REACTOR DE SUSTRATO SLIDO

Antecedentes
Los procesos de FES existen de manera natural desde el comienzo de la vida en el
planeta y fueron empleados de forma artesanal en los pases del Sudeste Asitico,
frica y Amrica Central desde hace siglos para la elaboracin de alimentos a partir de
cereales, yuca, entre otros. El objetivo fundamental con estas fermentaciones ha sido
no solo aumentar el contenido proteico de estos alimentos, sino mejorar las
posibilidades de conservacin, cambiar las caractersticas fsicas, el color, el olor o el
sabor de los mismos. Ejemplos de estos productos lo constituyen el Koji, que se
obtiene por el cultivo del hongo Aspergillus oryzae sobre cereales cocidos, el Shoyu, el
Miso y el Ontjom (Hesseltine, 1972). La produccin del queso Roquefort a partir de
leche de oveja, data de alrededor de 1000 aos; sin embargo, no es hasta
aproximadamente 1930 que se conoce el papel de los hongos en la elaboracin de
ese alimento, cuando se demostr que todos los hongos desarrollados en este tipo de
queso eran del mismo organismo Penicillium roqueforti.
No es hasta finales de la dcada de los 70 que se promueve con fuerza el estudio
cientfico, con vistas a aprovechar las ventajas econmicas de este tipo de
fermentacin (Doelle y col., 1992).

Definicin.
Hesseltine (1972) emple el trmino de fermentacin en estado slido a todas las
fermentaciones donde el sustrato no es lquido. Posteriormente, Raimbault (1980)
propuso un trmino ms preciso: "Las fermentaciones en las cuales el sustrato no est
ni disuelto ni en suspensin en un gran volumen de agua". No obstante, Moo-Young y
col. (1983), propusieron un trmino a todos los procesos que utilizan materiales
insolubles en agua para el crecimiento de microorganismos en ausencia de agua libre;
autores como Mudgett (1986) y Durand. y col. (1988), han planteado una definicin
ms general: "Es un mtodo de cultivo de microorganismos sobre y/o dentro de
partculas slidas". El lquido ligado a las partculas slidas debe estar en una cantidad
que asegure la actividad del agua adecuada para el crecimiento y el metabolismo de
los microorganismos, pero sin exceder el mximo poder de retencin de este lquido
en la matriz slida.
La definicin ms general y reciente fue formulada por Viniegra-Gonzlez (1997),
donde se plantea que "es un proceso microbiolgico que ocurre comnmente en la
superficie de materiales slidos que tienen la propiedad de absorber y contener agua,
con o sin nutrientes solubles". Esta definicin abarca a procesos donde el soporte
slido es inerte y los sustratos que utiliza el microorganismo pueden ser sustancias
solubles en agua, como el proceso de bioconversin de etanol y el crecimiento de
Candida utilis sobre amberlita (Christen y col., 1993).
 Cultivo sustrato solido
El medio de cultivo no fluye libremente
Medios pocos profundos, exceptuando
algunos casos.
El sustrato solido se humedece y la
absorcin de nutricin es de dichos solidos
El gradiente de concentracin de nutrientes
con el progreso de la fermentacin es
comn
La disponibilidad de agua es suficiente para
sostener un crecimiento optimo del cultivo
y, por tanto, constituye una proporcin
menor del volumen del medio
El sistema de cultivo consiste en 3 fases, por
ej., solido, lquido y gas
La fase lquida en el sistema se encuentra
discontinua
El sistema de cultivo no es asptico, la
esterilizacin se realiza con una buena
limpieza.
No se requiere un control riguroso de los
parmetros durante la fermentacin a
excepcin de eliminacin de calor, oxgeno
y humedad
La proporcin del inoculacin siempre es
grande
El oxgeno necesario para el crecimiento se
obtiene en mayor medida de la fase gaseosa
que del disuelto en el agua asociada al
sustrato solido
La aireacin provee oxgeno y adems
elimina el calor metablico y productos
gaseosos
El sistema puede o no presentar agitacin
El crecimiento fngico requiere la
penetracin profunda de las hifas en las
partculas solidas
Las bacterias y las levaduras crecen por
adhesin a las partculas del sustrato solido
El medio fermentado contiene el producto
en altas concentraciones
Cultivo liquido
El medio de cultivo siempre fluye libremente
Profundidad media invariablemente mayor
Los nutrientes se disuelven en agua y su
absorcin es en un estado lquido.
Los nutrientes se encuentran
uniformemente distribuidos en cualquier
momento durante la fermentacin
El agua es abundante sin ninguna
normalizacin y por lo tanto constituye un
parte importante del volumen del medio
Se encuentran 2 fases, ej., lquido y gaseoso.
La continuidad de la fase liquida es una
caracterstica comn.
Todo el sistema est bajo condiciones
aspticas
Riguroso control de todos los parmetros
durante la fermentacin
La proporcin de inoculacin es ms baja, a
menos que el proceso disponga lo contrario
El consumo de oxigeno es nicamente del
disuelto en el medio lquido
La aireacin provee oxgeno y elimina
productos gaseosos, pero no elimina calor
del medio
La agitacin es esencial para darle
uniformidad al medio, excepto en
fermentacin anaerbica.
Los hongos crecen en forma de micelios que
estn uniformemente distribuidos en el
cultivo
Las bacterias y levaduras se distribuyen
uniformemente en liquido agitado
El medio concentrado contiene el producto
en menor concentracin
Ventajas y desventajas de la fermentacin en estado slido comparada
con el cultivo sumergido en lquido.
Doelle y col. (1992) consideran como ventajas los siguientes aspectos:

Los medios de cultivo son simples, generalmente subproductos agrcolas que

presentan un alto contenido de los nutrientes necesarios.
La baja actividad del agua es de gran ayuda para evitar las contaminaciones,
especialmente de bacterias y levaduras.
La concentracin natural del sustrato permite utilizar reactores ms pequeos
en comparacin con los utilizados en otro tipo de fermentacin. Tienen mayor
productividad volumtrica.
La aireacin forzada es facilitada por la porosidad del soporte, lo que permite
una alta transferencia de oxgeno al microorganismo.
Pueden emplearse, frecuentemente conidios como inculo en los procesos de
crecimiento de hongos, lo cual disminuye los costos y las manipulaciones en la
preparacin del inculo.
Los conidios de los hongos que se producen son mucho ms resistentes y
tienen mejor adaptabilidad a las condiciones en las que se aplican como
agente de biocontrol.
El proceso de recobrado es simplificado. Algunos productos son utilizados
integralmente, como alimento animal, productos para el control biolgico, etc.
Los procesos se consideran generalmente como tecnologas limpias.
Entre las principales desventajas se encuentran:

Su aplicacin se limita a microorganismos que crecen en bajos contenidos de

humedad.
La extraccin del calor metablico puede ser un problema, sobre todo cuando
se trabaja a gran escala y no se controla el proceso.
La naturaleza slida del sustrato trae problemas al medir los parmetros de la
fermentacin tales como el pH, la temperatura, el contenido de humedad y la
concentracin de sustrato y productos.
Los procesos de transferencia de masa son limitados por la difusin.
Muchos aspectos ingenieriles como el diseo de reactores y el escalado estn
muy poco caracterizados.
El tiempo de fermentacin es mayor debido a que generalmente se utilizan
microorganismos que presentan bajas velocidades especficas de crecimiento.
Es bueno recalcar que algunas de estas desventajas son relativas, por ejemplo, el
tiempo de fermentacin ya que actualmente se estn empleando bacterias en los
procesos de FES.
Se realizan grandes esfuerzos en la bsqueda de soluciones parciales a las
dificultades antes mencionadas, algunos como Gervais y Bazelin (1986)
experimentaron con un reactor que permita la regulacin de la humedad relativa del
aire y su temperatura en circulacin, ya que segn Ballio y col. (1964) y Richard-
Molard y col. (1985), demostraron que durante el desarrollo del hongo, la variacin de
la actividad del agua (aH2O) en el medio, puede influir en el crecimiento micelial o en
la germinacin de las esporas y esto puede ser til para optimizar la produccin de
conidios en fermentadores con sustrato slido, donde la suplementacin de oxgeno y
la cosecha de conidios, resulta ms fcil que en fermentaciones lquidas.
Para el caso especfico del control biolgico, en la produccin de hongos por
fermentacin sumergida, en determinados casos, se obtienen blastosporas, que, si
bien son estructuras infectivas, resultan poco resistentes a los cambios de las
condiciones climticas (temperatura, radiacin, humedad, etc.), a diferencia de los
conidios que se producen en las fermentaciones en fase slida. Se caracterizan las
primeras por presentar cubiertas delgadas y lisas, que influyen negativamente en
cuanto a su eficiencia y persistencia despus de las aplicaciones dificultando, adems,
la formacin de epizootias.

Ejemplos de Aplicaciones socio-econmicas

Produccin de Tempeh (producto alimenticio procedente de la fermentacin de

la soja) a partir del crecimiento de hongos del genero Rhizopus en granos de
soja cocida.

Ensilado, es un proceso de conservacin del forraje basado en una

fermentacin lctica del pasto que produce cido lctico y una disminucin del
pH por debajo de 5. Permite retener las cualidades nutritivas del pasto original
mucho mejor que el henificado, pero precisa de mayores inversiones y
conocimientos para conseguir un producto de calidad.

