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1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 1

Chapitre 2 : Morphologie et ultrastructure des bactries

I- Morphologie des bactries


I-1- La forme
I-2- La taille
I-3- Les associations

II- Les constituants de la cellule bactrienne


II-1- Schma gnral simplifi dune bactrie
II-2- Elments constants et inconstants de la structure bactrienne

III- Les lments constants de la cellule bactrienne


III-1- La paroi bactrienne
a) Mthodes dtude
b) Aspect en microscopie lectronique
c) Structure chimique de la paroi
d) Les rles de la paroi
e) Quelques parois bactriennes particulires
III-2- Le cytoplasme
III-3- Lappareil nuclaire
a) Techniques dtude
b) Structure du chromosome bactrien
c) Rles du chromosome bactrien
III-4- La membrane cytoplasmique
a) Techniques dtude
b) Structure et composition chimique
c) Rles de la membrane cytoplasmique

IV- Les lments facultatifs de la cellule bactrienne


IV-1- La capsule
a) Mise en vidence
b) Morphologie et structure chimique
c) Rles et proprits
IV-2- Les flagelles
a) Mise en vidence
b) Morphologie et mode dinsertion
c) Architecture molculaire
d) Synthse du flagelle
e) Fonctionnement du flagelle
f) Rle des flagelles
IV-3- Les pili ou fimbriae
IV-4- Les plasmides
IV-5- Les spores
a) Mise en vidence
b) Morphologie et structure
c) Composition chimique
d) Le cycle sporal
e) Les tapes de la sporulation
f) Proprits de la spore
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Chapitre 2 : Morphologie et ultrastructure des bactries
I- Morphologie des bactries (Document 1)
Formes des cellules bactriennes : les bactries sont des organismes unicellulaires de formes varies

- bactries de forme arrondies ou cocci, isoles, en chanette, en amas (nombre variable de


cellules) : Staphylocoques, Streptocoques
- bactries de forme allonge ou bacilles isols, en chanette ou amas, de longueur et diamtre
variables : E.coli, Salmonella, Bacillus etc
- bactries de forme spirale spirilles, spirochtes comme Treponema
- un groupe particulier de bactries de forme filamenteuse se rapprochant des moisissures : les
Actinomyctes

Taille : les bactries les plus petites ont une taille denviron 0,2 m (Chlamydia) et les plus longues
certains Spirochtes peuvent atteindre 250m de long. En moyenne la taille se situe entre 1 et 10 m

Associations cellulaires : une espce bactrienne peut apparatre sous forme de cellules isoles
spares ou en groupements caractristiques variables selon les espces : association par paires, en
amas rguliers, en chanette, par quatre (ttrades) etc Cependant il faut savoir que les groupements
ne sont caractristiques quau sortir de lhabitat naturel de la bactrie; exemples :
- Les Staphylocoques isols dun pus prsentent des groupements caractristiques en grappe
de raisin
- Les Streptocoques isols dun lait forment des chanettes

Ensuite lorsque ces bactries sont cultives sur milieux synthtiques les groupements caractristiques
sont gnralement perdus.

Dans la nature certaines bactries vivent en groupes de cellules peu diffrencies : Cyanobactries qui
forment des trichomes

Les coques
Forme Mode de groupement Schma Exemples
Forme Isols mais le plus souvent Genre Neisseria (N. meningitidis :
sphrique Diplocoques en grain de caf mningite crbrospinale)
De 0.5 2 m Chanette Genre Streptococcus (S. pyogenes :
lsions cutanes, otites,
conjonctivites ; S. pneuminiae :
pneumonies, otites, sinusites)
Amas rguliers, grappe de Genre Staphylococcus
raisin
ttrades Genre Sarcina (flore intestinale),
Genre Deinococcus (non pathogne)

Les bacilles
Forme Mode de groupement Schma Exemples
Droits Isols le plus souvent, en Famille des entrobactries
0 6 m de long paires (diplobacilles), en (commensales intestins), Genre
0.5 2 m de large chanes Bacillus (sol, eaux, plantes ;
extrmits plates, pathognes = anthracis (charbon),
arrondies ou carres cereus et subtilis (intox alim))
Incurvs Genre Vibrio (V. Cholerae : cholra)
Coccobacilles Genre Acinetobacter (infections
Courts et larges, nosocomiales), Haemophilus
ressemblant des influenza (infections respiratoires,
coques mningite de lenfant, grippe
espagnole)
Autres formes : Palissades ou lettres Genre Corynebacterium (diphtheriae)
Extrmits renfles Genre Fusobacterium(infections
Extrmits fuseles bronchopulmonaires)
Extrmits en forme de Genre Bifidobacterium (flore
crosse intestinale : probiotique = protge
contre bact patho)

