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Nanoparticules et sant : des applications aux risques

potentiels. Lexemple du TiO2


Marie-Anne Guitou

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Marie-Anne Guitou. Nanoparticules et sant : des applications aux risques potentiels. Lexemple du
TiO2. Sciences pharmaceutiques. 2014. <dumas-01011269>

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UNIVERSIT DE BORDEAUX

U.F.R DES SCIENCES PHARMACEUTIQUES

Anne 2014 Thse N 27

Thse pour lobtention du

DILPME D TAT DE DOCTEUR EN PHARMACIE


Prsente et soutenue publiquement

Le 9 avril 2014

Par Marie-Anne GUITOU

Ne le 26 juillet 1988 Bordeaux (Gironde)

NANOPARTICULES ET SANT : DES APPLICATIONS AUX


RISQUES POTENTIELS
LEXEMPLE DU TiO2

Directeur de thse
Monsieur Herv SEZNEC

Jury

Madame Batrice LAZOU Matre de Confrences Prsident


Monsieur Herv SEZNEC Charg de recherche, CNRS Directeur
Madame Catherine HOURTIGUET Docteur en pharmacie Assesseur
Remerciements

Je remercie tout dabord Monsieur Philippe Moretto, directeur du Centre dEtudes Nuclaires

Bordeaux Gradignan de mavoir permis de raliser cette thse en partenariat avec le CENBG.

Je tiens galement exprimer toute ma reconnaissance lensemble des membres du jury pour le

temps consacr lvaluation de ce manuscrit.

Madame Batrice LAzou, je vous remercie pour lhonneur que vous mavez fait en prsidant cette

thse. Veuillez trouver dans ce travail lexpression de mes remerciements et de mon profond

respect.

Monsieur Herv Seznec, je vous suis trs reconnaissante davoir accept de diriger cette thse.

Votre disponibilit, ainsi que la qualit et la rigueur de votre enseignement mont permis de mener

bien ce travail. Veuillez trouver dans ce manuscrit, le tmoignage de ma gratitude et de ma plus

profonde considration.

Madame Catherine Hourtiguet, cest un grand plaisir de vous voir siger dans ce jury. Votre aide

dans mes dbuts professionnels ainsi que votre disponibilit mont t prcieuses durant mes annes

dtudes et plus particulirement pendant mon stage de 6me anne au sein de la Pharmacie de

Gnicart.

Je tiens largir ces remerciements lensemble de lquipe de la Pharmacie de Gnicart.

2
Je remercie galement Quentin de mavoir permis davancer ce travail grce ses explications

dexpert.

A ma famille,

Je ddie cette thse mes parents. Je vous remercie pour votre grand soutien et vos conseils

prcieux. Vous mavez aide me surpasser tout au long de mes tudes. Jespre que vous tes fiers

de mon parcours.

A Armelle, ma sur, Matthieu, mon frre et Hugues, mon beau frre. Je suis fire de vous avoir

mes cts. Merci pour votre soutien constant et si rconfortant.

A Vincent, tu mas permis dtre plus sereine pendant toutes ces annes dtude.

A Elise et Ins, mes nices. Vous tes ma joie de vivre !

A Mamie Elise,

A Papi Albert et Mamie Simone.

A mes amis de Pharmacie, avec qui jai pass dexcellents moments, des soires folles, de longues

sances BU, des TP houleux : Anas, Vanessa, Colombe, Marc, Laura, Emilie, Chlo, Stphanie,

Julie, Hlne, Marlne Merci tous pour votre bonne humeur. Je vous souhaite de vous panouir

dans votre vie professionnelle et personnelle.


3
Sommaire

Liste des abrviations ................................................................................................... 9

Liste des figures .......................................................................................................... 11

Liste des tableaux........................................................................................................ 13

Prambule ................................................................................................................... 14

Partie 1 : Le nanomonde ............................................................................................ 17

I. Dfinition du monde nanomtrique .................................................................................... 18

II. Classification des nanoparticules ........................................................................................ 21

1. Les nanoparticules souples ....................................................................................... 21

1.1. Nanoparticules dinspiration biologique : les liposomes ............................................... 21

1.2. Les polymres ................................................................................................................ 22

2. Les nanoparticules rigides ........................................................................................ 22

2.1. Les principales nanoparticules base de carbone .......................................................... 23

2.2. Les nanoparticules inorganiques rigides ........................................................................ 24

III. Synthse des nanoparticules ............................................................................................ 24

1. Mthodes physiques ....................................................................................................... 25

1.1. Evaporation/condensation .............................................................................................. 25

4
1.2. La pyrolyse laser ............................................................................................................ 25

1.3. Mthode arosol ............................................................................................................. 26

2. Mthodes chimiques ...................................................................................................... 26

2.1. Mthode sol-gel.............................................................................................................. 26

2.2. Production de liposomes ................................................................................................ 27

2.3. Mthodes solvo-thermale et hydro-thermale ................................................................. 27

IV. Proprits des nanoparticules ......................................................................................... 28

V. Modification de surface et/ou fonctionnalisation. Les applications au secteur

biomdical ..................................................................................................................................... 30

1. Amlioration de la stabilit en solution collodale......................................................... 30

2. Ciblage thrapeutique .................................................................................................... 31

3. Prvention de lopsonisation .......................................................................................... 31

4. Modification de la charge de surface ............................................................................. 32

5. Fonctionnalisation par un agent fluorescent pour limagerie. ........................................ 32

6. Passivation dagents de contraste nano-particulaires ............................................... 33

VI. Caractrisation des nanoparticules ................................................................................ 33

VII. Applications industrielles des nanoparticules ............................................................... 34

VIII. Rglementation ............................................................................................................. 36

Partie 2 : Applications des nanoparticules en thrapeutique et cosmtique ........... 40

I. Applications mdicales ......................................................................................................... 41

1. Systme de dlivrance de mdicaments, principe de la vectorisation. .......................... 41


5
2. Imagerie mdicale et oncologie ..................................................................................... 46

2.1. Applications loncologie ............................................................................................. 46

2.1.1. Dlivrance cible de molcules thrapeutiques vise anticancreuse. ................ 46

2.1.2. Exploitation de caractristiques propres aux nanoparticules ................................. 49

2.2. Applications limagerie ............................................................................................... 51

3. Antiseptiques : lexemple des nano-argents ................................................................... 54

II. Applications en dermo-cosmtique ..................................................................................... 55

1. Nanoparticules utilises en cosmtique ......................................................................... 56

2. Protection solaire............................................................................................................ 58

Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition aux nanoparticules .............................. 60

I. Toxicologie des nanoparticules ............................................................................................ 61

1. Les sources dexposition de la population gnrale aux nanomatriaux ....................... 61

2. Principaux facteurs dterminant les effets toxicologiques des nanoparticules .............. 62

II. Voies et conditions de pntration ...................................................................................... 63

1. Pntration cutane ........................................................................................................ 63

1.1. La peau : rappels anatomiques ....................................................................................... 63

1.2. Lpiderme ..................................................................................................................... 64

1.3. Fonction barrire de la peau ........................................................................................... 65

1.4. Limites de la barrire cutane .................................................................................. 66

1.5. Les voies de pntration cutane ................................................................................... 67

2. Pntration respiratoire .................................................................................................. 67

6
2.1. Rappel : Anatomie de lappareil respiratoire ................................................................. 67

2.2. La muqueuse respiratoire ............................................................................................... 68

2.3. Fonction barrire de l'pithlium respiratoire ................................................................ 69

2.4. Limites de la barrire respiratoire ............................................................................ 70

2.5. Pntration et accumulation : dposition des nanoparticules dans les rgions du systme

respiratoire .............................................................................................................................. 71

3. Ingestion ......................................................................................................................... 74

3.1. Rappel anatomique : lappareil digestif ......................................................................... 74

3.2. La muqueuse du tube digestif ........................................................................................ 75

3.3. Fonctions du tube digestif .............................................................................................. 76

3.4. Pntration et accumulation des nanoparticules dans le tractus gastro-intestinal .......... 77

III. Toxicocintique des nanoparticules aprs pntration dans lorganisme. .................. 80

Partie 4 : Etudes in vitro et in vivo de la pntration cutane et des effets sur la

sant des nanoparticules de TiO2 contenues dans les dermo-cosmtiques. ............. 84

I. Donnes concernant lexposition de la population gnrale aux cosmtiques contenant

des nanoparticules. ....................................................................................................................... 85

II. Mise en vidence du passage des nanoparticules contenues dans les dermo-cosmtiques

au travers de la barrire cutane et localisation cellulaire. ...................................................... 87

III. Facteurs influenant la pntration des nanoparticules par voie cutane. ................. 93

IV. Effets toxiques potentiels des nanoparticules manufactures utilises en dermo-

cosmtique : lexemple du TiO2 .................................................................................................. 95


7
1. Les pathologies de la peau ............................................................................................. 95

1.1. La dermatite atopique..................................................................................................... 95

1.2. Cancers cutans .............................................................................................................. 96

2. Etat des connaissances sur la toxicit des nanoparticules de TiO2 contenues dans les

dermo-cosmtiques............................................................................................................... 100

2.1. Stress oxydatif .............................................................................................................. 100

2.2. Inflammation ................................................................................................................ 104

2.3. Perturbation de lhomostasie ionique cellulaire ......................................................... 107

2.4. Effets carcinognes ...................................................................................................... 109

Conclusion et perspectives ....................................................................................... 112

Annexes ..................................................................................................................... 117

Rfrences bibliographiques .................................................................................... 124

SERMENT DE GALIEN ......................................................................................... 137

8
Liste des abrviations

: 1 Angstrom=10-10m

ADN : Acide dsoxyribonuclique.

AFSSET : Agence franaise de scurit sanitaire de lenvironnement et du travail

AIF : Apoptosis inducting factor

Ag : Argent

Al : Aluminium

ANSM : Agence nationale de scurit du mdicament

ARN : Acide ribonuclique

atm : Atmosphre

BALT : Tissu lymphode associ aux bronches

CdS : Sulfure de cadmium

CO2 : Dioxyde de carbone

Cu : Cuivre

ERO : Espces ractives oxygnes

Fe : Fer

IL : Interleukine

Ineris : Institut national de lenvironnement industriel et des risques

INF : Interfron

INRS : Institut national de recherche et de scurit pour la prvention des accidents du travail et des

maladies professionnelles

InVs : Institut de veille sanitaire


9
IRM : Imagerie par rsonnance magntique

IRSST : Institut de recherche en sant et scurit du travail

m : Mtre

MALT : Tissu lymphode associ aux muqueuses

MET : Microscopie lectronique transmission

nm : Nanomtre

m : Micromtre=10-6m

OGM : Organisme gntiquement modifi

PEG : Polythylne glycol

Pd : Palladium

PIXE : Particle Induced X-Ray Emission

RBS : Rutherford Backscattering Spectrometry

Rh : Rhodium

SiO2 : Dioxyde de silice

STIM : Scanning Transmission Ion Microscopy

TiO2 : Dioxyde de titane

TNF : Tumor necrosis factor

UV : Ultra-violet

Zn : Zinc

ZnO : Oxyde de zinc

10
Liste des figures

Figure 1: Comparaison relative de nanomatriaux avec des structures biologiques (4) .................... 19

Figure 2 : Reprsentation schmatique dun fullerne et des 60 atomes de carbone (noir) qui le

compose. Les ronds noirs symbolisent les atomes de carbone, les traits bleus reprsentent les

liaisons covalentes. Extrait du rapport R646 de lIRSST. (9) ............................................................ 23

Figure 3 : Rpartition en pourcentage de limpact conomique global des nanotechnologies en 2010

(2). ...................................................................................................................................................... 35

Figure 4 : Reprsentation dun liposome, vsicule constitue dun cur aqueux entour dune

couronne lipidique (25). ..................................................................................................................... 42

Figure 5 : Reprsentation dune micelle, structure polymre de forme sphrique dont le cur est

hydrophobe et la couronne hydrophile (29). ...................................................................................... 44

Figure 6 : Reprsentation de dendrimre, macromolcule ramifie tridimensionnelle qui peut

accueillir et fixer une molcule de mdicament (29). ........................................................................ 45

Figure 7 : Reprsentation dune nanoparticule dor, transportant une molcule thrapeutique. Du

PEG et un ligand y sont greffs (29). ................................................................................................. 49

Figure 8 : Reprsentation du march des nanoparticules dans lindustrie cosmtique (47). ............. 55

Figure 9 : Reprsentation anatomique de la peau et de ses annexes. ................................................. 64

Figure 10 : Prdiction du dpt de particules inhales au niveau du systme respiratoire chez

lhomme en fonction du diamtre des particules. Le sujet respirant majoritairement par la bouche

(pointill) ou par le nez (ligne continue) (11) .................................................................................... 73

Figure 11 extraite (4) : Passage des nanoparticules travers lpithlium intestinal. Trois voies

sont suspectes : voie lymphatique, la plus documente (absorption par les cellules M), la voie
11
paracellulaire (passage entre deux cellules), et la voie transcellulaire (absorption par les entrocytes,

spcialiss dans labsorption de nutriments) (63). ............................................................................. 79

Figure 12 : Cintique des nanoparticules. Le processus ADME (Absorption, Distribution,

Mtabolisme, Excrtion) est reprsent. Les flches pleines reprsentent les hypothses confirmes

concernant les voies empruntes par les nanoparticules ; les flches pointilles les voies non

dmontres (20).................................................................................................................................. 81

Figure 13 : Coupe histologique montrant la pntration dune particule marque par fluorescence

lintrieur du follicule pileux. Image de microscopie lectronique (76). ........................................... 92

Figure 14 : Images obtenues par microscopie lectronique transmission des kratinocytes aprs

traitement par TiO2. (A) : dtection dagglomrats de TiO2 dans lespace extracellulaire dans une

vsicule dendocytose (e) et intracellulaire (i). (B) reprsente linvagination de la membrane

cellulaire prcdent ltape dendocytose (86). ............................................................................... 102

Figure 15 : Mcanisme dcrivant les rponses intracellulaires aux radicaux oxygns et azots

induits par des nitrites en prsence de dioxyde de titane sous UVA (89). ....................................... 104

Figure 16 : Evolution de la taille des tumeurs aprs injection intrapritonale de TiO2 (97) .......... 110

Figure 17 : Analyse PIXE-Tomographie (3D) de C. elegans. Distribution tissulaire des lments

chimiques (Phosphore, Soufre, Calcium). Dtection et localisation des nanoparticules de TiO2

(images CENBG) ............................................................................................................................. 116

12
Liste des tableaux

Tableau 1 : Domaines dapplication en fonction du type de nanoparticules ..................................... 36

Tableau 2 : Quelques pigments minraux rfrencs dans le Colour index ...................................... 58

Tableau 3 : Quantit moyenne et mdiane de produit appliqu pour chaque type de cosmtiques par

application, par jour ainsi que le nombre moyen dapplications par jour. ......................................... 87

13
Prambule

Prambule

Les nanotechnologies constituent un champ de recherche et de dveloppement important depuis le

dbut du XXIme sicle. Les nanotechnologies reposent sur la capacit manipuler la matire

lchelle la plus petite possible, de lordre du milliardime de mtre soit 10-9 m. Lutilisation des

nanoparticules lchelle mondiale est considrable et ne cesse de saccrotre notamment sur le

plan mdical, environnemental et industriel.

Nombreuses sont les nations qui reconnaissent la ncessit de prendre en compte les nanoparticules

dans la rglementation du fait de limpact conomique et socital qui en dcoule. En raison de leur

taille, de leur persistance prsume dans lenvironnement et des interrogations grandissantes

concernant les effets potentiels sur la sant des utilisateurs, de nombreuses inquitudes ont merg.

Suite au dcret europen (CE) n 1907/2006 du Parlement europen et du Conseil du 18 dcembre

2006, la France impose aux industriels depuis le 1er janvier 2013 de dclarer lAgence nationale

de scurit sanitaire la prsence de matriaux ltat nano-particulaire dans leur production. Cette

mesure permet dassurer la traabilit, linformation au public et un recensement des produits mis

sur le march.

Lutilisation des nanoparticules rend possible la cration de nouvelles classes de matriaux aux

proprits innovantes. De trs nombreux travaux ont t publis ce sujet cette dernire dcennie et

les nanoparticules suscitent toujours beaucoup dintrt dans les domaines conomique, industriel et

mdical.

A ce jour, les nanoparticules font partie de notre quotidien. De nombreuses applications industrielles

et mdicales sont en cours de dveloppement, et sont pour certaines, dj mises en uvre. Les
14
Prambule

nanoparticules produites intentionnellement sont actuellement utilises dans les produits

cosmtiques, dhygine (dentifrice), additifs alimentaires, articles de sport, pneus, vtements, et

autres produits de consommation courante. La quantit de nanoparticules synthtises varie de

quelques grammes par an (marqueurs dans l'imagerie biologique) plusieurs tonnes (noir de

carbone utilis dans la fabrication de pneus de voiture) (1).

Entre 2010 et 2015, les enjeux conomiques lis lavnement des nanotechnologies au niveau

mondial devrait atteindre 1000 milliards deuros par an tous secteurs confondus et concerner

lemploi de plus de deux millions de personnes (2).

Il est alors possible de sinterroger sur les progrs apports par ces nanoparticules par rapport aux

technologies dj existantes et de lintrt de lutilisation massive des nanoparticules ces dernires

annes. Des tudes montrent que certaines proprits des objets lchelle nanomtrique peuvent

confrer des comportements spcifiques, exacerbant, dans certains cas, leur ractivit chimique,

leur comportement lectronique ou magntique, ou encore, leur potentiel de pntration dans les

organismes vivants.

Lessor des nanoparticules dans les produits de notre quotidien ncessite den valuer les effets sur

lhomme et son environnement. A ce jour, les donnes disponibles concernant limpact de ces

nanoparticules sont nombreuses mais demeurent complexes et incompltes. Dterminer limpact

des nanoparticules savre particulirement difficile : multiplicit de celles-ci, proprits

physicochimiques varies, nombre restreint dtudes in vivo, multiples voies dexposition et

difficult de quantifier les doses prsentes dans lorganisme. De plus, les rsultats des tudes

toxicologiques ne permettent pas dtablir lheure actuelle un bilan clair de leur toxicit

potentielle.

15
Prambule

Cette thse dexercice a pour but de proposer un tat des lieux des connaissances actuelles, des

applications et progrs apports par lutilisation des nanoparticules notamment dans le domaine de

limagerie mdicale, de loncologie et de la dermo-cosmtique. Premirement, nous nous

intresserons aux diffrents modes de synthse des nanoparticules, leurs proprits, ainsi qu la

rglementation actuellement en vigueur. Dans un deuxime temps, il sera question de comprendre

les interactions entre les nanoparticules et les molcules biologiques par ltude des diffrentes

voies dexposition et de pntration des nanoparticules. Enfin, travers lexemple de la

nanoparticule de dioxyde de titane (TiO2), nous recenserons les donnes actuelles concernant une

potentielle toxicit des nanoparticules suite lapplication cutane de dermo-cosmtiques et autres

produits de soins.

16
Partie 1 : Le nanomonde

17
Partie 1 : Le nanomonde

I. Dfinition du monde nanomtrique

Le prfixe nano dsigne un milliardime dunit. Un nanomtre (nm) est donc un milliardime

de mtre.

Les nanosciences concernent ltude des phnomnes et la manipulation de matriaux lchelle

atomique, molculaire et macromolculaire et dont les proprits diffrent significativement de

celles observes plus grande chelle.

Les nanotechnologies concernent la conception, la caractrisation, la production et la mise en uvre

de structures, de dispositifs et de systmes par le contrle de leur forme et de leurs dimensions

lchelle du nanomtre.

Les nanomatriaux quant eux, sont dfinis comme tant des matriaux sous forme de poudre,

darosol, de suspension liquide ou de gel, possdant une ou plusieurs dimensions lchelle

nanomtrique, c'est- -dire de lordre du milliardime de mtre ou 10-9 m.

Certaines nanoparticules sont dorigine naturelle cest dire issues druptions volcaniques, de feux

de fort, de lrosion (3).

Dautres sont dorigine anthropogniques proviennent de la fabrication de produits chimiques, du

raffinage et de la fusion de minerais, de la combustion de matriaux fossiles par les vhicules et les

moteurs d'avion (krosne, diesel) ou de la production nergtique (charbon, mazout) (3).

18
Partie 1 : Le nanomonde

La figure 1 permet de positionner les nanoparticules lchelle du monde macroscopique (4).

Figure 1: Comparaison relative de nanomatriaux avec des structures biologiques (4)

Les nanomatriaux sont des assemblages datomes dont au moins une dimension est comprise entre

1 et 100 nm (1). La limite infrieure admise est de 1 nm afin de ne pas dsigner comme

nanomatriaux des atomes ou molcules seuls ou en petit groupe. La limite suprieure admise est de

100 nm. Cest en gnral lordre de grandeur maximal pour lequel les proprits physicochimiques

des nanomatriaux sexpriment (1,5).

19
Partie 1 : Le nanomonde

Il existe deux classifications possibles pour les nanoparticules.

Une classification des structures propose en 2007 par Buzea et al., repose sur un classement en

fonction des dimensions des nanoparticules en trois classes.

Classe 1 : Cette classe comprend les films minces et revtements de surface infrieurs 100 nm.

Classe 2 : Les revtements pais et filtres nanoporeux.

Classe 3 : Les nanoparticules sous forme compacte de structure polydrique ou sphrode. Cette

structure peut tre simple, telle la nanoparticule libre, ou plus complexe, et former des agrgats ou

agglomrats de nanoparticules. Les nanoparticules ont gnralement une structure cristalline et sont

souvent de forme sphrique.

Une autre classification en fonction des dimensions est aussi admise (2). Dans ce cas, les

nanomatriaux sont rpertoris et classs en quatre familles selon leurs formes dutilisation.

Nanomatriaux de dimension 0 : Les nanomatriaux sous forme disperse, alatoire ou organise

(nanopoudres, fullernes et nanocapsules).

Nanomatriaux de dimension 1 : Les nanomatriaux sous forme de nano-fils et nanotubes.

Nanomatriaux de dimension 2 : Les revtements de surface pais et les couches minces.

Nanomatriaux de dimension 3 : Les nanocomposites. Les nanocomposites sont essentiellement

constitus de deux phases : le renfort et la matrice. Un nanocomposite comprend gnralement un

20
Partie 1 : Le nanomonde

renfort nanomtrique avec des proprits diffrentes du matriau massif. Les nanomatriaux

possdent des proprits spcifiques de surface qui induisent des interactions plus fortes avec la

matrice. Lincorporation de nanomatriaux dans les composites permet dapporter de nouvelles

fonctionnalits ou de modifier leurs proprits mcaniques, optiques, magntiques ou thermiques.

Dun point de vue chimique, il existe deux grandes catgories de nanoparticules qui diffrent par

leur composition : les nanoparticules organiques base datomes de carbone, telles le noir de

carbone, les nanoparticules de polymres ou les nanomicelles et les nanoparticules inorganiques de

composition mtallique (Zn, Fe, Cu) comme les oxydes mtalliques (TiO2, ZnO, SiO2) (6).

