se rapidamente, mas sem atropelos nem pnico, para a porta de sada do Edifcio e
aguarde no exterior. S deve entrar de novo no Edifcio quando para tal seja autorizado.

Note bem:
i) A observao destas regras absolutamente obrigatria.
ii) Esporadicamente so executados treinos para testar os sistemas de emergncia. Mesmo nestas
alturas, todas as normas acima referidas devem ser observadas como se duma situao real
se tratasse!

Tratamento em caso de acidente

Cortes: deve lavar imediatamente com gua e desinfetar o ferimento. Tenha cuidado para que
nenhum pedao de vidro ou qualquer corpo estranho fique no ferimento.
Queimaduras (calor, cidos ou bases): lave abundantemente a rea atingida com gua e
notifique o docente.

Conservao do laboratrio e do material

Deve manter limpas e livres de qualquer obstculo as zonas de circulao do seu laboratrio.
Deve manter a bancada limpa.
O material de vidro que utilizar deve ser convenientemente lavado e arrumado no fim do
trabalho.
Os frascos de reagentes e solventes, uma vez usados, devem ser tapados e postos no seu lugar.
Os aparelhos devem ser utilizados e protegidos respeitando as instrues de operao.
Sempre que danificar algum tipo de material informe imediatamente o docente, para que o
mesmo possa ser substitudo ou reparado.

Simbologia usada na rotulagem de produtos qumicos

A utilizao de produtos qumicos deve ser efetuada com cuidado e com conhecimento dos
riscos associados a cada produto. Os rtulos dos reagentes apresentam um ou mais smbolos que
do uma indicao sobre os perigos especficos desse produto. Para que os produtos sejam
utilizados com o devido cuidado, indispensvel conhecer o significado de cada smbolo.
5
 Apresentam-se aqui os smbolos mais vulgares:

EXPLOSIVO INFLAMVEL OXIDANTE

TXICO IRRITANTE CORROSIVO POLUENTE

Bibliografia
Guia de Segurana, Pedro Domingues, Mrio Simes, Departamento de Qumica, Universidade
de Aveiro
http://www.ilpi.com/msds/index.htm
http://www.sigma-aldrich.com/msds

6
 REGRAS PARA APRESENTAO E TRATAMENTO DE RESULTADOS EXPERIMENTAIS

1.1 Algarismos significativos

A escolha do nmero de algarismos expressos num resultado tem de ser feita com muito
cuidado. Suponha que pesou uma substncia numa balana em que a menor diviso da escala
0,0001 g. Deve indicar a massa da substncia como, por exemplo: 2,4093 0,0001 g. Se utilizou
uma balana em que a menor diviso da escala 0,1 g a massa da substncia tem de ser indicada
como, por exemplo, 2,4 0,1 g, ou seja, as quantidades determinadas experimentalmente devem ser
sempre indicadas de modo a que apenas o ltimo digito seja incerto.
Algarismos significativos - nmero total de algarismos incluindo o primeiro algarismo incerto e
excluindo os zeros esquerda do primeiro dgito diferente de zero (Tabela 1.1).
Tabela 1.1
Notao Algarismos
Valor
cientfica significativos
12,302 1,2302 101 5
0,020 2,0 10-2 2
200 2,00 102 3
2,0 102 2
2 102 1

No caso dos zeros situados direita podem surgir ambiguidades como, por exemplo, quando se
afirma que a massa de um corpo de 200 g. Existem trs interpretaes possveis para esta
afirmao: (a) a massa do corpo situa-se entre 100 e 300 g, (b) a massa do corpo situa-se entre 190
e 210 g, (c) a massa do corpo situa-se entre 199 e 201 g. Como se pode ver na Tabela 1.1 se
expressarmos essa massa em notao cientfica essa ambiguidade desaparece.

1.1.1 Clculos com algarismos significativos

frequentemente necessrio efetuar clculos numricos com resultados experimentais, para o
que fundamental saber decidir com quantos algarismos significativos se deve apresentar o valor
calculado para no escrevermos que a massa volmica de uma substncia de 2,19298 g cm-3,
utilizando como dado experimental um volume de 1,14 cm3 e uma massa de 2,5 g. Neste caso o
valor deveria ser apresentado com dois algarismos significativos: 2,2 g cm-3.
Adio e subtrao - O nmero de casas decimais do resultado deve ser igual ao menor nmero
de casas decimais das parcelas. Por ex. na adio 20,4+1,322+83=104,722, o resultado final dever
ser apresentado como 105.
7
 Multiplicao e diviso - O nmero de algarismos significativos do resultado deve ser igual ao
menor nmero de algarismos significativos de cada uma das parcelas. Por ex. 2,5
= 2,19298
1,14

dever ser apresentado como 2,2. De igual modo, o resultado de 2,5 x 1,13 = 2,825 dever ser
apresentado como 2,8.

