Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la
maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de
nucletidos, ms cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN.
Las molculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso
denominado transcripcin. Una vez procesadas en el ncleo celular, las
molculas de ARN pueden salir al citoplasma para su utilizacin posterior. La
informacin contenida en el ARN se interpreta usando el cdigo gentico, que
especifica la secuencia de los aminocidos de las protenas, segn una
correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para cada aminocido.
Esto es, la informacin gentica (esencialmente: qu protenas se van a
producir en cada momento del ciclo de vida de una clula) se halla codificada
en las secuencias de nucletidos del ADN y debe traducirse para poder
funcionar. Tal traduccin se realiza usando el cdigo gentico a modo de
diccionario. El diccionario "secuencia de nucletido-secuencia de
aminocidos" permite el ensamblado de largas cadenas de aminocidos (las
protenas) en el citoplasma de la clula. Por ejemplo, en el caso de la
secuencia de ADN indicada antes (ATGCTAGCATCG...), la
ARN polimerasa utilizara como molde la cadena complementaria de dicha
secuencia de ADN (que sera TAC-GAT-CTA-GCG-...) para transcribir una
molcula de ARNm que se leera AUG-CUA-GAU-CGC-...; el ARNm
resultante, utilizando el cdigo gentico, se traducira como la secuencia de
aminocidos metionina-leucina-cido asprtico-arginina-...
Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y
funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte
que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde
deben expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se
emplea para generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de
las clulas, los "ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos
u organelos celulares, entre otras funciones.
Historia de la gentica
La funcin biolgica del ADN comenz a dilucidarse en 1928, con una serie
bsica de experimentos de la gentica moderna realizados por Frederick
Griffith, quien estaba trabajando con cepas lisas (S) o rugosas (R) de la
bacteria Pneumococcus (causante de la neumona), segn la presencia (S) o
no (R) de una cpsula azucarada, que es la que confiere virulencia (vase
tambin experimento de Griffith). La inyeccin de neumococos S vivos en
ratones produce la muerte de stos, y Griffith observ que, si inyectaba ratones
con neumococos R vivos o con neumococos S muertos por calor, los ratones
no moran. Sin embargo, si inyectaba a la vez neumococos R vivos y
neumococos S muertos, los ratones moran, y en su sangre se podan aislar
neumococos S vivos. Como las bacterias muertas no pudieron haberse
multiplicado dentro del ratn, Griffith razon que deba producirse algn tipo
de cambio o transformacin de un tipo bacteriano a otro por medio de una
transferencia de alguna sustancia activa, que denomin principio
transformante. Esta sustancia proporcionaba la capacidad a los neumococos
R de producir una cpsula azucarada y transformarse as en virulentas. En los
siguientes 15 aos, estos experimentos iniciales se replicaron mezclando
distintos tipos de cepas bacterianas muertas por el calor con otras vivas, tanto
en ratones (in vivo) como en tubos de ensayo (in vitro).8 La bsqueda del
factor transformante que era capaz de hacer virulentas a cepas que
inicialmente no lo eran continu hasta 1944, ao en el cual Oswald
Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty realizaron un experimento hoy
clsico. Estos investigadores extrajeron la fraccin activa (el factor
transformante) y, mediante anlisis qumicos, enzimticos y serolgicos,
observaron que no contena protenas, ni lpidos no ligados, ni polisacridos
activos, sino que estaba constituido principalmente por "una forma viscosa de
cido desoxirribonucleico altamente polimerizado", es decir, ADN. El ADN
extrado de las cepas bacterianas S muertas por el calor lo mezclaron "in vitro"
con cepas R vivas: el resultado fue que se formaron colonias bacterianas S,
por lo que se concluy inequvocamente que el factor o principio transformante
era el ADN.9
En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molcula individual,
sino como una pareja de molculas estrechamente asociadas. Las dos
cadenas de ADN se enroscan sobre s mismas formando una especie de
escalera de caracol, denominada doble hlice. El modelo de estructura en
doble hlice fue propuesto en 1953 por James Watson y Francis Crick (el
artculo Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for Deoxyribose
Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril de 1953 en Nature), despus de
obtener una imagen de la estructura de doble hlice gracias a la refraccin por
rayos X hecha por Rosalind Franklin.22 El xito de este modelo radicaba en su
consistencia con las propiedades fsicas y qumicas del ADN. El estudio
mostraba, adems, que la complementariedad de bases poda ser relevante
en su replicacin, y tambin la importancia de la secuencia de bases como
portadora de informacin gentica.232425 Cada unidad que se repite, el
nucletido, contiene un segmento de la estructura de soporte (azcar +
fosfato), que mantiene la cadena unida, y una base, que interacciona con la
otra cadena de ADN en la hlice. En general, una base ligada a un azcar se
denomina nuclesido y una base ligada a un azcar y a uno o ms grupos
fosfatos recibe el nombre de nucletido.
