Quito Ecuador

NORMA NTE INEN 2951

TCNICA 2015-XX
ECUATORIANA

PRODUCTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIN DE PATULINA EN

ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURS DE MANZANA. MTODO
POR HPLC CON PURIFICACIN POR CROMATOGRAFA DE
REPARTO LQUIDO/LQUIDO.

FOODSTUFFS. DETERMINATION OF PATULIN IN CLEAR AND CLOUDY APPLE JUICE AND

PUREE. HPLC METHOD WITH LIQUID/LIQUID PARTITION CLEAN UP

_____________________________________

Correspondencia:

Esta norma nacional es equivalente a de la Norma Europea UNE EN 14177:2004.

DESCRIPTORES: frutas y productos derivados, patulina, cromatografa lquida de alta eficiencia, 11

HPLC.
Pginas
ICS: 67.080.10; 67.160.20
NTE INEN 2951 2014-XX

PRODUTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIN DE PATULINA EN NTE INEN

Norma
ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURS DE MANZANA. :2014
Tcnica
MTODO POR HPLC CON PURIFICACIN PRO
Ecuatoriana
CROMATOGRAFA DE REPARTO LQUIDO/LQUIDO

1 OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta norma nacional especifica un mtodo para la determinacin de patulina en zumos de manzana y en
purs de manzana mediante la utilizacin de cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC). El mtodo se
ha validado para la determinacin de patulina mediante el anlisis de muestras contaminadas natural y
artificialmente en zumos de manzana claros a niveles comprendidos entre 26 g/L y 128 g/L, en zumos de
manzana turbios a niveles comprendidos entre 26 g/L y 106 g/L, y en purs de manzana a niveles
comprendidos entre 23 g/kg y 121 g/kg.

2 REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos en su totalidad o en parte, son referidos en este documento y son indispensables
para su aplicacin. Para referencias fechadas, solamente aplica la edicin citada. Para referencias sin
fecha, aplica la ltima edicin del documento de referencia (incluyendo cualquier enmienda).

NTE INEN ISO 3696, Agua para uso en anlisis de laboratorio-Especificacin y mtodos de ensayo

3. FUNDAMENTO

Los zumos de manzana turbios y los purs de manzana se tratan enzimticamente con una pectinasa. La
patulina procedente del zumo de manzana o del pur tratado enzimticamente se extrae con acetato de
etilo. El extracto del disolvente se purifica mediante extraccin lquido-lquido con una disolucin acuosa de
carbonato sdico. El extracto de acetato de etilo se seca utilizando sulfato sdico anhidro. Tras la
evaporacin del acetato de etilo, la patulina se determina cuantitativamente mediante cromatografa lquida
de altas caractersticas (HPLC) utilizando deteccin ultravioleta (UV).

4. REACTIVOS
4.1 Durante los anlisis, y salvo que se indique lo contrario, se utilizan exclusivamente reactivos de grado
analtico reconocido y solamente agua destilada o agua de grado 1 segn se define en la NTE INEN ISO
3696. Los disolventes deben ser de una calidad adecuada para anlisis mediante HPLC.

4.2 Disolucin de carbonato sdico, de una concentracin en masa de (Na 2CO3) 15 g/L
Se disuelven 1,5 g de carbonato sdico en 100 mL de agua.

4.3 cido actico, de concentracin en volumen (CH3COOH) 98%

4.4 Sulfato sdico anhidro
4.5 Agua a pH 4
Se ajusta el agua a un pH de 4 con cido actico.
4.6 Etanol absoluto, (CH3CH2OH) 99,7%
4.7 Acetato de etilo

4.8 cido perclrico, (HClO4) = 60%

4.9 Acetonitrilo
4.10 Disolucin enzimtica de endogalacturonasa, de actividad tpica de 1 400 U/g

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Definicin de unidad: la cantidad de enzima que cataliza en 5 min un descenso en la viscosidad del 20% de
una disolucin de pectina al 1% a un pH de 3,4 y una temperatura de 25 C.

NOTA: Resultan prcticos los envases de 100 mL a 200 mL.

4.11 Fase mvil de HPLC

Se mezclan 95 partes por volumen de agua con 5 partes por volumen de acetonitrilo (4.9) y 0,095 partes por
volumen de cido perclrico (4.8), y se desgasifica.

