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Talanta 74 (2008) 936-943

Determinacin de compuestos tilicos como el mercurio

complejos por vapor fro atmica
espectrometra de absorcin y
su aplicacin a los vinos
Emilia Bramanti un,*, Rosa Cavallaro segundo, Massimo Onorun,
Roberto Zambonisegundo, Alessandro D'Olivo un
un Consejo Nacional Italiano de Investigacin (CNR), Instituto de procesos qumicos y fsicos,
(IPCF) Laboratorio de Instrumental Qumica Analtica,
Via G. Moruzzi 1, 56124 Pisa, Italia
segundo Universidad de Pisa, Departamento de Qumica y Qumica Industrial,
Via Risorgimento 35, 56126 Pisa, Italia
Recibido el 13 de marzo de 2007; recibida en en formar 25 de julio de de 2007 revisado; aceptado 30 de de julio de de 2007
Disponible en Internet el 15 de agosto de de 2007
Abstracto
Informamos sobre la aplicacin de un analizador de mercurio disponible en el mercado, que se basa en la generacin
de vapor de Hg0 de NaBH4 reduccin y
deteccin de absorcin atmica, para la cuantificacin y caracterizacin de grupos -SH y su aplicacin a muestras de
vino. El comportamiento de Hg (II)
y tiol-Hg (II) (RS-Hg) complejos a nivel nanomolar (RS = l-cistena, dl-penicilamina, nortepenicilamina acetil,
glutatin, cysteinylglycine,
homocistena) se ha estudiado despus de su reduccin con NaBH alcalina4 para dar Hg0. En ausencia de tiol-Hg (II)
se convierte cuantitativamente
a Hg0 por cantidad estequiomtrica de NaBH4 (Relacin de reaccin 1/4 mol NaBH4/ Mol Hg), mientras que la
reduccin completa de Hg (II) -tiol
a Hg0 requiere un exceso molar de NaBH4 hasta seis rdenes de magnitud, dependiendo del tipo de complejo y en la
pKun del grupo tilico.
En virtud de un exceso apropiado de reductor, Hg (II) y sus complejos de tiol no son distinguibles de dar la misma
respuesta. Estas propiedades permiten
la discriminacin de Hg (II) de Hg (II) -tiol sin ninguna separacin preliminar y la cuantificacin de los grupos tiol.
Instrumental
lmites de deteccin son tan bajos como 2,5 pg, permitiendo dilucin de la muestra, por lo tanto, reduciendo al
mnimo el riesgo de posibles interferencias que ocurren con el complejo
matrices reales.
El mtodo ha sido aplicado a la cuantificacin de los grupos tiol en muestras de vino. Comparacin con los resultados
obtenidos por HPLC acoplado a atmica
deteccin de fluorescencia confirm las potencialidades prometedoras del mtodo.
2007 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
palabras clave: generacin de vapor qumico; espectrometra de absorcin atmica; complejos de Mercurio-tiol; Los grupos
sulfhidrilo en el vino; tetrahidroborato
1. Introduccin
compuestos tilicos son bajos molecular o de alto peso molecular,
molculas ubicuas ampliamente estudiados en muchas reas de investigacin,
tales como geoqumica [1], bioqumica [2,3] y la metabolmica
[4], la nanotecnologa [5], medicina [6] ambiental [7] y
Qumica de Alimentos [8-10]. Ellos son bien conocidos para jugar fundamental
papeles estructurales y funcionales en qumica de protenas, siendo
*Autor correspondiente. Tel .: +39 050 3152293; Fax: +39 050 3152555.
Direccin de correo electrnico: emilia@ipcf.cnr.it (E. Bramanti).
se encuentra principalmente en el sitio activo de muchas enzimas y
directamente implicado en la catlisis [11].
Los metales pesados tienen una alta afinidad por -SH grupos y la
afinidad de mercurio, en particular, se sabe que es muy alta en el
intervalo de pH de 1-13 para los compuestos de bajo peso molecular (tales como
glutatin, cistena, la homocistena) y para macromolculas
(Protenas, materia hmica) [12]. La interaccin de los metales pesados
y, en particular, el mercurio con grupos tiol esenciales de
enzimas y protenas es la base del mecanismo de su
actividad txica [13-19].
