Ao del Servicio del Buen Ciudadano

ANALIZADOR ELISA

Instrumentacin y Automatizacin de equipos

de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

Zuasnabar Hilario Anthony

Torpoco Gonzales Kloriel
Martinez Diaz Dayans
Hinostroza Mucha Jhoans

2017 HYO
 Dedicatoria:

Este trabajo est dedicado para nuestros padres y profesores que son el impulso para seguir
adelante en nuestra carrera profesional y lograr el xito en nuestras vidas.
I INTRODUCCION

El analizador de ELISA es un espectrofotmetro especializado, diseado para efectuar la lectura de

los resultados de una tcnica que se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos o antgenos
especficos presentes en una muestra. La tcnica se basa en la deteccin de un antgeno
inmovilizado sobre una fase slida, mediante anticuerpos que, directa o indirectamente, producen
una reaccin cuyo producto puede ser ledo por el espectrofotmetro. Se le conoce tambin con el
nombre de Lector de ELISA.

II. OBJETIVOS

Reconocer cules son sus utilidades y finalidades del analizador de ELISA

III.DESARROLLO

1. ANALIZADOR DE ELISA
La tcnica ELISA ("Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay" Ensayo inmunoabsorbente ligado a
enzimas) se basa en la deteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase slida mediante
anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo producto, por ejemplo
un colorante, puede ser medido espectofotomtricamente. Este principio tiene muchas de las
propiedades de un inmunoensayo ideal : es verstil, robusto, simple en su realizacin, emplea
reactivos econmicos y consigue, mediante el uso de la fase slida, de una separacin fcil
entre la fraccin retenida y la fraccin libre.

Adems se han propuesto y desarrollado diferentes mtodos de amplificacin de la seal

(luminiscentes, cascadas enzimticas,...) que han permitido elevar la sensibilidad de algunos
ELISA a la obtenida en el RIA (radioinmunoensayo) hormonal.
Este mtodo ha tenido una enorme aplicacin en todos aquellos campos en los que se precisaba
la cuantificacin de productos mediante anticuerpos : diagnstico clnico, deteccin viral,
clasificacin de anticuerpos en isotipos, bsqueda de anticuerpos monoclonales, etc.
2. PROPOSITO DEL ANALIZADOR DE ELISA
Se utiliza para leer el resultado de las pruebas efectuadas utilizando la prueba de ELISA,la
cual tiene aplicacin directa en inmunologa y serologa que permite confirmar la presencia
de antgenos o anticuerpos de un agente infeccioso
3. PRINCIPIOS DE OPERACIN
El analizador de ELISA es un espectrofotmetro especializado. A diferencia de los
espectrofotmetros convencionales que permiten efectuar lecturas en un rango amplio de
longitudes de onda, este dispone de filtros o rejillas de difraccin que limitan el rango de
longitudes de onda a aquellas que se utilizan en la tcnica ELISA, la cual generalmente se
realiza con longitudes de onda comprendidas entre los 400 y los 750 nm nanmetros.
Algunos analizadores operan en el rango ultravioleta y pueden efectuar anlisis entre los 340
y los 700 nm. El sistema ptico utilizado por muchos fabricantes utiliza la fibra ptica para
llevar la luz hasta los pozos de la placa, donde se encuentra la muestra bajo anlisis.
La luz que atraviesa la muestra tiene un dimetro que vara entre 1 y 3 mm. Un sistema de
deteccin recibe la energa lumnica, proveniente de la muestra, la amplifica, determina la
absorbancia y, a travs de un sistema de lectura, la convierte en datos que permiten
interpretar el resultado de la prueba. Tambin hay analizadores de ELISA que emplean
sistemas lumnicos de doble haz. Las muestras del ensayo de ELISA se colocan en placas de
diseo especial, las cuales disponen de un nmero definido de pozos o vasos, en los cuales
se lleva a cabo el procedimiento o ensayo.
Son comunes las placas de 8 columnas por 12 filas, con un total de 96 pozos. Tambin existen
placas con un mayor nmero de pozos. Las hay de 384 pozos y la tendencia actual busca
aumentar el nmero de pozos, y reducir la cantidad de reactivos y el volumen de las muestras
requeridas. La ubicacin de los sensores pticos en el analizador de ELISA vara dependiendo
de los fabricantes. Algunos los colocan sobre la placa portamuestras, mientras que otros los
ponen directamente bajo los pozos de la placa.
En la actualidad, los analizadores de ELISA disponen de controles regulados por
microprocesadores, interfases de conexin a sistemas de informacin, programas de control
de procesos y control de calidad que, a travs del computador, permiten la automatizacin
completa de los ensayos requeridos.