4.12 Disolucin concentrada de patulina

ATENCIN - Se sospecha que la patulina es mutagnica y se ha descrito que presenta
propiedades inmunotxicas y neurotxicas. Deberan utilizarse en todo momento guantes y gafas de
proteccin, y las etapas de preparacin de todas las muestras y patrones deberan realizarse en una
cabina de gases.

Se disuelven en acetato de etilo (4.7) 5 mg de patulina, o bien el contenido de 1 ampolla (si la patulina se
encuentra cristalizada). Se lleva la disolucin a un matraz aforado de 25 mL y se enrasa con acetato de etilo,
obtenindose una disolucin que contiene aproximadamente 200 g/mL de patulina. La disolucin concentrada
de patulina se almacena en un congelador a una temperatura inferior a 0 C.

4.13 Disolucin patrn de patulina

Se evaporan 1 000 L de la disolucin concentrada (4.12) bajo atmsfera de nitrgeno hasta evaporacin
completa e inmediatamente se disuelve sta en 20 mL de etanol (4.6), obtenindose una concentracin en
masa de patulina de aproximadamente 10 g/mL.

Para determinar la concentracin exacta, se registra la curva de absorcin entre 250 nm y 350 nm en una
cubeta de cuarzo de 1 cm, utilizando etanol como referencia. Se identifica la longitud de onda de
absorcin mxima. La concentracin en masa de patulina pat, en microgramos por mililitro, se calcula
utilizando la ecuacin 1:

donde,

es la concentracin en masa de patulina, en microgramos por mililitro;

es la absorbancia determinada en el punto mximo de la curva de absorcin (en este caso:

aproximadamente a 276 nm);

M es la masa molecular relativa de la patulina (M = 154,12 g/mol);

es el coeficiente de absorcin molar relativo de la patulina en etanol [en este caso: 1 460 m2/mol, segn se
recoge en AOAC Official Methods, 1995, Natural Toxins, Patulin, 49.6.01.C(d)];

es la longitud de paso ptico de la cubeta de cuarzo, en centmetros.

La disolucin patrn de patulina se almacena en un congelador a una temperatura inferior a 0 C. Las

disoluciones almacenadas de esta forma son estables durante 2 meses. Antes de utilizarse, se debe asegurar
que la disolucin patrn haya alcanzado la temperatura ambiente para evitar la incorporacin de agua de
condensacin.

4.14 Disolucin patrn de patulina para calibracin

Se evaporan 500 L de la disolucin patrn (4.13) o una alcuota equivalente a una cantidad absoluta de 5 g
de patulina hasta evaporacin completa y se disuelven en 5 mL de agua a pH 4 (4.5), obtenindose una
concentracin en masa de patulina de 1 g/mL.

Esta disolucin puede almacenarse en una nevera a 4 C. Una disolucin almacenada de esta manera es
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estable durante 8 semanas como mnimo.

5. EQUIPOS

5.1 Generalidades
Los aparatos habituales de laboratorio y en particular, lo siguiente.

5.2 Pipetas automticas de capacidades de 5 mL, 1 mL, 200 L y 50 L, junto con las puntas de pipeta
apropiadas

5.3 Balanza analtica

5.4 Espectrofotmetro UV, de doble haz y registro, adecuado para realizar mediciones entre 250 nm y 350
nm

5.5 Cubetas de cuarzo, de longitud de paso ptico de 1 cm

5.6 Centrfuga, capaz de alcanzar 4 500 g

5.7 Tubos de centrfuga de 50 mL de capacidad con tapones de cierre de rosca

5.8 Rotavapor, con bao de agua conectado a 40 C

5.9 Papel de filtro, de un tamao de poro de entre 20 m y 25 m

5.10 Filtros para jeringas desechables, de un tamao de poro de 0,2 m (opcional)

Antes de su uso se analiza cada lote para asegurar que la patulina no se queda adsorbida en el filtro.