II. Classification des nanoparticules

Dans ce manuscrit, seront brivement dcrites les nanoparticules les plus couramment utilises et

synthtises relevant dun intrt pour le domaine mdical et dermo-cosmtique.

Il est possible de les classer en deux catgories selon leurs caractristiques physiques : souples

ou rigides (6).

1. Les nanoparticules souples

1.1. Nanoparticules dinspiration biologique : les liposomes

Ce sont typiquement des particules souples dformables sinspirant de lorganisation des

membranes cellulaires. Il sagit dune structure vsiculaire constitue dune bicouche

phospholipidique concentrique et dun cur aqueux. On parle de molcule amphiphile. Ce caractre

est d la prsence dun ple hydrophile sorientant vers les lments aqueux et dun ple

hydrophobe sorientant vers les constituants organiques (7).

Pour exemple, les liposomes se rvlent intressants dans llaboration de topiques dermatologiques

car les drogues incorpores dans cette structure pntreraient plus facilement dans le canal du

21
Partie 1 : Le nanomonde

follicule pileux que les molcules dun autre type de formulation en raison de leur similitude

molculaire avec les lipides cutans.

1.2. Les polymres

De nombreux polymres organiques sont produits dans des dimensions nanomtriques. Pour

exemples, citons le chlorure de polyvinyle, le polystyrne ou encore le latex. Rduits lchelle

nanomtrique, ces composs peuvent tre, dans certaines conditions, solubiliss ou modifis

chimiquement. Plusieurs de ces polymres organiques sont mme dtre prpars sous forme de

nano-fils.

2. Les nanoparticules rigides

Parmi les classifications, celle de lInstitut de recherche en sant et scurit du travail canadien

implant au Qubec (IRSST), dfinit et tablit une classification des nanoparticules rigides dans son

rapport R646. Ce rapport rsume les connaissances actuelles sur les nanoparticules de synthse.

Les nanoparticules rigides sont des structures collodales de diffrentes formes et diffrentes tailles,

constitues de carbone ou dlments tels que des mtaux (or, argent), des oxydes mtalliques

(oxydes de fer), des cramiques (silice).

22
Partie 1 : Le nanomonde

2.1. Les principales nanoparticules base de carbone

Les fullernes sont des cages constitues datomes de carbone. La forme la plus tudie, synthtise

pour la premire fois en 1985 (8), est sphrique et contient 60 atomes de carbone.

Cependant, il existe des structures contenant de 28 1500 atomes de carbone et pouvant atteindre

8,2 nm de diamtre.

Figure 2 : Reprsentation schmatique dun fullerne et des 60 atomes de carbone (noir) qui le

compose. Les ronds noirs symbolisent les atomes de carbone, les traits bleus reprsentent les liaisons

covalentes. Extrait du rapport R646 de lIRSST. (9)

Le graphite est compos dune srie de couches superposes dun rseau hexagonal datomes de

carbone, dont chaque atome est li trois carbones voisins dans un rseau planaire. Sparer ces

couches en une monocouche, dont lpaisseur est de lordre du nanomtre, permet dobtenir des

feuillets de graphne.

Les nanotubes de carbone constituent une nouvelle forme cristalline du carbone. Ils se prsentent

sous forme de nano-feuillets de graphne. Ce sont des cylindres creux pouvant avoir des diamtres

infrieurs au nanomtre et atteindre plusieurs millimtres de longueur. Chaque extrmit peut tre

ouverte ou ferme par une demi-molcule de fullerne.

23
Partie 1 : Le nanomonde

Le noir de carbone est constitu de matriel graphitique partiellement amorphe, c'est--dire non

cristallis, dont une fraction des particules lmentaires est de dimension nanomtrique,

gnralement de 20 70 nm. Ces particules, majoritairement sphriques peuvent sagglomrer et

former des structures pouvant atteindre 500 nm.

Les nano-fibres de carbone sont constitues de feuillets de graphne. Contrairement aux nanotubes,

elles ne senroulent pas en cylindre rgulier mais sorganisent plutt en structure en forme de cne

ou de tasse non ferm aux extrmits.

2.2. Les nanoparticules inorganiques rigides

Les mtaux peuvent tre labors dans des dimensions nanomtriques.

Des oxydes mtalliques de dimensions nanomtriques existent galement. Les plus courants, car

produits grande chelle, sont la silice (SiO2), le dioxyde de titane (TiO2) et loxyde de zinc (ZnO).

III. Synthse des nanoparticules

Les voies de production de ces nanomatriaux sont extrmement varies. Les nanoparticules sont

synthtises selon diffrentes approches : essentiellement par la mthode ascendante, (traduction

littrale de langlais bottom-up ), ou la mthode descendante (traduction littrale de langlais

top-down ) (2). Par lapproche ascendante ou bottom-up , les nanoparticules sont construites

atome par atome ou molcule par molcule (hydrolyse ou condensation dalkoxydes). Dans

lapproche descendante ou top-down , une grande structure est graduellement sous-

dimensionne, jusqu atteindre des dimensions nanomtriques aprs application de sollicitations

mcaniques svres, de chocs violents et de fortes dformations (broyage). Lapproche ascendante

permettrait la production dune plus grande diversit darchitectures et, souvent, un meilleur

contrle de ltat nanomtrique (tailles et distribution granulomtrique relativement mono disperse,


24
Partie 1 : Le nanomonde

positionnement des molcules, homognit des produits). Par opposition, lun des avantages de la

mthode descendante serait une capacit de production plus volumineuse mais un contrle de ltat

nanomtrique plus dlicat.

Dans un rapport de 2006, lAgence Franaise de Scurit Sanitaire de lEnvironnement et du

Travail (AFFSET) classe les diffrents modes de synthse des nanoparticules en fonction des

procds physiques, chimiques et mcaniques (Annexe 1). Les procds les plus courants sont

brivement dcrits ci-aprs.

1. Mthodes physiques

1.1. Evaporation/condensation

Cette mthode consiste vaporer un mtal par chauffage puis condenser la vapeur mtallique

afin dobtenir des nanopoudres formes de particules nanomtriques disperses. La difficult de

cette technique est le contrle absolu et homogne des particules lchelle nanomtrique. Les

nanoparticules sont obtenues par refroidissement trs rapide de la vapeur mtallique. Ce procd

permet de produire de trs grandes quantits de particules.

1.2. La pyrolyse laser

La pyrolyse laser est une mthode simple et efficace de synthse de poudres nanomtriques. Elle

repose sur l'interaction entre un laser CO2 et un flux de ractifs. Le transfert d'nergie provoque une

lvation rapide de temprature. Les ractifs prcurseurs sont dissocis et une flamme apparat

dans laquelle se forment les nanoparticules, qui subissent ensuite une baisse rapide de temprature

ou effet de trempe en sortie de flamme. Les poudres sont alors entranes par un flux gazeux

dans une zone de collecte. Dans la plupart des cas, cette collecte s'effectue sur poudre sche.

Cette mthode possde de nombreux avantages : une grande puret chimique des produits, une

25
Partie 1 : Le nanomonde

bonne homognit physique et chimique, une vitesse de trempe rapide et une bonne souplesse

dutilisation.

1.3. Mthode arosol

Un arosol est un ensemble de particules, solides ou liquides, d'une substance chimique donne en

suspension dans un milieu gazeux. La synthse de nanoparticules peut tre obtenue par oxydation

dans des flammes trs haute temprature ou plasma thermique partir de prcurseurs gazeux ou

liquides amens sous forme d'arosol.

La formation dun arosol ne ncessite pas un grand volume de liquide. La dure de raction est trs

courte et permet lobtention de particules pures avec un dbit et un rendement intressants.

Ce procd permet notamment la production de plusieurs tonnes par an de dioxyde de titane, silice

ou noir de carbone.

2. Mthodes chimiques

2.1. Mthode sol-gel

Le procd sol-gel permet de fabriquer un polymre inorganique par des ractions chimiques

simples, une temprature comprise entre 20 et 150C. La synthse est effectue partir

d'alcoolates de formule M(OR)n o M est un mtal ou le silicium et R un groupement organique

alkyle CnH2n+1. Cette raction seffectue en deux temps. Premirement, il y a hydrolyse du

prcurseur et dpart dun groupement alkyle. Cette tape peut tre catalyse par la modification du

pH dans le milieu ractionnel. La dispersion est appele le sol . Dans un deuxime temps, il se

produit une polymrisation inorganique qui aboutit la formation du gel . Le gel est ensuite

sch afin dliminer la phase aqueuse laide dun four par exemple.

Lintrt de ce procd est lexistence de prcurseurs pour un grand nombre de mtaux et non-

26
Partie 1 : Le nanomonde

mtaux. Ils sont soit liquides soit solides, et pour la plupart, solubles dans des solvants usuels

aqueux ou organiques. Cette mthode permet un bon contrle de la morphologie des nanoparticules

obtenues et la production de matriaux de plus grande homognit et puret des tempratures

infrieures celles des mthodes conventionnelles. En revanche, un des inconvnients demeure le

cot des prcurseurs.

2.2. Production de liposomes

La faon la plus classique de prparer des liposomes est celle dite de l'hydratation d'un film

lipidique. Ce film est souvent obtenu par vaporation d'un solvant organique dans lequel les lipides

sont dissous. L'hydratation de ce film conduit alors la sparation de fragments de bicouches

lipidiques. L'utilisation de phospholipides naturels permet de crer des systmes qui miment les

membranes biologiques.

2.3. Mthodes solvo-thermale et hydro-thermale

La mthode solvo-thermale permet de produire un grand nombre de matriaux : mtaux,

cramiques, semi-conducteurs et polymres. Ce procd consiste employer un solvant sous haute

pression (entre 1 atm et 10 000 atm) et une temprature comprise entre 100 et 1000C au sein

dun autoclave. Cependant, le principal inconvnient d'un tel dispositif ferm est l'inertie thermique

du racteur qui doit rsister l'effet conjugu de la temprature et de la pression, et aux variations

de tempratures qui en rsultent dans le milieu ractionnel. Ces limitations peuvent tre supprimes

en utilisant un dispositif en continu.

Un large choix de solvants possdant une temprature dbullition leve peut tre utilis.

Cette mthode solvo-thermale garantit un meilleur contrle de la taille, de la forme et une meilleure

qualit de fabrication des cristaux. Lorsque le solvant utilis est leau, on parle de mthode hydro-

thermale. La temprature est alors moins leve.

Les nanoparticules sont gnralement trs bien cristallises et ne ncessitent aucun traitement
27
Partie 1 : Le nanomonde

thermique supplmentaire aprs rcupration.

IV. Proprits des nanoparticules

Les nanoparticules prsentent des proprits qui sont fonction de leur composition, de leur structure

cristalline, de la surface expose ainsi que de leur procd de synthse. Cependant, quelle que soit

leur origine, les nanoparticules possdent des proprits physiques communes qui dcoulent

notamment de leur dimension. Lorsque la taille diminue, la surface spcifique augmente, le nombre

datomes en surface devenant plus important. Cela a pour consquence une modification des

proprits optiques, lectriques, magntiques, physiques (abaissement de la temprature de fusion),

catalytiques (ractivit accrue) du matriau sous forme nano-particulaire par comparaison au mme

matriau lchelle microscopique (1,10).

Les proprits des nanoparticules sont pour la plupart directement lies leur petite taille ainsi qu

leur surface.

Lorsque la taille diminue, le nombre de particules par gramme de matire croit considrablement.

Ainsi, le nombre d'atomes localiss en surface, c'est--dire en contact avec le milieu environnant

augmente.

De plus, la ractivit dune nanoparticule dpend de sa surface. Le rapport surface/particules et

surface/masse tant beaucoup plus important pour les nanoparticules que pour les particules

microscopiques, leur ractivit augmente (1,11).

La taille nanomtrique est galement susceptible de modifier les proprits lectriques de certains

matriaux semi-conducteurs prsentant une activit photo-catalytique linstar du dioxyde de titane

(TiO2) (12). Le principe de la photo-catalyse est lactivation dun semi-conducteur par absorption

dnergie lumineuse (photon). Au sein dun semi-conducteur, le gap entre la bande de valence et de

la bande de conduction est de faible nergie. Labsorption dun photon dnergie suprieure au gap

28
Partie 1 : Le nanomonde

permet le transfert dun lectron de la bande de valence vers la bande de conduction formant un

exciton. Un exciton est une combinaison dun lectron (charg ngativement) et dun trou

(charg positivement), form par le dpart de llectron. Ces deux entits sont instables et ont

tendance se recombiner avec une espce environnante induisant la formation de radicaux libres

susceptibles de ragir avec le milieu. En effet, les nanoparticules ont une surface plus importante

favorisant la cration de paire dlectrons ou excitons. La production dexciton est la base du

processus de photo-catalyse. Parmi les photo-catalyseurs les plus utiliss, on recense les oxydes

mtalliques et plus particulirement le TiO2. Dans ce cas particulier, lnergie apporte pour

lactivation du catalyseur doit se faire sous forme de rayonnements UV. Ce procd peut tre

exploit des fins de traitements de leau ou de purification de lair (13).

Les proprits optiques des nanoparticules savrent galement trs intressantes. De par leurs

dimensions infrieures aux longueurs donde de la lumire visible (380 780 nm), elles rduisent

labsorption et la diffusion de la lumire modifiant ainsi les proprits optiques de certains

matriaux. Sous forme de fine couche, elles apparaissent comme transparentes. Certaines

nanoparticules comme les oxydes mtalliques (ZnO, TiO2) de diamtre compris entre 30 et 80 nm

sont ainsi utilises en tant que filtres solaires grce leur capacit dabsorption des rayonnements

ultra-violets tout en restant transparentes lil nu. Ces proprits sont lorigine de leurs

nombreuses applications en dermo-cosmtique (12).

Parmi les proprits des nanoparticules, notons aussi leur comportement dans un arosol, c'est--

dire en suspension dans un fluide (liquide ou gaz). Dans un fluide, le comportement dynamique des

nanoparticules dpend essentiellement de la balance qui existe entre lagitation brownienne,

dautant plus importante que la dimension est petite, et la sdimentation. Les particules de masse

rduite ont tendance persister dans le fluide de manire stable. Les particules de masse plus

importante, quant elles vont sdimenter sous laction de la gravit.

29
Partie 1 : Le nanomonde

Les nanoparticules stabilises dans un fluide connaissent diffrents destins. Elles peuvent tout

dabord rester en suspension de manire stable ou bien se regrouper et sdimenter. Les processus de

regroupement sont induits par des forces dattraction faible (agglomration) ou forte (agrgation).

Le regroupement des particules entraine une augmentation de la masse de celles-ci conduisant leur

sdimentation dans le fluide et donc une diminution de leur concentration en suspension (11).

Enfin, les nanoparticules possdent des proprits mcaniques intressantes qui peuvent se traduire

par un phnomne de superplasticit . Elles permettent ainsi damliorer la rsistance de

matriaux composites sans compromettre leur ductilit, c'est--dire leur capacit se dformer

facilement (12).32-3-

V. Modification de surface et/ou fonctionnalisation. Les applications au

secteur biomdical

Les nanotechnologies offrent la possibilit de modifier la taille, la charge de surface ainsi que les

groupements fonctionnels de molcules usage thrapeutique (14). Ces possibilits semblent

illimites (6). Les modifications de surface apportes aux nanoparticules dpendent de lapplication

potentielle envisage.

1. Amlioration de la stabilit en solution collodale.

La fonctionnalisation des nanoparticules par des polymres augmente leur stabilit en solution

collodale et leur biodisponibilit. De ce fait, il est possible de recouvrir la particule dun produit

chimique comme le polythylne glycol (PEG) afin daugmenter la stabilit et le temps de prsence

de la molcule dans la circulation sanguine (6). Cest le cas par exemple du PEG-Intron et du

Pegasys. Ce sont des interfrons alfa, c'est--dire des protines immunomodulatrices PEGyles,

utilises dans le traitement des infections chroniques au virus de lhpatite C chez lhomme (15). Le

polythylne glycol est un agent de fonctionnalisation intressant car il est soluble, de taille
30
Partie 1 : Le nanomonde

modulable, inerte et non toxique. La pgylation, c'est--dire lajout de PEG, permet ainsi daccrotre

le temps de prsence de la molcule dans la circulation et daugmenter sa stabilit tout en diminuant

limmunognicit des protines recombinantes (16).

2. Ciblage thrapeutique

Les applications possibles de la fonctionnalisation des nanoparticules dans le domaine mdical sont

par consquent trs tendues. Pour exemples, des particules poreuses renfermant des molcules

usage thrapeutique permettent de livrer des mdicaments de faon slective certains organes

(17). Aussi, des nanoparticules se comportant comme systme de dlivrance dantigne ou adjuvant

(oxydes daluminium) servent llaboration de vaccins. Lutilisation de nanoparticules permet non

seulement daugmenter la stabilit de lantigne et son immunognicit, mais galement une

dlivrance cible au niveau des cellules immunitaires.

Les liposomes font partie des nanoparticules utilises dans le dveloppement des vaccins

(encapsulation dantignes type enveloppe virale) (18).

La surface des nanoparticules peut galement tre utilise comme plateforme de fixation de ligands.

Lajout danticorps monoclonaux ou spcifiques de cellules cancreuses comme lacide folique

(vitamine B9) faciliteraient le ciblage des cellules cancreuses au niveau du sein et du col de

lutrus (19) augmentant ainsi la capacit de ciblage thrapeutique (6).

Le ciblage thrapeutique permettant une dlivrance optimale du mdicament, limite ainsi le risque

deffet systmique et diminue la toxicit des agents thrapeutiques (en particulier des drogues

anticancreuses).

3. Prvention de lopsonisation

La modification de surface des nanoparticules contribue galement prvenir leur opsonisation.

Lopsonisation est un processus biochimique qui permet de recouvrir la molcule danticorps


31
Partie 1 : Le nanomonde

spcifiques (opsonine) afin dinduire sa phagoctytose. Les opsonines sont donc des anticorps et

certaines fractions du complment (groupe de protines prsentes dans le srum sanguin) se liant

aux antignes de surface du corps tranger. La phagocytose quant elle est lingestion suivie de la

digestion dune substance trangre par les macrophages en vue de son limination par lorganisme.

La prvention de lopsonisation par des agents stabilisants limite le risque de dgradation et

dagression par le systme immunitaire (6).

4. Modification de la charge de surface

La modification de la charge de surface des nanoparticules influence leur pntration cellulaire (20).

Les applications mdicales qui en dcoulent en dermatologie sont intressantes. Ces procds

permettent un meilleur contrle des processus suivants : pntration, profondeur des nanoparticules

au niveau du follicule pilo-sbac, dplacement, cintique ou type cellulaire cibl. Cest ainsi que

les liposomes cationiques pntreraient plus profondment le follicule que le mme liposome

charg ngativement (6). Autre exemple, des nanoparticules de latex (50-500 nm) charges

ngativement pntrent dans lpiderme alors que les particules charges positivement ou neutre en

sont incapables.

5. Fonctionnalisation par un agent fluorescent pour limagerie.

La fonctionnalisation des produits de contraste nano-particulaires par des agents fluorescents offre

la possibilit dune meilleure capacit de dtection en imagerie mdicale. Une large palette dagents

de contraste, de sondes fluorescentes et de radio-traceurs propose un ventail important

dopportunits pour limagerie du vivant et le dveloppement dapproches diagnostiques. Pour

exemple, les traceurs fluorescents infrarouges possdent des proprits photo-physiques adaptes

limagerie optique du vivant. Le vert dindocyanine, notamment est utilis pour visualiser les

structures angiogniques.

Plus rcemment, les quantum dots ou boites quantiques , sont de petits cristaux semi-
32
Partie 1 : Le nanomonde

conducteurs qui prsentent des proprits lectroniques associes leur taille, et des proprits

photo-physiques dintrt majeur pour limagerie de fluorescence, avec une brillance et une stabilit

photonique importantes (21).

6. Passivation dagents de contraste nano-particulaires

Passiver un agent de contraste nano-particulaire, cest lempcher de ragir en surface, tout en

conservant ses proprits optiques ou magntiques. Concernant l'oxyde de fer, des travaux mettant

en uvre la "passivation" de la surface des nanoparticules par une couche de protines (albumine)

montrent une amlioration de la stabilit en solution et de la biocompatibilit des nanoparticules

(22). Aussi, les nanoparticules inorganiques en dispersions collodales sont encapsules dans une

matrice polymrique par des techniques dmulsions ou dadsorption physique (23). Lobjectif est

dobtenir des particules de structure et de morphologie bien dfinies en vu dapplications

diagnostiques et thrapeutiques (hyperthermie magntique, thrapie cible) (22,23). Le contrle de

la morphologie et des proprits collodales reste alatoire en raison de lincompatibilit entre

particules inorganiques (hydrophiles) et polymres (hydrophobes). Pour pallier ce problme, une

tape de modification de surface de la nanoparticule inorganique (modification chimique,

adsorption de surfactant) est ncessaire afin damliorer la dispersion dans la matrice organique

(23).

VI. Caractrisation des nanoparticules

Une mtrologie prcise est indispensable la comprhension des proprits et des caractristiques

des nanomatriaux. Il est donc important de bien mesurer et de caractriser ces matriaux. Des

travaux mens au niveau international portent sur la mise au point doutils de mesure et de

caractrisation des nanomatriaux (12). Au niveau europen, le programme NANOSAFE pour

SAFE production and use of NANOmaterials a pour objectif de dvelopper des outils de

dtection et de caractrisation chimique afin de promouvoir une meilleure gestion et valuation des
33
Partie 1 : Le nanomonde

risques dans le cadre dune production industrielle scurise. Ce programme a lintention de traiter

en dtail un nombre limit de nanoparticules de rfrence. Les institutions et organismes mettant au

point des programmes de nanomtrologie sont en expansion ces dernires annes.

La mtrologie implique la matrise du prlvement, de la mesure des concentrations en nombre, en

surface ou en masse ainsi que la dtermination du spectre granulomtrique. Les nanoparticules

peuvent tre collectes sur des filtres ou sur des plaques. Pour exemple, la microscopie lectronique

transmission (MET) est classiquement utilise pour dfinir la dimension et la forme des

nanoparticules. La structure cristalline des nanoparticules, quant elle, peut tre caractrise par la

mthode de diffraction aux rayons X (DRX). Aussi, la surface spcifique doit tre dtermine ainsi

que la composition chimique des nanoparticules par des techniques danalyse lmentaire. Enfin,

ltude du comportement des nanoparticules en solution se fera par ztamtrie (mesure de charges

de surface). Pour cela, les appareils existants mis au point il y a dj quelques dcennies sont

constamment amliors (2).

VII. Applications industrielles des nanoparticules

Les avantages et applications que procurent les nanoparticules sur le plan mdical, environnemental

et commercial intressent les professionnels de la sant, les industriels et les consommateurs. Les

nanoparticules et nanomatriaux permettent daccrotre les performances de nombreux produits.

