INFORME DE PRCTICA 3: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE

ENTEROBACTERIAS.

1. GENERALIDADES DE LA PRCTICA
1.1. INFORMACIN GENERAL
DOCENTE RESPONSABLE: Q.F. ANDREA CHAVEZ COLCHA
CARRERA (S): MEDICINA VETERINARIA
ASIGNATURA (S): BACTERIOLOGIA
FECHA: 7 DE NOVIEMBRE DEL 2017
HORA DE INICIO: 11:00am
HORA FIN: 12:50pm
SEMESTRE (S): CUARTO
PARALELO (S): A
1.2 INFORMACIN DE LA PRCTICA
INTRODUCCIN.

Aislar bacterias en un cultivo puro ayuda a estudiar y entender ms sobre las propiedades
fisiolgicas de ciertos organismos que no es posible recabar en una simple base de estudio
amplia. Las diferentes bacterias prefieren diferentes condiciones fsicas y qumicas as que
es necesario suministrarlas de lo que necesiten para su correcto crecimiento. Algunas
tienen un lmite de tolerancia. Por esta razn, se utilizan varios mtodos para aislar y
estudiar microbios.

OBJETIVO GENERAL DE LA PRCTICA.

Aislar correctamente una colonia para posteriormente realizar su identificacin.

OBJETIVOS ESPECIFICOS DE LA PRCTICA.

1.- Aprender el manejo correcto de los materiales que se necesitan para aislar una
Escherichia coli.
2.- Realizar una correcta identificacin de la bacteria que se presente.

METODOLOGA

Explicativo, investigativo y prctico.

2. RESULTADOS DE LA PRCTICA.
2.1. ASISTENCIA ESTUDIANTIL.
ALUMNOS INSCRITOS EN EL SEMESTRE 50
ALUMNOS ASISTENTES A LA PRCTICA. 7
TASA DE ASISTENCIA 100
2.2. RESULTADOS DE APRENDIZAJE EN LA PRCTICA
Medios de cultivo. En los medios de cultivo las bacterias se multiplican y es necesario esperar
al menos 18-24 horas para visualizarlas. En trminos generales todas las bacterias tienen unos
requerimientos nutricionales imprescindibles para su crecimiento. Necesitan una fuente de
energa, una fuente de carbono, una fuente de nitrgeno, algunas sales, oligoelementos y agua.
Todos los medios de cultivo han de cumplir como mnimo con estos requisitos pero en muchas
ocasiones se necesitan adems otras sustancias adicionales como vitaminas, factores o
aminocidos esenciales.
Como medio de cultivo se us inicialmente un medio diferencial: se utilizan para poner de
manifiesto caractersticas distintivas de las colonias. Son medios que distinguen entre distintos
grupos bacterianos en funcin casi siempre del color de sus colonias. Por ejemplo, el agar
MacConkey es un medio slido que permite el crecimiento de bacilos gramnegativos
fermentadores y no fermentadores de lactosa. Los primeros adoptan una coloracin rosada que
los diferencia de los segundos. Los medios diferenciales, adems, pueden poner de manifiesto
mezclas y contaminaciones en los cultivos.

Pruebas bioqumicas: Las pruebas bioqumicas permiten determinar las caractersticas

metablicas de las bacterias objeto de identificacin. Algunas de estas pruebas son tcnicas
rpidas, ya que evalan la presencia de una enzima preformada y su lectura vara entre unos
segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del
microorganismo con una incubacin previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayora de
las pruebas que detectan componentes metablicos o aquellas que determinan la sensibilidad
de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificacin que
contienen el sustrato a metabolizar. No obstante, algunas de estas pruebas pueden realizarse de
forma rpida tras incubacin de unas 2-6h; en general, se trata de reacciones enzimticas
cromognicas o pruebas convencionales modificadas (hay discos o tabletas comercializados
con substratos cromognicos para uso individualizado). en litros. Dependiendo de su operacin
se encuentran semiautomticos o automticos.

