BIOEQUIVALENCIA

Universidad Austral de Chile
Facultad de Ciencias
Escuela de Qumica y Farmacia
PROFESOR PATROCINANTE: Daniel Prez O.

INSTITUCIN: Laboratorio Bag de Chile S.A.
PROFESOR CO-PATROCINANTE: Alejandro Jerez M.

INSTITUTO: Farmacia
FACULTAD: Ciencias
DESARROLLO DE UN TRABAJO IN VITRO PARA BIOEXENCIN DE UN ESTUDIO

DE BIOEQUIVALENCIA PARA ESTABLECER EQUIVALENCIA TERAPUTICA
ENTRE DOS FORMULACIONES COMPRIMIDOS QUE CONTIENEN
CICLOBENZAPRINA CLORHIDRATO 10 mg
Internado presentado como parte

de los requisitos para optar al
Ttulo de Qumico Farmacutico
CRISTOPHER AARON HERNNDEZ BUSTOS
VALDIVIA - CHILE
2010
2
A mis padres y hermana, por todo el apoyo brindado en cada momento de mi vida
3
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Laboratorio Bag de Chile S.A. por otorgarme la oportunidad de
realizar mi internado en la unidad de Desarrollo y Biofarmacia. En especial, agradezco a
los Qumicos Farmacuticos, Analistas y Auxiliar de Servicio de esta unidad, que
amablemente me otorgaron su disposicin y cooperacin.
A cada uno de mis profesores de la Universidad Austral de Chile, que me guiaron y
acompaaron en mi proceso formativo.
Finalmente, agradecer a todas las personas e instituciones que han sido parte en
mi desarrollo y crecimiento como persona.

4
NDICE
Pg.
1. Resumen............. 15
Summary........................................................................................................... 16
2. Introduccin............ 17
3. Marco Terico......... 24
3.1 Biodisponibilidad.......... 24
3.2 Biofarmacia........... 26
3.3 Bioequivalencia............ 26
3.4 Estudio de Bioequivalencia in vitro........... 29
3.5 Bioexencin.......... 31
3.6 Sistema de Clasificacin Biofarmacutico.......... 32
3.7 Buenas Prcticas de Manufactura y Control de Calidad.......... 45
3.8 Validacin......... 47
4. Problemtica a abordar......... 48
5. Objetivo General................ 48
6. Objetivos Especficos............ 48
7. Materiales............ 50
8. Metodologa............ 51
9. Resultados.......... 71
10. Discusin........... 135
11. Conclusiones.................................. 137
12. Proyeccin................... 138
13. Referencias Bibliogrficas................. 139

5
NDICE DE FIGURAS
Pg.
Fig. 1. Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (SCB)........................................ 32
Fig. 2. Frmula para obtener el factor de similitud (f2)........................................... 37
Fig. 3. Medicin del alineamiento de los ejes......................................................... 40
Fig. 4. Estructura Ciclobenzaprina Clorhidrato....................................................... 52
Fig. 5. Diseo experimental para 7 variables en un estudio de Robustez............. 60
Fig. 6. Parmetros evaluados en la Robustez....................................................... 61
Fig. 7. Experimentos y sus parmetros correspondientes..................................... 62
Fig. 8. Criterios de aceptacin para la Robustez................................................... 63
Fig. 9. Aparatos de disolucin utilizados................................................................ 68
Fig. 10. Condiciones para las pruebas de disolucin............................................. 69
Fig. 11. Descripcin de los productos en estudio.................................................. 70
Fig. 12. Tabla con resumen de resultados de Selectividad del medio y matriz..... 71
6
Fig. 13. Resumen de resultados en relacin al factor de respuesta...................... 71
Fig. 14. Resultados de Linealidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2.......................... 72
Fig. 15. Resultados de Linealidad para Buffer Ftalato, pH 3,0............................... 72
Fig. 16. Resultados de Linealidad para Buffer Acetato, pH 4,5............................ 73
Fig. 17. Resultados de Linealidad para Buffer Fosfato, pH 6,8.............................. 73
Fig. 18. Resultados de Exactitud y Precisin para el medio HCl 0,1 N, pH 1,2..... 74
Fig. 19. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Ftalato, pH 3,0.......... 75
Fig. 20. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Acetato, pH 4,5......... 76
Fig. 21. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Fosfato, pH 6,8......... 77
Fig. 22. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Acetato pH 4,5

(Lote 1)................................................................................................................... 78
Fig. 23. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Fosfato pH 6,8

(Lote 2)................................................................................................................... 79
Fig. 24. Resultados Estabilidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2.............................. 80
Fig. 25. Resultados Estabilidad para Buffer Ftalato, pH 3,0.................................. 81
Fig. 26. Resultados Estabilidad para Buffer Acetato, pH 4,5................................. 82

7
Fig. 27. Resultados Estabilidad para Buffer Fosfato, pH 6,8................................. 83
Fig. 28. Resultados Robustez para medio HCl 0,1 N, pH 1,2 (muestras con
matriz).................................................................................................................... 84
Fig. 29. Resultados Robustez para medio HCl 0,1 N, pH 1,2 (muestras sin
matriz).................................................................................................................... 84
Fig. 30. Resultados Robustez para Buffer Ftalato, pH 3,0 (muestras sin
matriz).................................................................................................................... 85
Fig. 31. Resultados Robustez para Buffer Acetato, pH 4,5 (muestras con
matriz).................................................................................................................... 86
Fig. 32. Resultados Robustez para Buffer Acetato, pH 4,5 (muestras sin
matriz).................................................................................................................... 86
Fig. 33. Resultados Robustez para Buffer Fosfato, pH 6,8 (muestras con
matriz).................................................................................................................... 87
Fig. 34. Resultados Robustez para Buffer Fosfato, pH 6,8 (muestras sin
matriz).................................................................................................................... 87
Fig. 35. Resumen resultados Influencia del Filtro para todos los
medios.................................................................................................................... 88
Fig. 36. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato en medio HCl 0,1 N, pH 1,2.......... 89
Fig. 37. Cromatograma del producto en estudio, que contiene Ciclobenzaprina

Clorhidrato, en medio HCl 0,1 N, pH 1,2................................................................ 89
Fig. 38. Cromatograma para el blanco medio HCl 0,1 N, pH 1,2........................... 90
Fig. 39. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, medio HCl 0,1 N,
pH 1,2..................................................................................................................... 90
Fig. 40. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Ftalato pH 3,0................... 91

8
Fig. 41. Cromatograma para el blanco, Buffer Ftalato pH 3,0................................ 91
Fig. 42. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato Buffer Acetato pH 4,5................... 92

Clorhidrato, Buffer Acetato pH 4,5......................................................................... 92
Fig. 44. Cromatograma para el blanco, Buffer Acetato pH 4,5.............................. 93
Fig. 45. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Acetato pH

4,5.......................................................................................................................... 93
Fig. 46. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Fosfato pH 6,8.................. 94

Clorhidrato, Buffer Fosfato pH 6,8.......................................................................... 94
Fig. 48. Cromatograma para el blanco, Buffer Fosfato pH 6,8............................... 95
Fig. 49. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Fosfato pH

6,8.......................................................................................................................... 95
Fig. 50. Resultados de Solubilidad medio HCl 0,1 N, pH 1,2................................. 96
Fig. 51. Resultados de Solubilidad Buffer Ftalato, pH 3,0...................................... 97
Fig. 52. Resultados de Solubilidad Buffer Acetato, pH 4,5.................................... 98
Fig. 53. Resultados de Solubilidad Buffer Fosfato pH 6,8...................................... 99
Fig. 54. Representacin grfica de los resultados de Solubilidad de

Ciclobenzaprina Clorhidrato en la forma de perfil de solubilidad versus pH.......... 99
9
Fig. 55. Resultados de Permeabilidad segn Software ChembiowDraw Ultra...... 100
Fig. 56. Resultados permeabilidad a travs de la barrera hematoenceflica en

clulas MDCK tipo II............................................................................................... 100
Fig. 57. Tabla Clasificaciones de Permeabilidad para frmacos........................... 101
Fig. 58. Correlacin de permeabilidades jejunales humanas con

permeabilidades determinadas en clulas MDCK tipo II........................................ 102
Fig. 59. Grfico de correlacin de permeabilidades jejunales humanas con

permeabilidades determinadas en clulas MDCK tipo II........................................ 102
Fig. 60. Correlacin de Clulas MDCK con Clulas Caco-2.................................. 103
Fig. 61. Grfico correlacin clulas MDCK con clulas Caco-2, Apical
Basolateral............................................................................................................. 103
Fig. 62. Grfico correlacin clulas MDCK con clulas Caco-2, Basolateral-
Apical...................................................................................................................... 103
Fig. 63. Perfil liberacin-disolucin producto en estudio (Ciclobenzaprina HCl)

Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)........................................................................... 104
Fig. 64. Clculo de los valores corregidos para las pruebas de disolucin
realizadas en el aparato de disolucin modelo Vision Elite, Hanson Research..... 105
Fig. 65. Clculo de los valores corregidos para las pruebas de disolucin
realizadas en los aparatos de disolucin modelo SR8 Plus, Hanson Research.... 105
Fig. 66. Grfico perfil liberacin-disolucin producto en estudio (Ciclobenzaprina

HCl) Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)................................................................... 106
Fig. 67. Grfico perfil liberacin-disolucin promedio, producto en estudio

(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)....................................... 106

10

Fig. 70. Grfico perfil liberacin-disolucin promedio, producto en estudio Lote

2, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)................................................................................... 108



3, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)................................................................................... 110
Fig. 74. Perfil liberacin-disolucin producto de referencia (Ciclobenzaprina

Fig. 75. Grfico perfil liberacin-disolucin producto de referencia

(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)....................................... 112
Fig. 76. Grfico perfil liberacin-disolucin promedio, producto de referencia

Fig. 77. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para medio HCl 0,1
N, pH 1,2................................................................................................................ 113

Lote 1, Buffer Acetato (pH 4,5)............................................................................... 114

HCl) Lote 1, Buffer Acetato (pH 4,5)...................................................................... 115

1, Buffer Acetato (pH 4,5)....................................................................................... 115


11






(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, Buffer Acetato (pH 4,5).......................................... 121

Fig. 90. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para Buffer pH 4,5..... 122

Lote 1, Buffer Fosfato (pH 6,8)............................................................................... 123

HCl) Lote 1, Buffer Fosfato (pH 6,8)....................................................................... 124

1, Buffer Fosfato (pH 6,8)....................................................................................... 124



12





(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, Buffer Fosfato (pH 6,8)........................................... 130

Fig. 103. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para Buffer pH 6,8... 131
Fig. 104. Tabla que entrega el resumen final de los resultados del estudio de
liberacin-disolucin por lote de producto.............................................................. 132
Fig. 105. Grfico que entrega el promedio de los resultados para el estudio de
liberacin-disolucin (medio HCl 0,1 N, pH 1,2).................................................... 133
liberacin-disolucin (Buffer Acetato, pH 4,5)........................................................ 133
liberacin-disolucin (Buffer Fosfato, pH 6,8)........................................................ 134
13
NDICE DE ABREVIATURAS
AUC: rea bajo la curva.
Caco-2: Clulas de carcinoma de colon humano.
C.mx.: Concentracin mxima.
Cp: Comprimido.
C.V: Coeficiente de variacin.
EMEA: Agencia Europea de Medicamentos.
FDA: Administracin Federal de Alimentos y Drogas de los Estados Unidos.
FFSO-LI: Formas Farmacuticas Slidas de Liberacin Inmediata.
FIP: Federacin Farmacutica Internacional.
GMP: Buenas Prcticas de Manufactura.
HPLC: Cromatgrafo Lquido de Alta Performance.
ICH: Conferencia Internacional sobre Armonizacin de Requisitos Tcnicos para

el Registro de Medicamentos para Uso en Humanos.
ISP: Instituto de Salud Pblica.
IVIVC: Correlacin in vivo-in vitro.
MAO: Monoamino oxidasa.
MAX: Mximo.
MDCK: Clulas de rin de canino Madin-Darby.
MIN: Mnimo.
OPS: Organizacin Panamericana de la Salud.
PotSt: Potencia del estndar.

14
PSt: Peso del estndar.
Res. Ex.: Resolucin Exenta.
RSD: Desviacin estndar relativa.
SCB: Sistema de Clasificacin Biofarmacutico.
SD: Desviacin estndar.
USP: Farmacopea de los Estados Unidos.
WHO: Organizacin Mundial de la Salud.
X: Promedio.
X Recup: Promedio de recuperacin.
% Recup: Porcentaje de Recuperacin.
[St]: Concentracin del estndar.

15
1. RESUMEN
A travs de un estudio in vitro de Bioequivalencia para Bioexencin, se puede
demostrar la intercambiabilidad entre Formas Farmacuticas Slidas Orales de
Liberacin Inmediata (FFSO-LI), cumpliendo con los criterios normativos. El Sistema de
Clasificacin Biofarmacutico (SCB) es un marco cientfico que clasifica los principios
activos sobre la base de su solubilidad y permeabilidad; estos parmetros, ms la
cintica de disolucin del producto farmacutico, son los factores que gobiernan la
velocidad y la cuanta de la absorcin del frmaco o Biodisponibilidad. Por lo tanto,
basndose en la evidencia se procedi a demostrar la Equivalencia Teraputica entre el
producto en estudio y el de referencia, que corresponden a comprimidos de 10 mg de
Ciclobenzaprina Clorhidrato, a travs de la caracterizacin del principio activo y la
comparacin de las cinticas entre los productos. El estudio de Equivalencia
Teraputica se bas en las recomendaciones entregadas por la Gua Tcnica G-BIOF
02 de la seccin de Biofarmacia del Instituto de Salud Pblica (ISP). La validacin
analtica permiti dar validez al desarrollo de los anlisis de solubilidad del activo y de
liberacin-disolucin de los productos de referencia y de estudio, lo cual posibilit
concluir la Equivalencia Teraputica de los productos.
Con estos estudios, Laboratorio Bag de Chile S.A. asegura la calidad, seguridad
y eficacia en sus productos y se mantiene en la vanguardia de la investigacin
farmacutica.
16
1. SUMMARY
Through an in vitro study of Bioequivalence for Biowaiver, the interchangeability
between Solid Pharmaceutical Oral Forms of Immediate Release can be demonstrated,
fullfilling the regulatory criteria. The Biopharmaceutics Classification System (BCS) is a
scientific framework that classifies subtances drug on the basis of its solubility and
permeability; these parameters, plus the kinetics of dissolution of the pharmaceutical
product, are the factors that govern the rate and extent of the drug absorption or
Bioavailability. Therefore, based on the evidence we proceeded to demonstrate the
Therapeutic Equivalence between the product in study and the one in reference, which
correspond to tablets of 10 mg of Ciclobenzaprine Hydrochloride, through the
characterization of the subtance drug and the comparison of the kinetics between
products. The study of Therapeutic Equivalence was based on the recommendations
delivered by the Technical Guide G-BIOF 02 of the section of Biopharmacy of Public
Health Institute (PHI). The analytical validation helped give validity to the development of
the analysis of solubility of the drug substance and liberation-dissolution of the reference
products and study, which enabled to conclude the Therapeutic Equivalence of
products.
With these studies, Laboratory Bag of Chile S.A. assures the quality, safety and
efficiency in its products and keeps in the forefront of the pharmaceutical investigation.
17
2. INTRODUCCIN
Los medicamentos en Chile juegan un rol muy importante en la salud de las
personas. En nuestro pas, se encuentran disponibles un gran nmero de
medicamentos que son distribuidos ampliamente, de manera que estn disponibles
para toda la poblacin. Es por esto, que los medicamentos deben cumplir con
estndares de calidad, seguridad, eficacia y equivalencia teraputica, por parte del
producto farmacutico similar, para poder asegurar as la intercambiabilidad. En
consecuencia, asegurar la calidad es uno de los puntos esenciales al momento de
hablar de medicamentos, por lo que uno de los principales requisitos es que los
productos farmacuticos sean elaborados bajo Buenas Prcticas de Manufactura
(tambin conocidas por sus siglas en ingls como GMP). Una manera de cumplir con
este objetivo es a travs de la Validacin, que asegura de manera consistente que los
productos cumplan con sus especificaciones y que se conduzca a los resultados
esperados.
El establecimiento de estos requisitos tcnicos deben ser previos al desarrollo de
un estudio de Bioequivalencia, ya que no tiene validez demostrarlo si previamente no se
asegura la reproducibilidad lote a lote (FDA, 2003).
Internacionalmente se reconocen una serie de mtodos para establecer o
demostrar Equivalencia Teraputica entre productos farmacuticos (ISP, 2007). Uno de
los ms utilizados son los estudios in vitro para optar a bioexenciones de un estudio in
vivo. La norma vigente en Chile establece que dos productos son Equivalentes
Teraputicos, si son Equivalentes Farmacuticos, rotulados y manufacturados bajo las
normas GMP y si han demostrado a travs de estudios apropiados, que sus efectos
18
respecto a eficacia y seguridad son los mismos, luego de ser administrados en la misma
dosis molar (Res. Ex. N 727, 2005). Debido a esto, se establece que no tienen validez
los estudios de Bioequivalencia de productos farmacuticos fabricados sin cumplimiento
de las normas GMP, empleando procesos de fabricacin no validados adecuadamente.
El desarrollo de un producto innovador demora 12 a 15 aos, de cada 5.000
molculas evaluadas tan slo una llega al mercado y cada proyecto cuesta 800 millones
de dlares, de los cuales el 94% de ellos proviene de la industria. El producto genrico,
en cambio, es la formulacin de un producto farmacutico distinto del innovador,
aunque con igual principio activo, pero con un precio inferior, lo que es la principal
justificacin de su existencia (Bavestrello, 2003). Una vez caducadas las patentes, las
autoridades sanitarias quedan en libertad de permitir el registro de similares o copias
del original y aprobar su salida al mercado. Esta aprobacin est concebida para bajar
los costos de los tratamientos debido a que en la mayora de los casos, el producto
original tiene precios mayores que los medicamentos similares (Saavedra et al, 2006).
Esta es la situacin que actualmente se est viviendo en el mundo y nuestro pas no es
ajeno a ella.
La Organizacin Panamericana de la Salud (OPS) compar los requisitos
actuales para estudios de Bioequivalencia entre los Estados Unidos, Canad y ocho
pases latinoamericanos con informacin disponible hasta Marzo de 2004: Argentina,
Brasil, Chile, Colombia, Costa Rica, Cuba, Mxico y Venezuela. La amplia divergencia
observada entre los pases en sus requerimientos para estudios de Bioequivalencia,
con la excepcin de Estados Unidos y Canad, los cuales son bastante similares en sus
requerimientos, indica la necesidad de continuar trabajando hacia la armonizacin.