Componentes
cido fosfrico:
Enlace fosfodister. El grupo fosfato(PO43-) une el carbono 5' del azcar de
un nuclesido con el carbono 3' del siguiente.
Desoxirribosa:
Es un monosacrido de 5 tomos de carbono (una pentosa) derivado
de la ribosa, que forma parte de la estructura de nucletidos del ADN.
Su frmula es C5H10O4. Una de las principales diferencias entre
el ADN y el ARN es el azcar, pues en el ARN la 2-desoxirribosa del
ADN es reemplazada por una pentosa alternativa, la ribosa.25
Las molculas de azcar se unen entre s a travs de grupos fosfato,
que forman enlaces fosfodister entre los tomos de carbono tercero
(3, tres prima) y quinto (5, cinco prima) de dos anillos adyacentes
de azcar. La formacin de enlaces asimtricos implica que cada hebra
de ADN tiene una direccin. En una doble hlice, la direccin de
los nucletidos en una hebra (3 5) es opuesta a la direccin en la
otra hebra (5 3). Esta organizacin de las hebras de ADN se
denomina antiparalela; son cadenas paralelas, pero con direcciones
opuestas. De la misma manera, los extremos asimtricos de las hebras
de ADN se denominan extremo 5 (cinco prima) y extremo 3 (tres
prima), respectivamente.
Bases nitrogenadas:
Las cuatro bases nitrogenadas mayoritarias que se encuentran en
el ADN son la adenina (A), la citosina (C), la guanina (G) y la timina (T).
Cada una de estas cuatro bases est unida al armazn de azcar-
fosfato a travs del azcar para formar el nucletido completo (base-
azcar-fosfato). Las bases son compuestos
heterocclicos y aromticos con dos o ms tomos de nitrgeno, y,
dentro de las bases mayoritarias, se clasifican en dos grupos: las bases
pricas o purinas (adenina y guanina), derivadas de la purina y
formadas por dos anillos unidos entre s, y las bases
pirimidnicas o bases pirimdicas o pirimidinas (citosina y timina),
derivadas de la pirimidina y con un solo anillo.25 En los cidos nucleicos
existe una quinta base pirimidnica, denominada uracilo(U), que
normalmente ocupa el lugar de la timina en el ARN y difiere de sta en
que carece de un grupo metilo en su anillo. El uracilo no se encuentra
habitualmente en el ADN, solo aparece raramente como un producto
residual de la degradacin de la citosina por procesos de desaminacin
oxidativa.
Timina: 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.
Timina:
En el cdigo gentico se representa con la letra T. Es un derivado
pirimidnico con un grupo oxo en las posiciones 2 y 4, y un grupo
metil en la posicin 5. Forma el nuclesido timidina (siempre
desoxitimidina, ya que solo aparece en el ADN) y
el nucletido timidilato o timidina monofosfato (dTMP). En el ADN, la
timina siempre se empareja con la adenina de la cadena
complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, T=A. Su frmula
qumica es C5H6N2O2 y su nomenclatura 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.
Citosina:
En el cdigo gentico se representa con la letra C. Es un derivado
pirimidnico, con un grupo amino en posicin 4 y un grupo oxo en
posicin 2. Forma el nuclesido citidina (desoxicitidina en el ADN) y
el nucletido citidilato o (desoxi)citidina monofosfato (dCMP en el ADN,
CMP en el ARN). La citosina siempre se empareja en el ADN con la
guanina de la cadena complementaria mediante un triple enlace, CG.
Su frmula qumica es C4H5N3O y su nomenclatura 2-oxo, 4
aminopirimidina. Su masa molecular es de 111,10 unidades de masa
atmica. La citosina se descubri en 1894, al aislarla del tejido
del timo de carnero.