Compostaje, donde el producto es obtenido de manera natural por

descomposicin aerbica (con oxgeno) de residuos orgnicos como restos
vegetales, animales, excrementos y purines (parte lquida altamente
contaminante que rezuma de todo tipo de estircoles animales), por medio de
la reproduccin masiva de bacterias aerbicas termfilas que estn presentes
en forma natural en cualquier lugar (posteriormente, la fermentacin la
continan otras especies de bacterias, hongos y actinomicetos).
PRINCIPIOS GENERALES EN EL DISEO Y OPERACIN DE BIORREACTORES
DE LECHO SLIDO

Consideraciones Que Afectan El Diseo Y La Operacin

En un proceso de fermentacin, el biorreactor provee del ambiente para el crecimiento

y la actividad de los microorganismos. El uso de una matriz slida, ya sea un soporte
inerte o un soporte-sustrato, tiene implicaciones relevantes sobre el diseo y operacin
de biorreactores.

La maximizacin de la velocidad de formacin de producto y su rendimiento dentro del

biorreactor son clave en la optimizacin del proceso.

Algunas de las caractersticas requeridas en un sistema de biorreactor de lecho slido

son las siguientes:

El material de construccin del biorreactor debe ser barato, inerte, resistente a

la corrosin y abrasin, no txico y capaz de soportar presin (generalmente
presin de vapor por esterilizacin).

El biorreactor debe ser capaz de trabajar en condiciones aspticas,

preferentemente libre de contaminacin microbiolgica, para prevenir riesgos
accidentales debido a la contaminacin biolgica, sin embargo algunos
procesos como el composteo pueden ser tratados como no estril.

El control y regulacin de los parmetros operacionales debe ser eficiente; de

tal modo que puede ser requerido un sistema de enfriamiento para controlar el
calor metablico generado.

El sistema del biorreactor debe tener los arreglos apropiados de aireacin y

agitacin que permitan la uniformidad en la biomasa.

El diseo del biorreactor debe simplificar el mantenimiento, la carga-descarga,

muestreo y la recuperacin del producto.

Contenido De Humedad

El contenido de humedad es un factor muy importante en la fermentacin en medio

slido. Esto es debido al hecho de que la gran mayora de las clulas viables estn
caracterizadas por un contenido de humedad de 70 - 80%.

El agua presente en el medio slido existe formando un complejo, dentro de la matriz

slida en forma de una delgada capa, ya sea absorbida sobre la superficie de las
partculas o menos fuertemente enlazada dentro de las regiones capilares del slido.

Los niveles de humedad en los procesos, varan entre 30 y 85% y tienen un marcado
efecto sobre la cintica de crecimiento.

El cultivo de microorganismos con altos niveles de humedad frecuentemente conduce

a que las partculas del sustrato se adhieran entre s o a las paredes del biorreactor.
Adems, los espacios entre las partculas son llenados con agua lo cual limita el
intercambio de gases y ocasiona que el sustrato se vuelva ms vulnerable a la
contaminacin bacteriana.

Por otro lado, a bajos niveles de humedad, se reduce el crecimiento microbiano ya que
aumenta la fase lag de un organismo, disminuye la velocidad especfica de crecimiento
hasta que el crecimiento cesa y genera una baja cantidad de biomasa. Tambin
reduce la estabilidad enzimtica, el hinchamiento del sustrato y la difusin de los
nutrientes.

Agitacin

La agitacin facilita el mantenimiento de condiciones homogneas dentro del

biorreactor, especialmente con respecto a la temperatura y al ambiente gaseoso.
Adems facilita una distribucin uniforme de cualquiera de los aditivos que pudieran
ser aadidos durante el proceso. Esto puede ser de vital importancia cuando es
necesario aadir nutrientes peridicamente o cuando es necesario aadir agua para
controlar el contenido de humedad o si es necesario aadir cido o base para el
control del pH. Dependiendo de las propiedades del sustrato, la agitacin puede
prevenir u ocasionar la aglomeracin de slidos.

Los procesos de fermentacin en medio slido pueden ser divididos en tres grupos
dependiendo del rgimen de mezclado que es usado:

Estticos

Peridicamente agitados

Continuamente agitados.

En fermentacin en medio slido esttica se han observado gradientes por arriba de

los 3 C por centmetro. Adems, si no se emplea aireacin forzada, el oxgeno en los
espacios inter-partculas puede caer a niveles limitantes y el dixido de carbono
elevarse a niveles inhibitorios.

En la fermentacin en medio slido peridicamente agitada, la agitacin sirve para

surtir de nuevo los espacios inter-partculas con aire fresco. La frecuencia del
mezclado depende de la fraccin de espacio vaco en el sustrato. La fraccin de
espacio vaco depende de propiedades del sustrato tales como el tamao y forma de
la partcula. Tambin depende del contenido de humedad, ya que un exceso de la
misma desplaza al aire. Obviamente, mientras ms grande sea la fraccin de espacio
vaco, ms oxgeno est presente en la masa de sustrato y ser menos necesaria una
agitacin frecuente para llenarlos de nuevo con aire fresco.

