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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BACTERIOLOGIA

Cdigo: SMC-MP-C1/AOC 1.3.2


Fecha: 02 JULIO 2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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INDICE

I. INTRODUCCION: 4
II. OBJETIVOS: 4
III. ALCANCES: 4
IV. RESPONSABILIDAD: 4
V. CONSIDERACIONES: 4
VI. PROCEDIMIENTOS: 5
1. TINCIN GRAM: 5
2. SIEMBRA: 9
3. ANTIBIOGRAMA: 13
4. CULTIVO BRONQUIAL Y DE EXPECTORACION: 19
5. ASPIRADO ENDOTRAQUEAL CUANTITATIVO (AETC): 23
6. COPROCULTIVO: 27
7. TINCION VB: 31
8. LEUCOCITOS ROTAVIRUS Y ADENOVIRUS EN DEPOSICION: 34
9. CLOSTRIDIUM DIFFICILE EN DEPOSICION: 37
10. ESTUDIO DE FLUJO VAGINAL: 39
11. HEMOCULTIVO: 43
12. HEMOCULTIVO CUANTITATIVO: 47
13. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO: 50
14. LIQUIDOS ESTERILES: 54
15. TINTA CHINA: 58
16. CULTIVO DE M. HOMINIS Y U. UREALITICUM: 61
17. ESTUDIO DE SECRECIONES: 63
18. ESTUDIO DE SECRECION URETRAL: 66
19. UROCULTIVOS: 69
20. LAVADO BRONCO ALVEOLAR (LBA): 75
21. CULTIVO DE IDENTIFICACION DE HONGOS: 78
22. PESQUIZA DE ENTEROCOCCUS VANCOMICINA RESISTENTE: 82
23. CULTIVO DE ANAEROBIOS: 85
24. CONTROL DE CALIDAD: 89
25. INDICADOR DE CALIDAD: 99
26. DERIVACIONES: 101
27. ANEXOS: 103
ANEXO 1: Antibiograma por difusin 104
ANEXO 2: Paneles de antibiograma y halos de inhibicin: 105
ANEXO 3: Agares para siembra de muestras: 108
ANEXO 4: Control medios de cultivo preparados: 109
ANEXO 5A: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 110
ANEXO 5B: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 111
ANEXO 5C: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 112
ANEXO 5D: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 113
ANEXO 5E: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 114
ANEXO 5F: Control de calidad Pruebas de susceptibilidad ATCC: 115
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ANEXO 6: Control de calidad Agar Sangre y Chocolate: 116


ANEXO 7: Control de McConkey: 117
ANEXO 8: Control de XLD: 118
ANEXO 9: Control de McConkey Sorbitol: 119
ANEXO 10: Control de VRE: 120
ANEXO 11: Control de Agar para candida: 121
ANEXO 12: Control de Bateras: 122
ANEXO 13: Control Ltex Staphylococcus: 123
ANEXO 14: Control de Reactivos: 124
ANEXO 15: Control de Tincin gram: 125
ANEXO 16: Control de Catalasa: 126
ANEXO 17: Control de Reactivo Optoquina: 127
CONTROL DE CAMBIO 128
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I. INTRODUCCION

El laboratorio de bacteriologa del Hospital Regional de Rancagua, cumple un rol


fundamental en el diagnstico, terapia y recuperacin del paciente, abarcando inclusive el
rea epidemiolgica a nivel interno y nacional, por medio del I.S.P. Lo anterior hace de esta
seccin, un rea con especiales caractersticas y que necesariamente implica tener
consideraciones especficas, que difieren del resto del laboratorio.
Los resultados confiables y en el menor tiempo posible, son una necesidad creciente en
todos los servicios, en especial con el actual panorama donde se hace cada vez ms
dificultoso una correcta eleccin antibitica, debido a la resistencia que adquieren los
microorganismos, y adems en el manejo de las infecciones intrahospitalarias.

II. OBJETIVOS

General:
Describir y estandarizar los diferentes procedimientos utilizados rutinariamente en el
laboratorio de bacteriologa

Especficos:
Servir de apoyo y capacitacin al personal de laboratorio, en especial a nuevos
funcionarios.
Establecer protocolos de trabajos seguros, eficaces y eficientes.
Asegurar la calidad de los diferentes exmenes realizados en la seccin de bacteriologa.

III. ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua. Correspondiente al turno de lunes a viernes de 8:00 a 16:50
horas. Debido a sus caractersticas especiales, los turnos de urgencia contemplan ciertos
aspectos de esta seccin.

IV. RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y capacitaciones


desarrolladas para las tcnicas descritas en el manual ser el Tecnlogo Mdico a cargo de
la seccin.

V. CONSIDERACIONES

En relacin a los tiempos de respuesta de los cultivos positivos, la mayora de stos pueden
ser informados dentro de las 4872 hrs. pero existe retraso en los informes de ciertas
muestras polimicrobianas en las cuales se debe realizar aislamientos, y/o bacterias
fastidiosas de desarrollo lento y de difcil identificacin.
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VI. PROCEDIMIENTOS

1. TINCIN GRAM

1.1. OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de la tincin de Gram.

1.2. ALCANCE

Personal Tecnlogo Mdico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


Hospital Regional de Rancagua.
El clnico solicita la tcnica de tincin Gram cuando existe una sospecha de una infeccin
bacteriana.

1.3. RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y capacitaciones


desarrolladas para las tcnicas de tincin Gram es el Tecnlogo Mdico.

1.4. TERMINOLOGIA

Tincin: Una tincin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio.
Estandarizar: Se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza una
actividad de manera estndar o previamente establecida.
Infeccin: Es el trmino clnico para la colonizacin de un organismo husped por especies
exteriores, el organismo colonizador es perjudicial para el funcionamiento normal y
supervivencia del husped, por lo que se califica al microorganismo como patgeno.

1.5. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

1.5.1. FUNDAMENTO:

La tincin de Gram es una de las tinciones ms importantes en bacteriologa, es un mtodo


que diferencia las bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas,
basado en las diferencias existentes entre las paredes celulares de las bacterias. Ambos
tipos de bacterias se tien distintamente debido a estas diferencias constitutivas de su pared.
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1.5.2. TIPO DE MUESTRA:

Muestra clnica que requiera de esta tincin.

1.5.3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Materiales:
Portaobjetos 25,4 x 76,2 mm.
Asa calibrada.
Mechero.
Guantes de ltex o vinilo.
Reactivos:
Colorante cristal violeta.
Solucin de bicarbonato
Lugol.
Decolorante alcohol-acetona.
Colorante de contraste Safranina.
Equipos:
Microscopio

1.5.4. PROCEDIMIENTO:

Marcar un portaobjetos conservado en alcohol y flameado previamente antes de usar y


fro, con el nmero de muestra a teir.
En caso de realizar un frotis para tincin a partir de colonias: se inocula una pequea
cantidad de la colonia a estudiar, sobre una gota de agua puesta en el portaobjetos,
posteriormente esparcir y pasar por la llama del mechero hasta que quede fija.
En caso de realizar un frotis para tincin directo de la muestra: se debe rotar la trula
extendiendo la muestra en el portaobjeto. Dejar secar.
Aadir 2 gotas aprox. de cristal violeta y adems adicionarle igual cantidad de solucin de
bicarbonato 1% a la preparacin.
- Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.
Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparacin con agua corriente sobre el
lavamanos.
Agregar 2 gotas de solucin Lugol a la preparacin, y dejar actuar 1 minuto. Transcurrido
el tiempo, lavar de la misma manera al punto anterior.
Con cuidado, aadir gota a gota el alcohol-acetona en la preparacin y dejar que
permanezca por 30 segundos,
Luego lavar la preparacin de la misma manera que el lavado anterior.
Aadir el colorante de contraste, Safranina hasta cubrir la preparacin y dejar actuar
durante 1 minuto y luego lavar.
Dejar secar al aire y observar al microscopio, posteriormente observar al microscopio con
aumento de 40X y 100X.
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1.6 FORMULARIOS Y REGISTROS:

Se informaran bacterias como Gram negativas y Gram positivas, as como su caracterstica


morfolgica (bacilos o cocos) y su agrupacin (diplo, cadena, etc.).
En caso de muestras de expectoracin y bronquiales, se informara leucocitos y clulas. Se
informara en el cuaderno correspondiente a la muestra.

1.7 REFERENCIAS:

Schlegel H., Zaborosch C. Microbiologa general. Ediciones Omega S.A. Barcelona;


1997. p: 50-54.
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1.8 FLUJOGRAMA DEL PROCEDIMIENTO:

Frotis

Agregar 2-3 gotas violeta + 2-3


gotas de bicarbonato de sodio
1%.

Esperar 1 minuto y lavar con


agua corriente

Agregar 2-3 gotas de Lugol


E
Esperar 1 minuto y lavar con
agua corriente
E

Decolorar 2-3 gotas con alcohol


acetona

Esperar 30 segundos y lavar con


agua corriente

Agregar 2-3 gotas de Safranina

Esperar 1 minuto y lavar con


agua corriente

Secar y observar
al Microscopio
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2. SIEMBRA

2.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de siembra del cultivo corriente.

2.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


Hospital Regional de Rancagua.
Diagnstico de una eventual enfermedad infecciosa, para efectuar la identificacin del
microorganismo, la cual conlleva a establecer el diagnstico etiolgico.

2.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACIN Y ACTUALIZACIN

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo bronquial es el Tecnlogo
Mdico.

2.4 TERMINOLOGIA

Inoculo: es la cantidad o nmero de grmenes infectantes que son introducidos


accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales.
Medio de Cultivo: es el conjunto de nutrientes y sustratos que permiten el crecimiento la
multiplicacin y el aislamiento de las diferentes especies bacterianas para llegar a su
identificacin.

2.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

2.5.1. FUNDAMENTO

Se basa en el crecimiento de microorganismos en distintos medios de cultivo. Los


componentes de estos medios, otorgan un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento
de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes.

2.5.2. TIPO DE MUESTRA

La muestra puede ser de Orina, Secrecin, Coprocultivo, Micolgico, Hemocultivo o Flujo


vaginal.
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2.5.3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Placas de Petri.
Asa de siembra.
Mechero.
Gradilla
Reactivos:
Placas de Agar Sangre
Placas de Agar McConkey.
Placas de Agar Chocolate.
Agar Sabouraud
Equipos:
Estufa de cultivo a 35C.

2.5.4. PROCEDIMIENTO
-Lavado de manos y uso de guantes.
-Rotular la placa de Petri con la letra y nmero que corresponda. La letra depender del
tipo de muestra que se siembre:

O Orina
P Secrecin
C Coprocultivo
M Micolgico
H Hemocultivo
F Flujo vaginal

- Encender el mechero.
- Tomar el tubo que contiene la muestra del paciente con la mano izquierda.
- Destapar el tubo que contiene la muestra y flamear ligeramente la boca del tubo para
evitar contaminacin.
- Tomar el asa de siembra con la mano derecha.
- Flamear el asa directamente a la llama del mechero hasta que el asa se ponga al rojo
vivo para su esterilizacin.
- Enfriar el asa en las paredes internas del tubo o con la tapa de la placa de Petri.
- Tomar un inculo del tubo, flamear nuevamente la boca del tubo, coloque la tapa y
djelo en la gradilla.
- Tomar la placa y deslizar el asa cargada en el primer cuadrante haciendo estras de lado
a lado en movimiento zigzag tocando suavemente la superficie del medio de cultivo,
procurando no romper ni arrastrar el agar. Solo la primera estra toca el cuadrante
anterior.
- Flamear el asa para esterilizar.
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- Girar la placa e iniciar las estras en el segundo cuadrante desde el primer cuadrante,
flamear el asa, y enfriar en el extremo del agar.
- Girar la placa e iniciar estras desde el segundo cuadrante hasta el tercer cuadrante,
flamear el asa, y enfriar en el extremo del agar.
- Girar la placa e iniciar estras desde el tercer cuadrante y extenderlas hasta el cuarto
cuadrante y termine en el centro de la placa, sin tocar los lugares donde sembr
anteriormente.
- La siembra finalmente debe formar un pentgono.
- Flamear el asa para su esterilizacin.
- Tapar la placa de Petri y apague el mechero cerrando la llave de paso del gas.

2.6 INFORME DE RESULTADOS

Se informarn todas las muestras ya sea con siembras sin desarrollo bacteriano, y las
muestras con desarrollo bacteriano con su respectivo estudio de identificacin y
sensibilidad cuando corresponda.
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2.7 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:

- esterilizar el asa
Lavado de manos. - girar la placa
- realizar estras desde el primer
cuadrante hasta el segundo
cuadrante.

Uso de guantes.

- Esterilizar el asa
- Girar la placa
- Realizar estras desde el
Rotular la placa de Petri segundo cuadrante al tercer
con la letra y nmero que cuadrante.
corresponda.
- Esterilizar el asa
- Girar la placa
- Realizar estras desde el
Encender el mechero. tercer cuadrante hasta el
cuarto cuadrante.

Flamear el asa para su


esterilizacin.
Tapar la placa de Petri y flamear el asa.

Tomar el inoculo con el asa.

Deslizar el asa cargada en el


primer cuadrante de la placa
de Petri en movimiento zigzag.
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3. ANTIBIOGRAMA

3.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de antibiograma.

3.2 ALCANCE
Personal Tecnlogo Mdico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del
hospital regional de Rancagua.
El clnico solicita la realizacin de un antibiograma cuando existe una sospecha de una
infeccin bacteriana.

3.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION


El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y
capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de antibiogramas es el Tecnlogo Mdico.

3.4 TERMINOLOGIA

-Antibiograma: es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la


susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos.
-Sensibilidad: Las pruebas de sensibilidad bacteriana se llevan a cabo mediante el
antibiograma que sirve para medir la sensibilidad de una cepa bacteriana a uno o varios
antibiticos. El estudio de la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la
eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. .
-Resistencia: si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida.
-Inculo: Es la cantidad o nmero de grmenes infectantes que son introducidos
accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales.
-Antibiticos: sustancia qumica capaz de inhibir el desarrollo de microorganismos.
-0.5 Mc Farland: Etaln de referencia en suspensiones bacteriolgicas para saber
aproximadamente el nmero de bacterias por mililitro, segn una escala que va de 0.5 a
10 C.
-CIM: Concentracin inhibitoria mnima: es la base de la medida de la sensibilidad de una
bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define como la menor concentracin de
una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento
bacteriano visible.
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3.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO PARA ANTIBIOGRAMA

3.5.1 FUNDAMENTO

El primer objetivo del antibiograma es medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se
sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la
sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones
teraputicas individuales.

El segundo objetivo del antibiograma es seguir la evolucin de las resistencias


bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un
centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la
antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y
adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de
prevencin en los hospitales.

3.5.2 TIPO DE MUESTRA

A todos los cultivos con desarrollo bacteriano patgeno o potencialmente patgeno y en


los cuales exista un mtodo estandarizado para el estudio e interpretacin del
antibiograma (CLSI).
Se excluyen los cultivos con flora comensal, los sin desarrollo bacteriano y los cultivos con
bacterias que no exista un mtodo estandarizado.

3.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Materiales:
-Tubos falcon con suero fisiolgico (3 mL)
-Placas Petri estriles.
-Sensidiscos con antibiticos.
-0.5 Mc farland.
-Puntas amarillas.
-Puntas azules.
-Pipetas 145 uL y pipeta 280 uL
-Trulas estriles.
-Lector de turbidez (DensiCHEK)
-Pinzas.
-Asas bacteriolgicas.
-Cassette VITEK 2
-Dispensador de solucin salina de volumen ajustable.

Tubos de ensayo desechables falcon.


