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Universidad Rafael Landvar

Facultad de Ingeniera
Industria de Alimentos
Laboratorio Qumica Orgnica II, Seccin 3
Catedrtico: Ingra. Anna Margarita Ros

Prctica No.01 (PARTE A)

IDENTIFICACIN DE ANALGSICOS
POR TLC

Santiago Villanueva Arocha


Carn: 1285914

Sbado, 3 de Septiembre del 2016


I. NDICE

1. Introduccin....................................................................................................Pgina 3

2. Fundamentos Tericos...................................................................................Pgina 4

3. Tabla de cambios fsicos y qumicos.............................................................Pgina 11

4. Fichas de seguridad ......................................................................................Pgina 13

5. Preguntas Pre-Laboratorio.............................................................................Pgina 17

6. Objetivos.........................................................................................................Pgina 19

7. Metodologa....................................................................................................Pgina 20
7.1 Diagrama de equipo................................................................................Pgina 20
7.2 Diagrama de Flujo...................................................................................Pgina 26

8. Mecanismos de reaccin...............................................................................Pgina 29

9. Referencias....................................................................................................Pgina 30

9.1 Bibliogrficas...........................................................................................Pgina 30
9.2 Electrnicas.............................................................................................Pgina 31

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1. INTRODUCCIN

NO APLICA

2. FUNDAMENTOS TERICOS
2.1 MATERIA

Se define como aquello que ocupa un lugar en el espacio y posee masa; es todo aquellos de lo que est
formado nuestro universo e incluye todas las cosas tangibles, desde las rocas a las plantas, pasando por
todos los seres vivos. La cantidad de materia se mide mediante su masa. La materia se puede presentar en
tres estados fsicos, los cuales sern mencionados a continuacin. (Brown. Et al., 2014)

2.2 ESTADOS DE LA MATERIA

Estado slido: La materia es rgida y posee forma y volumen definidos. Su volumen no cambia
apreciablemente con los cambios de presin y temperatura. Por consiguiente los cuerpos slidos no se
pueden comprimir o se comprimen muy poco.

Estado lquido: posee volumen propio, pero su forma es siempre la del recipiente que la contiene; al igual que
los slidos los lquidos no se pueden comprimir de forma apreciable.

Estado gaseoso: Se caracteriza por que una sustancia no posee forma ni volumen propios dado que ocupan
por completo el volumen del recipiente que los contiene. Los gases se pueden comprimir con suma facilidad.
(Brown. Et al., 2014)

2.3 CROMATOGRAFA

De acuerdo con Pavia et. Al. (2013), la tcnica de cromatografa de purificacin consiste en separar mezclas
de compuestos mediante la exposicin de dicha mezcla a un sistema bifsico equilibrado. Todas las tcnicas
de cromatografa dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles:
una fase mvil, llamada activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con
la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria un lquido
o un slido.

2.3.1 CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Es una tcnica que emplea como fase estacionaria una capa delgada de gel de slica o almina adherida a
un soporte de vidrio o aluminio. Para llevar a cabo esta tcnica se disuelve una pequea cantidad de la mezcla

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a separar, y con la ayuda de un capilar, se deposita sobre la parte inferior de la placa. La cromatoplaca se
introduce en un recipiente cerrado que contiene unos mililitros de disolvente (fase mvil) dejando que el
disolvente ascienda por el capilar, de modo que los componentes de la mezcla experimenten un proceso de
adsorcin-desorcin. (Pavia et. Al., 2013)

2.4 FACTOR DE RETENCIN

El factor de retencin para un producto qumico durante la cromatografa de capa delgada es una medida de
hasta qu punto se mueve hacia arriba la placa en respuesta al movimiento del disolvente. Puesto que el
movimiento absoluto de la sustancia qumica depende de hasta qu punto se le permite viajar al disolvente,
los valores de factores de retencin se calculan en relacin con el grado de movimiento disolvente. El factor
de retencin para un producto qumico es la distancia vertical movida por el producto qumico desde el lugar
donde se aplic originalmente a la placa, dividida por la distancia recorrida por el disolvente, medida desde el
mismo punto de partida. (Picado A.B. y lvarez M. 2008)

Se refiere a la relacin de la distancia que viaja el compuesto con respecto a la distancia que recorre el frente del
disolvente:

" =

Ecuacin No.10. Factor de retencin

Fuente: (Pavia Et. Al 2013)

2.5 SLICA GEL Y PLACAS DE ALUMINA EN CROMATOGRAFIA:

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados en la cromatografa son la silica gel
(SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter polar. El gel de slica consiste en una red tridimensional de
miles de alternaciones de enlaces de silicio y oxgeno, con grupos O-H en la superficie exterior. La gel de
slice posee una textura simplemente a arena muy finamente molida. Cabe sealar que el gel de slica es muy
polar y es capaz de formar enlaces de hidrgeno. La almina anhidra es el ms activo de los dos, es decir,
es el que retiene con ms fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente
apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, teres, aldehdos y cetonas). (Durst H.D. 2007)

2.6 REVELADO DE LA PLACA EN UNA CROMATOGRAFA

La localizacin de los componentes de la muestra (revelado de la placa) se puede realizar por varias tcnicas,
el mtodo de deteccin ms comn se basa en la incorporacin de un material fluorescente a la fase
estacionaria. Una vez finalizado el desarrollo se examina la placa bajo una luz ultravioleta. Los componentes
de la muestra eliminan la fluorescencia del material, de tal forma que toda la placa exhibe fluorescencia
excepto los lugares donde se encuentran los componentes de la mezcla no fluorescentes. (Climent M.J. Et.
Al, 2005)

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2.7 CMARA CROMATOGRFICA

La cmara se utiliza para el desarrollo del cromatograma, puede ser tan simple como un vaso de precipitados
cubierto con un vidrio de reloj, o una botella con tapn de corcho . El ( un disolvente aceptable o mezcla de
disolventes debe ser determinado por ensayo y error) disolvente de desarrollo se vierte en el recipiente hasta
una profundidad de unos pocos milmetros. La placa manchada se coloca entonces en el recipiente,
manchado extremo hacia abajo ; el nivel de disolvente debe estar por debajo de los puntos colocados de las
muestras. El disolvente entonces debe subir lentamente en el adsorbente por accin capilar.