1.1.2 -Arredondamentos
Quando se torna necessrio arredondar um resultado devem seguir-se as seguintes regras:
a. Se o primeiro algarismo a ser eliminado for igual ou superior a 5 aumenta-se uma
unidade ao algarismo que o precede (1,378 ficar 1,4)
b. Se o primeiro algarismo a ser eliminado for inferior a 5 mantm-se o algarismo que o
precede (1,348 ficar 1,3)

1.2 - Medies e Erros

Os erros que podem afetar um resultado experimental so essencialmente de dois tipos:
Erros sistemticos ou determinados Fazem com que as medidas feitas estejam
consistentemente acima ou abaixo do valor real e so principalmente devidos a erros instrumentais
(aparelho mal calibrado), utilizao de reagentes impuros, utilizao de material de vidro mal
aferido, perda de amostra durante a anlise, etc.
Estes erros podem ser eliminados fazendo uma utilizao correta do material e equipamento.
Erros aleatrios, indeterminados ou acidentais - So variveis em grandeza e sinal e so
essencialmente devidos ao operador (por ex.: utilizao incorreta de material de vidro e
equipamento). Estes erros podem tambm ter a sua origem em condies ambientais variveis ao
longo das experincias, como variaes de humidade, presso e temperatura, crises ssmicas, caso
os resultados experimentais sejam sensveis s variaes de algum destes parmetros.
Estes erros no so passveis de ser eliminados. Contudo, podero ser atenuados. Tendem a
diminuir medida que o nmero de determinaes aumenta ou que o operador se torna mais
experiente.

1.3 -Preciso e exatido

Os resultados experimentais esto sempre sujeitos a erros e para decidirmos se um determinado
resultado final merece ou no confiana temos de considerar a sua preciso e exatido.
Preciso - uma medida da proximidade entre os resultados de diferentes medidas
experimentais de uma mesma quantidade.
8
 Exatido - uma medida da proximidade entre o resultado experimental e o valor correto (ou
mais provvel) dessa quantidade.
Estes dois conceitos esto ilustrados nas Tabelas 1.2 e 1.3 em que se apresentam,
respetivamente, os resultados obtidos por quatro operadores diferentes na determinao da
densidade de um pedao de vidro (valor correto 2600 kg m-3), e a preciso e exatido dos
resultados.

Tabela 1.2
Operador Ensaio 1 Ensaio 2 Ensaio 3 Mdia Desvio Padro
1 2580 2590 2600 2590 10
2 2440 2460 2450 2450 10
3 2610 2760 2460 2610 150
4 2880 2620 2750 2750 130

Tabela 1.3
Exato No exato
Preciso Operador 1 Operador 2
2590 10 2450 10
Impreciso Operador 3 Operador 4
2610 150 2750 130

1.3.1 - Avaliao da exatido: Erro absoluto e erro relativo

Quando se conhece o valor verdadeiro de uma grandeza possvel avaliar a exatido do
resultado atravs do erro absoluto e do erro relativo.
Erro absoluto - diferena entre o valor verdadeiro e o valor encontrado.
O erro absoluto tem pouco interesse e por isso o que se utiliza mais frequentemente para avaliar
a exatido de um resultado o erro relativo.
Erro relativo - quociente entre o erro absoluto e o valor verdadeiro, expresso frequentemente
em percentagem. muito usado na prtica e est sobretudo ligado medida da exatido de
determinado resultado.
Er= |xi-|| / *100

1.3.2 - Avaliao da preciso: desvio mdio e desvio padro

Suponha que efetuou um nmero n de medidas de uma mesma grandeza e obteve os resultados
x1, x2, x3, ...
9
 A mdia aritmtica definida como n
xi
x= i=1
n

1 n
O desvio mdio definido como dm = xi x
n i =1

n
(x i x) 2
i =1
O desvio padro definido como S=
n 1

O desvio padro fornece indicaes sobre a preciso de um conjunto de medidas. Um valor

pequeno indica que as medidas esto mais concentradas em torno do valor mais provvel enquanto
um valor elevado indica uma disperso grande nos resultados.

1.4 - Grandezas e Unidades

O "Sistema Internacional de Unidades (SI)" um sistema constitudo por trs classes de
unidades: Unidades de base, Unidades suplementares e Unidades derivadas.
As unidades de base so independentes do ponto de vista dimensional e esto indicadas na Tabela
1.4.

Unidades suplementares - constituem uma classe contendo duas unidades - radiano - unidade
de ngulo plano e - esterradiano - unidade de ngulo slido.