-Solucin salina estril al 0.45-0.5%
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Reactivos:
-Placas con agar Mueller Hinton.
-Placas con agar Mueller Hinton con sangre de cordero al 5%.
-Placas con agar HTM.
-Placas con agar GC.
Equipos:
-Estufa de cultivo microbiolgico a 35 C.
-Refrigerador.
-Vortex

3.5.4. PROCEDIMIENTO

Antibiograma kirby- Bauer (difusin en agar)

- La placa con medio de cultivo a utilizar para realizar el antibiograma es diferente


dependiendo de la bacteria, por lo tanto, lo primero es definir que medio se va a utilizar
segn cada caso (Por ejemplo: Mueller Hinton sangre, HTM, etc). Ver Anexo N1
Antibiograma por difusin en donde se detalla el medio de cultivo adecuado para cada
bacteria.
- Marcar la placa a utilizar con un lpiz marcador con el nmero correspondiente a la
muestra.
- Con un asa estril se toman dos o tres colonias de la cepa en prueba y se realiza una
suspensin al 0.5 Mc Farland en un tubo Falcon con suero fisiolgico. Esta suspensin
debe ser leda comparndolo con el etaln Mc Farland, si est sobre los 0.5 se debe diluir
con suero fisiolgico, y si est bajo los 0.5 se debe agregar ms colonias bacterianas.
- Una vez obtenida la lectura correcta, introducir una trula estril dentro del tubo con la
suspensin al 0.5 Mc Farland, rotar la trula varias veces dentro del lquido, para que se
impregne y botar el excedente de lquido presionando la trula contra las paredes del
tubo.
- Pasar la trula por el agar Mueller Hinton en 3 direcciones, de manera que todo el agar
quede cubierto con la suspensin.
- Esperar unos 5 minutos para que la suspensin difunda en el agar.
- Marcar la placa con el perfil de antibiograma que se desea. Por ejemplo: Gram-
negativos, Gram positivos, Haemophilus, Pneumococo, Grupo viridans, etc. Ver Anexo N
2
- Tomar los antibiticos correspondientes al agente microbiano aislado y colocarlos en el
agar con una pinza flameada por el mechero.
- Incubar la placa 24 horas en estufa a 35 C. En atmsfera normal o CO2 segn el caso.
Ver detalles de la incubacin en Anexo N1 Antibiogramas por difusin
- Terminada la incubacin, se procede a realizar la lectura de los antibiticos midiendo el
dimetro de los halos con una regla en cada sensidisco y compararlos con la tabla de
halos correspondiente a la bacteria estudiada. Ver Anexo N 1
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Calibracin del Densichek


- Prender el densichek, botn central inferior.
- Agitar los standards que estn dentro de la caja Standard kits. Son 4 concentraciones
distintas, hay un blanco y 3 Standard de 0.5; 2 y 3 Mc Farland.
- En la pantalla del densichek llevar el pequeo tringulo que est en la parte superior a
GLASS, con la tecla central superior (tecla con cuatro rayas). Despus presionar tecla
con visto verde (lado derecho) y luego presionar la tecla central superior nuevamente.
-Con el tringulo bajo la palabra "glass se puede calibrar con los etalones estandarizados
(tubos).

- Introducir tubo 0.0 McF, esperar a que se estabilice la lectura. Si la lectura da 0.00 pasar
al siguiente tubo con la siguiente concentracin. Si el tubo no da 0.00 presionar tecla azul
izquierda para llevar a cero el equipo.
- Introducir el tubo 0.5 McF, esperar a que se estabilice la lectura, debe dar dentro de un
rango aceptable 0.44 0.56.
- Luego introducir el tubo 2 McF, esperar a que se estabilice la lectura, debe dar dentro de
un rango aceptable 1.85-2.15.
- Y finalmente colocar el tubo 3 McF, esperar a que se estabilice la lectura, debe dar
dentro de un rango aceptable 2.79-3.21.
- Luego se llevar el Densicheck para realizar un blanco con tubo plstico Falcon con
suero fisiolgico, .para esto, se debe presionar nuevamente tecla central superior (con
cuatro rayas), luego presionar tecla verde (lado derecho), y nuevamente presionar tecla
central superior. El pequeo tringulo negro de la pantalla se desplazar bajo la palabra
plastic.
- Introducir cualquier tubo Falcon con suero fisiolgico sin inculo, y esperar a que se fije
la lectura. Si la lectura de 0.00, el equipo est listo para ser usado. Si la lectura da
cualquier nmero superior (ej: 0.02, 0.04) llevar a 0.00 con tecla azul (lado izquierdo).
- En este punto, el equipo puede ser usado para estandarizar las lecturas de los inculos
bacterianos.

Antibiograma automatizado por Vitek 2:

- Elegir colonias aisladas de una placa primaria si se satisface los requisitos de cultivo o
subcultivar el microorganismo a analizar en el medio de agar apropiado e incubarlo
adecuadamente.
- Transferir 3mL de solucin salina estril en un tubo falcon.
- Con un asa estril transferir un numero de colonias suficientes para alcanzar la
concentracin 0,5 McF utilizando el densichek
- El inculo debe prepararse a partir de un cultivo puro, de acuerdo con las buenas
prcticas de laboratorio. En el caso de cultivos mixtos es necesario realizar aislamiento,
se recomienda realizar una comprobacin de la pureza de la placa para garantizar que se
utiliza un cultivo puro para este test
- Para una dilucin manual: A un segundo tubo que contenga 3mL de solucin salina,
transferir 145uL de suspensin ajustada y transferir a las tarjetas AST GN o 280uL de la
solucin ajustada a la tarjeta AST GP o AST YS. Colocar este tubo en el casete con una
tarjeta de sensibilidad. El tubo con la suspensin bacteriana inicial tambin puede
utilizarse para inocular una tarjeta de identificacin.
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- Introducir casete con tarjetas ya inoculadas en equipo Vitek2. Ver Manual del usuario
del instrumento en captulo Procesamiento de tarjeta de test , Preparacin del casete.
- En programa Kernmic se envan los datos demogrficos del paciente para ser enlazados
a las tarjetas incubadas en el Vitek2.Este paso se realiza en men ordenes editar y
luego en esta pantalla se anota el folio de la muestra en orden desde:-enter, click en
ventana resultados, se abre una nueva pantalla, y en sta, hacer click en ATB, luego
cerrar y dar un SI. Se vuelve a la primera pantalla.

- Para la lectura de los antibiogramas automatizados, ver en Manual del usuario del
Software, Capitulo 8, gestin de resultados.

3.5. FORMULARIOS Y REGISTROS:

Los resultados de los antibiogramas no poseen un tiempo especfico definido, debido a la


variabilidad de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los
profesionales del rea.
Los antibiogramas por kirby Bauer (por difusin) se anotarn en el cuaderno
correspondiente segn el tipo de muestra, y se informar cada antibitico con un S
(sensible), I (intermedio) o R (resistente).

Los resultados de los antibiogramas automatizados por Vitek2, se transmiten


automticamente una vez dada la validacin en Vitek2 Systems, y luego a travs de
Kernmic son transmitidos al sistema Omega para ser informados.

3.6. REFERENCIAS:

CLSI Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; twenty-first


informacional supplement. 2012.
Manual del usuario del instrumento; Biomerieux , Inc.
Manual del usuario del software; Biomerieux, Inc.
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3.7. FLUJOGRAMA ANTIBIOGRAMA KIRBY- BAUER

Tomar 2 o 3 colonias
de la cepa a trabajar

Medir la concentracin en el
densichek (0.5 McF)

Tomar una trula estril e introducirla


en el tubo falcon inoculado.

Pasar la trula por el agar en 3


direcciones distintas.

Esperar 5 minutos.

Colocar los sensidiscos respectivos.

Incubar la placa a 35C


por 24 horas.
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4. CULTIVO BRONQUIAL Y DE EXPECTORACIN

4.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento del cultivo bronquial y de expectoracin para identificar


microorganismos patgenos causales de infecciones pulmonares.

4.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Se indica el cultivo de secrecin bronquial o de expectoracin con fines diagnsticos para
pacientes peditricos o adultos, ambulatorios u hospitalizados, que requieran este tipo de
estudio.

4.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo bronquial es el Tecnlogo
Mdico.

4.4 TERMINOLOGIA

Expectoracin: fenmeno por el cual los productos formados en las vas respiratorias
son expulsados fuera del pecho.
Secrecin bronquial: sustancia producida en el rbol bronquial formada por moco, sales
proteicas, lquido plasmtico y protenas
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza
una actividad de manera standard o previamente establecida.

4.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO CULTIVO:

4.5.1 FUNDAMENTO:
El estudio microbiolgico de secreciones bronquiales o de expectoracin, permite el
estudio de bacterias involucradas en procesos infecciosos, del tracto respiratorio inferior.

4.5.2 TIPO DE MUESTRA:


La muestra bronquial o de expectoracin, viene tomada en contenedor plstico estril,
tapa rosca. La saliva no sirve para realizar este estudio.

4.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Materiales:
Tubos plsticos, tapa rosca y placas Petri estriles.
Porta objetos esmerilados.
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Reactivos:
Tincin de GRAM.
Placas de Agar Sangre
Placas de Agar McConkey.
Placas de Agar Chocolate.
Tubos de Agar Sabouraud corriente y especial (cultivo de hongos sujeto a solicitud del
mdico)
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
Estufa de cultivo microbiolgico a 25-28C. (para cultivo de hongos)
Microscopio corriente.

4.5.4 PROCEDIMIENTO

-Con una trula estril, tomar muestra para sembrar una placa de agar chocolate, una
placa de agar sangre de cordero 5%, una placa de McConkey, y en caso de ser solicitado
por el mdico, sembrar en un tubo con Sabouraud corriente y otro tubo con Sabouraud
especial (ver cultivo de hongos). Sembrar un sector de la placa, y luego con asa redonda
estril, proceder a diseminar, formando un pentgono, por toda la superficie del medio de
cultivo. Esterilizar el asa en cada sector.
-Realizar un frotis de la muestra en un portaobjetos previamente flameado (esperar a que
se enfre) para realizar tincin de Gram.
-Incubar agar Chocolate en atmsfera de microaeroflia, jarro con vela, a 35 C por 18-24
horas. El agar Sangre y agar McConkey se incuban en atmsfera normal, a 35 C por 18-
24 horas. -Una vez teido el frotis observar la calidad del esputo.
Si sta es buena muestra (o representativa) debe presentar al microscopio en aumento
menor (10x):
Polimorfonucleares en cantidad 25 por campo.
Clulas epiteliales en cantidad 10 por campo.

4.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.
Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad
de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

4.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.
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4.8 REFERENCIA

Shorr AF, Sherner JH, Jackson WL, Kollef MH. Invasive approaches to the
diagnosis of ventilator-associated pneumonia: a meta-analysis. Crit Care Med. 2005;
33:46-53.
Bouza E, Torres MV, Burillo A. Aportacin del laboratorio de microbiologa al
diagnstico de la numona asociada a ventilacin mecnica. Enferm Infecc Microbiol Clin.
2005; 23:2.
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4.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA

SECRECIN BRONQUIAL

Sembrar en Realizar tincin


Gram

Agar chocolate Agar sangre y


McConkey

Incubar por 18- Incubar por 18-


24hrs a 35C en 24hrs a 35C en
tarro con vela. atmosfera normal

Si existe desarrollo

Pruebas bioqumicas y
estudio de sensibilidad.
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5. ASPIRADO ENDOTRAQUEAL CUANTITATIVO (AETC).

5.1 OBJETIVOS:

Estandarizar la realizacin del cultivo cuantitativo de AETC a todo los paciente con
sospecha de neumona asociada a ventilacin mecnica (NAVM) (conexin a VM > 48hrs
y presencia de criterios clnicos-radiolgicos) y en el cual no se hayan efectuado cambios
de tratamiento antimicrobiano durante las ltimas 72 horas.

5.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes con ventilacin mecnica que se sospeche de NAVM con un cuadro clnico.

5.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo de secreciones biolgicas es el
Tecnlogo Mdico.

5.4 TERMINOLOGIA

NAVM: neumona asociada a ventilacin mecnica.


AETC: aspirado endotraqueal cuantitativo.
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza
una actividad de manera standard o previamente establecida.

5.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

5.5.1 FUNDAMENTO
Se utiliza en la sospecha de neumona asociada a ventilacin mecnica y en el cual no se
hayan efectuado cambios de tratamiento antimicrobiano durante las ltimas 72 horas.

5.5.2 TIPO DE MUESTRA


La muestra debe ser tomada en un tubo plstico estril con tapa rosca para su envo al
laboratorio.

5.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Perlas de vidrio estril.
Pipeta automtica con graduacin de 10 -100 l con puntas estriles amarillas.
Pipeta Pasteur.
Tubos de ensayo tipo centrifuga estril.
Rastrillos plsticos estriles.
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Reactivos:
Solucin de suero fisiolgico estril.
Placas con medios de cultivo McConkey y Sangre y Chocolate.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
Vortex.

5.5.4 PROCEDIMIENTO

-Diluir la muestra con suero fisiolgico estril duplicando el volumen de esta. Por ejemplo,
1mL de muestra se diluye con 1mL de suero fisiolgico.
-Agregar al tubo perlas de vidrio estriles. Agitar en Vortex durante 2 minutos para
homogenizar lo mejor posible la muestra.
-Extraer de la muestra homogeneizada 100ul de muestra y diluir en un tubo con 9,9mL de
suero fisiolgico estril (dilucin 1:100) y agitar para obtener una mezcla homognea.
-Rotular una placa de agar sangre y una placa de agar McConkey con el respectivo
nmero de la muestra y junto a este, 100 L.
-Rotular adems, otra placa de agar sangre y otra de agar McConkey con el nmero de la
muestra y 10 L.
-Inocular 100 L de la dilucin (1:100) en el set de placas rotuladas con 100 L (dilucin
final 1:2000).
-Inocular 10 L de la dilucin (1:100) en el set de placas rotuladas con 10 L (dilucin
final 1:20.000).
-Sembrar las placas con rastrillo hecho a partir de una pipeta Pasteur, estriando el agar en
todos los sentidos girando la placa, de modo que la muestra quede uniformemente
repartida. El modo de estriar se indica en la figura del
-Incubar las placas a 35C de 18-24 horas en atmsfera normal.
-Observar crecimiento de colonias.

5.6. INFORME DE RESULTADOS

Se informaran la o las bacterias patgenas encontradas con sus recuentos respectivos, y


con su identificacin hasta especie, en lo posible. As mismo se informara el Antibiograma
de cada especie encontrada.
Se realizar recuento por separado (en caso de que exista mas de una especie) de las
distintas colonias bacterianas desarrolladas en cultivo, seleccionando la placa ms
propicia para el este:
Las placas marcadas con 100uL se debern multiplicar por 2.000
Las placas marcadas con 10uL se debern multiplicar por 20.000
De esta manera se obtiene el recuento real de cada bacteria encontrada en el cultivo.

Recuento 1.000.000 UFC/ml, de importancia clnica.


Recuento < 1.000 UFC/ml, excluye diagnstico de NAVM.
Recuento entre 1.000 a 1.000.000 UFC/ml, requiere interpretacin segn criterio clnico.
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Los resultados negativos: se informan 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.
Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad
de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

5.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

5.8 REFERENCIA
Arancibia H, Francisco et al. Diagnstico de neumona asociada a ventilacin
mecnica. Rev. chil. infectol., 2001, vol.18, supl.2, p.41-57. ISSN 0716-1018.
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5.9. FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA

ASPIRADO ENDOTRAQUEAL CUANTITATIVO.

MUESTRA

Diluir en cantidad igual con suero fisiolgico (Dil. )

Agitar por 2 minutos en Vortex, con perlas de vidrio

Mezclar 100uL de muestra con 9.9 mL de


suero fisiolgico (Dil. 1/100).

Sembrar 100uL en placa de agar Sembrar 10uL en placa de agar


sangre y placa de McConkey (Dil. sangre y McConkey (Dil. 1/100).
1/10).

Estriar por toda la superficie con asa tipo


rastrillo.

Incubar a 35C por 18-24hrs.

Recuento de las colonias Recuento de las colonias

1 colonia= 2000 UFC/ml 1 colonia= 20000 UFC/ml


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6. COPROCULTIVO

6.1 OBJETIVO

Estandarizar la realizacin de coprocultivo para poder identificar en materia fecal


Microorganismos patgenos causales de infecciones gastrointestinales.

6.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes con diarrea aguda a la presencia de deposiciones lquidas o acuosas,
generalmente en nmero mayor de tres en 24 horas y que dura menos de 14 das.

6.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas en la seccin de bacteriologa es el Tecnlogo Mdico.

6.4 TERMINOLOGIA
Estandarizar: Se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se
realiza una actividad de manera standard o previamente establecida.
Infeccin: Es el trmino clnico para la colonizacin de un organismo husped por
especies exteriores, el organismo colonizador es perjudicial para el funcionamiento normal
y supervivencia del husped, por lo que se califica al microorganismo como patgeno.
Microorganismos patgenos: Son los microorganismos que originan infeccin.

6.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

6.5.1 FUNDAMENTO
Las tcnicas de coprocultivo se basan en la bsqueda de patgenos, que se desarrollan
en medios de cultivo selectivo diferenciales, como agar McConkey, agar XLD y agar
TCBS. Tambin en medios especiales como el agar Campylobacter.
A partir de colonias tpicas, sospechosas, se realizan identificaciones bioqumicas,
serolgicas y estudios de sensibilidad, cuando corresponda.

6.5.2 TIPO DE MUESTRA


Las muestras pueden ser Torulado rectal o sonda rectal. Las muestras deben venir en
medio Cary-Blair.

6.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Medio de transporte Cary Blair.
Porta objetos esmerilados.
Placas con medio de cultivo agar Mc Conkey Sorbitol.
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Placas con medio de cultivo agar XLD.


Placas con medio de cultivo agar TCBS.
Placas con medio de cultivo agar Campylobacter.
Tubos 14 x 14 con caldo peptonado pH 8.6.
Suplemento antibitico Campylobacter.
Sobres productores de atmosfera de microaerofilia.
Reactivos:
- Antisuero para Escherichia coli entero hemorrgico: O157.
Antisueros para Shigella: A, A1, B, C, D.
Antisueros para Salmonella: A, B, C1, C2, D, E.
Cristal violeta de uso en Microbiologa.
Bicarbonato de sodio 1 %.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
Microscopio corriente.
Estufa de cultivo a 42C.