19
Chile est en el proceso de establecer requerimientos para todos los ingredientes
activos que requieren estudios de Bioequivalencia dndole prioridad a los frmacos que
tienen ms alto riesgo de salud para la poblacin (OPS, 2008).
Las agencias de aprobacin de medicamentos ms desarrolladas del mundo,
Administracin Federal de Alimentos (FDA), Agencia Europea de Medicamentos
(EMEA) y la Organizacin Mundial de la Salud (WHO), han emitido numerosas
declaraciones y guas de orientacin para la aprobacin de la intercambiabilidad
teraputica, tanto para sus propios pases como para los pases con menor desarrollo
farmacolgico (Saavedra et al, 2006). Nuestro pas, desde el ao 2004, ha ido
desarrollando modificaciones a normas, programas de capacitacin y guas tcnicas
tendientes a avanzar en el tema de equivalencia teraputica (ISP, 2007).
El Ministerio de Salud de Chile, a travs del Instituto de Salud Pblica (ISP), ha
elaborado un trabajo conjunto para poder introducir modificaciones al Reglamento del
Sistema Nacional de Control de Productos Farmacuticos, tendientes a avanzar en el
tema de Equivalencia Teraputica, las que fueron publicadas en el Diario Oficial en
febrero de 2005. Paralelamente, la Seccin de Biofarmacia del Departamento de
Control Nacional del ISP, elabor la Norma que Define Criterios para Establecer
Equivalencia Teraputica a Productos Farmacuticos en Chile, la cual fue editada por
el Ministerio de Salud y publicada en el diario oficial junto con las Listas de principios
activos contenidos en productos farmacuticos, a los cuales se les deber exigir
estudios de Bioequivalencia in vivo o estudios in vitro (ISP, 2007).
Con el propsito de implementar la exigencia reguladora de la Equivalencia
Teraputica en Chile, durante el ao 2007 la Seccin de Biofarmacia del ISP, elabor

20
toda la documentacin tcnica indispensable con el objetivo de realizar los estudios
necesarios para demostrar intercambiabilidad entre productos farmacuticos. Dentro de
los documentos incluidos se encuentra la Gua Tcnica G-BIOF 02 denominada
Bioexencin de los estudios de Biodisponibilidad/Bioequivalencia para establecer
Equivalencia Teraputica de Formas Farmacuticas Slidas Orales, que entrega
recomendaciones para las solicitudes de exencin de los estudios de Biodisponibilidad
y/o Bioequivalencia in vivo para formas farmacuticas slidas orales de liberacin
inmediata (FFSO-LI) en base al Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (SCB) y para
formulaciones slidas orales proporcionalmente similares a otro producto cuya
Equivalencia Teraputica haya sido demostrada mediante un estudio in vivo (ISP,
2007).
En Chile, los estudios de Bioequivalencia deben hacerse en centros autorizados
por el ISP. Existen dos tipos de centros autorizados: los centros para estudios de
Bioequivalencia en voluntarios sanos (estudios in vivo), y centros para estudios
biofarmacuticos con fines de Bioexencin de los estudios de Bioequivalencia in vivo
(estudios in vitro). Hasta el momento, Chile cuenta con nueve centros de estudios
biofarmacuticos autorizados y veintisiete centros para estudios de Bioequivalencia in
vivo, uno en Chile, dos en Argentina y veinticuatro en Brasil (ISP, 2010).
Cabe destacar que existen principios activos definidos por el Ministerio de Salud
para los cuales es obligatorio la demostracin de Bioequivalencia por medio de estudios
in vivo o in vitro, pero tambin existe la alternativa que laboratorios presenten protocolos
de estudios de Bioequivalencia de productos que no aparezcan en los listados oficiales
o presenten informes de resultados de estudios realizados fuera de Chile, siempre y

21
cuando stos hayan sido previamente autorizados por agencias regulatorias
internacionales de prestigio, que menciona la Norma Chilena de Bioequivalencia (ISP,
2010).
El SCB simplifica los estudios de Bioequivalencia ya que se realizan pruebas in
vitro, sin requerir estudios en humanos por lo que son de menor costo y de mayor
rapidez. Aunque los estudios de Bioequivalencia in vivo han sido el estndar aceptado
internacionalmente para demostrar la seguridad y eficacia de los medicamentos,
actualmente se estn aceptando los estudios de Bioequivalencia in vitro y cada vez
toman ms fuerza para demostrar la intercambiabilidad de aquellos medicamentos que
pertenecen a la Clase I segn el SCB, es decir, que presenten alta solubilidad y alta
permeabilidad (Medina, 2009). As mismo, recientemente, la WHO extendi la
Bioexencin a los productos formulados con principios activos de la Clase 2 y 3, los
cuales deben cumplir con ciertos criterios durante la evaluacin (ISP, 2007).
A partir de estos antecedentes, Laboratorio Bag de Chile S.A. ha querido estar
a la vanguardia de la investigacin, el cumplimiento de las normativas y de las polticas
pblicas de salud, incorporando a sus investigaciones, la realizacin de estudios de
Bioequivalencia in vitro, autorizacin que fue otorgada el ao 2008 por el ISP a travs
de la Resolucin N 7449, que otorga la certificacin como Laboratorio autorizado para
la realizacin de estudios in vitro para optar a Bioexencin. Laboratorio Bag de Chile
S.A., en un permanente inters por estar a la vanguardia farmacutica, considera un
deber garantizar la calidad, seguridad y eficacia de sus productos farmacuticos
comercializados, por lo que han implementado todas las herramientas necesarias para
ratificar que sus productos son alternativas viables que mantienen el mismo nivel de
22
calidad requerido, lo que pretenden demostrar a travs de estudios de Bioequivalencia
in vitro.
23
Historia del Laboratorio
Laboratorios Bag, empresa lder de la Organizacin Bag, fue fundado en 1934
por Don Sebastin Bag, en Argentina. Desde 1960, Laboratorios Bag S.A. comienza
a afianzarse como una de las empresas lderes argentinas con una fuerte presencia en
Latinoamrica, lo que le permite extender su exitosa gestin a travs de sus 18 filiales
en pases de la regin. A mediados de los aos ochenta, la Organizacin Bag se
consolida constituyendo un conjunto de empresas que le permite no slo llevar los
beneficios de sus productos a otras naciones, sino favorecer el desarrollo cientfico de
la regin a travs del intercambio profesional y la apertura de lazos de comunicacin y
cooperacin cientfica y tecnolgica.
Laboratorio Bag S.A. de Chile, ocupa una posicin de liderazgo dentro del
mercado farmacutico chileno, tanto en unidades como en valores, ubicndose entre
las cinco empresas ms importantes del sector farmacutico chileno. La Planta
Farmacutica est certificada por el Instituto de Salud Pblica de Chile bajo las estrictas
normas GMP, conforme a las prcticas de manufactura recomendadas por la
Organizacin Mundial de la Salud. El laboratorio de Control de Calidad, est
reconocido y autorizado tambin por el ISP, como Laboratorio de Control Externo de
Calidad, desde el ao 1994. Laboratorio Bag S.A. de Chile adems de producir
medicamentos para el mercado nacional, tambin exporta a las filiales de la Compaa
en Bolivia, Ecuador, Paraguay y Per.

24
3. MARCO TERICO
3.1. Biodisponibilidad
La Biodisponibilidad se refiere a la velocidad y cantidad en que un frmaco es
absorbido a partir de una forma farmacutica para alcanzar la circulacin sistmica.
Existen una serie de factores que van a influir directa o indirectamente en la
Biodisponibilidad de un principio activo (Aulton, 2004). En primer lugar, tenemos el tipo
de forma farmacutica y los excipientes utilizados, que deben entregar el principio
activo en forma eficiente, disolverse en el medio biolgico en el que se encuentra y
absorberse para luego llegar a la circulacin sistmica. El segundo factor que tambin
est relacionado es el mecanismo de absorcin, que se refiere a como el principio
activo es transportado desde el lumen hacia la circulacin sistmica a travs de un
transporte activo, difusin simple, difusin facilitada, filtracin, pinocitosis o transporte
por pares inicos. El tercer factor son las caractersticas propias del sistema
gastrointestinal y el tiempo de trnsito que vara desde la ingesta de la forma
farmacutica hasta su llegada al coln. El cuarto factor son las caractersticas
fisicoqumicas del frmaco que afectan la absorcin, como el coeficiente de particin,
constantes de disociacin, pH, pKa, etc. Finalmente, tenemos el quinto factor que
corresponde a la eliminacin presistmica a nivel intestinal y heptica que est dado por
el sistema enzimtico del citocromo P450 o transportadores de flujo presentes en el
intestino delgado, que pueden disminuir la biodisponibilidad de ciertos frmacos
impidiendo en un cierto grado la absorcin del principio activo (Aulton, 2004).

25
Por lo tanto, para que un principio activo se pueda absorber, debe liberarse
desde la forma farmacutica, disolverse en condiciones fisiolgicas y ser permeable a
travs de la barrera gastrointestinal, para posteriormente alcanzar la circulacin
sistmica. La velocidad de disolucin va a depender de factores relacionados con el
medio de disolucin como el pH, temperatura, viscosidad, tensin superficial e
intensidad de la agitacin. Otro factor asociado es con respecto al slido que se va a
disolver, (su naturaleza qumica, el tamao de partcula y el polimorfismo). Por ltimo,
tenemos a los factores que dependen de la forma farmacutica como la va de
administracin y los excipientes utilizados (Aulton, 2004).
La Biodisponibilidad absoluta de un medicamento es una medida de la eficacia
de la va de administracin. La va intravenosa es la referencia absoluta ya que cuando
se inyecta un frmaco por esta va, ingresa a la circulacin sistmica el 100% de la
dosis. Por lo tanto, para evaluar la Biodisponibilidad absoluta se debe administrar el
mismo principio activo primero en una forma farmacutica de uso intravenoso y luego
en otra forma farmacutica preparada para administrar por la va que se quiere estudiar
(Estvez, 2000). En cambio, la Biodisponibilidad relativa es aquella en la que se
compara la Biodisponibilidad de un frmaco administrado en la forma farmacutica de
prueba con la del mismo frmaco administrado mediante la forma farmacutica
convencional (Aulton, 2004). Por lo tanto, la Biodisponibilidad relativa es una medida de
la eficacia de la absorcin de un mismo principio activo desde dos formas farmacuticas
similares (Estvez, 2000).

26
3.2. Biofarmacia
La Biofarmacia puede definirse como el estudio de la influencia de las
propiedades fisicoqumicas de los frmacos, su presentacin y sus vas de
administracin sobre la velocidad y magnitud de su absorcin. Los factores que influyen
sobre la liberacin de un frmaco de su forma farmacutica, su disolucin en los
lquidos fisiolgicos, su estabilidad en esos lquidos, su permeabilidad a travs de las
membranas biolgicas ms importantes y su metabolismo presistmico, condicionarn
la velocidad y magnitud de la absorcin del frmaco (Aulton, 2004).
En los ltimos aos, las propiedades biofarmacuticas han sido utilizadas como
una herramienta fundamental en la demostracin de intercambiabilidad entre productos
farmacuticos, lo que ha permitido comprobar si productos farmacolgicos
qumicamente equivalentes, pero fabricados por compaas distintas, son
teraputicamente equivalentes. Esto se ha logrado a travs de una extensin del
concepto de biodisponibilidad relativa, que consiste bsicamente en comparar la
cantidad total de un frmaco que llega sin cambios a la circulacin sistmica a partir de
una forma farmacutica de prueba y de otra convencional, que contengan dosis iguales
del mismo frmaco, siendo equivalentes o no en cuanto a la velocidad y magnitud de su
absorcin. A esto se le denomina estudio de Bioequivalencia, que consiste bsicamente
en la comparacin de dos productos farmacuticos en relacin a su Biodisponibilidad.
3.3. Bioequivalencia
Se dice que dos o ms productos qumicamente equivalentes son
Bioequivalentes si sus biodisponibilidades no difieren significativamente cuando se

27
administra la misma dosis en condiciones experimentales similares (Aulton, 2004). Por
lo tanto, los productos farmacuticos se consideran Bioequivalentes si el producto
farmacutico de prueba no muestra una diferencia significativa en la velocidad y grado
de absorcin por comparacin con un producto farmacutico designado como
referencia, cuando se administran a la misma dosis molar de la misma entidad activa,
en la misma forma farmacutica, bajo condiciones experimentales similares, bien sea
en dosis nicas o en dosis mltiples (USP, 2009).
El objetivo de un estudio de Bioequivalencia es demostrar que dos productos
medicinales producen concentraciones suficientemente similares para concluir que el
efecto sistmico de los productos es el mismo (EMEA, 2001).
El diseo de un estudio de Bioequivalencia depende de los objetivos del mismo,
la capacidad de analizar el frmaco en fluidos biolgicos, la farmacodinmica del
frmaco, la va de administracin del medicamento, la naturaleza del frmaco y del
producto farmacutico (USP, 2009).
Dentro de este contexto, los productos farmacuticos se pueden clasificar de la
siguiente manera:
3.3.1. Equivalentes Farmacuticos
Son productos farmacuticos que contienen idnticas cantidades de los mismos
principios activos, o sus mismas sales o steres, en idntica forma farmacutica y va
de administracin, pero no necesariamente contienen los mismos excipientes, y que
cumplen con las mismas o comparables especificaciones de calidad (Res. Ex. N 727,
2005).
28
Equivalentes Farmacuticos no necesariamente implican Bioequivalencia ya que
diferencias en los excipientes y/o procesos de manufactura pueden conducir a una
rpida o lenta disolucin y/o absorcin (EMEA, 2001).
3.3.2. Equivalentes Teraputicos
Dos productos farmacuticos son Equivalentes Teraputicos si son Equivalentes
Farmacuticos y, despus de la administracin en la misma dosis molar, sus efectos,
con respecto a eficacia y seguridad, son esencialmente los mismos, determinados por
estudios apropiados (Clnicos, Farmacodinmicos, de Bioequivalencia, o "in vitro").
Tales productos deben estar adecuadamente rotulados y ser manufacturados
cumpliendo con las normas vigentes GMP (Res. Ex. N 727, 2005).
En la prctica, la demostracin de Bioequivalencia es generalmente el mtodo
ms apropiado de acreditar Equivalencia Teraputica entre productos medicinales que
son Equivalentes Farmacuticos, siempre y cuando ellos no tengan excipientes que
vayan a afectar la seguridad o la eficacia. (EMEA, 2001).
3.3.3. Alternativas Farmacuticas
Los productos farmacuticos son Alternativas Farmacuticas si ellos contienen
idnticas cantidades de los mismos principios activos, pero difieren en su forma
farmacutica (tabletas y cpsulas, por ejemplo) o en su forma qumica (diferentes sales
o steres, por ejemplo). Las Alternativas Farmacuticas entregan la misma fraccin
activa por la misma ruta de administracin pero no son Equivalentes Farmacuticos
(Res. Ex. N 727, 2005).