Con el fin de obtener resultados reproducibles , la atmsfera en la cmara de desarrollo debe estar saturada
con el disolvente. Esto se puede lograr por el alcance del disolvente alrededor en el recipiente antes de que
sea aadida alguna de las placas. La atmsfera en la cmara se mantiene entonces saturada al mantener el
envase cerrado todo el tiempo excepto en el breve momento durante el cual se aade o elimina una placa.
(Lamarque A. Et. al 2008)

2.8 ACTIVACIN DE LA PLACA CROMATOGRFICA

Las placas de cromatografa en capa fina estn generalmente disponibles comercialmente, con un tamao
de partcula estndar para mejorar la reproducibilidad. Son preparadas mezclando el adsorbente , tal como
gel de slica, con una pequea cantidad de aglutinante inerte como el sulfato de calcio y agua . Esta mezcla
se extiende como una suspensin espesa en una hoja de soporte no reactivo , generalmente de vidrio , papel
de aluminio, o de plstico. La placa resultante se seca y se activa por calentamiento en un horno durante
treinta minutos a 110 C . El espesor de la capa absorbente es tpicamente alrededor de 0,1 hasta 0,25 mm
para fines de anlisis y alrededor de 0,5 a 2,0 mm para cromatografa en capa fina preparativa. (Pasto D.J. y
Johnson C.R., 1981)

2.9 FACTORES QUE AFECTAN LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

En la cromatografa en capa fina, hay una serie de factores crticos que hay que observar para lograr
repetitividad. Algunos de ellos son:

Manchas grandes: El tamao de la muestra no debe ser mayor a 1-2 mm de dimetro. Las manchas
de los componentes nunca deben mayor o menor que las muestras control. Si se tiene una mancha
ms grande, esto podra causar la superposicin de otros compuestos con vales de factor de retencin
similares en la placa. Si se produce la superposicin, sera difcil identificar los diferentes componentes

Avance desigual de solvente: un avance desigual de la fase mvil es un problema comn encontrado
en la cromatografa en capa fina. Las consecuencias seran valores de factor de retencin inexactos
debido al avance desigual de los puntos de origen de la muestra . Este avance no uniforme puede ser
causada por una serie de factores que figuran a continuacin:

- Que el fondo de la cmara cromatogrfica no sea plano.


- Adems, asegurarse de que la placa de cromatografa en capa fina sea colocada en la cmara
de manera uniforme. No se debe inclinar la placa o colocar con cierto ngulo de inclinacin .

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- Que la cantidad de solvente no sea suficiente. Debe haber suficiente disolvente (dependiendo del
tamao de la cmara ) para viajar a lo largo de la placa.
- Que la placa no se corte de manera uniforme . Se recomienda utilizar una regla que la placa se
cortada de manera uniforme .

En raras ocasiones , se utiliza agua como disolvente, ya que produce una curva irregular que se explica
principalmente por su tensin superficial .

La muestra debe estar por encima del nivel de disolvente. Si el nivel de disolvente cubre la muestra,
el punto de la muestra se lava en el disolvente antes de que se desplace hacia arriba la placa.

Si la muestra est demasiado concentrada, la sustancia se desplazar por la fase estacionaria como
una raya en lugar de un solo punto separado. (Sanz I., 2002)

2.10 FASE ABSORBENTE Y ELUYENTE (ESTACIONARIA Y MVIL)

En la cromatografa en capa fina la fase estacionaria est formada por una fina capa absorbente de materiales
como gel de slica, almina o celulosa unida a un soporte formado por placa de vidrio o plstico o una lmina
de aluminio. La fase mvil est formada por el eluyente (diversos compuestos orgnicos, etanol, o cido
actico) que se mueve por capilaridad a travs de la capa absorbente de la fase estacionaria. (Casado S. Et.
Al, 2012)

2.11 ELECCIN DEL SOLVENTE

La seleccin del disolvente adecuado es quizs el aspecto ms importante de la cromatografa en capa


fina, y determinar el mejor disolvente puede requerir un grado de prueba y error. Al igual que con la
seleccin de placas, tener en cuenta las propiedades qumicas de los analitos. Un disolvente de partida
comn es por ejemplo 1: 1 hexano: acetato de etilo. La variacin de la relacin puede tener un efecto
pronunciado en el factor de retencin teniendo valores van de 0 a 1, 0 indica que la polaridad del
disolvente es muy baja y 1 que indica que la polaridad del disolvente es muy alta. Al realizar el
experimento, no se desea que los valores sean 0 o 1, ya que los componentes que se van a separar
tienen diferentes polaridades. Si el valor es 0, se necesita aumentar la polaridad del disolvente porque
la muestra no se mueve y se pega a la fase estacionaria. Si el valor es 1, es necesario disminuir la
polaridad del disolvente debido a que el compuesto no fue capaz de separarse.

Si uno de los componentes de una mezcla no es soluble en un disolvente dado, pero otro componente
es muy soluble en el mismo, esto a menudo da buenas separaciones. La velocidad a la que viajan los
compuestos en la placa depende de dos cosas:

Si el compuesto es soluble en el disolvente, se desplazar ms arriba en la placa de


cromatografa en capa fina.