6.5.4 PROCEDIMIENTO
-Sembrar la muestra en agar McConkey sorbitol, XLD. Incubar 18-24 hrs. a 35C.
-Con la trula, realizar una extensin en un portaobjetos. Teir este frotis mediante la
tincin VB (Cristal violeta/bicarbonato) para la bsqueda de Campylobacter. Guardar la
trula en el medio Cary-Blair.
-Observar el frotis al microscopio con aceite de inmersin. Si existen bacilos curvos con
forma de gaviota, sembrar la muestra en agar Campylobacter e incubar en estufa a 42C
(seccin preparacin de medios), en jarra de microaerofilia con Campygen por 48 horas.
Verificar que la temperatura sea la indicada.
-Diariamente se sembraran para cultivo de Vibrio, muestras elegidas al azar: una muestra
peditrica y una muestra de adulto. (Vigilancia de laboratorio de Vibrio colera segn
Decreto Supremo N 158 y la Circular de Vigilancia y control de Clera B51/41)
-Para el cultivo de Vibrio spp. Al siguiente da, se debe emulsionar la trula previamente
guardada en caldo peptonado a pH= 8,6 para realizar el estudio de Vibrio spp. Incubar el
caldo por 6 horas a 35C.
-Luego del tiempo de incubacin, aspirar la zona superior del caldo con una pipeta
Pasteur e inocular una placa de agar TCBS y sembrar. Incubar por 18-24 horas a 35C.
-Despus del tiempo sealado para las respectivas placas, realizar pruebas bioqumicas y
estudio de sensibilidad a las colonias sospechosas.
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6.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados negativos: Se informan a las 48 horas, informar No hubo desarrollo de


Salmonella, Shigella, Yersinia enterocolitica, Campylobacter., y Escherichia coli
Enterohemorrgica y Vibrio (cuando es realizado).

Los resultados positivos: No poseen un tiempo especfico definido, debido a la


variabilidad de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los
profesionales del rea.
En caso de aislar cepas de Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli entero-
hemorrgica, Campylobacter spp., Vibrio spp.,se debe enviar al ISP.
Las especificaciones tcnicas y formularios para procedimiento de envo de cepas,estn
disponibles en www.ispch.cl.

6.7 FORMULARIOS Y REGISTROS


Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta
autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de coprocultivo, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

6.8 REFERENCIA

Mota F., Gutirrez C. Diarrea aguda. PAC P-1, Parte B Libro 4. Academia
Mexicana de Pediatra. http://www.drscope.com/
CHOICE Study Group. Multicenter, randomized, double-blind clinical trial to
evaluate the efficacy and safety of a reduced osmolarity oral rehydration salts solution in
children with acute watery diarrhea. Pediatrics 2003; 107:613-8.
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6.1 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA

Estudio de Vibrio Muestra en Medio Cary-Blair


Estudio de
Campylobacter

Guardar trula
Sembrar en Bacilos en
en medio Cary- Frotis
agar Mc forma de alas
Blair para
Conkey gaviotas
tincin
Sorbitol y XLD (curvos)
VB
Emulsionar trula
Sembrar en
en caldo
agar
peptonado pH 8.6
Campylobacter

Incubar 18-24 h a
Incubar por 6
35 C
horas a 35 C
Incubar en jarra
Aspirar zona -Pruebas con sobre
superior del caldo Bioqumicas Campygen por
con pipeta 48 h a 42 C
Pasteur -Serologa

Sembrar en agar -Estudios de


TCBS sensibilidad
-Pruebas
Bioqumicas
Incubar 18 24 h
-Estudio de
a 35 C
sensibilidad

Pruebas
Enviar cepas al ISP
Bioqumicas
Vibrio (Ver anexo)
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7. TINCIN VB

7.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de observacin de bacilos curvos o con forma de gaviotas


sugerentes de Campylobacter spp.

7.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes que posean dolor abdominal, fiebre y diarrea, con presencia de mucus y
sangre.

7.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tincin VB es el Tecnlogo Mdico.

7.4 TERMINOLOGIA

Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se


realiza una actividad de manera standard o previamente establecida.

7.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

7.5.1 FUNDAMENTO
Se basa en la tincin especial para observar bacterias del genero Campylobacter a travs
del colorante cristal violeta y agregando bicarbonato de sodio, que permitir la correcta
observacin de la bacteria.

7.5.2 TIPO DE MUESTRA


Las muestras pueden ser torulado rectal o sonda rectal, estas deben venir en medio Cary-
Blair.

7.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Porta objetos esmerilados.
Cubreobjetos de 24x50.
Receptculos para transporte de muestras.
Cmara hmeda.
Aceite de inmersin.
Reactivos:
Cristal violeta.
Bicarbonato de sodio.
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Equipos:
Microscopio.

7.5.4 PROCEDIMIENTO
-Realizar un frotis a la muestra de deposicin y dejar secar a temperatura ambiente.
-Teir la preparacin anterior con el colorante cristal violeta y bicarbonato de sodio por
partes iguales, durante un minuto.
-Lavar con agua corriente y secar a temperatura ambiente.
-Leer con lente de inmersin, buscando formas tpicas de Campylobacter spp.
-En caso de observar formas tpicas, se proceder a sembrar la muestra en Agar
Campylobacter y se incubar en atmsfera microaerfila, a 42C por 48 Hrs con sobre
Campygen.
-Posteriormente se identifica la cepa y se realiza estudio de sensibilidad respectivo.

7.6 INFORME DE RESULTADO

Resultados positivos: se informa como Campylobacter con su respectiva especie y


sensibildad y va incluido dentro del informe del coprocultivo solicitado al paciente. No
poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad de cada caso en particular y
factores externos que no dependen de los profesionales del rea.

Resultados negativos: se informa dentro de los resultados de coprocultivo negativo a las


48 Hrs.

7.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Como el estudio de Campylobacter forma parte del examen del coprocultivo, no es


necesario ingresarla en forma separada. Por lo tanto una vez llegada la muestra e
ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta autoadhesiva con cdigo de barras (la
cual trae el nombre, RUT y procedencia del paciente) al cuaderno de coprocultivo,
asignndole el nmero correlativo interno del cuaderno.

7.8 REFERENCIAS

Manual de diagnostico bacteriolgico en el laboratorio clnico, Instituto de Salud


Publica de Chile 1994.
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7.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA

TINCIN VB

Hacer un frotis a las muestra de deposicin y


secar.

Agregar colorante cristal violeta y bicarbonato


de sodio.

Lavar con agua y


secar.

Observar con lente de inmersin (100x).

Registrar resultados.
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8 LEUCOCITOS, ROTAVIRUS Y ADENOVIRUS EN DEPOSICION.

8.1 OBJETIVOS:

Diagnstico rpido de microorganismos presentes en deposicin, que pueda estar


provocando una diarrea aguda.

8.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACIN:

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes que posean diarrea aguda o diarrea que tenga un periodo de evolucin
prolongado.

8.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION:

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de anlisis de deposicin en diarreas agudas
es el Tecnlogo Mdico.

8.4 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO LEUCOCITOS FECALES, ROTAVIRUS Y


ADENOVIRUS

8.4.1 FUNDAMENTO
Leucocitos fecales: observacin microscpica en muestras de deposicin.
Rotavirus y Adenovirus: determinacin de antgenos virales por medio de
inmunocromatografa nos indicara el agente etiolgico de la diarrea aguda del paciente.

8.4.2 TIPO DE MUESTRA


Deposicin por emisin espontnea y deposicin obtenida por sonda rectal. En ambos
casos la deposicin viene en un frasco de polietileno limpio.

8.4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Pipetas de transferencia estriles.
Porta objetos esmerilados.
Cubreobjetos de 24x50.
Receptculos para transporte de muestras.
- Tubos plsticos o tubo de vidrio tipo Khan
Reactivos
Kit para determinacin de Rotavirus y adenovirus.
Hayem B
Equipos:
Microscopio.
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8.4.4 PROCEDIMIENTO

Rotavirus y Adenovirus:
-Para la identificacin de rotavirus y adenovirus se debe hacer por la tcnica de
inmunocromatografa, vase inserto de tcnica presente en el kit cromatogrfico segn
marca.

Leucocitos fecales:
-Con una paleta de madera, o plstica, tomar una pequea cantidad de muestra de heces,
preferentemente de la zona con mucosidades y depositar en un tubo plstico o vidrio.
-Agregar aproximadamente 5 gotas de Hayem B y homogenizar con un palo de madera o
plstico.
-Depositar gota con homogeneizado y cubrir la preparacin con un cubreobjeto,
-Observar la preparacin al microscopio con aumento de 10x, buscando leucocitos, y con
40x para confirmar.

8.5 INFORME DE RESULTADOS

-En el caso de los leucocitos fecales se realiza por medio de cantidad, informando por
medio de cruces.

3+ = Abundante Cantidad.
2+ = Moderada Cantidad.
1+ = Escasa Cantidad.

-En el caso de rotavirus y adenovirus en deposicin se interpreta como positivo o negativo


dependiendo el resultado del kit cromatogrfico.

Tanto los resultados positivos como los negativos se informaran durante la misma
jornada, en un periodo menor a 24 horas.

8.6 FORMULARIOS Y REGISTROS


Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta
autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de Leucocitos fecales y rotavirus, asignndole el nmero
correlativo interno del cuaderno.

8.7 REFERENCIAS
Biomerieux, kit vikia Rota-Adeno.
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8.8 FLUJOGRAMA LEUCOCITOS FECALES

Leucocitos fecales

Tomar muestra, preferentemente


la zona mucosa

Depositar en tubo plstico o


vidrio con tapa

Agregar 5 gotas de Hayem B al


tubo y homogeneizar

Depositar 1 gota de la
preparacin en portaobjeto
cubrir

Observar al microscopio con


aumento 10X y 40X

Registrar resultados
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9 CLOSTRIDIUM DIFFICILE EN DEPOSICION

9.1 OBJETIVO

Deteccin oportuna de Clostridium difficile en pacientes hospitalizados.

9.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes hospitalizados que estn en tratamiento con antibiticos (especialmente
betalactmicos, clindamicina y cefalosporinas); inmunodeprimidos, pacientes en edad
avanzada, con desnutricin calrica proteica, con uso de anticidos, intervencin
quirrgica sobre tracto gastrointestinal y previo contacto con pacientes positivos.

9.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas en la seccin de bacteriologa es el Tecnlogo Mdico.

9.4 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

9.4.1 FUNDAMENTO
El ensayo para la deteccin de toxinas A/B de Clostridium difficile es una prueba
automatizada para uso en los equipos de la familia VIDAS que permite la deteccin
cualitativa de las toxinas A y B en muestras de materia fecal por la tcnica ELFA
(Enzyme-Linked Fluorescent Assay).

9.4.2 TIPO DE MUESTRA


Muestras de materia fecal que vienen en recipientes limpios con cierre hermtico. Las
muestras de materia fecal recogidas en formol o PAF (utilizado en los
coproparasitolgicos), no son adecuadas para este ensayo.

9.4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Guantes
Pipeta automtica 300 ul
Puntas desechable
Tubos eppendorf
Bastoncillos o asas
Reactivos:
- Kit para C.difficile Toxin A y B (CDAB)
Equipo:
- VIDAS
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9.4.4 PROCEDIMIENTO
Para el procesamiento de las muestras, resultados, calibraciones, interpretacin y control
de calidad ver el Manual del Kit. para C.difficile Toxin A y B (CDAB)

9.5 INFORME DE RESULTADOS

Tanto los resultados positivos como los negativos se informaran durante la misma
jornada, en un periodo menor a 24 horas.

9.6 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de coprocultivo en la pestaa de Clostridium, asignndole el
nmero correlativo interno del cuaderno.

9.7 REFERENCIAS

Barlett,JG.;et al.1978. Antibiotic-associated pseudomembranous colitis due to toxin-


producing Clostridia.New England Journal of Medicine.298:531-534
Vidas C.difficile Toxin A y B (CDAB) Biomerieux. Ref: 30118.
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10. ESTUDIO DE FLUJO VAGINAL

10.1 OBJETIVO

Diagnosticar microorganismos que se encuentren en el flujo vaginal.


En pacientes peditricos, Haemophilus y Streptococcus pneumoniae adquieren un rol
significativo, en esta localizacin.
En pacientes mayores, tienen importancia, Gardnerella vaginalis, Trichomonas vaginalis,
especies de Candida, Bacilos Gram negativos, Streptococcus agalactiae, Neisseria
gonorrhoeae.

10.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Se indica el cultivo de secrecin, con fines diagnsticos para pacientes femeninos que
presenten alteraciones a nivel vaginal, tanto hospitalizadas como pacientes ambulatorios.

10.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo de secreciones biolgicas es el
Tecnlogo Mdico.

10.4 TERMINOLOGIA

ITS: infeccin de transmisin sexual.

10.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

10.5.1 FUNDAMENTO
El estudio microbiolgico de secrecin vaginal, permite el estudio de las bacterias
involucradas en procesos infecciosos, permitiendo descartar si es producto de una
Infeccin de transmisin sexual (ITS) o por colonizacin bacteriana.

10.5.2 TIPO DE MUESTRA


Normalmente, esta muestra puede venir tomada en medio de transporte Stuart o en un
tubo con suero fisiolgico. Ms informacin de la muestra remitirse al Manual de toma de
muestra de Microbiologa

10.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Tubos con medio de transporte Stuart.
Tubos con suero fisiolgico estril.
Porta objetos esmerilados.
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Reactivos:
Tincin de GRAM.
Placas de Agar Sangre.
Placas de Agar Chocolate.
Placas de Agar Candida (cromgeno).
Placas de Agar Mc Conkey.
Placas de Agar Thayer Martin.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
Microscopio corriente.
Jarra con vela.

10.5.4 PROCEDIMIENTO

-Numerar tubo con medio de transporte o suero fisiolgico (muestra), placas, y


portaobjetos a utilizar.
-Sacar trula del medio de transporte o con pipeta Pasteur si viene en suero fisiolgico y
sembrar en placa de Agar Sangre, Agar Chocolate y Agar Candida.
-Con la misma trula, o pipeta Pasteur realizar frotis en portaobjeto esmerilado, estril.
Dejar secar.
-Dejar la muestra que viene en suero fisiolgico, para observacin del directo al fresco, en
microscopio corriente. En caso de venir tomado en trula con Stuart, se puede hacer una
emulsin con suero fisiolgico rotando la trula en ste.
- Observar en microscopio corriente la muestra al fresco.
-Incubar placas en estufa de cultivo a 35C por 18 a 24hrs. en atmsfera normal. La placa
de Agar Chocolate se incuba en microaerofilia (tarro con vela), en estufa a 35C.
-Si se solicita estudio de Gonococo, en la orden mdica, se procede a sembrar una placa
de Thayer Martin, y se incuba en microaerofilia, en estufa de cultivo a 35C, por 18-24 hrs.
-Una vez seco el portaobjeto con el frotis, proceder a realizar Tincin de Gram.
-Secar portaobjeto teido, en estufa de cultivo. Leer en microscopio corriente.
-Revisar las placas despus de 18-24 hrs. de incubacin. Realizar bsqueda de colonias
de patgenos en las placas de medio de cultivo. En caso de no haber desarrollo, proceder
a incubar las placas en estufa de cultivo a 35C, por otras 18-24 hrs.
-Informar la o las bacterias patgenas encontradas, con identificacin hasta gnero y
especie, junto al estudio de sensibilidad antimicrobiano respectivo.
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10.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados negativos: Se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

Los resultados positivos: No poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

10.7 FORMULARIO Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de flujos vaginales, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

10.8 REFERENCIA
Anderson M, Karasz A, Friedland S. Are vaginal symptoms ever normal? A review of the
literature. MedGenMed. 2004;6(4):49.
Eckert LO, Lentz GM. Infections of the lower genital tract: vulva, vagina, cervix, toxic
shock syndrome, HIV infections. In: Katz VL, Lentz GM, Lobo RA, Gershenson DM, eds.
Comprehensive Gynecology. 5th ed. Philadelphia, Pa: Mosby Elsevier; 2007:chap 22.
Sanfilippo JS. Vulvovaginitis. In: Kliegman RM, Behrman RE, Jenson HB, Stanton BF,
eds. Nelson Textbook of Pediatrics. 18th ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007:
chap 549.
Spence D, Melville C. Vaginal discharge. BMJ. 2007; 335:1147-1151.
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10.9 FLUJOGRAMA SECRECIN VAGINAL

Secrecin vaginal

Muestra tomada en:

Suero fisiolgico y/o medio de


transporte Stuart.

Sembrar en:
Incubar a
- Agar sangre 35C por
Si hay sospecha de - Agar Candida. 18-24 hrs.
gonococo: - Agar McConkey (<14 aos)
Incubar a
35C por 18-
- Agar chocolate 24 hrs en
Sembrar en agar Thayer microaerofilia.
Martn e incubar a 35C - Realizar frotis y tincin Gram.
por 18-24hrs en - Lectura directo al fresco.
microaerofilia.

