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Practica Nº4 Determinación De La Actividad De Las Enzimas Transaminasas

Propósito
Determinar la actividad de la enzima GPT en suero humano.

Marco Teórico
Los aminoácidos tienen un rol fundamental en los seres vivientes, ya que constituyen proteínas y son precursores de
algunas hormonas y otros compuestos de interés biológico (neurotransmisores, histamina, anillos porfirínicos,
nucleótidos, etc.). El organismo puede sintetizar una parte de los α-aminoácidos para el suplemento proteico y otra
parte proviene de la dieta (aminoácidos esenciales).
Las transaminaciones son reacciones de intercambio de un grupo amino entre dos grupos carbonados, siendo
reemplazado el grupo amino por una función cetona. El papel de las transaminaciones es doble:
1. Permiten realizar la interconversión de los aminoácidos.
2. Posibilitan la separación de la parte nitrogenada de los aminoácidos apartados en exceso, constituyendo el
primer paso de catabolismo de aminoácidos.
Las transaminasas son enzimas que cumplen la función de catalizar las transaminaciones para la producción de los
aminoácidos necesarios para la síntesis de proteínas en el hígado. La Aspartato Aminotransferasa o Glutámico
Oxalacético Transaminasa (AST o GOT) se localiza sobre todo en la mitocondria y está presente en otros órganos además
del hígado, como son: el miocardio, musculo esquelético, riñones, cerebro, páncreas, pulmón, leucocitos y eritrocitos.
Por el contrario la Alanino Aminotransferasa o Glutámico Pirúvico Transaminasa (ALT o GPT) se localiza
fundamentalmente a nivel citosólico o en el hepatocito, lo que explica su mayor especificidad.
Determinaciones RANDOX
Método colorimétrico (Reitman y Frankel) para la determinación de transaminasas en suero. La actividad de las
transaminasas es proporcional a la cantidad de oxaloacetato y piruvato formados en un tiempo prefijado, medidos
colorimétricamente por la acción de la 2,4-dinitrofenil-hidrazina (DNFH) en un medio alcalino (tampón fosfatos:
⁄ en GOT; ⁄ en GPT).

GOT/AST GPT/ALT
La AST/GOT, cataliza la transferencia del grupo amino del La ALT/GPT, cataliza la transferencia del grupo amino de la
aspartato al oxoglutarato, con la formación de glutamato alanina al oxoglutarato, con la formación de glutamato y
y oxaloacetato. Se mide por la monitorización de la piruvato. Se mide por la monitorización de la
concentración de oxaloacetato hidrazona formado con concentración de piruvato hidrazona compuesto de 2.4-
2,4-dinitrofenil-hidrazinina. dinitrofenil-hidrazina.

Valores Normales
GOT/ASP El valor de transaminasas disminuye:
 Hombres 8-30 ⁄  En caso de embarazo.
 Mujeres 6-25 ⁄  Insuficiencia vitamina B6.
El valor de transaminas aumenta debido a:
GPT/ALT
 Hombres 8-35 ⁄  Anomalías hepáticas: hepatitis virales, infecciosas o toxicas, cáncer de hígado
 Mujeres 6-25 ⁄ o cualquier otra enfermedad que cause destrucción de las células hepáticas.
 Otras patologías: enfermedades autoinmunes, obesidad, sobrepeso,
alcoholismo, miopatías, infarto al miocardio, parasitosis y pancreatitis.
 Esfuerzos musculares y traumatismos.
 Edad: personas mayores de 60 años pueden presentar niveles muy elevados de transaminasas.