29
3.4. Estudios de Bioequivalencia in vitro
Los estudios de Bioequivalencia se iniciaron en 1977, cuando la FDA solicit
determinaciones farmacocinticas para Bioequivalencia, medidos en AUC (rea bajo la
curva) y C.mx. (concentracin mxima). La solicitud fue originada debido a problemas
surgidos en ese entonces, con genricos de digoxina, fenitona, antidepresivos
tricclicos e hipoglicemiantes orales (Bavestrello, 2003).
La utilizacin de los estudios in vitro (estudios de liberacindisolucin in vitro) se
basan en el hecho de que despus de la administracin de un medicamento por va oral
desde una forma farmacutica slida, la absorcin del principio activo depende de los
procesos de liberacin, disolucin y permeabilidad a travs de la barrera gastrointestinal
(ISP, 2007).
Hay evidencia que indica que las diferencias observadas in vivo entre la
velocidad y la cuanta de la absorcin de un principio activo en dos productos
farmacuticos orales slidos (Equivalentes Farmacuticos o Alternativas
Farmacuticas) pueden ser atribuibles a diferencias en la cintica de liberacin-
disolucin del frmaco in vivo (Yu et al, 2001). Sin embargo, cuando la liberacin-
disolucin in vivo de una FFSO-LI es rpida en relacin con el vaciamiento gstrico y el
principio activo tiene alta permeabilidad, es poco probable que la velocidad y la cuanta
de la absorcin del frmaco dependan de la liberacin-disolucin y/o el tiempo de
trnsito gastrointestinal del frmaco. Bajo tales circunstancias, es posible que no sea
necesaria la demostracin de Biodisponibilidad comparativa o Bioequivalencia in vivo
para los productos farmacuticos que contienen principios activos que pertenecen a la
Clase 1, siempre que los excipientes usados en la forma farmacutica y el proceso de

30
fabricacin no afecten significativamente la absorcin de los principios activos (Niazi,
2007).
Esta informacin es esencial, ya que otorga la evidencia cientfica necesaria para
respaldar la realizacin de los estudios de Bioequivalencia in vitro para los principios
activos que pertenecen a la Clase 1, segn el SCB, demostrando de esta manera la
Equivalencia Teraputica del producto genrico, que se propone como sustituyente del
producto innovador desarrollado por la industria de investigacin. Una vez establecida
la Equivalencia Teraputica se puede prescribir el medicamento genrico en base a la
evidencia de seguridad y eficacia establecida durante la investigacin.
Un estudio de Bioequivalencia in vitro es una prueba de disolucin que incluye la
comparacin del perfil de disolucin entre el producto de estudio y el producto de
referencia en tres medios: a pH 1,2, pH 4,5 y pH 6,8 (WHO, 2006).
Para la realizacin de un estudio de Bioequivalencia, es necesario contar con un
producto farmacutico de referencia, que generalmente es el producto innovador
elaborado por la industria farmacutica de desarrollo, y el producto farmacutico en
estudio. Ambos son definidos de la siguiente manera:
3.4.1. Producto de Referencia o Innovador
El producto de referencia es un producto farmacutico con el que el producto en
estudio est destinado a ser intercambiable en la prctica clnica. El producto de
referencia normalmente corresponde al producto innovador ya que su eficacia,
seguridad y calidad han sido establecidas. La eleccin del producto de referencia es

31
generalmente hecha por la autoridades nacionales a cargo de la regulacin de los
medicamentos (WHO, 2006).
3.4.2. Producto Farmacutico en estudio
Producto farmacutico que es sometido a una investigacin sistemtica para
determinar su equivalencia teraputica con respecto al producto de referencia, mediante
estudios apropiados (Res. Ex. N 727, 2005).
3.5. Bioexencin
Es la prerrogativa de la autoridad regulatoria para eximir de la obligacin de tener
que presentar estudios in vivo para el establecimiento de Equivalencia Teraputica, la
cul puede demostrarse mediante estudios in vitro (Res. Ex. N 727, 2005). Por lo tanto,
se puede entender que una Bioexencin es el reemplazo o exencin de los estudios de
Bioequivalencia in vivo por una prueba in vitro. Para formas farmacuticas slidas
orales, la evidencia de Bioequivalencia se determina basndose en una comparacin
del perfil de disolucin in vitro entre el producto en estudio y el producto de referencia
(USP, 2009).
Una de las mayores ventajas del procedimiento de Bioexencin es la
simplificacin y reduccin del tiempo requerido para la aprobacin del producto,
reduciendo as los costos de llevar un producto Bioequivalente al mercado. El desarrollo
de un estudio in vitro de Bioexencin de un estudio de Bioequivalencia in vivo para
FFSO-LI se basa en el SCB, que entrega una clasificacin de los principios activos en
base a su solubilidad y permeabilidad (WHO, 2006).

32
3.6. Sistema de Clasificacin Biofarmacutico
El Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (SCB) es un marco cientfico
utilizado para clasificar los principios activos basndose en su solubilidad acuosa y
permeabilidad intestinal. Cuando se combina con la cintica de liberacin-disolucin del
producto farmacutico, el SCB considera tres factores principales que gobiernan la
velocidad y cuanta de la absorcin a partir de formas farmacuticas de liberacin
inmediata: disolucin, solubilidad y permeabilidad intestinal (WHO, 2006).
De acuerdo al SCB, los principios activos se clasifican de la siguiente manera:
Fig. 1. Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (SCB)

Clase Solubilidad Permeabilidad
1 Alta Alta
2 Baja Alta
3 Alta Baja
4 Baja Baja
(USP, 2009).
Esta clasificacin puede ser usada para el marco de las especificaciones de la
disolucin in vitro y puede tambin proveer un base para predecir la probabilidad de
obtener una correlacin in vivo in vitro (IVIVC) satisfactoria (FDA, 1997). Diferentes a
las FFSO-LI son los productos de liberacin controlada o modificada ya que son
diseados para proporcionar perfiles de liberacin distintos, generalmente ms all de
las 12 horas, por lo que no pueden ser caracterizados por una prueba de disolucin de
un solo punto. Por esta razn, es ms fcil desarrollar una IVIVC para un producto de
liberacin controlada que para una FFSO-LI (Murthy, 2007).

33
El uso del SCB se ha convertido en un medio para documentar la
Bioequivalencia sin efectuar un estudio in vivo (USP, 2009). Para clasificar un producto
farmacutico acorde al SCB, la solubilidad, dosis y permeabilidad del frmaco deben
ser conocidas (Lindenberg et al, 2004). Para alta solubilidad, alta permeabilidad y para
una administracin oral del producto farmacutico, la documentacin de Bioequivalencia
usando una aproximacin in vitro es apropiada basada en el SCB (FDA, 2003).
De acuerdo a la Norma de Equivalencia Teraputica vigente en Chile, el principio
activo de un producto farmacutico para el cual se solicita una exencin de un estudio
de Biodisponibilidad in vivo, basndose en el SCB deber ser altamente soluble y
altamente permeable (Clase 1). Eventualmente se podr aceptar bioexenciones para
medicamentos elaborados con frmacos Clase 2 y 3, en cuyo caso se tomarn las
consideraciones caso a caso que sean pertinentes (ISP, 2007).
En resumen, la Bioexencin puede ser asumida si el producto de referencia y el
de estudio son altamente solubles, altamente permeables y de rpida o muy rpida
liberacin-disolucin. Adems, se debe tener en cuenta algunas consideraciones
adicionales, como los excipientes utilizados y la ventana teraputica del frmaco (Volpe,
2008). Hay que tener en cuenta que los excipientes utilizados en el producto en estudio,
no deben afectar la velocidad y magnitud de la absorcin, por lo que la cantidad de
excipientes en la FFSO-LI deber corresponder a la funcin prevista. Por otro lado, los
frmacos que tienen un estrecho margen teraputico no aplican para una solicitud de
Bioexencin (ISP, 2007).

34
3.6.1. Caracterizacin de Solubilidad
El establecimiento de la Clase a la que pertenece un principio activo en relacin a
su solubilidad considera la mayor concentracin posolgica del producto de liberacin
inmediata objeto de una solicitud de Bioexencin (ISP, 2007). Por lo tanto, un principio
activo se considera altamente soluble cuando la mayor dosis recomendada o la dosis
ms alta disponible en el mercado, como una forma farmacutica slida oral, es soluble
en 250 mL o menos, en un medio acuoso con valores de pH comprendidos entre 1,2
6,8 (WHO, 2006).
La FDA tambin ha desarrollado criterios para la evaluacin de la solubilidad, por
lo que seala que un principio activo es altamente soluble cuando la dosis ms alta es
soluble en 250 mL o menos, en un medio acuoso con valores de pH comprendidos
entre 1-7,5 (FDA, 2000). La reduccin de pH 7,5 (criterio FDA) a pH 6,8 refleja la
necesidad de disolver el principio activo antes de llegar a la mitad del yeyuno,
garantizando de esta forma una reserva suficiente para la absorcin en el tracto
gastrointestinal (WHO, 2005).
Un tema relevante del estado slido de los frmacos es que pueden existir en
varias formas cristalinas denominadas polimorfos y pseudopolimorfos que pueden
presentar diferencias en sus propiedades biofarmacuticas. El polimorfismo se define
como las diferentes estructuras cristalinas que una misma molcula puede presentar y
el pseudopolimorfismo son las formas cristalinas de una molcula que presentan en su
estructura cristalina otro tipo de molculas, como hidratos y solvatos. Las formas
polimrficas de un principio activo pueden tener diferentes propiedades fsicas y

35
qumicas, incluyendo el punto de fusin, la reactividad qumica, solubilidad aparente,
rango de disolucin, presin de vapor y densidad (FDA, 2007).
La solubilidad es una de las propiedades ms importantes que distingue a un
polimorfo de otro ya que uno puede ser tan soluble que termine siendo txico a una
dosis determinada, o tan insoluble que no produzca el efecto teraputico esperado.
Adems, la solubilidad se puede modificar con el hbito cristalino o morfologa de las
partculas y con el tamao de partculas del polimorfo, por lo que son caractersticas
que se deben establecer y controlar en la formulaciones farmacuticas que contengan
principios activos en estado slido (ISP, 2007).
3.6.2. Caracterizacin de Permeabilidad
La clasificacin de los principios activos en base a las caractersticas de
permeabilidad se basa directamente en la medida de absorcin de un principio activo en
el hombre o indirectamente en mediciones de la velocidad de transferencia de masa a
travs de la membrana intestinal humana (Yu et al, 2002). Como alternativa, se puede
utilizar sistemas no humanos capaces de predecir la medida de absorcin en el hombre.
Ante la ausencia de evidencia que sugiera inestabilidad en el sistema
gastrointestinal, se considera que el principio activo es altamente permeable cuando se
establece que la fraccin absorbida de la dosis administrada en seres humanos es del
90% o ms, basndose en una determinacin de balance de masa o en la comparacin
con una dosis de referencia intravenosa (FDA, 2000). Sucesivas discusiones y
publicaciones cientficas han sugerido reducir el criterio a un 85% de fraccin absorbida
en seres humanos, para clasificar un principio activo como altamente permeable (WHO,
36
2005). Sin embargo, la Gua Tcnica GBIOF 02 considera el criterio propuesto por la
FDA al momento de evaluar permeabilidad.
3.6.3. Cintica de liberacindisolucin
Las formas farmacuticas slidas orales se clasifican por su liberacindisolucin
rpida o lenta. Dentro de este marco, cuando cumplen ciertos criterios, se puede usar el
SCB como una herramienta de desarrollo del medicamento con el propsito de ayudar a
la industria farmacutica a justificar las solicitudes de Bioexencin (ISP, 2007).
Se considera que una FFSO-LI es de muy rpida liberacin-disolucin, cuando
no menos del 85% de la dosis del principio activo se disuelve a los 15 minutos,
empleando el aparato de paleta (aparato II USP) a 75 rpm o el aparato de canastillo
(aparato I USP) a 100 rpm, en un volumen de 900 mL o menos, en cada uno de los
siguientes medios (WHO, 2005):
1. Una solucin de pH 1,2: HCl 0,1 N o Fluido Gstrico Simulado USP sin enzimas;
2. Una solucin amortiguadora de pH 4,5: Buffer Acetato y,
3. Una solucin amortiguadora a pH 6,8: Buffer Fosfato o Fluido Intestinal Simulado
USP sin enzimas.
Se considera que una FFSO-LI es de rpida liberacindisolucin, cuando no
menos del 85% de la dosis del principio activo se disuelve dentro de 30 minutos,
empleando el Aparato I de la USP a 100 rpm o el Aparato II de la USP a 75 rpm en un
volumen de 900 mL o menos, en cada uno de los siguientes medios (WHO, 2005):
1. Medio cido, tal como HCl 0,1 N o Fluido Gstrico Simulado USP sin enzimas;
2. Buffer pH 4,5 y,
37
3. Buffer pH 6,8 o Fluido Intestinal Simulado USP sin enzimas.
Cabe destacar, que la FDA propone los mismos criterios establecidos por la
WHO para evaluar la rpida o lenta liberacin-disolucin de las FFSO-LI. Sin embargo,
la FDA propone que el criterio de velocidad para el Aparato II de la USP sea de 50 rpm,
a diferencia de las 75 rpm propuestas por la WHO.
Para respaldar una solicitud de Bioexencin, se deber evaluar un mnimo de 12
unidades posolgicas de un producto farmacutico de tres lotes diferentes. Se deber
recolectar las muestras en un nmero suficiente de intervalos para caracterizar
completamente el perfil liberacindisolucin del producto farmacutico. Cuando se
comparen los productos en estudio y el de referencia se debe utilizar el factor de
similitud denominado f2, que es una manera sencilla de comparar los perfiles de
disolucin. El factor de similitud corresponde a la transformacin logartmica de la raz
cuadrada recproca de la suma del error cuadrado y es una medicin de la similitud en
el porcentaje de disolucin entre las dos curvas (ISP, 2007).
Fig. 2. Frmula para obtener el factor de similitud (f2)
(WHO, 2005).
Donde:
n = nmero de puntos.
Rt = porcentaje (%) disuelto promedio del producto de referencia a cada tiempo de
muestreo t.
38
Tt = porcentaje (%) disuelto promedio del producto en estudio a cada tiempo de
muestreo t.
Los dos perfiles se consideran similares cuando el valor de f2 es > 50. Un valor
de f2 de 50 o mayor refleja la equivalencia de las dos curvas y por lo tanto, la
Bioequivalencia entre los productos. Para permitir el uso de datos promedio, el
coeficiente de variacin no deber ser ms del 20% en los puntos temporales ms
tempranos del perfil de liberacin-disolucin (por ejemplo, 10 minutos), y no ms del
10% en los dems puntos temporales del perfil (ISP, 2007). Es importante destacar que
si el producto de referencia y el de estudio se disuelven en un 85 % o ms de la
cantidad declarada a los 15 minutos o menos, (utilizando los tres medios de disolucin
descritos) no es necesaria la comparacin con una prueba f2 (WHO, 2006).
Como se mencion anteriormente, los aparatos de disolucin utilizados en el
estudio de liberacin-disolucin son los propuestos por la USP XXXII (aparato 1 y 2)
que estn constituidos por un mdulo agitador (motor) al cual se conecta al aparato que
gira. Este mdulo permite trabajar con distintas velocidades de agitacin expresadas en
rpm. Tambin presenta un mdulo calefactor que permite mantener la temperatura del
bao de agua donde se sumergen los vasos con el medio de disolucin a 37C 0.5.
Adems, estos aparatos tienen Vasos, Canastillos o Paletas dependiendo del equipo (el
aparato 1 es de canastillos y el aparato 2 es de paletas).
El clsico test de disolucin in vitro que aparece en Farmacopeas, se ha utilizado
para evaluar la calidad lote a lote de un producto farmacutico, para guiar el desarrollo
de nuevas formulaciones y para asegurar la calidad y el rendimiento continuo del
producto despus de ciertas modificaciones, tales como cambios en la formulacin,

39
cambios en el proceso de fabricacin, cambios en el sitio de fabricacin y aumento de
escala del proceso de fabricacin (Amidon et al, 1995). No se debe confundir esta
prueba con los estudios cinticos de liberacin-disolucin de los principios activos
desde las formas farmacuticas, cuya finalidad, en casos muy especficos, es
establecer la condicin de Equivalentes Teraputicos entre un producto en estudio y
uno de referencia, sin tener que realizar estudios de Bioequivalencia in vivo. Es decir,
para optar a una Bioexencin.
Para asegurar el correcto uso de los aparatos de disolucin se debe tener
presente algunas variables que son mencionadas a continuacin.
1. Equipo de Disolucin
1.1. Geometra del Sistema
La USP especifica que el eje del elemento de rotacin (de canastillo o paleta)
debe coincidir en todos los puntos con el eje central del vaso de disolucin dentro de
2 mm. Esta especificacin define el alineamiento, el centrado y la excentricidad de los
ejes.
1.1.1. Alineamiento de Ejes
Esta variable parece ser la influencia externa ms importante en ambos mtodos
(paleta y canastillo). La medicin y ajuste de esta variable se hace una vez que el bao
y la base del equipo han sido razonablemente nivelados mediante el uso de un nivel de
burbuja. Para chequear y ajustar el alineamiento se recomienda el uso de una escuadra
y la tapa de un vaso de disolucin como base de la escuadra, o la utilizacin de algn

40
sistema digital para la medicin. El procedimiento se debe realizar en dos planos
ubicados a 90 para asegurar la perpendicularidad en esos dos planos. Se recomienda
chequear esta variable cada vez que se mueve el equipo y, como buenas prcticas de
laboratorio, cada tres a seis meses.
Fig. 3. Medicin del alineamiento de los ejes
(Dissolution Toolkit, 2010).