Unidades derivadas - obtm-se a partir das unidades de base e/ou das unidades suplementares,
por meio de expresses algbricas que utilizam os smbolos matemticos de multiplicao e de
diviso (por ex. metro cbico como unidade da grandeza Volume).

Tabela 1.4
Grandeza Unidade Smbolo
Comprimento metro m
Massa quilograma kg
Tempo segundo s
Corrente elctrica ampere A
Temperatura kelvin K
Quantidade de matria mole mol
Intensidade luminosa candela cd

10
 exceo do quilograma, em que a unidade passa a ser o grama, os nomes e smbolos dos
mltiplos e submltiplos decimais das unidades SI obtm-se por meio dos prefixos seguintes
(Tabela 1.5):

Tabela 1.5
Mltiplos Submltiplos
Prefixo Smbolo Valor Prefixo Smbolo Valor
18
exa E 10 deci d 10-1
peta P 1015 centi c 10-2
tera T 1012 mili m 10-3
giga G 109 micro 10-6
mega M 106 nano n 10-9
quilo k 103 pico p 10-12
hecto h 102 fento f 10-15
deca da 101 ato a 10-18

11
 1. Preparao de solues por dissoluo e por diluio

Objetivos
Ilustrar o manuseamento de material de laboratrio.
Ilustrar a preparao de solues.

Introduo
Uma soluo uma mistura homognea de dois ou mais componentes, o facto de ser
homognea significa que a sua composio a mesma em toda a amostra. Chama-se solvente ao
componente predominante na mistura, e solutos aos componentes existentes em menor quantidade.
Concentrao de uma soluo a quantidade de soluto presente numa dada quantidade de
soluo. A concentrao pode exprimir-se em vrias unidades, sendo as mais comuns:

moles de soluto
Molaridade = mol/L ou mol.dm- 3
volume de soluo

Massa de soluto
Percentagem em massa do soluto = 100%
Massa do soluto + Massa de solvente

Em geral, para preparar uma soluo de concentrao conhecida, dissolve-se uma quantidade
pr-determinada de soluto num volume rigoroso de solvente. Se o soluto for um padro primrio e
as medies de massa e volume forem rigorosas, a concentrao da soluo ser rigorosamente
conhecida.
Podemos preparar solues diludas por diluio de solues mais concentradas. Neste caso,
para obter uma soluo de concentrao C2 necessrio pipetar um volume V1 da soluo mais
concentrada (de concentrao C1) para um balo de volume V2, e completa-se o volume deste at
ao trao com o solvente.
Neste trabalho, pretende-se preparar uma soluo de cloreto de sdio (NaCl) por pesagem e
dissoluo, e solues menos concentradas por diluio desta.

Observaes:
1- A quantidade de soluto a ser pesada deve ser calculada de acordo com a concentrao pretendida.
2- Verter para um recipiente pequeno e limpo (copo), uma quantidade suficiente de composto. Ser desse
copo que sero retiradas as quantidades necessrias. NOTA: No deve introduzir qualquer esptula ou
similar dentro do frasco original que contm o composto.
12
3- O NaCl e o cloreto de potssio (KCl) so padres primrios. Devem ser previamente secos na estufa,
para remover quaisquer molculas de gua de hidratao.
4- Para pesar quantidades rigorosas deve usar-se uma balana analtica de preciso 0,0001 g. (Nota: para
pesagens menos rigorosas pode usar-se uma balana tcnica de preciso 0,01 g).

Transferncia quantitativa
Transferncia quantitativa, significa que todo o material que transferido de
um lugar para outro tem que seguir um percurso. Por exemplo,
todas as partculas de um slido tm que ser transferidas do
papel de pesagem (ou do vidro de relgio) para um copo de
precipitao. Esta operao tem que ser realizada com cuidado para transferir
completamente o slido para o copo de precipitao. Finalmente, o papel (ou o
vidro de relgio) dever ser lavado para o copo de precipitao, para remover todos os vestgios do
slido.
Se est a transferir uma soluo ou mistura heterognea para outro recipiente,
lave o mesmo com o solvente para ter a certeza que a transferncia
quantitativa. As lavagens devero ser transferidas para o segundo recipiente
juntamente com o resto da mistura ou soluo.
Um balo volumtrico usado para preparar uma soluo de volume fixo. Para preparar uma
soluo, primeiro dissolva o material slido completamente, numa quantidade de gua menor que a
requerida para completar o balo volumtrico at marca indicadora.