5.11 Aparato de HPLC, que incluya lo siguiente

5.11.1 Sistema de inyeccin, un sistema de inyeccin de vlvula con un bucle de inyeccin de 50 L.

5.11.2 Bomba, isocrtica, sin generacin de pulsos y capaz de mantener una velocidad de flujo de un
volumen de 1 mL/min

5.11.3 Detector UV, equipado con una cubeta de flujo analtica y ajustado a 276 nm.

5.11.4 Columna analtica de HPLC en fase inversa, por ejemplo C18 octildecilsilano (ODS) (una carga de
carbono de entre el 12% y el 17% de forma completa o sobre el extremo superior ha demostrado ser
adecuada), la cual asegura la resolucin de la patulina respecto a todos los dems picos. La altura mxima
de los hombros de los picos solapantes debe ser inferior al 10% de la altura del pico ms alto (podra ser
necesario ajustar la fase mvil para conseguir una suficiente resolucin de la lnea basal). Debera utilizarse
una pre-columna adecuada.

5.11.5 Sistema de tratamiento de datos.

5.11.6 Vlvula de conexin o una segunda bomba de HPLC, opcional, para permitir el lavado de la columna
analtica entre inyecciones.

6. PROCEDIMIENTO

6.1 Preparacin de las muestras para anlisis

6.1.1 Zumo de manzana claro. No se requiere preparacin. Se contina segn se describe en los apartados 6.2 a
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6.1.2 Zumo de manzana turbio. Se trasvasan 20 mL 0,1 mL del zumo turbio a un tubo de centrfuga (5.7) y
se aaden 150 L de la disolucin enzimtica (4.10). Se tapa con el tapn de rosca y se agita bien para mezclar.
Se deja en reposo durante toda una noche a temperatura ambiente o durante 2 h a 40 C, tras lo cual se
centrifuga a 4 500 g durante 5 min.

6.1.3 Pur de manzana. Se pesa dentro de un tubo de centrfuga (5.7) una porcin para anlisis de 10 g del
pur, con una aproximacin de 0,1 g, se aaden 150 L de la disolucin enzimtica (4.10) seguido de 10 mL de
agua. Se tapa con el tapn de rosca y se agita bien para mezclar, utilizando un homogeneizador si la muestra lo
requiere. Se deja en reposo durante toda una noche a temperatura ambiente o durante 2 h a 40 C, tras lo cual
se centrifuga a 4 500 g durante 5 min.

6.2 Extraccin de patulina

Se pipetean 10 mL de zumo claro o de zumo turbio segn qued preparado en el apartado 6.1.2 y se introducen
en un decantador de 100 mL. Para el pur de manzana se pipetean 10 mL del pur de manzana segn
qued preparado en el apartado 6.1.3 y se introducen en un decantador de 100 mL. Esto es equivalente a 5 g
de pur de manzana. Se aaden 20 mL de acetato de etilo (4.7) y se agita durante 1 min. Se deja que se
separen las fases y a continuacin se decantan respectivamente en sendos Erlenmeyer. Se deposita otra vez
la fase acuosa sobre el mismo decantador y se re-extrae con una segunda porcin de 20 mL de acetato de
etilo. Se deja que se separen las fases y se decanta la fase acuosa inferior sobre un Erlenmeyer vaco y la
fase superior sobre el Erlenmeyer que contiene el acetato de etilo procedente de la primera extraccin. Se
repite este proceso de extraccin una tercera vez, pero despus de haber dejado que se separen las fases,
desechando la fase inferior acuosa. Se juntan los tres extractos de acetato de etilo en el decantador. Se enjuaga
con otros 5 mL de acetato de etilo el Erlenmeyer utilizado para recoger los extractos de acetato de etilo y se
aade este volumen al extracto de acetato de etilo presente en el decantador.

6.3 Eliminacin de los compuestos cidos interferentes

Se aaden 4 mL de la disolucin de carbonato sdico (4.2) al decantador que contiene el extracto de acetato de
etilo y se agita durante 0,5 min. Se dejan separar las fases, vaciando a continuacin la fase acuosa inferior
sobre un Erlenmeyer. Se vuelca la fase superior sobre un matraz de fondo redondo (5.12) a travs de un
embudo y un papel de filtro (5.9) que contenga aproximadamente 15 g de sulfato sdico anhidro (4.4). Se
transfiere la fase acuosa otra vez sobre el mismo decantador, se aclara el Erlenmeyer con 10 mL de acetato de
etilo (4.7), se aade ste al decantador y se agita durante 0,5 min. Se dejan separar las fases, se desecha la
fase inferior y se vuelca la fase superior sobre el matraz de fondo redondo (5.12) hacindola pasar a travs del
sulfato sdico. Se enjuaga el decantador con 15 mL de acetato de etilo y se vuelca ste, hacindole pasar a
travs del sulfato sdico, sobre el matraz de fondo redondo.