4-DNFH (R2). Mezclar e incubar a Mezclar e incubar a 37ºC por 30min. 2.a-dinitrofenilhidrazina hemolizacion.Diagrama de Flujo Extraer 2-3mL de sangre venosa y colocar en un tubo con heparina. . 2. Añadir 5mL de Añadir 5mL de NaOH (R3). 20-25ºC por 20 min. Mezclar y leer la Mezclar y leer la absorbancia de la absorbancia de la muestra a 546nm frente muestra a 546nm frente al reactivo blanco al al reactivo blanco al cabo de 5min.4-DNFH (R2). Mezclar y reposar a Mezclar y reposar a 20-25ºC por 20 min. Tampon GOT Tampon fosfato Tampon fosfato L-alanina L-aspartato α-oxoglutarato Obtener el plasma α-oxoglutarato sanguineo sin R2. Centrifguar por 15 minutos a 2000rpm. NaOH Kit ALT/GPT Kit AST/GOT Blanco Muestra Blanco Muestra Añadir 100μL de agua Añadir 100μL de agua Añadir 100μL de muestra y Añadir 100μL de muestra y destilada y 500μL del destilada y 500μL del 500μL del tampon (R1). NaOH (R3). Añadir 500μL Añadir 500μL 2. R1. tampon (R1).a-dinitrofenilhidrazina R3. NaOH R3. cabo de 5min. 500μL del tampon (R1). tampon (R1). Con un ayuno no menor a 8 hrs y no mayor a 12hrs. 37ºC por 30min. R2. Tampon R1. 2.

35 U/mL 3.105 ALT U/L AST U/L Lectura absorbancia AST: 0. mientras que el valor de AST lo rebasa. La interpretación de los niveles altos de TGO e TGP depende del cuadro clínico en general y así lo mejor es que esto sea determinado por médicos experimentados en hepatología. Sirve entonces como un indicador bastante específico del estado del hígado. ¿Cuál es el fundamento de la reacción? La enzima ALT cataliza la transferencia de un grupo amino desde el aminoácido L-alanina hacia el α-cetoglutarato resultando de esta reacción la formación de piruvato y L-glutamato. La velocidad resultante de la disminución de la absorbancia a 340 nm es directamente proporcional a la actividad de la ALT. ¿Dónde se encuentran la TGP en el organismo humano? TGP (ALT o SGPT o GPT) es encontrado en su mayor parte en el hígado. ¿Qué significado tiene una elevación en la concentración de la TGP? TGP y TGO son indicadores sensibles de daño hepático en diferentes tipos de enfermedades. 5. Este no es producido exclusivamente por el hígado.33 U/L Valor AST: 17. pero es donde se encuentra más concentrado. una enfermedad hepática establecida.025 0. La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la reducción del piruvato y la oxidación simultánea de NADH a NAD+. Así. dependen del Kit a usar. La transaminasa glutámica pirúvica (TGP) del suero. también puede ser debido a un error de toma de tiempos en las incubaciones.025 4 0.020 7 0. 4.Disposición de Residuos Inactivar con hipoclorito de sodio y desechar en la tarja.075 12 0. Conclusiones El procedimiento a seguir para la determinación de actividad de transaminasas. así como los valores normales. como las concentraciones y los cálculos pueden variar. Los niveles de estas enzimas no miden a extensión de daño en el hígado o muestran un pronóstico de la marcha futura.100 17 0. 0. Cuestionario 1. Más debe ser enfatizado que tener niveles más altos que lo normal de estas enzimas no indica. cabe destacar que la paciente no se encontraba en ayuno.040 13 Sexo: Femenino Edad: 20 años 0. Es liberado en la circulación sanguínea como resultado de daño hepático. los niveles de TGO y TGP no pueden ser usados para determinar el grado de daño hepático o indicar el futuro. En . para evitar algún error en la determinación. el valor de ALT se encuentra dentro del límite indicado. Escriba la reacción de la transaminasa TGP 2. Aunque la mayoría de los Kits manejan una técnica colorimétrica. ¿Cuáles son los valores de referencia de la TGP? Los valores normales de la TGP: 5 . Aunque el alto valor de AST puede ser causado por alguna patología. llamada alanina aminotransferasa (ALT) es una de las enzimas que catalizan el intercambio de grupos amino y oxo entre los α-aminoácidos y los α-oxo ácidos. por lo cual el valor obtenido de AST pudo ser afectado. Ellas pueden indicar algún problema o no. En este caso.85* U/L Valores Normales en suero: hasta 12U/L para ALT y AST. necesariamente.030 10 Paciente: -. los reactivos.050 8 0. por lo cual es de suma importancia indicar el Kit que se usó y manejar los valores de referencia y normales que vienen indicados.050 16 Valor ALT: 8. Resultados Valores de Referencia Kit RANDOX Lectura absorbancia ALT: 0.