Preparao de solues rigorosas por dissoluo

1- Pesar rigorosamente numa balana analtica a massa de soluto. Usar um copo (ou vidro de
relgio) e uma esptula, bem limpos e secos.
2- Adicionar gua destilada. Dissolver bem o soluto. Aquecer se necessrio.

13
3- Transferir a soluo para um balo volumtrico de capacidade igual ao volume de soluo
pretendido. Lavar o copo (3 vezes) com pequenas pores de gua destilada e deitar o lquido de
lavagem para o balo volumtrico.

4- Lavar o funil e retir-lo. Rolhar o balo e agit-lo para homogeneizar a soluo. Completar o
volume com gua destilada at ao trao de referncia do balo.

5- Se a soluo preparada no for para utilizar de imediato, enxaguar, com um pouco da soluo,
um frasco bem lavado, e transferir a soluo. Rolhar e rotular o frasco.

Preparao de solues rigorosas por diluio

1- Adicionar um pouco de gua destilada a um balo volumtrico de capacidade igual ao volume
de soluo pretendido.
2- Transferir um pouco da soluo a diluir para um copo bem limpo e seco (A). Aspirar um pouco
de soluo para a pipeta e enxagu-la, desprezando o lquido de lavagem (B).
14
3- Pipetar o volume de soluo pretendida (C) e transferir quantitativamente para o balo
volumtrico (D).

4- Adicionar mais solvente quase at ao trao e agitar o balo para homogeneizar.

5- Completar o volume com gua destilada at ao trao de referncia do balo.

6- Se a soluo preparada no for para utilizar de imediato, enxaguar, com um pouco da soluo,
um frasco bem lavado, e transferir a soluo. Rolhar e rotular o frasco.

15
Material disponvel
Copo de 100 mL Funil
Vareta Esguicho com gua destilada
Balo volumtrico de 250 mL NaCl
Esptula Balana

Procedimento experimental para preparar uma soluo de cloreto de sdio

1- Num copo de 100 mL pese rigorosamente a quantidade de cloreto de sdio (NaCl) necessria
para preparar 250 mL de uma soluo aquosa 0,25 mol.dm-3.
2- Com a ajuda de uma vareta de vidro, dissolva todo o NaCl usando a menor quantidade de gua
destilada possvel.
3- Quando todo o slido estiver dissolvido, transfira o lquido para um balo volumtrico de 250
mL. Lave cuidadosamente o copo vrias vezes com gua destilada, transferindo as guas de
lavagem para o balo volumtrico, de modo a transferir quantitativamente todo o NaCl. Tenha o
cuidado de no deixar o nvel do lquido ultrapassar o trao de referncia do balo volumtrico.
4- Rolhe o balo e agite para homogeneizar a soluo.
5- Adicione cuidadosamente gua destilada com o esguicho, at ajustar exatamente o nvel de
lquido marca do balo. Tenha ateno para no cometer erros de paralaxe.
6- Homogeneize novamente a soluo.
7- Identifique o balo.

Procedimento experimental para preparao de solues diludas

Por diluio da soluo anterior, prepare 2 solues de concentrao sua escolha entre as
seguintes:
~ 2x10-3 mol.dm-3; ~ 2x10-2 mol.dm-3; ~ 5x10-2 mol.dm-3; ~ 0,1 mol.dm-3
Calcule os volumes corretos para cada diluio, sabendo que existem no laboratrio pipetas
volumtricas de: 1, 2, 3, 5, 10, 20 e 25 mL; e bales volumtricos de: 10, 20, 25, 50, 100, 200, 250
e 500 mL.

REGISTE AS OBSERVAES E OS DADOS NO SEU CADERNO DE LABORATRIO

No final da aula deve responder s seguintes questes

Apresente todos os clculos efetuados para preparar a soluo inicial e as solues diludas.
Tenha ateno aos algarismos significativos.
Apresente ainda uma lista do material que utilizou para preparar apenas as solues diludas.
16
 2. Determinao de Vitamina C num comprimido comercial
Objetivos
Determinar a quantidade de Vitamina C num comprimido comercial recorrendo s suas
propriedades redutoras.
Ilustrar a qumica de oxidao-reduo (redox).

Introduo
A Vitamina C um nutriente essencial porque no pode ser sintetizada pelo nosso organismo,
tendo que ser fornecida por ingesto de alimentos ou medicamentos. Ela participa em quase todas
as reaes qumicas que ocorrem no nosso organismo, sendo imprescindvel em muitas delas.
Vitamina C o nome vulgar atribudo ao cido ascrbico, uma substncia que tem como
propriedade caracterstica o seu poder redutor. Este cido consegue reduzir o io frrico, Fe (III),
ao io ferroso, Fe (II), e o iodo, I2, a iodeto I .
A soluo de iodato de potssio, KIO3, de concentrao conhecida, adicionada a partir de
uma bureta, soluo acidificada de Vitamina C contendo iodeto.
O iodo formado pela reao do iodato com iodeto:

IO3 (aq) + 5 I (aq) + 6 H+ (aq) 3 H2O (l) + 3 I2 (aq)

Em seguida, o iodo formado reage com o cido ascrbico (Vitamina C), formando I , uma
espcie incolor.