Esta etapa debe completarse dentro de un intervalo de tiempo de 3 min.

6.4 Preparacin de la disolucin del extracto final de la muestra

Se evapora la disolucin procedente del apartado 6.3 hasta reducirla a un volumen pequeo (< 1 mL) mediante
vaco, utilizando un bao de agua a 40 C. Se trasvasa sta a un vial de vidrio. Se enjuaga el interior del matraz
de fondo redondo con acetato de etilo (4.7) para asegurar que se transfiere al vial toda la patulina. Se evapora la
disolucin bajo corriente de nitrgeno en un bloque calefactor o en un bao de agua conectado a 40 C, hasta
que quede completamente seca. El residuo se vuelve a disolver pipeteando dentro del vial 1 mL de agua (4.5)
(500 L para las muestras procedentes de purs) (V1). Se asegura que la muestra se disuelve completamente
haciendo que se mezcle bien utilizando un mezclador vortex. Se transfiere la disolucin de anlisis de la
muestra a un vial de HPLC. En caso necesario, se filtra a travs de un filtro de jeringa desechable (5.10).

7 PROCEDIMIENTO DE CONTAMINACIN ARTIFICIAL

7.1 Zumo de manzana claro

Se pipetean 10 mL del blanco de zumo claro en un decantador de 100 mL. Se pipetean 50 l de la disolucin
patrn (4.13) o una alcuota equivalente a una cantidad absoluta de 0,5 g de patulina y se aaden sobre el
blanco de zumo. Se cierra el recipiente y se agita bien para mezclar. Se contina segn se indica en los
apartados 6.2 a 6.4.
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7.2 Zumo de manzana turbio

Se pipetean 10 mL de zumo turbio en un tubo de centrfuga (5.7). Se pipetean 50 L de la disolucin patrn
(4.13) o una alcuota equivalente a una cantidad absoluta de 0,5 g de patulina y se aaden sobre el blanco de
zumo. Se cierra el tubo y se agita bien para mezclar. Se contina segn se indica en el apartado 6.1.2.

7.3 Pur de manzana

Se pesan, con una aproximacin de 0,1 g, 10 g de la muestra blanco de pur de manzana en un tubo de
centrfuga (5.7). Se pipetean 50 L de la disolucin patrn (4.13) o una alcuota equivalente a una cantidad
absoluta de 0,5 g de patulina y se aaden sobre el blanco de pur. Tras la adicin de la disolucin de patulina
se agita bien para mezclar. Se contina segn se indica en el apartado 6.1.3.

8. CALIBRACIN

8.1 Curva de calibracin

8.1.1 Generalidades. Se prepara una curva de calibracin al inicio de cada da en que se realicen anlisis.

8.1.2 Disoluciones de calibracin de patulina para HPLC. Se preparan 5 disoluciones patrn para
HPLC en matraces aforados de 2 mL independientes, segn se indica en la tabla 1. La disolucin patrn de
calibracin de patulina (4.14) se transfiere utilizando una pipeta. Los patrones se enrasan (hasta 2 mL) con agua
a pH 4 (4.5).

Tabla 1 Preparacin de las disoluciones patrn

Disolucin Agua (4.5) Disolucin patrn de trabajo de Concentracin en

patrn (L) patulina masa (g/mL)
(L)
1 1 000 1 000 0,50
2 1 200 800 0,40
3 1 500 500 0,25
4 1 800 200 0,10
5 1 900 100 0,05

8.2 Condiciones de funcionamiento de HPLC

Cuando se utilizaron la columna descrita en el apartado 5.11 y la fase mvil indicada en el apartado 4.11,
resultaron adecuados los siguientes parmetros:

Velocidad de flujo de la fase mvil (columna): 1,0 mL/min;

Longitud de onda de deteccin UV: 276 nm;

Volumen de inyeccin: 50 L

9. CLCULOS
La masa en nanogramos de patulina presente en la alcuota del extracto final de la muestra inyectada en la
columna de HPLC se obtiene mediante su lectura a partir de la curva de calibracin. La fraccin en masa
de patulina wPAT, en nanogramos por mililitro, (o en gramos en el caso de los purs) se calcula utilizando la
ecuacin (2).

