9.

Acuaporinas sintesis y donde se ubican

El agua es el componente predominante de todos los organismos vivos y por tal
razn interviene en la regulacin de la mayor parte de los procesos biolgicos.
Es conocida la elevada permeabilidad al agua de la mayora de las membranas
biolgicas en respuesta a mnimas diferencias osmticas que permite que los
compartimientos intra y extracelular mantengan su isotonicidad, necesaria para
la homeostasis intracelular. Sin embargo, los mecanismos por los cuales este
hecho indiscutible es posible siempre han sido motivo de controversia. El agua
puede atravesar la membrana por difusin simple o a travs de poros acuosos,
aunque por muchos aos se asumi que el transporte de agua ocurra slo por
medio del primer mecanismo. Sin embargo, debido a la baja solubilidad del agua
en la fase lipdica de la membrana, este mecanismo requiere una elevada
energa de activacin (Ea >10 kcal/mol), que llev a que de forma reiterativa se
planteara que necesariamente tenan que existir mecanismos que aceleraran
esta difusin en algunas circunstancias. La variable biofsica que define la
permeabilidad al agua por difusin es conocida como Pf, mientras que la
permeabilidad al agua determinada por un gradiente osmtico es definida como
Pd, la cual es dependiente de la temperatura y de la composicin lipdica de la
membrana. En algunas clulas, las membranas exhiben una relacin Pf /Pd
cercana a 1, lo cual significa que la mayor parte del agua que atraviesa la
membrana en respuesta a un gradiente osmtico, lo hace por difusin simple a
travs de la bicapa; pero en otros como los eritrocitos o las clulas epiteliales del
tbulo proximal renal, esta relacin es mucho mayor que 1, siendo una evidencia
de que el transporte de agua se realiza a travs de un poro o canal que facilita
el flujo de sta a travs de la membrana. Ms an, la existencia de ciertas
membranas impermeables al agua como la de las clulas del segmento
ascendente del asa de Henle renal o con una permeabilidad condicionada a un
agente externo como en el caso de las clulas del tbulo colector renal, pone en
evidencia que la permeabilidad al agua en ciertas membranas no es una
propiedad de la bicapa lipdica en s misma, sino que depende de un factor
proteico, cuya expresin y funcionalidad puede variar en los diferentes tipos de
clulas. Esto, sumado al hecho de que los flujos de agua a travs de ciertas
membranas como las del eritrocito pueden ser inhibidos por compuestos
mercuriales, dirigi la atencin de un amplio grupo de investigadores en el
sentido de encontrar las protenas responsables de la formacin de poros
acuosos en la membrana que pudieran explicar la dinmica del transporte de
agua en las membranas biolgicas sometidas a permanentes fluctuaciones
osmticas. En esta bsqueda se encontr que un nmero de protenas podan
comportarse como transportadores de agua, como ciertos canales de cloruro, los
transportadores de glucosa (GLUT) o el intercambiador de aniones de la banda
3 en eritrocitos, pero ninguna de estas vas presenta una cintica de transporte
suficientemente rpida para explicar relaciones Pf /Pd muy elevadas.
A inicios de la dcada de 1990, se inform el hallazgo en eritrocitos de una
protena de 28 kD, organizada en forma de tetrmeros, que fue llamada
inicialmente CHIP 28 (Channel-like Integral Protein of 28 KD), permeable
selectivamente a agua y que explicaba la elevada permeabilidad a sta en las
membranas en que estaba presente, posterior a su clonaje y secuenciacin, fue
sugerido el nombre de acuaporina 1 (AQP 1) para esta protena, el cual fue
adoptado oficialmente por la Organizacin del Genoma Humano (Human
Genome Organization) en 1997.
Luego se describieron varias protenas del mismo tipo, las cuales han recibido el
mismo nombre seguido de un nmero secuencial en relacin con la cronologa
de su descubrimiento. A partir de ah la investigacin alrededor de estas
protenas se ha incrementado notablemente y en la actualidad se han
determinado gran parte de sus caractersticas moleculares y funcionales y se
han descubierto varios miembros adicionales de esta familia, presentes a lo largo
de toda la escala filogentica.
CARACTERSTICAS GENERALES
Las acuaporinas constituyen una familia de protenas que puede subdividirse en
dos grupos: las acuaporinas clsicas y las acuagliceroporinas. Se diferencian
fundamentalmente en que las primeras slo son permeables a agua en forma
selectiva y las segundas tambin permiten el paso de glicerol y otros solutos de
bajo peso molecular. Hasta el momento se conocen 13 acuaporinas diferentes;
son nombradas como protenas AQP seguidas del nmero correspondiente.