1.1.2. Centrado de los Ejes
Las variaciones en el dimetro externo de los vasos de disolucin hacen
necesario ubicarlos individualmente con respecto al centro de rotacin, a fin de cumplir
la especificacin 2 mm del centro. Varios equipos de disolucin han adoptado un
sistema de tres argollas que ajustan el vaso con su centrado exacto respecto al eje de
rotacin. Es recomendable numerar y marcar los vasos para luego usarlos en la misma
ubicacin en el aparato. Este ajuste debe formar parte del procedimiento rutinario en un
buen anlisis de disolucin.

41
1.1.3. Excentricidad de los ejes
La USP especifica que el eje de agitacin debe rotar sin excentricidad
significativa. El trmino significativo pone en el experimentador la responsabilidad de
demostrar que la excentricidad no influye en el test.
1.2. Vibracin en el Sistema
La vibracin puede cambiar el flujo laminar del lquido e introducir energa no
deseada al sistema dinmico. Ambos efectos pueden provocar resultados errticos
entre uno y otro anlisis o entre vasos de disolucin, aumentando la velocidad de
disolucin y el coeficiente de variacin. Ningn sistema est libre de vibracin, pero
ideal es reducir la vibracin a un nivel mnimo manejable. La USP establece que
ninguna parte del sistema, incluyendo el contorno en el cual est montado, debe
contribuir significativamente a la vibracin que no sea la emitida por la suave rotacin
del elemento agitador. Un sistema satisfactorio de aislar el bao Mara del mesn de
laboratorio ha sido montando el bao en una plancha de poliuretano. Cualquier
elemento del laboratorio que pueda contribuir a la vibracin, como unidades de aire
acondicionado, centrfugas, bombas, etc., debe ser monitoreado y controlado.
1.3. Velocidad de agitacin
La velocidad de agitacin, generalmente de 50 a 150 rpm, es la variable que
determina cun rpido una forma farmacutica se desintegra y/o disuelve en un
volumen especificado de medio de disolucin. La USP requiere que la velocidad de
agitacin se mantenga en 4% de lo especificado. La velocidad de agitacin es

42
fcilmente controlada y monitoreada. Modernos controles de velocidad permiten una
lectura constante y digital de las rpm. Se ha observado que despus de iniciar su
funcionamiento, los equipos tienden a aumentar la velocidad de agitacin, por lo cual es
esencial estabilizar la lectura digital de las rpm por un perodo preliminar antes de
comenzar el anlisis. Es conveniente chequear si la lectura digital corresponde a la
velocidad real que est dando el equipo. Para ello basta colocar un papel engomado en
el extremo del eje y contar cuntas veces da la vuelta completa en un tiempo
determinado cronometrado.
1.4. Control de temperatura
El efecto de las variaciones de temperatura en los resultados de disolucin
depender de las curvas de temperatura, solubilidad del frmaco y excipientes de la
forma farmacutica. La USP especifica 37 C 0,5 C como temperatura de trabajo,
durante la prueba de disolucin.
El control de esta variable es relativamente simple:
Equilibrar la temperatura a 37 C antes de comenzar el anlisis.
Monitorear la temperatura (por lo menos cada una hora).
Chequear la temperatura al final del anlisis.
Es fundamental para este control usar termmetros adecuados y calibrados.

43
1.5. Posicin vertical de paleta o canastillo
La USP especifica que la distancia entre el fondo interno del vaso y el fondo de la
canasta o paleta se debe mantener en 25 mm 2 mm. Ya que la profundidad del vaso
puede variar, cada paleta o canastillo debe ser ajustado individualmente a la distancia
especificada. Existen calibradores de altura que permiten hacer este ajuste en forma
simple. Se pueden marcar los ejes o usar collares ajustables para establecer la posicin
requerida, de manera que sta pueda ser repetida en forma rpida y segura.
1.6. Posicin y mtodo de muestreo
La posicin de muestreo puede influir en mayor o menor grado en los resultados
de disolucin dependiendo del tamao de las partculas en que se desintegra el
producto y de la diferencia en la gravedad especfica entre las partculas y el medio de
disolucin. La USP establece que la muestra debe ser extrada desde una zona media
entre la superficie del medio de disolucin y la parte superior del canastillo o paleta y a
no menos de 1 cm de la pared del vaso. La especificacin USP presenta el
inconveniente de que es difcil de cumplirla cuando se usan 500 mL de medio de
disolucin y, adems, permite hacer un muestreo desde puntos muy cercanos al
canastillo. El muestreo automtico tiene la ventaja sobre el muestreo manual de que la
posicin de muestreo es siempre reproducible y para efectos de filtracin la cantidad de
prdida disminuye. Es preciso reducir lo ms posible el tiempo en que el sistema de
muestreo est en el vaso de disolucin, ya que la presencia del dispositivo puede
producir cambios en el flujo hidrodinmico.

44
1.7. Cuidados y manipulacin de paletas y canastillos
Los canastillos y paletas deben ser constantemente inspeccionados,
manipulados como instrumentos delicados y almacenados adecuadamente. Se
recomienda descartar los canastillos que se observen torcidos o con otros defectos que
no se puedan corregir por simple manipulacin. La cubierta de polifluorocarbono de las
paletas se puede daar y picar si stas se dejan caer o se tiran unas contra otras.
1.8. Formas farmacuticas que flotan
Uno de los problemas del mtodo de la paleta es que algunas formas
farmacuticas como las cpsulas tienden a flotar en el medio de disolucin a causa de
su baja gravedad especfica. La USP permite el uso de una pequea hlice de material
no reactivo para mantener la forma farmacutica en el fondo del vaso.
Conjuntamente, la USP establece que el equipo de disolucin se debe calibrar
con comprimidos de acuerdo a las condiciones de operacin especificadas. Para ello
existen comprimidos calibradores, uno del tipo desintegrable (Prednisona comprimidos
50 mg con excipiente lactosa) y otro del tipo no desintegrable (cido Saliclico
comprimidos 300 mg). Antes de proceder a calibrar, se deben chequear y ajustar
cuidadosamente todas las variables caractersticas del sistema. El equipo se debe
calibrar cada vez que se cambia de ubicacin o cuando se le hace algn cambio
significativo. Es una buena prctica de laboratorio calibrarlo por lo menos cuatro veces
al ao como rutina bsica para prevenir cualquier desalineamiento debido al uso o a la
prdida de las condiciones que requieren estar bajo control.

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3.7. Buenas Prcticas de Manufactura y Control de Calidad
La WHO define las GMP como el rea de garanta de la calidad que asegura que
los productos se fabriquen en forma uniforme y controlada, de acuerdo con las normas
de calidad adecuadas al uso que se pretende dar a los productos, y conforme a las
condiciones exigidas para su comercializacin (WHO, 1998). Las GMP abarcan todos
los aspectos del proceso de fabricacin locales, almacenamiento y transporte
adecuados; personal calificado y capacitado para la produccin y el control de la
calidad; laboratorios apropiados; procedimientos e instrucciones escritas aprobados;
registros donde consten todas las etapas de los procedimientos definidos y adoptados;
posibilidad de seguir un producto en todas sus etapas mediante registros de procesado
de lotes y registros de distribucin; y sistemas para el retiro de un producto y la
investigacin de quejas (WHO, 1998).
El principio rector de las GMP es que la calidad forma parte integral de la
elaboracin del producto, y no es algo que meramente se somete a prueba en el
producto. Por consiguiente, con esto se asegura que el producto no slo cumple con las
especificaciones finales, sino que se ha hecho con los mismos procedimientos y en las
mismas condiciones cada vez que se elabora. La validacin es la parte de las GMP por
la cual se logra que los sistemas, los equipos, los procesos y los procedimientos para
los ensayos del establecimiento estn bajo control y, por consiguiente, se produzca
uniformemente un producto de calidad (WHO, 1998).
El control de la calidad es una parte de las GMP que se refiere al muestreo, a los
procedimientos de organizacin, documentacin y autorizacin que asegura que los
ensayos de materias primas, materiales de envasado, productos intermedios, a granel y

46
acabados, realmente se efecten, para que no se permita la circulacin de los
materiales, ni se autorice la venta o suministro de los productos, hasta que su calidad
haya sido aprobada como satisfactoria. No se limita a las operaciones de laboratorio,
sino que debe estar presente en todas las decisiones concernientes a la calidad del
producto (WHO, 1992).
A travs de las normas GMP, se asegura que cada unidad de producto fabricado,
tenga la misma calidad que la unidad analizada por el Departamento de Control de
Calidad; ste debe ser tambin independiente de otros departamentos y estar bajo la
autoridad de una persona calificada y experimentada. Debe contar con recursos
suficientes para asegurar que los procedimientos de control de la calidad puedan
efectuarse con eficacia y confiabilidad. Para esto se debe contar con requisitos bsicos
del control de la calidad. Se debe contar con instalaciones adecuadas, personal
capacitado y procedimientos aprobados, a fin de llevar a cabo el muestreo, la
inspeccin y el ensayo desde las materias primas hasta el producto acabado. Deben
obtenerse muestras de materias primas, materiales de envasado, y productos
intermedios, a travs de mtodos y de personal aprobados por el departamento de
control de la calidad. Los mtodos de ensayo deben ser validados. Deben mantenerse
registros que sirvan para demostrar que se han llevado a cabo todos los procedimientos
de muestreo, inspeccin y ensayo, y que cualquier desviacin ha sido plenamente
registrada e investigada. Los productos terminados deben contener ingredientes que se
adecuen a la composicin cualitativa y cuantitativa del producto. No se debe autorizar la
venta o suministro de ningn lote de productos antes de su certificacin por el personal
autorizado. Finalmente, debe retenerse un nmero suficiente de materia prima y

47
productos para posibilitar un examen del producto en el futuro, si fuese necesario
(WHO, 1992).
3.8. Validacin
El objetivo de la validacin de una metodologa analtica es demostrar que dicho
procedimiento es adecuado para los fines previstos (ICH, 2005). La validacin por lo
tanto es, un procedimiento claramente diseado para establecer en forma documentada
que un sistema, un equipo, un proceso de produccin o una metodologa analtica de
control de un producto cumplen con los parmetros de calidad especificados (WHO,
1998).
El hecho de contar con los procesos validados no slo significa para una
industria farmacutica tener productos de calidad que le permitan garantizar su
efectividad para entrar y mantenerse en el exigente mercado farmacutico, sino tambin
significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, ya que se minimizan los riesgos de
perder lotes de produccin por errores generados durante el transcurso de la
fabricacin (WHO 1998).
Una vez desarrollado un mtodo de anlisis por HPLC, al igual que toda tcnica
analtica, deber validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los resultados
por l producidos son confiables. Diferencias entre distintas formas farmacuticas, tipo y
calidad de las materias primas empleadas por cada fabricante, hacen validar la
metodologa de cada producto en particular (Quattrocchi et al, 1992). Los parmetros
fundamentales para la validacin son exactitud, precisin, selectividad, sensibilidad,
reproducibilidad y estabilidad (FDA, 2001).

48
4. PROBLEMTICA A ABORDAR
Lograr demostrar a travs de un trabajo in vitro para Bioexencin de un estudio
de Bioequivalencia, la Equivalencia Teraputica entre dos formulaciones comprimidos
que contienen Ciclobenzaprina Clorhidrato 10 mg.
5. OBJETIVO GENERAL
Al realizar el trabajo in vitro para Bioexencin de un estudio de Bioequivalencia,
se busca el siguiente objetivo general:
Llevar a cabo un trabajo in vitro para Bioexencin de un estudio de
Bioequivalencia para establecer Equivalencia Teraputica entre dos
formulaciones comprimidos que contienen Ciclobenzaprina Clorhidrato 10 mg.
6. OBJETIVOS ESPECFICOS
Al realizar el trabajo in vitro para Bioexencin de un estudio de Bioequivalencia,
se desea lograr los siguientes objetivos especficos:
Llevar a cabo la Validacin de una metodologa analtica que ser utilizada en el
estudio, para establecer Equivalencia Teraputica entre dos formulaciones
comprimidos que contienen Ciclobenzaprina Clorhidrato 10 mg.
Dominar el correcto manejo del equipo HPLC y de otros equipos o materiales
empleados durante el estudio en cuestin.
Recopilar antecedentes bibliogrficos que permitan obtener informacin sobre los
productos que estarn sometidos al estudio, con la finalidad de demostrar
Equivalencia Teraputica.
49
Determinar la solubilidad del principio activo bajo condiciones de pH fisiolgicas
simuladas, basndose en el SCB.
Determinar la permeabilidad de un principio activo por medio de una bsqueda
bibliogrfica.
Determinar las caractersticas de liberacin-disolucin in vitro de los dos
productos farmacuticos en cuestin.

50
7. MATERIALES
7.1. Materiales y equipos
Algunos de los reactivos, materiales y equipos que se utilizaron durante el
estudio, son mencionados a continuacin:
Material de vidrio Clase A.
Soluciones y reactivos. Proveedor Merck S.A.
Estndar secundario, Ciclobenzaprina Clorhidrato.
Cromatgrafo Lquido de Alta Performance (HPLC), con detector de longitud de
onda variable, Agilent Serie 1200.
Aparato de Disolucin Vision Elite, asociado a Controlador Automtico Auto Plus
Maximer Virtual Instrument, Hanson Research. Posee un mostrador automtico
Auto Plus Multifill, Hanson Research.
Aparato de Disolucin SR8 Plus, Hanson Research.
Balanza Analtica Sartorius, Modelo CP224S.
pH Metro Fisher Hanna Hi123 N Serie 486570, con electrodo.
Sonicador Power Sonic Luc 410 Lab Tech.
Desaireador Media Mate Plus. Hanson Research.
Bao Termocirculador Lab. Tech. Modelo LCB R13.
Software Chembiodraw Ultra 11.0.

51
8. METODOLOGA
El estudio de Equivalencia Teraputica de FFSO-LI se bas en las
recomendaciones entregadas por el Instituto de Salud Pblica (ISP) a travs de la Gua
Tcnica G-BIOF 02 denominada Bioexencin de los estudios de
Biodisponibilidad/Bioequivalencia para establecer Equivalencia Teraputica de Formas
Farmacuticas Slidas Orales. Esta gua entrega informacin para las solicitudes de
exencin de los estudios de Bioequivalencia in vivo para FFSO- LI en base al SCB y
para formulaciones slidas orales proporcionalmente similares a otro producto, cuya
Equivalencia Teraputica haya sido demostrada mediante un estudio in vivo. Tambin,
se consult la literatura desarrollada por organizaciones que estn innovando en lo que
respecta a los avances cientficos y normativos-reguladores de los estudios de
Equivalencia Teraputica, como la Organizacin Mundial de la Salud (WHO),
Federacin Farmacutica Internacional (FIP), Administracin Federal de Alimentos y
Drogas de los Estados Unidos (FDA), Agencia Europea de Medicamentos (EMEA) u
otras de igual connotacin.
La metodologa para la clasificacin de los principios activos en base a su
permeabilidad, solubilidad y las caractersticas cinticas de liberacin-disolucin fueron
obtenidas de la Gua G-BIOF-02 denominada anteriormente.
8.1. Revisin Bibliogrfica
La recopilacin de informacin cientfica relevante es un paso clave para obtener
las herramientas y conocimientos necesarios para la realizacin de un ensayo analtico.