Daprs le rapport publi en 2008 par le Conseil des acadmies canadiennes (12), les performances

particulirement recherches sont labsorption des rayons ultra-violet, lamlioration des qualits

textiles, leffet antimicrobien, lapport dune fonction autonettoyante ou antiadhsive de surface,

laugmentation de la duret ou encore lapport dune fonction antiagglomrante ou fluidifiante.

De nombreux domaines dactivit utilisent dj des nanoparticules pour amliorer leurs

34
Partie 1 : Le nanomonde

applications. Entre autres, lindustrie automobile, lindustrie chimique, lindustrie lectronique, la

cosmtologie, la sant, la recherche, lhabitation, etc (9). (Annexe 2). Particulirement, le dioxyde

de titane (TiO2) est un excipient largement utilis comme colorant ou antiagglomrant (E171) par

lindustrie pharmaceutique dans llaboration des formes orales (glules, comprims).

Ainsi, de nombreux programmes de recherche et dveloppement en matire de nanotechnologie ont

un double objectif : amliorer les produits existants et donner naissance des techniques indites.

Pharmaceutique
Nanomatriaux 18%
34%

Chimie
(catalyseurs) 10%

Transport
nanolectronique
7%

Autre 1%

Electronique
30%

Figure 3 : Rpartition en pourcentage de limpact conomique global des nanotechnologies en 2010 (2).

35
Partie 1 : Le nanomonde

Types de nanoparticules Domaines dapplication

Fullernes Electronique, piles, cellules solaires, stockage des donnes et des gaz,

additifs dans les plastiques

Graphnes Tlcommunication

Nanotubes de carbone Applications potentielles en composites polymriques, metteurs

dlectrons, blindage lectromagntique, stockage de gaz

Nano-fibres Additifs dans les polymres, support catalytique, stockage de gaz

Noir de carbone Pigments, agents de remplacement des caoutchoucs (pneus)

Mtaux Marqueurs pour diagnostic mdical, agent de traitement anticancreux (Au),

proprits antimicrobiennes (Ag), convertisseurs catalytiques (Pt, Pd, Rh),

combustible (Al)

Oxydes mtalliques Plastics et caoutchoucs (SiO2), crme solaire (TiO2, ZnO), pigments de

peinture et cosmtiques (TiO2)

Polymres organiques et Applications potentielles : biomdecine (rgnration tissulaire et osseuse),

dendrimres Acheminement des mdicaments, thrapies, agents de contraste

Liposomes Applications mdicales et pharmacologiques

Tableau 1 : Domaines dapplication en fonction du type de nanoparticules

VIII. Rglementation

Les nanoparticules sont prsentes dans de nombreux produits de consommation courante (crmes

solaires, textiles, aliments) et dans des secteurs aussi varis que le btiment, lautomobile, la

chimie, la sant etc. En raison des inquitudes avances par les agences de sant, du travail et les

consommateurs, une rglementation spcifique au domaine des nanotechnologies doit tre mise en

place. Lobjectif est de quantifier lexposition des consommateurs et des travailleurs aux

nanoparticules contenues dans les produits prsents sur le march afin dvaluer les risques pour la
36
Partie 1 : Le nanomonde

population.

Les antcdents largement mdiatiss sur les OGM et le nuclaire ne font quamplifier ces

inquitudes et la ncessit dune rglementation stricte.

Jusqu prsent, seuls les Etats-Unis avaient mis au point une loi relative la recherche et au

dveloppement des nanotechnologies (loi publique 108-153 vote en 2003). Toutefois, nombre de

pays reconnaissent la ncessit de rglementer les nanotechnologies en raison des effets de leur

taille, de la persistance dans lenvironnement, de leur destruction et de la particularit des nano-

objets produits par auto-assemblage. Les directives europennes et les textes franais qui entourent

la question du risque chimique se fondent sur lvaluation de substances chimiques produites par

des procds classiques . Ainsi, cette approche est susceptible de ne pas correspondre au

domaine rcent des nanotechnologies.

La loi Grenelle 2 prvoyait le principe de la dclaration des nanoparticules. Deux dcrets, parus le

19 fvrier 2012 au Journal officiel, rendent cette obligation lgale. Les articles L. 523-1 L. 523-3

du code de l'environnement, crs par la loi Grenelle 2, prvoient l'obligation de dclarer l'identit,

les quantits et les usages des substances l'tat nano-particulaire produites, distribues ou

importes en France.

"Le dispositif a pour objet de mieux connatre ces substances et leurs usages, de disposer d'une

traabilit des filires d'utilisation, d'une meilleure connaissance du march et des volumes

commercialiss et enfin de collecter les informations disponibles sur les proprits toxicologiques

et co-toxicologiques", indique le ministre de l'Ecologie.

L'obligation concerne chaque fabricant, importateur et distributeur d'une substance l'tat nano-

37
Partie 1 : Le nanomonde

particulaire "en l'tat ou contenue dans un mlange sans y tre lie, ou de matriaux destins

rejeter cette substance dans des conditions normales ou raisonnablement prvisibles d'utilisation",

ds lors qu'il produit, importe ou distribue au moins 100 grammes par an de cette substance.

Larticle 3 du rglement CE n1907/2006 dfinit une substance nano-particulaire comme une

"substance, fabrique intentionnellement l'chelle nanomtrique, contenant des particules, non

lies ou sous forme d'agrgat ou sous forme d'agglomrat, dont une proportion minimale des

particules, dans la distribution des tailles en nombre, prsentent une ou plusieurs dimensions

externes se situant entre 1 nm et 100 nm". Les fullernes, les flocons de graphne et les nanotubes

de carbone paroi simple prsentant des dimensions externes infrieures 1 nm sont donc d'ores et

dj considrer comme des substances l'tat nano-particulaire.

La dclaration devra tre adresse au ministre charg de l'environnement avant le 1 er mai de chaque

anne, compter de 2013. Se rapportant l'anne civile prcdente, la premire dclaration portera

donc sur les donnes de 2012. Le dfaut de dclaration peut donner lieu une amende

administrative pouvant atteindre 3.000 euros et une astreinte journalire de 300 euros.

Les dclarations, ainsi que les donnes qu'elles contiennent, seront gres par l'Agence nationale de

scurit sanitaire de l'alimentation, de l'environnement et du travail (Anses).

Les informations relatives l'identit et aux usages des substances dclares doivent tre mises la

disposition du public chaque anne six mois aprs la date limite de dclaration. Cependant, le dcret

prvoit la possibilit pour les dclarants de demander ce que les informations restent

confidentielles lorsque leur diffusion pourrait porter atteinte au secret industriel et commercial.

38
Partie 1 : Le nanomonde

Le deuxime dcret prcise les organismes auxquels l'Anses peut transmettre les informations

qu'elle dtient. Il s'agit de l'Ansm, de l'InVS, de l'INRS, de l'Ineris et des organismes chargs de la

toxicovigilance.

Ce texte pourrait toutefois tre rvis d'ici dcembre 2014, en fonction du retour d'exprience et des

nouvelles donnes scientifiques (9).

39
Partie 2 : Applications des nanoparticules en

thrapeutique et cosmtique

40
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

I. Applications mdicales

Le dveloppement des nanotechnologies offre aujourdhui des outils minuscules, dont les proprits

exceptionnelles permettent denvisager des applications pointues en biomdecine (nano-mdecine) :

laboration de traitements plus srs et possibilit de ciblage thrapeutique en font des applications

prometteuses en cancrologie ou dermatologie par exemple.

Dautres travaux visent llaboration de surfaces biocompatibles pour implants et dispositifs

orthopdiques, vaccins composs dadjuvant base de nanoparticules, production dagents

antimicrobiens, et pour limagerie mdicale (imagerie par rsonnance magntique) par la mise au

point de nanoparticules magntiques comme agents de contraste.

1. Systme de dlivrance de mdicaments, principe de la vectorisation.

De nombreux axes de recherche concernent les nanoparticules inorganiques appliques au domaine

mdical. Il est possible de se poser la question de lintrt de dvelopper des nano-mdicaments en

raison de la richesse de la pharmacope dj existante. Une nouvelle gnration de mdicaments

sappuyant sur les progrs des nanotechnologies tente de cibler uniquement les organes et les tissus

malades. Cest le principe de la vectorisation (15). Lobjectif est de permettre le transport de

molcules biologiquement actives jusqu leur cible (24). Pour cela, le vecteur doit rpondre de

nombreuses exigences. Il doit tre biocompatible, cest dire tolr par lorganisme, doit franchir

les barrires biologiques et protger la molcule jusqu son site daction. De plus, il ne doit pas

tre toxique pour lorganisme. Ces performances permettent de limiter les effets indsirables et la

toxicit des mdicaments.

En pigeant la molcule dans une nanoparticule appele nanovecteur , le mdicament est protg

des dfenses naturelles du corps, il chappe au systme immunitaire jusquau moment o il atteint
41
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

les tissus viss, les cellules malades, voire lintrieur mme de la cellule.

Dans ce manuscrit, seuls les principaux nanovecteurs seront brivement dcrits. Parmi ces

nanovecteurs nous nous intresserons plus particulirement aux liposomes, micelles,

nanocapsules, nanosphres, et dendrimres.

Les liposomes sont des vsicules microscopiques formes de bicouches phospholipidiques

sinspirant des membranes biologiques. Cette organisation spontane est due au caractre

amphiphile des phospholipides. La phosphatidylcholine est le phospholipide le plus couramment

utilis pour llaboration de liposomes incorporant des molcules thrapeutiques (25).

Figure 4 : Reprsentation dun liposome, vsicule constitue dun cur aqueux entour dune

couronne lipidique (25).

Spontanment, les liposomes sorganisent en Multi-lamellar Vesicles (MLV) de 500 nm

10 m de diamtre et possdent deux ou plusieurs bicouches lipidiques spares entre elles par un

milieu aqueux. On retrouve galement des Small Uni-lamellar Vesicles (SUV), petits liposomes

denviron 25-50 nm de diamtre, possdant une seule bicouche de phospholipides. Enfin, les
42
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Large Unilamellar Vesicles (LUV) sont composs dune seule bicouche de taille comprise entre

50 et 500 nm de diamtre (25). Ces liposomes sont uniquement constitus du principe actif ou bien

fonctionnaliss par du polythylne glycol (PEG) voire mme par lajout de rcepteurs aux

marqueurs biologiques permettant un ciblage plus prcis de la cellule malade en cancrologie par

exemple.

Une dizaine de mdicaments transports par des nanovecteurs existent aujourdhui sur le

march. Cest le cas par exemple de lAmbisome. Il sagit dune formulation liposomale

damphotricine B, antifongique polynique large spectre actif sur les mycoses systmiques. Cette

formulation lipidique de lantifongique a t mise au point pour augmenter la tolrance de la

molcule tout en conservant son efficacit. En effet, lamphotricine B, traitement phare des

mycoses invasives possde une nphrotoxicit importante (26).

Aussi, les liposomes suscitent lespoir de thrapeutiques plus cibles en dermatologie et plus

particulirement dans le traitement de pathologies telles que lacn, la dermatite atopique, le

psoriasis voire mme les cancers cutans.

La peau est un organe directement accessible par lapplication de topiques dermatologiques. La

dlivrance optimale des molcules thrapeutiques ncessite la pntration de la couche corne afin

datteindre le tissu cible tout en vitant un passage systmique susceptible dtre lorigine deffets

indsirables. La structure molculaire des liposomes tant proche des lipides cutans, les molcules

internalises peuvent tre libres par fusion du liposome avec les membranes biologiques (6,25).

Les micelles se trouvent parmi les nanovecteurs dvelopps avec des applications mdicales

potentielles.

43
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Les micelles sont des nanoparticules constitues dune couronne de molcules amphiphiles c'est--

dire composes dun ple hydrophile et dun ple hydrophobe, en quilibre dynamique autour dun

cur non solide (27). En solution aqueuse, les molcules amphiphiles sorganisent spontanment en

minimisant les interactions de leurs parties hydrophobes avec lenvironnement aqueux alors quen

milieu organique les molcules amphiphiles adoptent le comportement inverse et ce sont les parties

hydrophiles qui sont orientes au cur de la micelle. Ces proprits font des micelles, des

nanoparticules intressantes car, de prparation aise, elles permettent dincorporer des molcules

aussi bien hydrophiles quhydrophobes.

Figure 5 : Reprsentation dune micelle, structure polymre de forme sphrique dont le cur est

hydrophobe et la couronne hydrophile (28).

Des tudes soulignent une protection de lopsonisation par lorganisation strique particulire de la

couronne des micelles. Lopsonisation est dfinie par lattachement des molcules du complment

la surface de la micelle, permettant ainsi daugmenter leur temps de demi-vie dans le sang (29).

Cependant lutilisation in vivo de ces micelles est encore ltape exprimentale.

Les nanocapsules sont des particules collodales constitues dun rservoir liquide ou semi-

liquide temprature ambiante dans lequel les molcules sont gnralement incorpores (30). Les

molcules peuvent aussi tre associes de faon covalente ou non la paroi polymrique (27).
44
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Toutefois, la plupart des nanocapsules possdent un rservoir lipidique permettant

lincorporation de molcules hydrophobes.

Les nanosphres sont des nanoparticules polymriques collodales matricielles ; de structure

entirement solide, pleines ou poreuses. Les nanosphres pleines sont des structures

nanomtriques compactes, de formes gnralement sphriques, synthtises base de polymres ou

de copolymres. Pour exemple, les nanoparticules de poly-(alkyl cyanoacrylate) (PACA),

biocompatibles et biodgradables, sont tudies comme vecteurs de molcules dans diffrents types

dapplications (vectorisation de drogues anticancreuses) (31).

Les dendrimres, catgorie mergeante de nanoparticules, sont des structures nanomtriques

formes de plusieurs sries de branchements organiss, relis par un cur molculaire (32). Les

dendrimres sont des nanovecteurs trs intressants. Grce ce systme de branchement, ils

offrent la possibilit deffectuer plusieurs types dassociations chimiques sur diffrents groupes

terminaux. Les molcules transportes sont insres entre les branchements ou associes

chimiquement ceux-ci. Les proprits des dendrimres dpendent de la nature chimique du cur

molculaire et des branchements (33).

Figure 6 : Reprsentation de dendrimre, macromolcule ramifie tridimensionnelle qui peut

accueillir et fixer une molcule de mdicament (28).

45
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

2. Imagerie mdicale et oncologie

2.1. Applications loncologie

Les progrs en nanotechnologie suscitent lespoir de nouveaux traitements du cancer, plus efficaces,

mieux cibls et mieux tolrs. Les nanoparticules, de part leur taille, leurs proprits physiques et

leurs interactions avec les tissus vivants, peuvent rpondre certains critres et se concentrer un

endroit prcis de lorganisme par exemple.

Les nanoparticules peuvent tre utilises selon les principes suivants : (i) la dlivrance cible de

molcules thrapeutiques, (ii) lexploitation de caractristiques propres aux nanoparticules pour la

thrapie.

2.1.1. Dlivrance cible de molcules thrapeutiques vise

anticancreuse.

La chimiothrapie conventionnelle, apparue dans les annes 1940 repose sur ladministration de

drogues non spcifiques , cystostatiques et cytotoxiques.

Il est ncessaire de proposer de nouvelles stratgies plus cibles, bases sur des mdicaments

dirigs spcifiquement contre les altrations molculaires responsables de cancers, et administrs

spcifiquement au site tumoral plutt que de manire gnralise.

Les proprits physiques des nanoparticules sont particulirement adaptes au dveloppement de

stratgies innovantes pour la mdecine. Elles constituent de petits chevaux de Troie permettant

de transporter jusqu la tumeur des agents cytotoxiques pour la thrapie amliorant

considrablement leur proprits pharmacocintiques et pharmacodynamiques. La nanotechnologie

offre la possibilit dun ciblage deux niveaux. Le ciblage molculaire consiste concevoir des

mdicaments capables dinteragir spcifiquement avec une cible molculaire pour neutraliser son

action (ciblage de lactivit enzymatique de protine). Le ciblage cellulaire consiste diriger lagent

46
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

thrapeutique vers un rcepteur spcifiquement exprim la surface des cellules cancreuses

(anticorps, fragments peptidiques ou ligands complmentaires) (17). De plus, les nanoparticules

sont couples des agents stabilisateurs pour permettre une diffusion prolonge dans lorganisme et

rduire leur reconnaissance et lopsonisation par le systme immunitaire (17,29).

Les nanoparticules augmenteraient la concentration de drogues anticancreuses au sein des cellules

atteintes tout en limitant la toxicit de ces mdicaments (34).

De nombreuses nanoparticules ont des utilisations possibles en oncologie. Quelques une seront

brivement dcrites dans ce manuscrit.

Des formulations nano-particulaires organiques, telles que les liposomes, constitus de polymres

organiques, de protines ou de peptides, ont t largement exploites pour la dlivrance de

molcules a vise anticancreuse.

A titre dexemples, mentionnons le Doxil et lAbraxane, mdicaments approuvs par la Food

and Drugs Administration (Etats-Unis) pour le traitement clinique de diffrents cancers. Le premier

constitue une formulation liposomale de Doxorubicine, utilise depuis plus de dix ans pour traiter le

sarcome de Kaposi, maladie opportuniste svissant chez le patient atteint du VIH (Virus

dimmunodficience humaine), le cancer du sein et de lovaire. Le second est une formulation nano-

particulaire dalbumine humaine couple au Paclitaxel. Cette formulation a montr une toxicit

rduite par rapport au Taxol dans des essais pr-cliniques de phase 1 et a permis en phase 2 et 3

dadministrer des doses suprieures en Paclitaxel amliorant ainsi lefficacit clinique, notamment

dans le cancer du sein mtastatique (17,34). Dautre part, des travaux raliss sur la souris rvlent

que leffet anti-tumoral de telles nanoparticules serait bien suprieur linjection dun mdicament

47
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

anticancreux tel que la Doxorubicine dose quivalente (29).

LAroplatine est un analogue structural de lOxaliplatine incorpor dans des liposomes

multilamellaires. LOxaliplatine est un analogue du Cisplatine, agent alkylant de lADN driv du

platine dot dune puissante action anticancreuse. LAroplatine a t test en phase 2 dessai

clinique chez des patients atteints de carcinome colorectal, rfractaires aux traitements

conventionnels (5 Fluoro-uracile associ lacide folinique, Capcitabine, Irinotecan). Cette

formulation liposomale est relativement bien tolre et possde une activit anti-tumorale

comparable celle de lOxaliplatine (35).

Les nanoparticules dor, dcores en surface par des oligonuclotides possdent des proprits

intressantes concernant ladministration de mdicaments : bonne pntration cellulaire, faible

toxicit, et protection des principes actifs vis--vis de la dgradation. Ces nanoparticules dor ont

t recouvertes en surface dun oligonuclotide portant un groupement amin terminal libre

condens un complexe du platine (IV). Lactivit de ces nanoparticules a t value in vitro sur

des lignes cellulaires (ostosarcomes humains, carcinome du poumon humain, cancer des

cervicales et de la prostate). Les nanoparticules dor sont 2 10 fois plus actives que le Cisplatine

sur toutes les lignes, en raison dune meilleure pntration cellulaire et dune meilleure

biodisponibilit (36).

48
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Dautres nanoparticules dor ou dargent sur lesquelles sont greffes des molcules thrapeutiques

ont t proposes pour le traitement topique de maladie de peau comme le psoriasis ou le cancer.

Figure 7 : Reprsentation dune nanoparticule dor, transportant une molcule thrapeutique. Du

PEG et un ligand y sont greffs (28).

Une meilleure biodisponibilit et un meilleur ciblage (tout en rduisant la toxicit des molcules)

sont les avantages mis en avant par certains auteurs concernant lutilisation de ces nanoparticules

par rapport aux nombreuses molcules dj prsentes sur le march (34).

Si de telles particules savrent prometteuses, il reste nanmoins dterminer leur toxicit long

terme car elles incluent des mtaux tels que le cobalt, le manganse ou le zinc non ncessairement

pris en charge par le mtabolisme de lorganisme. Leur utilisation chez lhomme nest donc pas

encore lordre du jour.

2.1.2. Exploitation de caractristiques propres aux nanoparticules

Les nanoparticules magntiques (nanoparticules dor, dargent, nanotubes de carbone) sont

galement activables distance et schauffent sous leffet dun champ magntique oscillant haute

frquence. Introduites au sein dune tumeur, elles peuvent endommager les cellules cancreuses en

provoquant une hyperthermie locale.

49
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Une des limitations de lhyperthermie magntique est le faible pouvoir chauffant des nanoparticules

magntiques usuelles. En consquence, pour obtenir un effet thrapeutique, de fortes doses de

nanoparticules doivent tre injectes localement dans la tumeur. La plupart des tudes vise donc

loptimisation du pouvoir chauffant des nanoparticules magntiques afin de rduire les doses

injectes (17,37).

Un autre exemple de caractristique propre aux nanoparticules exploitable en nano-mdecine est la

potentialisation des effets des rayonnements ionisants (radiothrapie anticancreuse). Dans ce cadre,

le produit NBTXR3 de la socit Nanobiotix a reu en juin 2013 lautorisation de lANSM pour

dmarrer un nouvel essai clinique de phase 1 chez une population cible de patients atteints de

carcinome pidermode localement avanc de la cavit buccale ou de loropharynx.

Cet essai clinique de phase 1 est une tude ouverte, non randomise, avec escalade de doses

valuant la toxicit et le profil de tolrance du produit. NBTXR3 est implant par injection intra-

artrielle ou intra-tumorale et activ par radiothrapie de haute prcision (radiothrapie

conformationnelle avec modulation dintensit ou IMRT), conformment la pratique mdicale.

Les objectifs secondaires de ltude incluent lvaluation de la rponse complte et globale par IRM

et lvaluation de la survie sans progression locale et gnrale (38).

Cette tude reprsente la deuxime indication du dveloppement clinique du NBTXR3,

actuellement en cours dvaluation chez des patients atteints dun sarcome des tissus mous.

Lactivation par rayons X de ce type de nanoparticules gnre des lectrons provoquant la

destruction des cellules cancreuses. Cette approche, en rduisant les doses de radiothrapie

ncessaire, limite les dommages des tissus sains et effets indsirables (39).

50
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

2.2. Applications limagerie

Les nanoparticules inorganiques possdent des proprits particulires de conductivit, de

magntisme, de biocompatibilit, de ractivit, et de fluorescence les rendant attractives dans

diffrentes applications y compris en diagnostic mdical. Plusieurs tudes internationales

dmontrent lintrt que prsente lutilisation de nanoparticules dans le domaine mdical, en tant

quagents de contraste en imagerie par rsonnance magntique particulirement.

Les agents de contraste sous forme nano-particulaire peuvent devenir des outils efficaces afin

damliorer les diagnostics mdicaux et la chirurgie assiste par imagerie. Lutilisation de

nanoparticules savre intressante par rapport aux agents de contraste iods, baryts ou complexes

de gadolinium par lamlioration de la biocompatibilit, des capacits de dtection in vivo et de

ciblage. Nanmoins, il faut garder lesprit lincompltude des donnes toxicologiques ce sujet.

Certains types de nanoparticules apparaissent depuis toujours comme agents de contraste. Cest le

cas de certaines nanoparticules doxydes mtalliques.