La alta afinidad de inorgnico (Hg2+) Y el mercurio orgnico
cationes (rhG+, En donde R = CH3, Fenilo, por ejemplo) para grupos -SH
0039-9140 / $ - see front matter 2007 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
doi:10.1016 / j.talanta.2007.07.041
E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943937
se ha utilizado para fines analticos y de diagnstico. Hg2+
se ha propuesto para amperomtrica [20] y conductividad
[21] titulacin con el fin de determinar los tioles en una concentracin
gama de 10-3 a 10-5 mol L-1; rHG+ ha sido usado
como sonda molecular bioqumica para grupos sulfhidrilo activos
[12].
Un nuevo mtodo sensible y selectivo para la determinacin de
grupos tiol a nivel nanomolar se ha desarrollado en nuestro laboratorio
[22]. Se basa en el vapor fro (CV) generacin
tcnica junto con un laboratorio montado de fluorescencia atmica
espectromtrico (AFS) detector para la caracterizacin de
Hg -tiol (II) y Hg (II) complejos protenicas [22,23]. El selectivo
reduccin de Hg inorgnico (II) y sus complejos tilicos
variando la concentracin de NaBH alcalina4 conjunto
con deteccin AFS de la Hg evolucionado0 revel una interesante
y herramienta analtica sensible para la investigacin y
caracterizacin de Hg (II) complejos de tiol tales como el tilico
protenas ovoalbmina, la hemoglobina, la gliceraldehdo-3-phosphatedehydrogenase,
la aldolasa, la piruvato quinasa, la hexoquinasa, lactato
deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, creatina fosfoquinasa,
lisozima y del citocromo do [23].
En este trabajo, la cistena, glutatin, penicillamine-
complejos de mercurio, previamente estudiados por CV-AFS, y
cistena-glicina, homocysteine- y norteacetil penicillamine-
complejos de mercurio ha sido investigado por inyeccin de flujo
vapor fro espectrometra de absorcin atmica (FI-CV-AAS), que
integra mercurio de inyeccin de flujo de generacin de vapor fro con
un detector de absorcin atmica muy sensible. FI-CV-AAS tiene
sido adaptado para la caracterizacin de Hg (II) -tiol
por curvas de reduccin y de titulacin y ha sido
aplicado a la determinacin de compuestos tilicos totales en
vinos.
2. Experimental
2.1. productos qumicos
soluciones de Hg inorgnico (II) Trabajando en una forma de
Hg (NO3)2 se prepararon mediante diluciones en serie de la solucin madre
(10005_GML-1, BDH Laboratory Supplies, Poole,
Inglaterra) justo antes de su uso. Las soluciones madre de tioles (lcistena,
CYS 30119, glutatin reducido, GSH G4251,
dl-penicilamina, PSH 76410, norte-acetilo-re-penicilamina, NAP
01423, cisteinil-glicina, Cys-Gly c0166, homocistena, HCys
H4628, etil-2-mercaptopropionato, Et-2-PrSH W327905 desde
Fluka-Sigma-Aldrich, Chemical Co., Miln, Italia), se prepararon
como se inform anteriormente [22,23].
Las soluciones madre y de trabajo de NaBH4 se prepararon como se
previamente reportado [22,23].
Agua purificada con un sistema Milli-Q (Millipore Filter Co.,
Bedford MA, EE.UU.) se utiliz en todas las operaciones.
2.2. Las soluciones de trabajo
Todas las soluciones de trabajo que contienen Hg (II) y / o tioles
a nivel nanomolar ((5-300)10-9 mol L-1) Estan preparados
justo antes del uso mediante diluciones apropiadas con una solucin que contiene
10-2 mol L-1 tampn fosfato de sodio de pH (7,4,
5)10-2 mol L-1 NaCl (indicado como PBS / NaCl). La adicion
de NaCl previene la formacin de hidrxidos de mercurio insolubles
a travs de la formacin de complejos de mercurio de cloruro.
Las soluciones que contienen Hg (II) y tiol, en el molar deseada
ratio, conducir a la formacin de Hg (II) -tiol. Desde el
reaccin de Hg inorgnico (II) con grupos sulfhidrilo es instantnea
a temperatura ambiente no se requiere ningn tiempo de incubacin antes de
mediciones. Las soluciones se analizaron dentro de 1 h de
preparacin.
2.3. Hg (II) titulaciones -tiol
Las titulaciones se realizaron para tioles mediante el procesamiento separado
soluciones que contienen cada uno la misma concentracin de Hg (II), tpicamente
410-8 mol L-1, Y cantidades crecientes de la tiol,
tpicamente en el intervalo de (0-2)10-7 mol L-1, A fin de realizar
diferentes relaciones molares de tiol / mercurio. Se prepararon soluciones
en PBS / NaCl en tubos de ensayo de 10 ml, cargado en el inyector automtico y
analizado dentro de 15 min. Un total de 10 ml fueron suficientes para tres
replica mediciones y toda la titulacin requeridas sobre
15 minutos.