Quando todo o cido ascrbico tiver reagido, o iodo em excesso permanece em soluo,
conferindo-lhe uma colorao acastanhada. Para aumentar a intensidade da cor, adiciona-se
soluo de amido, que forma com o I2 um composto de cor azul escura muito intensa.

Solues e material disponvel

Comprimido de Vitamina C Proveta de 50 mL
Balo volumtrico de 500 mL 2 Copos de 100 mL
2 Erlenmeyers de 250 mL Soluo de amido a 0,5%
Soluo aquosa de HCl 1M Soluo aquosa de KIO3 0,010M
Soluo aquosa de KI 1,7x10-2M Bureta e funil
Pipeta volumtrica de 25 mL e pipetas de Pasteur (de plstico) Esguicho com gua destilada
17
Procedimento experimental
SEGURANA
Usar sempre os culos de proteo.
A soluo de HCl corrosiva!!! Manusear com cuidado!
Ao encher a bureta, no despejar o lquido a um nvel acima do nvel dos olhos: retirar a
bureta do suporte para a encher!

1- Deite o comprimido de vitamina C num copo de 100 mL.

2- Adicione cerca de 50 mL de gua e agite at dissolver.
3- Transfira para um balo volumtrico de 500 mL. Procure obter uma transferncia quantitativa,
lavando vrias vezes o copo com gua destilada.
4- Complete o volume do balo volumtrico com gua destilada.
Preparao da bureta: verifique se a torneira est a funcionar devidamente, lavando a bureta com
gua destilada e passando com um pouco da soluo de KIO3 que vai ser usada.
5- Encha a bureta com a ajuda de um copo e de um funil. Coloque-a no suporte, certifique-se que
no h bolhas de ar e despeje algum lquido de modo a que o nvel se situe dentro da escala.
6- Registe o valor da leitura inicial.
7- Mea rigorosamente 50,00 mL da soluo de Vitamina C para um balo erlenmeyer de 250
mL.
8- Adicione ao erlenmeyer 1 mL de soluo de KI 1,7x10-2 M, 1 mL de HCl 1 M e 1 mL de
soluo de amido 0,5% (ambos medidos com pipetas de Pasteur de plstico).
9- Titule com a soluo fornecida de KIO3 0,0100 M at ao aparecimento de uma cor azul
persistente, indicativa do ponto termo da titulao. Registe o valor da leitura final do lquido.
10- Repita a titulao para obter maior rigor dos valores experimentais.

REGISTE AS OBSERVAES E OS DADOS NO SEU CADERNO DE LABORATRIO.

No final da aula deve responder s seguintes questes

Determine a quantidade de Vitamina C presente no comprimido com base nos resultados obtidos
nos ensaios efetuados.
Compare esse valor com o valor que esperava obter.
Determine a concentrao da soluo de Vitamina C preparada.

18
 3. Propriedades qumicas de alguns hidratos de carbono
HOH2C H
O
H OH

HO CH2OH

HO H

Objetivos
Estudar o carcter redutor do monossacardeo frutose.
Estudar o carcter no-redutor e a hidrlise do dissacardeo sacarose.

Introduo
Os hidratos de carbono so os compostos orgnicos mais abundantes nas plantas. Eles
desempenham papis vitais nos sistemas biolgicos, nomeadamente como fontes de energia
(glucose, amido, glicognio, etc.), como componentes da estrutura de suporte das plantas (celulose)
e das paredes celulares das bactrias e ainda como componentes essenciais dos cidos nucleicos
(D-ribose e 2-desoxi-D-ribose).
A designao "hidrato de carbono" deriva do facto de muitos membros desta famlia de compostos
possurem uma frmula molecular do tipo Cn(H2O)m. Por exemplo, a frmula molecular da glucose,
C6H12O6, pode-se indicar como C6(H2O)6. De forma anloga, a frmula molecular da sacarose,
C12H22O11, pode-se indicar como C12(H2O)11. Note que nem todos os hidratos de carbono
obedecem a esta frmula geral. A designao "hidrato de carbono", apesar de no ser totalmente
correta, continua, no entanto, a ser usada para classificar este tipo de compostos.
Quimicamente, os hidratos de carbono so poli-hidroxialdedos, poli-hidroxicetonas ou compostos
que por hidrlise do origem a este tipo de aldedos ou cetonas. Assim, a qumica dos hidratos de
carbono essencialmente a qumica dos grupos hidroxilo e carbonilo (e das ligaes hemiacetal e
acetal, formadas por reao entre estes dois grupos funcionais).