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Qu tanto se acopla el compuesto a la fase estacionaria?. Si el compuesto se acopla a la fase
estacionaria, se adhieren a ella, lo que har que no se mueva una gran distancia en el
cromatograma. (Hougen Et. Al. 2006)

2.12 CAFENA

La cafena es un alcaloide de conocidas propiedades estimulantes cardiacas y del sistema nervioso central.
Se encuentra principalmente en el caf, el t y la cola. Aunque la cafena no presenta toxicidad a las dosis de
consumo habitual, un gran exceso de la misma (10 g en una ingesta) puede lelgar a ser letal. Una taza de
caf contiene aproximadamente 100 mg de cafena, y la mitad de esta cantidad se puede encontrar en una
taza de t. (Sanz Berzosa el. Al, 2002)

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3. TABLA DE CAMBIOS FSICOS Y QUMICOS

TABLA NO.1. CAMBIOS FSICOS Y QUMICOS

PASO TRANSFORMACIN FSICO Y/O QUMICA

Al preparar la mezcla de etanol absoluto, y cloruro de metilo ,


las molculas que conforman las dos sustancias comienzan a
interactuar con las molculas, ya que stas tratan de rodear a
Mezcla etanol absoluto, y cloruro las molculas de la muestra de manera que las fuerzas
de metilo intermoleculares de los lquidos puros tienden a debilitarse.
(eluyente) Esto suceda ya que al ser los 2 compuestos polares, al
momento mezclarlos las fuerzas de atraccin dipolo-dipolo
entre stas dos molculas son relativamente fuertes para
formar una mezcla homognea; adems se forman puentes de
hidrgeno entre los hidrgenos presentes en el etanol absoluto.

El acetato de etilo es un disolvente moderadamente polar que


tiene las ventajas de ser voltil, por otro lado el cido actico
glacial es un excelente disolvente prtico polar. Al mezclar
estos solventes ayuda a que se " peguen " al gel de slica y
recorren distancias cortas en la placa, mientras que las
sustancias no polares se difunden en el disolvente y recorren
Mezcla de cido actico glacial y grandes distancias. Las mezcla de estos compuestos tiene una
acetato de etilo interaccin ms fuerte con la slica y es, por lo tanto, ms capaz
(eluyente) de disipar la fase mvil. La pequea cantidad de cido actico
glacial juega un papel importante en la cromatografa, ya que
proporciona protones y suprime la ionizacin de la aspirina , el
ibuprofeno y las dems muestras , que les permite viajar hacia
arriba sobre la placa en su forma protonada. Sin el cido, estos
compuestos no se movera.

Compuestos en solucin de El etanol es una sustancia altamente polar. Esto se debe al


cloroformo y etanol (50:50) grupo hidroxilo, u OH, grupo que se encuentra en el extremo
de la molcula de etanol que contiene un enlace polar. El
cloroformo es un compuesto polar ms dbil, por lo tanto el

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etanol es aadido al cloroformo con el fin de mejorar la
adsorcin de la fase mvil en la fase estacionaria y cumplir con
las caractersticas que debe poseer el eluyente para obtener
una mejor accin de capilaridad en la placa de slica.

El eluyente (fase mvil) asciende por la placa casi vertical (fase


estacionaria) por la accin de la capilaridad, la cual es una
Adsorcin de fase mvil en la propiedad de los lquidos que les permite ascender por una
fase estacionaria superficie esto se logra ya que las fuerzas intermoleculares y
las fuerzas de cohesin de la sustancia son menores que la
fuerza de adhesin del lquido con el material sobre el cual
asciende.

Al utilizar gel de slice como fase estacionaria las fuerzas


interactivas dominantes entre el adsorbente y los materiales a
ser separados son de tipo dipolo-dipolo; las molculas
fuertemente polares interactan fuertemente con los grupos
Cromatografa en capa fina de polares del gel y tendern a pegarse o adsorberse por las
las muestras de analgsicos y partculas del adsorbente mientras que las molculas
caf instantneo dbilmente polares interaccionan con menor fuerza. Por tal
razn las molculas dbilmente polares tienden a moverse a
travs del adsorbente y el eluyente ms rpidamente que las
ms polares.

La visualizacin de las muestras se puede llevar a cabo con luz


ultravioleta ya que se aplican en las placas sustancias
fluorescentes las cuales son capaces de absorber energa en
Visualizacin con luz ultravioleta forma de radiaciones electromagnticas y posteriormente
emitir parte de esa energa en forma de radiacin
electromagntica de longitud de onda diferente.

Visualizacin con yodo


La mayora de los compuestos adsorber yodo y se hacen

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visibles si se expone a vapor de yodo . Aunque la reaccin
puede tener lugar con algunos compuestos insaturados , para
la gran mayora de los compuestos , el yodo parece estar unido
fsicamente al material y no reacciona qumicamente.

Despus de llevar a cabo el proceso de elucin se seca la placa


y se coloca en la cmara cromatogrfica que contiene cristales
de yodo y se calienta preferiblemente a aproximadamente 50
C. Las manchas marrones aparecen donde estn situados los
solutos. Cuando la placa se retira de la cmara , las manchas
desaparecen rpidamente y por lo que esta tcnica de
deteccin parece ser esencialmente no destructiva.

Este procedimiento de deteccin se puede mejorar mediante la


exposicin de la placa de primera a una muy alta concentracin
de vapor de yodo , la placa es la retira y se deja reposar durante
unos minutos para permitir que el exceso de yodo se evapore.