Les premires nanoparticules ayant obtenu une autorisation de mise sur le march (AMM) sont des

nanoparticules base doxydes de fer (Fe2O3), dveloppes comme agents de contraste en imagerie

par rsonance magntique (IRM) chez lhomme (40). On retrouve notamment certains produits tels

que lEndorem utilis dans limagerie du cancer du foie, produit par le laboratoire Guerbet, le

Feridex permettant la dtection de lsions du foie, AMAG Pharmaceuticals, le Lumirem dans

limagerie du tube digestif, laboratoire Guerbet, le Combidex dans limagerie des ganglions

lymphatiques du cancer de la prostate et le Resovist utilis pour la dtection de lsions du foie,

laboratoire Schering. Ce sont des nanoparticules constitues dun cur doxyde de fer, trs sensible

lexposition un champ magntique externe, enrob par des agents de fonctionnalisation

(principalement des drivs de dextran, silicone et citrate). Le dextran est le polymre le plus

employ dans la conception de ces produits. En effet, il permet de prolonger la demi-vie


51
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

plasmatique des nanoparticules in vivo compar dautres polysaccharides comme le mannose ou le

galactose.

Ces systmes nano-particulaires prsentent des tailles variables qui conditionnent leur

biodistribution. On peut ainsi classer les agents de contraste superparamagntiques constitus de

nanoparticules doxyde de fer en deux catgories : les USPION (Ultrasmall Super Paramagnetic

Iron Oxide Nanoparticles) de taille infrieure 50 nm (imagerie du cerveau, diagnostic des

pathologies ischmiques) et les SPION (Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles) qui

possdent une taille suprieure 50 nm (applications intressantes dans limagerie par voie

parentrale du foie, de la rate, du tractus gastro-intestinal et des ganglions lymphatiques) (40). De

faon gnrale, les nanoparticules inorganiques possdent des caractristiques dabsorption et de

diffraction de la lumire qui les rendent intressantes comme agent de contraste en imagerie.

Le dveloppement dagents de contraste, de sondes fluorescentes, de traceurs et bio-senseurs ,

associs au dveloppement de stratgies de vectorisation et de ciblage, offre des perspectives pour

limagerie du vivant. Lorsque ces dispositifs sont introduits slectivement au sein de cellules

cancreuses, ils deviennent visibles et donc traables par imagerie.

Les bio-senseurs fluorescents drivent de structures biologiques (peptides, protines ou

polymres). Ils comportent un domaine de reconnaissance de la cible molculaire, de son activit

enzymatique ou de sa conformation et sont coupls une ou plusieurs sondes fluorescentes dont les

proprits changent lors de la dtection de la cible. Les changements dans les concentrations

relatives, le comportement ou lactivit biologique et enzymatique dune cible sont rapports en

temps rel par les bio-senseurs (41). Par ailleurs, ils offrent une solution sensible et non-invasive

pour la dtection de bio-marqueurs cancreux par imagerie optique de fluorescence, palliant les

inconvnients de la biopsie. Les bio-marqueurs constituent une caractristique biologique

52
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

mesurable (protines, acides nucliques, mtabolites), lie un processus normal ou non.

Toutefois, ladministration de bio-senseurs fluorescents in vivo reste limite ce jour car elle

dpend du dveloppement de stratgies de vectorisation et de ciblage.

Ainsi les traceurs et bio-senseurs fluorescents doivent tre complexs des nanoparticules

organiques ou conjugus des nanoparticules inorganiques ou des nanotubes afin dassurer une

internalisation cellulaire efficace et le ciblage de cellules cancreuses (17).

Il est galement possible de concevoir des nanoparticules qui permettent simultanment de

visualiser et de traiter certaines tumeurs. Deux types de nanoparticules offrent ce type

sapplications.

Dune part, les nanoparticules dites passives , c'est--dire transportant des agents

photosensibilisants (37). Cest le cas de la nanoparticule de silice. Il sagit dun matriau poreux

biocompatible qui met une luminescence en se dgradant permettant ainsi le diagnostic mais aussi

le traage des cellules cancreuses in vivo. Il convient ensuite de fixer des ligands de surface afin de

cibler les cellules malades et dincorporer des molcules thrapeutiques dans les pores (37,42).

Parmi les nanoparticules passives citons galement les nanoparticules dor et les polymres

biodgradables.

Dautre part, les nanoparticules dites actives comme le TiO2, elles-mmes lorigine de leffet

photo-catalytique. Ce type de nanoparticule est susceptible de gnrer des radicaux libres oxygns

trs ractifs en prsence deau et sous rayonnements UV. Ces radicaux libres entranent la

destruction des cellules malades (37). Cependant, des avances techniques demeurent ncessaires et

la toxicit de la plupart des structures tudies constitue un obstacle majeur pour leur application

chez l'homme.

Les inconvnients des cette technique comme laddition de produits chimiques organiques toxiques

ou le recours aux nanocristaux semi-conducteurs afin dassurer la proprit de luminescence dans

53
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

les autres formes de particules dveloppes, risquent doccasionner une accumulation dans le corps

- notamment au niveau du foie - de mtaux potentiellement toxiques.

3. Antiseptiques : lexemple des nano-argents

Largent tait dj utilis pour ses proprits antiseptiques dans lantiquit. Ravelin, savant franais

dmontre au XIXme sicle que largent mtal ltat divis, agit dose extrmement faible, comme

un puissant bactricide. Peu aprs, un mdecin allemand Brenno Crede met en vidence que

largent en solution collodale c'est--dire en suspension dans leau distille, limine faible dose

de trs nombreuses bactries tout en restant trs peu toxique pour lhomme dans des conditions

normales dutilisation.

Largent sous forme nano-particulaire semble aujourdhui trs prometteur en raison de ses

proprits biocides, de son action anti-inflammatoire, et des applications mdicales qui en dcoulent

(43). Les nanoparticules dargent possdent des proprits trs intressantes compares de

nombreux antibiotiques, en raison de leur effet antibactrien. De plus, il ny a pas de risque

dallergie, les phnomnes de rsistance sont modrs et largent ninterfre pas avec les

antibiotiques (44).

La mthode de prparation la plus efficace dune solution collodale dargent est llectrolyse. Il

sagit dune raction chimique sous laction dun champ lectrique qui permet la formation dargent

mtal nano-particulaire (Ag), avec des proportions variables de cations argent (Ag+).

Sous laction du courant lectrique lanode libre des atomes dargent (Ag) sous forme de

nanoparticules, lesquelles possdent une surface active beaucoup plus importante que les atomes

dargent lmentaire classique , ce qui leur confre de remarquables proprits, surtout

bactricides.

Lobjectif est de limiter la formation de particules dargent charges positivement (Ag+), fortement

bactricides, mais trs toxiques pour certaines espces vivantes notamment les animaux sang froid

54
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

(poissons et les batraciens) (43).

Parmi les applications industrielles des nanoparticules dargent, on compte lincorporation dargent

dans des vtements comme les chaussettes afin de neutraliser les odeurs (45), mais aussi dans les

emballages alimentaires dans le but dinhiber la prolifration de microorganismes et de garantir

ainsi une meilleure conservation des aliments (46).

II. Applications en dermo-cosmtique

Lindustrie cosmtique tend sans cesse amliorer les proprits des produits cosmtiques : tenue,

transparence, brillance et proprits optiques. A cet effet, des tudes ciblent lutilisation de

nanoparticules en nano-dispersions et en micromulsions dans les formulations cosmtiques. Les

industries cosmtiques utilisent les formes nano-particulaires de leurs ingrdients afin damliorer

la protection contre les ultra-violets, la pntration cutane, la tenue de leur produit, la couleur,

lclat etc. (47). Il est admis que les plus grandes industries cosmtiques utilisent largement les

nanoparticules dans leur formulation comme le dmontre ce graphique.

Beiersdorf Este Lauder Johnson


Shiseido Johnson
Avon
L'Oral
Kao Corp

Unilever

Procter
Henkel Gamble

Figure 8 : Reprsentation du march des nanoparticules dans lindustrie cosmtique (47).

55
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Le march concernant les nanoparticules destines la cosmtique en 2012 est valu 155,8

millions de dollars (47)

1. Nanoparticules utilises en cosmtique

Diffrents types de nano-lments sont produits en vue dune application dans le domaine de la

cosmtique. Journal of pharmacy and Bioalled sciences en fait la synthse dans son article

Nanotechnology in cosmetic, opportunities and challenges, 2012 (47). Seules les nanoparticules les

plus couramment utilises seront voques. On retrouve entre autres :

Les liposomes. Ces structures permettent une meilleure absorption des principes actifs par la peau

par fusion de leur bicouche lipidique avec la membrane cutane.

Les nanomulsions. Ce sont des dispersions de gouttelettes nanomtriques. Leur petite taille fournit

une plus grande stabilit, amliore la performance des ingrdients actifs et la dure de conservation

du produit.

Les nanocapsules. Ce sont des particules nanomtriques faites dune capsule de polymre entourant

un noyau aqueux ou huileux. Il a t constat que lutilisation de nanocapsules diminuerait la

pntration de certains filtres UV dans la peau de porc compar aux mulsions classiques.

Les nanoparticules lipidiques solides. Ce sont des gouttelettes huileuses solides tempratures

corporelles et stabilises par des tensioactifs. Elles permettent de protger les ingrdients

encapsuls, de contrler la dlivrance des agents cosmtiques et damliorer la pntration de

composs actifs dans la couche corne.

56
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Les nanoparticules dor et dargent, peuvent galement tre intgres dans ces formulations en

raison de leurs proprits antibactriennes.

Les cubosomes sont forms par auto assemblage de particules liquides cristallines et de

tensioactifs. Les cubosomes offrent une grande surface, une faible viscosit et peuvent exister

nimporte quel niveau de dilution. Ils sont capables de transporter des molcules hydrophiles ou

hydrophobes. En raison du faible cot des matires premires et de leur potentiel dans la libration

contrle grce la fonctionnalisation, ils sont un choix attractif pour le secteur cosmtologique.

Les hydrogels sont des structures en trois dimensions constitues de rseaux de polymres

hydrophiles qui peuvent shydrater et gonfler dans leau et les liquides biologiques sans dissoudre la

substance encapsule .

Enfin, les fullernes entrent dans la composition de nombreuses crmes pour le visage trs

coteuses car ils constituent un capteur de radicaux libres. Ils peuvent galement tre utiliss

comme pigments. Les compositions cosmtiques dans lesquelles les fullernes sont utilises

concernent essentiellement le maquillage du visage (ombres paupires, eye-liners, mascaras,

poudres, fonds de teint, fards joues, crmes teintes, des rouges lvres, sticks anticerne, vernis

ongles, etc.).

Dans les compositions cosmtiques, le fullerne ou les mlanges de fullernes sont gnralement

prsents en une teneur comprise entre 0,01 et 50 % en poids par rapport au poids total de la

composition, celle-ci tant dpendante de l'effet cosmtique recherch.

57
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

Les compositions cosmtiques de maquillage contiennent, des pigments supplmentaires rfrencs

dans le Colour index.

Dnomination Codification

Dioxyde de titane CI 77891

Noir CI 77499

Jaune CI77492

Violet de manganse CI 77742

Bleu outremer CI 77007

Bleu ferrique CI 77510

Tableau 2 : Quelques pigments minraux rfrencs dans le Colour index

2. Protection solaire

On constate ces dernires annes une augmentation des cas de cancers cutans pithliaux et

mlanomes. L'utilisation des crmes solaires est alors propose comme un lment important de

prvention des cancers cutans (48).

Les crmes solaires classiques utilisent des lments chimiques organiques capables d'absorber les

rayonnements ultra-violets. Une des principales applications des nanoparticules dans le domaine

dermo-cosmtique est leur utilisation en tant que filtre anti-UV.

Les particules de dioxyde de titane (TiO2) et doxyde de zinc (ZnO) sont utilises depuis de

nombreuses annes dans les crmes solaires en tant que filtres anti-UV. Ces particules ont la

capacit d'absorber et de reflter les rayonnements UV confrant ainsi une photo-protection. Etant

visibles, ces particules laissaient un film blanc sur la peau. La rduction de leur taille aux

dimensions nanomtriques a permis llaboration de crmes solaires invisibles tout en

conservant leur proprit photo-protectrice (49). Les nanoparticules des TiO2 utilises en tant que

58
Partie 2 : Applications en thrapeutique et cosmtique

filtres inorganiques sont gnralement sous forme cristalline (rutile le plus souvent, anatase, ou

mlange des deux). Concernant le ZnO, la forme cristallographique la plus stable

thermodynamiquement est la structure hexagonale compacte (de type Wrtzite). Son aptitude

rflchir la lumire UV fait du ZnO un lment de choix pour son utilisation en tant que filtre UV

dans les produits de protection solaire.

Les particules formules dans les crmes solaires peuvent tre enrobes dalumine, de silice, mais

aussi de substances organiques telles que le dimthicone ou lacide stearique afin d'amliorer leur

stabilit, lincorporation dans les formules et d'empcher d'ventuelles ractions chimiques

(diminution de leffet photo-catalytique rduisant la production doxydants).

D'autres structures nano-particulaires telles que les liposomes sont utilises d'une part pour leur

proprit de bloqueurs de photons, d'autre part afin d'augmenter la pntration grce la

prsence de la bicouche phospholipidique.

Un autre avantage de ce type de formulation est l'homognit de la distribution sur la surface

cutane aprs application apportant ainsi une photo-protection maximale la diffrence des crmes

de formulation huile/eau qui prsentent une rpartition htrogne en raison de l'orientation des

composs lipophiles au niveau des rgions hydrophiles de la couche corne (6).

59
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition aux

nanoparticules

60
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

I. Toxicologie des nanoparticules

En raison des multiples perspectives dutilisation des nanomatriaux et de leur croissance attendue

ces prochaines annes dans des domaines tels que lindustrie, la mdecine ou encore

lenvironnement, les expositions humaines sont potentiellement nombreuses et importantes (2). La

dtermination de ces expositions passe au pralable par lidentification de lensemble des produits

et des milieux pouvant contenir des nanoparticules (50).

Les connaissances actuelles des effets notamment respiratoires et cardiovasculaires des particules

nanomtriques ou particules ultrafines issues de la pollution atmosphrique (51) font craindre des

incidences sur la sant dues aux nanoparticules issues des activits anthropiques et plus encore des

nanoparticules manufactures. Les nanoparticules issues de la pollution atmosphrique prsentent

des proprits toxiques qui peuvent sappliquer aux nanoparticules manufactures retrouves au

sein de nombreux composs domestiques. Lors de ces expositions, il est avanc que les

nanoparticules sont susceptibles de pntrer dans lorganisme par voies cutanes, respiratoires ou

encore digestives (20).

1. Les sources dexposition de la population gnrale aux nanomatriaux

Lexposition est dfinie comme le contact dans le temps et lespace entre une personne et un ou

plusieurs agents biologiques, physiques ou chimiques. Lvaluation de lexposition a pour but de

dfinir les cas dexposition rels ou possibles dans une population humaine ou un systme

biologique. Lexposition humaine aux nanoparticules peut avoir lieu en milieu professionnel ou

environnemental, et en tant que consommateur (12). Deux types dexposition de la population

gnrale aux nanoparticules peuvent tre distingus. Dune part, les expositions dites directes

cest--dire les expositions quotidiennes aux nanomatriaux contenus dans les produits de

consommation courante : produits dhygine corporelle et domestiques, mdicaments, emballages


61
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

alimentaires, vtements et textiles, prothses mdicales, etc.

Dautre part, les expositions dites indirectes : les nanoparticules se retrouvant dans

lenvironnement suite lusure, la dgradation ou la fin de vie des composs contenant ces

nano-objets . Citons lexemple des nanoparticules contenues dans les pneumatiques, les encres,

les carburants, les appareils lectroniques, les textiles, les films de vitrages, les panneaux solaires,

etc. (52). Dans ce contexte dexpositions indirectes, la caractrisation des expositions humaines

passe par la comprhension pralable des phnomnes de dgradation, dmission, de transport et

daccumulation dans lenvironnement (12).

2. Principaux facteurs dterminant les effets toxicologiques des

nanoparticules

Les principaux facteurs dterminant la toxicologie des nanoparticules manufactures sont : les

facteurs concernant lexposition : voies, importance et dure de lexposition ; les facteurs

concernant lindividu expos : susceptibilit individuelle, interaction des nanoparticules avec les

composants biologiques, volution des nanoparticules aprs leur entre dans lorganisme et les

proprits physico-chimiques des nanoparticules (53).

Ainsi, dans le cas des nanoparticules, la composition chimique nest pas seule influencer leur

potentielle toxicit. Dautres proprits, notamment leur taille, jouent un rle dans celle-ci,

permettant aux nanoparticules dchapper aux mcanismes de dfense de lorganisme et dinteragir

avec les constituants biologiques (ADN).

Limpact des caractristiques physico-chimiques des nanoparticules manufactures sur leurs effets

toxiques est loin dtre dfini et dfinitif. Cependant, les donnes obtenues sur les consquences

toxicologiques des nanoparticules issues de la pollution atmosphrique, permettent de penser que

certains facteurs seraient impliqus dans les effets toxicologiques des nanoparticules manufactures.

Parmi ces paramtres, citons : la taille, pouvant altrer les proprits physico-chimiques des

62
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

molcules et ainsi augmenter la ractivit avec les tissus biologiques par la production de radicaux

libres oxygns ; laire et la ractivit de surface ; le nombre ; la composition chimique et

particulirement la capacit produire des formes ractives de loxygne ; la forme ; la solubilit ;

la capacit former des agrgats ou des agglomrats ; les traitements de surface ; la structure ; la

cristallinit ; enfin, dautres paramtres tels que les mthodes de fabrication et lusure des

nanomatriaux manufactures entrent galement en considration (11,53).

II. Voies et conditions de pntration

1. Pntration cutane

1.1. La peau : rappels anatomiques

La peau est constitue denviron 70 % deau, 27 % de lipides, 2 % de protines et denviron 1 %

doligo-lments. La peau est lorgane du corps humain le plus tendu et le plus lourd, cest un tissu

de revtement trs souple, rsistant et impermable.

Elle constitue la couche corporelle protectrice externe mais elle est galement implique dans

diffrents processus fondamentaux tels que la rgulation de la temprature corporelle, la dfense

immunitaire, le mtabolisme (synthse des vitamines D, hormones, sbum), ou encore la perception

sensorielle.

Elle est constitue de trois couches : lpiderme, le derme et lhypoderme. Lpiderme est la couche

la plus externe, protectrice. Lpaisseur moyenne de lpiderme est de 100 m mais peut varier de

50 m au niveau de la paupire 1 mm au niveau de la paume de la main ou de la plante des pieds.

A la surface de la peau sont prsents des follicules pileux do mergent des poils, ainsi que des

pores o souvrent les glandes sudoripares et sbaces. Elle prsente galement des sillons formant

63
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

les empreintes digitales (54).

Figure 9 : Reprsentation anatomique de la peau et de ses annexes.

1.2. Lpiderme

Lpiderme est un pithlium pavimenteux pluristratifi pais, kratinis et non vascularis. Il est en

constant renouvellement. Cest un tissu de recouvrement comprenant cinq couches successives. La

plus profonde est la couche basale ou germinative, puis vient la couche pineuse, la couche

granuleuse et enfin la couche corne (stratum corneum), couche la plus superficielle.

La couche corne se compose d'environ une vingtaine de couches de cellules mortes. Cest une

couche de kratine, compose de cornocytes et rsistante aux changements chimiques. La couche

corne assure plusieurs fonctions de la peau. Elle la protge contre les agressions extrieures

(chaleur, froid, scheresse, dshydratation) et agit galement comme une barrire en empchant la

pntration dans l'organisme d'lments extrieurs (agents microbiens, poussires, etc.).

La partie superficielle de la couche corne desquame progressivement au fur et mesure que ses

cellules se dtachent de l'pithlium plus profond.

Lpiderme, est un tissu particulirement expos aux atteintes physiques, chimiques ou

64
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

microbiennes du monde extrieur. Il assure lorganisme une barrire protectrice grce

llimination progressive de ses parties les plus superficielles, perte compense par un

renouvellement cellulaire continu partir de cellules souches et vitent la dshydratation de

lorganisme. Lpiderme est constamment renouvel tous les 25 40 jours.

Lpiderme est compos prs de 95% de kratinocytes produisant la kratine. La kratine est une

protine fibreuse, insoluble, constitue en majorit dacides amins soufrs (cystine) formant des

ponts disulfures confrant ainsi une rigidit lensemble. Toutes les cellules de l'piderme sont

relies entre elles par des structures appeles les desmosomes.

Les mlanocytes, prsents dans lpiderme, synthtisent un pigment, la mlanine (melas = noir).

Cette varit de cellules se situe plus profondment dans l'piderme, mais reste nanmoins en

contact avec les kratinocytes qui intgrent progressivement la mlanine fabrique par les

mlanocytes. Les pigments de mlanine ainsi absorbs protgent notamment lADN des cellules

pithliales contre les effets nfastes des rayonnements solaires (ultraviolets A, B et C). D'autres

varits de cellules prsentes dans l'piderme sont des cellules circulantes du systme immunitaire

et servent essentiellement la dfense de l'organisme (54).

1.3. Fonction barrire de la peau

La peau constitue une frontire mcanique, physique, chimique et immunologique. Elle joue le rle

de barrire de protection contre les agressions externes multiples (rayonnements, micro-organismes,

substances chimiques, allergnes) et vite la dshydratation de lorganisme. Elle est galement le

sige de nombreux processus mtaboliques et assure des fonctions sensorielles, immunitaires et

thermorgulatrices (55).

65
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

La notion de barrire cutane se rfre la fonction de la couche corne qui est la couche externe

de lpiderme. Dun point de vue physiologique et fonctionnel, la fonction barrire rsulte dune

organisation tissulaire et biochimique bien spcifique et particulire au niveau protique, lipidique

et enfin au niveau de la composition et de la distribution ionique (55).

1.4. Limites de la barrire cutane

Cette barrire demeure incomplte car elle laisse passer certaines substances (cafine), certains

toxiques (alcool, acide salicylique, iode), et peut tre amoindrie par des effractions cutanes, des

maladies cutanes (psoriasis, eczma) ou encore un effet occlusif (sous un pansement ou corps gras,

par exemple).

Elle est permable pratiquement toutes les substances, seul le degr de permabilit varie.

Diffrents paramtres peuvent influencer lefficacit de la fonction barrire de la peau : lquilibre

physico-chimique de la couche corne (hydrophobicit, lipophilie, scrtion de sbum) ; le pH

cutan, important puisquil conditionne lionisation et la capacit dabsorption des principes actifs.