Les bactries spirales


Forme Mode de groupement Schma Exemples
Distinction sur le nombre et Isols Les spirochtes : Treponema
lamplitude des spirales pallidum (syphilis)
Taille 5 500 m
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Autres formes de bactries


Forme Schma Exemples
Bactries pdoncules Genre Caulobacter (non patho)
Bactries filamenteuses Genres Actinomyces (svt associ des inflammations sans
tre patho)
Genre Streptomyces (tellurique = sol)

II- Les constituants de la cellule bactrienne

II-1- Schma gnral simplifi dune bactrie


Complter le schma gnral dune bactrie (Document 2) en prcisant les lments constants et
facultatifs

II-2- Elments constants et inconstants de la structure bactrienne


Certaines structure sont prsentes chez toutes les bactries, ce sont les lments constants ; dautres sont
retrouvs seulement chez certaines bactries : ce sont les lments inconstants ou facultatifs .

Construire avec eux et partir du schma prcdent un tableau rcapitulant les lments constants et
facultatifs :

Elments CONSTANTS Elments FACULTATIFS


Paroi (Gram+ : PG ; Gram- : mbr ext + PG) Capsule
Membrane plasmique Msosome (rle incertain)
cytoplasme Plasmide
Priplasme (espace priplasmique) Vacuole gaz (bactries aquatiques)
Ribosomes Inclusions de rserves
Polysomes Pili = fimbriae
Appareil nuclaire : chromosome unique Flagelles
Chromatophore (bactries photosynthtiques)
Endospore (bactries sporulant)

Replacer llment de la structure bactrienne qui correspond chaque dfinition inscrite dans le tableau
du Document 3.

III- Les lments constants de la cellule bactrienne

III-1- La paroi bactrienne

a) Mthodes dtude

- expriences de plasmolyse (cellule plonge dans un milieu hypertonique, la paroi se dcolle )


- broyage des bactries et lyse par ultrasons
- conglation / dconglation
On spare ensuite les diffrents constituants par centrifugation, lavages.
On passe ensuite ltude en microscopie lectronique ou ltude chimique.

b) Aspect en microscopie lectronique

On distingue 2 types de parois au microscope lectronique : les Gram (+) et les Gram (-).
Voir Document 4.
Espace priplasmique
partir des 2 photographies prsentes sur le Document 4, faire un dessin simplifi de la paroi des
bactries Gram+ et Gram-.

Peptidoglycane Membrane externe 7 8


De 20 80 nm nm
(80 90% de la paroi) Espace priplasmique

Peptidoglycane
De 2 nm (10 % de la paroi)
Espace priplasmique
Espace priplasmique
Membrane plasmique 7.5 nm
Membrane plasmique 7.5 nm

Gram + Gram
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c) Structure chimique de la paroi

C1) Principaux constituants chimiques prsents dans la paroi des bactries Gram positif et Gram ngatif :

Paroi des bactries Gram (+) Paroi des bactries Gram (-)
Osamines : N-actyl glucosamine (NAG) et Acide N-actyl muramique (ANAM)
Acides techoiques et lipotechoiques (polymres Pas dacides techoiques ni lipotechoiques
de polyribitol phosphate ou polyglycrol phosphate)
Acides amins dont 4 majeurs : Ala (D et L) D-Glu, L- Mmes acides amins
Lys, acide diaminopomlique (DAP) (moins de L-Lys et de DAP)
Peu de lipides (1 2 %) Lipides en grande quantit (10 20 % dans la
membrane externe)

Lgender les schmas des parois Gram (+) et (-) sur le Document 5.

C2) La membrane externe de la paroi des bactries Gram (-) : elle est lie la couche de peptidoglycane par
la lipoprotine de Braun. Elle est forme dune bicouche dont seule la partie infrieure est phospholipidique. La
partie suprieure est constitue de LPS (lipopolysaccharide). Voir Document 6. Celui-ci comprend :
- une partie lipidique (lipide A) qui comporte une activit toxique
- lie un polysaccharide central (le core )
- qui porte des chanes de 3 6 sucres tournes vers lextrieur (appeles lantigne O car trs
antignique)
A cause du pouvoir toxique du lipide A, le LPS est appel une endotoxine .

C3) La coloration de Gram : Les diffrences de constitution et de structure chimique des parois Gram (+) et
Gram (-) permettent dtablir le principe de la coloration labore par Christian GRAM (1884) :

Bactrie Gram positif tapes Bactrie Gram ngatif


1- coloration par le violet de
gentiane du cytoplasme des
cellules

2- fixation du violet par le lugol


(ractif iodo-iodur) = formation de
complexes violet-lugol

3- Dcoloration par lalcool


(solubilise les lipides de la mbr ext
des gram(-) et dcolore le cpxe
violet-lugol ; pas deffet sur les
gram(+) car ne pntre pas dans
leur cytoplasme)
4- Coloration par la fuschine (ou
safranine) qui recolore le
cytoplasme des gram(-) en rose

C4) Le peptidoglycane : On retrouve un compos commun dans les parois des bactries Gram (+) et (-) : le
peptidoglycane = murine = mucopeptide. Il est compos de motifs glucidiques et peptidiques.