Fuente: Elaboracin Propia

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4. FICHAS DE SEGURIDAD
TABLA NO.2. PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DE LOS REACTIVOS A UTILIZAR EN LA
PRCTICA

Punto
Masa Densidad Punto de
Frmula de Solubilidad
Compuesto Apariencia molar g/mL ebullicin Estructura
molecular fusin (25C)
g/mol (25C) C
C

Lquido
Agua incoloro, Infinita en
H 2O 18.016 1.0 0 100
destilada incoloro e agua
insaboro
Fuente: Elaboracin
Propia, Chem Draw

Lquido Miscible en
incoloro con agua en
Etanol C 2H 6O 64.1 0.79 -114 78.37
olor todas las
caracterstico. proporciones. Fuente: Elaboracin
Propia, Chem Draw

Lquido,
60.5 0.8 g/mL en
Cloroformo CHCl3 incoloro, olor 119.38 1.492 -63
61.5 agua
caracterstico
Fuente: Elaboracin
Propia, Chem Draw

Solubilidad
en agua
ligera (0,03
g/100 g de
Cristales
agua @
Cristales de negro-
I2 253.81 8.8 114 184 20C).
iodo azulado, brillo
Fcilmente
metlico Fuente: Elaboracin
soluble en
ter dietlico. Propia, Chem Draw
Soluble en
metanol.

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cido Lquido,
Soluble en
actico CH3COOH incoloro de 60.05 1.05 16.2 117-118
agua
glacial olor acre
Fuente: Elaboracin
Propia, Chem Draw

Lquido,
Acetato de incoloro de 1 mL / 10 mL
C 4H 8O 2 88.11 0.902 -83 77
etilo olor de agua
caracterstico
Fuente: Elaboracin
Propia, Chem Draw

Fuente: INSHT, 2013

TABLA NO.3. TOXICIDADES DE LOS REACTIVOS A UTILIZAR EN LA PRCTICA

Toxicidades
Compuesto Dosis letal
Inhalacin Ingestin Piel Ojos

Hiperhidratacin,
Rata:
edemas
Oral 90 ml/kg
cerebrales
Agua destilada - - -
irreversibles,
Humano:
comas e incluso
>7.5 L al da
muerte.

Irritacin de ojos
y tracto
respiratorio
superior,
nuseas,
vmito, dolor de Dermatitis Irritacin solo en
Rata: cabeza, Envenenamiento caracterizada concentraciones
Etanol
Oral 25.8 g/Kg excitacin o alcohlico. por resequedad mayores a 5000
depresin, y agrietamiento. a 10000 ppm.
adormecimiento
y otros efectos
narcticos,
coma o incluso,
la muerte.

Rata: Dao a tejidos de Conjuntivitis,


Irritacin,
Cloroformo LD50 Oral 908 Depresin hgado y riones, quemadura,
enrojecimiento.
mg/kg respiratoria, dolor abdominal, irritacin.

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neumonitis nusea, irritacin
qumica, edema gastrointestinal.
pulmonar,
acidosis
metablica,
dolor de
cabeza, fatiga.

Corrosivo. Puede
Corrosivo. Los causar graves Corrosivo. El Corrosivo. El
vapores irritan quemaduras de la contacto con el contacto puede
Humanos:
severamente y boca, garganta y lquido puede causar graves
LDL - Ruta: Va
Cristales de iodo puede quemar estmago. Causa causar quemaduras y
oral, dosis: 28 mg
las membranas dolor abdominal, quemaduras con lesiones
/ kg
mucosas y vas diarrea, fiebre, ampollas, oculares
respiratorias. vmitos, estupor irritacin y dolor. permanentes.
y shock.

Destructivo de
las membranas
mucosas y
tracto
Corrosivo
respiratorio, Irritacin y
Rata: gastrointestinal, Irritacin y
cido actico irritacin y quemaduras
DL50 oral 3.310 perforaciones, quemaduras
glacial quemaduras severas,
mg/kg nuseas, vmitos severas.
graves, dolor de ceguera
y diarrea.
cabeza,
nuseas y
vmitos, falla
respiratoria.

Irritacin
Dolor de
gastrointestinal,
cabeza, nusea, Resequedad,
Ratas: prdida de Irritacin,
prdida de agrietamiento,
Acetato de etilo Oral LD50 11.3 coordinacin por oscurecimiento
conciencia, sensibilizacin,
mL/Kg hidrlisis rpida a de crneas.
sensibilizacin dermatitis.
cido actico y
de mucosas
etanol.
Fuente: INSHT, 2013

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TABLA NO.4. ANTDOTO DE LOS REACTIVOS A UTILIZAR EN LA PRCTICA

Antdoto
Formas de
Compuesto
desecho
Inhalacin Ingestin Piel Ojos

En caso de
Agua malestar, pedir
- - -
destilada atencin Drenaje.
mdica.

Traslade a la
vctima a un
lugar ventilado. Lavar
Aplicar inmediatament
Eliminar la ropa
respiracin e con agua o
Incineracin contaminada y Incineracin
Etanol artificial si sta disolucin
controlada. lavar la piel con controlada.
es dificultosa, salina de
agua y jabn.
irregular o no manera
hay. abundante.
Proporcionar
oxgeno.

En pequeas
cantidades
evaporarse en
Lavar la boca
campana
con abundante
extractora.
agua, no
Lavar con Grandes
inducir vmito, Quitar ropa
Aire fresco, disolucin cantidades deben
suministrar de contaminada y
Cloroformo respiracin salina neutra mezclarse con
15 a 20 g de lavar con agua y
artificial. abriendo combustible
carbn jabn.
prpados. (queroseno) e
activado
incinerarse en
disuelto en 1
equipo
taza de agua.
especializado para
evitar generacin
de fosgeno.

Enjuagar con
agua
Aclarar con agua
abundante
abundante,
durante varios
Aire limpio, Enjuagar la despus quitar la
minutos (quitar
reposo y boca y ropa
Cristales de las lentes de Incineracin
proporcionar proporcionar contaminada y
iodo contacto si controlada.
asistencia asistencia aclarar de nuevo
puede hacerse
mdica. mdica. y proporcionar
con facilidad) y
asistencia
proporcionar
mdica.
asistencia
mdica.