POSITIVO
Observar desarrollo
bacteriano.

Pruebas bioqumicas y
estudio de sensibilidad. POSITIVO NEGATIVO

- Realizar frotis y tincin Gram.


- Lectura del directo al fresco.
Pruebas bioqumicas y Volver a incubar las placas
estudio de sensibilidad. segn corresponda por 24hrs
Envo de cepas al ISP ms.
(notificacin
obligatoria)
NEGATIVO

Negativo a las 48hrs de


incubacin.
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11. HEMOCULTIVO

11.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento del hemocultivo para el diagnstico de sepsis.

11.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.

11.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de hemocultivo es el Tecnlogo Mdico.

11.4 TERMINOLOGIA

Bacteriemia: presencia de bacterias en la sangre


Septicemia o Sepsis: concepto eminentemente clnico, que significa bsicamente,
desarrollo de una respuesta sistmica a la infeccin.
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza
una actividad de manera standard o previamente establecida.

11.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

11.5.1 FUNDAMENTO
Los sistemas automatizados para hemocultivos consisten bsicamente en botellas con
diversos medios de cultivo (aerbicos, anaerbicos, hongos, micobacterias y con resinas
que captan antibiticos) que se incuban en equipos que agitan constantemente las
muestras y que poseen modernos sistemas de deteccin microbiana. Estos se basan en
la deteccin de productos del metabolismo bacteriano (CO2) mediante tcnicas
radiomtricas, espectrofotomtricas, fluoromtricas y/o colorimtricas. El computador
asociado a los equipos relaciona las mediciones con ndices y/o grficas de crecimiento
microbiano que dan un aviso cuando la deteccin sobrepasa un punto de corte. Las
botellas se descargan, se hace una tincin de Gram y se informan precozmente.

11.5.2 TIPO DE MUESTRA


Recin nacidos: 1 mL de sangre por frasco completando un set de 2 frascos.
Lactantes 1 mes 1 ao: 1,5 mL de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos.
Mayores de 2 aos: 2,5 mL de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos.
Adultos: 5 10 mL de sangre por frasco, completando un set de 2 frascos.
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11.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Materiales:
Frascos de hemocultivos peditricos de 20ml (amarillos) y adultos de 30 ml (verdes).
Agujas de hemocultivos.
Portaobjetos con borde esmerilado
Placas de medio Agar sangre y Mc Conkey.
Reactivos:
Reactivos para tincin de Gram.
Equipos:
Equipo automatizado Bact Alert 3D.
Microscopio corriente
Estufa de cultivo a 35C.

11.5.4 PROCEDIMIENTO
-Ingresar datos del paciente al Bact View como se menciona en el manual de Bact Alert
System training manual with Bact VIEW Software, Capitulo 5, pg 5.1, Biomerieux
- Cargar frascos en el incubador, en el lugar donde indique el equipo con la luz.
-La incubacin, agitacin y monitoreo de los frascos de hemocultivos se realiza en equipo
automatizado Bact Alert 3D.

Procedimiento en hemocultivo positivo:


-Desinfectar la tapa del frasco con algodn impregnado en alcohol. Introducir aguja
especial para hemocultivos.
-Sembrar muestra (1 o 2 gotas) en agar sangre y agar McConkey. Colocar una gota de
sangre en un portaobjetos limpio y numerado, extender con la aguja para realizar tincin
de Gram.
-Incubar las placas en estufa de cultivo a 35C por 18-24 horas.
-Al da siguiente realizar lectura de las placas y efectuar identificacin y estudio de
sensibilidad segn corresponda.

11.6 INFORME DE RESULTADOS

Los frascos positivos: Sern entregados por el equipo con una alarma sonora y visual. La
entrega de resultados no posee un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad de
cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.
Se realizar un pre-informe de la tincin de gram en caso de que los dos hemocultivos de
un mismo paciente presenten positividad.
En caso de que sea solo uno de los dos frascos del paciente, el que resulte positivo, el
pre-informe de la tincin de gram se realizara solo en aquellos caso que se visualice un
bacilo gram negativo o una levadura.
Si se observara una cocacea gram positiva es recomendable esperar la positividad del
segundo frasco del paciente ya que puede tratarse de contaminacin de la piel.
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Los resultados negativos: Al quinto da de incubacin el equipo Bact Alert arroja los
resultados negativos, los cuales se informaran: negativos al quinto da de incubacin.

11.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de hemocultivos, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno, y al lado derecho del formulario de registro, se pegar la etiqueta desprendible
del frasco, la cual trae el cdigo de barras de ste.

11.8 REFERENCIA
Everts RJ; Vinson EN; Adholla PO; Reller BL. Contamination of catheter-drawn blood
cultures. J. Clin. Microbiol. 2001; 39:3393-3394
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11.9 FLUJOGRAMA HEMOCULTIVO

HEMOCULTIVO

HEMOCULTIVO AUTOMATIZADO

SISTEMA BACTALERT.

Incubar frascos en BACTALERT por

18-24hrs a 35C.

Hemocultivo positivo.
Hemocultivo negativo
(hasta 5 das).

Sembrar en agar Realizar tincin Gram.


sangre y McConkey. T
INFORMAR.
Informe preliminar.

Incubar en estufa a 35C por 18-24hrs.

CULTIVO NEGATIVO. CULTIVO POSITIVO.

Si al Gram original no se
observan bacterias.
Si al Gram original se
observan bacilos Gram (-) (Falso positivo)

Sembrar en agar chocolate.

Reincubar frasco en
BACTALERT.

Incubar a 35C en tarro con


vela.

Realizar pruebas bioqumicas y estudio de sensibilidad.


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12. HEMOCULTIVO CUANTITATIVO

12.1 OBJETIVO

Detecta en forma oportuna, infecciones asociadas en pacientes hospitalizados, con


catter venoso central (CVC), en los cuales se sospecha colonizacin del catter.
Paciente con ms de 24 horas con catter, con fiebre mayor o igual a 38 C, sin otro foco
infeccioso documentado.

12.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico del hospital regional de Rancagua.

12.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de hemocultivo es el Tecnlogo Mdico.

12.4 TERMINOLOGIA

Hemocultivo cuantitativo: Permiten establecer el nmero de bacterias por mL de sangre


cultivada.
CVC: cateter venoso central.

12.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

12.5.1 FUNDAMENTO
Los hemocultivos cuantitativos informan de la deteccin de las infecciones asociadas a
catter venoso central y evita el retiro innecesario de catteres.

12.5.2 TIPO DE MUESTRA


Se recibirn 2 jeringas con sangre heparinizadas, una rotulada como CVC y otra como
perifrica.

12.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Placas de medio Agar sangre.
Jeringas estriles.
Equipos:
Estufa de cultivo a 35 C.

12.5.4 PROCEDIMIENTO
-La orden mdica debe indicar cultivo de Hemocultivos cuantitativos, central y perifrico.
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-La metodologa para los hemocultivos cuantitativos una vez ya recepcionadas las 2
jeringas, una con sangre obtenida del catter venoso central y otra con sangre perifrica,
es el siguiente:

-Rotular cada jeringa.


-Vaciar 1 ml., de sangre de la jeringa del CVC a una placa de agar sangre de cordero 5%,
tapar y tratar de distribuir la muestra en la placa sin invertir y sin destapar, en forma
homognea.
- En ocasiones no llega la cantidad solicitada (1ml), por lo que es siempre necesario, para
efecto del recuento, marcar la placa con la cantidad de muestra sembrada: 1 ml, 0.75ml,
0.5 ml etc.
-Hacer lo mismo con la jeringa PERIFERICA.
-Incubar las placas en estufa de cultivo a 35C, hasta 48 hrs. con la tapa mirando hacia
arriba ( el nmero de la base de la placa mirando hacia abajo)
-Sin crecimiento o menos de 5 colonias por placa el cultivo se informa como Negativo.
-Realizar identificacin y estudio de sensibilidad del agente involucrado.

12.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados positivos: No poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.
Se informar el cultivo positivo con el recuento de colonias, expresado en UFC/mL y se
realizar la identificacin y sensibilidad bacteriana correspondiente.
Si el recuento bacteriano es superior 5 a 10 veces, en el CVC, sobre el cultivo de sangre
perifrica: se determina que La infeccin del torrente sanguneo es asociada al catter
venoso central.

Los resultados negativos: Se informan a las 72 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

12.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

12.8 REFERENCIAS

Everts RJ; Vinson EN; Adholla PO; Reller BL. Contamination of catheter-drawn
blood cultures. J. Clin. Microbiol. 2001; 39:3393-3394.
Fuller DD, Davis TE Jr, Denys GA, York MK. Evaluation of BACTEC MYCO/F Lytic
medium for recovery of mycobacteria, fungi, and bacteria from blood. J. Clin. Microbiol.
2001; 39: 2933-2936.
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12.9 FLUJOGRAMA HEMOCULTIVO CUANTITATIVO

Hemocultivo
cuantitativo.
Identificacin de las
muestras.

Jeringa con 1ml de Jeringa con 14ml de


sangre de origen sangre de origen
central. perifrico.

Sembrar 1ml en Sembrar 1ml en


agar sangre. agar sangre.

Incubar 72hrs a 37C

POSITIVO. NEGATIVO.

Realizar pruebas
bioqumicas y
sensibilidad
bacteriana.
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13. LIQUIDO CEFALORRAQUDEO

13.1 OBJETIVO

Diagnostico microbiolgico de meningitis.

13.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Mdico y Tcnico Paramdico de la seccin de bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Se indica una puncin lumbar, con fines diagnsticos para meningitis, hemorragias
menngeas, encefalitis y neuropatas.

13.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de lquido cefalorraqudeo es el Tecnlogo
Mdico.

13.4 TERMINOLOGIA

LCR: Lquido cefalorraqudeo.

13.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

13.5.1 FUNDAMENTO
El estudio de lquido cefalorraqudeo, nos permite la deteccin oportuna de
microorganismo causantes de meningitis.

13.5.2 TIPO DE MUESTRA


Muestra obtenida por puncin lumbar.

13.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Frasco de hemocultivo BacT/Alert PF o tubo plstico estril tapa rosca de 15ml.
Pipetas de transferencia estriles.
Porta objetos esmerilados.
Algodn
Agujas hemocultivos
Reactivos:
Tincin de Gram.
Placas de cultivo con agar chocolate y sangre.
Alcohol de 70.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
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Centrifuga rango mnimo 0 a 3.500 rpm.


Microscopio corriente.
Equipo automatizado Bact/Alert.
Jarra con vela

13.5.4 PROCEDIMIENTO

Siembra de la muestra tomada en tubo estril:


-Centrifugar el lquido a 3000 rpm por 10 minutos. Los lquidos purulentos pueden ser
sembrados sin necesidad de centrifugar.
-Sembrar del sedimento, aspirando con pipeta Pasteur estril. Sembrar una gota en agar
chocolate y agar sangre. Incubar en estufa a 35 C por 18-24 horas. Incubar placa de agar
chocolate en tarro con vela.
-Realizar frotis para tincin de Gram. El resultado del Gram, especialmente en el caso de
LCR turbios, semi turbios o purulentos, debe informarse de inmediato. La concentracin
de la muestra, como un paso previo a su tincin mejora el rendimiento, por lo que es
recomendable su uso de rutina.
-Todo hallazgo importante, tambin debe incluirse en el informe (por ejemplo, presencia
de elementos levaduriformes).

Muestra tomada en frasco de hemocultivo peditrico:


-Incubar durante dos das el frasco en equipo automatizado Bact/Alert.
-Siembra de frasco positivo: Desinfectar la tapa del frasco con algodn impregnado en
alcohol. Introducir aguja especial para hemocultivos.
-Sembrar muestra (1 o 2 gotas) en agar sangre y agar chocolate. Colocar una gota de
muestra en un portaobjetos limpio y numerado, extender con la aguja para realizar tincin
de Gram.
-Incubar las placas en estufa de cultivo a 35C por 18-24 horas.
-Al da siguiente realizar lectura de las placas y efectuar identificacin y estudio de
sensibilidad segn corresponda.

13.6 CONSIDERACIONES ESPECIALES

El Instituto de Salud Pblica, establece de manera temporal que el laboratorio


local deber enviar la muestra de LCR al laboratorio de referencia de la seccin
Bacteriologa del ISP, para su estudio de PCR (Polimerasa en cadena en tiempo real) si a
las24 hrs. no presentan desarrollo en cultivo de LCR y adems presenta alguna de las
siguientes condiciones:
Estudio Citoqumico: Recuento de leucocitos: mayor 100/mm 3 y/o Glucorraquia menor o
igual a 40 mg/dl..
Todo hallazgo microbiolgico en LCR debe ser enviado al ISP, ya sea Neisseria
menigitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus Beta hemoltico, Listeria
monocytogenes, Streptococcus pneumoniae, etc.
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13.7 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados positivos:


Gram directo: las muestras en las cuales se observan microorganismos al Gram, sern
informadas en un periodo menor a las 2 horas de ingresada la muestra al laboratorio, va
telefnica al servicio correspondiente y registrndola en carpeta Registro de valores de
alerta (ubicado en secretara de bacteriologa) simultneamente al informe escrito.
Cultivo: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad de cada caso en
particular y factores externos que no dependen de los profesionales del rea.

Los resultados negativos:


Gram directo: las muestras en las cuales no se observan microorganismos se informarn
como No se observan bacterias y/o No se observan levaduras y deben ser informadas
antes de las 2 horas de ingresada la muestra al laboratorio. No es necesario el informe
telefnico salvo que el mdico lo solicite.
Cultivo: Se informan a las 48 hrs. desde su ingreso al laboratorio de bacteriologa.

FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones (en caso de que llegue tomada en tubo) o al
cuaderno de hemocultivos (en caso de que llegue tomada en frasco), asignndole el
nmero correlativo interno del cuaderno.

13.8 REFERENCIAS

Curso Post Ttulo Estudio y Estandarizacin de Lquidos Biolgicos en el Laboratorio


Clnico. 2001.
Aplicacin de la citocentrifugacin en el diagnstico precoz de las infecciones
bacterianas de lquidos estriles. Tesis doctoral Jess Turio Luque. Universidad de
Granada 2007.
Recomendaciones para el estudio de lquidos biolgicos serosos en el laboratorio de
urgencias. A. Noguera y col. Quim Clin 2004:23(3) 141-145.
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13.9 FLUJOGRAMA DE LCR

LCR en frasco de hemocultivo LCR en frasco plstico estril

Centrifugar a 3.000rpm por 10min

Incubar en equipo BACTALERT por 2


das

Del sedimento

Seguir el esquema de hemocultivos Tincin Gram Sembrar en agar chocolate y


positivos, de lo contrario el equipo lo agar sangre
informara negativo a los 2 das.
Presencia de bacterias

Incubar a 35C por 18-24 horas (placa


en tarro con vela)
INFORME
INMEDIATO

POSITIVO NEGATIVO

Realizar pruebas
Realizar tincin Gram bioqumicas y estudio de Incubar por 18-24 horas a
sensibilidad 35C

ENVIO DE CEPAS AL ISP


Negativo Positivo
(ver anexo)

Informar como Volver a


negativo a las 48
horas POSITIVO

Volver a POSITIVO
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14. LIQUIDOS ESTERILES

14.1 OBJETIVOS

Estandarizar el diagnstico rpido de microorganismos presentes en los distintos tipos de


lquidos biolgicos estriles, que es de gran importancia para el diagnstico de
infecciones que, en esta localizacin es generalmente grave.

14.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.

14.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de lquidos estriles es el Tecnlogo Mdico.

14.4 TERMINOLOGIA
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se
realiza una actividad de manera Standard o previamente establecida.
Lquidos biolgicos: podemos definir a todos aquellos lquidos o fluidos corporales
procedentes del organismo.

14.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

14.5.1 FUNDAMENTO:
El estudio de los lquidos estriles nos permitir el estudio de microorganismos, causantes
de enfermedades, por lo cual los resultados deben ser evaluados con la clnica del
paciente.

14.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Muestras de lquido asctico, liquido articular o sinovial, liquido peritoneal o liquido pleural.

14.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Materiales:
Tubos de muestra estril en caso de ser tomados en tubo.
Frasco de hemocultivo en caso de ser tomado en frasco.
Pipetas de transferencia estriles.
Porta objetos esmerilados.
Agujas de hemocultivos
Reactivos:
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Tincin de Gram.
Placas de cultivo con agar chocolate y sangre.

Alcohol de 70.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
Microscopio corriente.
Equipo automatizado Bact/Alert.

14.5.4 PROCEDIMIENTO:
Muestra tomada en tubo:
Centrifugar la muestra a 3000 rpm por 10 minutos. Se elimina el sobrenadante.
Con una pipeta Pasteur estril, tomar muestra centrifugada y sembrar una placa de agar
chocolate y una placa de agar sangre de cordero al 5%.
Depositar una gota de muestra en un portaobjeto. Realizar un frotis delgado,
extendiendo un poco de la muestra, para hacer una tincin de Gram.
Incubar la placa de agar chocolate en jarra con vela y en atmsfera normal el agar
sangre durante 18-24 horas a 35C.
Muestra tomada en frasco de hemocultivo:
Una vez llegada la muestra se ingresa de igual forma que un hemocultivo en equipo
automatizado Bact/Alert.