Ce pH est variable sur les divers endroits du corps, mais aussi en fonction de la sueur, des scrtions

sborrhiques, ou des pathologies de la peau. La peau est environ pH 5, mais le pH des

cosmtiques appliqus peut faire varier celui-ci; lintgrit biologique de la peau : ltat de la peau

est un facteur essentiel. Une peau dont la fonction barrire est lse (brlures, cicatrices, eczma)

favorisera la pntration dagents exognes ; lge du sujet : des diffrences de permabilit sont

observes entre lenfant et le sujet g, notamment en raison de diffrence dhydratation, dabsence

de glandes sbaces, dune kratinisation moins importante chez lenfant et dun amincissement de

lpiderme chez les personnes ges ; lpaisseur de la peau : lpaisseur de lpiderme et surtout

de la couche corne a un impact sur lefficacit de la fonction barrire. Pour exemple, les zones

palmoplantaires sont relativement peu permables compte tenu de lpaisseur de la couche corne

(55) ; lespce considre : par rapport aux autres espces, la peau humaine est gnralement la

66
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

peau la moins permable aux substances chimiques (56).

1.5. Les voies de pntration cutane

L'absorption percutane correspond au transfert d'une substance travers la peau depuis le milieu

extrieur jusqu'au sang. L'tape de pntration est une diffusion passive. Elle dpend du gradient de

concentration des molcules existantes dans le vhicule et de la surface pidermique. Une fois

absorbe, la substance est distribue dans l'organisme puis, aprs avoir t ou non mtabolise,

c'est--dire transforme par lorganisme, est limine. Au sein de l'piderme, la couche corne est

reconnue comme barrire la diffusion.

Anatomiquement, deux voies sont possibles pour la pntration des particules : l'une, par diffusion

passive, travers les espaces intercellulaires de la couche corne et travers les cellules cornes

elles-mmes dite voie transpidermique ; l'autre empruntant les annexes cutanes comme les

follicules pilo-sbacs et/ou les glandes sudoripares, dite voie transannexielle.

La pntration ne s'effectue pas uniquement par l'une des voies, les deux participent au phnomne.

La pntration globale rsulte donc la fois d'un passage transpidermique et transannexiel (55).

2. Pntration respiratoire

2.1. Rappel : Anatomie de lappareil respiratoire

Lappareil respiratoire est lensemble des organes dont la fonction est dassurer la respiration

permettant les changes gazeux entre lair et le sang. A lappareil respiratoire, sont annexs

lappareil olfactif et une partie de lappareil phonatoire (57).

Dun point de vue anatomique, lappareil respiratoire comprend les voies ariennes, les poumons, la

plvre, la circulation pulmonaire et les muscles respirateurs insrs sur la paroi thoracique.

Les voies ariennes sont divises en voies ariennes suprieures et voies ariennes infrieures. Les

67
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

voies ariennes suprieures sont situes dans la face et le cou et comprennent les fosses nasales

(annexes lolfaction), les sinus paranasaux, le pharynx (carrefour avec lappareil digestif), et le

larynx (annex la phonation) (57). Les voies ariennes infrieures sont situes dans le cou et le

thorax. Elles sont composes de la trache et de larbre bronchique jusquaux alvoles pulmonaires.

Les poumons, entours de la plvre, sont les deux organes parenchymateux o se produisent les

changes gazeux entre latmosphre et la circulation pulmonaire ou petite circulation.

La paroi thoracique entoure la cavit thoracique o se situent les poumons. Elle est mobile grce

laction des muscles respirateurs (58).

Les voies ariennes sont couvertes dun pithlium, qui est un tissu compos de cellules pithliales

jointives et solidaires les unes des autres grce des jonctions intercellulaires. Les alvoles sont

elles-mmes composes de trois couches : les cellules pithliales, linterstitium et une couche

dendothlium. Linterstitium est compos dun tissu conjonctif qui soutient les cloisons alvolaires

(58).

2.2. La muqueuse respiratoire

La muqueuse respiratoire est prsente depuis les fosses nasales jusquaux bronchioles terminales

intra-pulmonaires. Elle se compose dun pithlium, dune lame basale dune paisseur denviron

1000 et dun chorion. Le chorion est un tissu conjonctif lche constitu dlments

caractristiques : Le MALT / BALT (Tissu Lymphode Associ aux Muqueuses / aux Bronches),

systme de veille immunologique. Ce chorion prsente un infiltrat lymphocytaire (sous forme de

lymphocytes isols ou regroups en follicules primaires et secondaires), des monocytes et des

macrophages ainsi que des cellules pro-inflammatoires, comme les mastocytes ou les

polynuclaires. Sont galement prsentes des glandes sreuses qui scrtent des solutions protiques

trs fluides ainsi que des glandes muqueuses qui scrtent des mucines.

68
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Plusieurs types dpithliums sont prsents au niveau de lappareil respiratoire : lpithlium

pseudo-stratifi qui est un pithlium simple (une seule assise de cellules), mais qui ressemble, sur

des coupes histologiques, un pithlium stratifi (toutes les cellules sont en contact avec la lame

basale mais toutes natteignent pas le ple apical) ; lpithlium prismatique, ou cylindrique : les

cellules sont plus hautes que larges ; lpithlium cili : les cellules cilies majoritaires sont

pourvues de cils vibratiles apicaux. Ils participent lescalator muco-ciliaire, systme de clairance

spcifique des voies de conduction (58).

2.3. Fonction barrire de l'pithlium respiratoire

Lorganisme dispose au niveau de lappareil respiratoire de moyens de dfense trs diversifis et

sophistiqus contre les agressions des gaz et des particules de lair ambiant.

Tout dabord des moyens mcaniques. La disposition anatomique des voies ariennes et de larbre

trachobronchique favorise la dposition des particules. Il se produit donc une filtration

nasopharynge et trachobronchique, et une vacuation mcanique par le tapis mucociliaire (58).

L'pithlium respiratoire est trs actif grce des fonctions scrtoires (production de mucus), des

fonctions d'puration par clairance mucociliaire, de transport d'ions et d'autres substances, mais

aussi des fonctions d'adhrence bactrienne.

Le mucus forme un revtement continu tapissant toutes les voies de conductions. Il a une triple

fonction. Il assure lhumidification de lair inspir, la protection physique des cellules pithliales et

pige les particules. Les scrtions bronchiques peuvent tre assimiles un milieu bi-phasique.

Dune part, une phase sol aqueuse, profonde et fluide (ions, lipides, protine) dans laquelle

baignent les cils. Dautre part une phase gel , viscolastique et superficielle, prsente au sommet

des cils (58,59).

69
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Le mucus contient des mucines. Ce sont des macromolcules acides ou neutres de hauts poids

molculaires trs htrognes. Ces chanes polypeptidiques sur lesquelles sont fixs des groupes

glucidiques reprsentent des sites de liaison pour les adhsines bactriennes et les virus, avant leur

limination mcanique par l'activit ciliaire.

Des moyens physico-chimiques constituent galement un systme de dfense. Cela concerne toutes

les surfaces de contact avec lair inhal en raison de la prsence de revtements de protection des

parois (mucus des voies de conduction, surfactant alvolaire).

Enfin, des moyens cellulaires. Ils jouent un rle majeur au niveau de la zone alvolaire : les

macrophages alvolaires (cellules poussires) prennent en charge les particules insolubles par

phagocytose. Ils entourent les particules, les digrent et les dirigent vers lascenseur muco-ciliaire

pour llimination. Lefficacit de la phagocytose dpend de la forme, de la taille et de la quantit

de particules prsentes. En effet, ce systme peut tre satur par un nombre trop important de

particules liminer (9).

2.4. Limites de la barrire respiratoire

Les modulations physiologiques des ractions de dfense de lappareil respiratoire en rponse aux

agressions des polluants ariens sont nombreuses.

Il peut se produire des changements de diamtre des voies de conduction : diminution du diamtre

(bronchoconstriction) ou augmentation (bronchodilatation) ; des modifications de la frquence

respiratoire impliquant une oscillation de la frquence dentre des polluants ; une variation des

secrtions de mucus et de surfactant.

Laugmentation de la scrtion de mucus, gnralement accompagne dune broncho-dilatation,

favorise : lpuration muco-ciliaire des particules ; les expulsions rflexes (toux, ternuements) et

70
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

lactivation des moyens de dfense cellulaire (phagocytose par les macrophages, raction immune

par les lymphocytes, mastocytes et cellules prsentatrices de lantigne).

En rgle gnrale, ces ractions dfensives tendent empcher la pntration dun polluant (gaz

irritants, poussires) dans la profondeur des voies de conduction arienne et acclrer

lpuration des polluants particulaires dposs sur les parois des voies de conduction.

Dans certains cas, les ractions de lappareil respiratoire prsentent des insuffisances. En particulier

si lagression est importante ou prolonge : une hyperscrtion de mucus risque dencombrer les

voies respiratoires et une inflammation chronique peut dclencher un processus de fibrose. Enfin, il

faut garder prsent lesprit que certains polluants peuvent djouer les systmes de dfense en

pntrant lappareil respiratoire sans provoquer la moindre raction (monoxyde de carbone par

exemple).

Aussi, les ractions de dfense dpendent souvent de manire importante : des variations

physiologiques entre les individus (ge, sexe ou susceptibilit gntique) ; du niveaux dactivit

physique (effort intense) car laugmentation de la ventilation et de la perfusion pulmonaire accrot

le niveau dexposition du sujet ; de son tat de sant (asthme, bronchopneumopathie chronique

obstructive) (58).

2.5. Pntration et accumulation : dposition des nanoparticules dans

les rgions du systme respiratoire

Linhalation reprsente la principale voie dexposition aux nanoparticules chez lhomme. Un

nombre considrable de nanoparticules ou particules ultrafines sous forme darosol existe dans

lenvironnement, en grande partie en raison du trafic automobile et des divers procds industriels

(20).

71
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Ltude du dpt des particules dans le systme respiratoire rvle dimportantes diffrences

concernant les sites de dposition. Le diamtre des particules inhales, en particulier entre les

particules de taille nanomtrique et les particules de taille plus importante influence grandement

leur dpt.

Cinq mcanismes interviennent dans le dpt de particules : la sdimentation, lie la gravit

agissant sur les particules ; limpaction inertielle, qui caractrise le comportement des particules

massives ; linterception, qui se produit au moment o une particule entre en contact avec une

surface ; la diffusion, lie au mouvement alatoire des particules trs fines et lattraction

lectrostatique, pouvant influencer nettement le dpt pour les particules fortement charges (11).

Afin dexaminer la dposition des nanoparticules, le systme respiratoire est divis en trois rgions :

les rgions naso-pharynge, tracho-bronchique et alvolaire. Chaque rgion constitue un lieu de

dpt de nanoparticules de diffrentes tailles.

La morphologie de larbre respiratoire et les paramtres physiologiques varient de manire

importante en fonction des individus et de leur activit.

Lge, le sexe, les pathologies telles que les syndromes obstructifs (bronchopneumopathie

chronique obstructive) et restrictifs (asthme) sont des lments qui peuvent altrer le

fonctionnement et la structure normale des voies respiratoires (11).

De manire gnrale, le plus faible dpt est constat pour les particules dun diamtre denviron

300 nm. A cette taille, les particules sont trop grosses pour que le mcanisme de diffusion soit

important et trop petites pour que limpaction et la sdimentation aient un effet (11).

La figure 10 reprsente le dpt total et rgional dans larbre respiratoire des particules en fonction

de leur diamtre (compris entre 1 nm et 100 m). Ces courbes correspondent un sujet rfrent ,

c'est--dire respirant majoritairement par le nez ou la bouche et passant un tiers de sont temps assis

72
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

et deux tiers de son temps en activit lgre. Pour les particules de diamtre infrieur 300 nm, le

dpt augmente de manire significative car la diffusion devient prdominante. Les nanoparticules

de diamtre suprieur 10 nm se dposent plus de 50% au niveau alvolaire, tandis que celles

infrieures 10 nm se dposent principalement en rgion extra thoracique (plus de 80%), et de

manire moins importante dans la rgion tracho-bronchique.

Notons quentre 10 nm et 200 nm, le mode de respiration a peu deffets sur le dpt des particules.

Ces importantes diffrences de lieux de dposition ont des consquences sur les effets potentiels des

nanoparticules dans le systme respiratoire.

Figure 10 : Prdiction du dpt de particules inhales au niveau du systme respiratoire chez

lhomme en fonction du diamtre des particules. Le sujet respirant majoritairement par la bouche

(pointill) ou par le nez (ligne continue) (11)

73
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Cas particulier : inhalation de poudre libre cosmtique

Une tude amricaine sintresse lexposition et au risque dinhalation des nanoparticules suite

lutilisation de poudres cosmtiques (blush, poudres minrales) (60). Parmi les six produits du

commerce analyss, cinq prsentent dans leur formulation des nanoparticules alors que seulement

trois fabricants nen revendiquaient la prsence. La microscopie lectronique transmission est

utilise afin de dterminer la taille, la structure et lagglomration des nanoparticules alors que la

spectroscopie diffraction laser a pour but dvaluer la dispersion des nanoparticules dans lair ainsi

que leur distribution en fonction de la taille. Ltude rvle que les nanoparticules contenues dans

ces poudres sont essentiellement prsentes sous forme dagglomrats.

Afin de mimer les conditions relles dexposition aux nanoparticules contenues dans les poudres

cosmtiques, la poudre a t applique sur des visages artificiels laide du pinceau fourni par

le fabricant. La distribution des particules en fonction de leur taille et leur concentration est ensuite

dtermine. Les rsultats rvlent dans ce cas une dposition de ces agglomrats essentiellement au

niveau des voies ariennes suprieures. Les investigations doivent tre poursuivies mais cette tude

donne un exemple de mthodologie utilisable afin de dterminer quantitativement lexposition aux

nanoparticules contenues dans les cosmtiques en vue dvaluer les risques toxicologiques lis

leur utilisation.

3. Ingestion

3.1. Rappel anatomique : lappareil digestif

Le tube digestif stend de l'sophage jusquau canal anal. Il est form d'une paroi regroupant cinq

tuniques concentriques. De l'intrieur vers l'extrieur, on distingue ainsi : une muqueuse constitue

dun pithlium reposant sur un chorion (tissu conjonctif). C'est la tunique la plus interne, en

contact avec la lumire du tube digestif ; une musculaire-muqueuse, tunique fine faite de cellules

74
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

musculaires lisses ; une sous-muqueuse, constitue de tissu conjonctif ; une musculeuse, tunique

paisse constitue de cellules musculaires lisses ; une adventice faite de tissu conjonctif.

3.2. La muqueuse du tube digestif

Trois types dpithlium prsentant des morphologies et des fonctions diffrentes constituent le

revtement interne du tube digestif : un pithlium de protection mcanique, un pithlium de

protection chimique et un pithlium dabsorption.

Lpithlium de protection mcanique est observ au niveau des deux extrmits du tube digestif

(sophage et canal anal). Il sagit dun pithlium pavimenteux stratifi. Il est non kratinis sauf

au niveau des 2/3 infrieurs du canal anal o il sagit dun prolongement de lpiderme.

Lpithlium de protection chimique est localis au niveau de lestomac. Il sagit dun pithlium

prismatique simple, c'est--dire form de cellules plus hautes que larges, alignes en mono-couche.

Ces cellules sont scrtrices et dites ple muqueux ferm. Cest un pithlium scrtoire. Le

mucus produit par cet pithlium scrtoire contribue lubrifier la paroi gastrique et la protger

de lattaque du suc gastrique. Lpithlium gastrique sinvagine et forme de petites dpressions

appeles cryptes au fond desquelles souvrent les canaux excrteurs des glandes gastriques.

Lpithlium dabsorption est localis au niveau de lintestin. Il sagit dun pithlium prismatique

simple constitu dentrocytes et accueillant des cellules glandulaires isoles, les cellules

caliciformes. Les entrocytes prsentent une diffrenciation de leur ple apical sous forme de

microvillosits. Les microvillosits sont de petites expansions cytoplasmiques pouvant sorganiser

sous deux formes : plateau stri encore appel bordure en brosse et strocils. La fonction des

entrocytes est labsorption digestive des nutriments (cest--dire des glucides, des protides, et des

lipides) au niveau des microvillosits. De nombreuses enzymes sont prsentes et vont permettre

75
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

dachever lhydrolyse des protides en acides amins qui seront pris en charge par des transporteurs

spcifiques de la membrane plasmique apicale. Au niveau de cet pithlium se trouvent aussi des

cellules caliciformes. Ce sont des cellules glandulaires scrtion muqueuse participant la

lubrification du tube digestif.

Lorganisation de cet pithlium dabsorption prsente des variations rgionales.

Au niveau de lintestin grle (duodnum, jjunum, ilon), les entrocytes sont beaucoup plus

abondants que les cellules caliciformes et leur plateau stri constitue le dernier niveau dun

dispositif complexe damplification de la surface dabsorption. Ce dispositif comprend : les anses

intestinales (replis de lintestin), les valvules conniventes (plis transversaux permanents de la

muqueuse et de la musculaire muqueuse), les villosits intestinales : expansions en doigt de gant de

la muqueuse contenant des cellules musculaires lisses et des vaisseaux sanguins et lymphatiques,

enfin, les microvillosits du plateau stri des entrocytes.

Au niveau du clon et du rectum, les cellules caliciformes sont beaucoup plus nombreuses que les

entrocytes. Il ny a pas de systme damplification de la surface intestinale.

3.3. Fonctions du tube digestif

Le tube digestif exerce essentiellement trois types de fonctions : des fonctions digestives, des

fonctions immunitaires et des fonctions endocrines.

Les fonctions digestives sont assures par trois constituants majeurs de la paroi digestive :

lpithlium de revtement, qui participe au transit des aliments et labsorption des nutriments ;

les glandes exocrines du tube digestif, qui protgent et lubrifient les parois du tube digestif et

participent la dgradation des aliments ; la musculature lisse du tube digestif, qui permet la

progression et le brassage mcanique des aliments.

76
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Les fonctions immunitaires sont assures par les organes lymphodes du tube digestif.

Enfin, les fonctions endocrines sont assures par les cellules endocrines dissmines dans

lpithlium du tube digestif et qui scrtent des hormones digestives.

3.4. Pntration et accumulation des nanoparticules dans le tractus

gastro-intestinal

Les nanoparticules peuvent atteindre le systme gastro-intestinal aprs avoir t ingres

indirectement (non intentionnellement) si contenues dans lalimentation, leau ou encore prsentes

dans les cosmtiques et produits dhygine (rouges lvres, dentifrice), voire directement

(intentionnellement) en tant que vecteurs de mdicaments. Elles peuvent galement accder au

systme gastro-intestinal aprs dglutition lorsquelles sont inhales (20). En effet, les

nanoparticules inhales se dposant sur larbre tracho-bronchique peuvent tre piges dans le

mucus qui tapisse la paroi des voies ariennes et transportes vers la cavit oro-pharynge par

mouvements mucociliaires. Ce mucus ensuite dgluti, transporte les particules vers le systme

gastro-intestinal. Notons que 98% des nanoparticules ingres sont vacues par les selles en 48

heures et une partie de la quantit restante par les urines. Cependant, un faible pourcentage de ces

nanoparticules peut diffuser travers le mucus, tre absorb par les entrocytes et gagner la

circulation sanguine (1).

La pntration des nanoparticules est favorise par la superficie totale du tube digestif qui est

denviron 240 m2 mais dpend aussi de leur taille et de leurs proprits physico-chimiques comme

la stabilit, ou la surface hydrophobe (61). La charge semble galement intervenir dans la

pntration des nanoparticules (62). Pour exemple, les nanoparticules de latex charges

positivement sont piges dans le mucus charg ngativement tandis que celles charges

77
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

positivement traversent le mucus et peuvent interagir avec les cellules pithliales (1,46).

Carrire et al, tudie in vitro (article en rvision) la translocation de nanoparticules de TiO2 travers

diffrents modles dpithliums gastro-intestinaux : un modle dentrocytes (Caco2) ; un modle

traduisant la complexit de la barrire digestive (co-culture Caco2 HT29-MTX ; entrocytes -

cellule scrtrice mucus) ; un modle complexe reprsentatif des cellules M (co-culture

Caco2/RajiB).

Les cellules M jouent un rle immunologique car permettent lendocytose et la phagocytose. Ces

modles sont intressants car ils prennent en compte la complexit de la structure intestinale.

Cependant une des limites de cette approche in vitro est la possibilit de rupture ou de dplacement

des couches cellulaires faussant ainsi le passage des nanoparticules.

Ces modles sont mis en prsence de nanoparticules de TiO2 sous forme cristalline (anatase, 25

nm). La translocation possible travers la barrire biologique est dtermine par microscopie

lectronique transmission, une cartographie lmentaire par XRF couple une analyse de

lenvironnement atomique du titane par spectromtrie dabsorption des rayons X.

Les rsultats de cette tude montrent une faible accumulation de TiO2 au niveau des cellules Caco2

ainsi quune absence de leur translocation ; une accumulation importante de nanoparticules au sein

de la co-culture Caco2/HT29MTX avec une absence de translocation ; une accumulation importante

et la mise en vidence dune translocation pour la co-culture Caco2/RajiB.

La translocation des nanoparticules travers le systme digestif se ferait majoritairement en partie

terminale de lilon c'est--dire au niveau des plaques de Peyer (jonctions intercellulaires). Ces

plaques sont composes de 10 % de cellules M (61). Labsorption des nanoparticules par ces

cellules reprsentent une voie potentielle aprs passage par le systme lymphatique pour rejoindre

les systmes sanguins et les autres organes. Dautres hypothses sont mises sur labsorption des

78
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

nanoparticules et concernent le passage travers lpithlium intestinal par voie paracellulaire voire

transcellulaire (figure 11) (46,63).

Figure 11 extraite (4) : Passage des nanoparticules travers lpithlium intestinal. Trois voies sont

suspectes : voie lymphatique, la plus documente (absorption par les cellules M), la voie

paracellulaire (passage entre deux cellules), et la voie transcellulaire (absorption par les

entrocytes, spcialiss dans labsorption de nutriments) (63).

Lanalyse du passage du franchissement de lpithlium intestinal par les nanoparticules prend

tout son sens si lon considre que labdomen constitue un second cerveau prsentant 200

millions de neurones. En effet, son rle cl dans le dveloppement de nombreuses pathologies

chroniques (dpression, anxit, maladies neuro-dgnratives) commence seulement tre

apprhend. De plus, des inquitudes sont souleves par la prsence de nanoparticules dans les

laits materniss et de leur ventuel passage travers la barrire intestinale.

79
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

III. Toxicocintique des nanoparticules aprs pntration dans lorganisme.

Afin de mettre en vidence une ventuelle toxicit des nanoparticules, il est ncessaire de

dterminer le devenir de ces lments dans lorganisme, c'est--dire leur cintique. La cintique

regroupe lensemble du processus ADME (Absorption, Distribution, Mtabolisme, Excrtion).

Dans un premier temps la substance (mdicament ou toxique) est absorbe. Cela correspond son

passage dans la circulation sanguine. Elle est ensuite distribue aux diffrents organes et peut subir

un mtabolisme (ou biotransformation) au niveau du foie. Enfin elle peut tre limine de

lorganisme par voie rnale, biliaire ou fcale.

Pour les substances chimiques classiques , la toxicocintique peut tre prdite par comparaison

avec des analogues structuraux. En revanche, pour les nanoparticules, trop peu de donnes sont

disponibles et une tude au cas par cas serait ncessaire afin de dterminer leur devenir dans

lorganisme, chaque nanoparticule engendrant des effets diffrents.