14
Diluir con agua en
Lavar con una proporcin de
Enjuagar con Lavar con agua y abundante 1:20 u otra que
cido Aire fresco, agua, no jabn por 15 agua por al sea necesaria,
actico suministrar suministrar minutos, aplicar menos 15 neutralizar con
glacial oxgeno. nada por la pomada en caso minutos bicarbonato de
boca. de quemadura. levantando los sodio a pH 6-7 y
prpados. luego desechar en
el desage.

Pequeas
cantidades
pueden
Enjuagar la Lavar con
Eliminar ropa evaporarse en la
boca con abundante
Aire fresco, contaminada, campana de
Acetato de abundante agua
respiracin lavar con extraccin; si la
etilo agua, beber 2 levantando los
artificial. abundante agua cantidad es
vasos de agua prpados por 5
y jabn grande incinerarla
para diluir. minutos.
en un incinerador
provisto con
postquemador.

Fuente: INSHT, 2013

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5. PREGUNTAS PRE-LABORATORIO

1. Explicar cmo influyen los siguientes parmetros en la separacin por cromatografa


en capa fina

a) Fase estacionaria
El proceso de separacin en la cromatografa depende de las diferencias en la
fuerza con los componentes de la mezcla se adsorben a la fase estacionaria y mvil,
por lo tanto es de vital importancia utilizar una fase estacionaria adecuada. Como
se mencion anteriormente los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms
ampliamente utilizados en la cromatografa son la silica gel (SiO2) y la almina
(Al2O3), ambas de carcter polar. El gel de slica es muy polar y es capaz de formar
enlaces de hidrgeno. La almina anhidra es el ms activo de los dos, es decir, es
el que retiene con ms fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para separar
compuestos relativamente apolares. (Durst H.D. 2007)

b) Fase mvil
Como se mencion anteriormente el proceso de separacin en la cromatografa
depende de las diferencias en la fuerza con los componentes de la mezcla se
adsorben a la fase estacionaria y mvil, por lo tanto tambin es de vital importancia
utilizar una fase mvil adecuada. La cromatografa por lo general se divide en dos
categoras segn el tipo de la fase mvil que se utiliza . Si la fase mvil es un lquido,
la tcnica es la cromatografa lquida; si es un gas , la tcnica es la cromatografa
de gas. La fase mvil fluye a travs de la fase estacionaria y lleva los componentes
de la mezcla con ella. Los diferentes componentes viajan a diferentes velocidades.
(Anderson G. Et al., 2011)

c) Saturacin de la cmara
Se debe colocar papel de filtro en la cmara de saturacin despus de colocar el
disolvente y antes de la fase estacionaria . Se absorbe el lquido en el disolvente y
proporciona ms rea de superficie para la evaporacin. Entre ms superficie y ms
rapidez significa que hay ms evaporacin. Ms evaporacin significa ms vapor de
disolvente en el aire de la cmara , lo cual es lo ms deseable. (Beyer W. 1987)

d) Humedad relativa
El efecto de las variaciones de humedad en los valores de los factores de retencin
de algunos hipnticos fue investigado bajo condiciones estandarizadas. Se encontr

16
que los cambios considerables en el valor del factor de retencin pueden ocurrir
como resultado de diferentes cantidades de humedad, presentes en forma de vapor
en la atmsfera ambiente. Con el aumento de la humedad podra observarse un
claro aumento en el valor del factor de retencin que se ve al principio, pero esto es
seguido por una fuerte cada del factor de retencin a humedades ms altas . Para
trabajos reproducibles en la cromatografa en capa fina se recomienda la
disponibilidad de una sala de humedad constante. (Guarnizo A. F., 2005)

2. A qu se le llama activacin de la placa y cmo se activa?

Se le llama activacin de la placa a un proceso separado del secado de la placa. El secado


de la placa simplemente remueve el agua, u otros solventes utilizados, sin embargo parte
del agua se encuentra enlazada fsicamente. El proceso de activacin de la placa involucra
el secado de la misma una temperatura elevada, normalmente de 110 a 130C por 1 a 2
horas, lo que remueve la humedad, incluyendo en agua enlazada qumicamente. (Smith I.,
1969)

3. Explicar como mnimo cuatro mtodos de desarrollo de activacin de la placa


cromatogrfica.

a) Otro mtodo de activacin de la placa puede darse, colocando la placa en un horno


a 120C, por 1 hora, utilizando como solventes: cloroformo, metanol, HONH4 al 20%.
(Smith I,1969)

b) Activacin dentro de la estufa a 120 C durante 30 minutos para eliminar toda el


agua adsorbida. (Unicum, 2016)

c) Si las placas no fueron adquiridas recientemente, colocarlas en un horno a 100C


por 30 minutos y colocarlas en una desecadora hasta que sean utilizadas. (Pavia
et. Al., 2013)

d) La placa debe secarse y ser activada por calentamiento en un horno durante treinta
minutos a 110 C . El espesor de la capa absorbente es tpicamente alrededor de
0,1 hasta 0,25 mm para fines de anlisis y alrededor de 0,5 a 2,0 mm para
cromatografa en capa fina preparativa. (Pasto D.J. y Johnson C.R., 1981)

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4. Cules son los tipos de solventes que se pueden usar en cromatografa de capa
fina?
a) Con fases estacionarias polares
Gel de slica (SiO2)

b) Con fases estacionarias poco polares o apolares


La almina (Al2O3)

5. Indicar 3 ejemplos de mtodos de visualizacin o revelacin de placas


cromatogrficas que existen. En qu se basa cada uno?