La frecuencia de mezclado tambin estar determinada por las necesidades de

enfriamiento del sustrato, el cual estar determinado por la tasa de crecimiento y a la
produccin asociada de calor metablico.

Sin embargo el mezclado de sustratos slidos puede tambin tener efectos dainos,
incluyendo efectos adversos sobre la porosidad del sustrato, rompimiento de adhesin
del microorganismo al sustrato y daar al micelio fngico debido a los fuerzas de corte
causadas por la abrasin entre las partculas.
Aireacin

La aireacin cumple con cuatro funciones principales en la fermentacin en medio

slido

I. Mantener las condiciones aerobias

II. Retirar el dixido de carbono

III. Regular la temperatura del sustrato

IV. Regular el nivel de humedad.

La velocidad ptima de aireacin estar determinada por la naturaleza del

microorganismo empleado, los requerimientos particulares de oxgeno para el
crecimiento y la sntesis de producto sobre los nutrientes dados, la cantidad de calor
metablico que debe ser disipada, el grado al que el CO2 y otros metabolitos voltiles
son eliminados, el espesor del sustrato y su densidad de empaque y el contenido de
humedad.

Donde se emplea aireacin forzada, es ms comn hacerlo con el soplado de aire

hacia arriba a travs del sustrato soportado en una base plana perforada. Es
importante obtener una distribucin equitativa del aire para evitar que se formen
canales de flujo de aire. Sin embargo, la base plana debe tener un gran nmero de
orificios pequeos en vez pocos orificios grandes.

Conforme el aire pasa a travs de la columna y remueve el calor del sustrato, el aire
se calienta, perdiendo eficiencia para enfriar a travs de la columna.
Consecuentemente, se establece un gradiente de temperatura a lo largo de la columna
con la temperatura ms alta en la salida final del lecho.

Transferencia Y Remocin Del Calor

La importancia de la temperatura en el desarrollo de un proceso biolgico es tal que

puede determinar efectos tan importantes como la desnaturalizacin de protenas,
inhibicin enzimtica, induccin o inhibicin de la produccin de un metabolito
particular, muerte celular, etc.

Los procesos de fermentacin en medio slido generalmente son exotrmicos y la

generacin de calor por altos niveles de actividad microbiana dentro de los slidos
puede conducir a gradientes trmicos impuestos por la limitada capacidad de
transferencia de calor de los sustratos slidos, lo cual podra ser contraproducente
para la formacin de biomasa o producto.

En procesos aerobios, la generacin de calor puede aproximarse utilizando la

velocidad de evolucin de CO2 o de consumo de O2. De acuerdo con Reid (1989) cada
mol de CO2 producido durante la oxidacin de lignina libera aproximadamente 475 KJ
de calor.

La transferencia global de calor puede ser limitada por:

La transferencia de calor intra- e inter-partcula

 La transferencia de calor de la superficie de la partcula a la fase gaseosa

La velocidad a la cual el calor en la fase gaseosa es removido.

La velocidad de transferencia conductiva de calor dentro de una partcula slida puede

predecirse por partculas de geometra conocida y estructura homognea, y es
afectada por la conductividad trmica y tamao de la partcula.

La velocidad de transferencia de calor de un slido a la fase gaseosa puede ser

aumentada considerablemente por flujo forzado de grandes cantidades de gas
pasando las partculas slidas. Donde no hay dicha conveccin forzada, el calor tiene
que ser transferido del slido a la fase gaseosa por conduccin y entonces tiene que
difundir a travs de la masa del gas al ambiente generando grandes variaciones en el
contenido de calor dentro de la matriz como es en el caso de las pilas de composta.

La remocin del calor es probablemente el factor ms crucial que limita el

escalamiento en los procesos de fermentacin en medio slido en gran escala.

La velocidad en la que el calor necesita ser removido depende de la actividad

metablica del microorganismo y de la cantidad de sustrato en el biorreactor.
Desafortunadamente la naturaleza slida del sustrato y su bajo contenido de humedad
conduce a velocidades muy bajas de transferencia de calor.

Las distintas estrategias para la remocin de calor pueden ser resumidas de la

siguiente manera:

Aireacin forzada con aire hmedo para remover el calor por conduccin.

Aireacin forzada con aire seco para remover el calor por evaporacin.

Enfriamiento de la superficie externa del biorreactor, ya sea con una chaqueta

de agua o cubrindolo con un lienzo humedecido con agua.

Circulacin de agua fra a travs de un intercambiador de calor interno.

Colocacin del biorreactor en un cuarto a temperatura controlada o un bao de

agua (esto solo es posible a escalas relativamente pequeas).

Por supuesto, varios de estos mtodos pueden ser usados en combinacin. La

remocin evaporativa de calor es el mtodo ms eficiente, y puede remover un 80%
del calor generado por el crecimiento.