3.1 EQUIPOS REQUERIDOS

Un analizador de ELISA.
Un lavador de ELISA (captulo 2).
Un sistema dispensador de lquidos. (Pueden usarse pipetas multicanal).
Una incubadora especializada para las placas.
La ilustracin que se presenta a continuacin da una idea de la forma en que se
encuentran interrelacionados los equipos mencionados.
3.2 FASES MECANICAS DE UN ENSAYO UTILIZANDO LA TECNICA DE ELIZA
Cuando se utiliza un analizador de ELISA normalmente se realiza los siguientes pasos:
1.Utilizando el lavador de ELISA o microplacas,se efecta un primer lavado de placas
2.Mediante el dispensador de lquidos o las pipetas multicanal,se llenan los vasos o pozos
de las placas con las soluciones preparadas para ser utilizadas en el ensayo
3.A continuacin se coloca las placas en la incubadora donde a temperatura controlada se lleva
a cabo un conjunto de reacciones
Las etapas 1,2,3 se pueden repetir varias veces dependiendo del ensayo hasta que se logre que
las muestras colocadas en las placas hayan terminado sus reacciones.
4.Finalemnte cuando se han completado las reacciones qumicas,se lleva la placa al analizador
de ELISA y se efectan las lecturas que permiten emitir un diagnostico

3.3 FASES QUIMICAS DE LA TECNICA DE ELISA

1. Se recubren los pozos de una placa con anticuerpos o antigenos

2. Se aaden las muestras, controles y estndares a los pozos de las placas y se incuban a
temperaturas que oscilan entre la tempreatura ambiebte y 37C por un periodo de tiempo
determinado,segn caracateristicas de la prueba.Durante la incubacin una parte del antgeno de
la muestra se une al anticuerpo del recubrimiento de la placa,en funcin de su presencia y cantidad
en la muestra analizada
3. Despus de la incubacin, las entidades no unidas-antigenos o anticuerpos-se lavan y se retiran
de la placa.utilizando el lavador de ELISA que utiliza un buffer de lavado adecuado
4. A continuacin, se aade un anticuerpo secundario,demoninado el conjugado el cual tiene una
enzima que reaccionara con el sustrato para producir un cambio de color
5. Se inicia entonces un segundo perodo de incubaacion,durante el cual el conjugado se unira al
complejo antgeno-anticuerpo en los pozos de la placa
 6. Despus de la incubacin, se realiza un nuevo la lavado para retirar de los pozos de la placa
cualquier vestigio del conjugado no unido.
7. Se aade un sustrato. La enzima reaccionar con el sustrato y causar un cambio de color en
la solucin, brindando un medio para medir la cantidad de conjugado que a la vez dir cunto
complejo antgeno-anticuerpo est presente. Otro perodo de incubacin permitir que esta
reaccin tenga lugar.
8. Cumplido el tiempo de incubacin, se aade un reactivo para detener la reaccin
sustrato-enzima y prevenir cambios adicionales de color. Generalmente este reactivo
es un cido diluido.
9. Finalmente, se efecta la lectura de la placaen el analizador de ELISA. Los valores de los
resultados se usan para determinar las cantidades de antgeno o anticuerpo especficos presentes
en la muestra.
Algunos de los pozos en la placa se destinan para colocar estndares y controles. Los estndares
permiten definir los puntos de corte (cut off). Los controles son cantidades conocidas que se usan
para medir el xito del ensayo, evaluando los datos recibidos contra las concentraciones
establecidas para cada control. El proceso antes descrito es comn, aunque muchas pruebas de
ELISA tienen variantes.

4.SERVICIOS REQUERIDOS
Para que el analizador de ELISA opere correctamente, es necesario verificar los siguientes puntos:
1.Un ambiente limpio y libre de polvo
2. Una mesa de trabajo estable. Lo recomendable es que la misma est alejada de equipos que
generen vibraciones centrfugas, agitadores, que tenga un tamao
adecuado que permita ubicar, al lado del analizador de ELISA, los equipos complementarios
requeridos para efectuar la tcnica en mencin: lavadores, incubadora,
dispensador y computador con perifricos
3. Una fuente de suministro elctrico de acuerdo con las normas y estndares implementados en
el pas. En los pases americanos se utilizan por lo general voltajes de 110 V y
frecuencias de 60 Hz.