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Donde,
es la fraccin en masa de patulina;

es la masa de patulina presente en la alcuota del extracto final de la muestra inyectada en la

columna, en nanogramos;

es el volumen de la alcuota del extracto final de la muestra (6.4) inyectada en la columna, en mililitros;

es el volumen del extracto final de la muestra (6.4), en mililitros (V1 = 1,0 mL para los zumos, V1 = 0,5 mL
para los purs);

es el volumen de muestra extrada, en mililitros para los zumos (ms = 10 mL) o en gramos para los purs
(ms = 5 g).

El resultado final puede expresarse en microgramos por litro (o por kilogramo para los purs) ya que estas
unidades son equivalentes a nanogramos por mililitro (o por gramo).

10. PRECISIN
10.1 Anlisis interlaboratorios
Los valores obtenidos en anlisis interlaboratorios respecto a la precisin del mtodo se muestran en el anexo
A. Los valores obtenidos a partir de dicho anlisis interlaboratorios pueden no resultar aplicables a rangos de
concentraciones o matrices diferentes de las indicadas.

10.2 Repetibilidad

La diferencia absoluta entre los resultados de dos anlisis individuales realizados sobre un material de anlisis
idntico por el mismo analista, utilizando el mismo equipamiento y dentro del intervalo de tiempo ms corto
posible, no ser superior al valor del lmite de repetibilidad r en ms de un 5% de los casos.

Los valores para zumos de manzana claros x = 26 g/L r = 10,36 g/L

son:
x = 54 g/L r = 16,8 g/L

x = 67 g/L r = 23,5 g/L

x = 128 g/L r = 27,7 g/L

Los valores para zumos de manzana turbios x = 26 g/L r = 10,36 g/L

son:
x = 60 g/L r = 21,8 g/L

x = 69 g/L r = 11,8 g/L

x = 106 g/L r = 28,6 g/L

Los valores para purs de manzana son: x = 23 g/kg r = 17,9 g/kg

x = 38 g/kg r = 10,6 g/kg

x = 69 g/kg r = 21,0 g/kg

x = 121 g/kg r = 66,1 g/kg

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10.3 Reproducibilidad
La diferencia absoluta entre los resultados de dos anlisis individuales realizados sobre un material de anlisis
idntico en dos laboratorios diferentes no ser superior al valor del lmite de reproducibilidad R en ms de un 5%
de los casos.

Los valores para zumos de manzana claros son: x = 26 g/L R = 23,5 g/L

x = 54 g/L R = 38,1 g/L

x = 67 g/L R = 42,8 g/L

x = 128 g/L R = 39,2 g/L

Los valores para zumos de manzana turbios x = 26 g/L R = 23,5 g/L

son:
x = 60 g/L R = 35,0 g/L
x = 69 g/L R = 28,0 g/L

x = 106 g/L R = 36,1 g/L

Los valores para purs de manzana son: x = 23 g/kg R = 23,8 g/kg

x = 38 g/kg R = 25,3 g/kg

x = 69 g/kg R = 23,8 g/kg

x = 121 g/kg R = 97,4 g/kg

11. INFORME DE ENSAYO

El informe del anlisis debe incluir los siguientes datos:

a) toda la informacin necesaria para la identificacin de la muestra (tipo de muestra, origen de la

muestra, designacin);

b) una referencia a esta norma nacional;

c) la fecha y el tipo de procedimiento de toma de muestras (si se conoce);

d) la fecha de recepcin;

e) la fecha del anlisis;

f) los resultados del anlisis y las unidades en las que stos se han expresado;

g) si se ha comprobado la repetibilidad;

h) todas las particularidades observadas durante el desarrollo del anlisis;

i) todas las operaciones no descritas en el mtodo, o consideradas opcionales, que pudieran haber influido
sobre los resultados.

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ANEXO Y

DATOS DE PRECISIN

Los siguientes datos se obtuvieron en un anlisis interlaboratorios [1] realizado de acuerdo con las Directrices
de AOAC sobre los procedimientos de los estudios colaborativos para la validacin de las caractersticas de un
mtodo de anlisis [2].