Cependant quelques hypothses peuvent tre mises (20).

80
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Figure 12 : Cintique des nanoparticules. Le processus ADME (Absorption, Distribution,

Mtabolisme, Excrtion) est reprsent. Les flches pleines reprsentent les hypothses confirmes

concernant les voies empruntes par les nanoparticules ; les flches pointilles les voies non

dmontres (20).

La principale voie dexposition aux nanoparticules est la voie pulmonaire en raison de la grande

quantit de nanoparticules prsentes dans lenvironnement. Cependant, du fait de lessor des

nanoparticules dans les domaines de la cosmtique, de lalimentaire et du mdical, les voies

cutane, gastro-intestinale et parentrale ne doivent pas tre ngliges.

Labsorption est la premire tape de la cintique. Concernant la voie pulmonaire, ce passage se fera

principalement au niveau des alvoles pulmonaires, systme richement vascularis. Les

nanoparticules prsentes dans le tractus gastro-intestinal peuvent quant elles atteindre la

circulation sanguine ou lymphatique par les entrocytes ou les plaques de Peyers.

La deuxime tape de la cintique est la distribution de ces nanoparticules aux diffrents tissus ou

81
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

organes (foie, rate, cur, cerveau). Lorsque les nanoparticules atteignent la circulation gnrale,

elles peuvent interagir avec les protines plasmatiques, les facteurs de coagulation, les globules

blancs ou les globules rouges.

Le mtabolisme prsent, concerne les nanoparticules absorbes au niveau du systme gastro-

intestinal qui rejoignent le foie (organe de la mtabolisation) par la veine porte. Cependant peu de

rsultats sont ce jour disponibles sur ce point.

Llimination des nanoparticules seffectue ensuite par diffrentes voies : soit par leur porte

dentre si celles-ci ne sont pas absorbes (escalator mucocilliaire pour la voie pulmonaire) ; soit

par voie rnale ou biliaire pour les nanoparticules ayant gagn la circulation gnrale.

La cible rnale doit faire lobjet dune attention particulire, le rein intervenant majoritairement

dans le processus dlimination des nanoparticules (64). Il est donc ncessaire de sinterroger sur

limpact de la prsence de nanoparticules au niveau de cet organe dlimination. Des tudes in vitro

ont ainsi t ralises (Laboratoire de biologie cellulaire, Facult de sciences biologiques de

Bordeaux) sur des lignes cellulaires humaines issues de la partie glomrulaire (lieu de filtration) et

tubulaire proximale (lieu de rabsorption et daccumulation) des nphrons (65). Une exposition

limite (24 heures) des cellules rnales aux nanoparticules met en vidence linfluence de leurs

caractristiques physico-chimiques sur les effets biologiques alors quune exposition prolonge (28

jours) permet dvaluer limpact de la dure dexposition sur les effets toxicologiques des

nanoparticules.

La composition chimique et la libration de cations par les nanoparticules apparaissent comme des

paramtres essentiels lorigine deffets cytotoxiques sur les cellules rnales.

Ltude porte sur trois nanoparticules mtalliques : le dioxyde de titane (TiO2), loxyde de zinc

(ZnO) et le sulfure de cadmium (CdS).

82
Partie 3 : Toxicologie et voies dexposition

Les nanoparticules non dissociables de TiO2 napparaissent pas comme toxiques court terme, la

diffrence des nanoparticules de ZnO et CdS, susceptibles dengendrer des effets cytotoxiques part

la libration de cations (Zn2+, Cd2+). De plus, laugmentation de la surface des particules atteignant

la taille nanomtrique amliore leur capacit de dissociation.

Les nanoparticules de TiO2, aprs expositions rptes, forment des agglomrats pouvant tre

internaliss dans les cellules par des mcanismes encore inconnus et saccumulent dans le territoire

cytoplasmique (vacuoles) les rendant potentiellement toxiques sur des temps plus longs

dexposition.

Une corrlation directe entre formation despces ractives oxydes (ERO) et effets cytotoxiques a

pu tre tablie pour la double cible tubulaire et glomrulaire. Des ERO sont gnres de faon

indirecte par les cations mtalliques librs par dissociation des nanoparticules. Ces ERO sont

suffisantes pour induire un stress oxydant et lapparition de dommages cellulaires (peroxydation

lipidique, atteinte de la membrane lysosomale), ainsi quune rponse adaptative molculaire

(rponse anti-oxydante, rponse au stress cellulaire, apoptose : mort cellulaire programme) sur une

courte priode dexposition. Pour les nanoparticules de TiO2, cest la suite dune exposition

longue et rpte que survient un stress oxydant lorigine deffets cytotoxiques in vitro.

Lanalyse de limpact des nanoparticules mene in vitro permet donc une approche toxicologique

adapte la dtermination des mcanismes molculaires et cellulaires.

83
Partie 4 : Etudes in vitro et in vivo de la

pntration cutane et des effets sur la sant

des nanoparticules de TiO2 contenues dans les

dermo-cosmtiques.

84
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

I. Donnes concernant lexposition de la population gnrale aux

cosmtiques contenant des nanoparticules.

La barrire cutane protge le corps des atteintes environnementales. Alors que les molcules de

faible poids pntrent les couches cutanes vivantes de la peau, les particules plus grosses

sinfiltrent gnralement dans la couche corne superficielle, sauf existence de microlsions.

Dans les pays industrialiss, les nanoparticules mises dans l'environnement (moteurs diesel,

pigments), augmentent les risques dexpositions internes par ingestion et inhalation. Le risque

d'absorption percutane des nanoparticules est galement davantage pris en compte. En effet, les

produits domestiques (produits dentretien mnager) et dermo-cosmtiques (crmes solaires, fond

de teint, crmes de soin, dentifrices, rouges lvres) utiliss, contiennent dans leurs formulations de

nombreuses nanoparticules, le plus souvent sous forme de TiO2, et sont directement appliqus sur la

peau (20). Ces produits tant employs quotidiennement, lexposition est quasi-permanente. De

mme, certains textiles tels que les vtements de sport, les chaussettes, contiennent des

nanoparticules dargent vise antibactrienne (45,66). Bien que la peau constitue naturellement

une barrire protectrice, il faut mettre lhypothse que certains ingrdients puissent franchir cette

barrire et se trouver dans la circulation gnrale.

De mme, dautres produits sous forme de spray susceptibles dtre inhals, et lusage de

topiques cosmtiques sur les muqueuses, augmentent les possibilits de pntration. Cest pourquoi

il apparat essentiel dtudier les consquences sur la sant de lapplication de ces produits et de

quantifier cette exposition.

Une premire tude a t mene en 2006 aux Etats Unis sur 360 femmes, ges de 18 69 ans

utilisant rgulirement des cosmtiques (67). Les produits inclus dans ltude se prsentent sous

85
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

diffrentes formes. Il sagit de nettoyants visage pouvant tre rincs (liquide, gel, savon) ou sans

rinage (lotion, lait) ; de shampoings ou aprs shampoings sans rinage ; de fards paupire ou

poudre.

Ces femmes ont d rapporter la frquence dapplication de ces produits cosmtiques sur deux

semaines.

Des analyses statistiques ont t conduites et lchantillon de personnes choisies a t compar la

population de femmes adultes des Etats-Unis afin que ltude soit reprsentative (68).

Sur les 360 sujets recruts, seuls 295, 297 et 299 ont complt respectivement ltude pour les

nettoyants visage, les produits de coiffure, et les fards paupire.

Une tude similaire a t effectue dans les mmes conditions auprs de 360 femmes amricaines

ges de 19 65 ans sur dautres produits tels que parfums, laques, gels coiffants, fonds de teint

liquides, shampoings, gels douches, et antiperspirants (69).

Le mode dutilisation de chaque produit est diffrent. Par exemple, les nettoyants pour visage sont

utiliss par chaque sujet tous les jours de ltude voire deux fois par jour et les fards paupire en

moyenne une fois par jour avec une frquence dapplication moindre le week-end. La frquence

dutilisation de soins capillaires est quant elle plus alatoire et dpend de la frquence de lavage

(67). Ces travaux mettent en vidence une consommation importante de dermo-cosmtiques

susceptibles de contenir des nanoparticules, point de dpart ltude de limpact ventuel sur la

sant des consommateurs des nanoparticules contenues dans les dermo-cosmtiques.

86
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Produits Quantit Mdiane de la Quantit Mdiane de Nombre

cosmtiques moyenne de quantit de moyenne de la quantit dapplications

produit par produit par produit de produit par jour

application application appliqu par par jour

(en g) (en g) jour (en g) (en g)

Nettoyant 2,57 2,11 4,06 3,25 1,6

visage

Fard 0,03 0,09 0,04 0,010 1,2

paupire

Parfum 0,33 0,23 0,53 0,34 1,67

Laque 2,58 1,83 3,57 2,71 1,49

Gel coiffant 3,64 2,66 5,18 3,74 1,51

Fond de teint 0,54 0,36 0,67 0,45 1,24

liquide

Shampoing 11,76 9,56 12,80 10,75 1,11

Gel douche 11,3 9,5 14,5 12,9 1,37

Anti- 0,61 0,45 0,79 0,59 1,3

transpirant

Tableau 3 : Quantit moyenne et mdiane de produit appliqu pour chaque type de cosmtiques par

application, par jour ainsi que le nombre moyen dapplications par jour.

II. Mise en vidence du passage des nanoparticules contenues dans les

dermo-cosmtiques au travers de la barrire cutane et localisation

cellulaire.

Les produits cosmtiques commercialiss contiennent dans leur formulation bon nombre de

nanoparticules, notamment du dioxyde de titane (TiO2) et de loxyde de zinc (ZnO), incorpors afin
87
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

damliorer entre autres la transparence et la tenue des produits. Le TiO2 et le ZnO, sont galement

utiliss en tant que filtres anti-UV inorganiques (ou physiques) large spectre, en raison leur

capacit dabsorption et de rflexion des UV (48). Ces dermo-cosmtiques tant appliqus

quotidiennement sur la peau, il parat important de sinterroger sur la pntration de ces

nanoparticules au travers de la barrire cutane, de leur accumulation dans lorganisme et de leur

toxicit afin de dterminer limpact de ces nanomatriaux sur la sant des consommateurs (70).

LOrganisation Mondiale de la Sant (OMS) dfinit en 2006 labsorption cutane comme le

transport de substances chimiques depuis la surface de la peau jusqu la circulation gnrale alors

que la pntration cutane reprsente lentre de substances au sein de la couche corne.

Les nanoparticules manufactures utilises par lindustrie dermo-cosmtique peuvent tre divises

en deux catgories : les produits biodgradables (liposomes, mulsions) et les non biodgradables

(oxydes mtalliques sous forme de fullernes). La toxicit concernerait essentiellement les

monomres et les mtabolites des nanomatriaux (70).

Il est complexe dvaluer le passage de la barrire cutane des nanoparticules contenues dans les

dermo-cosmtiques. En effet, la pntration des nanoparticules dans les tissus vivants na pas t

clairement dtermine : de nombreuses tudes ont t ralises sur des modles in vitro mais peu

dentres elles concernent des modles in vivo. De plus, la plupart des tudes ont t ralises sur des

temps courts, avec des particules non caractrises selon les connaissances actuelles en termes de

taille, forme cristalline, enrobage, etc.

Diffrentes mthodes danalyses ont t utilises pour la dtection du titane par exemple : analyse X

en dispersion dnergie, spectromtrie dabsorption atomique, microscopie lectronique.

88
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Dans ce cadre, NANODERM , projet europen auquel a particip le Centre dEtudes Nuclaires

de Bordeaux Gradignan (CENBG), travaille depuis plusieurs annes sur les problmatiques lies

la pntration de la barrire physiologique cutane suite lapplication de topiques

pharmacologiques et dermo-cosmtiques. Ce projet est bas sur la microanalyse dchantillons

biologiques, qui a pour objectif la quantification, la dtection et le traage des nanoparticules de

TiO2 aprs application de crmes solaires du commerce sur des chantillons de peau porcine et

humaine. Plusieurs techniques danalyses de haute rsolution comme la Microscopie Electronique

Transmission (MET) et la STIM (Scanning Transmission Ion Microscopy) sont exploites. La

technique STIM rvle lultra-structure du tissu tudi grce au contraste en densit naturelle de

lchantillon. La mthode PIXE (Particle induced X-Ray emission) permet une cartographie

lmentaire chimique rapide et sensible (limite de dtection de lordre de la partie par million).

Enfin, la technique de diffusion RBS (Rutherford Backscattering Spectrometry) dtermine la masse

de la matire organique des chantillons tudis. La combinaison des informations fournies par les

mthodes PIXE et RBS permet une mesure trs prcise des concentrations dlments traces dans

les tissus ou cellules.

Lanalyse des chantillons par techniques STIM et PIXE met en vidence une rpartition du TiO2

lintrieur des follicules pileux (de faon non homogne) et au niveau des couches externes de la

stratum corneum (71)

Une tude de la FDA (Food and Drug Administration ; Sadrieh et al.) peut savrer pertinente. Des

expriences ont t menes in vivo en vue de lvaluation de la pntration cutane de

nanoparticules de TiO2 reprsentatives de celles commercialises pour les produits cosmtiques.

Elles ont est menes sur le mini-porc, espce qui constitue un modle appropri pour lextrapolation

des rsultats lhomme en raison des fortes similarits de la peau entre ces deux espces en termes

de permabilit et de structure cutanes. Ce travail a t ralis sur une dure relativement longue

89
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

avec des applications rptes (application de produits 4 fois par jour, 5 jours par semaine durant 22

jours).

Ainsi, Sadrieh et al. mettent en vidence par microscopie lectronique balayage la prsence de

fortes quantits de nanoparticules de TiO2 (enrobes et non enrobes) et de particules de TiO2

submicroniques (300-500 nm) dans le stratum corneum et la prsence de quelques particules isoles

de TiO2 dans le derme pour les animaux traits avec les trois types de particules. Pour ce point, les

auteurs mettent lhypothse dune mauvaise sparation de lpiderme et du derme entranant la

prsence de TiO2 dans le derme. Par ailleurs, cette tude rvle des quantits statistiquement

significatives de TiO2 dans le ganglion inguinal gauche du groupe trait par des nanoparticules de

TiO2 non enrobes (forme la plus rencontre dans les cosmtiques) et dans le ganglion inguinal

droit du groupe trait par des particules de TiO2 submicroniques (300-500 nm).

Ces rsultats ne permettent pas de conclure de faon dfinitive une absence dabsorption

systmique chez le mini-porc du fait de la prsence de nanoparticules de TiO2 non enrobes et de

particules de TiO2 submicroniques (300-500 nm) dans les ganglions inguinaux. Les auteurs ne

concluent pas sur la prsence statistiquement significative de TiO2 dans les ganglions inguinaux ni

sur une diffusion systmique potentielle. (72).

Les expriences in vivo chez lanimal et en particulier chez le porc constitue un outil indispensable

lobtention de donnes pertinentes lextrapolation lhomme. Nanmoins, seules des tudes sur

lhomme permettraient de certifier la pntration cutane des nanoparticules.

Certaines expriences pilotes ralises in vivo sur un nombre restreint dindividus mettent en

vidence, par spectromtrie de masse avec plasma couplage inductif (mthode danalyse

qualitative et quantitative de sensibilit importante), aprs exrse chirurgicale du tissu cutan, la

prsence dun taux lev de TiO2 dans lpiderme et le derme suite une application excessive de

90
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

crme solaire (73) alors que dautres travaux prouvent que le TiO2 et le ZnO sous forme micro et

nano-particulaire sont incapables de pntrer dans lpiderme (74). Ces tudes ne prennent pas en

compte des paramtres tels que les mouvements de la peau, ltat des follicules pileux, la charge des

particules ou encore lge du sujet (20). Par ailleurs Gulson et al. rapportent une augmentation du

taux zinc dans le sang et les urines aprs application de crme solaire contenant des nanoparticules

de ZnO chez une vingtaine dindividus dans des conditions normales dapplications et dexposition

solaire. Cependant, il est difficile de dterminer si le Zinc (Zn) prsent dans les urines provient des

nanoparticules de ZnO ou des ions Zn2+ dissous ayant pntr par dautre voies (75).

Dautres observations ont t ralises par microscopie rayons X aprs application de crme

solaire du commerce sur peau doreille de porc (modle considr comme prsentant des

caractristiques dintrt pour ltude de la fonction barrire cutane en rponse des stress

physiques ou chimiques (54)) et de rats anesthsis aprs dlamination de la couche corne ( tape

stripping ). Les rsultats sont en accord avec ceux noncs dans le rapport final de 2007 du projet

NANODERM et montrent que le TiO2 utilis comme filtre anti-UV est en gnral visualis en

grande concentration dans les couches les plus externes de la couche corne. Ces nanoparticules

semblent se distribuer au niveau des follicules pileux et des stries de la peau (figure n13) mais de

rpartition diffrente sagissant de follicules pileux ouverts ou de follicules pileux ferms

(76).

91
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Figure 13 : Coupe histologique montrant la pntration dune particule marque par fluorescence

lintrieur du follicule pileux. Image de microscopie lectronique (76).

Cependant, il demeure difficile daffirmer le passage des nanoparticules au travers de la barrire

cutane en raison des larges manipulations des fragments de peau au cours des tudes.

Au vue des donnes actuelles, les particules de taille suprieure ou gale 100 nm ne semblent

pas capables de franchir une barrire cutane intacte mais ces investigations se poursuivent pour

les nanoparticules de taille infrieure 100 nm (76)

Dans ce contexte, le Centre dEtudes Nuclaires de Bordeaux Gradignan (CENBG) a particip

au dveloppement de nouvelles mthodes et outils danalyses (analyse par faisceau dions

haute rsolution, protocoles de prparation dchantillons biologiques exposs aux

nanoparticules). Cette thmatique a permis la mise en place dtudes fondamentales, dune part

de la barrire cutane, et dautre part, de linteraction des nanoparticules avec des cellules

pithliales humaines telles que les kratinocytes.

Des tudes par analyse chimique par microsondes nuclaires ont t ralises sur peau humaine

92
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

native issue de biopsie, puis sur peau reconstitue in vitro en vue de ltude de la diffusion de

substances exognes (oxydes mtalliques, nanoparticules) travers la barrire cutane.

Afin de dterminer la toxicit des nanoparticules de TiO2, des nanoparticules fonctionnalises

laide de molcules fluorescentes (Rhodamine, Fluorescine) ont t labores. Les rsultats

mettent en vidence la localisation des nanoparticules de TiO2 in vitro sur des populations

cellulaires de kratinocytes. Les nanoparticules de TiO2 se localisent exclusivement au niveau

cytoplasmique en zone pri-nuclaire. En revanche un marquage spcifique de lappareil de

Golgi des cellules exposes au TiO2 fonctionnalises par un anticorps indique une co-localisation

entre lappareil de Golgi et les nanoparticules par microscopie confocale (54).

III. Facteurs influenant la pntration des nanoparticules par voie

cutane.

Plusieurs facteurs sont susceptibles dinfluencer le passage cutan des nanoparticules. Lademann et

al. se sont concentrs sur lventuelle augmentation de la pntration des nanoparticules en fonction

de la taille des follicules pileux aprs tude du volume des follicules pileux de diffrents volontaires

sur diffrentes parties du corps (77). Le volume folliculaire le plus lev a t observ sur le front et

le mollet, compar au dos, thorax, bras, avant-bras ou cuisse. Le front regroupe une forte densit de

petits follicules pileux (duvet), la diffrence du mollet o il sagit dune faible densit de grands

follicules pileux. Le volume des follicules pileux du cuir chevelu na pas t dtermin prcisment

dans cette tude mais est susceptible dtre encore plus important que le volume du front.

Des expriences ralises in vitro par Kimura et al. laide dun modle nano-particulaire marqu

par fluorescence (Fluoresbrite : modle facilement dtectable et non soluble) sur peau de rat

hairless , mettent en vidence leffet barrire dune peau intacte aux nanoparticules fluorescentes

par microscopie confocale balayage laser (MCBL). Cependant, la fluorescence observe

93
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

augmente de manire proportionnelle au diamtre de pores cr artificiellement par des aiguilles. La

pntration des nanoparticules serait donc troitement corrle au diamtre des pores, la taille des

follicules pileux et ltat de la peau. Lintgrit de la peau influence donc trs certainement la

pntration des nanoparticules suite leur application au travers de produits cosmtiques (70).

Autre paramtre prendre en considration, linfluence de la taille des particules sur la pntration

cutane (76). La taille des particules retrouves dans les follicules pileux aprs application de

crmes solaires est de lordre de 100 nm (78). De plus, ltude de la pntration dans les follicules

pileux de particules (diamtre compris entre 750 et 6000 nm) marques par fluorescence sur des

coupes histologiques montrent que les particules de diamtre infrieur pntrent beaucoup plus

facilement dans le follicule pileux que celles de taille plus importante (78). Le stockage des

particules au sein des follicules pileux apparat donc comme inversement proportionnel la taille de

celles-ci. La taille des particules pntrant le follicule pileux est comprise autour de 300-600 nm, ce

qui correspond approximativement la taille des cuticules des poils (530 nm pour lhomme, 320 nm

pour le porc) (76). Cependant, les rsultats des tudes NANODERM rfutent cette hypothse

car les nanoparticules se retrouvant dans le follicule pileux taient de taille infrieure (20-100 nm)

(71).

Il apparat mme possible, aprs exprience in vitro sur peau doreille de porc, que la variation de la

taille des particules permette le ciblage spcifique de diffrents sites folliculaires (79).

Aussi, Lademann et al. rapportent une augmentation de la pntration de nanoparticules

fluorescentes in vitro lorsque les cosmtiques sont appliqus en massage sur de la peau doreille de

porc (80). Le mcanisme de pntration des nanoparticules seffectue par processus mcanique et

non par diffusion passive (71). Le massage semble reproduire les mouvements physiologiques des

poils in vivo, les mouvements des poils entrainant les nanoparticules au sein du follicule pileux.

Aprs leur pntration, les nanoparticules sont piges lintrieur du follicule pileux et ne sont

limines que par des processus lents tels que la croissance du poil ou lafflux de sbum (79).

94
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Les follicules pileux reprsentent une interruption au sein de la barrire cutane et peuvent se

comporter comme une porte dentre pour les nanoparticules dans certaines conditions

(pratiques hyginiques comme le rasage ou lpilation). Lusage de topiques cosmtiques pourrait

tre lorigine dun ventuel passage de ces lments dans la circulation sanguine.

IV. Effets toxiques potentiels des nanoparticules manufactures utilises en

dermo-cosmtique : lexemple du TiO2

1. Les pathologies de la peau

1.1. La dermatite atopique

Lincidence de la dermatite atopique ou eczma atopique est en constante augmentation (81), elle

touche prs de 20% des enfants de moins de 11 ans, et apparat le plus souvent entre 2 et 6 mois.