A partir des renseignements fournis par les Documents 6 et 7, faire un schma simplifi du
peptidoglycane en utilisant les reprsentations suivantes :
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1

1: ANAM 2: NAG 3: liaison glucosidique 1-4 4: ttrapeptide


5: pont interpeptidique
o Commencer par reprsenter un enchanement de ANAM et NAG lis par liaison 1-4
o Ajouter les ttrapeptides sur les ANAM
o Reprsenter une autre chane identique proximit
o tablir les liaisons entre les chanes grce aux ponts interpeptidiques correctement positionns.

C5) Lespace priplasmique : il contient des enzymes qui participent la nutrition (hydrolases) et des protines
qui sont impliques dans le transport de molcules lintrieur de la cellule.
Les Gram (+) excrtent plutt les enzymes hors de la cellule. Ce sont alors des exoenzymes .

g) Les rles de la paroi

Afin dtudier les rles de la paroi, on utilise un enzyme lytique, le lysozyme.

Le lysozyme clive les liaisons 1-4 glycosidiques entre le NAG et le ANAM. Il en rsulte une destruction
totale du peptidoglycane chez les bactries Gram(+), et une fragmentation de celui-ci chez les Gram(-) car
le peptidoglycane est moins accessible cause de la membrane externe.

Exprience :

1- On place une souche de Bacillus subtilis (bacille Gram+) en milieu hypotonique : la bactrie se
comporte normalement.

2- Si on ajoute du lysozyme cette suspension, les bactries gonflent et clatent.

3- On fait la mme exprience en milieu isotonique, les bactries nclatent pas en prsence de
lysozyme, mais elles prennent une forme sphrique appelle : PROTOPLASTE. Les protoplastes
ne possdent plus les proprits antigniques de la bactrie, ne se divisent plus, ne fixent plus les
bactriophages et sont incapables de mobilit.

4- On fait la mme exprience avec Escherichia coli (bacille Gram-) : en milieu isotonique +
lysozyme, les bactries prennent une forme sphrique appele : SPHEROPLASTE. Les
sphroplastes conservent toutes les proprits initiales de la bactrie.

Voir Document 8

Rle 1 de la paroi : assurer le maintien de la forme de la bactrie


Rle 2 de la paroi : assurer une protection contre la pression osmotique intracellulaire (car forte
concentration en mtabolites lintrieur de la cellule >> leau rentre)
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Un protoplaste ne possde plus les proprits antigniques de la bactrie dorigine. En effet, on trouve comme
antignes paritaux (= de la paroi) :

- chez les Gram(+) : peptidoglycane + acides techoiques et lipotechoiques + polyoside C chez les
streptocoques (voir TP sur le srogroupage des streptocoques)

- chez les Gram(-) : les antignes O du LPS (voir Document 6) (voir TP sur le srotypage des
salmonelles)

Rle 3 de la paroi : proprits antigniques

Ltude des protoplastes met galement en vidence dautres rles :

Rle 4 de la paroi : permettre la fixation des bactriophages. Ils reconnaissent des rcepteurs localiss sur le
peptidoglycane des Gram(+) ou la membrane externe des Gram(-). Cette proprit est utilise pour lidentification
de certaines bactries : cest la lysotypie.

Rle 5 de la paroi: participer la mobilit. En effet, les flagelles sont implants dans la membrane
cytoplasmique mais ne peuvent pas fonctionner en absence de peptidoglycane (do immobilit des protoplastes)

Rle 6 de la paroi : toxicit. Chez les Gram(-), le LPS est une endotoxine (effet toxique port par le lipide A) qui
peut donner fivres et lsions.

Rle 7 de la paroi : permabilit. La paroi laisse passer de petites molcules comme leau, les sels minraux ou
des mtabolites simples. Par contre elle est plus ou moins permable certains solvants (exemple lalcool. cf
coloration de Gram)

e) Quelques parois bactriennes particulires

Certains groupes bactriens possdent des parois trs diffrentes de celles des Gram (+) et (-). Cest le cas
notamment des Archeobactries et des Mycobactries.
Chez LES ARCHAEBACTERIES, la paroi a une structure et une composition trs diffrentes des Eubactries.
Mais elles peuvent tre colores par la mthode de Gram et apparaissent soit Gram+, soit Gram- en fonction de
la structure de leur paroi :
Les Gram + ont une paroi avec une couche paisse et homogne de peptidoglycane mais diffrent de celui des
Eubactries, on parle de pseudomurine.
Les Gram- nont pas de mb externe ni de peptidoglycane, mais elles possdent une couche superficielle de sous-
units protiques ou lipoprotiques.