14.6 CONSIDERACIONES GENERALES:

Los lquidos purulentos pueden ser sembrados directamente, sin centrifugar. El frotis
para la tincin de Gram, en este caso, se realiza depositando una gota de lquido en un
porta, en seguida, esparcir suavemente con trula delgada, rodndola cuidadosamente
por sobre el portaobjetos para obtener un frotis delgado.

14.7 INFORME DE RESULTADOS:

Al momento de informar el cultivo de lquidos estriles se debe informar el crecimiento


bacteriano, con la cepa identificada, ms su correspondiente antibiograma. Aquellos
cultivos sin crecimiento bacteriano a las 48 hrs se deben informar como negativos.

Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.
Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad
de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

14.8 FORMULARIOS Y REGISTROS:

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones (en caso de que llegue tomada en tubo) o al
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cuaderno de hemocultivos (en caso de que llegue tomada en frasco), asignndole el


nmero correlativo interno del cuaderno.

14.9 REFERENCIA:

Curso Post Ttulo Estudio y Estandarizacin de Lquidos Biolgicos en el Laboratorio


Clnico. 2001.
Aplicacin de la citocentrifugacin en el diagnstico precoz de las infecciones
bacterianas de lquidos estriles. Tesis doctoral Jess Turio Luque. Universidad de
Granada 2007.
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14.10 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:

Muestra.

Centrifugar muestra.

Tomar muestra con pipeta Pasteur estril.

Sembrar placa de Sembrar tubo con Preparar frotis


agar chocolate. caldo tioglicolato. (delgado).

Incubar por 18-24 Incubar por 18-24 Realizar tincin


horas a 35C en horas a 35C en Gram.
tarro con vela. atmsfera normal.

Observar.

Observar posible desarrollo


microbiano.

Pruebas bioqumicas y estudio


de sensibilidad.
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15. TINTA CHINA

15.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de pesquisa de Cryptococcus neoformans en lquidos


estriles como LCR, visualizando la cpsula.

15.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Para pacientes que poseen una infeccin fngica del sistema nervioso central, el cual
puede adems afectar a los pulmones y a la piel.

15.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tincin VB es el Tecnlogo Mdico.

15.4 TERMINOLOGIA:

Cpsula: es una caracterstica distintiva de la levadura, constituyendo el principal


factor de virulencia.
LCR: liquido cefalorraqudeo
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se
realiza una actividad de manera Standard o previamente establecida.

15.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO:

15.5.1 FUNDAMENTO:

Tcnica utilizadas para la observacin de la estructura de la capsula, principalmente en


Cryptococcus neoformans. Esta tcnica se denomina tincin negativa, debido a que se
tie el fondo de la preparacin y no el microorganismo.

15.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Muestras de liquido asctico, liquido articular o sinovial, lquido peritoneal, lquido pleural.

15.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Porta objetos esmerilados.
Cubreobjetos
Tubos plsticos estriles tapa rosca
Pipetas Pasteur estriles
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Reactivos:
Tinta china.
Agua destilada.
Equipos:
Centrifuga.
Microscopio.

15.5.4 PROCEDIMIENTO:
Centrifugar LCR a 3000 rpm por 10 minutos y eliminar sobrenadante.
Colocar en un tubo de Khan estril, una gota de tinta china de buena calidad
(Black magic USA) y adicionar 2 o 3 gotas de agua destilada.
Homogenizar.
En un portaobjetos colocar, con una pipeta Pasteur estril una gota de LCR
centrifugado y una gota de la dilucin de tinta china.
Homogenizar mezclando las dos gotas hasta tener un color oscuro y
colocar cubreobjeto sobre la preparacin.
Observar en el microscopio con aumento 10x y luego confirmar con aumento 40x,
buscando las levaduras con capsula tpica.

15.6 INFORME DE RESULTADOS

Se informar de acuerdo:

Positivo: (Se observa fondo negro y las levaduras con capsula sin color): Presencia de
capsula de Cryptococcus neoformans.)

Negativo: ausencia de cpsula de Cryptococcus neoformans.

Tanto los resultados positivos como los negativos se informaran durante la misma
jornada, en un periodo menor a 24 horas.

15.7 FORMULARIOS Y REGISTROS:

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

15.8 REFERENCIAS

Manual de microbiologa clnica, Patrick Murray 9 Edicin 2007,


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15.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:

Tincin tinta china.

Centrifugar LCR y eliminar


sobrenadante.

En un tubo khan colocar tinta china y


gotas de agua destilada.

Homogenizar.

Agregar en un portaobjeto una gota de


LCR centrifugado y una gota de
dilucin de la tinta china.

Homogenizar.

Observar en el microscopio en
aumento 10x y confirmar en 40x.

Registrar resultados.
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16 CULTIVO DE MYCOPLASMA HOMINIS Y UREAPLASMA UREALITICUM

16.1 OBJETIVOS

Sirve de apoyo al diagnstico, en pacientes con infecciones del tracto genital femenino.

16.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Anlisis desarrollado en adultos hospitalizados y ambulatorios, cuya sintomatologa sea
sospechosa de una infeccin del tracto genital femenino.

16.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de lquidos estriles es el Tecnlogo Mdico.

16.4 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTOS

16.4.1 FUNDAMENTO:
El cultivo est adaptado a una galera de pruebas para el crecimiento ptimo de los
Mycoplasmas (pH, substratos y asociacin de varios factores de crecimiento).
La presencia de substratos especficos, urea para Mycoplasma spp. Y arginina para
Mycoplasma hominis, y de un indicador, rojo fenol, permite, en caso de cultivo positivo,
visualizar un cambio de color del caldo, vinculado a un aumento del pH.
La asociacin de 3 antibiticos y de un antifngico, aporta la selectividad respecto a la
flora de contaminacin, eventualmente presente en la toma de muestra. Esta galera
permite obtener, la identificacin, el recuento y la sensibilidad a los antibiticos presentes
en la galera.

16.4.2 TIPO DE MUESTRA:


Muestras femeninas: secrecin cervical o vaginal.
Muestras masculinas: orina, secrecin uretral, prosttica, o semen.

16.4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Puntas amarillas estriles.
Propipeta ajustable
Trulas estriles, polister o plstico.
Reactivos:
Kits de Mycoplasma /Ureaplasma
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
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16.4.4 PROCEDIMIENTO :

Dirjase al inserto de la tcnica del kit comercial.

16.5 INFORME DE RESULTADOS:

Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

16.6 FORMULARIOS Y REGISTROS:


Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta
autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de Flujos vaginales, en la pestaa de Mycoplasma asignndole el
nmero correlativo interno del cuaderno.

16.7 REFERENCIAS:

Ryan KJ, Ray CG (editors) (2004). Sherris Medical Microbiology (4th ed. edicin).
McGraw Hill. pp. 409-12. ISBN 0838585299.
Hutchison, C. A. III, and M. G. Montague. 2002. Mycoplasmas and the minimal genome
concept, p. 221-254. In Razin, S., and R. Herrmann (eds.), Molecular Biology and
Pathogenicity of Mycoplasmas, Kluwer Academic/Plenum, New York..
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17 ESTUDIO DE SECRECIONES

17.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de diagnstico microbiolgico de los procesos supurados.

17.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Para pacientes peditricos o adultos, hospitalizados en su mayora, y tambin pacientes
ambulatorios que requieran es tipo de estudio.

17.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo de secreciones biolgicas es el
Tecnlogo Mdico.

17.4 TERMINOLOGA
Estandarizar: Se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza una
actividad de manera Standard o previamente establecida.

17.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

17.5.1 FUNDAMENTO:

El estudio microbiolgico de secreciones, permite el estudio de bacterias involucradas en


procesos infecciosos, de diverso ndole, siendo generalmente del grupo de las aerobias y
facultativas.

17.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Secrecin ocular, biliar, peritoneal, tica, piel, herida, escara, nasal, ulcera, quemadura,
etc.

17.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Tubos con medio de transporte Stuart.
Porta objetos esmerilados.
Reactivos:
Tincin de Gram.
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Placas de Agar Sangre.


Placas de Agar Mc Conkey.
Tubos con caldo Tioglicolato.
Placas con Agar Chocolate

Equipos:
Estufa de cultivo a 35C.
Microscopio corriente.

17.5.4 PROCEDIMIENTO:
Numerar tubo con medio de transporte (muestra), placas, tubos y portaobjetos a utilizar.
Sacar trula del medio de trasporte y sembrar en los medios de cultivo respectivo para
cada tipo de muestra y segn tabla Anexo N 3 Agares para siembra de muestras
Con la misma trula, realizar frotis en portaobjeto esmerilado, estril. Dejar secar.
Incubar placas y caldo de cultivo, en estufa de cultivo a 35C por 18 a 24 hrs.
Una vez seco el portaobjetos con el frotis, proceder a realizar Tincin de Gram.
Secar portaobjetos teido, en estufa de cultivo. Leer en microscopio corriente.
Revisar las placas y tubos despus de 18-24 hrs. de incubacin. Realizar bsqueda de
colonias de patgenos en las placas de medio de cultivo. En caso de no haber desarrollo,
revisar caldo Tioglicolato. Si est turbio, proceder a realizar traspaso en Agar Sangre y
Mac Conkey desde este caldo; incubando las placas en estufa de cultivo a 35C, por 18-
24 hrs. En caso contrario, incubar por 18-24 hrs. ms, las placas y tubos negativos, sin
desarrollo bacteriano.
Informar la o las bacterias patgenas encontradas, con identificacin hasta gnero y
especie, junto al estudio de sensibilidad antimicrobiano respectivo.

17.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

17.7 FORMULARIO Y REGISTRO

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.
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1.3.2
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17.8 REFERENCIAS

Manual de microbiologa clnica, Patrick Murray , 9 Edicin 2007,

Manual de diagnstico bacteriolgico en el laboratorio clnico, Rosa Bustos y col. 1994,


Instituto de Salud Pblica.

17.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA.

Muestra de secrecin

Medio de transporte Stuart

Realizar frotis en porta-objeto Sembrar en agar sangre,


McConkey y caldo tioglicolato

Tincin y lectura de Gram


Incubar por 24hrs a 35C y observar
crecimiento

POSITIVO NEGATIVO

Estudio microbiolgico del Incubar por 24hrs a 35C y


crecimiento bacteriano observar crecimiento

Negativo
Realizar pruebas bioqumicas
y estudio de sensibilidad

Informar negativo a
las 48hrs
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18 ESTUDIO DE SECRECION URETRAL

18.1 OBJETIVOS

Diagnstico de microorganismos que son capaces de realizar complicaciones crnicas


como epididimitis, prostatitis y sndrome de Reiter.

18.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Se indica el cultivo de secrecin, con fines diagnsticos para pacientes masculinos que
presenten uretritis, tanto hospitalizados como tambin pacientes ambulatorios.

18.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo de secreciones biolgicas es el
Tecnlogo Mdico.

18.4 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

18.4.1 FUNDAMENTO:

El estudio microbiolgico de la secrecin uretral, permite el estudio de las bacterias


involucradas en procesos infecciosos permitiendo descartar si es producto de gonococo u
otra bacteria.

18.4.2 TIPO DE MUESTRA:

Secrecin uretral. La muestra debe venir tomada en medio de transporte Stuart. Para ms
informacin dirigirse al manual de toma de muestra.

18.4.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS


Materiales:
Tubos con medio de transporte Stuart.
Porta objetos esmerilados estriles.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Placas de Agar Sangre.
- Placas de Agar Chocolate.
Placas de Agar Thayer Martin.
Placas de Agar Candida.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
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1.3.2
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Microscopio corriente.
Jarro con vela.

18.4.4 PROCEDIMIENTO:

Numerar tubo con medio de transporte (muestra), placas, tubos y portaobjetos a utilizar.
Sacar trula del medio de trasporte y sembrar en placas de Agar Sangre, Agar
Chocolate, Agar Thayer Martin y Agar Candida; Con la misma trula, realizar frotis en
portaobjeto esmerilado, estril para tincin Gram.
Incubar placas, en estufa de cultivo a 35C por 18 a 24hrs., en atmosfera normal. Las
placas de Thayer Martin y Agar Chocolate, se incuban en atmsfera de microaerofilia
(jarro con vela), en estufa de cultivo a 35C, por 18-24 hrs.
Leer en microscopio corriente, la tincin de Gram
Revisar las placas despus de 18-24 hrs. de incubacin. Realizar bsqueda de colonias
de patgenos en las placas de medio de cultivo. En caso de no haber desarrollo, proceder
a incubar las placas en estufa de cultivo a 35C, por otras 18-24 hrs.
Informar la o las bacterias patgenas encontradas, con identificacin hasta gnero y
especie, junto al estudio de sensibilidad antimicrobiano respectivo.

18.5 INFORME DE RESULTADOS:

Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.
En caso de obtener desarrollo de Neisseria gonorrhoeae, la cepa debe ser enviada al ISP.

18.6 FORMULARIOS Y REGISTROS:

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

18.7 REFERENCIA:
.
Organizacin Mundial de la Salud. Guas para el tratamiento de las infecciones de
transmisin sexual. OMS 2005. ISBN:92-4-354626-0
Workowski KA, Berman SM. Diseases characterized by urethritis and cervicitis. Sexually
transmitted diseases treatment guidelines 2006. Centers for Disease Control and
Prevention. MMWR. 2006 Aug 4;55(RR-11):35-49.
Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Update to CDC's sexually
transmitted diseases treatment guidelines, 2006: fluoroquinolones no longer
recommended for treatment of gonococcal infections. MMWR.2007 Apr 13;56(14):332-6.
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18.8 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:

Secrecin uretral

Muestra en medio de
transporte Stuart.

Realizacin de frotis para tincin


Gram. Sembrar en:

- Agar sangre.
- Agar chocolate
(microsensiblidad).
Lectura en microscopio - Agar Thayer Martin.
corriente. - Agar candida.

Incubar a 35C entre 18 a 24hrs y observar


desarrollo bacteriano.

Positivo. Negativo.

Pruebas bioqumicas y Incubar a 35C por 24hrs


estudio de sensibilidad. ms y observar desarrollo
bacteriano.

Negativo.

Informar negativo a las


48hrs de incubacin.
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19. UROCULTIVOS

19.1 OBJETIVOS

Estandarizar el diagnstico de certeza de infecciones de va urinaria, identificar su agente


causal y su sensibilidad a los antibiticos, as como para confirmar la curacin
bacteriolgica.

19.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes que presenten sospecha de cistitis, pielonefritis, bacteriuria asintomtica y
menos frecuente prostatitis aguda, abscesos renal o sepsis de posible origen urolgico.

19.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para la tcnica de urocultivo es el Tecnlogo Mdico.

19.4 TERMINOLOGIA

Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se


realiza una actividad de manera Standard o previamente establecida.
ITU: infeccin del tracto urinario.

19.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

19.5.1 FUNDAMENTO:
La tcnica de Urocultivo se basa en la bsqueda de bacterias uropatgenas, presentes en
la orina de pacientes, y que se detectan durante el estudio del cultivo de orina adicionado
del sedimento urinario; este completa el estudio del cultivo.

19.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Orina de primera miccin 2 chorro, puncin vesical, catter, sonda vesical.

19.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Frascos con tapa rosca de 50 ml estriles.
Asas plsticas de 1L estriles o metlicas 10 ul.
Portaobjetos.
Cubreobjetos de 20x20.
Pipeta automtica graduada 1-100 ul.
Puntas pipeta esteriles.
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Fecha: 02 JULIO2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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Tubos de centrfuga, cnicos y limpios.

Reactivos:
Placas con medio de cultivo Agar sangre de cordero 5% y Agar Mc Conkey
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35 C.
Centrifuga rango mnimo 0 a 1.500 rpm.
Microscopio corriente.