Solues e material disponvel

Frutose e sacarose 2 Bales volumtricos de 50 mL Funil
Esguicho com gua destilada Tubos de ensaio Esptula
Soluo aquosa de KMnO4 a 0,3% 2 Copos de 100 Ml Balana
Soluo aquosa de NaOH a 10% Pipetas de Pasteur (de plstico)
Reagente de Fehling Soluo aquosa de HCl a 10%
19
Procedimento experimental
Carcter redutor da frutose
1- Prepare 50,00 mL de soluo aquosa de frutose a 5%, num balo volumtrico.
2- Em cada um de dois tubos de ensaio, devidamente identificados, coloque 40 gotas da soluo de
frutose preparada.
3- A cada um dos tubos, adicione 10 gotas de soluo de permanganato de potssio a 0,3%.
4- S a um dos tubos adicione 2 gotas de hidrxido de sdio a 10%.
5- Agite os tubos e verifique se ocorre, ou no, alguma transformao. Registe o que observou.
6- Aquea o(s) tubo(s) onde no observou qualquer transformao, num banho de gua a 60C,
durante 5 minutos. Registe o que observou.

7- Noutro tubo de ensaio, devidamente identificado, coloque 40 gotas da soluo de frutose

preparada e adicione 20 gotas de reagente de Fehling3 (previamente preparado pelo docente).
8- Agite o tubo e verifique se ocorre, ou no, alguma transformao. Registe o que observou.
9- Se no observou qualquer transformao, aquea o tubo num banho de gua a 60C, durante 5
minutos. Registe o que observou.

Sacarose: um acar no-redutor

1- Prepare 50 mL de soluo aquosa de sacarose a 5%, um balo volumtrico.
2- Num tubo de ensaio, devidamente identificado, coloque 40 gotas da soluo de sacarose
preparada.
3- Adicione 20 gotas de reagente de Fehling ao tubo de ensaio.
4- Agite o tubo e verifique se ocorre, ou no, alguma transformao. Registe o que observou.
5- Se no observou qualquer transformao, aquea o tubo num banho de gua a 60C, durante 5
minutos. Registe o que observou.

Hidrlise da sacarose
1- Coloque, em cada um de trs tubos de ensaio, devidamente identificados, 40 gotas da soluo de
sacarose preparada.
2- Ao primeiro dos tubos acrescente um volume igual de gua; ao segundo adicione um volume
igual de cido clordrico a 10% e ao terceiro adicione um volume igual de hidrxido de sdio a
10%.

3 Ver a composio e a preparao do Reagente de Fehling.

20
3- Aquea os tubos durante 5 minutos num banho de gua a 60 C.
4- Retire 10 gotas de cada um dos 3 tubos de ensaio anteriores para 3 tubos de ensaio limpos. Em
seguida, adicione 20 gotas de reagente de Fehling a cada um dos 3 tubos.
5- Agite os tubos e verifique se ocorre, ou no, alguma transformao. Registe o que observou.
6- Aquea os tubos onde no observou qualquer transformao, num banho de gua a 60C,
durante 5 minutos. Registe o que observou.

REGISTE AS OBSERVAES E OS DADOS NO SEU CADERNO DE LABORATRIO.

No final da aula deve responder s seguintes questes

De acordo com resultados obtidos, dever interpretar com base nas reaes qumicas, as
observaes registadas justificando e identificando claramente aspetos como a formao de
precipitado, mudana de cr..

Bibliografia
R. Morrison, R. Boyd, Qumica Orgnica, Fundao Calouste Gulbenkian.
F. A. Carey, Organic Chemistry, McGraw-Hill.

21
 4. Dilise de uma mistura de amido e de glucose

Objetivos
Conhecer o princpio da dilise na separao de molculas de diferente massa molecular.
Detetar o amido pelo teste do iodo.
Utilizar o reagente de Fehling para detetar acares redutores.

Introduo
Dentro de uma manga de dilise, vai colocar a soluo de cozimento de amido e a soluo de
glucose. A manga, depois de fechada, vai ser mergulhada em gua, qual vai adicionar um pouco
de soluo de iodo. O amido, uma macromolcula, no passa pelos poros da manga de dilise. No
entanto, a glucose e o iodo so molculas suficientemente pequenas para passarem pelos poros da
manga de dilise. O interior da manga vai ficando azul, devido entrada de iodo que vai reagir com
o amido.
A passagem da glucose pode ser avaliada pela deteo de acares redutores no dialisato,
recorrendo a um teste caracterstico para a deteo de acares redutores: reao com o reagente de
Fehling.