Chez les Gram +, la pseudomurine contient seulement des AA L dans les ponts, de lacide N-
actylalosaminuronique et pas de nam et des liaisons osidiques 1-3 la place de 1-4.

Les mycobactries sont des bacilles lgrement incurvs, se multipliant trs lentement.
Leur paroi est trs riche en lipides et contient des cires : acides gras en C60 (acides mycoliques), qui empchent
de prendre la coloration de Gram.
Ces bactries sont dites : BAAR : bacilles acido-alcoolo-rsistants. On les appelle aussi bactries sans paroi .
Ex : Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprea

Voir Document 9

III-2- Le cytoplasme

Dlimit par la membrane cytoplasmique.


Sorte de gel contenant de leau et :
Des ribosomes: interviennent dans la synthse des protines. Sont associs en chapelets sur
lARNm sous forme de polysomes. Sont composs de 2 sous-units de taille diffrente (diamtre de
10 30 nm ; constante de sdimentation de 70S). Sont composs de protines et dARNr (particules
ribo-nucliques). On peut les colorer par du bleu de mthylne.

Des substances de rserve = inclusions cytoplasmiques : en gnral, chaque groupe de bactries


synthtise une seule catgorie de substances de rserve qui forment des agrgats, parfois de grande
taille. Cela peut tre des glucides (amidon et surtout glycogne), des lipides (poly-hydroxy-butyrate) et
parfois des minraux (fer, soufre).
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- rserves polysaccharidiques : amidon ou glycogne qui se forment en rponse un excs de
source de C alors que la source dazote ou de S ou de P est limitante. Inclusions trouves
notamment chez les bactries des genres Bacillus, Micrococcus, Neisseria..
- granules de PHB ( = poly-bta-hydroxybutyrate ) rservoirs de C et d nergie qui saccumulent
quand les lments nutritifs autres que la source de C deviennent limitants. Elles sont trouves
notamment chez les Vibrio et les Pseudomonas.
- Granules de polyphosphates inorganiques ou volutine chez la plupart des bactries ; ce sont
des rserves de phosphate.
- Des lipides et des esters dacides gras longues chanes sont stocks dans des vacuoles chez
les Mycobactries notamment.

Des organites spcialiss : diffrents de ceux trouvs dans les cellules eucaryotes. On trouve des
chromatophores (organites spcialiss dans la photosynthse), des vacuoles gaz (permettant aux
bactries aquatiques de flotter la surface de leau).

Des pigments : (= molcules colores). On trouve des bactriochlorophylles (couleur verte) ou des
carotnodes (couleur jaune de lespce Staphylococcus aureus).

Le pH du cytoplasme se situe autour de 7 7.2.

III-3- Lappareil nuclaire

a) Techniques dtude

Elles ncessitent de distinguer lADN des ARN, trs nombreux dans le cytoplasme, qui masquent le chromosome
bactrien.

Coloration de FEULGEN : traitement lacide chlorhydrique (HCl) dilu qui libre le dsoxyribose et
ses fonctions aldhyde. En prsence de ractif de Schiff (colorant basique), les rsidus aldhydiques se
colorent en rouge fonc.

Technique de BOIVIN : destruction de lARN par une ribonuclase, puis coloration classique de lADN
par un colorant basique (ractif de Schiff, bleu de mthylne)

Autoradiographie : on fait incorporer aux bactries de la thymidine tritie (base T spcifique de lADN)
pendant leur croissance. La radioactivit rsultante impressionne un film photographique.

b) Structure du chromosome bactrien

Le chromosome bactrien est une unique molcule dADN circulaire ferme et trs longue ( environ 1000 fois
plus longue que la bactrie : 1360 m chez E.coli ) libre et pelotonne dans le cytoplasme. Labsence de
membrane nuclaire conduit parler dappareil nuclaire ou de nucloide plutt que de noyau. Cet ADN est
associ des protines notamment des topoisomrases qui interviennent dans le repliement de la molcule
dADN, par contre on ne trouve pas dhistones comme chez les eucaryotes.
Une bactrie peut renfermer plus dune copie de son chromosome , ceci dpend notamment des conditions de
croissance ; les cellules en croissance rapide ont plus dune copie car la rplication de lADN se met en route
avant que la division cellulaire ne samorce et la sparation effective des deux cellules filles peut intervenir avec
retard sur la rplication.

Voir Document 10

c) Rles du chromosome bactrien

Il est le support des caractres hrditaires, de linformation gntique.


Il va se rpliquer lidentique pour que une cellule fille hrite du mme potentiel gntique que la cellule mre
(voir cours de BIOCHIMIE sur la REPLICATION)

III-4- La membrane cytoplasmique

a) Techniques dtude

- Expriences de plasmolyse en milieu hypertonique.