Aparte de la activacin con luz UV y Yodo, tambin pueden llevarse a cabo los siguientes
mtodos:

a) Permanganato de potasio:
Esta mancha en particular es excelente para grupos funcionales que son sensibles a la
oxidacin . Alquenos y alquinos aparecern fcilmente en una placa de cromatografa en
capa fina. Despus de la inmersin en la mancha puede observarse como una mancha
de color amarillo brillante sobre un fondo prpura brillante. Alcoholes, aminas , sulfuros ,
mercaptanos y otros grupos funcionales oxidables tambin pueden ser visualizados , sin
embargo, ser necesario calentar suavemente la placa de cromatografa en capa fina.
(Gimnez R. 2005)

b) Mancha verde de Bromocresol:


Esta mancha es excelente para grupos funcionales cuyo pKa es de aproximadamente 5,0
e inferior . Por lo tanto , esta mancha proporciona un excelente medio para visualizar
selectivamente cidos carboxlicos . stos aparecen como manchas amarillas brillantes
en un fondo azul , ya sea clara u oscura y por lo general , no es necesario calentar la
placa de TLC despus de la inmersin .Este mtodo de visualizacin TLC tiene un tiempo
bastante largo tiempo de vida (por lo general semanas). (Gimnez R. 2005)

c) Dinitrofenilhidrazina:
Es desarrollado principalmente para aldehdos y cetonas; forma las hidrazonas
correspondientes , que son generalmente de color amarillo a naranja y por lo tanto se
visualizaron fcilmente. (Gimnez R. 2005)

18
6. Cules mtodos de visualizacin o revelacin de placas cromatogrficas se
emplearn en la prctica?

Luz UV
Cristales de yodo.

7. Dibujar las estructuras de los distintos componentes activos de los medicamentos


que se emplearn en la prctica Identificar y nombrar los grupos funcionales que
estn presentes en cada uno de los analgsicos que se van a analizar?

TABLA NO.5. COMPONENTES ACTIVOS DE LOS MEDICAMENTOS

NOMBRE
ESTRUCTURA
MEDICAMENTO COMPONENTE GRUPOS
COMPONENTE ACTIVO
ACTIVO FUNCIONALES

Acetaminofn Paracetamol Amida y fenol

cido cido carboxlico y


Aspirina
acetilsaliclico ster

cido cido carboxlico y


Cardioaspirina
acetilsaliclico ster

Ibuprofeno Ibuprofeno cido carboxlico

Fuente: Elaboracin propia.

19
6. OBJETIVOS
6.1 OBJETIVO GENERAL

1. Determinar la composicin de las muestras problema por medio de las muestras control
de acetaminofn, aspirina, cardioaspirina, ibuprofeno y cafena haciendo uso de la
tcnica de cromatografa en capa fina.

6.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

2. Determinar el factor de retencin de las muestras de acetaminofn, aspirina,


cardioaspirina, ibuprofeno y cafena por medio de la tcnica de cromatografa en capa
fina, llevando a cabo la visualizacin con luz UV y yodo.

3. Determinar el factor de retencin de las muestras problema por medio de la tcnica de


cromatografa en capa fina, llevando a cabo la visualizacin con luz UV y yodo.

4. Comparar el factor de retencin de muestras control y experimentales de acetaminofn,


aspirina, cardioaspirina, ibuprofeno y cafena, por medio de la tcnica de cromatografa
en capa fina, llevando a cabo la visualizacin con luz UV y yodo.

20
7. METODOLOGA

7.1 DIAGRAMA DE EQUIPO

7.1.1 CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Figura No.6. Cmara para cromatografa de capa fina


Fuente: Pavia, Lampman, Kriz & Engel (2013).

PASOS GENERALES PARA LLEVAR A CABO LA TCNICA

1. Preparar la placa cromatogrfica recortndola de un tamao adecuado para el nmero


de muestras que se aplicarn. Generalmente lo recomendable es recortar placas entre 3
y 5 cm de ancho por 10 cm de alto.

2. Trazar con un lpiz una lnea recta a 1 cm del borde inferior de la placa del adsorbente y
sealar ligeramente en punto o puntos donde se aplicarn las muestras.

3. Escoger el eluyente a utilizar, para ello se toma una placa cromatogrfica y se hace a
lpiz una lnea horizontal sobre la que se hacen marcas de separacin de 1 cm; sobre
cada punto se aplica con un capilar de vidrio de dimetro interno menor de 1 mm la
muestra. Aplicar sobre cada punto de muestra un tipo de eluyente entre los que se desea
probar; tras la visualizacin del resultado se pueden determinar las mejores condiciones
de elucin de acuerdo al siguiente criterio:
a. Si el eluyente es poco polar y casi no desplaza las sustancias del punto de
aplicacin.
b. Si el eluyente tiene la polaridad suficiente para arrastrar lo suficiente la sustancia
sobre el absorbente; este es el adecuado para realizar la cromatografa en capa
fina.
c. Si el eluyente es demasiado polar desplaza a la sustancia demasiado.

4. Aplicar la muestra con un capilar limpio en cada una de las marcas.

21
5. Preparar la cubeta de cromatografa utilizando un recipiente de volumen y tamao
adecuado al de la placa, colocando una cantidad de eluyente que no sobrepase la lnea
de aplicacin de la placa.

6. Introducir un trozo de papel de filtro rodeando parcialmente la pared de la cubeta


cromatogrfica con el fin de saturar la atmsfera de la cubeta con el vapor del disolvente
y prevenir la evaporacin del eluyente desde la placa cromatogrfica.

7. Introducir la placa en la cubeta cromatogrfica con el cuidado de que sta no toque el


papel filtro.

8. Cerrar la cubeta sin moverla y dejar migrar el eluyente hasta aproximadamente 1-1.5 cm
del borde superior.

9. Sacar la placa cromatogrfica de la cubeta y marcar con un lpiz la lnea de mxima altura
alcanzada por el frente del eluyente.

10. Secar la placa al aire o con ayuda de una estufa dejando que se evapore todo el eluyente.

11. Si las sustancias diluidas son coloreadas la visualizacin de las sustancias ser directa;
de lo contrario la placa cromatogrfica se ver blanca y se deber usar una lmpara
ultravioleta para hacerlas visibles.