La perdida de agua representa un problema serio en la fermentacin en medio slido

donde el contenido de humedad del sustrato es ya bajo. Sin embargo, el enfriamiento
evaporativo debe estar acompaado de un abastecimiento de agua.

Concentracin De Sustrato Y Disponibilidad

La concentracin de nutrientes en la fase lquida de un proceso de fermentacin en

medio slido ha recibido poca atencin. La limitaciones en el crecimiento por
nutrientes es usualmente ms severa en la fermentacin en medio slido debido a las
limitadas velocidades de difusin de nutrientes y del limitado acceso de los
microorganismos a los nutrientes. La relacin entre la masa de carbono y nitrgeno
(C/N) es de particular importancia y el valor ptimo puede variar en un amplio rango
desde 10 hasta 100. Este argumento es vlido cuando el metabolito a producir no est
asociado al crecimiento o incluso parcialmente asociado y cuando las fuentes de
carbono y nitrgeno son biodisponibles. En el caso cuando el metabolito est asociado
al crecimiento es mejor que desde el principio del proceso el medio este equilibrado.
Por otro lado, cuando se trata de hongos, es necesario tomar en cuenta como la
relacin C/N puede inducir o retrasar la esporulacin ya que es el factor limitante
definitivo en la produccin de biomasa fngica.

pH

Cada microorganismo posee un rango de pH para su crecimiento y actividad con un

valor ptimo dentro del rango ya que en los cultivos en estado slido es muy difcil
controlar el pH; por lo tanto es deseable que el microorganismo usado tenga un amplio
rango de pH y un pH optimo para su crecimiento. La mayora de los microorganismos
crecen sobre un rango de pH de 3 a 4 unidades, con el pH ptimo para su crecimiento
sobre un rango de pH de 1.5 unidades

El pH de un cultivo puede cambiar en respuesta a las actividades metablicas

microbianas debido a varias razones:

La secrecin de cidos orgnicos como cido actico cido lctico, los cuales
ocasionan un descenso en el pH.

La asimilacin de cidos orgnicos que pueden estar presentes en ciertos

medios puede conducir a un aumento en el pH.

La utilizacin microbiana de la fuente de nitrgeno tambin puede causar que

el pH cambie.

El control de pH es uno de los problemas an no resuelto en los procesos de

fermentacin en medio slido. Este problema se debe a la carencia de equipos y
electrodos apropiados para determinar el pH en materiales slidos y a la existencia de
gradientes de pH debido a las caractersticas heterogneas del proceso. Sin embargo
suele utilizarse para su control diferentes relaciones de sales de amonio y urea en el
sustrato. La hidrlisis de la urea libera amoniaco, el cual contrarresta la rpida
acidificacin que resulta de consume del in amonio.

BALANCES DE MATERIA Y ENERGA EN BIORREACTORES

El biorreactor puede ser tratado como un todo si se dibuja una frontera al exterior del
biorreactor y solo se consideran los intercambios de masa y energa entre el
biorreactor y sus alrededores. Las corrientes de aire transportan masa (N2, CO2, O2 y
vapor de agua) y energa dentro y fuera del biorreactor. La tendencia para el aire es
salir del biorreactor ms caliente y llevando consigo ms agua que cuando entr, y una
temperatura y humedad ms alta contribuye a la remocin global del calor del
biorreactor. La composicin del aire puede ser diferente a la salida y a la entrada. El
aire de salida generalmente tiene ms CO2, menos O2 y ms agua que el de entrada.
Por lo tanto en trminos de transferencia de masa, el efecto del flujo de aire no es solo
proveer O2 y remover CO2, si no tambin secar el biorreactor. Debe notarse que es
casi imposible prevenir este efecto de secado si el aire se calienta al pasar por el
biorreactor.

Cualquiera de los siguientes procesos de transferencia de masa puede ser limitante

para el crecimiento global o para la formacin de productos tipo de biorreactor, la
naturaleza de la matriz slida y la cintica de las reacciones microbiolgicas:

I. Difusin de gases hacia y desde las superficies slidas.

II. Adsorcin y desorcin de los reactantes y productos sobre y desde la

superficie.

III. Difusin de los reactantes y productos a lo largo de la superficie de las

partculas.

IV. Difusin de los nutrientes y enzimas dentro de las partculas porosas.

La energa puede intercambiarse por transferencia convectiva de calor entre las

paredes del biorreactor y los alrededores. La conveccin de calor hacia el exterior de
la pared del biorreactor ocurrir por conveccin libre si el exterior de la pared del
biorreactor est en contacto con el aire en los alrededores y no hay flujo forzado de
este aire al pasar el biorreactor. Si el biorreactor est enchaquetado se bombea agua
a travs de la chaqueta, o si el aire es soplado al pasar sobre la superficie del
biorreactor, entonces el aire ser removido por conveccin forzada.

MODOS DE OPERACIN DEL BIORREACTOR

La mayora de las aplicaciones de fermentacin en medio slido involucran cultivo por

lote.