Tabla 1 .Datos de precisin. Zumo de manzana claro

Contaminacin
Muestra Nivel bajo Nivel Nivel alto artificial en
medio ciego
Ao del anlisis interlaboratorios 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Nmero de laboratorios 12 12 12 12

Nmero de laboratorios participantes tras eliminar a 12 12 10 12

los discrepantes
Nmero de discrepantes (laboratorios) 0 0 2 0

Nmero de resultados aceptados 12 12 10 12

Valor medio x , g/L 26 54 128 67

Desviacin estndar de la repetibilidad sr, g/L 3,7 6,0 9,9 8,4
Desviacin estndar relativa de la repetibilidad RSDr, 14 11 8 13
%
Lmite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], g/L 10,36 16,8 27,7 23,5
Desviacin estndar de la reproducibilidad sR, g/L 8,4 13,6 14 15,3
Desviacin estndar relativa de la
reproducibilidad 33 25 11 23
RSDR, %
Lmite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], g/L 23,5 38,1 39,2 42,8
Rendimiento de recuperacin, % 89% 20%

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 Tabla 2. Datos de precisin. Zumo de manzana turbio

Contaminacin
Muestra Nivel bajo Nivel Nivel alto artificial en ciego
medio
Ao del anlisis 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Nmero de laboratorios 12 12 12 12

Nmero de laboratorios participantes tras eliminar a 12 9 10 11

los discrepantes
Nmero de discrepantes (laboratorios) 0 3 2 1

Nmero de resultados aceptados 12 9 10 11

Valor medio x , g/L 26 69 106 60
Desviacin
L estndar de la repetibilidad sr, g/L 3,7 4,2 10,2 7,8
Desviacin estndar relativa de la repetibilidad 14 6 10 13
RSDr, %
Lmite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], g/L 10,36 11,8 28,6 21,8
Desviacin estndar de la reproducibilidad sR, g/L 8,4 10 12,9 12,5
Desviacin estndar relativa de la reproducibilidad 33 14 12 21
RSDR, %
Lmite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], g/L 23,5 28 36,1 35
Rendimiento de recuperacin, % 80% 16%

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 Tabla 3. Datos de precisin. Pur de manzana

Contaminacin
Muestra Nivel bajo Nivel medio Nivel alto artificial en ciego

Ao del anlisis interlaboratorios 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Nmero de laboratorios 9 11 10 10

Nmero de laboratorios participantes tras eliminar a los 8 9 10 9

discrepantes
Nmero de discrepantes (laboratorios) 1 2 0 1

Nmero de resultados aceptados 8 9 10 9

Valor medio x , g/kg 23 38 121 69

Desviacin estndar de la repetibilidad sr, g/kg 6,4 38 23,6 7,5
Desviacin estndar relativa de la repetibilidad RSDr, % 27 10 19 11

Lmite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], g/kg 17,9 10,6 66,1 21

Desviacin estndar de la reproducibilidad sR, g/kg 9,2 12,6 34,8 8,5
Desviacin estndar relativa de la reproducibilidad 13 33 29 36
RSDR, %
Lmite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], g/kg 25,7 35,3 97,4 23,8
Rendimiento de recuperacin, % - - - 92% 12%

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Bibliografa

AENOR. 2004. UNE EN 14177. Productos alimenticios. Determinacin de patulina en zumos claros y
turbios y en purs de manzana. Mtodo por HPLC con purificacin pro cromatografa de reparto
lquido/lquido. Espaa, 2004.

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 INFORMACIN COMPLEMENTARIA

Documento: TTULO: PRODUCTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIN Cdigo: ICS

NTE INEN 2951 DE PATULINA EN ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURS 67.080.10;
DE MANZANA. MTODO POR HPLC CON PURIFICACIN 67.160.20
PRO CROMATOGRAFA DE REPARTO LQUIDO/LQUIDO.

ORIGINAL: REVISIN:
Fecha de iniciacin del estudio: La Subsecretara de la Calidad del Ministerio de Industrias
2014-12-23 y Productividad aprob este proyecto de norma
Oficializacin con el Carcter de
por Resolucin No.
publicado en el Registro Oficial No.

Fecha de iniciacin del estudio:

Fechas de consulta pblica:

Subcomit Tcnico de:

Fecha de iniciacin: Fecha de aprobacin:
Integrantes del Subcomit:

NOMBRES: INSTITUCIN REPRESENTADA:

Otros trmites: Esta NTE INEN xx:xx (xxx), reemplaza a la NTE INEN xx:xx (xx)

La Subsecretara de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprob este proyecto de

norma

Oficializada como: Por Resolucin No. Registro Oficial

No.
Servicio Ecuatoriano de Normalizacin, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre
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