2.4. recogida y almacenamiento de la muestra
Un total de 10 ml de cada muestra de vino (norte= 8 muestras de vino
examinadas) se tomaron muestras de las botellas de vidrio original, permanecer hermticamente
cerrado en tubos de ensayo de vidrio en la oscuridad a 4 C, y se analizaron dentro de
48 h de muestreo. titulaciones de mercurio para determinar la -SH total de
se realizaron con muestras de vino diluido 50 veces
con PBS / NaCl. Todos los anlisis se realizaron en noviembre
2006. curva de reduccin se lleva a cabo mediante el anlisis de un 200 ml
PBS / NaCl que contiene 510-8 mol L-1 Hg (II) y 480_L de
vino.
2.5. FI-CV-AAS analizador
El Sistema de Inyeccin de Mercurio Perkin-Elmer Flow (FIMS-
100) equipado con un automuestreador AS-91, se emple en el
configuracin convencional para valoraciones de mercurio-tiol (Figura 1,
Aconfiguration) con un bucle de inyeccin de 200 _L, el peristltica
bomba funcionar a 40 rpm, que corresponde a una velocidad de flujo medida
de 3.5mLmin-1. NaBH4 en 0,1 mol L-1 NaOH fue empleado
como agente reductor a una concentracin que oscila entre 10 -8 y
310-4 mol L-1 (Ver resultados). medio de muestra y portador fue
PBS / NaCl.
Para las curvas de reduccin se modific la configuracin FIMS-100
conectar la salida del inyector automtico a la lnea de reductor (Figura 1,
configuracin B). En esta configuracin el inyector automtico ofrece
una secuencia de 15 soluciones de NaBH4, 0,1 mol L-1 NaOH,
NaBH4 concentraciones que oscilan entre 310-9 mol L-1 y
1 mol L-1. El bucle de muestra se carga en continuo en el relleno
posicin de la vlvula de inyeccin. En esta configuracin la muestra
solucin despus de la carga de bucle podra reciclarse, lo que limita la muestra
el consumo slo a la cantidad inyectada multiplicado por el
nmero de inyecciones. A 30 cmbobina reduccin ID 0,75 mm tiene
ha empleado [22].
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Fig. 1. Representacin esquemtica de la configuracin FIMS-100 para tiol y el vino titulaciones (A) y para las curvas de reduccin
de los complejos de mercurio / tiol (B). GLS,
separador de gas-lquido; PP, la bomba peristltica.
3. Resultados y discusin
3.1. Las curvas de calibracin de mercurio en PBS / NaCl
Hg (II) curvas de calibracin se llevaron a cabo tanto mediante el uso convencional,
condiciones de reduccin qumica de cido, (0,2% NaBH4
en 0,05% de NaOH; portador = 3% (v / v) HCl) y mediante la realizacin de
la reduccin de mercurio en medio alcalino (10 -5 mol L-1 NaBH4
en 0,1 mol L-1 NaOH; portadora = 10-2 mol L-1 tampn de fosfato
solucin de pH 7,4, 510-2 mol L-1 NaCl). Los resultados muestran que
mercurio se puede determinar tambin en soluciones neutras (PBS / NaCl)
con una concentracin de agente reductor 5000 pliegues ms diluida
que la sugerida por FIMS que operan manual con una deteccin
lmite de 2,5 pg, el rango dinmico lineal que abarca desde 3 pg
a 30 ng (intervalo investigado). Estas figuras de mrito no eran
significativamente diferentes de los obtenidos en un medio de HCl.
3.2. Determinacin y caracterizacin de tioles por
FI-CV-AAS
La caracterizacin de los complejos de tiol de mercurio originalmente
desarrollado para CF-CV-AFS [22] fue realizado por FI-CVAAS.
Tres tioles de bajo peso molecular investigado previamente
(CYS, GSH y PSH) y tres tioles (CysGly, HCys, NAP) no
estudiado previamente fueron considerados. La prueba se ha realizado
mediante el estudio de la eficiencia de formacin de Hg0 en la reaccin de
tanto de Hg (II) y complejos de tioles de mercurio (Hgnorte(RS)metro) con
NaBH4 bajo condiciones alcalinas. El sistema de reaccin puede ser
caracterizado por el estudio de las curvas de reduccin y titulacin
como curvas presentan a continuacin.
complejos de Mercurio-tiol, Hgnorte(SR)metro, Se pueden obtener en una
manera simple por reaccin de un tiol con Hg2+ a temperatura ambiente.