Solues e material disponvel

Soluo aquosa de amido a 3%
Soluo aquosa de glucose a 3%
Soluo aquosa de iodo (5 mmol.dm-3 de I2 em 30 g.dm-3 de KI)
Reagente de Fehling
Manga de dilise de acetato de celulose
2 Copos de 250 mL Pipetas de Pasteur (de plstico)
Tubos de ensaio Placa com agitao
Vidro de relgio Barra magntica

22
Procedimento Experimental
Dilise
1 - Corte 20 cm de manga de dilise e ferva-a em gua destilada durante 5 min. Deixe arrefecer.
2 - Faa um ou dois ns numa das extremidades da membrana.
3 - Como ilustrado na Figura 1, introduza 5 mL de soluo de amido e 5 mL de soluo de glucose
na manga de dilise.

Figura 1- Enchimento da manga de dilise.

4 Antes de fechar a outra extremidade da manga, tambm com um ou dois ns, retire 40 gotas de
soluo para um tubo de ensaio. Registe a cor inicial da soluo.
5 Coloque a manga num copo de forma alta com 90 mL de gua destilada e 5 mL de soluo de
iodo. Retire, igualmente, 40 gotas de soluo para um tubo de ensaio. Registe a cor inicial da
soluo. Coloque a agitar com uma barra magntica temperatura ambiente. Tape o copo com um
vidro de relgio.

GLUCOSE + GUA
IODO + GUA

IODO + AMIDO
GLUCOSE + AMIDO

Incio da dilise (tempo zero) Aps 30 minutos

6- No tempo zero, verifique a presena de acares redutores na soluo da manga, copo e gua da
torneira (serve como controle).
a) Coloque 40 gotas de gua num tubo de ensaio.

23
 b) Em seguida, adicione 40 gotas de reagente de Fehling a cada um dos trs tubos de ensaio.
Aquea os 3 tubos de ensaio num banho de gua a 60C durante 10 minutos. Registe a cor final
das solues.
7- Aps 30 minutos de agitao, retire cuidadosamente a manga do copo e coloque-a num copo
seco. Registe a cor final das solues na manga de dilise e no copo.
8- Em seguida, a presena de acares redutores nas solues da manga e do copo vai ser testada
com o reagente Fehling.
a) Identifique 2 tubos de ensaio correspondentes soluo da manga e do copo.
b) A cada um dos tubos de ensaio adicione 40 gotas da soluo da manga e da soluo do copo.
c) Em seguida, adicione 40 gotas de reagente de Fehling a cada um dos dois tubos de ensaio.
Aquea os 2 tubos de ensaio num banho de gua a 60C durante 10 minutos. Registe a cor final
das solues.

REGISTE AS OBSERVAES E OS DADOS NO SEU CADERNO DE LABORATRIO.

No final da aula deve responder s seguintes questes

Interprete e relacione os resultados experimentais que obteve nos testes com o reagente de
Fehling, justificando, se pode concluir que:
a) O amido no saiu pela membrana de dilise.
b) A glucose passou pela membrana de dilise.
c) O iodo passou pela membrana de dilise.
Comente a sensibilidade do mtodo utilizado na determinao de acares redutores.

Bibliografia
1. A.J.L.O. Pombeiro, Tcnicas e Operaes Unitrias em Qumica Laboratorial, 2 ed., Fundao
Calouste Gulbenkian.
2 - D. Voet, J.G. Voet, Biochemistry, John Wiley.
3 - R. Morrison, R. Boyd, Qumica Orgnica, Fundao Calouste Gulbenkian.
4 - F. A. Carey, Organic Chemistry, McGraw-Hill.

24
 5. Aminocidos: propriedades qumicas

Objetivos
Efetuar a curva de titulao da glicina.
Identificar os valores de pKa1, pKa2 e ponto isoeltrico da glicina a partir da curva de titulao.
Utilizar a soluo de ninidrina para distinguir a glicina da L-prolina.