¿Qué categorías de aminoácidos son esenciales en los humanos y cuáles no lo son? Los aminoácidos esenciales (histidina. metionina.  Los aminoácidos no esenciales pueden ser sintetizados en el organismo.  La arginina y cantidades suplementarias de histidina son requeridas durante periodos de crecimiento. ácido glutámico . melanina.  La cisteína deriva su azufre del aminoácido esencial metionina. Haga una lista de los aminoácidos esenciales para un adulto fenilcetonúrico y compárelos con los requerimientos de un adulto normal La fenilcetonuria impide al organismo procesar adecuadamente la fenilalanina. En la hepatitis C solo es observada una pequeña elevación en las TGO y TGP. ¿Cuántos α-aminoácidos participan en el Ciclo de la Urea? 3: Glutamina. siendo que algunos de estos pacientes pueden haber avanzado para una enfermedad crónica con fibrosis o cirrosis. Alanina. uno de los aminoácidos esenciales que se encuentran en los alimentos que contienen proteínas: carne. 3.pacientes con hepatitis A aguda. nicotinamida. El esqueleto carbonado de 10 de los aminoácidos no esenciales puede ser derivado de la glucosa. aves. fenilalanina.  La tirosina se produce por hidroxilación del aminoácido esencial fenilalanina. treonina. huevos. pescado. Ejercicios de integración 1. En general. creatina. triptófano y valina) son requeridos en la dieta. las TGO y TGP son muy altos (algunas veces alcanzan millares de unidades). tales como las bases púricas y pirimídicas.  Los aminoácidos son utilizados para la síntesis de muchos otros compuestos nitrogenados. no quedando ningún daño. hemo. y esfíngosina. epinefrina y otras aminas nitrogenadas. lisina. Haga un diagrama en el que exponga la participación de la Glutamato deshidrogenasa y la Glutamino sintetasa para producir glutamina a partir de amoniaco y α-cetoglutarato 2. pero la mayoría de estos pacientes con la hepatitis A recupera completamente el hígado. Adulto Normal Adulto Fenilcetonúrico Leucina Leucina Isoleucina Isoleucina Valina Valina Lisina Lisina Treonina Treonina Metionina Metionina Fenilalanina -- Triptófano Triptófano 4. tiroxina. leucina. leche y productos lácteos. isoleucina.

es/ficheros/archivos/1130010C.com/2250S. La síntesis de proteínas se realiza en los ribosomas situados en el citoplasma celular. Síntesis.ALT o TGP” http://hepato. Utilización” http://docencia.php Consultado 23/09/2014  “Procedimiento De ALT (TGP) Para La Determinación Cuantitativa De Alanina Aminotransferasa En Suero UV” http://www. Referencias  “Catabolismo De Los Aminoácidos: Transaminaciones” file:///C:Users/Kiddo/Downloads/16589242.linear.TP%20N%C2%BA%202%”=Metabolismo%20de%20Prote%C3%ADna s%20y%20AAs%20-%20Enzimas%20Transaminasas. 5.izt.pdf Consultado 09/09/2014  “Transaminasas: GOT y GPT” http://salud.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/4_Metabolismo/3-Aminoacidos/1- MetabolismodeAminoacidos. Con base en la respuesta anterior ¿Cuántos pueden usarse para la síntesis de proteínas? Se conoce como síntesis de proteínas al proceso por el cual se componen nuevas proteínas a partir de los veinte aminoácidos esenciales.es/sintesis-proteinas Consultado 23/09/2014 .PDF Consultado 09/09/2014  “Las Transaminasas AST o TGO . En este proceso. se transcribe el ADN en ARN.pdf Consultado 09/09/2014  “El Paciente Con Transaminasas Altas” http://www3.es/archivos_pdf/download/panda/modulo5/REVI5.kioskea.uam.pdf Consultado 23/09/2014  “Las Proteínas” http://proteinas.htm Consultado 23/09/2014  “Metabolismo De Aminoácidos: Degradación.com/p_transaminases/011_transamin_esp.LINEAR CHEMICALS” http://www.org. Entonces los 3 pueden usarse.net/faq/2161-transsaminasas-got-y-gpt Consultado 09/09/2014  “GOT/GPT Color.caes.cimascientific.