UNIVERSIDAD JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRINO SANCHEZ CARRION

METABOLISMO BACTERIANO
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UNIVERSIDAD NACIONAL JOS FAUSTINO SNCHEZ CARRIN
FACULTAD DE ING.AGRARIA, IND. ALIMENTARIAS Y
AMBIENTAL
Escuela de Ingeniera Ambiental

ASIGNATURA:
Microbiologa
PROFESOR:
Luis Alberto Huaynas Dueas
TEMA:
Pruebas utilizadas en el metabolismo bacteriano
TRABAJO:
Informe N09

INTEGRANTES:
Espinoza Bravo Edith Anatolia

CICLO:
VI
HUACHO PER
2017

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 INTRODUCCIN

Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgnica a
partir de elementos inorgnicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se
encuentren, y de ah que en el interior de estos ocurran una serie de reacciones de sntesis y de
descomposicin de sustancias orgnicas, las cuales reciben el nombre de metabolismo.

A partir de estas caractersticas metablicas se realizan pruebas obtenidas para la

identificacin de microorganismos y productos obtenidos de la relacin microorganismo-
medio.

Otro de los aspectos importantes de la realizacin de estas pruebas, es que a partir de estas
ayudan a dar una respuesta ante la posible contaminacin de los alimentos por medio de
microorganismos patgenos. Las tcnicas de bioqumica han proporcionado una herramienta
til para la deteccin directa de los microorganismos contaminantes.

La identificacin bacteriana se puede realizar por medio de una serie de anlisis que
necesitan de diferentes cultivos y procedimientos para llegar a identificar las especies
bacterianas que contaminan los alimentos o las aguas.

A continuacin, se desarrollan diferentes tcnicas para la identificacin de algunos

microorganismos y productos obtenidos en la relacin ya mencionada, microorganismo-
medio.

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 OBJETIVOS

OBJETIVOS GENERALES

Realizar y analizar las diferentes tcnicas de identificacin bacteriana.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Caracterizar en cada medio de cultivo el fundamento de la tcnica empleada.

Analizar los respectivos resultados y por medio de estos hacer una previa interpretacin.

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 MARCO TERICO

Metabolismo Bacteriano

La capacidad de utilizar y transformar la energa es una de las propiedades fundamentales de

los sistemas vivientes. La energa puede hallarse en muchas formas, pero aprovechables a los
organismos vivos solo muy pocas. La energa mecnica se libera, por ejemplo, durante
movimiento celular, agitacin de cilios y flagelos, y las alteraciones de la forma celular; la
energa electromagntica se encuentra en forma de radiaciones (la luz es la fuente de energa
primaria para los organismos sintticos como las algas y las plantas), la energa trmica es
producida por la agitacin molecular y, la energa qumica que es la contenida en los enlaces de
sustancias y puede ser liberada de los compuestos orgnicos e inorgnicos a travs de ciertas
reacciones. Las reacciones qumicas son acompaadas por cambios en el nivel energtico. La
energa requerida para que una reaccin inicie se llama energa de activacin.

Otros aspectos importantes a considerar es la necesidad de la clula de poseer, adems de

catalizadores, una reserva de energa, esta servir para los procesos de sntesis celular y en la
conversin de sustratos a formar actividades. En la clula ocurre dos importantes y opuestos
procesos, y la generacin de energa y utilizacin de ella en los procesos de sntesis celular, los
cuales constituyen el metabolismo, este es la suma de transformaciones de la materia que ocurre
en el interior de las clulas y que da lugar a la sntesis de material celular a partir de sustancias
nutritivas.

1. METABOLISMO
Puede dividirse para su mejor estudio en tres aspectos diferentes

1.1 CATABOLISMO

Que es la suma de reacciones exergnicas que permiten liberar la energa contenida en los
nutrientes o sustratos y ser acumuladas en forma de ATP, u otros compuestos,

1.2 METABOLISMO INTERMEDIO

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Que es el conjunto de reacciones de los productos de hidrlisis del catabolismo y algunos
nutrientes son transformados en cidos orgnicos, esteres fosfricos y otros compuestos como
aminocidos.

1.3 ANABOLISMO

Que es la parte del metabolismo implicado en la sntesis e macromolculas (cidos nucleicos,

protenas, sustancias de reserva y otros, todos reacciones endergnicas).