RECOMENDACIONES DE TCNICA

Realizar el corte por el lado del soporte para no daar el adsorbente.

Debe tenerse en cuenta que la separacin entre cada muestra debe ser de al menos 0.5
cm.

Se debe dejar al menos 1 cm de distancia entre las aplicaciones laterales y el borde de


la placa.

El dimetro de la aplicacin no debe superar nunca los 2 mm.

No rodear por completo la cubeta con el papel filtro, dejar una abertura de 2-3 cm.

22
PREPARACIN DE MICROPIPETAS

Figura 14. Construccin de micropipetas


Fuente: Pavia, Lampman, Kriz & Engel (2013).

1. Calentar los tubos capilares por el centro de los mismos por medio de un mechero y
rotarlos hasta que estn suaves.

2. Al estar suaves, la parte calentada se debe estirar hasta que se forme una porcin de un
tubo de 4-5 cm de largo.

3. Al enfriarse por la porcin alargada se coloca una marca en el centro del mismo y se
rompen.

UTILIZACIN DE LMPARA DE LUZ ULTRAVIOLETA

Figura No.7. Visualizacin por medio de lmpara cromatogrfica


Fuente: Mohrig, Noring & Schatz (2010).

1. Se roca la capa con el agente de visualizacin adecuado.

2. Se ilumina la placa con la lmpara de onda corta (254 nm), los compuestos separados
aparecern como manchas oscuras; aquellos que presentan fluorescencia por s mismos,
aparecern como manchas brillantes.

3. Con la lmpara apuntando hacia la placa se delimita suavemente con un lpiz para indicar
en dnde se encuentra la mayor densidad y as realizar el anlisis del compuesto.

23
7.2 DIAGRAMA DE FLUJO

PARTE A. PREPARACIN DE LA CMARA DE DESARROLLO

INICIO

Cubrir el interior de la cmara con una pieza de papel filtro, dejar


pequea abertura de 2 cm.

Adicionar el solvente a la cmara de desarrollo (que en este caso ser


5% de cido actico glacial en acetato de etilo).

El nivel del solvente deber quedar a una profundidad de 1 cm.

Tapar bien la cmara.

Antes de colocar la placa en el interior de la cmara, se deber


asegurar que el papel filtro est completamente humedecido por el
solvente.

Verificar que el nivel del solvente no quede en la lnea o arriba de la


lnea donde hizo la aplicacin de las muestras.

FIN

24
PARTE B. APLICACIN DE LAS MUESTRAS CONTROL

INICIO

Preparar y rotular capilares, con Acetaminofn, Aspirina,


Cardioaspirina, Ibuprofeno, Cafena, Mezcla de todas las drogas,
Muestra desconocida 1, y Muestra desconocida 2.

Obtener 2 placas cromatogrficas de 10cm x 6.6cm manipularlas con


mucho cuidado. Colocarlas en la mesa de trabajo sobre una servilleta
de papel.

Usando una regla y un lpiz, trazar suavemente una lnea atravs de


la placa (del lado ms corto) a una distancia de 1.5 cm de la base.

Sobre la misma lnea y a 0.6 cm de distancia del lado izquierdo


marque 6 puntos muy suavemente a intervalos de 1 cm entre cada
uno. Hacer lo mismo con la otra paca.

Sobre la primera placa, empezando de izquierda a derecha, con el


capilar de punta fina, colocar muestras control en orden alfabtico,
siguiendo el siguiente orden: acetaminofn, aspirina, cafena,
ibuprofeno, y salicilamida.

Hacer las marcar tan pequeas como sea posible. Para que no se
traslape una muestra con la otra. La aplicacin deber tener de 1 2
mm de dimetro.

Practicar aplicaciones en un papel, de manera de no raspar la placa


cuando se efecte la aplicacin.

FIN

25
PARTE C. DESARROLLO DE LAS PLACAS

INICIO

Destapar la cmara y colocar muy cuidadosamente la placa donde se


hicieron las aplicaciones en el interior de la cmara.

Colocar la placa recostada en la pared interna del frasco en un ngulo


de aproximadamente 45 sin que la superficie cubierta con el
absorbente de la placa cromatogrfica toque el papel filtro.

Colocar de nuevo la tapa de la cmara y esperar que el solvente


avance por efecto de capilaridad. A medida que el solvente avanza la
placa se notar humedecida.

Cuando el solvente ha alcanzado una altura aproximada de 0.5 cm de


la parte superior de la placa, sta debe ser removida de la cmara.

Usar un lpiz para marcar inmediatamente la posicin del frente del


solvente. Dejar la placa en la campana sobre una toalla de papel
hasta que se seque.

FIN

26
PARTE D. VISUALIZACIN

INICIO

Cuando la placa est seca observarla bajo luz UV de onda corta (245
nm). Delinear ligeramente con un lpiz alrededor de las manchas que
se observen.

Anotar cualquier diferencia de comportamiento entre el ibuprofeno y la


salicilamida. Ambos compuestos tiene valores similares de Rf pero las
manchas tienen diferente apariencia bajo la iluminacin UV.

Hacer un dibujo de la placa en el cuaderno y anotar las diferencias


observadas.

Colocar la placa en un frasco que contenga unos pocos cristales de


yodo. Tapar el frasco y calentarlo muy suavemente sobre bao de
vapor hasta que las manchas empiecen a aparecer.

Retirar la placa del frasco y anotar las observaciones en el cuaderno.

Usar una regla marcada en milmetros y medir la distancia que cada


mancha se desplaz en relacin al frente del solvente. Calcule los
valores Rf para cada mancha.

FIN

27
PARTE E. ANLISIS DE ANALGSICOS

INICIO

Obtener la mitad de una tableta de cada analgsico que se va a


analizar.

Se debe trabajar por lo menos con analgsico que contenga aspirina,


acetaminofn, ibuprofeno, salicilamida y cafena.