- Microscopie lectronique

b) Structure et composition chimique


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Elle possde le mme type de structure que celle dune cellule eucaryote (bicouche phospholipidique) mais avec
beaucoup moins de glucides et jamais de strols (sauf les mycoplasmes).

Elle est compose de 60 70 % de protines et 30 40 % de lipides.

Voir Document 10

c) Rles de la membrane cytoplasmique

C1) Rle de barrire semi-permable (ou semi slective): elle permet le passage de molcules lipophiles et
empche le passage des molcules hydrophiles.
On distingue 2 grands types de transport :

Le transport passif : il se fait dans le sens du gradient de concentration et ne ncessite pas dnergie.

Le transport actif : il se fait en sens inverse du gradient de concentration des molcules, ce qui
ncessite lutilisation dnergie (gnralement fournie sous forme dATP)

Voir Document 10 bis

C2) Site de fixation des flagelles (voir les flagelles plus loin)

C3) Possde des protines membranaires ayant pour rles :

Enzymes responsables de la biosynthse et de lexcrtion dans lespace priplasmique


de molcules ncessaires la synthse de la paroi

Enzymes de la chane respiratoire permettant la synthse dATP

Transporteurs de diverses molcules (ions, sucres, ) dans les 2 sens.

Pour plus de dtails sur les mcanismes de transport au travers de la membrane plasmique se reporter aux livres suivants :
Physiologie de la cellule bactrienne de Neidhart et Bactries et environnement de Pelmont

De plus la membrane joue un rle important dans la dtection de composs prsents dans le milieu environnant
grce la prsence de protines transmembranaires du chimiotactisme. Ceci permet aux bactries dotes de
flagelles de nager vers les endroits qui leur sont les plus favorables, les plus riches en nutriments par
exemple et de sloigner des endroits dfavorables comme ceux qui contiennent des substances toxiques. Ces
protines interviennent dans le sens de rotation des flagelles.

IV- Les lments facultatifs de la cellule bactrienne

IV-1- La capsule

Pour quelle existe il faut que :


- la bactrie possde les gnes codant pour sa fabrication
- que la bactrie ait sa disposition dans le milieu de culture les lments ncessaires sa
fabrication (principalement des glucides.

a) Mise en vidence

Etat frais lencre de chine : les bactries apparaissent sur fond sombre avec un halo clair autour du
corps bactrien qui correspond la capsule.

Voir Document 11
Microscopie lectronique

Techniques immunochimiques : des Ac anti-capsulaires se fixent sur les Ag capsulaires. Le complexe


Ag-Ac prcipite et augmente lpaisseur de la capsule qui devient visible au microscope. Cette raction
est appele : Raction de gonflement de la capsule de NEUFELD.

b) Morphologie et structure chimique

De nombreuses bactries sont capables de synthtiser des polyosides de surface . Parmi ces polyosides de
surface, on distingue de faon quelque peu arbitraire, la capsule et les couches muqueuses ou slime.
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- soit une couche glatino-muqueuse, bien dfinie, entourant un ou plusieurs corps bactriens (ex :
Pneumocoques (Streptococcus pneumoniae) encapsuls en diplocoques ; Klebsielle pneumoniae
encapsule seule)
- soit une couche diffuse et visqueuse

Sur milieu solide, les colonies donnent un aspect caractristique : type M (exemple : Klebsiella pneumoniae)

La capsule est en gnral de nature polysaccharidique, et quelquefois polypeptidique


(Bacillus anthracis ou megatherium).

Couche muqueuse ou slime : couche diffuse, facilement sparable du corps bactrien. La


production de slime est frquente chez les bactries aquatiques et particulirement importante
chez les bactries du genre Zooglea qui produisent des masses gluantes. Certains polyosides
produits par des bactries ont un intrt industriel et sont produits comme glifiant notamment
en industries alimentaires : Leuconostoc mesenteroides produit des dextrans, Xanthomonas
des xanthanes
Couche S : couche de surface cristalline de dcouverte relativement rcente car elle ne peut
tre mise en vidence que par microscopie lectronique. Elle est constitue de sous units
protiques organises de faon cristalline selon un systme gomtrique carr, hexagonal ou
oblique (ressemble la cotte de maille des armures) . Elle a t trouve chez des
Archeobactries ( Methanococcus par ex) et chez des Bactria ( Chlamydia, Treponema,
Helicobacter, Bacillus Clostridium ). La couche S joue un rle en tant que squelette mais elle
pourrait aussi tre implique dans ladhsion, dans la rsistance aux protases des
macrophages et dans la protection vis vis des bactriophages.

c) Rles et proprits

La capsule na pas un rle vital pour la bactrie (sans elle, elle peut vivre et se multiplier), mais elle peut tre utile
la bactrie grce ses rles :

De protection : contre les UV, la dessiccation, les agents physiques et chimiques

Dans le pouvoir pathogne :

Elle soppose la phagocytose en diminuant ladhsion de bactries aux macrophages


Elle exerce un chimiotactisme ngatif sur les leucocytes
Elle empche la pntration des antibiotiques
Ainsi pour certains germes (ex : pneumocoques), une perte de la capsule correspond une perte de la
virulence.