2. ENSAYOS BIOQUMICOS

La identificacin de un aislamiento bacteriano puede realizare utilizando diferentes

combinaciones de caractersticas y diferentes criterios en la evaluacin de similitudes.

Los ensayos bioqumicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioqumicas

convencionales, generalmente determinan la actividad de una va metablica (conjunto de
reacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer transforma o no.

Existen diferentes sistemas que facilitan la realizacin de tales ensayos, porque proponen el
mejor conjunto de pruebas bioqumicas para la identificacin de un grupo bacteriano, porque
simplifican la interpretacin de un resultado utilizando un valor numrico, porque proveen los
reactivos listos para su uso o porque son totalmente automatizables.

2.1 LAS PRUEBAS O ENSAYOS BIOQUMICOS

son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada
caracterstica bioqumica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimtica,
grupo de enzimas o determinada va metablica, crecimiento a una determinada temperatura,
crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio
profundo del metabolismo bacteriano.

Para llevarlas a cabo, se pueden utilizar diferentes sistemas de trabajo (medio de cultivo,
indicador, revelador, etc.) que puede ser diferente an para el mismo ensayo si se trata de
diferentes microorganismos. Por ejemplo se debe suplir con factores de crecimiento el medio de
cultivo para estudiar la fermentacin de distintos azcares cuando se sabe que el

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microorganismo en estudio es exigente. A la determinacin de la especie se puede llegar segn
diversos sistemas (manuales de identificacin, comerciales, etc.).

a) Los comerciales utilizan modificaciones de las pruebas bioqumicas convencionales,

ya sea sustratos deshidratados, tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o
pequeos compartimentos con medios listos para sembrar. En todos los casos se
emplean cdigos numricos para la interpretacin de resultados

Los sistemas comerciales ms comnmente usados son:

BBL, ENTEROTUBE II (Becton Dickinson). Es un sistema para usar en la

identificacin de Enterobacterias, definida como bastones Gram -, aerobios o anaerobios
facultativos, oxidasa (-). Consiste en un tubo de plstico con 12 medios de cultivo
contenidos en compartimentos individuales que se inoculan simultneamente en una
etapa y permiten la deteccin de 15 caractersticas bioqumicas.
OXI/FERM TUBE II, (Becton Dickinson). Es un sistema listo para usar para la
identificacin de bastones gram (-), aerobios o anaerobios facultativos, oxidasa (+).
Consiste en un tubo de plstico de 12 medios de cultivo que permite la realizacin
simultnea de 14 pruebas bioqumicas.
API 20 E. Es un sistema estandarizado para la identificacin de Bacterias Gram -.
Consiste en una plantilla con microtubos conteniendo medios de cultivo deshidratados
que se reconstituyen al agregar una suspensin bacteriana. Permite la realizacin de 23
pruebas bioqumicas a partir de una nica colonia bacteriana.

Otros sistemas:

Quintet 3H de Diagnostics Pasteur para Enterobacterias. API 10S, versin

miniaturizada del API 20 E
API Listeria
API NH (Neisseria - Haemophilus)

Existen tambin sistemas de identificacin comerciales para levaduras:

API 20 C (Para levaduras del gnero Candida)

Auxacolor de Diagnostics Pasteur

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 Fongiscreen 4H de Diagnostics Pasteur (Para identificacin de levaduras de inters
mdico)

b) En la Ctedra se desarroll un sistema para la identificacin de Enterobacterias que

consta de nueve pruebas bioqumicas convencionales (SYS 9E). Este sistema identifica
las 23 especies ms frecuentemente aisladas de muestras clnicas. Est integrado por las
siguientes pruebas: produccin de H2S en agar triple azcar hierro (TSI), fenilialanina
deaminasa, produccin de indol, descarboxilacin de lisina, descarboxilacin de ornitina,
crecimiento en citrato, fermentacin de arabinosa, fermentacin de sorbitol y
produccin de acetona (VP).

2.2 EN ESQUEMA LA REALIZACIN DE UNA PRUEBA BIOQUMICA IMPLICA

- Cultivar el microorganismo en un medio que contiene un determinado sustrato o

inhibidor y luego de la incubacin visualizar el crecimiento y la degradacin de un
sustrato, ya sea por viraje de un indicador o por agregado de un reactivo revelador de la
presencia del sustrato, o de algn producto de su degradacin.

