Parmetros cromatogrficos

Nmero de Platos Tericos(N)

Es la longitud de columna requerida para que se establezca un
equilibrio del soluto entre la FM y FE. El nmero de platos tericos mide
que tan buena es una columna, la cual debe tener un nmero grande de
platos tericos y producir picos angostos.

Algunas formas empleadas para incrementar los platos tericos incluye:

Alargar la columna, disminuir el dimetro de la columna, mejorar el
empaque, disminuir la cantidad de muestra y optimizar el flujo de fase
mvil. La definicin de plato terico (y altura de plato) a permanecido
desde la teora propuesta por Martin y Syle, postulada para tratar de
explicar eficiencias en las separaciones cromatogrficas; Segn esta
teora la columna se encuentra formada por un numero N de capas
angostas y sucesivas llamadas platos dentro de los cuales se
efectuaban equilibrios del analito entre las fases mvil y estacionaria.
Determinacin de N
 Determinacin de N

Es difcil establecer en forma precisa el comienzo y final de la

seal cromatogrfica, se mide el ancho en la mitad de la
altura de la seal y se asumir que es una Gaussiana (W1/2)
N = 16(tr / Wb) 2
Altura de un plato terico (HETP H)
Representa el largo de columna requerida por un
plato terico. Segn Syle y Martin: representa la
longitud de las capas continuas (platos) que
componen una columna. H es empleada como
medida de la eficiencia de una columna. Cuando el
valor es pequeo representa una eficiencia mayor.
H es empleada adems como parmetro para
determinar el ensanchamiento de una banda.

H =L/N
Coeficiente de particin (K) Es el valor de la
constante de equilibrio formado por el analito entre
las fases movil y estacionaria. Es constante para
una temperatura y caracteristica para cada
relacion de analito-fase movil-fase estacionaria.

K = Conc.AnalitoFE / Conc.AnalitoFM
K = Cs / CM
K = k, xb
= Volmen FM/ Volmen FE
Factor de Capacidad (k)
Es un parmetro (k) que se utiliza para describir las velocidades de migracin de
los analitos en las columnas y se interpreta considerando que mientras mayor sea
el valor de este factor menor es la velocidad de migracin de los solutos en la
columna.
Para una especie A, el factor de capacidad A k se define como:

kA = KA VS
VM

Donde KA = constante de distribucin, VS = Volumen de la fase

estacionaria y VM = Volumen de fase Mvil

Tambin puede escribirse:

kA = tRA - tM
tM

Donde tRA = Tiempo de retencin de Compuesto A, tM = Tiempo muerto

Factor de Selectividad o separacain ()
Determina las separaciones entre picos, un valor de = 1
representa tiempos de retencion iguales y por lo tanto no
existe separacion. Un numero mas grande significa una
columna mas selectiva y una mejor resolucion . Los valores
grandes de son el resultado de una fase estacionaria
selectiva.

() = kB
kA
donde kB es el factor de capacidad del compuesto B, que es el mas
retenido y kA es el factor de capacidad del compuesto A( primer comuesto
en eluir), que es el menos retenido.
Con esta definicin siempre es mayor que la unidad.
= tRB - tM
tRA - tM
Resolucin (R):
Es un parmetro que indica cmo dos seales estn
separadas una de la otra. Un valor de 1.5 representa
una separacion hasta la linea base de ambos picos,
y un valor de 1.0 , representa una resolucion del
90%, en algunos casos esto es suficiente para los
calculos del area de los picos

Rs = 2 [tRB tRA]
WA + WB
Factor de Retencin (Rf ) : Mide la velocidad del soluto a
travs de una columna comparado
con la velocidad de la fase mvil.
Tiempo y Volumen de Retencin
 Mecanismo de Separacin de
Componentes
Si los solutos 1 y 2 tienen capacidades k1 y k2, entonces sus
tiempos de retencin estn dados por:

y la separacin de las seales cromatogrficas estar dada por:

Asumiendo que las fases no son compresibles

despus de diversas operaciones matemticas se

tiene que:

Donde w es el ancho de la seal cromatogrfica

 Resolucin (R)
Es un parmetro que indica cmo dos seales
estn separadas una de la otra
Otras formas de calcular R usando datos
experimentales se muestra a continuacin:
 Capacidad de Seales
Es una medida de cuntas seales se pueden separar entre
dos puntos en un cromatograma.
Calculo en terminos tericos
 Es una medida del nmero de componentes que pueden
ser separados.
Est basada en condiciones isotrmicas o isocrticas.
Asume que el ancho de la seal aumenta linealmente
con la temperatura.
Si asumimos un ancho de seal (w) constante, el
nmero posible de seales separadas entre los puntos 1
y 2 ser:

Rs1/Rs2=N1/N2 Tr1/tr2=(Rs1/Rs2)2
Ejemplo:
Ancho
 Modelo de Platos Modificado
Para Columnas Capilares
Las ecuaciones para calcular la resolucin y
la capacidad para columna empacadas NO
son aplicables para columnas capilares.
Si el punto 1 corresponde al solvente (aire )
El nmero de platos puede ser determinado por:

Donde W0 corresponde al ancho de la seal del

solvente (aire)
Tiempo de retencin
tR= Tiempo transcurrido desde el instante de inyeccin de muestra al
mximo de pico
Tiempo retencin ajustado: tR = tR tm
Tiempo muerto, tm, tiempo necesario para que la fase mvil atraviese la
columna
 Recuerde que existen solo dos formas para mejorar
las separaciones cromatogrficas:

a)Incrementar la separacion de las bandas: Aunque

se mejora la separacion de los componentes este
metodo tiene el inconveniente de que ocasiona
ensanchamiento de las bandas y se requieren
tiempos de elucion mayores.
Ej. Emplear flujos de fase movil menores, Al
aumentar el largo de la columna, Al variar la fase
estacionaria (modificando k), finalmente,
incrementando ya sea variando la temperatura
(GC), o la composicion de la fase movil (HPLC)
b) Disminuir el ensanchamiento de los picos -
Resulta la forma ideal de trabajar pero por
desgracia las variables que afectan el
ensanchamiento de las bandas solo pueden ser
disminuidas hasta cierto grado debido a
restricciones tecnicas. Ej. Incrementando la
eficiencia de la columna ya sea, disminuyendo
el diametro de la columna (ej. col. capilares en
GC), o empleando empaques mas pequenos
(diametro de particula, GC/HPLC).
Los factores que pueden afectar las separaciones
cromatogrficas son:

Independientes del Operador

a). Dimetro de columna
b). Longitud de columna
c). Composicin de fase estacionaria d). Dimetro
de las partculas de relleno e). Dimetro de la
pelcula de fase mvil f). Uniformidad del
empaquetamiento

Dependientes del Operador

g). Composicin de la fase mvil h). Flujo de fase
mvil
i). Temperatura
j). Volumen de Injeccin
k). Modificacin qumica de la fase estacionaria
 Mtodos Analticos (1)

Anlisis Cualitativo

Comparar el tiempo de retencin del pico del problema

con el de un patrn.

Se agrega al problema una muestra conocida. Si el

tiempo de retencin es idntico al de un componente
del problema, el rea de ese pico aumentar.

Se debe identificar en dos o ms tipos de columnas.

 Mtodos Analticos (2)

Anlisis Cuantitativo

El rea de un pico es proporcional a la cantidad de ese

componente.
1- Los cromatgrafos modernos tienen integradores y
computadoras que calculan las reas.
2- Planmetro.
3- Para un pico gaussiano, el producto de la altura por el ancho
medido a la altura media es igual al 84 % del rea total.
4- Puede dibujarse un tringulo con dos lados tangentes a los
puntos de inflexin en cada lado del pico. El rea es 96 % del
rea de un pico gaussiano.
Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 16,40 y 17,63 min,
respectivamente, en una columna de 30,0 cm. Una especie no retenida
pasa a travs de la columna en 1,30 min. Las anchuras mximas (en la
base) de A y B son 1,11 y 1,21 min, respectivamente.
Calcule,
a)La resolucin de la columna
b)nmero medio de platos en la columna,
c)altura de plato,
d)la longitud de la columna necesaria para lograr una resolucin de 1,5
e)el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un
valor de resolucin de 1,5.

a)Rs=1,06
b)N=3444,68
c)H8,7110-3 cm
d)L=60cm
e)34,76min
 Mtodos Analticos (3)
Cmo los detectores no responden de la misma manera a
todos los solutos, debe medirse un factor de respuesta
emprico F

rea del analito Concentracin del analito

=F
rea del patrn Concentracin del patrn
Area del analito/Area Patrn interno

F=FPI/FX

Sx/SPI= F x Cx/CPI

Concentracin del analito/Concentracin Patrn interno

1.-Se realizo una curva de calibracin en HPLC de teobrimina como patrn interno (PI)
y teofilina como analito, obteniendo los datos en la siguiente tabla, Calcular la
concentracin de la muestra problema en ppm.

C. analito C. patrn rea rea

(mg/L) Interno analito Patrn Interno
(mg/L)
Patrn 1 300 350 450,7 905,7
Patrn 2 400 350 804,9 901,3
Patrn 3 500 350 1150,2 890,1
Patrn 4 600 350 1405,6 897,8
MP 350 1268,4 903,6

Y= 1,2611x-0,5593