Introduo
Embora, frequentemente, se representem os aminocidos como contendo um grupo amino e um
grupo carboxilo, H2NCHRCO2H, certas propriedades fsicas (ponto de fuso, solubilidade e
momento de dpolo) e qumicas (constantes de acidicidade e basicidade) no esto em conformidade
com essa estrutura.
As constantes de acidicidade e de basicidade dos aminocidos so excessivamente pequenas
CO2H) e amino (
quando comparadas com as constantes de grupos carboxlicos ( NH2). Por
exemplo, a glicina tem valores de pKa prximo de 10 e de pKb prximo de 12, enquanto a maioria
dos cidos carboxlicos tm valores de pKa ~5 e a maioria das aminas alifticas tm valores de
pKb ~ 4.
As propriedades fsico-qumicas dos aminocidos esto perfeitamente de acordo com uma
estrutura inica dipolar:
+
H3NCHRCO2

As propriedades cido-base tornam-se, deste modo, compreensveis, tendo em conta que o Ka e o

Kb medidos dizem respeito, respetivamente, acidicidade de um io amnio, RNH3+, e basicidade
de um io carboxilato, RCO2 .
Tendo em conta a estrutura inica dipolar dos aminocidos, pode-se definir o seu ponto isoeltrico
(pI) como sendo o valor de pH da soluo em que determinado aminocido no migra, sob a
influncia de um campo eltrico. Dito de outra forma, o pI o valor de pH da soluo na qual o
aminocido tem carga global nula.
A glicina (cido aminoactico) o aminocido mais simples e, dos aminocidos naturais, o nico
que no quiral. O carbono assimtrico (ou quiral) em todos os outros aminocidos. A
configurao dos aminocidos especificada, normalmente, pelo sistema D/L.
25
 Todos os aminocidos naturais quirais que fazem parte da constituio das protenas apresentam
configurao L no seu carbono . A prolina um aminocido quiral e, ao contrrio da glicina,
uma substncia ticamente ativa.
O teste com ninhidrina extremamente sensvel para detetar grupos amino e carboxlicos livres
em aminocidos, protenas e pptidos. Todos os aminocidos que possuam um grupo amino livre
do um resultado positivo (cor azul arroxeada).

No caso da prolina, como o grupo amino no livre, o teste com a ninidrina d um resultado
negativo (cor amarela).

Solues e material disponvel

Placa com agitao Soluo aquosa de NaOH 0,1M 2 Bales volumtricos de 50 mL
Pipeta volumtrica de 25 mL Medidor de pH Pipetas de Pasteur (de plstico)
Fita de pH Balana Glicina e L-prolina
Barra magntica Ninidrina a 1% em etanol HCl concentrado
Bureta de 50 mL 2 Copos de 100 mL Tubos de ensaio
Esptulas Copo de 250 mL Funil

26
Procedimento experimental
Determinao da curva de titulao da glicina
1- Prepare 50 mL de uma soluo aquosa de glicina 0,1M, num balo volumtrico.
2- Calibre o aparelho medidor de pH com as solues aferidas que lhe so fornecidas.
3- Num copo pequeno, coloque 25,00 mL da soluo de aminocido e adicione, gota a gota, HCl
concentrado (no nicho) at o pH ser aproximadamente igual a 1,5 (verifique este valor com a fita de
pH).
4- Em seguida, transfira esta soluo para um copo maior.
5- Encha uma bureta com a soluo aquosa de NaOH 0,1M.
6- Adicione pequenos volumes da soluo de NaOH 0,1M soluo do aminocido, mantendo a
agitao constante (Figura 1), e faa um registo da variao do pH com o volume de base
adicionado.
7- Interrompa o trabalho quando o valor do pH estiver entre 11,5-12,0.
8- Lave e arrume cuidadosamente o eltrodo do aparelho medidor de pH.

Figura 1. Montagem tpica para a titulao

Distino entre glicina e L-prolina

Prepare 50,00 mL de uma soluo aquosa de L-prolina a 5%, num balo volumtrico.

Teste com ninidrina

1- Coloque 20 gotas da soluo de glicina e L-prolina em dois tubos de ensaio e adicione 3 gotas da
soluo de ninidrina.
2- Aquea os tubos de ensaio num banho de gua (a ferver) durante 2 minutos.
3- Deixe arrefecer e registe a cor final das solues.

REGISTE AS OBSERVAES E OS DADOS NO SEU CADERNO DE LABORATRIO.

27
No final da aula deve responder s seguintes questes
Represente graficamente a variao de pH com o volume de base adicionado na titulao da
glicina.
Identifique no grfico:
a) os pontos correspondentes aos valores de pKa1 e pKa2 da glicina;
b) o ponto isoeltrico da glicina;
c) as regies nas quais se pode considerar que a soluo se comporta como tampo.
Escreva as estruturas das formas de glicina que predominam nas seguintes regies:
a) pH 1;
b) pKa1;
c) ponto isoeltrico;
d) pKa2;
e) pH 11.

Bibliografia
R. Morrison, R. Boyd, Qumica Orgnica, Fundao Calouste Gulbenkian.
F. A. Carey, Organic Chemistry, McGraw-Hill.

28