Pruebas en tubo de ensayo (pruebas bioqumicas): En este caso requieren patrones de

inoculacin especficos para los tubos con agar inclinado, con medio slido horizontal o con
medio semislidos. En el caso del tubo con agar inclinado, la inoculacin se realiza a partir de
una colonia aislada tomada de una placa petri. Con el asa se traslada el inoculo a la superficie
del medio que se siembra por estras, a veces es necesario practicar una incisin en la superficie
del agar, la cual no debe llegar hasta el fondo.
La inoculacin de algn medio slido presentado en tubo de ensayo con superficie horizontal
se realiza utilizando un alambre recto. El mtodo de sembrado consiste en inocular por picadura
evitando llegar hasta el fondo del medio.
Los medios semislidos se emplean para los estudios de movilidad (Medio SIM); se inocula
utilizando un alambre recto tratando que la incisin no llegue al fondo del tubo.
Prueba de descarboxilacin de la Lisina (LIA): Esta prueba mide la capacidad enzimtica
de un organismo para descarboxilar un aminocido formando una amina, con la consiguiente
alcalinidad. El LIA es un medio diferencial empleado para caracterizar las Enterobacterias. Es
muy til para diferenciar tempranamente cepas de Salmonella y Arizona de Citrobacter.
Urea: Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desdoblar, la Urea, formando
dos molculas de amoniaco por accin de la enzima ureasa. Esta prueba se utiliza para
diferenciar los organismos del gnero Proteus rpidamente ureasas positivos de otros miembros
de las Enterobacterias.
Prueba del medio Triple Sugar Iron (TSI): Esta prueba determina la capacidad de un
organismo de atacar un hidrato de carbono especfico en un medio de crecimiento bsico, con
la produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible produccin de cido
sulfhdrico.

Pruebas que se utilizan en la identificacin preliminar, con lectura inmediata:

Catalasa: La catalasa es un enzima presente en la mayora de los microorganismos que poseen
citocromos. Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el perxido de hidrgeno en agua
y oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas. El principal objetivo de esta prueba es
separar Micrococacceae (positiva) de Streptococcus spp. y Enterococcus spp. (negativa).
Oxidasa: Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reaccin de
la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidacin del
citocromo el cual es reducido por el oxgeno molecular producindose agua o perxido de
hidrgeno segn la especie. bacteriana. El oxgeno acta por tanto como aceptor final de
electrones en la cadena transportadora de electrones.

2.4. CONCLUSIN.
Aprendimos como aislar las colonias que sembramos anteriormente.
Mejoramos nuestra prctica con los materiales de laboratorio.
Conocimos ms acerca del uso de los agares usados para la identificacin de Escherichia coli.

3. RUBRICA (EJEMPLO)

Problema: 1 2 3 4
No sabe Sabe identificar el Sabe identificar el
identificar el No sabe identificar objetivo del objetivo del
Identifica el objetivo del el objetivo del problema y localizar problema y
problema problema ni problema pero los datos pero no los localizar los datos
localiza los localiza los datos expresa con claridad y los expresa con
datos y rigor claridad y rigor
Selecciona las
No selecciona estrategias Selecciona y aplica Selecciona y
las estrategias adecuadas para la estrategia aplica las
Selecciona las
adecuadas para resolver el adecuada pero no lo estrategias
estrategias
resolver el problema pero no hace con rigor adecuadas con
problema las aplica matemtico precisin y rigor
correctamente
No da el Expresa
Expresa Da slo la solucin
resultado del El resultado es adecuadamente la
adecuadamente numrica del
problema o lo da incompleto solucin del
la solucin problema
incorrecto problema

4. ANEXOS

1. EVIDENCIA FOTOGRFICA.

IMAGEN 1. MATERIALES A USAR

IMAGEN 2. ROTULACIN DE TUBOS

 IMAGEN 4. AISLAMIENTO DE LA
COLONIA
IMAGEN 3. RECOLECCIN DE
COLONIA A IDENTIFICAR
2. LISTADO DE ALUMNOS ASISTENTES
NOMBRE Y APELLIDO CDULA FIRMA
CRUZ TIERRA JONATHAN STALIN 095424651
GUAMN YCAZA HAROLD ANDRS 1206705376
MEJIA MELISSA

PAMBI GALLARDO LUIS FERNANDO 0705916914

RZURI ZAMBRANO ILLONA NABYLL 0931289458
TROYA ZAPATA VIANCA
VALDEZ JULIO CESAR
3. EVIDENCIA DE LAS TCNICAS EMPLEADAS.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-
procedimientomicrobiologia37.pdf
http://ateneo.unmsm.edu.pe/ateneo/bitstream/123456789/3053/1/revista_peruana_de_biolog
ia08v20n2_2013.pdf
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412007000200012
https://biotaetscientia.wordpress.com/2011/05/06/experiencias-pruebas-bioquimicas-para-
bacteriologia/