AQP3, AQP7 y AQP9 son acuagliceroprotenas, las dems se consideran
acuaporinas clsicas. Todas pueden ser reguladas por diversos factores
intracelulares, entre los cuales son fundamentales el pH y la fosforilacin,
principalmente mediada por proten quinasa A. Son protenas integrales de
membrana, que presentan una similitud estructural bastante notable. Todas
tienen sus segmentos amino y carboxilo terminal intracelulares, estn
conformadas por dos mitades muy similares entre s; exhiben 6 segmentos
transmembrana Todas son tetramricas, aunque algunas pueden formar
oligmeros ms pequeos, como la AQP4. La mayora de las acuaporinas son
inhibibles por compuestos mercuriales, pero no es una caracterstica comn a
todas, porque algunas pueden incluso ser activadas por stos.
Las acuaporinas son altamente selectivas al paso de agua, impidiendo incluso el
paso de protones; la estructura del poro acuoso impide que el agua protonada
(H3 O+) sea capaz de atravesar la barrera formada por el residuo Arg-195, el
cual est conservado en todos los miembros de la familia y ocupa una posicin
preponderante en el poro. Existe una segunda barrera al paso de protones,
formada por un fuerte dipolo en el centro del poro formado por dos segmentos
que contienen la secuencia NPA (asparagina-prolinaalanina), el cual reorienta
las molculas de agua al pasar, disrumpiendo las interacciones entre una
molcula y la siguiente, lo cual elimina la posibilidad del transporte de protones
simultneamente. En general, estos canales de agua tampoco permiten el paso
de otros iones, porque el tamao del poro es aproximadamente de 2.8 , el cual
es mucho menor que el dimetro de cualquier ion hidratado. La presencia de un
residuo alternativo a His-180, como Gly, est asociada con un dimetro del poro
mayor, como sucede en las acuagliceroporinas, lo cual permite el paso de
glicerol y otros solutos.
CARACTERSTICAS PARTICULARES
AQP0. Su denominacin destaca el hecho de que fue descrita antes de la AQP1,
aunque su relacin con esta familia de canales de agua es posterior. Se expresa
en las clulas fibrilares del cristalino, en las cuales cumple un papel
primariamente estructural, aunque su funcin an est lejos de ser comprendida
completamente; fue llamada LMIP (Lens Major Intrinsec Protein), debido a que
es una de los pptidos ms abundantes en estas clulas, constituyendo la mitad
de todas sus protenas; no es inhibible por mercuriales y su permeabilidad al
agua es baja en proporcin con las dems. Parece que su funcin ms
importante es servir como protena de adhesin entre las clulas del cristalino,
lo cual se evidencia por la disrupcin de los contactos intercelulares en individuos
con mutaciones congnitas en el gen de AQP0, con la consecuente
desorganizacin del tejido, generando la aparicin de cataratas de diferente
gravedad; sin embargo, los mecanismos por los cuales ocurre esto son poco
claros, aunque se ha identificado que cada molcula de AQP0 se yuxtapone a
otra en la membrana vecina, estableciendo contactos ntimos entre s. Su
actividad como canal de agua es activada por disminucin de pH e inactivada
por aumentos de calcio intracelular y da lugar a flujos de agua cuando el
gradiente osmtico lo permite, lo cual puede jugar un papel importante en la
regulacin de la forma celular del cristalino.
AQP1. Es la acuaporina ms abundante en las membranas animales y
posiblemente la de expresin menos selectiva. Ha sido la acuaporina prototipo
pues fue la primera en ser descrita y por tanto es la ms estudiada hasta el
momento, lo cual ha permitido conocerla mejor que todos los dems miembros
de la familia. Fue descubierta inicialmente en eritrocitos, pero su presencia se ha
demostrado en la mayor parte de epitelios, sobre todo abundante en tbulo
proximal renal (TPR) y segmento descendente delgado (SDD) del asa de Henle
en el rin, en todos los tipos de endotelio, en los epitelios de cristalino y crnea
y en los colangiocitos. Existen otros epitelios en los cuales se ha demostrado su
ausencia como en la nefrona distal y las glndulas salivales. Sin embargo,
parece estar presente en la mayora de membranas, aunque en muchas de ellas
su papel funcional permanezca sin ser dilucidado. Es la responsable de la alta
permeabilidad al agua del TPR y del SDD del asa de Henle, en los cuales es una
de las protenas ms abundantes tanto en membrana apical como basolateral.