La mayora de los procesos de fermentacin en medio slido continuos y por lote

alimentado estn aun bajo investigacin en escala pequea y semi-piloto.

Los procesos de fermentacin en medio slido pueden ser divididos dentro de dos
grupos:

I. Fermentacin sin agitacin.

II. Fermentacin con agitacin intermitente o continua.

El ltimo grupo puede ser subdividido en cuatro grupos:

I. Fermentacin con agitacin intermitente sin aireacin forzada.

II. Fermentacin con agitacin lenta contina sin aireacin forzada.

III. Fermentacin con agitacin intermitente con aireacin forzada.

IV. Fermentacin con aireacin forzada y agitacin contina.

Los parmetros de proceso son factores muy importantes a tomarse en consideracin

para el diseo de biorreactores de lecho slido. La informacin disponible sobre el
consumo de sustrato, transferencia de oxgeno y cintica de crecimiento no provee
datos detallado dentro del diseo del biorreactor.

Caractersticas generales del sustrato para SSC

La estructura macromolecular de sustratos solidos

Todos los sustratos solidos tienen al menos una caracterstica en comn: su estructura
bsica es macromolecular. Es esta estructura macromolecular la que le otorga la
propiedad de un slido al sustrato. Una estructura de este tipo puede ser el carbn y
fuente de energa para el crecimiento (ej: celulosa), en este caso la estructura de
sustrato solido puede degenerarse durante el proceso.

Tamao de particula

El tamao de partculas es extremadamente importante dado que afecta la relacin de

superficie volumen de las partculas y la densidad de empaquetamiento con la masa
de sustrato.

La relacin de superficie-volumen determina la fraccin de sustrato que se encuentra

accesible inicialmente para el microorganismo. Sin embargo el tamao de partcula
puede ser difcil de caracterizar, dado que la medicin de volumen y areas
superficiales puede ser extremadamente dificultosa para partculas irregulares.

El tamao de particula afecta la forma en que la partculas el sustrato se empaquetan

entre si, y por lo tanto tambin la fraccin de vacio entre ellas. Un empaquetado de
partculas suelto es esencial en SSc aerobico ya que permite la difusin de oxigeno
entre partculas. Si las partculas son muy pequeas se empaquetaran entre si de
manera muy apretada. Esto debe ser balanceado en contra de la relacin superficie-
volumen dao que si las partculas son muy grandes entonces mucho del sustrato
permanecer inaccesible para el microorgasnismo.

Muchos sustratos requieren una reduccin de tamao de particula para encajar en

SSC. Esta reduccin puede ser realizada con un pre tratamiento anterior lo cual es
costoso. Por lo tanto el mayor tamao que permita una fermentacin aceptable ser el
optimo. Esto variara de acuerdo al sistema.

Forma de la particula.

Junto con el tamao de particula, la forma afecta la relacin superficie-volumen de las

paticulas. Afecta adems como las partculas se empaquetan entre si, y por lo tanto la
presencia de espacio vacio para la difusin de oxigeno para las partculas. La forma de
partculas no ha tenido un estudio en particular, sin embargo existen ciertos principios
bsicos a tener en cuenta:

a) Cubos se empaquetan y no dejas espacio libre vacio entre si.

b) Partculas de forma de laminas largas y delgadas poseen una relacin de

superficie-volumen grande, pero tienden a formar capas entre si excluyendo el
aire.
 c) El empaquetamiento de esferas rigidas siempre deja espacio libre entre si.

d) Partculas compresibles pueden sufrir deformacin debido al gran peso que

deben soportar por encima de ellas, causando la desaparicin de espacio libre.

e) Para sustrato compuesto de partculas de diferente tamao, las mas pequeas

ocuparan el espacio entre las mayores, provocando la disminucin de espacio
vacio.

Porosidad en las partculas.

Un gran tamao de poro permitir la penetracin de micelios profundo dentro de la

particula. Un tamao pequeo puede interferir en la penetracin de micelio, y un
tamao lo suficientemente pequeo puede restringir el paso de exoenzimas en caso
de que se necesiten. Sin embargo el tamao de poros no ha sido investigado
sistemticamente para SSC, por lo que tamaos optimos de poros no han sido
determinados.

Consistencia de partculas

Si las partculas son muy pegajosas existir una tendencia a formar aglomerados,
forzando al aire a salir de los espacios en que se encuentra. El contenido de humedad
es un factor de gran influencia para la pegajosidad del slido sustrato.

La rigidez de las partculas puede ser un factor importante, especialmente en equipos

de gran escala. Existira una gran masa de sustrato por lo que las partculas en el
fondo sern aplastadas o deformadas debido al gran peso encima de ellas,
removiendo los espacios vacios y evitando una aireacin apropiada. Las fuerzas de
compresin sobre sustratos pueden ser fcilmente determinadas con un tensimetro.