52
Es por esto, que a continuacin se detallan algunas propiedades y caractersticas del
principio activo en cuestin.
8.1.1. Descripcin del principio activo
A continuacin, se presenta la descripcin del principio activo, obtenida de la
base de datos conocida como DrugBank.
a) Nombre del principio activo: Ciclobenzaprina (como Ciclobenzaprina Clorhidrato).
b) Nombre qumico: 3-(5H-dibenzo [a,d] ciclohepten-5-ilidene)-N, N-dimetil -1-
propanamina.
c) Estructura:
Fig. 4. Estructura Ciclobenzaprina Clorhidrato
. HCl
La forma molecular de Ciclobenzaprina Clorhidrato es C20H21N x HCl, y su peso

molecular es de 311,9 g/mol.
d) Accin teraputica: Relajante muscular.
e) Propiedades: Ciclobenzaprina suprime el espasmo del msculo esqueltico de
origen local sin interferir con la funcin y fuerza muscular. Se ha demostrado que la
accin sobre la formacin reticular reduce el tono motor influyendo sobre el sistema
motor gamma y alfa.

53
f) Indicaciones: Cervicobraquialgias, lumbalgias, tortcolis, fibrositis, periartritis
escapulohumeral, espasmos musculares asociados con dolor agudo de etiologa
musculoesqueltica.
g) Dosificacin: La dosis habitual es de 10 mg dos o tres veces al da, distribuidos a
intervalos regulares. Segn criterio mdico puede administrarse 40 mg por da; no se
recomienda exceder los 60 mg.
h) Reacciones adversas: Ciclobenzaprina en las dosis recomendadas es muy bien
tolerada. En forma ocasional pueden presentarse mareos, sequedad bucal y
somnolencia.
i) Precauciones y advertencias: Ciclobenzaprina slo debe emplearse durante
periodos no mayores a dos o tres semanas. Debe administrarse con precaucin en
pacientes medicados con frmacos anticolinrgicos, personas que operan maquinarias
o conducen vehculos. Dado que se carece de experiencia no se recomienda
administrarla a los nios.
j) Interacciones: No administrar en forma simultnea con antidepresivos tricclicos,
inhibidores de la monoaminooxidasa. Puede potenciar los efectos del alcohol,
barbitricos u otros frmacos depresores del sistema nervioso central.
k) Contraindicaciones: Hipersensibilidad a la Ciclobenzaprina y glaucoma. Retencin
urinaria. Uso simultneo con inhibidores de la MAO. Fase aguda postinfarto de
miocardio. Pacientes con arritmias cardiacas, bloqueo o alteraciones de la conduccin,
insuficiencia cardiaca congestiva. Hipertiroidismo.

54
8.1.2. Propiedades Fisicoqumicas
a) Solubilidad: Libremente soluble en agua y alcohol, moderada solubilidad en
isopropanolol, ligeramente soluble en cloroformo y cloruro de metileno, prcticamente
insoluble en hidrocarbonos.
b) pKa: El pKa de Ciclobenzaprina es cercano a 8,47.
c) Peso molecular: El peso molecular de Ciclobenzaprina Clorhidrato es de 311,9
g/mol.
d) Aspecto: cristales blancos.
e) Punto de fusin: 215C y 219C.
8.2. Validacin de la metodologa analtica
La validacin de la metodologa analtica se bas en los parmetros
recomendados por el ISP a travs de la Gua Tcnica G-BIOF 02 denominada
Bioexencin de los estudios de Biodisponibilidad/Bioequivalencia para establecer
Equivalencia Teraputica de Formas Farmacuticas Slidas Orales. Los parmetros
evaluados en la Validacin fueron linealidad, exactitud, precisin, robustez, selectividad,
influencia del filtro, estabilidad y precisin intermedia.
8.2.1. Desarrollo analtico
Los medios de disolucin utilizados en la caracterizacin de solubilidad y en la
cintica de liberacin-disolucin fueron los siguientes:

55
Solucin HCl 0,1N, pH 1,2:
Preparacin: medir 8,5 mL de cido Clorhdrico (HCL) concentrado (37%) y diluir con agua
destilada hasta completar 1 L. (Este medio ser utilizado en las pruebas de solubilidad y
liberacin-disolucin).
Solucin amortiguadora de Ftalato, pH 3,0:
Preparacin: tomar 250 mL de la solucin de ftalato de potasio 0,2 M, con 22,3 mL de HCl
0,2 M y diluir con agua destilada hasta completar 1 L. (Este medio ser utilizado solo en la
prueba solubilidad).
Solucin amortiguadora de Acetato, pH 4,5:
Preparacin: pesar 2,99 g de Acetato de Sodio NaC2H3O2 3H2O; medir 14 mL de cido
Actico 2 N, y diluir con agua destilada hasta completar 1 L. (Este medio ser utilizado en
las pruebas de solubilidad y liberacin-disolucin).
Solucin amortiguadora de fosfato, pH 6,8
Preparacin: medir 250 mL de la solucin de fosfato monobsico de potasio 0,2 M en
un matraz volumtrico de 1000 mL. Agregar 112 mL de la solucin de hidrxido de
sodio 0,2 M. (Este medio ser utilizado en las pruebas de solubilidad y liberacin-
disolucin).
En las pruebas de cintica liberacin-disolucin los medios fueron precalentados,
desaireados y filtrados a travs del Desaireador Media Mate Plus. Cada vez que fue
necesario determinar la concentracin de las muestras analizadas por el HPLC, se

56
procedi a la calibracin a partir de la concentracin del estndar, que fue determinada
a travs de la siguiente frmula:
Clculos:
[St] = PSt * PotSt * Dilucin
[St]: Concentracin del estndar (mg/mL o mg/Cp segn corresponda).
PSt: Peso del estndar (mg).
PotSt: Potencia del estndar (%).
Dilucin: Volumen utilizado (mL).
A continuacin, se proceder a detallar cuales fueron los parmetros analizados
en la validacin de la metodologa analtica necesaria para llevar a cabo el estudio de
Bioexencin.
a) Selectividad o Especificidad
Este parmetro se refiere a la propiedad del mtodo de producir una seal
medible debida a la sola presencia del analito, libre de interferencia de otros
componentes en la matriz de la muestra. Estos componentes pueden ser excipientes de
un frmaco, productos de degradacin, metabolitos del mismo analito en un fluido
biolgico, etc. (Quattrocchi et al, 1992).
En este parmetro se analizaron soluciones que contenan slo el medio de
disolucin (blanco) y soluciones que contenan los componentes de la matriz (medio
que contiene todos los componentes de la forma farmacutica, menos el principio activo
a validar), determinndose la contribucin de ambos al cromatograma, a travs del

57
clculo de ruido. Por lo tanto, por cada medio de disolucin se realiz una prueba de
selectividad para el blanco y la matriz, en la que se prepar:
1 blanco, que se inyect al cromatgrafo durante aproximadamente 10 minutos.
10 matrices, que se inyectaron al cromatgrafo durante aproximadamente 10
minutos. Este ensayo no se realiz para el Buffer Ftalato pH 3,0 debido a que este
medio no ser utilizado en el estudio de liberacindisolucin.
Criterio de aceptacin: La determinacin de la contribucin de la seal de ruido debe
ser menor al 2%.
b) Linealidad
Es la capacidad de un mtodo analtico de asegurar que los resultados obtenidos
son directamente proporcionales a la concentracin del analito en la muestra (WHO,
2006).
En este parmetro se prepararon y midieron para cada medio: Cinco soluciones,
que contengan aproximadamente 10%, 30%, 60%, 90% y 120% de la concentracin
estndar de Ciclobenzaprina Clorhidrato, que se inyectaron por quintuplicado en el
cromatgrafo.
Criterio de aceptacin: El coeficiente de correlacin no deber ser menor a 0,98, el
intercepto en y no debe ser diferente de cero, empleando un intervalo de confianza del
95%, y el coeficiente de variacin del factor de respuesta no debe ser mayor a 2%.
58
c) Exactitud y Precisin
La exactitud de un mtodo, corresponde a la diferencia entre el valor obtenido
(media) y el valor verdadero (Quattrocchi et el, 1992), y la precisin del mtodo expresa
la cercana entre una serie de mltiples muestreos de una misma muestra homognea,
bajo condiciones establecidas (ICH, 2005).
En estos parmetros se prepararon y midieron para cada medio: muestras que
contenan cantidades equivalentes 30%, 60% y 120% de la concentracin terica del
estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato. Cada una de las muestras debe contener la
matriz del producto (para medio Buffer Ftalato pH 3,0 no se agrega matriz ya que este
medio no ser utilizado en la prueba de liberacin-disolucin). Para cada uno de los
niveles se prepararon tres muestras por separado y se inyectaron por duplicado en el
HPLC.
Criterio de aceptacin: El porcentaje promedio de recuperacin debe ubicarse entre
95% y 105%, y el RSD debe ser menor o igual a 2%.
d) Precisin Intermedia
La precisin intermedia se realiz con la finalidad de observar si la metodologa
analtica era reproducible al momento de cambiar al analista, demostrando de esta
forma la reproducibilidad del mtodo. Esta prueba se efectu en dos medios distintos
(Buffer Acetato pH 4,5 y Buffer Fosfato pH 6,8). Dos analistas diferentes realizan dos
estudios cinticos de disolucin (n=6) por duplicado, repetidos para dos lotes. Se
comparan los resultados promedios y los coeficientes de variacin (%).

59
Criterios de aceptacin: La diferencia en los valores promedio, no debe exceder un
10% en aquellos tiempos en los que se ha disuelto un porcentaje menor o igual al 85%
y un 5% en los que se ha disuelto ms del 85% del frmaco en estudio.
e) Estabilidad
La finalidad que tiene la prueba de estabilidad es demostrar que las muestras y
estndares de Ciclobenzaprina Clorhidrato no sufren algn tipo de degradacin o
alteracin, ya sea a temperatura ambiente o de refrigeracin, que afecte su
concentracin al ser analizados al HPLC.
Para este parmetro se prepararon y midieron para cada medio: dos soluciones
estndares y dos muestras, realizando dos lecturas de cada estndar y de las
muestras. Se almacenaron las fracciones sobrantes o no utilizadas de estndares y
muestras, a temperatura ambiente y en el refrigerador (aproximadamente a 4C), por 24
horas. Transcurrido este periodo de tiempo, se analizaron los estndares y muestras
por el HPLC. Finalmente, se compar el resultado promedio de las soluciones
estndares con el valor terico y los resultados de las muestras con las obtenidas en las
lecturas iniciales.
Criterio de aceptacin: Los estndares son estables si el promedio de las lecturas 24
horas despus de la preparacin es igual al valor terico en un 98% a 102%, y las
muestras son estables en solucin, si el porcentaje de recuperacin relativo se
encuentra entre 98% y 102% del valor promedio. Esto se aplica tanto a la fraccin
almacenada a temperatura ambiente, como a la fraccin refrigerada.

60
f) Robustez
La robustez de un mtodo analtico corresponde a los estudios que indican el
grado de confiabilidad del ensayo ante cambios de variables comunes. Estos cambios
pueden ser ligeras diferencias operativas, de equipos, analistas, laboratorios, fuente de
columnas, etc. (Quattrocchi et al, 1992).
Para este ensayo fueron evaluados diversos parmetros mediante ocho
experimentos, que comparan la influencia de los factores mediante el cambio en estos
parmetros, utilizando el mtodo Plackett y Burman, descrito por Quattrocchi et al
(1992). A continuacin se aplica la siguiente tabla:
Fig. 5. Diseo experimental para 7 variables en un estudio de Robustez

FACTOR EXP1 EXP2 EXP3 EXP4 EXP5 EXP6 EXP7 EXP8
A/a A A A A a a a a
B/b B B b b B B b b
C/c C c C c C c C c
D/d D D d d d d D D
E/e E e E e e E e E
F/f F f f F F f f F
G/g G g g G g G G g
Resultado exp. s t u v w x y z
(Quattrocchi et al, 1992).
Los parmetros en mayscula corresponden a la metodologa original y los
parmetros en minscula a los cambios realizados para el anlisis de robustez. El
efecto de cada factor se calcula de la siguiente forma:
Valor del efecto A-a=1/4((s+t+u+v)-(w+x+y+z)) = 1
Valor del efecto B-b=1/4((s+t+w+x)-(u+v+y+z)) = 2
Valor del efecto C-c=1/4((s+u+w+y)-(t+v+x+z)) = 3
Valor del efecto D-d=1/4((s+t+y+z)-(u+v+w+x)) = 4

61
Valor del efecto E-e=1/4((s+u+x+z)-(t+v+w+y)) = 5
Valor del efecto F-f=1/4((s+v+w+z)-(t+u+x+y)) = 6
Valor del efecto G-g=1/4((s+v+x+y)-(t+u+w+z)) = 7
Considerando los 7 parmetros siguientes, se trabaja con el valor original
(maysculas) y un valor alternativo (minsculas):
Fig. 6. Parmetros evaluados en la Robustez

FACTORES METODOLOGIA ORIGINAL METODOLOGIA MODIFICADA
Efecto tiempo preparacin-

A a A/a
lectura
Concentracin componente de
B b B/b
la fase mvil
Volumen de inyeccin C c C/c
Concentracin de Fase Mvil D d D/d
Temperatura E e E/e
Longitud de onda F f F/f
Flujo G g G/g
Los parmetros mostrados en la figura 6, sern los seleccionados para sufrir una
modificacin, evaluando de esta forma la robustez del mtodo analtico desarrollado.
Las letras maysculas representa los parmetros de la metodologa original y las letras
minsculas representan los parmetros de la metodologa modificada.
Luego se completa la matriz y se realizan los 8 experimentos segn la
metodologa desarrollada. A continuacin se presenta una tabla con los experimentos

62
realizados, que considera cada uno de los parmetros evaluados en el ensayo de
Robustez.
Fig. 7. Experimentos y sus parmetros correspondientes

PARAMETRO Exp 1 Exp 2 Exp 3 Exp 4 Exp 5 Exp 6 Exp 7 Exp 8
Efecto tiempo
A-a A A A A a a a a
preparacin-lectura
Concentracin
B-b B B b b B B b b
componente fase mvil
C-c Volumen de Inyeccin C c C c C c C c
D-d Concentracin Fase Mvil D D d d d d D D
E-e Temperatura E e E e e E e E
F-f Longitud de Onda F f f F F f f F
G-g Flujo G g g G g G G g
Resultado Exp. s t u v w x y z
La figura 7 muestra los 8 experimentos necesarios para demostrar la robustez del
mtodo. Cada experimento presenta 4 parmetros modificados, exceptuando el
experimento nmero 1, que contiene los 7 parmetros originales.
Concluidos todos los experimentos, se obtiene los efectos de modificar cada
parmetro, reemplazando en las ecuaciones anteriormente descritas, los resultados de
cada uno de los 8 experimentos. Estos 7 resultados son comparados con la expresin
s2, siendo s el valor de la desviacin estndar obtenido en el estudio de precisin del
mtodo. Todos los experimentos se deben realizar a partir de una muestra homognea.
Cabe destacar, que por cada uno de los medios analizados se prepararon dos muestras
que contenan la matriz del medio ms el principio activo (excepto para el Buffer Ftalato
pH 3,0) a validar y dos muestras que solo contenan el principio activo. Adems, se
debieron preparar dos estndares para poder cuantificar los resultados obtenidos.
63
Criterio de Aceptacin: Comparar el valor del efecto obtenido, con la expresin s2
donde s es la desviacin estndar obtenida en el ensayo de precisin del mtodo. A
continuacin se presenta una tabla con los criterios de aceptacin para el ensayo.
Fig. 8. Criterios de aceptacin para la Robustez

Resultado Criterio
Menor a s2 No significativo
Mayor a s2 y Delta menor a 3% Significativo
Delta mayor a 3% Muy significativo
g) Influencia del filtro
Se realiz una prueba de influencia del filtro adecuada a las concentraciones de
trabajo y en todos los medios de disolucin. Se determin el efecto del filtro sobre una
solucin estndar. Para ello se analiz el estndar filtrado y otro sin pasar por el filtro,
para ms tarde comparar ambos resultados.
Criterio de aceptacin: El porcentaje de recuperacin relativa debe encontrarse entre
98% y 102%.
8.3. Solubilidad
Se deber determinar el perfil de solubilidad versus el pH del principio activo en
estudio, en un medio acuoso a 37 + 1C con pH comprendido entre 1,2 6,8. Adems,
se deber evaluar un nmero suficientes de condiciones de pH para definir con
precisin el perfil de solubilidad versus pH. Se deber determinar la concentracin del
principio activo en los tampones seleccionados y en las condiciones de pH sealadas,
utilizando un ensayo validado (ISP, 2007).