- Cultivar el microorganismo en un medio de propagacin que contenga el sustrato de una

enzima inducible y luego de la incubacin demostrar la actividad enzimtica.

En todos los casos se debe tener un cultivo fresco (18-24 hrs. de incubacin) en un medio en que
el microorganismo se desarrolla en forma ptima, a pH, fuerza inica, atmsfera y temperatura
adecuados. Siempre que se prepara un nuevo lote de medio de cultivo para una prueba, deben
llevarse a cabo los correspondientes controles de calidad, sembrando en dicho medio una cepa
positiva y otra negativa para ese test.

3. PRUEBAS UTILIZADAS EN EL METABOLISMO BACTERIANO

3.1 TSI (TRIPLE SUGAR IRON)

El agar triple azcar hierro es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la
capacidad de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico

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medio. Tambin permite la deteccin de la produccin de H2S. Es un medio til para la
identificacin de Enterobacterias.
El agar se prepara en forma de pico de flauta. Esto determina que existan 2 cmaras de
reaccin dentro del mismo tubo. La porcin inclinada (pico) expuesta en toda su superficie
al oxgeno es aerobia y la porcin inferior (fondo) est protegida del aire y es relativamente
anaerobia. La porcin inclinada del tubo que est expuesta al oxgeno atmosfrico tiende a
tornarse alcalina (roja por el rojo fenol) por la utilizacin aerobia de las peptonas.
En el fondo del tubo, donde no hay oxgeno, la degradacin proteica es mnima y se pueden
detectar pequeas cantidades de cido por la aparicin de un color amarillo (indicador: rojo
fenol). En ausencia de fermentacin de carbohidratos, no se formarn cidos y por la
produccin de aminas en el pico, todo el medio quedar rojo. Esto se da en organismos no
fermentadores.
El medio est diseado de tal forma que la glucosa se encuentra en una proporcin 10 veces
menor que la lactosa y la sacarosa. Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de
glucosa pero no de lactosa ni de sacarosa, la cantidad de cido producida por fermentacin a
partir de la glucosa ser baja porque la concentracin de glucosa es baja. Al principio se
producir viraje del indicador al amarillo en tubo, pero al continuar la incubacin, el pico del
tubo retornar al rojo por la degradacin aerobia de las peptonas antes descrita.
Si el microorganismo fermenta la lactosa y/o la sacarosa, como las concentraciones de estos
azcares es 10 veces mayor, se producir mayor cantidad de cido que no puede ser revirado
por la produccin de aminas en la superficie por metabolismo aerobio. La produccin de H2S

a partir de tiosulfato se pone en evidencia por precipitar el Fe +2 del sulfato ferroso. Como
esta reaccin se da slo en medio cido, un ennegrecimiento del fondo del tubo se lee como
fermentacin de algunos de los azcares del medio. Adems puede observarse la produccin
de gas, como burbujas en el fondo del tubo.

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 Microorganismos Crecimiento Columna vertical Sup inclinada For de
Escherichia coli Bueno Amarillo Amarillo H2S
Citrobacter freundi Bueno Amarillo y negro Amarillo -
Enterobacter cloacae Bueno Amarillo Amarillo +
Shigella flexneri Bueno Amarillo Rojo -
Salmonella thyphimurium Bueno Amarillo-negro Rojo -
Salmonella enteriditis Bueno Amarillo-negro Rojo +
Proteus mirabilis Bueno Amarillo-negro Rojo +
Proteus vulgaris Bueno Amarillo -negro Amarillo +
+

Interpretacin

Pico alcalino/fondo alcalino (Alc/Alc)

No hay fermentacin de azcares. Caracterstica de bacterias no fermentadoras.

Pico alcalino/fondo cido (Alc/A)

Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas.

Pico alcalino/fondo negro (Alc/A/H2S +)

Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas, produccin de cido sulfhdrico.

Pico cido/fondo cido (A/A)

Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse H2S o no. (A/A/H2S -) A estos
resultados se les agrega el resultado de la produccin de gas. Ej. A/A/gas+/H 2S-.

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 3.2 CITRATO

La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono es una prueba til en la

identificacin de Enterobacterias.

La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo

con citrato como nica fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinizacin del
medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al
alcalino a pH 7,6.