Su distribucin parece ser diferencial dentro del tbulo proximal, pues es ms
abundante en el segmento 3 de ste; tambin es ms abundante en el epitelio
tipo II en los segmentos descendentes delgados del asa de Henle, el cual est
presente sobre todo en nefronas de asa larga. Esta acuaporina es crtica para la
reabsorcin renal de agua, pues el TPR es responsable por la reabsorcin de las
dos terceras partes de toda el agua filtrada; su expresin defectuosa o su
ausencia produce un rin incapaz de concentrar la orina en forma eficiente, por
la elevada carga de agua que debe manejar la nefrona distal; adems, la elevada
permeabilidad al agua del SDD del asa de Henle es vital para el mecanismo de
cantracorriente, fundamental para mantener el gradiente osmolar medular, el
cual es el fundamento principal para que se pueda dar la dilucin y concentracin
de orina. Su expresin en algunos lechos endoteliales es regulada por una
diversidad de estmulos locales y sistmicos, an en estudio. Por ejemplo, en el
lecho vascular pulmonar su expresin es incrementada en forma notable por
corticosteroides, lo cual ha sido implicado en la maduracin pulmonar inducida
por stos. Adems, la AQP1 ha sido involucrada en la regulacin del flujo de
lquido en casi todos los compartimientos del organismo, otorgndole un papel
preponderante en condiciones fisiolgicas como el intercambio de fluido capilar,
la produccin de lquido cefalorraqudeo, el humor acuoso o la endolinfa, lo cual
necesariamente ha dirigido la atencin a buscar su papel en condiciones
patolgicas relacionadas como el edema cerebral, el edema pulmonar, el edema
perifrico o el glaucoma.
AQP 2. Es expresada exclusivamente en membranas apicales en los tbulos
distales y colectores renales y es la responsable de la permeabilidad apical al
agua de este segmento de la nefrona; es inhibible por mercuriales y su actividad
es dependiente de hormona antidiurtica (ADH); est presente en vesculas
intracelulares las cuales son inducidas a la fusin con la membrana externa por
la ADH; cuando la hormona no est presente los segmentos de membrana con
AQP2 son reinternalizados, al parecer a travs de un mecanismo similar a la
reinternalizacin de receptores. La ADH se libera desde el hipotlamo en
respuesta a estmulos como la hipovolemia o la hiperosmolaridad y al determinar
la permeabilidad al agua de la nefrona distal, determina el grado de
concentracin o dilucin de la orina; esta hormona ejerce su efecto a travs de
la fosforilacin mediada por proten quinasa A (PKA), secundaria a la activacin
de su receptor de membrana acoplado a protenas G, adems de promover la
expresin de la protena. Diversas mutaciones congnitas en el gen que codifica
AQP2 y que inducen una alteracin en las propiedades fundamentales de la
protena, pueden producir un tipo de diabetes inspida nefrognica, condicin
caracterizada por poliuria e incapacidad para concentrar la orina, con las
consecuentes prdida incrementada de lquidos y deshidratacin, las cuales
originan polidipsia compensatoria.
AQP 3. Es expresada en membranas basolaterales de TDR y TCR, coexistiendo
con AQP2 en el mismo tipo de clulas; la funcin de ambas acuaporinas est
acoplada, pues AQP3 es la responsable de la permeabilidad al agua de la
membrana basolateral. Tambin puede ser regulada por ADH, pero no es
dependiente completamente de su presencia como sucede con AQP2. Esta
acuaporina tambin ha sido encontrada en otros tejidos como epitelios de las
vas areas, piel y ojo, pero su funcin en estas clulas no ha sido estudiada
suficientemente, aunque tambin all parece participar en la permeabilidad de
membranas basolaterales permitiendo el movimiento de agua que ha ingresado
a la clula por otra acuaporina apical, de manera similar como sucede en la
nefrona distal. Es permeable tambin a glicerol, pero el papel fisiolgico de esta
funcin no es claro. Es inactivada por disminucin de pH y puede ser regulada
por fosforilacin.
AQP4. Es la acuaporina ms abundante en el cerebro, donde fue aislada por
primera vez; no es sensible a mercuriales y es activada por fosforilacin mediada
por diversos sistemas. Es expresada en clulas astrogliales, incluyendo clulas
ependimarias y endoteliales, pero no ha sido identificada en neuronas. Es muy
abundante en regiones osmosensibles, como el ncleo supraptico del
hipotlamo, donde est presente en la regin que rodea las neuronas secretoras
de ADH, por lo cual se cree que interviene en la regulacin de su produccin. Se
colocaliza con un canal de potasio en clulas de Mller en retina en forma muy
caracterstica, aunque la significancia fisiolgica de este hallazgo no es
conocida; puede facilitar la transferencia de fludos en respuesta a flujos de
potasio durante la regulacin del volumen intracelular y el balance de las
concentraciones de K+. Interviene tambin en la produccin de lquido
cefalorraqudeo, al parecer predominantemente en la absorcin por lo cual est
implicada en la produccin de edema cerebral y otras condiciones relacionadas.
