Cdigo: PRLC 119

ANTICUERPOS Versin: 8
ANTIFOSFOLIPIDOS Pgina 1 de 3
Vigencia desde: Marzo 27 de 2015

I. PRINCIPIO O FUNDAMENTO

Inmunoensayo enzimtico en fase slida para la deteccin cualitativa de anticuerpos contra

fosfolpidos en suero humano. Cada pozo esta cubierto con B2 Glicoproteina I,
cardiolipina, fosfatidilcolina, etanolamina, inositol, serina, cido fosfatidico y esfingomielina
altamente purificados. El suero diludo del paciente es incubado con el antgeno especfico
cubierto en la microplaca. Si los anticuerpos del paciente estn presentes se unen al
antgeno. Luego del lavado, se adiciona el conjugado marcado con HRP el cual se une al
complejo formado en el paso anterior. Se lava nuevamente y se adiciona substrato TMB
que produce una reaccin de color, la cual es frenada adicionando cido clorhdrico. La
intensidad de color es proporcional a la concentracin de anticuerpos presentes en la
muestra del paciente. La absorbancia se lee a 450 nm en un microlector.

I. IMPORTANCIA CLINICA

Sndrome de anticuerpos antifosfolpidos (SAAF) es una entidad autoinmune con

caractersticas clnicas definidas asociadas a autoanticuerpos medibles. Existen dos tipos
de anticuerpos antifosfolpidos asociados a un mal resultado reproductivo: anticardiolipina
(ACP) y anticoagulante lpico (ACL). Los mecanismos patognicos de los anticuerpos
antifosfolpidos incluye trombosis intervellositaria, infartos intravellositarios y vasculopata
decidual. ACP y ACL interfieren en forma directa con una variedad de protenas
anticoagulantes asociadas a fosfolpidos promoviendo trombosis y vasculopata.
SAAF ocurre con frecuencia en pacientes con una enfermedad autoinmune de base,
generalmente lupus eritematoso sistmico (LES). En este contexto, la entidad es conocida
como SAAF secundario. Cuando se detecta SAAF sin patologa autoinmune subyacente se
denomina SAAF primario, que representa ms de la mitad de las pacientes obsttricas con
SAAF. La mayora de las mujeres con SAAF primario no progresaran a un LES y pueden
presentar periodos de remisin (clnica y de laboratorio) con escaso riesgo de
manifestaciones trombticas. Sin embargo, el embarazo impone un "stress" especial siendo
inhabitual que una paciente con SAAF tenga un resultado reproductivo normal si sta no es
tratada.

II. REQUISITOS DE LA MUESTRA

Se debe utilizar suero fresco, libre de ictericia, lipemia, hemlisis y contaminacin

bacteriana. Muestra estable 3 das en refrigeracin.

III. EQUIPO

Microlector Biotek

IV. REACTIVOS

Todos los reactivos deben almacenarse a temperatura de refrigeracin y llevar a

temperatura ambiente cuando se procesen las muestras.
- Pozos recubiertos con cardiolipina bovina mas B2 glicoprotena I, fosfatidil serina,
inositol, etanolamina, colina esfingomielina elevadamente purificadas.

Elabor y revis: Aprob:

LUISA BELTRAN PEA DOLLY PAOLA SIERRA

Cargo: BACTERILOGA Cargo: COORD. LABORATORIO CLINICO
Fecha: Marzo 27 de 2015 Fecha: Marzo 27 de 2015
 Cdigo: PRLC 119
ANTICUERPOS Versin: 8
ANTIFOSFOLIPIDOS Pgina 2 de 3
Vigencia desde: Marzo 27 de 2015

- Diluyente de muestra concentrado.

- Solucin de lavado concentrado.
- Control negativo.
- Control positivo.
- Calibradores
Conjugados anti IgG e IgM (marcados con HRP).
Substrato (TMB y H2O2)
- Solucin de freno (cido clorhdrico 1 M)

V. CONTROLES

Control negativo: contiene suero humano diluido y azida de sodio como preservante.
Control positivo: contiene suero humano diluido y azida de sodio como preservante.

VI. CALIBRACION

Se establece curva standar trada la DO de cada calibrador co respecto a los

correspondientes valores de concentracin en U/ml..

VII. PROCEDIMIENTO

- Llevar a temperatura ambiente todos los reactivos y mezclar bien antes de usar.
- Preparacin de reactivos:
- Diluyente de muestras: Diluir 1:5 con agua destilada. Estable 1 mes a temperatura
de refrigeracin.
- Solucin de lavado: Diluir 1:50 con agua destilada. Estable 1 mes a temperatura de
refrigeracin.
- Diluir las muestras 1:101 con el diluyente de muestras. (1000 ul de diluyente + 10 ul de
muestra)
- Pipetear 100 ul de cada muestra diluida a su pozo respectivo.
- Pipetear 100 ul de cada control listo para usar
- Incubar 30 minutos a temperatura ambiente
- Lavar 3 veces con solucin de lavado diluida
- Pipetear 100 ul de conjugado en cada pozo segn corresponda.
- Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
- Lavar 3 veces con solucin de lavado diluida.
- Pipetear 100 ul de substrato TMB en cada pozo
- Incubar 30 minutos a temperatura ambiente protegido de la luz.
- Pipetear 100 ul de solucin de freno en cada pozo
- Incubar 5 minutos y leer a 450 nm (opcionalmente a 450/620 nm) dentro de los 30
minutos siguientes.

VIII. CALCULOS

Luego de leer la absorbancia de los controles, punto de corte y muestras de pacientes, se

debe comparar los resultados de los pacientes con el valor del punto de corte. Todas las
muestras con absorbancias mayor al punto de corte se consideran positivas.
Sensibilidad de la Prueba 97%
Especificidad: 97%
 Cdigo: PRLC 119
ANTICUERPOS Versin: 8
ANTIFOSFOLIPIDOS Pgina 3 de 3
Vigencia desde: Marzo 27 de 2015

IX. LIMITACIONES

Se recomienda volver a procesar muestras con resultados dudosos. Los resultados

obtenidos en este ensayo solo son un auxiliar para diagnstico. Cada mdico debe
interpretar estos resultados con base en la historia del paciente, los hallazgos fsicos y otros
procedimientos de diagnstico. Se recomiendan pruebas para el anticoagulante lpico para
confirmar un resultado negativo. Un paciente se considera positivo para anticuerpos
antifosfolipidos si una de estas dos pruebas o ambas dan resultados positivos.

X. VALORES DE REFERENCIA

Negativo: 12 U/ml
Positivo: 18 U/ml

XI. CONTROL DE CAMBIOS

VERSIN No. FECHA APROBACIN DESCRIPCION CAMBIOS SOLICITADO

7 Abril 10 de 2014 Revisin sin cambios Bacteriloga

Seccin
8 Marzo 27 de 2015 Revisin sin cambios Bacteriloga
Seccin