CRECIMIENTO MICROORGANISMOS
Positivo: medio de cultivo Azul Citratos - positivos:
oscuro Enterobacter, S. parathyphi, S. enteriditis, S.
typhimurium, Arizona.
Klebsiella, Serratia.

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Negativo o inhibido Citratos negativos:
Shigella, Escherichia, S. paratyphi y otros.

Interpretacin

- El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estra,

acompaado o no de un viraje del indicador al azul.

3.3 INDOL

El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptfano. Las
bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con
produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La produccin de indol es una caracterstica
importante para la identificacin de muchas especies de microorganismos.
La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo
de los reactivos de Kovacs y Ehrlich descriptos ms adelante. El medio de cultivo utilizado
debe ser rico en triptfano.
Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al aadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs,
se producir un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba ser considerada
positiva. Si esto ocurre despus de 24 horas, la prueba se considera completa, pero si es
negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es conveniente hacer
siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porcin de unos 2ml que se retira de
l aspticamente.

Interpretacin

- El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo,

segundos despus de aadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba
positiva.

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 3.4 ROJO DE METILO

Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los diferentes gneros
de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin de productos de fermentacin que se
originan por la fermentacin de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentacin
cido-mixta y la fermentacin del 2,3 butanodiol. En la fermentacin cido mixta se forman
fundamentalmente lctico, actico y succnico, adems de etanol, H2 y CO2. En la va del
butanodiol se forman cantidades menores de cido (acetato y succinato) y los principales
productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.

El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo),
que se utiliza para visualizar la produccin de cidos por la va de fermentacin cido mixto.

Reaccin cromtica Microorganismos

De anaranjado a rojo Eschericha coli citrobacter y
De anaranjado a amarillo otros Enterobacter aerogenes
Rojo (positivo) Enterbacter cloacae
Sin reaccin (negativo) Enterobacter coli

Interpretacin

- La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la

produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador y el
microorganismo ferment la glucosa por la va de cido mixta. Un color anaranjado,
intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.

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 3.5 VOGES-PROSKAUER

En la prueba de Voges-Proskauer se determina la va de fermentacin del butanodiol

descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto
intermediario en la produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno
la acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color
rojo-fucsia.

Interpretacin
- El desarrollo de un color rojo-fucsia luego de 15 minutos indica la presencia de
diacetilo, producto de oxidacin de la acetona y por lo tanto una prueba VP
positiva.

3.6 CAT ALASA

La catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua.
Qumicamente, la catalasa es una hemoprotena de estructura similar a la de la hemoglobina,
excepto que los 4 tomos de hierro de la molcula estn en estado oxidado (Fe+++) en lugar
de reducido (Fe++). Excluyendo los estreptococos, la mayora de las bacterias aerobias y
anaerobias facultativas poseen actividad catalasa.
El perxido de hidrgeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo
oxidativo aerbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular, el perxido de hidrgeno
es letal para las clulas bacterianas. La catalasa transforma el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno de acuerdo a la siguiente reaccin:

H2O2 H2O + O2 (burbujas de gas)

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayora de
las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin
es Streptococcus.
Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros:

Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

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 Bacillus (+) de Clostridium (-).
Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de
C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-)

Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos
tcnicas:

3.6.1 Mtodo del portaobjetos (recomendado):

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar
sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo
sin mezclarlo con el cultivo.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden
producirse falsos positivos.

3.6.2 Mtodo del tubo de ensayo:

Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente

inoculado.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).

Precauciones:

Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin
de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio
contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.

Interpretacin
1. efervescencia, indica una prueba positiva. Dado que algunas bacterias pueden
poseer enzimas distintas de la catalasa, capaces de descomponer el perxido Prueba
cualitativa: la rpida aparicin y produccin sostenida de burbujas de gas o de hidrgeno, unas
pocas burbujas diminutas, formadas a los 20 a 30 segundos no se consideran una prueba
positiva.

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 2. Prueba semicuantitativa: las determinaciones cuantitativas de catalasa se llevan a
Cabo ms comnmente en la identificacin de micobacterias. Se mide la altura que alcanza
la formacin de burbujas de gas en el tubo, luego de aadir el perxido de hidrgeno.
Una columna de burbujas de 50 mm o ms, se considera una reaccin fuertemente positiva.