Tambin se encuentra en fibras musculares esquelticas, sobre todo las de tipo
rpido, en las cuales se ha encontrado una clara asociacin con la funcin del
citoesqueleto. Adicionalmente se ha encontrado en rin, sobre todo en mdula,
pero slo en membranas basolaterales de las clulas principales del tbulo
colector, donde se colocaliza con AQP3; no es sensible a ADH ni a ninguna otra
hormona; all parece intervenir en el flujo basolateral de agua slo bajo mxima
estimulacin por ADH.
AQP 5. Est localizada en la membrana apical de clulas epiteliales en mltiples
glndulas, tales como las sudorparas, lacrimales, salivares y submucosas
respiratorias; su principal papel fisiolgico consiste en regular el flujo de agua
hacia la luz glandular. Tambin han sido encontradas en los neumocitos tipo I y
su disfuncin est relacionada con mltiples enfermedades respiratorias como el
asma y la bronquitis crnica. Tambin es expresada en el epitelio corneal, donde
contribuye a la hidratacin de la crnea y al mantenimiento de la transparencia
de sta.
AQP6. Se encuentra principalmente en el tbulo colector renal, aunque ha sido
hallada en otros tejidos, principalmente epiteliales. Su expresin en rin est
limitada a las clulas intercaladas, en las cuales se encuentra en vesculas
intracelulares, colocalizada con H+ -ATPasa, las cuales pueden incorporarse a
la membrana por un estmulo desconocido. Su permeabilidad al agua es baja,
no es inhibible por mercurio e incluso puede ser activada por bajas
concentraciones de ste. Es regulable por pH, siendo activada por acidificacin
e inhibida por alcalinizacin y ha sido demostrado que participa en la secrecin
de H+ por las clulas intercaladas, importante en el proceso de balance
cidobase renal, posiblemente regulando flujos de agua en respuesta a los flujos
de protones y otros iones acompaantes durante el proceso de regulacin del
pH intracelular.
AQP7. Fue identificada inicialmente en tejido adiposo donde es expresada
ampliamente, aunque tambin parece estar presente en muchos otros tejidos
como espermatocitos y tbulo proximal renal. Es permeable a glicerol y parece
ser una ruta alterna para la salida del glicerol producido durante la liplisis, sin
embargo su papel fisiolgico an est siendo evaluado.
AQP8. Est presente exclusivamente en membranas intracelulares; ha sido
hallada en clulas epiteliales de tbulo proximal renal, tbulo colector renal,
yeyuno, leon, colon, bronquios y glndulas salivales; adems parece estar
presente en hepatocitos y testculo. Es la nica acuaporina que exhibe
permeabilidad a la rea.
AQP9. Identificada en hepatocitos, clulas en las cuales parece cumplir su
principal papel. Es tambin permeable a otros solutos de bajo peso molecular y
puede funcionar como una ruta de entrada para glicerol durante la
gluconeognesis. Su funcin en situaciones de control metablico extremo
podra ser importante para aumentar la fuente de glicerol en el hepatocito,
probablemente funcionando en concierto con la AQP7 en tejido adiposo60.
Tambin es expresada en leucocitos, donde se ha encontrado que es permeable
a arsenita, un agente usado en quimioterapia para el tratamiento de ciertos tipos
de leucemia mieloctica, por lo cual su expresin en clulas tumorales podra
tener cierta significancia terapetica.
AQP10. Fue hallada en duodeno y yeyuno, pero al parecer se encuentra en
epitelios en forma inespecfica, pero an no hay datos acerca de su significancia
funcional.
AQP11 y 12. Estn localizadas permanentemente en las vesculas
intracelulares, son ms abundantes en el ojo y en el pncreas.

10. mecanismos de permeabilidad del agua en asa de Henle

El asa de Henle consta de 3 segmentos:
Descendente fino
Ascendente fino
Ascendente grueso
Las porciones descendentes fino y ascendente fino poseen membranas
epiteliales finas sin bordes en cepillo con clulas que poseen pocas mitocondrias
y niveles mnimos de actividad metablica.