Antignique : les Ag capsulaires sont responsable de la spcificit srologique (Ag K). A partir de cette
proprit, une classification peut tre tablie (ex : 70 types srologiques diffrents chez Streptococcus
pneumoniae).

IV-2- Les flagelles


Ce sont des organes locomoteurs spcialiss. Ils sont trs rares chez les coques.

a) Mise en vidence

Indirecte : tat frais (bactries en mouvement) ou en milieu semi-glos (MM)

Directe : en microscopie optique aprs avoir paissi les flagelles par des colorations spciales (Rhodes,
Leifson : fuschine basique) ; ou en microscopie lectronique.

Voir Document 11

b) Morphologie et mode dinsertion

Ils mesurent en moyenne 16 20 m (beaucoup plus que la bactrie) et sont trs fins (300 dpaisseur).

Il existe diffrents modes dinsertion des flagelles, selon le nombre et la position de ceux-ci :
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polaires

pritriche

Ils sont fixs la bactrie par insertion dans la membrane cytoplasmique.

Ils sont mobiles par rotation, comme une hlice, grce un mcanisme similaire un rotor fonctionnant grce
lnergie fournie par un gradient de protons.

Le mcanisme de rotation seffectue grce un complexe situ dans la paroi.

c) Architecture molculaire

Le flagelle bactrien est constitu de 3 parties :

- le filament hlicodal
- le crochet
- le corpuscule basal

c1) Le filament
Cest un cylindre creux constitu dune seule protine multimrique : la flagelline (PM : 30.000 60.000 g/mol).
La flagelline, protine fibreuse, se positionne en hlice rigide qui tourne la manire de lhlice dun bateau.
c2) Le crochet
Il lie le filament au corpuscule basal.
Il a la mme composition que le filament, mais cet endroit, la flagelline ne possde pas le mme pas
dhlice, ce qui permet la formation dun coude.

Le crochet est plus court que le filament, mais plus large. Trs flexible, il permet dinduire le mouvement de la
bactrie.

La jonction crochet-filament est assure par des protines associes au crochet = protines HAP (Hook
Associated Proteins).

c3) Le corpuscule basal


Enfoui dans la cellule, il insre le flagelle dans le corps cellulaire.
Son architecture, assez complexe, peut tre simplifi en 3 parties :

- une partie mobile = le rotor


- une partie fixe = le stator
- un inverseur qui dclenche le mouvement soit dans le sens des aiguilles dune montre (CW) soit dans
le sens inverse (CCW)

Sa composition est diffrente chez les bactries Gram (+) et Gram (-).
Voir Document 12

d) Synthse du flagelle

20 30 gnes sont impliqus dans la synthse des flagelles.


1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 11

La synthse du flagelle se fait par un assemblage squentiel des diffrents composants : disques, du corps
basal, puis du crochet et enfin du filament.

Voir Document 12

e) Fonctionnement du flagelle

Cest une force proton motrice qui est responsable de la rotation (mcanisme pas totalement lucid).

C'est--dire quun gradient de protons se dispersant au travers des 2 anneaux fournit lnergie ncessaire la
rotation.

LATP ne semble pas tre impliqu dans la rotation du flagelle.

Selon le sens de rotation du flagelle, la bactrie ne se comporte pas de la mme manire :

1 2

1 : Dans le sens inverse des aiguilles dune montre (CCW), la bactrie avance en tournant
lgrement sur elle-mme

2 : Dans le sens des aiguilles dune montre (CW), la bactrie culbute et change alors de direction
pour repartir en avant avec les flagelles tournant CCW.

Remarque : pour les ciliatures pritriches :


1 : tous les flagelles sont regroups larrire du corps bactrien (comme les tentacules dun poulpe)

2 : les flagelles se dispersent autour du corps bactrien et la bactrie culbute.

f) Rles des flagelles

f1) La locomotion
Mises en vidence sur des milieux semi-gloss (diffusion dans la glose) ou sur milieu solide (envahissement
de la surface de la bote. Ex : Proteus).

f2) Rle antignique


Les antignes flagellaires (Ag H) dterminent diffrents srotypes (exemple : srotypage des Salmonella. Voir
TP). En prsence de lanticorps correspondant leur Ag H, les bactries agglutinent et les bactries
simmobilisent.