Adenina: 6-aminopurina.
Adenina:
En el cdigo gentico se representa con la letra A. Es un derivado de la
purina con un grupo amino en la posicin 6. Forma el
nuclesido adenosina (desoxiadenosina en el ADN) y el
nucletido adenilato o (desoxi)adenosina monofosfato (dAMP, AMP).
En el ADN siempre se empareja con la timina de la cadena
complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, A=T. Su frmula
qumica es C5H5N5 y su nomenclatura 6-aminopurina. La adenina, junto
con la timina, fue descubierta en 1885 por el mdico alemn Albrecht
Kossel.
Las bases nitrogenadas tienen una serie de caractersticas que les confieren
unas propiedades determinadas. Una caracterstica importante es su
carcter aromtico, consecuencia de la presencia en el anillo de dobles
enlaces en posicin conjugada. Ello les confiere la capacidad de absorber luz
en la zona ultravioleta del espectro en torno a los 260 nm, lo cual puede
aprovecharse para determinar el coeficiente de extincin del ADN y hallar la
concentracin existente de los cidos nucleicos. Otra de sus caractersticas es
que presentan tautomera o isomera de grupos funcionales, debido a que un
tomo de hidrgeno unido a otro tomo puede migrar a una posicin vecina;
en las bases nitrogenadas se dan dos tipos de tautomeras:
tautomera lactama-lactima, donde el hidrgeno migra del nitrgeno
al oxgeno del grupo oxo (forma lactama) y viceversa (forma lactima), y
tautomera imina-amina primaria, donde el hidrgeno puede estar formando el
grupo amina (forma amina primaria) o migrar al nitrgeno adyacente (forma
imina). La adenina slo puede presentar tautomera amina-imina, la timina y el
uracilo muestran tautomera doble lactama-lactima, y la guanina y citosina
pueden presentar ambas. Por otro lado, y aunque se trate de
molculas apolares, las bases nitrogenadas presentan suficiente
carcter polar como para establecer puentes de hidrgeno, ya que tienen
tomos muy electronegativos (nitrgeno y oxgeno) que presentan carga
parcial negativa, y tomos de hidrgeno con carga parcial positiva, de manera
que se forman dipolos que permiten que se formen estos enlaces dbiles.
Apareamiento de bases
Vase tambin: Par de bases
Cada tipo de base en una hebra forma un enlace nicamente con un tipo de
base en la otra hebra, lo que se denomina complementariedad de las bases.
As, las purinas forman enlaces con las pirimidinas, de forma que A se enlaza
solo con T, y C solo con G. La organizacin de dos nucletidos apareados a
lo largo de la doble hlice se denomina apareamiento de bases. Este
emparejamiento corresponde a la observacin ya realizada por Erwin
Chargaff (1905-2002),30 que mostr que la cantidad de adenina era muy
similar a la cantidad de timina, y que la cantidad de citosina era igual a la
cantidad de guanina en el ADN. Como resultado de esta complementariedad,
toda la informacin contenida en la secuencia de doble hebra de la hlice de
ADN est duplicada en cada hebra, lo cual es fundamental durante el proceso
de replicacin del ADN. En efecto, esta interaccin reversible y especfica
entre pares de bases compmentarias es crtica para todas las funciones del
ADN en los organismos vivos.
Como se ha indicado anteriormente, los dos tipos de pares de bases forman
un nmero diferente de enlaces de hidrgeno: A=T forman dos puentes de
hidrgeno, y CG forman tres puentes de hidrgeno (ver imgenes). El par de
bases GC es por tanto ms fuerte que el par de bases AT. Como
consecuencia, tanto el porcentaje de pares de bases GC como la longitud total
de la doble hlice de ADN determinan la fuerza de la asociacin entre las dos
hebras de ADN. Las dobles hlices largas de ADN con alto contenido en GC
tienen hebras que interaccionan ms fuertemente que las dobles hlices cortas
con alto contenido en AT.31 Por esta razn, las zonas de la doble hlice de
ADN que necesitan separarse fcilmente tienden a tener un alto contenido en
AT, como por ejemplo la secuencia TATAAT de la caja de Pribnow de
algunos promotores.32 En el laboratorio, la fuerza de esta interaccin puede
medirse buscando la temperatura requerida para romper los puentes de
hidrgeno, la temperatura de fusin (tambin denominado valor Tm, del
ingls melting temperature). Cuando todas las pares de bases en una doble
hlice se funden, las hebras se separan en solucin en dos hebras
completamente independientes. Estas molculas de ADN de hebra simple no
tienen una nica forma comn, sino que algunas conformaciones son ms
estables que otras.33
Estructura
El ADN es una molcula bicatenaria, es decir, est formada por dos cadenas
dispuestas de forma antiparalela y con las bases nitrogenadas enfrentadas.