19.5.4 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

La metodologa de la siembra microbiolgica depende de la forma de obtencin de la


muestra:

Tabla N1
Siembra de orinas segn toma de muestra

Orina de segunda miccin Sembrar 1 uL (Multiplicar por 1000)


Orinas por cateterizacin o sondeo Sembrar 10 uL (multiplicar por 100)
vesical
Orinas por puncin vesical Sembrar 100 uL (Multiplicar por 10)
Resiembra de orina Gram del sedimento , Sembrar 10 uL en
agar sangre y chocolate

Siembra orina 2 chorro:


Agitar bien la muestra.
Tomar muestra de orina con asa calibrada1 ul desechable.
Sembrar y estriar en un cuarto de placa de agar sangre de cordero al 5%, previamente
cortada y marcada.
Sin volver a la muestra, sembrar y estriar en un cuarto de placa de agar Mc Conkey, es
decir, con la misma gota se siembran los dos agares, lo que permite tener colonias mas
aisladas en este agar.
Finalmente y despus de haber realizado la siembra en los dos agares, realizar tajo en
agar sangre y eliminar el asa.
Incubar en estufa a 35 C por 18-24 horas.
El recuento de colonias se realiza desde el agar sangre.
Para la lectura de la muestra ver Tabla N 2 Interpretacin del urocultivo y conducta
recomendada Pag.81.
En caso de obtener un cultivo negativo en presencia de un sedimento alterado y/o con
bacteriuria, se debe hacer una resiembra aumentando la cantidad a sembrar, es decir 10
ul, en un agar sangre cordero al 5% y un agar chocolate, adems de realizar un gram
directo del sedimento.
Siembra de orina por sondeo, puncin o cateterizacin:
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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Agitar la muestra.
Marcar el nmero interno de la muestra en un cuarto de placa de agar sangre de
cordero 5% y tambin en un cuarto de placa de agar McConkey. Debajo del nmero de la
muestra, marcar el volumen de muestra sembrado (10 100 ul).
Tomar muestra de orina con pipeta automtica y punta desechable estril. La
cantidad a tomar depende de la toma de muestra. Ver Tabla N1 Siembras de orina
segn toma de muestra.
Depositar la cantidad descrita segn Tabla N1 en el agar sangre de cordero al 5%.
Sacar nuevamente muestra con la pipeta y sembrar agar McConkey.
Luego con un asa metlica estril se estra la muestra en las dos placas realizando el
tajo en el agar sangre de cordero al 5%.
Incubar en estufa a 35 C por 18-24 horas.
El recuento de colonias se realiza desde el agar sangre.
Para la lectura de la muestra ver Tabla N 2 Interpretacin del urocultivo y conducta
recomendada Pag.81.

Para el sedimento urinario:


Traspasar un volumen de 10 ml de orina a un tubo plstico con tapa de 10 mL, para
centrifugar a 1500 rpm por 5 minutos.
Eliminar el sobrenadante para obtener el sedimento urinario. Mezclar bien y colocar una
gota en portaobjeto y encima de esta, un cubreobjetos.
Observar sedimento al microscopio.

19.6 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad


de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

Los resultados negativos: se informan a las 24 horas, desde su ingreso a la unidad de


bacteriologa.

19.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de urocultivo, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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19.8 REFERENCIAS

Comit de Microbiologa Clnica. Encuesta sobre mtodos de diagnstico microbiolgico


de la infeccin urinaria. Rev Chilena de Infectologa 2001.
Sobel J D, Kaye D. Urinary tract infections. In: Mandell, Douglas & Bennett's Principles
and Practice of Infectious Diseases. Mandell G L, Bennett J E, Dolin R, eds. 5th edition,
2000. Churchill Livingstone, New York.
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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19.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:


ORINA

Orina de 2do chorro:


Centrifugar a 1500rpm por sembrar con asa de 1ul Orina por sonda: Orina por puncin vesical:
10 minutos. en agar sangre y sembrar 10ul en agar sembrar 100ul en agar
McConkey. sangre y McConkey. sangre y McConkey.

Sedimento urinario.

Incubar en estufa por 18-24hrs a


35C.

NEGATIVO: Informar como


POSITIVO: Realizar 0 colonias.
recuento de colonias y
multiplicar segn Tabla
N 1.

Cultivo negativo con


sedimento alterado y/o
bacteriuria: resiembra con
10ul en agar sangre y
Realizar pruebas chocolate + tincin Gram.
bioqumicas y estudio
de sensibilidad.

Incubar en estufa por 18-


24hrs a 35C.
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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TABLA N2
INTERPRETACION MICROBIOLOGICA DEL UROCULTIVO Y CONDUCTA
RECOMENDADA.

*Mujer embarazada, paciente diabtico o urolgico


INTERPRETACION MICROBIOLGICA DEL UROCULTIVO
Y CONDUCTA RECOMENDADA
Recuento Condicin Sedimento Microorganismo (s) Interpretacin/Conducta
de clnica o urinario Aislado (s) recomendable
Colonias mtodo de
(UFC/mL) recoleccin
0 Independiente Urocultivo negativo
del resultado
Cualquier Puncin Independiente Cualquier Identificacin y estudio
recuento suprapbica del resultado microorganismo de susceptibilidad
1.000 Caterizacin Independiente 2 especies Identificacin y estudio
transitoria del resultado uropatgenos de susceptibilidad
10.000 Segundo Independiente 2 especies Identificacin y estudio
chorro en del resultado uropatgenos de susceptibilidad
paciente
especial*
10.000 Orina por Patolgico 2 especies Identificacin y estudio
catter uropatgenos de susceptibilidad
permanente
10.000 Primera Patolgico 2 especies Identificacin y estudio
miccin, uropatgenos de susceptibilidad
Segundo
chorro
100.000 Primera Patolgico 2 uropatgenos + Identificacin y estudio
miccin, otra bacteria con de susceptibilidad solo
Segundo recuento 10 veces de los uropatgenos
chorro menos
100.000 Primera Sin 2 especies Identificacin y estudio
miccin, antecedentes uropatgenos de susceptibilidad
Segundo
chorro
100.000 3 especies Polimicrobiano
Uropatgenos sin Solicite nueva muestra
Predominio de
ninguno
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20. LAVADO BRONCOALVEOLAR (LBA)

20.1 OBJETIVOS

Estandarizar el diagnstico de neumona en pacientes en ventilacin mecnica. Por medio


de tcnicas de cultivo cuantitativo.

20.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Se indica en pacientes crticos con sospecha de neumona por ventilacin mecnica.

20.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas de cultivo de secreciones biolgicas es el
Tecnlogo Mdico.

20.4 TERMINOLOGIA
LBA: lavado broncoalveolar.
Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se realiza
una actividad de manera Standard o previamente establecida.

20.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

20.5.1 FUNDAMENTO:
El estudio microbiolgico de lavado broncoalveolar, permite el estudio de las bacterias
involucradas en procesos infecciosos de neumona.

20.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Muestra de lavado alveolar tomado con fibrobroncoscopio.

20.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Tubos plsticos, tapa rosca, de centrifuga, estriles.
Puntas amarillas estriles.
Pipeta automtica 10-100 ul
Tubos con 9,9 mL. de suero fisiolgico.
Reactivos:
Placas de Agar Sangre.
Placas de Agar Mc Conkey.
Placas de Agar chocolate.
Equipos:
Estufa de cultivo microbiolgico a 35C.
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Tarro con vela.

20.5.4 PROCEDIMIENTO:
Numerar placas, a utilizar.
Homogenizar la muestra en vortex.
Aspirar 100 ul de la muestra, y vaciar en tubo que contiene 9,9 ml. de suero fisiolgico
(dilucin 1: 100).
Homogenizar en vortex.
Sembrar depositando 100 ul. de la dilucin anterior, en placa de Agar Sangre. (dilucin
1:10).
Esparcir con rastrillo, por toda la superficie del medio de cultivo.
Repetir los pasos 6 y 7, en placas de Agar Chocolate y Mac Conkey.
Incubar placas de Agar Sangre y Mc Conkey, en estufa de cultivo a 35 C por 18-
24hrs.en atmsfera normal. La placa de Agar Chocolate se incuba en atmsfera de
microaerofilia, (tarro con vela), en estufa de cultivo a 35 C por 18-24 hrs.
Observar el desarrollo de colonias de bacterias patgenas. Si el cultivo esta negativo,
incubar por otras 18-24 hrs. Respetar la atmsfera de incubacin segn el medio utilizado.
Cada colonia de importancia clnica, se multiplica por 1.000. El punto de corte es
10.000 UFC/mL.
Informar la o las bacterias patgenas encontradas, con identificacin hasta gnero y
especie, junto al estudio de sensibilidad antimicrobiano respectivo.

20.6 INFORME DE RESULTADOS:


Los resultados negativos: se informan a las 48 horas, desde su ingreso a la unidad de
bacteriologa.
Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la variabilidad
de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los profesionales del
rea.

20.7 FORMULARIOS Y REGISTROS:


Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta
autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

20.8 REFERENCIAS

Liebler JM, Markin C: Fiberoptic bronchoscopy for diagnosis and treatment. Crit Care
Clin 2000; 16: 83-100.
Resultados preliminares y factibilidad del mini lavado broncoalveolar en pacientes
cursando falla respiratoria severa. Rev.Mdica Chile 2011;1292-1297
Experiencia clnica de la utilidad del lavado broncoalveolar en pediatra Rev. Chilena
Pediatrica 73(6);576-582,2002.
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20.9 FLUJOGRAMA DE LA MUESTRA:

Lavado Bronqueoalveolar
Muestra entre 5 a 10 ml de lavado

Homogeizar en vortex

Diluir 100 uL de la solucin homogeneizada con 9.9ml de suero


fisiolgico estril(dilucin1.100)

Sembrar 100 ul de la dilucin en: Agar sangre, Chocolate y McConkey


y Chocolate

Incubar a 35C entre 18 a 24 hrs y observar desarrollo bacteriano

Positivo Negativo

Identificacin y estudio de Incubar a 35C por 24 hr ms y


Sensibilidad bacteriana observar desarrollo bacteriano

Informar recuento de colonia: Negativo:


Informar negativo a las 24 hrs

1 colonia equivale a 1000 ufc/ml


Punto de corte: 10.000 ufc/ml
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21. CULTIVO E IDENTIFICACION DE HONGOS.

21.1 OBJETIVOS

Estandarizar el procedimiento de cultivo e identificacin de hongos. Investigar la presencia


de hongos en muestras clnicas.

21.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes que posean lesiones fngicas en pelo, piel y uas.

21.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para el cultivo e identificacin de hongos es el profesional
Tecnlogo Mdico.

21.4 TERMINOLOGIA

Estandarizar: se conoce como estandarizacin al proceso mediante el cual se


realiza una actividad de manera Standard o previamente establecida.
KOH: hidrxido de potasio.

21.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

21.5.1 FUNDAMENTO:
El examen microscpico directo es uno de los procedimientos ms baratos, simples y
tiles para el diagnstico de las micosis, otorgando un resultado rpido al emitirlo como un
informe preliminar, que permitir al clnico iniciar la terapia antifngica.

21.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Con muestras clnicas de pelo, piel y uas de los sitios de lesin.

21.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Portaobjeto.
Cubre objeto.
Asa de gancho.
Tubo con medio Sabouraud dextrosa
Tubo con medio Dermasel
Cinta scotch
Reactivos:
KOH 10%.
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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Lactofenol
Equipos:
Microscopio.

21.5.4 PROCEDIMIENTO:

Examen directo:
Depositar escamas de piel o pelos, en un portaobjeto, agregar una gota de KOH al 10%
y cubrir con un cubreobjeto, calentar suavemente y esperar 15 a 20 minutos para que la
preparacin se clarifique.
Observar al microscopio con aumento de x10 y x40 para determinar la presencia de
elementos fngicos; hifas hialinas, septadas, ramificadas y/o la presencia de conidios y
artroconidios.
En infecciones por hongos levaduriformes, observar las levaduras, pseudohifas e hifas.

Cultivo:
1) Medios de cultivo, temperatura y tiempo de incubacin: dependen de la muestra
clnica:

a) Muestras de piel y anexos (dermatofitosis)


- siembra: en 4 tubos, 2 de agar Sabouraud y 2 de agar Dermasel.
- incubacin: 1 tubo de cada tipo a 25 C y a 35C.
- tiempo: 3 semanas.

b) Muestras genitales:
- siembra: 1 placa de agar Can.
- incubacin: a 35C.
- tiempo: 48 horas.

c) Muestras oculares y ticas:


- siembra: 2 tubos de agar Sabouraud.
-incubacin: a 25C y a 35C.
- tiempo: 2 semanas.

d) Muestras respiratorias, sangre, nariz y cavidades paranasales:


- siembra: 2 tubos de agar Sabouraud.
- incubacin: a 25C y a 35C
- tiempo: 2 semanas.

e) Muestras de orinas y deposiciones:


- siembra: 1 tubo de agar Sabouraud.
- incubacin: a 35C.
- tiempo: 5 das.
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f) Muestras de lquidos estriles (LCR, sinovial, peritoneal, etc.)


- siembra: 1 tubo de agar Sabouraud.
- incubacin: a 35C.
- tiempo: 3 semanas.

Para identificacin de hongos filamentosos


Realizar observacin macroscpica de cada uno de ellos, en el anverso y en el reverso
de las colonias cultivadas en los agares, observando textura, produccin de pigmentos,
difusin de este etc.
Montar preparacin con las cepas, tomando parte del desarrollo del hongo con un trozo
de cinta adhesiva y depositarla sobre una gota de lactofenol y cubrir con el portaobjetos.
Como alternativa a lo anteriormente sealado se utiliza una asa de gancho y se procede
a inocular directamente la colonia dese el agar, luego se agrega una gota de lactofenol a
un portaobjetos y a continuacin se mezcla con la colonia, se pone un cubreobjeto sobre
la preparacin.
Realizar observacin microscpica, diferenciando hifas, tipos de conidias:
macroconidias y microconidias (presencia de septos).
Diferenciar las principales caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicas
de los 3 gneros de hongos patgenos agentes de dermatofitosis.

21.6 INTERPRETACION DE RESULTADOS

Los resultados negativos: se informan a las 15 (muestras respiratorias) o 20 das


(muestras de raspado de uas, piel, pelo) segn el tipo de muestra, desde su ingreso a la
unidad de bacteriologa.
Los resultados positivos: no poseen un tiempo especfico definido, debido a la
variabilidad de cada caso en particular y factores externos que no dependen de los
profesionales del rea.

21.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de secreciones, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

21.8 REFERENCIAS

Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico micolgico Universisdad


de Chile , Facultad de Medicina , Instituto de Ciencias Biomdicas , Programa de
Microbiologa y Micologa. T.M. Mara Cristina Daz J. ,Dra. Andrea Elgueta N. Dra.
Denisse Seplveda B. Santiago de Chile 2009
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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21.8 FLUJOGRAMA CULTIVO DE HONGOS:

Toma de Muestra:
piel, uas, pelo

Directo al fresco: KOH 20% Siembra: 2 Sabouraud


2 Dermasel

Incubacin:

25C
37C
1 Sabouraud 1 Sabouraud
1 Dermasel 1 Dermasel

Observar: 1 Vez por semana

Durante: 3 Semanas

(-) Levaduras Filamentosos*

Identificacin Identificacin
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22. PESQUIZA DE ENTEROCOCCUS VANCOMICINA RESISTENTE.

22.1 OBJETIVOS

Prevenir la aparicin de resistencia a Vancomicina en Enterococcus sp.


Controlar la diseminacin de VRE, especialmente en los hospitales.
Detectar la infeccin por VRE en sus primeras etapas.

22.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes hospitalizados en unidades de cuidados intensivos con 5 o ms das de
hospitalizacin total desde su ingreso al hospital.

22.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas es el Tecnlogo Mdico.

22.4 TERMINOLOGIA

VRE: Enterococcus resistente a vancomicina.

22.5 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

22.5.1 FUNDAMENTO:
Se usa un medio cromognico selectivo para el cribado de Enterococcus faecium y
Enterococcus faecalis que presentan una resistencia adquirida a la Vancomicina (VRE) a
partir de muestras clnicas.

22.5.2 TIPO DE MUESTRA:


Muestras de torulado rectal.

22.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Asa metlica.
Mechero.
Reactivos:
Agar VRE ( Biomerieux )

Equipo:
Estufa de cultivo
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22.5.4 PROCEDIMIENTO :
Se obtendr una muestra de torulado rectal de los sujetos en estudio.
Inocular las muestras fecales sobre placas de agar VRE con un hisopo estril y se
extiende con un asa de metal utilizando la tcnica de aislamiento.
Incubar a 37C durante un total de 48 horas, se debe examinar a las primeras 24 horas.
Vuelva a incubar las placas negativas durante otras 24 horas.
Se informar todas aquellas muestras que presenten colonias caractersticas de
E.faecium y E.faecalis.

22.6 INFORME DE RESULTADOS

La identificacin directa de E. faecium y E. faecalis despus de la incubacin 48 horas.


Los resultados positivos: presencia de colonias con centro morado oscuro y halo
transparente, pueden ser informados inmediatamente como: Enterococcus faecium
Vancomicina resistente.
Las colonias color turquesa deben ser estudiadas traspasndolas a un Agar Sangre de
cordero 5% y realizar identificacin y E-Test a Vancomicina en bsqueda de E.faecalis
Vancomicina resistente (No se han registrado cepas resistentes).
Los resultados negativos: se informaran a las 48 horas de incubacin como Negativo
para Enterococcus Vancomicina Resistente

22.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de coprocultivo, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

22.8 REFERENCIAS

http://www.biomerieuxchile.cl/servlet/srt/bio/chile/dynPage?open=CHL_CLN_PRD&doc=
CHL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_10&pubparams.sform=11&lang=es_cl. Visto
06/04/2013.
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22.9 FLUJOGRAMA DEL PROCEDIMIENTO:

Toma de muestra.

Torulado rectal.

Inocular en agar
VRE.

Aislar con asa


metlica.

