MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA

PRACTICA No 01

METODOS DE SEPARACION DE SUSTANCIAS: CROMATOGRAFIA EN PAPEL DE

FILTRO

Blgo. Kelvin FACUNDO SALAS

1. INTRODUCCION

La CROMATOGRAFIA es Un mtodo que se usa en bioqumica, para separar

componentes de una mezcla en solucin, estos componentes se desplazan a
diferentes velocidades en una fase estacionaria. Existen diferentes tipos de
cromatografa como la cromatografa de gases, de reparto, de intercambio
inico, de capa fina, en gel de poliacrilamida y cromatografa en papel de
filtro la que ser utilizada en la presente prctica con fines didcticos.

La cromatografa en papel de filtro se fundamenta en la solubilidad diferencial

de las sustancias en solventes orgnicos, las cuales migran sobre el papel,
esta velocidad de desplazamiento se ve afectada por el tamao de los
solutos, sus cargas elctricas, fuerzas hidrofbicas, fuerza de van der waals,
puentes de hidrgeno y por el tamao de los poros de la fase estacionaria

Los solutos avanzan sobre la fase estacionaria segn sus coeficientes o

factores de retraso (Rf) y se mide en trminos relativos a la distancia
avanzada por el frente de la fase mvil (FM)

2. OBJETIVOS:

- Extraer y separar los pigmentos fotosintticos mediante el uso de un

mtodo de separacin de sustancias: La cromatografa en papel de filtro
- Determinar el factor de retraso para cada uno de los componentes
separados

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS: (materiales por cada mesa de

trabajo)
 - Hojas frescas de Spinacia olercea espinaca
- Piln o mortero de piedra, vidrio o porcelana
- Papel filtro
- Tubos de ensayo de 10 mm * 15 cm con tapa rosca o caucho
- Bagueta de vidrio
- Vaso de precipitado de 100 ml
- Placas petri de vidrio de 100 * 15 mm
- Embudo de vidrio
- Alcohol de 96 (Frasco de 100 ml)
- Regla milimtrica
- Cronmetro
- Balanza de precisin

(*) Material de vidrio para cada mesa de trabajo

4. PROCEDIMIENTO:

4.1Extraccin de pigmentos:

4.1.1 Tomar 2 o 3 hojas frescas de espinaca y pesarlas

4.1.2 Colocarlas en el mortero e iniciar su trituracin adicionando alcohol de 96
a medida que este se vaya consumiendo
4.1.3 Filtrar sobre un tubo de ensayo haciendo uso de un embudo de vidrio con
papel de filtro
4.1.4 Medir el volumen filtrado

4.2Separacin de pigmentos:

4.2.1 Transvasar el filtrado obtenido hacia un vaso de precipitado o una placa

petri
4.2.2 Cortar rectngulos de papel de filtro de 5 * 10 cm
4.2.3 Colocar el papel de filtro de forma vertical sobre la solucin
4.2.4 Esperar 30 minutos
4.2.5 Observar y reportar los resultados

5. RESULTADOS/OBSERVACIONES

Grafique los resultados obtenidos y complete la siguiente tabla

PIGMENTO COLO DISTANCIA SOLUTO DISTANCIA FASE FACTOR DE

R (cm) MOVIL (cm) RETRASO
Clorofila A
Clorofila B
Beta
caroteno
Xantofila
6. CUESTIONARIO

1. Describa cromatografa y sus tipos

2. Explique que es el factor de retraso o coeficiente de retraso (Rf)