Triturar la mitad de la tableta en un mortero. Transferir la mitad de la


Tableta pulverizada a un Erlenmeyer de 25 ml.

En un beaker de 50 ml mezclar 15 ml de etanol absoluto y 15 ml de


cloruro de metileno y mezclar perfectamente la solucin.

Agregar 5 ml del solvente a cada una de las muestras de analgsicos


pulverizados y calentar suavemente cada una sobre un bao de vapor
a aproximadamente 100 C.

Despus de calentar las muestras permitir que sedimenten y utilizar el


lquido claro sobrenadante para hacer las aplicaciones sobre la
segunda placa separada. Colocar tambin la mezcla de referencia.

Desarrollar la placa en 0.5% de cido actico glacial en acetato de


etilo siguiendo todo el procedimiento anterior. Observar con luz UV y
marcar las manchas visibles. Repetir visualizacin con yodo.

FIN

8. MECANISMOS DE REACCIN

No aplica

28
9. REFERENCIAS
9.1 BIBLIOGRFICAS:

1. Anderson G. Et al. (2001) Experimentos de qumica orgnica, con enfoque en ciencias de la


vida (Primera edicin). Editorial Elizcom. Colombia: Buenos Armenia.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:45 p.m.

2. Beyer W. (1987) Manual de qumica orgnica (Primera edicin). Editorial Pearson Revert
S.A.. Barcelona: Espaa.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:45 p.m.

3. Brown T., Le May E., Bursten B. y Burdge J. Qumica: La Ciencia Central. [2014]
Decimosegunda edicin. Editorial Pearson Educacin, Mxico, D.F.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:45 p.m.

4. Casado S. Et. Al., (2012) Operaciones bsicas de laboratorio (Primera edicin) Editorial
Paraninfo. Madrid, Espaa.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 14:35 p.m.

5. Glagovsky L. (Siglo XXI) Qumica Orgnica, Fundamentos terico prctico oara el


laboratorio (Primera edicin) Editorial Eudeba Argentina: Buenos Aires.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

6. Guarnizo A. F. (2005) Experimentos de qumica orgnica, con enfoque en ciencias de la vida


(Primera edicin) Editorial Elizcom. Colombia: Armenia.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

7. Durst H.D. (2007) Qumica Orgnica Experimental (Primera edicin) Editorial Revert S.A.
Espaa: Barcelona.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

8. Fernndez A. M. (2001) Estudio del comportamiento fotoqumico (Primera edicin)


Universidad de Santiago de Compostela
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

9. Gimnez R. (2005) Mantenimiento y servicios a la produccin (Primera edicin) Editorial


Marcomba. Espaa: Barcelona.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

10. Harper E. (2003) Manual de instalaciones electromecnicas (Primera edicin) Editorial


Limusa. Mxico: Mxico D.F.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

11. Hougen Et. Al. (2006) Principios de procesos qumicos (Primera edicin) Editorial Revert
S.A. Espaa: Barcelona.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:23 p.m.

12. Kane J.W. (2007) Fsica (Primera edicin) Editorial Revert S.A. Espaa: Barcelona.

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Sbado 27 de Agosto del 2016, 13:12 p.m.

13. Lamarque A. Et. al (2008) Fundamentos Terico-Prcticos de Qumica Orgnica (Primera


Edicin) Editorial Encuentro. Argentina: Crdoba.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 21:34 p.m.

14. P. Atkins (2006) Principios de qumica (Los caminos del descubrimiento). (Tercera Edicin)
Editorial Mdica Panamericana S.A. Espaa: Madrid.
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15. Pasto D.J. y Johnson C.R. (1981) Determinacin de estructuras orgnicas. (Primera Edicin)
Editorial Revert S.A. Barcelona: Espaa.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:55 p.m.

16. Pavia L. Et al (2011) A small scale aproach to Organic Laboratory Techniques (Tercera
Edicin) Western Washington University. Estados Unidos: California.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 13:13 p.m.

17. Pavia L. Et al (2011) A microscale aproach to Organic Laboratory Techniques (Quinta Edicin)
Western Washington University. Estados Unidos: California.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 13:13 p.m.

18. Picado A.B. y lvarez M. (2008) Qumica I Introduccin al estudio de la materia. (Primera
Edicin) Editorial EUNED. Costa Rica: San Jos.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 18:45 p.m

19. Petrucci. Ralph, Herring. Geoffrey, Madura. Jeffry, Bissonnette. Carey (2011) Qumica
General (10 edicin). Espaa: Pearson Educacin, S.A.
Domingo 28 de Agosto del 2016, 21:25 p.m

20. Sanchez P. Y Sanz A. (1985) Qumica analtica bsica (Primera Edicin) Universidad de
Valladolid.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

21. Sanz I. (2002) Prcticas de qumica orgnica, experimentacin y desarrollo (Primera Edicin)
Editorial de la UPV. Espaa: Valencia.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

22. Sienko M.J. (1985) Problemas de qumica, Serie Revert de Problemas (Primera edicin)
Editorial Revert S.A.. Espaa: Barcelona.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

23. Smith I. (1969) Chromatographic and electrophoretic techniques (Tercera edicin) Editorial
William Heinemann. Gran Bretaa.
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

24. Wentworth & Ladner. (1975) Fundamentos de Qumica Fsica (Primera Edicin) Editorial:
Revert, S.A.. Espaa: Barcelona
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

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9.2 REFERENCIAS ELECTRNICAS:

1. INSHT (2013) Banca en lnea. [En red] Disponible en:


http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/FISQ/Fich
eros/1301a1400/nspn1371.pdf
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

2. SEP Institutos Tecnolgicos (2004) Banca en lnea. [En red] Disponible en:
http://ssfe.itorizaba.edu.mx/ntec13/webext/secure/securitysheet.html
Sbado 27 de Agosto del 2016, 20:15 p.m.

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