Cette pathologie concerne galement 5% des adultes (82). La dermatite atopique peut se dfinir

comme une affection inflammatoire de la peau avec une hyperractivit cutane due des facteurs

dclencheurs environnementaux. Il sagit dune pathologie chronique, dvolution longue avec

disparitions et rapparitions possibles des symptmes. Elle est sans gravit, non contagieuse et

disparat gnralement avec lge. Cependant, elle est souvent ressentie comme une exprience

douloureuse et pnible.

La dermatite atopique se caractrise par une xrose (scheresse cutane), du prurit et des lsions

rythmateuses. Elle se limite essentiellement la peau du visage et aux zones de flexions comme

les coudes ou les aisselles, zones o lpiderme est le plus fin. Il existe une prdisposition gntique

la dermatite atopique. En effet, elle survient sur un terrain familial allergique appel atopie (82). Il

est tabli quun enfant sur deux dont les deux parents sont allergiques dveloppe une dermatite

95
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

atopique (81).

Deux causes majeures sont responsables de la survenue de cette pathologie. Dune part, la fonction

barrire de la peau peut tre dfaillante, rendant la peau plus permable. La perte en eau est alors

augmente (scheresse de la peau) et les agresseurs (allergnes) pntrent plus facilement. Dautre

part, il peut se produire une rponse immunitaire exagre suite la prsence dun allergne et

provoquer ainsi une pousse deczma qui se traduira par une rougeur, des dmangeaisons, voire un

suintement. Chez 80% des individus atteints de dermatite atopique, une augmentation srique en

Immunoglobulines E (IgE) est observe (81).

De multiples facteurs favorisent les crises : des facteurs saisonniers ou climatiques (hiver, froid) ;

des allergnes ariens (pollens), de contact (nickel...), alimentaires ; des infections (otites, rhumes,

pousses dentaires...) ; des irritations cutanes (produits cosmtiques) ; des facteurs psychologiques

(stress, motions).

Le traitement prventif consiste restaurer la fonction barrire de la peau (crmes, huiles de bain...)

et limiter voire viter le contact avec les allergnes. Pendant la crise, le traitement repose sur la

prescription de dermo-corticodes et/ou immunosuppresseurs locaux.

1.2. Cancers cutans

Le cancer de la peau est une tumeur maligne dveloppe aux dpens des cellules de la peau. Les

cancers de la peau existent sous trois formes : les carcinomes basocellulaires, les carcinomes de

cellules squameuses et les mlanomes.

Les cancers de la peau sont les cancers les plus frquents, mais aussi les plus gurissables sils sont

dtects et traits assez tt. Aux Etats-Unis, un million de nouveaux cas de carcinomes

(basocellulaire et des cellules squameuses) sont dtects chaque anne et lincidence des

96
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

mlanomes ne cesse de saccrotre. Cette progression est principalement la consquence dune

surexposition aux rayons ultraviolets naturels et artificiels (83).

Il existe deux types de tumeurs cutanes. Les carcinomes se dveloppant partir de cellules de

lpiderme, soit de la couche basale (carcinome basocellulaire), soit des couches suprieures

(carcinome spinocellulaire). Ce sont les plus frquents, puisquils reprsentent 90 % des cancers de

la peau, dont 75 % pour les basocellulaires et 20 % pour les spinocellulaires. Les carcinomes

surviennent la plupart du temps aprs 50 ans et se gurissent aisment. Les carcinomes

basocellulaires ne dveloppent jamais de mtastases ; les spinocellulaires assez rarement,

principalement dans les ganglions lymphatiques proches de la tumeur (54).

Chez des sujets prdisposs, plusieurs facteurs environnementaux, et plus particulirement des

expositions solaires aigus intermittentes et rptes, sont impliqus dans la formation des

carcinomes basocellulaires.

Cependant parmi les facteurs de risque essentiels, les prdispositions gntiques ne doivent pas tre

exclues, de mme que lexposition certains agents pathognes (virus du papillome humain), les

cicatrices de brlures et les plaies persistantes.

Les mlanomes se dveloppent partir de mlanocytes, lieu de synthse de la mlanine. Cette

mlanine est responsable dune pigmentation brune ou rouge. La pigmentation brune confre le

bronzage et une certaine protection contre les rayonnements ultraviolets alors que la pigmentation

rouge nassure aucune protection. Les sujets qui fabriquent essentiellement des pigments rouges ne

bronzent pas et ont, de ce fait, plus de risque de dvelopper des cancers cutans. Les mlanocytes

sont normalement prsents dans lpiderme, associs aux cellules pidermiques localises en partie

profonde de lpiderme.

97
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Ces cancers sont beaucoup plus rares, mais peuvent se dvelopper chez de jeunes sujets. Il faut les

dtecter et les traiter rapidement, car ils peuvent engendrer des mtastases trs difficiles radiquer.

Le plus souvent, les mlanomes sont des tumeurs pigmentes, plus ou moins brunes (contenant la

mlanine).

L'exposition solaire excessive est le facteur essentiel responsable du dveloppement des cancers

cutans, et plus particulirement des mlanomes. Les patients peau blanche d'origine europenne

sont les principales victimes des carcinomes cutans, qui sont plus rares chez les patients peau

pigmente. Cependant, lexposition excessive aux rayons solaires nest pas le seul facteur

contribuant au dveloppement de cancers cutans, certaines caractristiques gntiques engendrent

une prdisposition au mlanome (54).

La polmique des produits dermo-cosmtiques

De nombreuses substances composant les produits cosmtiques appliqus de manire rptitive sur

la peau sont suspectes favoriser lapparition de ces cancers. En effet, selon les estimations, le

nombre de cancers de la peau progresse rgulirement avec deux fois plus de cancers tous les dix

ans, ces donnes tant contradictoires avec laugmentation de la consommation de produits solaires,

multiplie par deux en dix ans (d'aprs la Fdration des industries de la parfumerie). Depuis

plusieurs annes maintenant, une polmique se dveloppe et concerne la toxicit potentielle de

certaines molcules contenues dans des produits cosmtiques usage courant. Parmi les composs

incrimins on retrouve : des conservateurs tels que le phnoxythanol, le mthylisothiazolinone

(MIT) ou les parabnes, certains filtres UV- notamment le 4-mthyl-benzylidne camphor (4-MBC)

- possdant des effets perturbateurs endocriniens- ainsi que les nanoparticules de TiO2 prsentes

dans de nombreux produits cosmtiques (crmes solaires, dentifrice) (1). Certaines tudes

98
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

mettent en vidence des effets indsirables sur la sant des composs contenus dans les crmes

solaires suite de fortes doses dexposition. Cependant, les effets de ces composs doses plus

faibles, notamment au travers dune exposition via les dermo-cosmtiques nest toujours pas

prouve.

Plusieurs hypothses sont avances mais la communaut scientifique reste divise sur le sujet. Par

exemple, les individus s'enduiraient d'une mince pellicule de crme solaire et, se croyant protgs,

ne respecteraient pas ainsi le mode et la frquence dapplication des produits.

Il se peut galement que laugmentation actuellement observe des cancers de la peau puisse

sexpliquer par un effet retard . En effet, 20 30 ans peuvent scouler entre le moment o un

individu initie le dveloppement dun cancer de la peau et le moment o la pathologie se dclare et

est diagnostique. Il se pourrait donc que des mlanomes apparaissant dans les annes 1990

trouvent leur origine dans les annes 1970, et probablement avant.

Les franais notamment, n'ont rellement pris en compte le risque de lexposition solaire qu' partir

des annes 1990 avec la mise en uvre de la prvention et lutilisation de la crme solaire. Aussi, le

nombre des cancers de la peau en France devrait continuer de crotre avec 6 000 7 000 nouveaux

mlanomes par an. En revanche, en Australie, une diminution du nombre de cancers serait observe

seulement depuis 4 ans, bien que leur campagne de prvention ait t engage il y a maintenant plus

de 25 ans.

A ce jour, aucune tude scientifique ne peut ni prouver ni valider ces tendances (54).

99
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

2. Etat des connaissances sur la toxicit des nanoparticules de TiO2

contenues dans les dermo-cosmtiques

Trs peu de donnes fiables (car non reproduites) sont actuellement disponibles concernant limpact

des nanoparticules manufactures (contenues dans les dermo-cosmtiques entre autres) sur la sant

de lhomme.

Ltude des effets toxicologiques des nanomatriaux a dbut ces dernires annes sur des modles

animaux (in vivo) et des cellules en culture (in vitro). De plus les lments de nanotoxicologie

rapports chez lhomme font tat dinteractions des nanoparticules avec le vivant au niveau

cellulaire et incitent donc la prudence.

2.1. Stress oxydatif

Dimportantes donnes provenant dexpriences ralises sur les particules ultrafines de la pollution

atmosphrique et quelques tudes effectues sur des nanoparticules manufactures suggrent que le

stress oxydant constitue un mcanisme central dans les effets toxicologiques des nanoparticules

manufactures (53,84,85). Le stress oxydant rsulte dun dsquilibre de la balance oxydants

antioxydants en faveur des oxydants. Ce dsquilibre survient quand la production doxydants

(espces ractives oxygnes : ERO), est suprieure la capacit des systmes antioxydants de

lorganisme (enzymes tels que la superoxyde dismutase, la catalase ou encore les vitamines C et E).

Une diminution de la capacit de systmes antioxydants, avec une formation doxydants inchange,

peut galement conduire au stress oxydant. La production accrue dERO endommage les

macromolcules biologiques (acides nucliques, lipides, protines) perturbant ainsi le

fonctionnement cellulaire (hyper prolifration, apoptose, mutation) (2). Ces phnomnes de stress

oxydant interviennent dans de nombreuses pathologies (athrosclrose, maladies

neurodgnratives, cancers) et dans les processus de vieillissement cellulaire. Ainsi, une action

dltre du stress oxydatif sur lADN et lARN cellulaire accompagne dinactivation enzymatique

100
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

peut tre suspecte au niveau de la peau.

Deux mcanismes majeurs aboutissent un stress oxydant aprs exposition aux nanoparticules :

premirement, une production despces ractives oxygnes (ERO) par la nanoparticule elle-mme

du fait de ses proprits physico-chimiques comme la ractivit de surface et la prsence de mtaux

de transition ; deuximement, une production accrue dERO par la cellule suite au contact et/ou

lincorporation de nanoparticules (85).

Des expriences ont t menes in vitro par Jaeger et al. sur des kratinocytes HaCaT (HaCaT =

human adult low calcium, high temperature keratinocytes).

Les cellules HaCaT constituent un modle cellulaire utilis en recherche scientifique et dermo-

cosmtique. Ces cellules non cancreuses issues dune ligne cellulaire de kratinocytes humains

conservent une forte capacit de prolifration et de diffrenciation in vitro (caractre immortel). Ces

cellules offrent galement des capacits de rgnration tissulaire in vitro ("tissu in vitro") et de

transformation tumorigne.

Les rsultats de lquipe allemande mettent en vidence la survenue de mutations au niveau de

lADN mitochondrial aprs internalisation et agrgation de nanoparticules de TiO2 par les cellules

HaCaT. La dltion observe, (perte de la paire de base 4977 appele common deletion ), est la

plus frquente et la plus caractristique des mutations de lADN mitochondrial humain. Elle est

induite par la prsence de grande quantit dERO. Les nanoparticules de TiO2 sont donc lorigine

dune augmentation du taux dERO semblable une exposition importante aux UVA. Cette

production dERO peut donc tre lorigine dun ventuel effet cytotoxique (mort cellulaire) ou

gnotoxique induit par les nanoparticules de TiO2. Cependant, des expriences complmentaires

sont indispensables afin de confirmer limpact de lusage quotidien de cosmtiques incluant des

101
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

nanoparticules sur la sant humaine. Ces tudes doivent entre autres prendre en compte les

proprits physico-chimiques des nanoparticules, leur concentration et la dure dexposition (86).

Figure 14 : Images obtenues par microscopie lectronique transmission des kratinocytes aprs

traitement par TiO2. (A) : dtection dagglomrats de TiO2 dans lespace extracellulaire dans une

vsicule dendocytose (e) et intracellulaire (i). (B) reprsente linvagination de la membrane cellulaire

prcdent ltape dendocytose (86).

Les nanoparticules de TiO2 possdent par ailleurs des proprits photo-catalytiques potentialises

par les rayonnements UV. Cette proprit particulire peut savrer intressante en photothrapie

anticancreuse (limitation de la croissance tumorale, apoptose des cellules cancreuses). Les

processus de photo-oxydation catalyse par le TiO2 on t dmontrs in vitro. Laction conjointe du

102
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

TiO2 contenu dans les crmes solaires et des UVA lie lexposition solaire est susceptible

daggraver les dysfonctions de la barrire cutane par production dun stress oxydatif lorigine de

dommages au niveau de lADN cellulaire (49,87).

Aussi, lquipe chinoise de Tu et al. met en vidence plusieurs reprises une photo-toxicit dose-

dpendante du TiO2 en prsence de nitrites.

Les structures et fonctions des protines tyrosines peuvent tre altres par nitration (due la

prsence despces ractives au nitrogne) entrainant des anomalies au niveau des signaux de

transduction cellulaire. Ce mme phnomne peut tre observ en cas dinflammation ou de

brlures. Les nitrites sont prsents dans les fluides biologiques comme la sueur ou le sang et en

grande quantit dans les cosmtiques et lalimentation.

Les risques lis lapplication de nanoparticules de TiO2 en prsence de nitrite sous irradiations

UVA ont t valus laide de modles cellulaires de kratinocytes humains (HaCaT). Les

rsultats mettent en vidence une augmentation de la toxicit des nanoparticules de TiO2 de manire

dose-dpendante et linduction dune nitration de la protine cystatine A des cellules

kratinocytaires amplifiant lapoptose cellulaire.

Dune part, lapoptose (mort cellulaire programme) des kratinocytes est en lien avec la voie AIF

(Apoptosis Inducting Factor), molcule pro-apoptotique libre par la mitochondrie, qui fait suite

la production de monoxyde dazote (NO).

Dautre part, les nitrites associs au TiO2 augmentent considrablement la mort de cellules cutanes

exposes aux UVA par production de radicaux libres nitrs inhibant lactivit de la protine

cystatine A. Les caspases ne pouvant tre inhibes par la cystatine A, il se produit une augmentation

103
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

de lapoptose en raison de labsence de rgulation (88). Ces donnes sont rassembles dans la

figure suivante.

Figure 15 : Mcanisme dcrivant les rponses intracellulaires aux radicaux oxygns et azots induits

par des nitrites en prsence de dioxyde de titane sous UV (88).

Remarque : les nanoparticules de TiO2 utilises dans les produits cosmtiques sont enrobes par des

substances organiques ou inorganiques et peuvent tre galement dopes, afin de diminuer les effets

du stress oxydant. De plus, des systmes antioxydants sont ajouts dans les formulations.

Concernant le TiO2, la forme anatase est considre comme susceptible de produire plus de stress

photo-oxydant mais les produits cosmtiques ne contiennent gnralement que le TiO2 sous la

forme rutile ou dun mlange anatase/rutile.

2.2. Inflammation

Linflammation est un phnomne se produisant en rponse une agression menaant lorganisme.

Cette rponse est de type immunologique. L'inflammation est utile, car elle aide lorganisme

104
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

combattre lagression. Cependant, linflammation peut tre exagre, et alors devenir dltre. Les

nanoparticules peuvent induire une rponse inflammatoire plus importante que celle induite par des

particules de mme forme et de mme composition chimique, mais de taille micromtrique. Cette

rponse inflammatoire est troitement associe la prsence dun stress oxydant activant les gnes

pro-inflammatoires (85). La raction inflammatoire sattnue progressivement en cas dintervention

de mcanismes de contrle (enzymes anti-oxydantes, mdiateurs anti-inflammatoires) et aboutissent

une rsolution spontane de linflammation. Dans le cas contraire, la raction inflammatoire peut

entraner la dysfonction de lorgane o elle se dveloppe, et/ou affecter des organes distance,

travers la scrtion de mdiateurs solubles.

Les nanoparticules de TiO2 ne pntrent pas facilement une barrire cutane intacte. Cependant il

est prouv que la barrire cutane de patients atopiques est altre par le processus inflammatoire

pouvant faciliter la pntration des nanoparticules travers la couche corne.

Les nanoparticules de TiO2 contenues dans les dermo-cosmtiques et produits pharmaceutiques sont

essentiellement sous forme cristallines (anatases et rutiles), notamment dans les crmes solaires

(83). Ces cosmtiques sont en contact direct avec la couche corne.

La dermatite atopique se traduisant par la prsence de lsion inflammatoire cutane, il semble

intressant dtudier limpact dinjection transdermique du TiO2 sur la maladie. Pour cela,

Yanagisawa et al. utilisent un modle murin de peau atopique (souche de souris transgnique

NC/Nga). Linjection dun allergne, lextrait de mite, mime les lsions de la dermatite atopique.

Les rsultats sont valus en fonction de scores cliniques incluant ltat de scheresse cutane, la

prsence de blessures et ddmes. Ladministration intradermique dune solution contenant les

nanoparticules de TiO2 de trois tailles diffrentes (15, 50 et 100 nm) nentraine pas dpaississement

ou dinflammation significative de la peau de loreille des souris transgniques. Linjection

dallergnes dacariens quant elle, augmente significativement lpaississement de la peau de

105
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

loreille en comparaison linjection de solution nano-particulaire aprs trois jours dexprience.

Enfin, ladministration conjointe de nanoparticules et dallergnes augmente considrablement

lpaississement de la couche corne. (89).

Aprs injection dallergnes associs au TiO2, il apparat une augmentation de linfiltration

dosinophile par comparaison linjection dallergnes seuls. Il en est de mme pour les taux

dinterleukines (IL4 ; IL5 ; IL13) alors que lexpression dinterfron (INF) au niveau cutan au

contraire, diminue.

Ces rsultats mettent galement en vidence une augmentation significative du taux dhistamine

suite ladministration conjointe de nanoparticules et dallergnes en comparaison linjection

dallergnes seuls (89).

Linjection intradermique de nanoparticules de TiO2 semble aggraver les lsions de dermatite

atopique supposant un dysfonctionnement de la barrire cutane par des rponses inflammatoires,

immunitaires Th2 et la libration dhistamine.

Par extrapolation, lorsque la barrire cutane est franchie, le TiO2 est donc susceptible daggraver

les effets inflammatoires caractristiques des allergnes cutans dans la dermatite atopique.

Lexemple des adjuvants aluminiques met laccent sur lambivalence des nanoparticules. Maquieira

et al. confirment in vivo (tude chez la souris et le lapin) limmunognicit des nanoparticules

doxydes daluminium. La liaison covalente de nanoparticules doxyde daluminium un haptne

(molcule de faible poids molculaire antignique (capable dtre reconnue par le systme

immunitaire) mais non immunogne) active une rponse spcifique du systme immunitaire (90).

Cependant les donnes concernant le dveloppement de myofascites macrophages suite

linjection de vaccins contenant des adjuvants aluminiques toffent les rsultats concernant le

potentiel inflammatoire induit par les nanoparticules.

106
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

La myofascite macrophages (MMF) est une maladie rare identifie en 1993 et classe dans une

nouvelle catgorie de syndromes nomme pour la premire fois en 2011 sous le terme

Autoimmune/inflammatory syndrome induced by adjuvants (ASIA). La MMF est caractrise

par des manifestations systmiques (asthnie, myalgie, arthralgies, fivre) ou locales (au niveau

du site dinjection du vaccin). Les causes spcifiques ne sont pas connues mais la maladie est le

plus souvent associe la persistance dans le muscle de loxyde daluminium utilis comme

adjuvant dans les vaccins humains chez des individus ayant une susceptibilit gntique. Au niveau

du muscle, des lsions microscopiques montrent une infiltration de macrophages (91).

Limportance des tudes humaines sur labsorption percutane du TiO2 est souligne par

linsuffisance des expriences susceptibles de fournir une approche pertinente et applicable

lvaluation du risque inflammatoire chez lhomme, les donnes disponibles concernant

essentiellement des expositions suite leffraction de la barrire cutane.

2.3. Perturbation de lhomostasie ionique cellulaire

Des tudes in vitro (projet NANODERM ) des effets du TiO2 (anatase, 9 nm) sont menes sur

diffrentes populations cellulaires : kratinocytes humains immortaliss (HaCaT), sbocytes

humains immortaliss (SZ 95), fibroblastes murins immortaliss (NIH 3T3), culture primaire de

fibroblastes humains (HDF), mlanocytes humains et cellules dendritiques humaines. Lanalyse

microscopique rvle : une internalisation au niveau cytoplasmique du TiO2 dans les populations

des fibroblastes, mlanocytes et cellules dendritiques par un phnomne dendocytose ; une

augmentation du calcium intracellulaire au niveau des fibroblastes ; une diminution de la

prolifration des kratinocytes, sbocytes et fibroblastes. Aprs exposition au TiO2, des

changements morphologiques (rtractations, trous ) sont dcrits au niveau de la membrane

cellulaire de fibroblastes humains (71).

107
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

En ce sens, des analyses par microfaisceau dions sur une culture de kratinocytes (in vitro) ont t

menes au CENBG afin de dterminer si la composition chimique lmentaire des cellules cultives

en prsence de TiO2 (TiO2- P25 : 80 % anatase, 20 % rutile de diamtre compris entre 25 et 35 nm)

variait. Lanalyse quantitative lchelle cellulaire ne rvle pas de modifications majeures dans la

distribution et la composition chimique lmentaire pour la plupart des espces chimiques tudies.

Indpendamment de la concentration en nanoparticules de TiO2, il se produit cependant une

augmentation significative de la concentration du calcium intracellulaire.

Il est dfini et dcrit quune augmentation de calcium intracellulaire induit la diffrenciation des

kratinocytes et une modification du cytosquelette dactine (92).

Linduction prcoce de la diffrentiation des cellules exposes au TiO2 a t mise en vidence par

ltude de lexpression de linvolucrine. Linvolucrine est une protine exprime essentiellement

dans les couches pineuse et granuleuse de lpiderme et utilise comme marqueur dexpression

tardif de la diffrenciation des kratinocytes.

De plus, dans les cellules exposes au TiO2, le rseau dactine est trs significativement modifi

avec une organisation priphrique dans les cellules. Cette organisation est typique dune

rorganisation induite par une augmentation du calcium intracellulaire (93). Aussi, il a t constat

une diminution de la prolifration cellulaire non associe une mort cellulaire.

La perturbation de lhomostasie ionique par laugmentation de la concentration calcique

intracellulaire saccompagnant dune diffrenciation cellulaire prcoce significative avec

diminution de la prolifration cellulaire (sans mort cellulaire) rend compte de la toxicit de ces

nanoparticules (94).

108
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

2.4. Effets carcinognes

Concernant le potentiel cancrigne des nanoparticules de TiO2, diffrentes tudes rvlent des

rsultats contradictoires (95,96).

Certains auteurs affirment que les nanoparticules de TiO2 contenues dans les dermo-cosmtiques ne

traversent pas la couche corne dune peau saine et nentrainent donc pas deffets systmiques pour

la sant humaine (5).