Modelo Matemtico

En los patrones y cintica de crecimiento encontramos una falta de

comprensin, debido a tres problemas:

1. La complejidad de la disposicin tridimensional del micelio y el sustrato.

2. La heterogeneidad del sustrato en s.
3. La dificultad de mediciones directas de la biomasa.

En consecuencia, los modelos matemticos investigados son de origen

emprico y la caracterizacin del crecimiento es escaza. Varios investigadores
han llevado acabo la realizacin de dichos modelos, a continuacin, se
presentan 2 ejemplos.

Okazaki (1980)

Es un Modelo emprico, donde la ecuacin logstica fue asumida para el

mantenimiento celular del crecimiento del Aspergillus orizae:

dm/dt=m(1-m/N)

m= Peso seco micelial por gramo de materia seca

= Velocidad especfica de crecimiento durante fase logartmica.

N=Es el peso mximo micelial por gramo de materia seca.

Okazaki ha asumido que la produccin de CO2 fue debido a tanto al crecimiento como
al mantenimiento celular:

dA/dt=K1 dm/dt=K2m

A= CO2 por miligramo de materia seca.

K1= CO2 por miligramo de micelio seco formado

K2= CO2 debido a la respiracin endgena por miligramo seco por hora.

En este modelo la primera ecuacin representa un modelo emprico de crecimiento. La

segunda ecuacin es simplemente una correlacin que nos permite medir el
crecimiento que ha habido.

Estas ecuaciones fueron combinadas y se asumi un cociente de respiracin de 10,

para predecir el consumo de oxigeno durante el crecimiento. Buenos resultados fueron
obtenidos entre la prediccin y el consumo real de oxgeno. Este fue el primer intento
de modelado directo del crecimiento microbiano.

Sato y Yoshiza (1998)

La velocidad de desprendimiento de dixido de carbono durante el crecimiento de

Saccharomyces cerevisiae en arroz o smola de maz puede ser expresada en
condiciones de crecimiento y mantenimiento:

1
= +
2

CER = velocidad de desprendimiento de dixido de carbono

YXCO2 = rendimiento de las clulas contra el dixido de carbono

m = coeficiente de mantenimiento
X = nmero de clulas

t = tiempo

La velocidad de produccin del etanol se asumi directamente proporcional a la

velocidad del dixido de carbono. Adems, se propuso que el etanol inhibe su propia
produccin por la disminucin del coeficiente de mantenimiento de acuerdo de la
siguiente ecuacin:

= exp( )

mm = coeficiente de mantenimiento mximo

k = coeficiente de inhibicin del etanol

Cp = Concentracin de etanol

La medicin de dixido de carbono fue usada para predecir los perfiles de produccin
de etanol y biomasa.

Principios de diseo de un biorreactor

Los criterios ms importantes para el diseo de un biorreactor pueden resumirse del

siguiente modo dependiendo del tipo de biorreactor y la fermentacin a utilizar :

1. El tanque debe disearse para que funcione aspticamente durante numerosos

das, para evitar la aparicin de contaminantes en las operaciones de bioprocesos de
larga duracin.

2. Debe permitir una mayor rea de contacto entre las fases bitica y abitica del
sistema, es decir, se debe proporcionar un sistema adecuado de aireacin y agitacin
para cubrir las necesidades metablicas de los microorganismos.

3. El consumo de energa debe de ser el mnimo posible.

4. Entradas para la adicin de nutrientes y el control de pH.

5. El crecimiento microbiano es generalmente exotrmico, por lo que, el biorreactor

debe facilitar la transferencia de calor, del medio hacia las clulas y viceversa, a
medida que se produce el crecimiento celular, adems de mantener estable la
temperatura deseada.

6. Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo.

7. Suministrar oxgeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.

8. El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que todo el
sistema ha sido esterilizado y posteriormente inoculado con el microorganismo
deseado.

Los biorreactores ms utilizados a nivel industrial estn provistos de mecanismos de

agitacin, dispersin y aireacin as como de sistemas para el control de la
temperatura, pH. Los biorreactores deben ser optimizados para obtener la mxima
concentracin de productos de la fermentacin, como lo son la biomasa microbiana y/o
metabolitos en un tiempo mnimo y a menor costo de produccin.