Examinar a las Incubar a 37C


primeras 24hrs. durante un total de
48hrs.

Volver a incubar las placas


negativas durante otras
24hrs.

Resultados positivos por


color de colonia.

Identificar gnero y
especie.
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23. CULTIVO DE ANAEROBIOS

23.1 OBJETIVOS

Diagnosticar la presencia de bacterias anaerobias.


Estas bacterias estn formando parte de la flora indgena pero bajo ciertas circunstancias
pueden provocar enfermedades ya sea de origen endgeno como exgeno.
Las enfermedades infecciosas humanas de origen endgeno ms comunes son:
Actinomicocis, abscesos ( cerebrales, hepticos , abdominales , pulmonares ) ,
bacteremia , endocarditis , gingivitis , procesos infecciosos del tracto genital femenino ,
mionecrosis o gangrena gaseosa , peritonitis , sinusistis etc.
Las enfermedades de origen exgeno mas comunes son : botulismo , ttano , colitis-
pseudomembranosa , aborto sptico etc.

23.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Personal Tecnlogo Medico y Tcnico Paramdico de la seccin de Bacteriologa del


hospital regional de Rancagua.
Pacientes hospitalizados con sospecha de infeccin anaerobia.

23.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas es el Tecnlogo Mdico.

23.4 TERMINOLOGIA

Anaerobios: Las bacterias anaerobias son microorganismos que no


requieren oxgeno molecular para vivir y multiplicarse.

23.5 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

23.5.1 FUNDAMENTO:

El cultivo de bacterias anaerobias in vitro requiere de medios de cultivos especficos


enriquecidos y de un sistema anaerbico de incubacin que contenga 85% de N2 , 10%
de H2 y 5% de CO2 para desarrollarse..

23.5.2 TIPO DE MUESTRA:

Muestras aspiradas (pus, abscesos, LCR, lquido pleural, asctico, articular, sinovial,
etc.) y debe ser colocada en un medio de transporte en condiciones anaerobias,
(Portagerm de Biomerieux))
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
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23.5.3 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:


Materiales:
Asa metlica.
Mechero
Jarra Gaspak o jarra anaerbica
Reactivos:
Sobres comerciales de generador de hidrgeno y anhdrido carbnico ( CO2 )
:Anaerogen ( Oxoid )
Sobres comerciales de Indicador de anaerobiosis
Placa de agar sangre anaerobia
Placa de agar sangre anaerobia con gentamicina
Placa de agar sangre corriente
Caldo tioglicolato de sodio con glucosa sin indicador
Vitamina K1-hemina
Tincin de gram
Tarjetas Vitek ANC
Equipo:
Microscopio
Lupa estereoscpica
Vitek 2 compact
Estufa de cultivo a 35C

23.5.4 PROCEDIMIENTO:
Preparar las placas de agar sangre anaerobio con y sin gentamicina idealmente el
mismo da de llegada la muestra. Es un requisito muy importante la frescura de los
medios a usar.
Simultneamente, regenerar a bao Mara hirviendo por 10 minutos un caldo tioglicolato
con glucosa y sin indicador, enriquecido con vitamina K1-hemina.
Una vez listas las placas, se destapa el frasco de Portagerm , el medio de transporte
del frasco se teir azul , lo que indica que el frasco perdi la anaerobiosis , por lo que
se debe trabajar rpido la siembra.
Extraer muestra con una pipeta Pasteur estril y sembrar agregando 1-2 gotas de la
misma en un agar sangre anaerobio, un agar sangre anaerobio con gentamicina, un
tubo con caldo tioglicolato especial para anaerobios, un agar sangre de cordero 5%
corriente y un frotis para tincin de gram.
Introducir los dos agar sangre anaerobios y el caldo en una jarra anaerbica
Introducir en la jarra el indicador de anaerobiosis. Al abrir el sobrecito, el papel se torna
rosado por la presencia de oxgeno.
Abrir el sobre con el generador de hidrgeno y CO2 ,y rpidamente introducir en la jarra.
Cerrar la jarra lo antes posible.
Incubar jarra anaerbica por 48 horas a 35C.
El papel indicador de anaerobiosis debe tornarse blanco en el transcurso de las horas.
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
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Incubar la placa de agar sangre corriente en un tarro con vela (microaerofilia) a 35C por
24-48 hrs.
Al termino de la incubacin, sacar las placas anaerobias de la jarra, eliminar los sobres
generadores e indicadores.
Observar el desarrollo de las placas bajo lupa estereoscpica y buscar colonias
sospechosas de anaerobios.
Si la colonia sospechosa se encuentra en escasa cantidad debe traspasarse a una
placa de agar sangre anaerobia e incubarla en condiciones anaerobias.
Si existe suficiente cantidad de cultivo puro traspasar simultneamente a :
1 placa de agar sangre anaerobia e incubar en anaerobiosis a 35C por 48 horas
1 placa de agar sangre corriente e incubar a 35C por 24 horas
Tincin de Gram
Al trmino de la incubacin , sacar las placas y observar si:
- la colonia sospechosa creci slo en anaerobiosis y el cultivo corriente en CO2
est sin desarrollo = presencia de anaerobio, realizar identificacin con tarjeta Vitek ANC
segn Manual del usuario del instrumento en captulo Procesamiento de tarjeta de test
, Preparacin del casete.
- la colonia sospechosa crece en anaerobiosis y tambin en el cultivo corriente en
CO2 = presencia de anaerobio facultativo ( en este grupo se encuentra las
enterobacterias , Staphylococcus y Streptococcus ) , realizar identificacin bacteriana de
rutina con las tarjetas Vitek que correspondan.

23.6 INFORME DE RESULTADOS:

Los resultados positivos: No poseen un tiempo especfico definido, debido al tiempo que
toman en desarrollarse las bacterias anaerobias, adems de factores externos que no
dependen de los profesionales del rea.
Los resultados negativos: Se pueden informar a partir del 4 - 6 da de incubacin.
Se informar como: No hubo desarrollo de anaerobio estricto.

23.7 FORMULARIOS Y REGISTROS

Una vez llegada la muestra e ingresada al sistema informtico, pegar la etiqueta


autoadhesiva con cdigo de barras (la cual trae el nombre, RUT y procedencia del
paciente) al cuaderno de anaerobios, asignndole el nmero correlativo interno del
cuaderno.

23.8 REFERENCIAS

Manual de diagnstico bacteriolgico en el laboratorio clnico , Instituto de salud Pblica


de Chile, 1994.
Manual del usuario del instrumento , Vitek 2 compac , Biomerieux.
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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23.9 FLUJOGRAMA DEL PROCEDIMIENTO

Muestra en portagerm

Agar sangre anaerobio incubar jarra gaspak - 48 hrs. a 35C


Caldo tioglicolato incubar jarra gaspak - 48 hrs. a 35C
Agar sangre anaerobio con Gentamicina incubar jarra gaspak - 48 hrs. a 35C
Agar sangre corriente incubar en CO2 24 hrs. a 35C

Colonias sospechosas

Agar sangre anaerobio incubar jarra gaspak 48 hrs. a 35C


Agar sangre corriente incubar en CO2 24 hrs.

Desarrollo bacteriano: Desarrollo bacteriano:


Agar sangre anaerobio (+) Agar sangre anaerobio (+)
Agar sangre CO2 (+) Agar sangre CO2 (-)

Anaerobio facultativo Anaerobio estricto

Identificar
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1.3.2
Fecha: 02 JULIO2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
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24. CONTROL DE CALIDAD

24.1 OBJETIVO

Verificar el requisito de la calidad especificado, detectar y eliminar los errores para


asegurar los mtodos y procedimientos cualitativos del rea de bacteriologa.

24.2 ALCANCE/CAMPO DE APLICACION

Este procedimiento se aplica en el proceso analtico a todos los anlisis bacteriolgicos


que estn sujetos a control de calidad.

24.3 RESPONSABLE DE SU ELABORACION Y ACTUALIZACION

El responsable de la elaboracin y actualizacin de las tcnicas, protocolos y


capacitaciones desarrolladas para las tcnicas es el Tecnlogo Mdico.

24.4 TERMINOLOGIA

Cepas ATCC (American Type Culture Collection): son cepas certificadas, las cuales son
un material biolgico de referencia. La coleccin certifica que se suministra una
determinada cepa, que es un cultivo puro, y que se han observado las convenientes
pruebas morfolgicas, bioqumicas y moleculares correspondientes.

24.5 DESARROLLO PROCEDIMIENTO

24.5.1 FUNDAMENTO:
El establecimiento de un programa de control de calidad permite monitorizar con carcter
continuo las actividades del laboratorio de bacteriologa en todas sus etapas para lograr
un proceso de constante mejora de la calidad, permitiendo alertar a los profesionales
responsables de posibles resultados insatisfactorios que pueden y deben ser corregidos.

24.5.2 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Materiales:
Mechero Bunsen.
Trulas estriles de madera con algodn hidrfilo.
Tubos plsticos estriles Falcon 72x75 mm
Solucin salina estril al 0.45 0.5 % con un pH de 4.5-7.0
Dispensador de solucin salina de volumen ajustablePipetas automticas de 145 ul y
280ulPuntas amarillas y azules para pipetas automticas.
Medios de cultivos enriquecidos, selectivos, diferenciales.
Cepas ATCC.
- Casette Vitek 2
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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Reactivos
Reactivos de tincin de Gram
Tiras de oxidasa
Agua oxigenada
Discos de optoquin
Sensidiscos
Slidex Staph-Kit
Slidex pneumo-Kit
Tarjetas de sensibilidad Vitek2
Tiras de E-Test
Equipos:
Estufa de Cultivo a 35C.
Congelador -70C ( se dispone slo de congelador a -20C )
Unidad Densicheck Vitek2
Vitek2 compact
Refrigerador.

24.5.3 PROCEDIMIENTO:

Conservacin y siembra de las cepas del control de calidad (ATCC):

Las cepas del control de calidad deben ser probadas con el procedimiento
estndar del mtodo de difusin en disco o por el mtodo automatizado, utilizando los
mismos materiales y mtodos que se utilizan para las cepas clnicas. Para su siembra a
partir del liofilizado comercial dirigirse al inserto del proveedor.
Para conservar las cepas por tiempos prolongados es conveniente colocarlas en
congeladores a temperaturas menores a -20C (idealmente a -70C), utilizando caldo
soya tripticasa con 10-15% de glicerol o con leche descremada.
Las cepas para el trabajo diario deben conservarse entre 2-8C, sembrando en
estras en agar sangre de cordero al 5% (bacterias comunes) o en agar chocolate
(bacterias nutricionalmente deficientes) y debern ser traspasadas semanalmente. Los
cultivos de trabajo deben ser remplazados por lo menos una vez al mes, a partir de la
cepa que se mantiene congelada.
Las cepas para controlar los antibiogramas (automatizado o por difusin): Antes de
ser probada las cepas se deben subcultivar en un medio slido con el fin de obtener
colonias aisladas. Los aislamientos a partir de congelados o liofilizados se deben
traspasar dos veces antes de ser usados.
Para la correcta conservacin de E.coli ATCC 35218 y K.pneumoniae ATCC
700603 se deben tener cuidados especiales como: almacenamiento a -70C y subcultivos
mnimos. Esto se debe a que se ha documentado la prdida espontnea del plasmidio
que codifica para la beta lactamasa si no se respeta estas condiciones. Si esto sucede se
obtendrn resultados fuera de los rangoa aceptables como zonas de inhibicin
incrementadas para E.coli ATCC 35218 frente a penicilinas lbiles a estas enzimas.
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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(ej:ampicilina, ticarcilina, y piperacilina) y K.pneumoniae ATCC 700603 frente a


cefalosporinas y aztreonam.
A) Control de calidad de antibiograma automatizado Vitek2:
Requisitos de calidad:
Las cepas ATCC a probar deben dar dentro de los rangos de CIM establecidos por la
CLSI e incorporados en el programa del Vitek2.

- El primer paso es proceder y recuperar las cepas segn el punto 24.5.3 conservacin
y siembra de las cepas del control de calidad ATCC
- Luego se procede a cargar las tarjetas en prueba segn el procedimiento indicado en
el capitulo antibiograma 3.5.4 procedimiento de antibiograma automatizado por
Vitek2, o tambin segn Manual del usuario Vitek2

En la siguiente tabla se detallan las cepas a probar para el mtodo automatizado


segn cada tarjeta y su periocidad:

Control de calidad de antibiograma automatizado Vitek2 :


Tarjeta AST Sensibilidad Cepas ATCC a probar Periocidad

E.coli ATCC 25922


Gram negativo E.coli ATCC 235218 cada cambio de lote
Ps.aeruginosa ATCC 27853
K:pneumoniae ATCC 700603

E.faecalis ATCC 29212


E.faecalis ATCC 51299
Gram positivo S.aureus ATCC 29213 cada cambio de lote
S.aureus ATCC BAA-1026
S.aureus ATCC BAA-976
S.aureus ATCC BAA-977

Levaduras Cand.parapsilosis ATCC 22019 cada cambio de lote


Cand.kruzei ATCC 6258
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B) Control de calidad de antibiograma por difusin Kirby-Bauer:

Requisitos de calidad:
Las cepas ATCC a probar deben dar dentro de los rangos establecidos por la
CLSI, midiendo para tal efecto los halos en milmetros.

- El primer paso es proceder y recuperar las cepas segn el punto 24.5.3 conservacin
y siembra de las cepas del control de calidad ATCC
- Luego se procede a inocular las placas segn el procedimiento indicado en el capitulo
antibiograma 3.5.4 Antibiograma Kirby-Bauer (difusin en agar).
- Los rangos establecidos se encuentran en las tablas respectivas para cada bacteria y
para cada antibitico. Ver 24.6 Formularios y registros.

En la siguiente tabla se detallan las cepas a probar para el mtodo por difusin
Kirby-Bauer y su periocidad:

Control de calidad de antibiograma por difusin Kirby-Bauer:


Antibiograma por difusin Cepas ATCC a probar Periocidad

Gram negativo E.coli ATCC 25922


Ps.aeruginosa ATCC 27853 Mensual
H.influenzae ATCC 49247

Gram positivo S.aureus ATCC 25923


S. pneumoniae ATCC 49619 Mensual
E.faecalis ATCC 29212

Acciones correctivas en resultados fuera de rango en los antibiogramas y pruebas:

Probar la combinacin droga-bacteria involucrada desde el da en que se detecta el


error y observar cinco das consecutivos. Registrar todos los resultados.
Si las cinco medidas para la combinacin droga-bacteria estn dentro de los rangos
aceptables no se necesario otra accin correctiva.
Si alguna de las cinco medidas permanece fuera del rango aceptable, se requiere
revisar las siguientes acciones:
Revisar si la cepa control es la correcta.
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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Observar si existe contaminacin de la cepa o el medio.


Las zonas de dimetro fueron medidas y transcritas correctamente.

El estndar de turbidez no est vencido y haya sido correctamente homogeneizado


antes de su uso.
Los materiales utilizados no estuvieran vencidos y que fueran almacenados a la
temperatura correcta.
La estufa de incubacin tuviera la temperatura y atmsfera adecuada.
Funcionamiento correcto de los equipos utilizados.
Conservacin adecuada de los discos, tarjetas, pruebas, agares, etc.
Las cepas control no han sido cambiadas ni contaminadas.
Las suspensiones del inculo se han preparado y ajustado correctamente y a partir de
una placa incubada por no mas de 24 horas.
En los antibiogramas por difusin comprobar el grosor del medio Mueller Hinton, el que
debe ser de 4mm. (a menor profundidad falsa sensibilidad, y a mayor profundidad falsa
resistencia).
Puede ser necesario obtener una nueva cepa de control de calidad y nuevos lotes de
materiales. Hasta que el problema sea resuelto, puedes ser necesario utilizar un mtodo
alternativo para evaluar la sensibilidad.
Una vez que el problema haya sido corregido, se debe documentar el comportamiento
satisfactorio de las pruebas.

C) Control de calidad de medios de cultivos:


Requisitos de calidad:
- Ausencia o presencia de de desarrollo bacteriano segn cada medio de cultivo a
probar.

- Una vez preparados los medios de cultivo se probaran sembrando en ellos distintas
cepas segn el medio. Las cepas a probar se encuentran congeladas, por lo tanto se
deben previamente descongelar y traspasar a un agar sangre y/o Mc Conkey, agar
Sabouraud segn corresponda.

- Los resultados del control se anotan en las tablas descritas en el punto 24.6
Formularios y registros, en las cuales aparece detallado los resultados esperados
segn cada medio de cultivo.
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- En la siguiente tabla se detallan las cepas a probar y su periocidad:

Control de calidad de medios de cultivos:


Medios de cultivo Cepas a probar Periocidad

Agar sangre de
cordero Streptococcus grupo A 2 veces a la semana
5% S. pneumoniae ATCC 49619

Agar Chocolate H.influenzae ATCC 49247 2 veces a la semana

E.coli
Agar Mc Conkey Proteus mirabilis Cada frasco
Enterococcus faecalis

E.coli
Agar XLD Proteus mirabilis Cada frasco
Shigella flexneri

E.coli ATCC 25922


Agar Sorbitol E.coli O:157 Cada frasco

Enterococcus
Vancomicina=R
Enterococcus
Agar VRE Vancomicina=S Cada lote
E.coli ATCC 25922

Candida albicans
Agar CAN Candida glabrata Cada lote
E.coli ATCC 25922

D) Control de calidad pruebas bioqumicas:


Requisitos de calidad:
Ausencia o presencia de reacciones bioqumicas esperadas segn cada bacteria a
probar.