Bien que le titane et le TiO2 soient considrs comme inertes lchelle micromtrique, il faut

nanmoins sassurer que ces constituants sont sans danger au vue de leur utilisation cosmtique

sous forme nano-particulaire.

Le centre international de recherche sur le cancer (CIRC) a class en 2006 toutes les formes de TiO2

comme potentiellement cancrignes pour les hommes (classe 2B) sur les bases des donnes

obtenues aprs tude de linhalation de particules finement divises chez le rat et des donnes

pidmiologiques chez lhomme, suggrant une augmentation de lincidence des tumeurs et

emphysmes pulmonaires (2).

Une tude a t mene par Furukawa et al. afin de dterminer le potentiel promoteur de

cancrognse cutane des nanoparticules de TiO2 fonctionnalises ou non, utilises en dermo-

cosmtiques (95). Lexprience a t ralise partir de souris dont le processus de cancrognse

cutan a t induit (par du 7,12 dimthylbenz[]anthracne (DMBA)) et maintenu (par du 12-o-

ttradcanoylphorbol 13 actate (TPA)). La prsence de nodules par observation macroscopique

aprs application de nanoparticules de TiO2 doses croissantes nest pas significative par

comparaison aux groupes tmoins. Daprs ces rsultats, lapplication cutane de nanoparticules de

TiO2 ne conduit pas un risque de carcinogense cutane.

109
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

Moon et al. tudient limpact des nanoparticules de TiO2 sur la croissance in vivo de tumeurs

cutanes travers la modulation de lactivit du systme immunitaire (96). Le protocole consiste en

linjection intrapritonale quotidienne chez des souris de nanoparticules de TiO2 pendant 28 jours

prcdant limplantation de cellules tumorales (cellules de mlanome B16F10 utilise pour

lanalyse de la croissance tumorale in situ). Les donnes mettent en vidence une augmentation de

la taille des tumeurs chez les souris exposes aux nanoparticules de TiO2 par injection intra-

pritonale par comparaison aux souris contrles (figure 16).

Figure 16 : Evolution de la taille des tumeurs aprs injection intrapritonale de TiO2 (96)

Lexprience montre galement que les nanoparticules de TiO2 peuvent perturber le dveloppement

et la prolifration des lymphocytes B et T, diminuer la population de cellules Natural Killer (NK)

ainsi que lactivit des macrophages.

Pour mmoire, les lymphocytes sont les cellules centrales du systme immunitaire, capables de

reconnaitre spcifiquement les lments trangers et de les diffrencier des composants de

lorganisme. Normalement, ils ne doivent pas ragir contre les tissus de lorganisme lui-mme. Il

existe deux types de lymphocytes : les cellules B qui produisent les anticorps et les lymphocytes T

110
Partie 4 : Etudes de la pntration cutane et des effets du TiO2

possdant plusieurs fonctions (assistent les cellules B dans leur rponse anticorps, reconnaissent et

dtruisent les cellules infectes, activent la phagocytose et contrlent la qualit et le niveau de la

rponse immune). Brivement, les cellules Natural Killer (NK), sont quant elles, capables de

dtruire une grande varit de cellules cibles. Elles reprsentent ainsi une seconde ligne de dfense

(97).

En se basant sur ces rsultats, il est possible de suggrer que les nanoparticules de TiO2 en altrant

le systme dimmunosurveillance ont un effet indirect sur la croissance tumorale in situ. La

prsence de nanoparticules de TiO2 entranerait donc une diminution de la rponse immunitaire et

une augmentation de la taille des tumeurs solides comme le montre la figure n16. Ces rsultats sont

en accord avec un prcdent rapport indiquant que linjection intrapritonale dune suspension de

TiO2 sous forme de fullernes peut potentialiser la croissance tumorale (cellules de mlanomes) in

vivo par des mcanismes de suppressions de la rponse immune (98).

111
Conclusion et perspectives

Conclusion et perspectives

Les nanoparticules font, ce jour, partie intgrante de notre quotidien, puisque prsentes en grande

proportion dans nos produits de consommation courante et dans notre environnement. Lobjectif de

ce manuscrit est double : dune part, informer des perspectives intressantes et innovantes

quoffrent les nanomatriaux du fait de leurs proprits physico-chimiques que ce soit dans les

domaines de lindustrie ou du mdical ; dautre part, sensibiliser aux effets et interactions de ces

lments avec les systmes biologiques.

En oncologie, le dveloppement des nanoparticules permet aujourdhui de proposer une thrapie

cible, dont lefficacit daction et la diminution des effets secondaires sont suprieures la

chimiothrapie conventionnelle.

Ces thrapeutiques nouvelles se basent sur la capacit de dlivrance et de ciblage ainsi que sur

lexploitation de caractristiques propres aux nanoparticules. Dans ce contexte, certains produits

sont dores et dj en phase dessais cliniques sur lhomme.

En imagerie, les nanoparticules inorganiques possdent des caractristiques dabsorption et de

diffraction de la lumire qui les rendent intressantes comme agent de contraste.

Le dveloppement de nouveaux outils comme lmergence de traceurs ou bio-senseurs

fluorescents offre aujourdhui lespoir dun diagnostic prcoce et non invasif du cancer.

La matrise et lessor de ces diffrentes applications en imagerie et thrapie donnent une nouvelle

impulsion aux nanotechnologies et les orientent vers le dveloppement de nanoparticules

fonctions multiples en vue de la vectorisation dagents de contraste combins un nano-

mdicament.

Cette thse dexercice aborde la toxicit des nanoparticules contenues dans les dermo-cosmtiques
112
Conclusion et perspectives

par le biais du TiO2. Ces nanoparticules utilises entre autres comme filtres physiques anti-UV dans

les crmes solaires et susceptibles du franchissement de la barrire cutane, seraient suspectes

dengendrer une dynamique dans lapparition et le dveloppement de pathologies cutanes

(cancers).

A travers lanalyse de diffrents travaux de recherche, une approche de cette nanotoxicit est

propose.

Plusieurs voies dexpositions aux nanoparticules sont possibles : la voie pulmonaire est la principale

en raison des quantits importantes de particules ultrafines prsentes dans lenvironnement ; la voie

digestive par lingestion de nanoparticules utilises comme additifs alimentaires, excipients dans les

formes pharmaceutiques orales, adjuvants dans les articles dhygine (dentifrice) ; enfin la voie

cutane est considrer du fait de lapplication quasi quotidienne de dermo-cosmtiques.

La nanotoxicit a essentiellement t tudie in vitro par diffrentes techniques dimagerie associes

des techniques de fonctionnalisation chimique des nanoparticules.

En admettant la voie transannexielle comme porte dentre la pntration transcutane, il est

envisageable dans certaines conditions (pratiques hyginiques : rasage, pilation) que le TiO2 puisse

tre en contact avec les cellules vivantes du follicule pileux. De mme lintgrit cutane constitue

un paramtre important dans le passage des nanoparticules.

Au niveau cellulaire, linternalisation des nanoparticules de TiO2 par les kratinocytes entraine une

augmentation significative de la concentration calcique intracellulaire. Ce taux de calcium dans la

cellule est associ une diminution de la prolifration cellulaire en absence de mort cellulaire.

Linternalisation des nanoparticules de TiO2 provoque aussi une diffrentiation prcoce des cellules

113
Conclusion et perspectives

kratinocytaires.

Il a aussi t mis en vidence que la pntration des nanoparticules peut induire un stress oxydatif

lorigine dune toxicit cellulaire.

Enfin, si lon considre que les nanoparticules de TiO2 altrent le systme dimmunosurveillance, il

nest pas exclu quelles aient un effet indirect sur la croissance tumorale in situ.

A ce jour, il reste difficile de se prononcer quant linnocuit de ces lments. Dautres travaux au

cas par cas sont indispensables afin de clarifier leur impact sur la sant des hommes en raison de

leur multiplicit et des diffrentes voies dexposition possibles. Ltude du devenir des

nanoparticules dans notre organisme (toxicocintique) et de leurs effets cellulaires (stress oxydatif,

cytotoxicit, gnotoxicit) est essentielle afin de garantir leur scurit dutilisation.

Dautres points non voqus dans ce manuscrit mriteraient de faire lobjet dune attention

particulire. Aujourdhui se pose la question du devenir de ces composs nano-particulaires dans

lenvironnement. Des recherches se poursuivent sur limpact de lapplication de crme solaire avant

la baignade et de leffet de cette pollution sur les cosystmes marins. Selon une tude de

lEnvironmental Health Perspectives (EHP), mene par le Professeur Donavaro, les crmes solaires

utilises ont une action dltre sur les rcifs coralliens. Des expriences menes dans diffrentes

mers du globe (Ocans Pacifique, Atlantique, Indien) soulignent que certains filtres anti-UV

chimiques (ethylhexyl-methoxycinnamate (OMC), octocrylne (OCT), benzophenone-3 (BZ),

ethylhexylsalicylate (EHS)) entranent le blanchiment et la mort de coraux par dveloppement

dinfections virales dtruisant la Zooxantelle, micro-algue vivant en symbiose avec le corail,

ncessaire son dveloppement (99).

Une alternative afin de prserver lcosystme marin serait lutilisation de crmes solaires avec

filtres minraux considres comme bio mais contenant des nanoparticules.

114
Conclusion et perspectives

En ce sens, une tude environnementale de limpact de ces nanoparticules laide dun organisme

multicellulaire se rvle pertinente.

De nouvelles expriences proposent une approche environnementale en laboratoire des effets

potentiels des nanoparticules sur un organisme multicellulaire Caenorhabditis elegans (C elegans),

modle animal de laboratoire admis pour raliser des tudes toxicologiques in vivo.

La prsence dun stress induit par les polluants ou la dsorganisation des cosystmes peuvent tre

values par lanalyse de labondance et de la structure des nmatodes (vers ronds).

C. elegans est un modle biologique trs intressant car il permet une premire approche lchelle

de la cellule. Il offre la possibilit dtudier le passage des nanoparticules par diffrentes voies

(ingestion, passage travers la cuticule). De plus, les effets peuvent tre observs au niveau de la

cellule, des organes, mais aussi lchelle de lindividu (embryon, larve, adulte) et sur les

gnrations successives.

Ce modle permet galement denvisager des modes dinteractions plus complexes comme la

bioaccumulation ou la bio persistance des nanoparticules.

Des tests de toxicit bass sur C.elegans ont t dvelopps afin destimer les risques co

toxicologiques au niveau des sols et de leau. Lanalyse lmentaire chimique par PIXE est une

technique non invasive adapte la dtection, localisation, suivi et quantification des nanoparticules

dans cet organisme.

115
Conclusion et perspectives

Figure 17 : Analyse PIXE-Tomographie (3D) de C. elegans. Distribution tissulaire des lments

chimiques (Phosphore, Soufre, Calcium). Dtection et localisation des nanoparticules de TiO 2 (images

CENBG)

Des tudes ont dj dmontr leffet toxique et dltre des nanoparticules notamment sur les

capacits reproductives de C.elegans (100). Par analogie lhomme, C.elegans prsentent

anatomiquement les diffrents organes susceptibles dtre exposs aux nanoparticules avec des

conditions dexpositions similaires. De plus, leur transparence permet un traage facile des

nanoparticules.

En conclusion, la nanotoxicologie ncessite une analyse au cas par cas, prenant en compte, la

forme, la voie dexposition, les vecteurs associs. Ce manuscrit tmoigne que le domaine des

nanotechnologies ainsi que leur impact environnemental et sur la sant humaine savrent des sujets

de recherche mergeant, puisquils bouleversent le principe mme de la toxicologie base sur leffet

de la dose. .

116
Annexes

ANNEXE 1: Tableau rcapitulant les mthodes de synthse des nanomatriaux (inspir du rapport AFSSET

juillet 2006)

Mthode de Principe de fonctionnement Type de nanomatriaux Taille des

production fabriqus nanomatriaux

Mthodes physiques

Evaporation Evaporation dun mtal par Fe, Ni, Co, Cu, Al, Pd et 20 100 nm

/condensation sous chauffage puis condensation Pt.

pression inerte ou de la vapeur mtallique afin Oxydes.

ractive dobtenir des nano-poudres

formes de particules

nanomtriques disperses.

Pyrolyse LASER Interaction en jets croiss Si, SiC, SiCN, 15 20 nm

entre l'mission d'un laser SiCNAlY, SiCO,

CO2 et un flux de ractifs. Si3N4, TiC, TiO2,

fullernes, suies

carbones, etc.

Fluide supercritique Le fluide supercritique peut Matriaux pour la Quelques nm

(sans raction tre utilis en tant que vectorisation de quelques m

chimique) solvant, antisolvant, principes actifs

plastifiant, nbuliseur, phase

dmulsion, etc.

Micro-ondes Couplage avec les voies de Nickel, argent 20 200 nm

synthse des nanoparticules,

pour permettre un chauffage

117
plus rapide et plus homogne

du milieu.

Irradiation ionique Plusieurs mthodes : dpt Production de nanopores ?

/Electronique d'nergie par des ions lourds dans un matriau de

rapides d'acclrateurs qui dimensions

permet la ralisation de macroscopiques ou de

membranes polymres nanostructures

nanoporeuses ; irradiation de immobilises dans une

la mobilit ionique qui permet matrice

d'obtenir des agrgats

mtalliques insrs dans des

matrices vitreuses

Recuit basse Des nanostructures peuvent Alliages mtalliques et Toute la gamme

temprature de tre obtenues partir de Intermtalliques nanomtrique

phases amorphes phases amorphes par complexes avec trois

massives traitement thermique de cinq lments base Al,

recristallisation Zr, Fe.

Plasma thermique Les particules vaporises ou Des nanopoudres ?

fondues dans un plasma cramiques comme des

thermique sont trempes ou carbures (TiC, TaC,

condenses sous forme de SiC), des siliciures

particules ultra fines (MoSi2), des oxydes

dops (TiO2) ou

complexes (HA, YIG,

provskites)

Dpt physique en Le procd PVD (Physical Des dpts de TiN, ?

phase vapeur Vapor Deposition) met en CrN, (Ti,Al)N

118
uvre lvaporation ou la

pulvrisation dune cible

mtallique solide.

Mthodes chimiques

Ractions en phase Le procd CVD (Chemical Matriaux de natures Quelques nm

vapeur Vapor Deposition) permet trs diverses (carbures, quelques m

llaboration de couches nitrures, oxydes, alliages

minces par raction chimique mtalliques, etc.).

entre un compos volatil du

matriau dposer et la

surface du substrat recouvrir.

Ractions en milieu Mise en solution de ractifs La plupart des mtaux et Quelques nm

liquide conduisant la formation de oxydes quelques

nanoparticules par centaines de nm

modification des conditions

physico-chimiques du milieu

(pH, temprature,

concentration, etc.).

Ractions en milieu Ce procd recouvre de La plupart des mtaux et Quelques nm

solide nombreuses voies de synthses oxydes quelques m

qui ont pour objet de contrler

la taille des nanoparticules.

(notamment par la taille des

produits initiaux, par la

diffusion, par des sites

ractionnels spcifiques ou par

le volume ractionnel)

119
Techniques sol-gel Production de nanomatriaux La plupart des oxydes Quelques nm

partir de solutions dalkoxydes quelques

ou de solutions collodales centaines de nm

sous forme de monolithes, de

nano-pigments cristalliss ou

de couches minces. Ce sont

des techniques fondes sur des

ractions de polymrisation

inorganiques.

Fluide Ajustement continu des La plupart des mtaux, Quelques nm

supercritique avec proprits physico-chimiques oxydes et quelques quelques m

raction chimique du milieu ractionnel sur une nitrures

grande chelle par ajustement

des paramtres pression et

temprature sur de petites

chelles afin de contrler la

raction chimique et ainsi

llaboration du matriau

Mthodes

mcaniques

Mcanosynthse et La mcanosynthse consiste Tous les types de particules de

activation broyer des poudres matriaux (cramiques, quelques nm

mcanique de micromtriques (1 50 m) de mtalliques, polymres, particules

procds de la plusieurs alliages pour les semi conducteurs) microniques

mtallurgie des mlanger. nanostructures

poudres

120
Consolidation et Les techniques de

densification consolidation permettent

dobtenir des pices massives

partir de matriaux

pulvrulents (poudres

mtalliques, cramiques, semi-

conducteurs et organiques).

Forte dformation Raffiner la structure dun

(hypercorroyage) matriau cristallin (mtal,

cramique), jusqu obtenir

une taille de grains de

quelques dizaines de

nanomtres. Les techniques

utilises sont la torsion,

lextrusion, etc

121
ANNEXE 2 : Exemples de proprits recherches par lutilisation de nanoparticules dans diffrents secteurs

dactivits (2,9)

Transport terrestre, aronautique Amlioration : des performances des moteurs, de la rsistance


et spatial mcanique et thermique des matriaux, de lefficacit nergtique, de la
scurit, du confort, des matriaux autonettoyants ; Diminution de : la
corrosion, la pollution, du cot, consommation de carburant ;
dveloppement de dtecteurs de glace et de fissures des structures.
Electronique et communication Dveloppement de : mmoires haute densit, processus miniaturiss,
crans plats clairement brillant et trs haute dfinition, polymres et
composites nanostructurs permettant le dveloppement de composants
lectroniques souples et de papier lectronique.
Industrie chimique et matriaux Dveloppement de : cramiques, pigments, poudres et catalyseurs
multifonctionnels, fils plus lgers et plus rsistants, inhibiteurs de
corrosion, couches fonctionnelles (isolation thermique, antiadhsive,
antistatique), peintures, vitres et vtements auto nettoyants, membrane
pour sparation de matriaux (traitement des eaux, dialyse), outils de
coupe extrmement durs etc.
Sant et industries Nouvelles approches pour un diagnostic mdical plus prcis
pharmaceutiques, biomdicales, (marqueurs fluorescents, contrastes accrus en imagerie, meilleure
biotechnologiques et cosmtiques caractrisation de certains paramtres) traitements mieux cibls et plus
efficaces.
En cosmtologie : amlioration des proprits optiques (protection anti-
UV), de la tenue (crmes solaires rsistantes leau), de la brillance et
de la transparence des produits, dveloppement de nouveaux produits
antirides, antivieillissement et antibactriens.
Agriculture Meilleure absorption des pesticides, fertilisants et autres substances
chimiques agricoles. Optimisation de la production animale par
libration dhormones de croissance et de vaccins sur demande,
dtection de pathognes chez les animaux et les plantes.
Energie Amlioration des performances des systmes de production et
dutilisation de lnergie, stockage de lhydrogne, nouvelle gnration
de cellules photovoltaques, production de batteries et cellules de
combustion, optimisation de lefficacit de lnergie olienne,
matriaux isolants plus efficaces.
122
Secteur manufacturier Conception dquipements pour produire et incorporer des
nanoparticules dans des produits valeur ajoute et assurer la
caractrisation et la qualit ; ingnierie de prcision pour la production
de nouvelles gnrations dinstruments sur mesure, nouveaux processus
et nouveaux outils pour manipuler la matire au niveau atomique et
dveloppement dappareils divers.
Environnement et cologie Rduction des missions de polluants, dpollution des sites contamins,
traitements des effluents, protection des organismes sensibles et
diminution des missions de CO2 ; rcupration et recyclage des
ressources existantes, amlioration de la dcontamination et du
recyclage des mtaux.
Dfense Dtecteurs dagents chimiques et biologiques, explosifs plus puissants,
systmes furtifs, textiles lgers et performants se rparant deux mme,
systmes de surveillance miniaturiss et systme de guidage plus
prcis.
Caoutchouc et matires plastiques Rduction du poids et augmentation de la performance des
pneumatiques, dure de vie accrue et recyclage. Diminution des
missions sonores.
Mtallurgie Amlioration des proprits des mtaux, diminution du frottement et de
lutilisation de lubrifiants lors de la fabrication des pices ; outils de
coupe plus durs et plus rsistants labrasion et la corrosion,
amlioration des performances dusinage.

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136
SERMENT DE GALIEN

Je jure, en prsence des matres de la Facult, des conseillers de lordre des


Pharmaciens et de mes condisciples :

Dhonorer ceux qui mont instruite dans les prceptes de mon art et de leur
tmoigner ma reconnaissance en restant fidle leur enseignement ;

Dexercer, dans lintrt de la sant publique, ma profession avec conscience et


de respecter non seulement la lgislation en vigueur, mais aussi les rgles de
lhonneur, de la probit et du dsintressement ;

De ne jamais oublier ma responsabilit et mes devoirs envers le malade et sa


dignit humaine.

En aucun cas, je ne consentirai utiliser mes connaissances et mon tat pour


corrompre les murs et favoriser des actes criminels.

Que les hommes maccordent leur estime si je suis fidle mes promesses.

Que je sois couverte dopprobre et mprise de mes confrres si jy manque.

137
THESE soutenue par : GUITOU Marie-Anne
TITRE : Nanoparticules et sant : des applications aux risques potentiels.
Lexemple du TiO2.
TH. D. Pharmacie : Bordeaux/2014 ; n27
Rsum :
Les nanotechnologies constituent un champ de recherche et de dveloppement important depuis le
dbut du XXIme sicle. Elles reposent sur la capacit manipuler la matire lchelle du
nanomtre (10-9 m) voire de latome. Lutilisation des nanoparticules au niveau mondial ne cesse de
saccrotre notamment sur le plan mdical, environnemental et industriel. Elles permettent la
cration de nouvelles classes de matriaux aux proprits innovantes. Ainsi, ces nanoparticules
produites intentionnellement sont utilises dans des produits cosmtiques et dhygine, dentifrices,
additifs alimentaires, articles de sport, pneus... De plus, leurs proprits particulires en font des
outils extrmement intressants dans plusieurs domaines de la recherche fondamentale et clinique,
tels que loncologie, limagerie mdicale, le diagnostic, ladministration de mdicaments, la
fabrication de biomatriaux, ou encore la vaccination. Il est indispensable de clarifier limpact de
ces nanoparticules sur la sant en raison de leur multiplicit et des diffrentes voies dexposition
possibles. Il est ce jour difficile de se prononcer quant linnocuit de ces lments, les rsultats
tant parfois contradictoires, linstar des donnes actuelles relatives la pntration de la barrire
cutane par les nanoparticules du dioxyde de titane (TiO2) contenues dans les dermo-cosmtiques.
Ltude du devenir des nanoparticules dans notre organisme (toxicocintique) et de leurs effets
cellulaires (stress oxydatif, cytotoxicit, gnotoxicit) reste indispensable afin de garantir leur
scurit dutilisation. Ce manuscrit propose une introduction gnrale aux nanotechnologies et
leurs applications par une approche du nanomonde et ltude particulire de lventuelle toxicit du
TiO2 contenu dans les topiques cosmtiques.
Title: Nanoparticles and health: applications to potential risks. The example of TiO2
Mots cls: Nanoparticules, nanotoxicit, applications mdicales, dermo-cosmtiques, TiO2,
pntration cutane.
Keywords: Nanoparticles, nanotoxicity, medical applications, dermo-cosmetics, TiO2, skin
penetration.
UFR des Sciences Pharmaceutiques
Universit de Bordeaux
Ple Sciences de la sant
146, Rue Lo Saignat
33 076 Bordeaux Cedex

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