Algunos de los biorreactores utilizados a escala laboratorio son cajas petri y matraces
Erlenmeyer. Estos son utilizados por su simplicidad, los cuales no operan con aeracin
ni agitacin forzada, en ellos solamente es controlada la temperatura del cuarto de
incubacin.
Biorreactor de Columna Estril

Este biorreactor trabaja con un volumen de 1 litro, cuenta con un muestreador de

humedad relativa y un sistema de calefaccin en la cabeza de la columna, mientras
que en el circuito de operacin se encuentra un sistema de enfriamiento, utilizando
agua fra, el cual rodea una resistencia de calentamiento. Es a nivel laboratorio.
Compuesto por pequeas columnas que contienen el sustrato y es puesto en un
termorregulador de agua y esta conectado a una columna de cromatografa. Es para
monitorear la produccin de CO2 que es el resultado de la respiracin del MO y de sus
reacciones metablicas.
Tambor horizontal

Uno de los biorreactores en estado slido ms utilizado son los llamados tambor
horizontal, el cual se ha diseado de varias formas: como un contenedor rotatorio,
perforado o con paletas, con el fin de obtener una agitacin continua del sustrato
slido para incrementar el contacto entre las paredes del biorreactor y el sustrato, as
como, proveer mayor oxigeno al microorganismo. Los equipos rotatorios, consisten de
un cilindro, con o sin chaqueta con agua para el control de temperatura, el cual gira
lentamente volteando al medio de cultivo ayudado de pestaas que se

encuentran adheridas a la pared (Fig. 3a). Este tipo de biorreactor presenta

dificultades en el control de

temperatura y humedad debido a problemas de aglomeramientos de clulas por

ruptura micelial

En cambio los biorreactores de tipo tambor con paletas, vuelve ms eficiente la

trasferencia de oxigeno y disminuye la aglomeracin de partculas de sustrato durante
el crecimiento microbiano (Fig. 3b). Sin embargo, generalmente, un biorreactor de
fermentacin slida con agitacin permanente, aunque sea suave, puede modificar la
estructura del medio slido.
Biorreactor Zymotis

Consiste de platos verticales por donde internamente hay transferencia de calor

debido a la circulacin de agua fra, mientras, que el aire previamente temporizado es
introducido por el fondo del sistema. Entre cada plato se carga el medioslido
previamente inoculado, dicha cama se mantiene esttica durante la fermentacin. Este
sistema es parecido a los biorreactores de columna, con la diferencia de que las capas
de sustrato estn verticalmente fijas, por lo tanto es difcil trabajar en condiciones
aspticas.

1.1 Biorreactor Plafractor.

El sistema es higinico y automatizado para un proceso de cultivo en bandeja. Esta

controlado por computadora. Todas las operaciones del proceso fermentativo, como
esterilizacin, enfriamiento, inoculacin, control, recuperacin de producto y post-
esterilizacin, se realiza en un solo equipo.

El equipo consta de bandejas selladas colocadas una sobre la otra formando dos
torres unidas por un eje central. Cada mdulo cuenta con un brazo de mezclado, el
cual rota alrededor axialmente, y con canales de remocin de calor metablico, control
de humedad, aireacin y vapor para la esterilizacin. Este equipo fue diseado con el
objetivo de reemplazar los cuartos de incubacin por un equipo mas compacto.
 El calor metablico es removido por conduccin. El reactor
es construido por mdulos individuales apilados e
interconectados.

Los canales no comunicados entregan fluidos fros y

calientes, los cuales estn intercalados entre dos lminas.
Los canales comunicados pueden llevar fluidos
esterilizantes (vapor), para ajustar la humedad y el oxigeno
que contiene y para extraer el componente de inters
luego del cultivo.

Biorreactor de bandeja

El cual consiste de una columna de 13 pulgadas de altura y un dimetro de 10

pulgadas (Fig. 6). En su interior se encuentran ocho charolas perforadas, las cuales
tiene una capacidad de 140 mL cada una. La transferencia del oxgeno es por
burbujeo a travs de un distribuidor de aire, permitiendo la transferencia a un flujo de
194 mL/min. La temperatura es regulada por una chaqueta de enfriamiento y/o
calentamiento, por lo que es posible controlar y medir los cambios de temperatura.
Bajo este sistema se permite una mejor distribucin de oxigeno por aireacin hacia las

charolas.
Biorreactor de lecho fluidizado

Sistema de operacin en modo continuo el cual puede ser operado por altos periodos
de tiempo a un alto valor de productividad. El principio del diseo se basa en proveer
agitacin y aireacin por flujo forzado de aire proveyndolo por la parte del cilindro a
travs de una bomba. El sistema provee un incremento en la transferencia de oxigeno
a la cama de sustrato, sin embargo, se presenta dao al inoculo por causa del gran
esfuerzo de corte generado, adems de que se forman gradientes de temperatura a
travs de la columna que pueden afectar al producto deseado.

APLICACIONES

La aplicacin de cultivos en sustratos slidos es muy amplia, pueden ser algunas

fermentaciones en estado slido (FES) de las cuales se destacan el uso en
biorremediacin y biodegradacin de compuestos contaminantes, la transformacin
biolgica de residuos agroindustriales y en la fabricacin de papel, en la produccin de
compuestos bioactivos ( antibiticos, antioxidantes, antitumorales), de enzimas, de
cidos orgnicos, biopesticidas, biocombustibles, y compuestos aromticos (mercado
de sabores, fragancias y pigmentos para el usos en alimentos, bebidas), entre otros.