3.7 UREASA

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de

amoniaco por accin del enzima ureasa. Esta actividad enzimtica es caracterstica de todas
las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este gnero de otras
enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.
Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se
complementa despus del autoclavado con 50ml/l de urea. sta ser degradada por aquellos
microorganismos capaces de producir el enzima ureasa. Esta degradacin produce amoniaco
que har variar el color del indicador de amarillo a rojo, ponindose as de manifiesto la
actividad ureasa.
Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el tiempo de incubacin
ya que especies de Proteus vuelven alcalino el medio poco despus de la inoculacin y sus
resultados deben ser ledos en las primeras 2-6 horas, mientras que Citrobacter freundii y
Klebsiella pneumoniae tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas de incubacin.

Colonias Microorganimo
Rojo Urea
fucsia positivos:
Amarillo Proteus, Klebsiella,
Enterobacter, Citrobacter.
Urea negativos:
Shigella, Salmonella,
Escherichia,
Citrobacter, Enterobacter,
Serratia, Providencia.

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3.8 GELATINAZA

Para la determinacin del nmero total de grmenes y para la investigacin, en aguas de

grmenes que licuan la gelatina. Hay aparicin de halos de aclaracin alrededor de las colonias
que licuan la gelatina.

Microorganismos Cuotas de
Escherichia coli recuperacin (%)
Proteus vulgaris 170
170
Staphilococcus 170
aureus 170
Enterococcus 170
faecalis Bacillus
cereus

3.9 OXIDASA

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reaccin de la oxidasa se
debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidacin del citocromo que es
reducido por el oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie
bacteriana. El oxgeno acta por tanto como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa slo se encuentra en
los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algn
microaerfilo (Vibrio fetus), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.
Asmismo, la presencia de oxidasa va ligada a la produccin de catalasa, ya que sta degrada el
perxido de hidrgeno que se produce como consecuencia de la reduccin del oxgeno y cuya
acumulacin es txica.

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para:

Identificar todas las especies de Neisseria (+)

Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.

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El reactivo de la oxidasa ms recomendado es la solucin acuosa al 1% de diclorhidrato de
tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos txico y mucho ms sensible que el
correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es ms caro. Este
reactivo tie las colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira gradualmente a prpura-
negruzco intenso.

Realizacin de la prueba:

3.9.1 Mtodo en placa directa

Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la placa
y no invertirla.
Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reaccin se produce en unos
10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 10-30
minutos.

3.9.2 Mtodo indirecto sobre papel

Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente en una placa de Petri.

Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel.
Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado.
La reaccin de color positiva se produce a los 5-10 segundos.

3.10 COAGULASA PARA (Staphylococcus)

Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de

Staphylococcus (coagulasas negativos). La tcnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada.

Mecanismo de accin de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana)

reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguneo similar a la protrombina,
dando lugar a un complejo anlogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona
con fibringeno formando un cogulo de fibrina en ausencia de Ca2+.

La coagulasa ligada o factor de agregacin acta directamente sobre el fibringeno y lo

convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmticos.

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 3.11 HIDRLISIS DEL ALMIDON

El almidn es producido principalmente por plantas superiores, La amilosa y la amilopectina son

componentes del almidn pero la amilosa es de estructura lineal, con enlaces (1-4), que forma
hlices en donde se juntan las molculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras que la
amilopectina es de estructura ramificada, con con enlaces (1-4) (1-6), que forma hlices
mucho ms cortas y las molculas de yodo son incapaces de juntarse presentando un color
intermedio entre anaranjado o amarillo.

La hidrlisis del almidn es un proceso muy utilizado en la industria para producir glucosa a
partir de almidn de determinados frutos o productos y esto se efecta en tres pasos que son los
siguientes:

- Gelatinizacin
- Dextrinizacin
- Sacarificacin

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El lugol con el almidn forman un complejo color caf-prpura que desaparece cuando el
almidn ha sido degradado

Interpretacin

o Con la reaccin del Lugol podemos identificar de modo general polisacridos, pero de
modo especfico entre uno de ellos se encuentra el almidn que lo identificamos en la
prctica.
o El almidn al ponerse en contacto con el lugol presenta una coloracin violeta, esto se
debe a que cuando el lugol reacciona con las dos estructuras que forman el almidn, con
la amilosa proporciona un color azul y cuando reacciona la amilopectina con lugol
proporciona un color rojo y la combinacin de estos dos colores nos proporciona el
color violeta caracterstico del almidn.