La spcificit antignique repose sur le nombre et la squence des acides amins de la flagelline.

f3) Fixation des bactriophages


Les flagelles sont le lieu de fixation de certains bactriophages.

f4) Le chimiotactisme
Certaines substances attirent les bactries mobiles, dautres les repoussent.
1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 12
Selon la composition du milieu de culture, on distingue 2 types de trajectoires :

Les courses sont plus longues, les


Les mouvements se font au hasard, culbutes moins frquentes, et une
les courses sont courtes, les direction privilgie apparat en
culbutes sont frquentes, et il ne fonction dun gradient de substances
se dgage pas une direction attractives ou rpulsives.
privilgie.
Voir Document 13
Le milieu de culture est donc neutre.

IV-3- Les pili ou fimbriae


(Fimbriae = filament ou fibre en latin ; pili = cheveu ou structure chevelue en latin)

Ce sont des structures filiformes, diffrentes des flagelles, qui sont quasi systmatiques chez les Gram (-) et
rares chez les Gram (+).
Ils sont de nature protique.

On distingue 2 sortes de pili :

Les pili communs ou de type I : ils sont nombreux autour de la bactrie, courts (de lordre de 1m) et
rigides (on les appelle galement des cils). Ils sont impliqus dans les proprits dadhsion des
bactries aux tissus. Ils constituent donc un facteur de virulence pour les bactries pathognes.

Les pili sexuels ou de type II : ils sont plus longs (10 m environ) et se terminent par un renflement.
Leur nombre varie entre 1 et 4. Ils ont un rle dans la conjugaison bactrienne (un des 3 modes de
transfert de matriel gntique dune bactrie une autre).

Les pili de la bactrie donatrice vont permettre de reconnatre une bactrie rceptrice (de lamarrer) et
entraner la cration dun pont cytoplasmique entre les 2 bactries, permettant ainsi le passage dune molcule
dADN.

Voir document 14 (pili communs)

IV-4- Les plasmides


Ce sont des molcules dADN bicatnaire, extra-chromosomiques, plus petites que le chromosome bactrien
(environ 1.000 3.000 pb soit 1/100 du chromosome), capables dautorplication.

Certains plasmides peuvent sintgrer au chromosome bactrien : on les appelle des pisomes.

Les plasmides apportent du matriel gntique supplmentaire la bactrie, qui code pour des caractres
additionnels, mais non indispensables au mtabolisme normal de la cellule bactrienne.
Non indispensables la survie de lespce, ces plasmides confrent aux bactries qui les hbergent des
avantages slectifs importants : ils portent des gnes codant des rsistances aux antibiotiques, des mtaux
lourds, des gnes codant des voies mtaboliques nouvelles comme la possibilit dutiliser des hydrocarbures et
des drivs organiques complexes (trs frquents chez les bactries du genre Pseudomonas ). Certaines
bactries portent aussi des gnes codant la synthse de substances comme des antibiotiques, des toxines et des
facteurs de virulence.

Remarque : importance des plasmides portant des gnes de rsistance aux antibiotiques dans laugmentation
des cas dinfections nosocomiales.

Ces plasmides peuvent se transfrer dune bactrie une autre par diffrents mcanismes (voir cours de
gntique bactrienne).
Les plasmides sont des outils trs utiles en gnie gntique : on introduit dans une bactrie des gnes non
bactriens ports par des plasmides, afin de lui faire acqurir de nouveaux caractres (exemples : synthse
dinsuline, dhormone de croissance, vaccin HBV).
1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 13

IV-5- Les spores

Ce sont des structures de rsistance formes par certaines bactries lorsque les conditions deviennent
dfavorables (carence en lments nutritifs ).

Trois genres bactriens sont caractriss par des endospores : Bacillus, Clostridium et Sporosarcina. Ce sont
toutes des bactries Gram (+).

a) Mise en vidence

Les spores sont visibles la coloration de Gram o elles apparaissent comme des espaces vides
lintrieur des bactries : seul le contour de la spore apparat color.

A ltat frais, elles apparaissent comme de petites masses rfringentes au sein de la bactrie, ou libres
dans le milieu.

Il existe des colorations spciales bases sur le caractre acido-alcoolo-rsistant des spores.
Exemple : coloration au vert de malachite = coloration de Benito-Trujillo. Aprs une contre
coloration par la fushine, les spores apparaissent verte dans la bactrie rose.

Voir Document 14

b) Morphologie et structure

Les spores sont de petites units ovales ou sphriques.


Elles peuvent dformer ou non le corps bactrien. Leur position dans la cellule est variable : centrale,
terminale, subterminale.