En su estructura tridimensional, se distinguen distintos niveles:3435
Estructura primaria
Secuencia de nucletidos encadenados. Es en estas cadenas donde se
encuentra la informacin gentica, y dado que el esqueleto es el mismo para
todos, la diferencia de la informacin radica en la distinta secuencia de bases
nitrogenadas. Esta secuencia presenta un cdigo, que determina una
informacin u otra, segn el orden de las bases.
Estructura secundaria
Es una estructura en doble hlice. Permite explicar el almacenamiento
de la informacin gentica y el mecanismo de duplicacin del ADN. Fue
postulada por Watson y Crick, basndose en la difraccin de rayos X
que haban realizado Franklin y Wilkins, y en la equivalencia de bases
de Chargaff, segn la cual la suma de adeninas ms guaninas es igual
a la suma de timinas ms citosinas.
Es una cadena doble, dextrgira o levgira, segn el tipo de ADN.
Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina y la guanina de
una cadena se unen, respectivamente, a la timina y la citosina de la
otra. Ambas cadenas son antiparalelas, pues el extremo 3 de una se
enfrenta al extremo 5' de la homloga.
Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el ms abundante y
es el que tiene la estructura descrita por Watson y Crick.
Estructura terciaria
Se refiere a cmo se almacena el ADN en un espacio reducido, para
formar los cromosomas. Vara segn se trate de
organismos procariotas o eucariotas:
La forma "A" es una espiral que gira hacia la derecha, ms amplia que la "B",
con una hendidura menor superficial y ms amplia, y una hendidura mayor
ms estrecha y profunda. La forma "A" ocurre en condiciones no fisiolgicas
en formas deshidratadas de ADN, mientras que en la clula puede producirse
en apareamientos hbridos de hebras ADN-ARN, adems de en complejos
enzima-ADN.3839
Los segmentos de ADN en los que las bases han sido modificadas
por metilacin pueden sufrir cambios conformacionales mayores y adoptar la
forma "Z". En este caso, las hebras giran alrededor del eje de la hlice en una
espiral que gira a mano izquierda, lo opuesto a la forma "B" ms frecuente. 40
Estas estructuras poco frecuentes pueden ser reconocidas por protenas
especficas que se unen a ADN-Z y posiblemente estn implicadas en la
regulacin de la transcripcin.41
Estructuras en cudruplex
Estructura de un ADN en cudruplex formada por repeticiones en
los telmeros. La conformacin de la estructura de soporte del ADN difiere
significativamete de la tpica estructura en hlice.42
La doble hlice es una espiral dextrgira, esto es, cada una de las cadenas
de nucletidos gira a derechas; esto puede verificarse si nos fijamos, yendo
de abajo a arriba, en la direccin que siguen los segmentos de las hebras que
quedan en primer plano. Si las dos hebras giran a derechas se dice que la
doble hlice es dextrgira, y si giran a izquierdas, levgira (esta forma puede
aparecer en hlices alternativas debido a cambios conformacionales en el
ADN). Pero en la conformacin ms comn que adopta el ADN, la doble hlice
es dextrgira, girando cada par de bases respecto al anterior unos 36. 50
Cuando las dos hebras de ADN se enrollan una sobre la otra (sea a derechas
o a izquierdas), se forman huecos o hendiduras entre una hebra y la otra,
dejando expuestos los laterales de las bases nitrogenadas del interior (ver la
animacin). En la conformacin ms comn que adopta el ADN aparecen,
como consecuencia de los ngulos formados entre los azcares de ambas
cadenas de cada par de bases nitrogenadas, dos tipos de hendiduras
alrededor de la superficie de la doble hlice: una de ellas, la hendidura o surco
mayor, que mide 22 (2,2 nm) de ancho, y la otra, la hendidura o surco menor,
que mide 12 (1,2 nm) de ancho.51 Cada vuelta de hlice, que es cuando sta
ha realizado un giro de 360 o lo que es lo mismo, de principio de hendidura
mayor a final de hendidura menor, medir por tanto 34 , y en cada una de
esas vueltas hay unos 10,5 pb.