Asa descendente de Henle. A medida que el lquido fluye por el asa
descendente de Henle, el agua se reabsorbe hacia la mdula. La rama
descendente es muy permeable al agua, pero mucho menos al cloruro de sodio
y a la urea. Luego la osmolaridad del lquido que fluye a travs del asa
descendente aumenta gradualmente hasta que casi se iguala a la del lquido
intersticial que le rodea, que es de unos 1.200 mOsm/1 cuando la concentracin
sangunea de ADH es elevada. Cuando se est formando una orina diluida,
debido a la baja concentracin de ADH, la osmolaridad del intersticio medular es
menor de 1.200 mOsm/l; en consecuencia, la osmolaridad del lquido tubular del
asa descendente disminuye. Esto se debe en parte al hecho de que se absorbe
menos urea en el intersticio medular a partir de los conductos colectores cuando
las concentraciones de ADH son bajas y el rin est formando un gran volumen
de orina diluida.
Asa ascendente fina de Henle. La rama ascendente fina es prcticamente
impermeable al agua, pero reabsorbe parte del cloruro de sodio. Debido a la
elevada concentracin del cloruro de sodio en el lquido tubular, y por la
extraccin de agua del asa descendente de Henle, hay una difusin pasiva del
cloruro de sodio desde la rama ascendente fina hacia el intersticio medular. As,
el lquido tubular se diluye ms a medida que el cloruro de sodio difunde fuera
del tbulo y el agua permanece en l. Parte de la urea absorbida en el intersticio
medular a partir de los conductos colectores tambin difunde a la rama
ascendente, lo que devuelve la urea al sistema tubular y ayuda a impedir el
lavado de la mdula renal. Este reciclado de la urea es un mecanismo adicional
que contribuye a la hiperosmolaridad de la mdula renal.
Asa ascendente gruesa de Henle. La parte gruesa del asa ascendente de
Henle es prcticamente impermeable al agua, pero grandes cantidades de sodio,
cloro y potasio y otros tipos de iones se transportan activamente desde el tbulo
hacia el intersticio medular. Luego el lquido presente en la rama ascendente
gruesa del asa de Henle se diluye mucho, lo que reduce la concentracin a unos
100 mOsm/l.

Discusin.
Los descubrimientos de las acuaporinas han cambiado el panorama con respecto a la
comprensin del transporte de agua en las membranas biolgicas y a la naturaleza de las
protenas transportadoras en general, porque su estudio ha dejado en claro que existen canales
en las membranas no slo permeables a iones y que los movimientos de agua a travs de las
membranas son regulados por la clula en forma muy diferente a como se pensaba hace una
dcada. La bsqueda de nuevas acuaporinas y la investigacin acerca de las ya identificadas se
est realizando en muchos laboratorios de investigacin en todo el mundo por la gran
importancia que stas protenas tienen en la fisiologa del control del volumen celular y los
mecanismos de control osmtico que toda clula posee. Tambin su papel en el control del flujo
de glicerol y otros solutos y las implicaciones que esto puede tener en la regulacin metablica
general constituyen desafos muy interesantes. Adems, la ntima relacin que tienen con
diversas enfermedades han incrementado el inters por comprender su significancia funcional
en los diferentes tipos de clulas, pues esto podra implicar comprender mejor los mecanismos
fisiopatolgicos que lleven al desarrollo de medidas terapeticas nuevas y tal vez ms eficaces
para el tratamiento de las enfermedades asociadas. La fisiopatologa de muchas enfermedades
cuyo origen molecular era desconocido antes de la era de las acuaporinas ha empezado a
comprenderse mejor, lo cual resultar necesariamente en un mejor enfoque de stas a nivel
clnico y teraputico, porque, por ejemplo, aquellas enfermedades que son secundarias a
mutaciones puntuales en el gen de una AQP, como cataratas congnitas secundarias a la
mutacin Glu-134-Gly en AQP0 o diabetes inspida nefrognica secundaria a una mutacin en
Arg-187 en AQP2, podran ser objeto de terapia gnica en el futuro. Una diversidad de estudios
biomdicos y clnicos han demostrado que un amplio rango de enfermedades pueden estar
relacionado con una disfuncin en algn tipo de acuaporina y en teora, todas las enfermedades
relacionadas en una u otra forma con el transporte de agua son susceptibles de ser causadas
por la funcin alterada de estas protenas; sin embargo, an queda mucho por investigar y
discutir lo cual hace an ms interesante abordar este tema y tenerlo presente como uno de los
polos de desarrollo de la fisiologa y la fisiopatologa celular en los prximos aos, pues es muy
probable que las acuaporinas sean protagonistas de primera lnea en la era del enfoque
molecular de la medicina que se est viviendo.