64
Se deber establecer la clasificacin de solubilidad, calculando el volumen de un
medio acuoso suficiente para disolver la mayor potencia de la forma farmacutica. De
esta forma, se clasificar un principio activo como altamente soluble cuando la mayor
dosis sea soluble en un volumen de 250 mL o menos, de medio acuoso en toda la
gama de pH comprendida entre 1,2 6,8 (WHO, 2006).
El mtodo utilizado para la prueba de solubilidad fue de agitacin por matraz.
Para este ensayo se prepararon diferentes soluciones a un pH determinado (Medio HCl
0,1 N, pH 1,2; Buffer Ftalato pH 3,0; Buffer Acetato pH 4,5 y Buffer Fosfato pH 6,8). El
principio activo fue adicionado a 5 mL de cada medio hasta lograr la saturacin. Debido
a que Ciclobenzaprina Clorhidrato es una molcula dependiente de pH, la solubilidad es
distinta en cada uno de los medios (ver figura 49, 50, 51 y 52). Posteriormente, las
muestras fueron sonicadas y colocadas en el bao termorregulador por 24 horas a 37 +
1C. Al da siguiente, las muestras fueron diluidas y filtradas para ser analizadas en el
HPLC. Para poder cuantificar las muestras obtenidas, se debi preparar un estndar 1 y
un estndar 2 de Ciclobenzaprina Clorhidrato. La preparacin de los medios se
encuentra detallada en el punto 8.2.1.
Criterio de aceptacin: Ciclobenzaprina Clorhidrato debe ser soluble en volmenes de
250 mL o menos, en los cuatro medios seleccionados.

65
8.4. Permeabilidad
Existen numerosas tcnicas para calcular o determinar la velocidad de paso a
travs de membranas, que pueden utilizarse para estudiar la absorcin oral en seres
humanos. El principio activo se considera altamente permeable cuando se establece
que la fraccin absorbida de la dosis administrada en seres humanos es del 90% o
ms, basndose en una determinacin de balance de masa o en la comparacin con
una dosis de referencia intravenosa (FDA, 2000).
Para respaldar la alta permeabilidad del frmaco, se deber presentar resultados
propios o antecedentes cientficos vlidos que respalden la alta permeabilidad del
principio activo (ISP, 2007).
Existen varias tcnicas para demostrar la permeabilidad de un principio activo
determinado, pero dentro de los ms simples tenemos la determinacin de la lipofilia a
travs del clculo de Log P y cLog P a travs de programas informticos, como el
Software ChembioDraw Ultra 11.0, que fue utilizado para obtener los valores de Log P y
cLog P de Ciclobenzaprina.
8.4.1. Bsqueda Bibliogrfica
Una de las principales propiedades de una molcula es su coeficiente de
particin entre una fase de aceite y otra de agua, conocido como Log P. Este
coeficiente mide la lipofilia de la molcula y permite predecir con que facilidad
atravesar las membranas (Aulton, 2004). Existen varios mtodos para determinar la
lipofilia de la molcula, pero hoy en da, en vez de determinar directamente Log P se
pueden utilizar mtodos informticos para calcularlo, como el Software ChembioDraw

66
Ultra 11.0. La correlacin entre los valores calculados y medidos es razonablemente
buena. Log P puede calcularse dividiendo la molcula en fragmentos y calculando la
contribucin de cada fragmento a la lipofilia global, a menudo conocido como cLog P
(Aulton, 2004). En la literatura no fueron encontrados antecedentes sobre estudios de
balance de masa, o permeabilidad intestinal para este frmaco. Sin embargo, esta
seccin es respaldada mediante los resultados de cLog P y Log P para Ciclobenzaprina
entregados por el Software ChembioDraw Ultra 11.0 y comparados con los obtenidos
para Metoprolol como frmaco de alta permeabilidad, a travs del mismo programa.
En las ltimas dcadas se han utilizado cada vez ms las tcnicas con cultivos
celulares para determinar la absorcin de las molculas; actualmente se aceptan como
modelo de la absorcin (Aulton, 2004).
En la bsqueda de antecedentes cientficos, no fueron encontrados estudios de
balance de masa o permeabilidad intestinal para Ciclobenzaprina, pero dentro de la
literatura se encontr un estudio de permeabilidad de Ciclobenzaprina en clulas MDCK
tipo II, (corresponden a clulas de rin de canino) que fue elaborado para estudiar el
paso del frmaco a travs de la barrera hematoenceflica por Mahar et al (2002). Las
clulas MDCK son utilizadas en estudios de transporte de frmacos en modelos de
mucosa intestinal, barrera hematoenceflica y rin. Teniendo este estudio como
antecedente, se procedi a realizar una correlacin con otras fuentes cientficas vlidas,
sobre permeabilidad intestinal, que no consideran a Ciclobenzaprina dentro sus
estudios, pero s a otros frmacos que estn dentro del estudio de permeabilidad de
Ciclobenzaprina en clulas MDCK tipo II.

67
Analizando los resultados de permeabilidad, se observa que aquellos que
superan la permeabilidad de Metoprolol, estn clasificados como de Alta Permeabilidad,
como en otros estudios enfocados a analizar la permeabilidad intestinal.
La primera correlacin realizada (Fig. 57) fue entre el estudio de permeabilidad
en clulas MDCK tipo II y un estudio realizado por Wu et al (2005), sobre la clasificacin
segn la permeabilidad intestinal de frmacos. Una segunda correlacin realizada fue la
del estudio de permeabilidad en clulas MDCK tipo II con otro estudio de permeabilidad
jejunal humana (Fig. 58 y 59) realizado por Kasim et al (2004), considerando a
Metoprolol como principio activo de alta permeabilidad.
Una de las lneas celulares ms utilizadas son las Caco-2. Las clulas Caco-2
son una lnea de clulas del carcinoma de colon humano que fueron propuestas como
modelo para la absorcin oral de frmacos. En cultivo, estas clulas se diferencian
espontneamente formando una monocapa de enterocitos polarizados parecidos a los
del intestino delgado (Aulton, 2004). Para demostrar que existe una correlacin entre la
utilizacin de estas dos lneas celulares, al momento de respaldar los resultados de
permeabilidad, se recurri a la literatura en bsqueda de algn antecedente que
respaldara dicha correlacin. As es como Ranaldi et al (1992) presentan un estudio en
clulas Caco-2 y MDCK (Fig. 60, 61 y 62).
Criterio de aceptacin: A travs de la bsqueda de antecedentes cientficos vlidos,
se debe demostrar la alta permeabilidad de Ciclobenzaprina.

68
8.5. LiberacinDisolucin
Para la Bioexencin de un estudio de Bioequivalencia in vivo, el producto en
estudio deber exhibir caractersticas de liberacin-disolucin in vitro muy rpidas o
rpidas (criterios de clasificacin fueron mencionados en el punto 3.6.3.), dependiendo
de las propiedades SCB del principio activo (ISP, 2007). Los aparatos y procedimientos
generales para demostrar la cintica de liberacindisolucin del principio activo desde
su forma farmacutica debern estar validados.
La aprobacin de productos similares empleando estudios comparativos de
liberacin-disolucin in vitro, deben basarse en la generacin de perfiles cinticos de
disolucin realizados en aparatos de disolucin.
Este estudio se llev a cabo utilizando los medios HCl 0,1 N, pH 1,2; Buffer
Acetato pH 4,5 y Buffer Fosfato pH 6,8 en las condiciones de disolucin detalladas a
continuacin, utilizando los siguientes aparatos de disolucin:
Fig. 9. Aparatos de disolucin utilizados

Equipo Marca Modelo
Test de disolucin N2 Hanson Research SR8 Plus
Test de disolucin N3 Hanson Research SR8 Plus
Test de disolucin N5 Hanson Research Vision Elite 8
Los tres aparatos detallados en la tabla fueron los utilizados para la realizacin
del estudio de liberacin-disolucin. El modelo Vision Elite 8 de Hanson Research

69
contiene un muestreador automtico a diferencia de los otros dos aparatos de
disolucin, en los que el muestreo se debe hacer de forma manual. El equipo utilizado
en el estudio de liberacin-disolucin es el aparato nmero 2 de la USP, tipo paleta.
A continuacin, se presenta una tabla con las condiciones necesarias para
realizar el ensayo de liberacin-disolucin.
Fig. 10. Condiciones para las pruebas de disolucin

Medio Solucin HCl pH 1,2 Buffer Acetato pH 4,5 Buffer Fosfato pH 6,8
Volumen 900 mL 900 mL 900 mL
Aparato N2 (USP), Paletas N2 (USP), Paletas N2 (USP), Paletas
Velocidad 75 r.p.m 75 r.p.m 75 r.p.m
Tiempo de muestreo 5-10-15-20 minutos 5-10-15-20 minutos 5-10-15-20 minutos
Temperatura 37C 0,5C 37C 0,5C 37C 0,5C
El objetivo de este estudio es establecer una comparacin entre las cinticas de
liberacin-disolucin del producto en estudio y el producto de referencia. Por lo tanto,
por cada medio se realizan pruebas de disolucin con 12 unidades de cada lote, por 20
minutos totales (muestreando cada 5 minutos), en 900 mL de medio, a 75 r.p.m y a
37C, utilizando el aparato N2, tipo paleta.
A continuacin se presenta una tabla con la descripcin de los productos
utilizados durante el estudio de liberacin-disolucin.

70
Fig. 11. Descripcin de los productos en estudio

NUMERO
PRODUCTO PRESENTACIN POTENCIA
DE LOTE
Producto en estudio Comprimidos recubiertos 1 10 mg
Producto de referencia Comprimidos recubiertos 1 10 mg
En este estudio, se analizaron tres lotes del producto en estudio y un lote del
producto de referencia, con dos cinticas de liberacin-disolucin por cada lote. Por lo
tanto, se realizaron un total de 8 cinticas de liberacin-disolucin por cada medio de
disolucin.
8.5.2. Preparacin de las muestras
Para Medio HCl 0,1 N (pH 1,2), Buffer Acetato pH 4,5 y Buffer Fosfato pH 6,8: Pesar
y transferir individualmente 1 comprimido a cada uno de los vasos del equipo de
disolucin que contienen 900 mL de medio. Se debe extraer un volumen de muestra
filtrada cada 5 minutos y realizar las diluciones pertinentes, para finalmente analizar las
muestras en el cromatgrafo. Para poder cuantificar las muestras obtenidas, se debi
preparar un estndar 1 y un estndar 2 de Ciclobenzaprina Clorhidrato. La preparacin
de los medios se encuentra detallada en el punto 8.2.1.
Criterio de aceptacin: para cada cintica de liberacin-disolucin realizada, el
producto farmacutico debe presentar una rpida o muy rpida liberacin-disolucin.

71
9. RESULTADOS
9.1. Validacin de la metodologa analtica
a) Selectividad
La tabla mostrada a continuacin resume los resultados obtenidos en la prueba
de selectividad, para todos los medios de disolucin.
Fig. 12. Tabla con resumen de resultados de Selectividad del medio y matriz
ESPECIFICACION DE
TIPO DE ENSAYO RESULTADO VEREDICTO
PUREZA
SIN PRESENCIA DE SEALES
SELECTIVIDAD AL AL TIEMPO DE RETENCION DE
NO HAY SEAL CUMPLE
MEDIO DISOLUCIN CICLOBENZAPRINA
CLORHIDRATO
SIN PRESENCIA DE SEALES
SELECTIVIDAD A LA AL TIEMPO DE RETENCION DE
NO HAY SEAL CUMPLE
MATRIZ CICLOBENZAPRINA
CLORHIDRATO
b) Linealidad
Las siguientes tablas presentan los resultados de Linealidad para los distintos
medios.
Fig. 13. Resumen de resultados en relacin al factor de respuesta

72
Fig. 14. Resultados de Linealidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2
Fig. 15. Resultados de Linealidad para Buffer Ftalato, pH 3,0

73
Fig. 16. Resultados de Linealidad para Buffer Acetato, pH 4,5
Fig. 17. Resultados de Linealidad para Buffer Fosfato, pH 6,8

74
c) Exactitud y Precisin
En las siguientes tablas se presentan los resultados obtenidos para los
parmetros Exactitud y Precisin de los medios.
Fig. 18. Resultados de Exactitud y Precisin para el medio HCl 0,1 N, pH 1,2
Recup: porcentaje de recuperacin.

X = Promedio.
SD = Desviacin estndar.
RSD = Desviacin estndar relativa.
75
Fig. 19. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Ftalato pH 3,0

X = Promedio.
76
Fig. 20. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Acetato, pH 4,5

X = Promedio.
77
Fig. 21. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Fosfato, pH 6,8

X = Promedio.
78
d) Precisin Intermedia
A continuacin se presentan los resultados para la Precisin Intermedia en Buffer
acetato pH 4,5 y Buffer fosfato pH 6,8.
Fig. 22. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Acetato pH 4,5 (Lote 1)
X = Promedio.
DS = Desviacin estndar.
79
Fig. 23. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Fosfato pH 6,8 (Lote 2)
X = Promedio.
DS = Desviacin estndar.
80
e) Estabilidad
A continuacin se presentan los resultados de Estabilidad para los distintos
medios.
Fig. 24. Resultados Estabilidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2

Estandares y muestras iniciales Valores de 24 Hrs (Ambiente)
Dia 1 PESO CONC (mg/cp) Lectura X 24 Hr Lectura X % Recup
M1 22,2 10,04 9,93 M1 9,97

9,93 9,98 100,5%
M1 22,2 10,04 9,93 M1 9,99
M2 22,1 9,99 10,06 M2 10,05
10,03 10,11 100,7%
M2 22,1 9,99 10,00 M2 10,16
X Recup 100,6% CUMPLE
St 1 22,2 10,04 St 1 9,90

9,90 98,6%
St 2 22,2 10,04 St 1 9,90
St 2 10,19
10,19 101,5%
St 2 10,19
VEREDICTO: CUMPLE
MUESTRAS
Estandares y muestras iniciales Valores de 24 Hrs (Refrigerados)
M1 22,2 10,04 9,93 M1 10,02

9,93 10,05 101,2%
M1 22,2 10,04 9,93 M1 10,08
M2 22,1 9,99 10,06 M2 10,23
10,03 10,18 101,5%
M2 22,1 9,99 10,00 M2 10,13
St 1 22,2 10,04 St 1 10,06

10,06 100,1%
St 2 22,2 10,04 St 1 10,05
St 2 9,98
10,04 100,0%
St 2 10,09
VEREDICTO: CUMPLE
X = Promedio.
% Recup = Porcentaje de recuperacin.
X Recup = Promedio recuperacin.
81
Fig. 25. Resultados Estabilidad para Buffer Ftalato pH 3,0

M1 222,6 10,10 9,98 M1 10,29

10,01 10,30 102,9%
M1 222,6 10,10 10,03 M1 10,30
M2 222,2 10,08 9,83 M2 10,01
9,84 9,98 101,4%
M2 222,2 10,08 9,84 M2 9,94
St 1 222,4 10,09 St 1 10,07

10,09 100,0%
St 2 222,4 10,09 St 1 10,10
St 2 9,99
10,01 99,2%
St 2 10,03
VEREDICTO: CUMPLE
MUESTRAS
M1 222,6 10,10 9,98 M1 10,08

10,01 10,08 100,7%
M1 222,6 10,10 10,03 M1 10,07
M2 222,2 10,08 9,83 M2 9,97
9,84 9,99 101,6%
M2 222,2 10,08 9,84 M2 10,01
St 1 222,4 10,09 St 1 10,27

10,28 101,9%
St 2 222,4 10,09 St 1 10,29
St 2 10,06
10,07 99,8%
St 2 10,07
VEREDICTO: CUMPLE
X = Promedio.
82
Fig. 26. Resultados Estabilidad para Buffer Acetato pH 4,5