- Los medios de cultivo se probaran inoculando en ellos distintas cepas segn el medio.
Las cepas a probar se encuentran congeladas, por lo tanto se deben previamente
descongelar y traspasar a un agar sangre y/o Mc Conkey.
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1.3.2
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Control de calidad pruebas bioqumicas:


Medio Cepas control Periocidad

TSI Escherichia coli Mensual


Proteus mirabilis
Shigella flexneri
Pseudomonas aeruginosa

LIA Escherichia coli Mensual


Proteus mirabilis
Shigella flexneri

MIO Escherichia coli Mensual


Klebsiellla pneumoniae

UREA Proteus mirabilis Mensual


Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli

CITRATO Klebsiella pneumoniae Mensual


Escherichia coli

Prueba Cepas a probar Periocidad

Slidex Staph-kit S .aureus ATCC 25923 Cada lote


S. epidermidis

Oxidasa Pseudomona aeruginosa Mensual


Escherichia coli

Cada vez que se


Catalasa Staphylococcus aureus ocupe
Streptococcus sp.

Optoquina Streptococcus pneumoniae Cada lote


Streptococcus viridans
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E) Control de calidad de las tinciones:


Requisitos de calidad:
Correcta coloracin segn el grupo de bacterias: bacilos gram negativos = rojos y
cocaceas gram positivas = azules.

- Se proceder a realizar una preparacin segn el capitulo Tincin de Gram, 1.5.4


Procedimiento.
- Las cepas a probar y su Periocidad estn descritas en las siguiente tabla:

Control de calidad de las tinciones:


Tincin Cepas a probar Periocidad

Violeta, lugol y safranina Staphylococcus aureus Cada vez que se prepare


Escherichia coli Una nueva tincin.

F) Control de calidad de esterilidad en la preparacin de medios de cultivo:


Requisitos de calidad:
Corroborar que a las 48 horas de incubacin a 35C las placas no presenten
contaminacin bacteriana.

Se debe realizar un control de esterilidad de cada lote de placas preparadas en el


laboratorio de agar sangre de cordero al 5%, agar chocolate y agar Mueller Hinton cada
vez que se preparen, incubando el 100% de las placas a 35C por 48 horas.
Si no se obtuviese el resultado esperado (es decir, sin contaminacin), descartar toda la
partida y revisar:
Modo de preparacin del medio.
Medio comercial (fecha de expiracin)
Forma de plaquear o dispensar en tubos, para encontrar el error y tomar acciones
preventivas.

24.6 FORMULARIOS Y REGISTROS

A) Control de calidad antibiograma automatizado Vitek2:


Los registros quedan guardados en PC del Vitek2 en cono Gestin de
resultados de CC.
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1.3.2
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B) Control de calidad antibiograma por difusin:


- Los resultados del control de calidad se registrarn en el archivador CONTROL DE
MEDIOS DE CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA.

Anexo N5 A: Escherichia coli


Anexo N5 B: Pseudomonas aeruginosa
Anexo N5 C: Staphylococcus aureus
Anexo N5 D: Enterococcus faecalis
Anexo N5 E: Haemophilus influenzae
Anexo N5 F: Streptococcus pneumoniae
(Para imprimir planillas ir al PC bacteriologa - mis documentos - carpeta Planillas QC).

C) Control de calidad de medios de cultivo:


- Los resultados del control de calidad se registrarn en el archivador CONTROL DE
MEDIOS DE CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA.

Anexo N6: agar sangre y agar chocolate


Anexo N7: agar Mc Conkey
Anexo N8: agar XLD
Anexo N9: agar sorbitol
Anexo N10: agar VRE
Anexo N11: agar CAN
(Para imprimir planillas ir a PC bacteriologa - mis documentos - carpeta Planillas QC -
Planillas QC ATCC por difusin).

D) Control de calidad pruebas bioqumicas:


- Los resultados del control de calidad se registrarn en el archivador CONTROL DE
MEDIOS DE CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA.

Anexo N12: control medios de bateras (pruebas bioqumicas)


Anexo N13: control latex Staphylococcus.
Anexo N14: control de reactivos: oxidasa.
Anexo N15: control de tincin de Gram.
Anexo N16: control de reactivos: catalasa.
Anexo N17: control de reactivos: optoquina

(Para imprimir planillas ir a PC bacteriologa - mis documentos - carpeta Planillas QC:


Anexo N12: batera bioqumica (TSI, LIA, MIO, urea, citrato) Planilla QC batera
''Anexo N14, 15, 16 y 17: Planillas QC oxidasa, Gram, catalasa, optoquin
respectivamente).
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
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E) Control de calidad de tinciones:


- Los resultados del control de calidad se registrarn en el archivador CONTROL DE
MEDIOS DE CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA.

Anexo N15: control de tincin de Gram.

(Para imprimir planillas ir aPC bacteriologa mis documentos carpeta Planillas QC


Planillas QC oxidasa, Gram, catalasa, optoquin, Anexo N15).

F) Control de calidad de esterilidad en la preparacin de los medios de cultivo:


- Los resultados del control de calidad de esterilidad en la preparacin de medios de
cultivos se registraran en la carpeta CONTROL DE CALIDAD PREPARACIN DE
MEDIOS.

Anexo N4: medios de cultivo.

(Para imprimir planillas ir a Anexo N 4: PC bacteriologa - mis documentos - carpeta


planillas QC - Planillas QC N placas preparadas)

24.7 REFERENCIAS

Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical microbiology. 8 Ed.2003.


Bergey's Manual of determinative Bcateriology, 1994.
CLSI Ao 2013.
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25. INDICADOR DE CALIDAD:

1-. Tiempo de respuesta de Gram directo LCR realizados en el laboratorio de


Bacteriologa:

Una vez emitido el informe de LCR en el sistema omega, se imprime una copia de ste.
Se archiva en carpeta de Informes de LCR tiempos de respuesta 2015. De manera
trimestral, el encargado de calidad revisa los datos (tiempo) para el cumplimiento de este
indicador y lo registra para la seccin.

Nombre del % Gram directo de LCR informados antes de 2 horas


Indicador

Tipo de Resultado
Indicador

Frmula N de Gram de LCR informados antes de 2 hrs en el periodo X 100


N Total de Gram de LCR recibidos en el periodo

Fuente de Copia de informes de gram LCR (universo y tiempos)


Informacin

Periodicidad de Mensual
Evaluacin
Umbral de Mayor o igual a 80%
Cumplimiento

Responsable TM Encargado seccin Bacteriologa


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2-. Valor crtico: Gram directo de LCR con resultados positivos realizados en el
laboratorio de Bacteriologa:

Nombre del % Gram directo de LCR con resultados positivos informados


Indicador

Tipo de Resultado
Indicador

Frmula N Total de Gram de LCR con resultados positivos informados x100

N Total de LCR con resultados positivos

N Total de Gram de LCR con resultados positivos informados X 100


N Total de Gram de LCR con resultados positivos

Fuente de Sistema Omega Copia de informes de gram LCR


Informacin

Periodicidad de Trimestral
Evaluacin
Umbral de Mayor a 80%
Cumplimiento

Responsable TM Encargado seccin Bacteriologa


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26. DERIVACIN DE CEPAS AL ISP:

26.1 OBJETIVO

Cumplimiento del reglamento sobre Notificacin de Enfermedades Transmisibles de


Declaracin Obligatoria (Decreto Supremo N 158 de 2004) (ENO)

26.2 ALCANCE

Personal Tecnlogo Medico y Secretaria del laboratorio de bacteriologia del hospital


regional de Rancagua.

26.3 RESPONSABLE DE PREPARACIN Y ENVIO

El responsable de la preparacin de la cepa es el Tecnlogo Mdico. El responsable del


envo y embalaje (triple embalaje) es la secretaria del laboratorio de bacteriologa del
Hospital regional de Rancagua.

26.4 TERMINOLOGIA

ENO: enfermedad de notificacin obligatoria.

26.5 PROCEDIMIENTO

- La cepa bacteriana debe enviarse en un medio de transporte Stuart.


- Las muestras de Hanta virus, Sarampin, Rubola y Parlisis Flccida se enviaran
segn las indicaciones descritas en carpeta Instrucciones y formularios que se
encuentra en secretaria.

26.6 FORMULARIOS Y REGISTROS

Las cepas a enviar se anotaran en el cuaderno ISP, en el cual tambin se anotan las
respuestas del Instituto de Salud Publica.
- Cada cepa ira con su formulario respectivo:
a) B1: formulario envos cepas bacterianas
b) B3: formulario de envo estudio vigilancia resistencia antimicrobiana
c) los formularios para envi de Hanta virus, Sarampin, Rubola y Parlisis Flccida se
encuentran en la pgina Web: www.ispch.cl
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BACTERIOLOGIA
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26.7 CEPAS A ENVIAR


- Vibrio cholera,
- Corynebacterium difteriae
- enfermedad invasora por Haemophilus influenzae
- Neisseria meningitidis
- Salmonella sp
- Shigella sp
- Neisseria gonorrhoeae
-Streptococcus pneumoniae en enfermedad invasora
- Streptococcus grupo B en enfermedad invasora
- Listeria monocytogenes
- Klebsiella sp resistente a imipenem y/o meropenem
- Enterococcus faecium vancomicina resistente (excepto hisopado rectal)
- Staphylococcus aureus resistente a la cloxacilina en hemocultivos

26.7 REFERENCIAS

- Instituto de Salud Publica.


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ANEXOS
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1.3.2
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Versin: 0
BACTERIOLOGIA
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ANEXO 1

ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIN.


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BACTERIOLOGIA
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Suspensi Turbidez Temperatur Atmosfera Tiempo


n (McF) a (horas)
(+/- 2C)

Mueller Hinton NaCl 0,5 35 C Ambiental 16-20


0,85%

HTM NaCl 0,5 35 C 5% 20-24


0,85%

Mueller Hinton NaCl 0,5 35 C 5% 20-24


+5% sangre 0,85%
cordero

Agar GC NaCl 0,5 35 C 5% 20-24


0,85%
Ambiental
Mueller Hinton NaCl 0,5 35 C o 5% 18-24
0,85% (segn
organismo)
Jarra
Mueller Hinton Agua 1 42 C Gaspak 48
+5% sangre destilada con sobre
cordero Campygen
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1.3.2
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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 2
PANELES ANTIBIOTICOS Y HALOS DE INHIBICIN SEGN CLSI 2014

Pseudomonas Acinetobacter baumanii


S I R S I R
Meropenem 16 14-15 13 Sulfa-ampicilina 15 dic-14 11

Amikacina 17 15-16 14 Amikacina 17 15-16 14

Gentamicina 15 13-14 12 Gentamicina 15 13-14 12

Imipenem 19 16-18 15 Meropenem 16 14-15 13

Ciprofloxacino 21 16-20 15 Imipenem 16 14-15 13

Ceftazidima 18 15-17 14 Ciprofloxacino 21 16-20 15

Cefepime 18 15-17 14 Cefepime 18 15-17 14

Pip/taz 21 15-20 14 Pip/taz 21 18-20 14

Enterobacterias: Orinas Enterobacterias


S I R S I R
Ampicilina 17 14-16 13 Ampicilina 17 14-16 13

Amikacina 17 15-16 14 Amikacina 17 15-16 14

Gentamicina 15 13-14 12 Gentamicina 15 13-14 12


Nitrofurantoina 17 15-16 14 Ceftriaxona 23 20-22 19

Cefotaxima 26 23-25 22 Imipenem 23 20-22 19

Ciprofloxacino 21 16-20 15 Ciprofloxacino 21 16-20 15

Sulfa-trime 16 nov-15 10 Sulfa-ampicilina 15 dic-14 11

Cefazolina 23 20-22 19 Cefepime 18 15-17 14


Cefuroxima 18 15-17 14 Pip/taz 21 18-20 17
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
Fecha: 02 JULIO2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
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ANEXO 2
PANELES ANTIBIOTICOS Y HALOS DE INHIBICIN SEGN CLSI 2014

Haemophilus Neumococo
S I R S I R
Ampicilina 22 19-21 18 cloranfenicol 21 - 20

Cloranfenicol 29 26-28 25 rifampicina 19 17-18 16

Sulfa-trime 16 nov-15 10 vancomicina 17

Ceftriaxona 26 - - eritromicina 21 16-20 15

Ciprofloxacino 21 - - tetraciclina 23 19-22 18


Cefuroxima 20 17-19 16 sulfa-trime 19 16-18 15
Sulfa-ampicilina 20 - 19 levofloxacino 17 14-16 13

Levofloxacino 17 - - Oxacilina 20 19

Staphylococcus sp Enterococcus
S I R S I R
Rifampicina 20 17-19 16 Ciprofloxacino (orina) 21 16-20 15

Eritromicina 23 14-22 13 Nitrofurantoina (orina) 17 15-16 14

Tetraciclina 19 15-18 14 Ampicilina 17 - 16

Sulfa-trime 16 nov-15 10 Vancomicina 17 15-16 14

Clindamicina 21 15-20 14 Eritromicina 23 14-22 13


Linezolid 21 - 20 Penicilina 15 - 14
Ciprofloxacino 21 16-20 15 Linezolid 23 21-22 20

Nitrofurantoina 17 15-16 14 Teicoplanina 14 nov-13 10


Staph aureus y lugdunensis Gentamicina 120 10 07-sep 6
Cefoxitina 22 - 21
(informar como
Staph coag negativa
oxacilina)
25 - 24
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
Fecha: 02 JULIO2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
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ANEXO 2
PANELES ANTIBIOTICOS Y HALOS DE INHIBICIN SEGN CLSI 2014

Coprocultivo
S I R
Ampicilina 17 14-16 13
Cloranfenicol 18 13-17 12
Sulfa-trime 16 11-15 10
Ciprofloxacino
(Salmonella 21 16-20 15
intraintestinales y
distintas de typhi)
Ciprofloxacino
(solo Salmonella 31 21-30 20
typhi y Salmonella
spp en
extraintestinales)
Cefotaxima
(solo en Salmonella 26 23-25 22
sp. de origen
extraintestinal)
Acido Nalidixico (*)

Nota 1: Salmonella aisladas de deposicin deben ser informadas rutinariamente solo


Ampicilina, Fluoroquinolonas (Ciprofloxacino) y SxT.
Nota 2: Samonella con resistencia a Acido Nalidixico pueden estar asociadas a falla
clnica o baja respuesta al tratamiento con quinolonas en pacientes con salmonelosis
extraintestinal.
Nota 3: No utilizar Cefalosporinas de 1 ni 2 generacin, Cefamicinas ni Aminoglicosidos
pueden aparecer susceptibles in vitro pero in vivo no son efectivos.
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 3

AGARES PARA SIEMBRA DE MUESTRAS


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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 4

MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS


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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 5A

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 5B

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 5C

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 5D

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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ANEXO 5E

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 5F

CONTROL DE CALIDAD PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD ATCC


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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 6

CONTROL DE CALIDAD AGAR SANGRE Y CHOCOLATE


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ANEXO 7

CONTROL Mc CONKEY
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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 8

CONTROL XLD
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1.3.2
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ANEXO 9

CONTROL Mc CONKEY SORBITOL


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1.3.2
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ANEXO 10

CONTROL DE CALIDAD VRE


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ANEXO 11

CONTROL DE CALIDAD AGAR PARA CANDIDA


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1.3.2
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ANEXO 12

CONTROL DE CALIDAD BATERIAS


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1.3.2
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 13

CONTROL LATEX STAPHYLOCOCCUS


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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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ANEXO 14

CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS


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BACTERIOLOGIA
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ANEXO 15

CONTROL DE TINCIN GRAM


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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
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ANEXO 16

CONTROL DE CATALASA
Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
1.3.2
Fecha: 02 JULIO2014
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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
Pgina: 127 de 128

ANEXO 17

CONTROL DE REACTIVO OPTOQUINA


Cdigo: SMC-MP-C1/AOC
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Fecha: 02 JULIO2014
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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BACTERIOLOGIA
Vigencia:02 JULIO 2019
Pgina: 128 de 128

CONTROL DE CAMBIOS

Fecha Tipo de cambio Aprobacin

16 de Marzo 2015 Se modifica de acuerdo a


valores crticos versin 3, se
elimina del estado el
inherente al laboratorio de
valores crticos de
bacteriologa sealado en la
pgina 52 de este manual.

1 de Noviembre de 2015 Se genera una nueva


planilla de registros de
llamados telefnicos
registro de hemocultivos y
LCR positivos (carpeta en
secretaria)