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 FLUJOGRAM AS

TSI o KIA
Sembrar en TSI o KIA
medio

Incubar 37C por 24

horas

Observar resultados

CITRATO Simmons
Sembrar en medio citrato

37C (por
Incubar 24,48,72)
horas)

Observar resultados

Caldo
INDOL Sembrar en medio peptona
tripticasa

37C (24, 48
Incubar
horas)

Agregar reactivo
kovancs

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 Agitar

Observar resultados

ROJO DE METILO
Caldo RM.VP
Sembrar en medio

Incubar 37C (2-4 dias)

Agregar indicador
Rojo de metilo

Observar resultados

VOGES PROSKAUER
Sembrar en medio

Incubar

Agregar 0.6ml Naftol al 5%

Agregar 0.2ml KOH al 40% Agitar

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 Agitar

Exponer al aire 15 min

Observar resultados

MOTILIDAD Y H2S

Sembrar en medio SIM

Incubar 37C, (28-

48horas)

Agregar reactivo
Kovacs

Agitar

Observar
resultados

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CAT ALASA
Extraer colonias

Colocar en portaobjetos

Agregar H2O2

Observar resultados

UREASA
Urea
Sembrar en medio Christens
en

Incubar 37C, (1-

6das)

Observar resultados

GELATINAZA
Sembrar en medio Gelatina

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Utilizar un tubo de control

Incubar 37C, (1-5das)

Observar resultados

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 RESULTADOS
Las pruebas bioqumicas realizadas en un laboratorio arrojaron los siguientes resultados:

Pruebas Medios de Rang Indicador Color Color final Resultad

bioqumicas cultivos o inicial o
de
pH
TS I TSI 7,4 Rojo de fenol Rojo oscuro Negro +
0,2

KLIGER Kliger Rojo de fenol Caf vino Caf vino -

Citrato Simmons 6.9 Azul de Verde Azul(pico de flauta) y +

citrato bromotimol verde(profundidad)
Indol Caldo Kovacs Incoloro Rosado sin anillo -
peptona
tripticas
a
Rojo de metilo Caldo RM - 6,9 Rojo de Anaranjado Amarillo -
VP 0,1 metilo
Descarboxilasa LIA Prpura de Amarillo Amarillo -
bromocresol
Voges proskauer Caldo RM - Amarillo Rojo (superficie) y +
VP amarillo(fondo)
Motilidad y H2S SIM Tiosullfato de Amarillo Amarillo +
sodio y coaguloso(superficie) y
sulfato negro(fondo)
ferroso

Catalasa H2O2 Amarillo Blanco efervescente +

Gelatinaza Gelatina Amarillo Amarillo transparente -
transparente
Ureasa Urea Rojo de fenol Piel de ante fucsia +
Christensen
Nitrato Nitrato Griess- transparente Amarillo -
ilosvay y
Kovacs
Baird parker agar Baird parker 6.8 Cloruro de Amarillas Caf oscuro (colonias) +
agar 0.2 ltio y telurito (colonias)

Mac Conkey M ac 7.1 Rojo neutro Amarillas Rosado (colonias) +

Conkey 0.1 (colonias)
Hektoen Enteric Hektoen 7.7 Azul de Amarillas +
Agar Enteric Agar 0,1. bromotimol y (colonias). Negro con verde
fucsina cida brillante(colonias)
Endo C Endo C 7.4 Fucsina- Amarillas Rojo (colonias) +
0.2 sulfito (colonias)

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 CONCLUSIN

Las pruebas bioqumicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una

va metablica (conjunto de reacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora
en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.

A partir de las pruebas bioqumicas de identificacin bacteriana, mediante estndares

establecidos, podemos conocer que bacteria tenemos en una muestra problema basndonos
en sus reacciones metablicas las cuales son caractersticas de cada microorganismo.

Son funciones especificas del metabolismo:

Obtencin de energa para los procesos celulares.

Conversin de los compuestos nutritivos en precursores de los componentes celulares.

Organizacin de esas macromolculas en polmeros.

Formacin y degradacin de las biomolculas necesarias para las funciones

especializadas de la clula.

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 BIBLIOGRAFIA

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Bioquimicas

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