MUESTRAS
M1 22,2 10,04 10,28 M1 10,11

10,26 10,11 98,5%
M1 22,2 10,04 10,24 M1 10,11
M2 22,3 10,09 10,34 M2 10,18
10,36 10,20 98,5%
M2 22,3 10,09 10,37 M2 10,22
St 1 22,3 10,09 St 1 9,86

9,87 97,9%
St 2 22,4 10,13 St 1 9,88
St 2 9,93
9,93 98,0%
St 2 9,93
VEREDICTO: CUMPLE
MUESTRAS
M1 22,2 10,04 10,28 M1 10,12

10,26 10,175 99,2%
M1 22,2 10,04 10,24 M1 10,23
M2 22,3 10,09 10,34 M2 10,23
10,36 10,26 99,1%
M2 22,3 10,09 10,37 M2 10,29
St 1 22,3 10,09 St 1 9,89

9,88 98,0%
St 2 22,4 10,13 St 1 9,87
St 2 9,98
9,965 98,4%
St 2 9,95
VEREDICTO: CUMPLE
X = Promedio.
83
Fig. 27. Resultados Estabilidad para Buffer Fosfato pH 6,8

M1 222,0 10,07 10,01 M1 10,01

10,01 9,99 99,9%
M1 222,0 10,07 10,00 M1 9,97
M2 222,1 10,07 10,02 M2 10,00
10,03 10,00 99,7%
M2 222,1 10,07 10,04 M2 9,99
St 1 222,5 10,09 St 1 10,13

10,12 100,2%
St 2 222,1 10,07 St 1 10,10
St 2 10,04
10,03 99,6%
St 2 10,02
VEREDICTO: CUMPLE
MUESTRAS
M1 222,0 10,07 10,01 M1 10,16

10,01 10,14 101,3%
M1 222,0 10,07 10,00 M1 10,12
M2 222,1 10,07 10,02 M2 9,76
10,03 9,77 97,4%
M2 222,1 10,07 10,04 M2 9,78
St 1 222,5 10,09 St 1 10,07

10,12 100,2%
St 2 222,1 10,07 St 1 10,16
St 2 10,17
10,17 100,9%
St 2 10,17
VEREDICTO: CUMPLE
X = Promedio.
84
f) Robustez
En las siguientes tablas se presentan los resultados obtenidos para la robustez.
Fig. 28. Resultados Robustez para medio HCl 0,1 N, pH 1,2 (muestras con matriz)
Valor del efecto DICTAMEN Result experiment %

Valor del efecto Tiempo preparacin-lectura 0,00675 No Significativo s 106,2%
Valor del efecto concentracion cido 0,01275 No Significativo t 106,3%
Valor del efecto volumen de inyeccin 0,00125 No Significativo u 105,2%
Valor del efecto concentracin Fase Mvil -0,00375 No Significativo v 105,5%
Valor del efecto Temperatura -0,00325 No Significativo w 106,0%
Valor del efecto Longitud de Onda -0,00200 No Significativo x 105,9%
Valor del efecto flujo 0,00225 No Significativo y 104,7%
z 103,9%
Fig. 29. Resultados Robustez para medio HCl 0,1 N, pH 1,2 (muestras sin matriz)

Valor del efecto Tiempo preparacin-lectura 0,03025 Significativo s 102,1%
Valor del efecto pH Fase Mvil 0,01875 No Significativo t 107,7%
Valor del efecto volumen de inyeccin -0,01125 No Significativo u 101,5%
Valor del efecto concentracin de MeOH 0,01575 No Significativo v 101,4%
Valor del efecto flujo -0,01575 No Significativo y 100,1%
z 99,9%
: Cada vez que se prepararon muestras para medio HCl 0,1 N (muestras sin matriz),
ya sea para pruebas de solubilidad y cintica de liberacin-disolucin, fueron analizadas
el mismo da que fueron preparadas para evitar alguna significancia en los resultados.
85
Fig. 30. Resultados Robustez para Buffer Ftalato, pH 3,0 (muestras sin matriz)
86
Fig. 31. Resultados Robustez para Buffer Acetato, pH 4,5 (muestras con matriz)
Fig. 32. Resultados Robustez para Buffer Acetato, pH 4,5 (muestras sin matriz)
MUESTRA TIPO 2 (No contiene Matriz) : Robustez del ensayo de solubilidad

Valor del efecto Tiempo preparacin-lectura -0,00921 No Significativo s 100,6%
Valor del efecto pH Fase Mvil -0,00050 No Significativo t 101,1%
Valor del efecto volumen de inyeccin -0,00075 No Significativo u 100,9%
Valor del efecto concentracin de MeOH 0,00074 No Significativo v 100,7%
z 101,6%
87
Fig. 33. Resultados Robustez para Buffer Fosfato, pH 6,8 (muestras con matriz)
Fig. 34. Resultados Robustez para Buffer Fosfato, pH 6,8 (muestras sin matriz)
MUESTRA TIPO 2 (No contiene Matriz) : Robustez del ensayo de solubilidad

Valor del efecto Tiempo preparacin-lectura 0,00496 No Significativo s 102,3%
Valor del efecto pH Fase Mvil 0,00297 No Significativo t 102,8%
Valor del efecto volumen de inyeccin 0,00521 No Significativo u 103,7%
Valor del efecto concentracin de MeOH -0,01611 No Significativo v 104,1%
z 99,7%
88
g) Influencia del Filtro
A continuacin se presenta una tabla con el resumen de los resultados para la
influencia del filtro.
Fig. 35. Resumen resultados Influencia del Filtro para todos los medios
89
9.2. Cromatogramas
A continuacin se presentan los Cromatogramas obtenidos en cada uno de los
medios.
Fig. 36. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato en medio HCl 0,1 N, pH 1,2

Clorhidrato, en medio HCl 0,1 N, pH 1,2
90
Fig. 38. Cromatograma para el blanco medio HCl 0,1 N, pH 1,2
Fig. 39. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, medio HCl 0,1 N, pH 1,2
91
Fig. 40. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Ftalato pH 3,0
Fig. 41. Cromatograma para el blanco, Buffer Ftalato pH 3,0

92
Fig. 42. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato Buffer Acetato pH 4,5

Clorhidrato, Buffer Acetato pH 4,5
93
Fig. 44. Cromatograma para el blanco, Buffer Acetato pH 4,5
Fig. 45. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Acetato pH 4,5
94
Fig. 46. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Fosfato pH 6,8

Clorhidrato, Buffer Fosfato pH 6,8
95
Fig. 48. Cromatograma para el blanco, Buffer Fosfato pH 6,8
Fig. 49. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Fosfato pH 6,8
96
9.3. Solubilidad
A continuacin se presentan los resultados de los distintos ensayos de
solubilidad para el principio activo Ciclobenzaprina Clorhidrato.
Fig. 50. Resultados de Solubilidad medio HCl 0,1 N, pH 1,2
M = Muestra.
V/D = Volumen necesario para disolver una dosis de 10 mg de Ciclobenzaprina HCl.
X = Promedio.
D.S = Desviacin estndar.
%RSD = Desviacin estndar relativa.
97
Fig. 51. Resultados de Solubilidad Buffer Ftalato, pH 3,0
M = Muestra.
X = Promedio.
98
Fig. 52. Resultados de Solubilidad Buffer Acetato pH 4,5
M = Muestra.
X = Promedio.
99
Fig. 53. Resultados de Solubilidad Buffer Fosfato pH 6,8
M = Muestra.
X = Promedio.
Fig. 54. Representacin grfica de los resultados de Solubilidad de

Ciclobenzaprina Clorhidrato en la forma de perfil de Solubilidad versus pH
Pe rfil de Solubilida d de Ciclobe nza prina Clorhidra to ve rsus

pH
180,0
160,0
Solubilidad (mg/mL)
140,0
120,0
100,0
80,0
60,0
40,0
20,0
0,0
1,2 3 4,5 6,8
pH m e dio
100
9.4. Permeabilidad
A continuacin se presentan los antecedentes que entregan un respaldo a los
resultados de permeabilidad propuestos para Ciclobenzaprina.
Fig. 55. Resultados de Permeabilidad segn Software ChembiowDraw Ultra

Principio activo Log P cLog P
Ciclobenzaprina 4,31 5,097
Metoprolol 2,18 1,4834
Fig. 56. Resultados Permeabilidad a travs de la barrera hematoenceflica en

clulas MDCK tipo II
Transporte Apical- Transporte Basolateral-
Principio activo Basolateral Apical
(nm/s) (nm/s)
Ciclobenzaprina 385 375
Metoprolol 296 359
(Modificado de Mahar et al, 2002)
101
Fig. 57. Tabla Clasificaciones de Permeabilidad para frmacos

Clasificacin Permeabilidad en
Frmacos Permeabilidad clulas MDCK
intestinal tipo II
Amitriptilina Alta Alta
Buspirona Alta Alta
Clorpromazina Alta Alta
Desipramina Alta Alta
Fluoxetina Alta Alta
Midazolam Alta Alta
Antipirina Alta Alta
Atenolol Alta Alta
Clorfeneramina Alta Alta
Verapamilo Alta Alta
Metoprolol Alta Alta
Atenolol Baja Baja
Cimetidina Baja Baja
Trimetoprim Baja Baja
(Adaptado desde Wu et al, 2005; y Mahar et al, 2002)
Nota figura 57: En la tabla se puede observar que la correlacin de los resultados de
ciertos frmacos considerados altamente permeables en el estudio de permeabilidad en
clulas MDCK tipo II y el realizado por Wu et al (2005) es bastante buena, ya que once
de los catorce principios activos seleccionados muestran una alta permeabilidad, y tres
de los catorce principios activos muestran una baja permeabilidad en ambos estudios.
102
Fig. 58. Correlacin de permeabilidades jejunales humanas con permeabilidades

determinadas en clulas MDCK tipo II
Permeabilidad Jejunal Humana Permeabilidad BBB(blood-brain barrier),

Frmacos 4
(x10 cm/s) con clulas MDCK tipo II (nm/s)
Atenolol 0,20 2,56
Cimetidina 0,26 3,96
Metoprolol 1,34 296
Propanolol 2,91 403
Carbamazepina 4,3 602
Antipirina 5,6 792
Verapamilo 6,8 415

(Adaptado desde Kasim et al, 2004; y Mahar et al, 2002)
Fig. 59. Grfico correlacin de permeabilidades jejunales humanas con

permeabilidades determinadas en clulas MDCK tipo II
Grafico de correlacin de la permeabilidad jejunal humana con

resultados en celulas MDCK tipo II
Frmac os
6
Peff x E4 (cm/s)
0
0 200 400 600 800
Pa pp (nm /s) e n C lula s MDCK tipo II
(Adaptado desde de Kasim et al, 2004; y Mahar et al, 2002)
Nota figura 58 y 59: Considerando a Metoprolol como un principio activo de alta
permeabilidad, en ambos estudios se demuestra una buena correlacin con respecto a
los principios activos analizados.

103
Fig. 60. Correlacin de Clulas MDCK con Clulas Caco-2
Transporte Apical-Basolateral Transporte Basolateral-Apical
% frmaco/hora % frmaco/hora
Frmacos
Clulas Clulas
Clulas MDCK Clulas MDCK
Caco-2 Caco-2
Trimetoprim 3,3 3,9 8,4 5,1
Rifampicina 5,2 4 6,7 5,6
d-Cicloserina 14,3 0,7 1,5 1,1
Rifapentina 18,1 20,3 19,2 20,2
Novobiocin 19,4 9,3 19,8 9,3
Isoniazida 35,6 21,7 36,2 17,1
Acido Nalidixico 132,7 143,2 131,0 129,0

(Modificado de Ranaldi et al, 1992)
Fig. 61. Grfico correlacin clulas MDCK Fig. 62. Grfico correlacin clulas MDCK
con clulas Caco-2, Apical-Basolateral con clulas Caco-2, Basolateral-Apical
Gr fico Corre la cin C lula s M DCK con C lula s Grfico Correlacin Clulas MDCK con Clulas Caco-2,
Ca co-2, Apica l-Ba sola te ra l. Basolateral-Apical
140
140
120 120
R 2 = 0.977 5 R2 = 0.9749
Clulas MDCK
100
Clulas MDCK
100
80 Frmac os 80 Frmacos
60 Lineal (Frmac os) 60 Lineal (Frmacos)
40 40
20 20
0
0
0 50 100 150
0 50 100 150
C lula s Ca co-2 Clulas Caco-2
(Adaptado desde Ranaldi et al, 1992) (Adaptado desde Ranaldi et al, 1992)
Nota figura 60, 61 y 62: En la tabla y en los grficos del estudio de Ranaldi et al (1992)
se puede inferir la correlacin entre ambas lneas celulares cuando se habla de
permeabilidad.
104
9.5. Liberacin-Disolucin
A continuacin se presentan los resultados del estudio de liberacin-disolucin
para los medios a pH 1,2, pH 4,5 y pH 6,8.

Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)
X = Promedio.
C.V= Coeficiente de variacin.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
105
El clculo de los valores corregidos para cada uno de los ensayos de liberacin-
disolucin se realiza de la siguiente manera:
Fig. 64. Clculo de los valores corregidos para las pruebas de disolucin realizadas
en el aparato de disolucin modelo Vision Elite, Hanson Research
Tiempo Clculo
5 min Valor de lectura 5 min
10 min Valor de lectura 10 min + (Valor de lectura 5 min * (12/900))

Valor de lectura 15 min + (Valor de lectura 5 min * (12/900)) + (Valor Corregido 10
15 min
min * (12/900)).
20 min
min * (12/900)) + (Valor Corregido 15 min * (12/900)).
Fig. 65. Clculo de los valores corregidos para las pruebas de disolucin realizadas
en los aparatos de disolucin modelo SR8 Plus, Hanson Research
Tiempo Clculo
5 min Valor de lectura 5 min
10 min Valor de lectura 10 min + (Valor de lectura 5 min * (20/900))

15 min
min * (20/900)).
20 min
min * (20/900)) + (Valor Corregido 15 min * (20/900)).
106
Fig. 66. Grfico perfil liberacin-disolucin producto en estudio

(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, medio HCl 0,1 N (pH 1,2)
Perfil Liberacin-Disolucin producto en estudio

Lote 1, Medio pH 1,2
V1
V2
120,0%
V3
Ciclobenzaprina H Cl
100,0% V4
% d isuelto de
80,0% V5
60,0% V6
40,0% V7
20,0% V8
0,0% V9
5 min 10 min 15 min 20 min V10

V11
Tiempo
V12

Perfil Liberacin-Disolucin promedio

Producto en estudio, Lote 1
Medio pH 1,2
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
5 min 10 min 15 min 20 min
Tiempo (min)
107

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
108


Lote 2. Medio pH 1,2
V1
V2
120,0%
V3
Ciclobenzaprina HCl
100,0% V4
% d isuelto de
80,0% V5
60,0% V6
40,0% V7
20,0% V8
0,0% V9
V11
Tiempo
V12


Medio pH 1,2
120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
109

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
110


V1
V2
120,0%
V3
Ciclobenzaprina H Cl
100,0%
V4
% d isuelto de
80,0% V5
60,0% V6
40,0% V7
20,0% V8
0,0% V9
V11
Tiempo
V12


Medio pH 1,2
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
111
Fig. 74. Perfil liberacin-disolucin producto de referencia (Ciclobenzaprina HCl)

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
112

Perfil Liberacin-Disolucin producto de referencia

V1
120,0%
V2
% disu elto de Cicloben zaprina
100,0% V3
V4
80,0% V5
60,0% V6
HCl
V7
40,0% V8
V9
20,0%
V10
0,0% V11
Tiempo (min)


Producto de referencia, Lote 1
Medio pH 1,2
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disu elto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
113
Fig. 77. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para medio HCl 0,1 N, pH 1,2
% disuelto a los 15
Producto N de Lote Lmite Resultado
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
Estudio 1 93,2% 85% disuelto a los
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
PROMEDIO 99,2 % CLASIFICACIN
liberacin-disolucin
% disuelto a los 15
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
Referencia 1 93,8% 85% disuelto a los
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
PROMEDIO 93,8 % CLASIFICACIN
liberacin-disolucin
114

Lote 1, Buffer Acetato (pH 4,5)
X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
115

(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, Buffer Acetato (pH 4,5)
Perfil Li be ra cin-Dis olucin produc to en e studio