Hendiduras mayor y menor de la doble hlice.
La anchura de la hendidura mayor implica que los extremos de las bases son
ms accesibles en sta, de forma que la cantidad de grupos qumicos
expuestos tambin es mayor lo cual facilita la diferenciacin entre los pares de
bases A-T, T-A, C-G, G-C. Como consecuencia de ello, tambin se ver
facilitado el reconocimiento de secuencias de ADN por parte de
diferentes protenas sin la necesidad de abrir la doble hlice. As, protenas
como los factores de transcripcin que pueden unirse a secuencias
especficas, frecuentemente contactan con los laterales de las bases
expuestos en la hendidura mayor.52 Por el contrario, los grupos qumicos que
quedan expuestos en la hendidura menor son similares, de forma que el
reconocimiento de los pares de bases es ms difcil; por ello se dice que la
hendidura mayor contiene ms informacin que la hendidura menor. 50
Sentido y antisentido
Artculo principal: Antisentido
Superenrollamiento
Modificaciones qumicas
La expresin de los genes est influenciada por la forma en la que el ADN est
empaquetado en cromosomas, en una estructura denominada cromatina. Las
modificaciones de bases pueden estar implicadas en el empaquetamiento del
ADN: las regiones que presentan una expresin gnica baja o nula
normalmente contienen niveles altos de metilacin de las bases citosina. Por
ejemplo, la metilacin de citosina produce 5-metil-citosina, que es importante
para la inactivacin del cromosoma X.61 El nivel medio de metilacin vara
entre organismos: el gusano Caenorhabditis elegans carece de metilacin de
citosina, mientras que los vertebrados presentan un nivel alto hasta 1 %
de su ADN contiene 5-metil-citosina.62 A pesar de la importancia de la 5-metil-
citosina, sta puede desaminarse para generar una base timina. Las citosinas
metiladas son por tanto particularmente sensibles a mutaciones.63 Otras
modificaciones de bases incluyen la metilacin de adenina en bacterias y
la glicosilacin de uracilo para producir la "base-J" en kinetoplastos.6465
El ADN puede resultar daado por muchos tipos de mutgenos, que cambian
la secuencia del ADN: agentes alquilantes, adems de radiacin
electromagntica de alta energa, como luz ultravioleta y rayos X. El tipo de
dao producido en el ADN depende del tipo de mutgeno. Por ejemplo, la luz
UV puede daar al ADN produciendo dmeros de timina, que se forman por
ligamiento cruzado entre bases pirimidnicas.67 Por otro lado, oxidantes tales
como radicales libres o el perxido de hidrgeno producen mltiples daos,
incluyendo modificaciones de bases, sobre todo guanina, y roturas de doble
hebra (double-strand breaks).68 En una clula humana cualquiera, alrededor
de 500 bases sufren dao oxidativo cada da.6970 De estas lesiones oxidativas,
las ms peligrosas son las roturas de doble hebra, ya que son difciles de
reparar y pueden producir mutaciones puntuales, inserciones y deleciones de
la secuencia de ADN, as como translocaciones cromosmicas.71
Genes y genoma
Vanse tambin: Ncleo celular, Cromatina, Cromosoma y Genoma.
El ADN codificante
Desde este punto de vista, las obreras de este mecanismo son las protenas.
Estas pueden ser estructurales, como las protenas de
los msculos, cartlagos, pelo, etc., o funcionales, como la hemoglobina o las
innumerables enzimas del organismo. La funcin principal de la herencia es la
especificacin de las protenas, siendo el ADN una especie
de plano o receta para producirlas. La mayor parte de las veces la
modificacin del ADN provocar una disfuncin proteica que dar lugar a la
aparicin de alguna enfermedad. Pero en determinadas ocasiones, las
modificaciones podrn provocar cambios beneficiosos que darn lugar a
individuos mejor adaptados a su entorno.
El ADN no codificante
Transcripcin y traduccin
Artculos principales: Transcripcin (gentica) y Traduccin (gentica).