La spore peut-tre libre ou non (voir spores de B. anthracis sur Document 14)
La recherche de tous ces caractres se fait dans un but taxonomique.

c) Composition chimique

La spore possde de nombreuses enveloppes. Voir Document 14


La spore se diffrentie de la cellule vgtative par :

une faible teneur en eau (do rsistance la dessiccation)


une faible teneur en enzymes (activit mtabolique rduite)
la prsence de dipicholinate de calcium dans une enveloppe particulire : le cortex
une diminution du nombre de liaisons entre NAM et NAG
la prsence de protines de type kratine dans les tuniques
1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 14

d) Le cycle sporal

Il reprsente le passage de la forme vgtative la forme sporule et inversement :

SPORULATION
Forme vgtative Forme sporule
GERMINATION
Afin que la spore germe, elle doit se trouver dans des conditions favorables : eau, nutriments, pH, force
ionique, temprature convenable, pas dagents antimicrobiens.

Inversement, des conditions dfavorables de croissance entranent la sporulation ou labsence de germination de


la spore.

e) Les tapes de la sporulation

La sporulation dure environ 7 heures.

Voir Les diffrentes tapes de la sporulation : Documents 15 complter par des schmas

La sporulation :
Elle est provoque par lpuisement du milieu en substrat nutritif et elle peut ncessiter des conditions
particulires : absence doxygne pour les Clostridium, prsence doxygne au contraire pour Bacillus anthracis .
Le processus de sporulation dbute la fin de la phase exponentielle et se droule en 6 tapes :
a. stade 1 formation du filament axial : la division nuclaire ntant pas suivie dune division
cellulaire , les deux gnomes fusionnent donnant un filament chromatique axial
b. stade 2 : les deux gnomes se sparent et en mme temps la membrane cytoplasmique
sinvagine prs dun ple de la cellule pour former un septum de sporulation qui partage la
cellule en deux parties ingales.
c. Stade 3 : Ce septum va envelopper le cytoplasme de la plus petite partie pour former une
prspore caractristique
d. Stade 4 : entre les deux membranes limitant la prspore se forme la paroi sporale puis
apparat rapidement le cortex
e. Stades 5 et 6 : apparition des tuniques et aprs maturation, la cellule vgtative se lyse et
libre la spore.

f) Proprits de la spore

La spore possde de nouvelles proprits par rapport la cellule vgtative :

Thermo rsistance :
La spore rsiste en gnral des tempratures de 70-80C pendant 10 minutes, parfois plus. Cette
proprit est due la prsence de lacide dipicholinique et la dshydratation de la spore. (Les
protines et les acides nucliques ltat dshydrats sont trs rsistants la dnaturation thermique).

Cette proprit entrane des problmes importants dans les hpitaux, les salles de chirurgie et les
industries alimentaires (Clostridium tetani >> ttanos ; C. botulinum >> botulisme)

Rsistance aux agents physiques et chimiques :


La spore rsiste aux rayons UV, X, ultrasons, antiseptiques, dsinfectants, ATB (un ATB bactricide pour
une bactrie peut savrer simplement sporostatique pour les spores de la mme bactrie). Cela pose
galement des problmes dans les hpitaux.

Rsistance la dessiccation et au vieillissement :


Ces phnomnes semblent dus la faible teneur en eau et au mtabolisme ralenti : on parle dtat
de dormance.

Synthse dantibiotiques :
Certaines bactries synthtisent des ATB au dbut de la phase de sporulation. Exemple : Bacillus
licheniformis synthtise ainsi la Bacitracine ; Bacillus polymyxa le polymyxine
Mais aussi des toxines (entrotoxine de Clostridium perfringens) ou des substances activit
biopesticide ( toxines ltales pour des insectes) comme le corps parasporal de Bacillus thuringiensis et
de Bacillus sphaericus .
1TSBioT cours microbio - Chapitre 2 : Morphologie et ultra structure des bactries 15

g) La germination ;

Place dans des conditions favorables (eau glucose acides amins) la spore redonne naissance une cellule
vgtative. On distingue 3 stades dans le processus de germination :
a. lactivation : correspondant une lsion des enveloppes sporales par des agents
physiques (choc thermique ) ou chimiques ( acides , lysozyme ) ou mcaniques
( abrasion, choc ) . Remarque : lactivation thermique est mise profit au cours de la
tyndallisation qui consiste chauffer 3 fois le produit striliser : 30 min 60C
( destruction des formes vgtatives et induction de la germination dventuelles
spores ) , le deuxime chauffage 60C 30 minutes tue les spores issues da la
germination et induit la germination des spores rsiduelles et le troisime chauffage
dans les mmes conditions dtruit les dernires formes vgtatives.
b. Linitiation dbute en prsence de conditions favorables dhydratation et de mtabolites
effecteurs ( alanine , magnsium adnosine ) qui pntrent travers les enveloppes
endommages. Des enzymes hydrolytiques dgradent les constituants de la spore ; il y a
libration du dipicolinate de calcium . le cortex dtruit la pore s imbibe deau et gonfle.
c. Lmergence de la nouvelle cellule vgtative : grce laltration des enveloppes