Lote 1. Me dio Buffer Ac etato pH 4,5
V1
120,0%
V2
% disuelto de Ciclobenz aprina
100,0% V3
V4
80,0% V5
V6
60,0%
HCl
V7
40,0% V8
V9
20,0%
V10
V11
0,0%
5 min 10 m in 15 min 20 min V12
Tiempo (min)


Medio Buffer Acetato pH 4,5
120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
116

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
117

Perfil Libe ra cin-Disol ucin produc to en es tudi o

Lote 2. Medi o Buffe r Ac etato pH 4 ,5
V1
120,0% V2
% disuelto de Ciclobenz aprina
100,0% V3
V4
80,0% V5
V6
60,0%
HCl
V7
40,0% V8
V9
20,0%
V10
0,0% V11
Tiempo (min)


120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
118

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
119

Perfil Libe ra cin-Disol ucin produc to en es tudi o

Lote 3. Medi o Buffe r Ac etato pH 4 ,5
120,0% V1
V2
% disuelto de Ciclobenzaprina
100,0% V3
V4
80,0%
V5
60,0% V6
HCl
V7
40,0% V8
V9
20,0%
V10
0,0% V11
5 min 10 m in 15 min 20 min V12
Tiempo (min)


120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiemp o (min )
120

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
121


Lote 1. Medio Buffer Acetato pH 4,5
V1
V2
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
V3
100,0%
V4
% disu elto de
80,0%
V5
60,0% V6
40,0% V7
20,0% V8
0,0% V9
Tiempo V11
V12


120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
122
Fig. 90. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para Buffer pH 4,5

% disuelto a los 15
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
PROMEDIO 102,5 % CONCLUSION
liberacin-disolucin
% disuelto a los 15
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
liberacin-disolucin
123

Lote 1, Buffer Fosfato (pH 6,8)
X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
124

(Ciclobenzaprina HCl) Lote 1, Buffer Fosfato (pH 6,8)
Perfil Liberacin-Di sol uc in producto en estudio

Lote 1 . Me dio Buffer Fosfato pH 6,8
V1
120,0%
% disuelto de Ciclobenzaprina HCl
V2
100,0% V3
V4
80,0% V5
V6
60,0%
V7
40,0% V8
V9
20,0% V10
V11
0,0%
V12
Tiempo (min)


Medio Buffer Fosfato pH 6,8
120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
125

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
126

P erfil Libe ra cin-Disol ucin produc to en es tudi o

Lote 2. Me dio Buffer Fosfato pH 6 ,8
120,0% V1
% disuelto de Ciclobenzaprina HCl
V2
100,0%
V3
V4
80,0%
V5
60,0% V6
V7
40,0%
V8
20,0% V9
V10
0,0%
V11
5 m in 10 min 15 min 20 m in
V12
T iempo (min)

Perfil Lib eracin-D isolucin prom edio

Producto en estudio, Lo te 2
Medio B uffer Fosfato p H 6,8
12 0,0%
10 0,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
8 0,0%
6 0,0%
4 0,0%
2 0,0%
0,0%
5 min 10 m in 15 m in 20 m in
Tiem po (m in)
127

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
128


Lote 3. Medio Buffer Fosfato pH 6,8
120,0%
% disu elto de Ciclobenzaprina HCl
V1
100,0% V2
V3
80,0% V4
V5
60,0%
V6
40,0% V7
V8
20,0% V9
V10
0,0%
V11
V12
Tiempo (min)


120,0%
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
129

X = Promedio.
MAX = Mximo.
MIN = Mnimo.
130


Lote 1. Medio Buffer Fosfato pH 6,8
V1
120,0% V2
V3
100,0%
Ciclobenzaprina HCl
V4
% disuelto de
80,0% V5
60,0% V6
V7
40,0% V8
20,0% V9
V10
0,0%
V11
V12
Tiempo (min)


120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo (min)
131
Fig. 103. Resumen resultados estudio liberacin-disolucin para Buffer pH 6,8

% disuelto a los 15
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Mayor o igual a
Muy rpida
Estudio 3 104,1 % 85% disuelto a los
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
PROMEDIO 102,0% CONCLUSION
liberacin-disolucin
% disuelto a los 15
minutos.
Mayor o igual a
Muy rpida
liberacin-disolucin
15 min.
Muy rpida
liberacin-disolucin
132
Fig. 104. Tabla que entrega el resumen final de los resultados del estudio de
liberacin-disolucin por lote de producto
% disuelto
PRODUCTO LOTE MEDIO Conclusin
15 min
HCl 0,1 N, pH 1,2 93,2
Muy rpida
1 Buffer acetato pH 4,5 103,6
liberacin-disolucin
Buffer fosfato pH 6,8 101,5
HCl 0,1 N, pH 1,2 99,4

Muy rpida
Estudio 2 Buffer acetato pH 4,5 101,8
liberacin-disolucin
HCl 0,1 N, pH 1,2 105,1

Muy rpida
3 Buffer acetato pH 4,5 102,0
liberacin-disolucin
PRODUCTO LOTE MEDIO % disuelto Conclusin

HCl 0,1 N, pH 1,2 93,8
Muy rpida
Referencia 1 Buffer acetato pH 4,5 98,1
liberacin-disolucin
133
liberacin-disolucin (medio HCl 0,1 N, pH 1,2)
Perfiles comparativos de liberacin-disolucin en

medio pH 1,2 P. ESTUDIO
P. REFERENCIA
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo
liberacin-disolucin (Buffer Acetato, pH 4,5)

medio buffer Acetato pH 4,5
P. EST UDIO
P. REFERENCIA
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo
134
Fig.107. Grfico que entrega el promedio de los resultados para el estudio de

liberacin-disolucin (Buffer Fosfato, pH 6,8)

medio buffer Fosfato pH 6,8 P. EST UDIO
P. REFERENCIA
120,0%
Ciclobenzaprina HCl
100,0%
% disuelto de
80,0%
60,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Tiempo
135
10. DISCUSIN
El desarrollo de los estudios Bioequivalentes ha sido una herramienta
fundamental al momento de demostrar intercambiabilidad entre productos
farmacuticos denominados similares. Al demostrar Bioequivalencia, el producto en
estudio puede hacer uso del conocimiento generado por el producto innovador, el que
ha pasado por diferentes fases de estudio, para garantizar la calidad, seguridad y
eficacia de la forma farmacutica. Por lo tanto, si ambos productos demuestran similar
Biodisponibilidad, se puede tener la certeza razonable de que tendrn eficacia y
seguridad comparables.
A la hora de elaborar una solicitud de Bioexencin tiene un gran peso el
conocimiento del profesional junto a un correcto manejo de los equipos y materiales
empleados, al igual que una revisin bibliografa muy completa del principio activo en
cuestin, porque si bien es cierto, las propiedades de solubilidad y permeabilidad son
esenciales, no son las nicas a tener en cuenta al presentar un estudio de Bioexencin,
ya que entran en juego otros asuntos tales como el rango teraputico, la
farmacocintica del frmaco, la condicin de salud para la cual el medicamento es
usado, los excipientes utilizados en la formulacin y la evidencia de que el medicamento
no ha presentado problemas de eficacia y/o seguridad.
Diferencias entre distintas formas farmacuticas, tipo y calidad de las materias
primas empleadas por cada fabricante hacen necesario validar la metodologa para
cada producto en particular, por lo que todo nuevo mtodo analtico debe demostrar
idoneidad y aplicabilidad en un alto grado, asegurando que el mtodo sea confiable en
la produccin de resultados dentro de los intervalos propuestos, para cada uno de los
136
parmetros analizados en la validacin de la metodologa analtica. Cada uno de los
resultados obtenidos, ya sea en relacin a selectividad, linealidad, exactitud, precisin,
precisin intermedia, estabilidad, robustez e influencia del filtro, arrojaron resultados que
se encuentran dentro de los criterios de aceptacin propuestos cada uno de los
parmetro discutidos.
La determinacin de permeabilidad, solubilidad y cintica de liberacin-disolucin
son esenciales para corroborar la intercambiabilidad entre el producto en estudio y el de
referencia, a travs de resultados que se encuentren dentro de los criterios
normalizados y establecidos por la gua Tcnica G-BIOF 02 elaborada por la seccin de
Biofarmacia del ISP. Por lo tanto, los antecedentes cientficos, a partir de las
correlaciones realizadas con las distintas fuentes bibliogrficas, aportan evidencia
suficiente a favor de la alta permeabilidad de Ciclobenzaprina. Adems, la
determinacin de solubilidad y la cintica de liberacin-disolucin arrojan resultados que
se encuentran dentro de los criterios establecidos, con una alta solubilidad para
Ciclobenzaprina Clorhidrato y una muy rpida liberacin-disolucin para el producto en
estudio y el de referencia.
137
11. CONCLUSIONES
Para demostrar que los procedimientos realizados cumplen con los fines
previstos, se realiz la validacin de la metodologa analtica analizando cada uno de
los parmetros recomendados. Por lo tanto, la metodologa analtica utilizada en el
trabajo in vitro para Bioexencin de un estudio de Bioequivalencia, para dos
formulaciones comprimidos que contienen Ciclobenzaprina Clorhidrato 10 mg, es
adecuada para los fines previstos, ya que cumple con los parmetros de calidad
especificados.
A travs de un estudio in vitro de Bioexencin, se puede demostrar la
intercambiabilidad entre FFSO-LI, cumpliendo con los criterios establecidos por el SCB.
Alta permeabilidad, alta solubilidad y una rpida o muy rpida liberacin-disolucin son
los resultados necesarios para que los productos sean considerados Bioequivalentes.
Por lo tanto, los antecedentes cientficos de permeabilidad y los resultados de las
pruebas de solubilidad y cintica de liberacin-disolucin aportaran evidencia suficiente
a favor de la Bioequivalencia entre el producto en estudio y el de referencia que
contienen 10 mg de Ciclobenzaprina Clorhidrato.
Laboratorio Bag de Chile S.A. seguir desarrollando estudios de
Bioequivalencia, ya que estos se convierten en una nueva herramienta, con la que
Laboratorio Bag de Chile S.A. corrobora la eficacia y la seguridad de sus productos,
atendiendo las distintas necesidades de medicamentos en la poblacin.

138
12. PROYECCIN
El objetivo de un pas en materia sanitaria debe encaminarse a asegurar un
mercado de medicamentos de calidad, con estrategias accesibles y viables que
cumplan normas internacionales como las GMP. Las agencias regulatorias de nuestro
pas confrontan actualmente el reto de asegurar que la poblacin tenga acceso
potencial y real a medicamentos de comprobada accin teraputica, que tengan la
calidad suficiente para prevenir y curar las enfermedades. Todos los sectores oficiales,
acadmicos, profesionales e industriales involucrados, aceptan que los estudios de
Bioequivalencia, en sus diferentes modalidades, constituyen la va ms objetiva y
confiable para establecer equivalencia teraputica entre formulaciones de un mismo
principio activo.
La sustitucin de medicamentos es algo muy frecuente en nuestro pas ya sea
por la bsqueda de precios ms adecuados por parte del paciente o por convenios
suscritos por organismos privados dentro del acontecer farmacutico, que muchas
veces sustituyen los medicamentos recetados por el mdico por productos que
contienen el mismo principio activo, pero su eficacia, seguridad y calidad no han sido
corroborados a travs de los estudios adecuados. Por lo tanto, el cambio ms
importante para los pacientes ser que en el futuro podrn optar a medicamentos ms
baratos y seguros, pues la Bioequivalencia permitir mayor y mejor acceso a aquellos
frmacos que hoy en da no estn disponibles para gran parte de la poblacin, con
precios ms adecuados y un arsenal farmacolgico ms amplio que asegura la calidad,
seguridad y eficacia al paciente o servicio.

139
13. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Universidad Austral de Chile

PROFESOR PATROCINANTE: Daniel Prez O.

PROFESOR CO-PATROCINANTE: Alejandro Jerez M.

DESARROLLO DE UN TRABAJO IN VITRO PARA BIOEXENCIN DE UN ESTUDIO

Internado presentado como parte

CRISTOPHER AARON HERNNDEZ BUSTOS

Agradezco a Laboratorio Bag de Chile S.A. por otorgarme la oportunidad de

realizar mi internado en la unidad de Desarrollo y Biofarmacia. En especial, agradezco a

los Qumicos Farmacuticos, Analistas y Auxiliar de Servicio de esta unidad, que

amablemente me otorgaron su disposicin y cooperacin.

A cada uno de mis profesores de la Universidad Austral de Chile, que me guiaron y

acompaaron en mi proceso formativo.

mi desarrollo y crecimiento como persona.

3.4 Estudio de Bioequivalencia in vitro........... 29

3.6 Sistema de Clasificacin Biofarmacutico.......... 32

3.7 Buenas Prcticas de Manufactura y Control de Calidad.......... 45

10. Discusin........... 135

11. Conclusiones.................................. 137

12. Proyeccin................... 138

13. Referencias Bibliogrficas................. 139

Fig. 1. Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (SCB)........................................ 32

Fig. 2. Frmula para obtener el factor de similitud (f2)........................................... 37

Fig. 3. Medicin del alineamiento de los ejes......................................................... 40

Fig. 4. Estructura Ciclobenzaprina Clorhidrato....................................................... 52

Fig. 5. Diseo experimental para 7 variables en un estudio de Robustez............. 60

Fig. 6. Parmetros evaluados en la Robustez....................................................... 61

Fig. 7. Experimentos y sus parmetros correspondientes..................................... 62

Fig. 8. Criterios de aceptacin para la Robustez................................................... 63

Fig. 9. Aparatos de disolucin utilizados................................................................ 68

Fig. 10. Condiciones para las pruebas de disolucin............................................. 69

Fig. 11. Descripcin de los productos en estudio.................................................. 70

Fig. 13. Resumen de resultados en relacin al factor de respuesta...................... 71

Fig. 14. Resultados de Linealidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2.......................... 72

Fig. 15. Resultados de Linealidad para Buffer Ftalato, pH 3,0............................... 72

Fig. 16. Resultados de Linealidad para Buffer Acetato, pH 4,5............................ 73

Fig. 17. Resultados de Linealidad para Buffer Fosfato, pH 6,8.............................. 73

Fig. 19. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Ftalato, pH 3,0.......... 75

Fig. 20. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Acetato, pH 4,5......... 76

Fig. 21. Resultados de Exactitud y Precisin para el Buffer Fosfato, pH 6,8......... 77

Fig. 22. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Acetato pH 4,5

Fig. 23. Resultado Precisin Intermedia realizada en Buffer Fosfato pH 6,8

Fig. 24. Resultados Estabilidad para medio HCl 0,1 N, pH 1,2.............................. 80

Fig. 25. Resultados Estabilidad para Buffer Ftalato, pH 3,0.................................. 81

Fig. 26. Resultados Estabilidad para Buffer Acetato, pH 4,5................................. 82

Fig. 27. Resultados Estabilidad para Buffer Fosfato, pH 6,8................................. 83

Fig. 36. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato en medio HCl 0,1 N, pH 1,2.......... 89

Fig. 37. Cromatograma del producto en estudio, que contiene Ciclobenzaprina

Fig. 38. Cromatograma para el blanco medio HCl 0,1 N, pH 1,2........................... 90

Fig. 40. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Ftalato pH 3,0................... 91

Fig. 41. Cromatograma para el blanco, Buffer Ftalato pH 3,0................................ 91

Fig. 42. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato Buffer Acetato pH 4,5................... 92

Fig. 43. Cromatograma del producto en estudio, que contiene Ciclobenzaprina

Fig. 44. Cromatograma para el blanco, Buffer Acetato pH 4,5.............................. 93

Fig. 45. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Acetato pH

Fig. 46. Estndar Ciclobenzaprina Clorhidrato, Buffer Fosfato pH 6,8.................. 94

Fig. 47. Cromatograma del producto en estudio, que contiene Ciclobenzaprina

Fig. 48. Cromatograma para el blanco, Buffer Fosfato pH 6,8............................... 95

Fig. 49. Cromatograma de la matriz del producto en estudio, Buffer Fosfato pH

Fig. 50. Resultados de Solubilidad medio HCl 0,1 N, pH 1,2................................. 96

Fig. 51. Resultados de Solubilidad Buffer Ftalato, pH 3,0...................................... 97

Fig. 52. Resultados de Solubilidad Buffer Acetato, pH 4,5.................................... 98

Fig. 53. Resultados de Solubilidad Buffer Fosfato pH 6,8...................................... 99

Fig. 54. Representacin grfica de los resultados de Solubilidad de

Fig. 55. Resultados de Permeabilidad segn Software ChembiowDraw Ultra...... 100