Interacciones ADN-protena
Todas las funciones del ADN dependen de sus interacciones con protenas.
Estas interacciones pueden ser inespecficas, o bien la protena puede unirse
de forma especfica a una nica secuencia de ADN. Tambin pueden unirse
enzimas, entre las cuales son particularmente importantes las polimerasas,
que copian las secuencia de bases del ADN durante la transcripcin y la
replicacin.
Interacciones inespecficas
Las protenas estructurales que se unen al ADN son ejemplos bien conocidos
de interacciones inespecficas ADN-protenas. En los cromosomas, el ADN se
encuentra formando complejos con protenas estructurales. Estas protenas
organizan el ADN en una estructura compacta denominada cromatina.
En eucariotas esta estructura implica la unin del ADN a un complejo formado
por pequeas protenas bsicas denominadas histonas, mientras que
en procariotas estn involucradas una gran variedad de protenas.8283 Las
histonas forman un complejo de forma cilndrica denominado nucleosoma, en
torno al cual se enrollan casi dos vueltas de ADN de doble hlice. Estas
interacciones inespecficas quedan determinadas por la existencia de residuos
bsicos en las histonas, que forman enlaces inicos con el esqueleto de
azcar-fosfato del ADN y, por tanto, son en gran parte independientes de la
secuencia de bases.84 Estos aminocidos bsicos experimentan
modificaciones qumicas de metilacin, fosforilacin y acetilacin,85 que
alteran la fuerza de la interaccin entre el ADN y las histonas, haciendo al ADN
ms o menos accesible a los factores de transcripcin y por tanto modificando
la tasa de transcripcin.86
Interacciones especficas
Un grupo bien definido de protenas que unen ADN es el conformado por las
protenas que se unen especficamente a ADN monocatenario o ADN de
hebra sencilla (ssDNA). En humanos, la protena A de replicacin es la mejor
conocida de su familia y acta en procesos en los que la doble hlice se
separa, como la replicacin del ADN, la recombinacin o la reparacin del
ADN.91 Estas protenas parecen estabilizar el ADN monocatenario,
protegindolo para evitar que forme estructuras de tallo-lazo (stem-loop) o que
sea degradado por nucleasas.
Las protenas especficas estudiadas con mayor detalle son las encargadas
de regular la transcripcin, denominadas por ello factores de transcripcin.
Cada factor de transcripcin se une a una secuencia concreta de ADN y activa
o inhibe la transcripcin de los genes que presentan estas secuencias
prximas a sus promotores. Los factores de transcripcin pueden efectuar esto
de dos formas:
Como los ADN diana pueden encontrarse por todo el genoma del organismo,
los cambios en la actividad de un tipo de factor de transcripcin pueden afectar
a miles de genes.96 En consecuencia, estas protenas son frecuentemente las
dianas de los procesos de transduccin de sealesque controlan las
respuestas a cambios ambientales o diferenciacin y desarrollo celular.
Nucleasas y ligasas[
Las nucleasas son enzimas que cortan las hebras de ADN mediante
la catlisis de la hidrlisis de los enlaces fosfodister. Las nucleasas que
hidrolizan nucletidos a partir de los extremos de las hebras de ADN se
denominan exonucleasas, mientras que las endonucleasas cortan en el
interior de las hebras. Las nucleasas que se utilizan con mayor frecuencia
en biologa molecular son las enzimas de restriccin, endonucleasas que
cortan el ADN por determinadas secuencias especficas. Por ejemplo, la
enzima EcoRV, que se muestra a la izquierda, reconoce la secuencia de 6
bases 5-GAT|ATC-3, y hace un corte en ambas hebras en la lnea vertical
indicada, generando dos molculas de ADN con los extremos romos. Otras
enzimas de restriccin generan sin embargo extremos cohesivos, ya que
cortan de forma diferente las dos hebras de ADN. En la naturaleza, estas
enzimas protegen a las bacterias contra las infecciones de fagos, al digerir el
ADN de dicho fago cuando entra a travs de la pared bacteriana, actuando
como un mecanismo de defensa.98 En biotecnologa, estas nucleasas
especficas de la secuencias de ADN se utilizan en ingeniera
gentica para clonar fragmentos de ADN y en la tcnica de huella gentica.