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DETERMINACIN ENZIMTICA DE TRANSFERASAS.

I. OBJETIVO:
Determinar la concentracin aspartato aminotransferasa (AST o GOT)
sanguneo por el mtodo enzimtico.
interpretar los resultados con fines diagnsticos.
II. FUNDAMENTO TEORICO:

Entre las pruebas que informan de lesin hepatocelular o citlisis destacan las
transaminasas o aminotransferasas.
stas representan enzimas del metabolismo intermedio, que catalizan la transferencia
de grupos amino del cido asprtico o alanina al cido acetoglutrico, formando cido
oxalactico y cido pirvico.
En el hgado se producen mltiples reacciones de transaminacin, pero las nicas
transaminasas con valor clnico son dos:
aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutmicooxalactica (AST o GOT)
cuya vida media es de 48 horas,
alaninoaminotransferasa o transaminasa glutmico-pirvica(ALT o GPT) con una
vida media de 18 horas.
La ALT es ms especfica de dao heptico que la AST,
debido a que la primera se localiza casi exclusivamente en el
citosol del hepatocito, mientras que la AST, adems del
citosol y mitocondria, se encuentra en el corazn, msculo
esqueltico, riones, cerebro, pncreas, pulmn, eritrocitos y
leucocitos.
La elevacin srica de transaminasas se correlaciona con el
vertido a la sangre del contenido enzimtico de los
hepatocitos afectados, aunque la gradacin de la elevacin
enzimtica puede no relacionarse con la gravedad lesional.
As, pues, se puede considerar la enfermedad heptica como
la causa ms importante del aumento de la actividad de la ALT y frecuente del aumento
de la actividad de la AST.

VALORES NORMALES DE GOT Y GPT:

suero o plasma: 12 -18 U/L

FUNDAMENTO DEL METODO:

GOT
L-aspartato + -cetoglutarato glutamato + oxalacetato.

GPT
L-alanina + -cetoglutarato glutamato + piruvato.
El oxalacetato formado es inestable y se transforma en piruvato.

Piruvato + 2,4 dinitrofenil hidracina compuesto coloreado.


Medio alcalina

III. PARTE EXPERIMENTAL:

MATERIALES: REACTIVOS: EQUIPOS:

tubos de GOT: fotocolormetro o


ensayo. Sustrato: solucin con 100 mmol de aspartato y espectrofotmetro.
bao mara. 2mn cetoglutaratoen Buffer fosfato pH 7.4
Micropipetas. Reactivo:2,4-DNFH en cido Clorhdrico 1mmol.
gradilla. Diluyente de enzimas: solucin de NaOH 4 mol/L
MUESTRA:
cronometro. Estndar: solucin de piruato de Na 2mmol.
Suero (no
GPT
necesariamente en
Sustrato:solucin de 200mmol de L-alanina y
ayunas)
2mn de cetoglutarato en buffer fosfato: pH 7.4.
Reactivo:2,4-DNFH en cido Clorhdrico 1mmol.
Diluyente de enzimas: solucin de NaOH 4 mol/L

PROCEDIMIENTO:

Extraer sangre venosa Obtener el suero, por centrifugacin. Marcar dos tubos: B (blanco)
D (desconocido), colocar:
B D
Sustrato (GOT o GPT) 250L 250L
Colocar en bao mara durante 5 minutos a 37C.
Suero ---------- 50L
Agua destilada. 50L ----------
Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos, luego aadir:
Reactivo 2,4DNFH 0.25mL 0.25mL
Mezclar por agitacin dejar 10 minutos a 37C y agregar.
Diluyente de enzimas 2.5mL 2.5mL
Mezclar por inmersin y retirar del bao maria, luego de 2 minutos leer la absorbancia en
el espectrofotometro a 505 nm, llevando a cero con el agua destilada.

El color de la
reaccin es estable
durante 30 minutos,
la absorbancia debe
ser leidadentro de
ese lapso.

IV. CONCLUSIONES:
Se determin la concentracin de GOT y GPT sanguneo por mtodo
enzimtico.