4.1 . CALIBRACION DEL ANALIZADOR DE ELISA

La calibracin de un analizador de ELISA es un proceso especializado que debe realizar un
tcnico o ingeniero debidamente entrenado,siguiendo las instrucciones que para el efecto brinda
cada fabricante. Para efectuar la calibracin se requiere disponer de un juego de filtros grises, los
cuales se encuentran montados en una placa de igual geometra a las utilizadas para efectuar los
anlisis. Los fabricantes suministran dichos filtros y pueden ser utilizados para realizar calibraciones
a cualquier longitud de onda de las que utiliza el equipo.Los filtros de calibracin disponen de al
menos tres valores de densidad ptica, preestablecidos dentro de los rangos de medicin; uno bajo,
uno medio y el ltimo, un valor alto. Para efectuar la calibracin se realiza el siguiente proceso:
1. Colocar el filtro de calibracin en el equipo.
2. Efectuar una lectura completa con el filtro de calibracin. Verificar si se presentan diferencias
en las lecturas obtenidas de canal a canal. Si es as, invertir el filtro (180) y repetir nuevamente
la lectura para descartar que las diferencias puedan ser atribuibles al filtro en s. Por lo general,
se acepta que el instrumento no requiere calibracin, si se encuentra ajustado en dos
longitudes de onda.
3. Verificar si el lector est descalibrado. Si es as, proceder a la calibracin, siguiendo la rutina
definida por el fabricante, verificando especialmente que la linealidad de las
lecturas se mantenga lo ms rigurosamente.

4. Si no se dispone de filtro de calibracin,verificar la misma colocando una solucin de color en

los pozos de una placa y efectuando en seguida una lectura completa.Luego invertir la placa
 180 y efectuar una nueva lectura. Si ambas lecturas presentan valores promedio idnticos en
cada fila, el analizador se encuentra calibrado.
5. Verificar si el desplazamiento de la placa se encuentra calibrado, columna por columna.Colocar
una placa vaca y efectuar las lecturas.Si no se observan diferencias medias entre las lecturas
de columna a columna de la primera a la ltima, podra asumirse que el avance se encuentra
calibrado.

5 RUTINAS DE MANTENIMIENTO
5.1 MANTENIMIENTO BASICO
1 Revisar que los sensores pticos de cada canal estn limpios. Si se detecta suciedad, limpiar
con un pincel la superficie de las ventanas de los emisores de luz y de los sensores.
2 Confirmar que el sistema de iluminacin est limpio.
3 Verificar que la calibracin del analizador es adecuada. Cuando se inicien las operaciones
diarias, permitir que el analizador se caliente durante 30 minutos. A continuacin, realizar una
lectura en blanco y luego leer un mdulo lleno de sustrato.
Las lecturas deben ser idnticas. Si no lo son, invertir el mdulo y repetir la lectura, a fin de
determinar si la desviacin se origina en el mdulo o en el lector.
4 Examinar el avance automtico de la placa. El mismo debe ser suave y constante.

5.2 MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1 Verificar la estabilidad de la lmpara. Usar el filtro de calibracin, efectuando lectura con
intervalos de 30 minutos o una misma placa. Comparar las lecturas. No deben
existir diferencias.
2 Limpiar los sistemas pticos de los detectores y los sistemas de iluminacin.
3 Limpiar el mecanismo de avance de la placa.
4 Verificar la alineacin de cada pozo con los sistemas emisores y detectores de luz.

6 BIBLIOGRAFIA
ELISA Automation, Hudson Control Group, AB104A, 2002. (www.hudsoncontrol.com)
Solid Phase Guide, NUNC, Brand Products, Introduction to Solid Phase Techniques.
(http://www.nuncbrand.com/PDF/Guides%20and%20Manuals/Guide%20to%20Solid%20P
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Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus,
ECRI, 5200 Butler Pike, Plymouth Meeting, PA, USA, 2000.
Zoon, Kathryn, Recommendations to users of medical devices that test for infectious disease
markers by enzyme immunoassay (EIA) test systems, Division of Blood Applications,
Bethesda, MD. (http://www.fda.gov/cber/bldmem/122094.txt)