Los complejos ms comnmente observados son Hg (SR) 2
y Hg2(SR)2 [20,21,24-34]. Aunque varios autores han
excluida la formacin de Hg2(SR)2 compuestos en presencia
de in cloruro, debido a la estabilidad de HgCl4
2- que suprime
la reaccin del exceso de mercurio con el mercapturo [24,35], otra
los hicieron observar la formacin de tales complejos tambin en el
presencia de iones cloruro, y en particular a pH bsico [20]. En
Hg2(SR)2 un tomo de mercurio se une firmemente como mercapturo y
el segundo se une ms dbilmente [20].
Las curvas experimentales obtenidos por el trazado de la mercurio
seal de absorbancia relativa frente NaBH4 concentracin ser
curvas de reduccin denomina; que representan la fraccin del total
mercurio que se puede reducir a Hg0 por una concentracin dada de
reductor.
Hg (SR)2 complejos se prepararon usando un exceso de tiol
(RSH / Hg (II) = 4) de acuerdo con la reaccin de equilibrio:
Hg2+ +2RSH = Hg (SR)2 +2H+ (1)
con una constante de equilibrio:
KF = [Hg (SR)2][MARIDO+]2
[Hg2+] [RSH]2 (1a)
Teniendo en cuenta que los valores de logKF son alrededor de 40 (tabla 1),
el empleo de un exceso molar de tiol hace que la concentracin
de libre Hg (II) despreciable con respecto a mercurio total
concentracin.
Figura 2A muestra la comparacin de las curvas de reduccin de Hg (II)
y de Hg (SR)2 complejos (donde R = GSH, CYS, NAP, Cys-
Gly, Hcys, PSH) y la titulacin tpica curvas de mercurio con
GSH (Figura 2SEGUNDO).
La seal de absorbancia integrada normalizada de HgCl4
2-
aumenta con NaBH4 se alcanza la concentracin hasta una meseta
de NaBH4/ relaciones molares de Hg mayor que 0,270,02 para el
reduccin de 510-8 mol L-1 Hg (II) soluciones. NaBH4/ Hg
relacin molar se ha estimado por la interseccin de la lineal
ajuste de los datos de la creciente parte de la curva A (Figura 2A) con
la meseta. Este valor est de acuerdo con la estequiometra de la
de la reaccin de reduccin de Hg (II) por NaBH4 en alcalina
medios de comunicacin, como se inform anteriormente [22].
Tabla 2 informes do50 valores de los seis tioles estudiados, donde do50
se define como la concentracin de NaBH4 que da el 50%
seal de absorbancia integrada de normalizado.
Estos resultados estn en buen acuerdo con los resultados anteriores
obtenido por CF-CV-AFS [22]. Vale la pena sealar que la
magnitud del exceso molar de agente reductor, que vara de aproximadamente
103-106, Dado que se correlaciona con Kun Los valores reportados en
literatura [36]. El grfico de logdo50 p frenteKun de grupo -SH de
tiol se informa en Fig. 3. Un ajuste lineal de estos datos dio una intercepcin
= 18,04,4 y una pendiente =-2.370.47 (R = 0,9292,norte= 6).
E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943939
tabla 1
Resumen de las constantes de estabilidad de RS-Hg (II) conocidos a partir de datos de la literatura (KF = 12)
Mtodo tiol do (Mol L-1) T (C) Ion fuerza (mol L-1) Log Medium pH 1 Iniciar sesin 2 Iniciar sesinKF rbitro.
PSH ISE 10-3 25 0.1 6-8 NaClO4 38,3 6,1 44,4 [31]
LiCLO4
CEM 10-3 25 0.1 6-8 NaClO4 37,8 6,7 44,5 [28]
LiCLO4
CYS CEM 10-3 25 0.1 6-8 NaClO4 37,8 6,2 44 [28]
LiCLO4
GE 10-2 25 0.1> 11.5 de NaNO3 - - 39,4 [26]
10-4 a 10-3 25 0 KNO3 43.57 [24]
ISE 10-4 a 10-3 12 1 KNO3 45.4 [24]
GSH ISE 10-4 a 10-3 25 0> 9,5 KNO3 - - 41.58 [24]
10-4 a 10-3 12 1> 9,5 KNO3 - - 43.47 [24]
GE 10-4 25 0.1> 9,5 KCl - - 33,4 [29]
GE, electrodo de vidrio; ISE, electrodo selectivo de iones.
Estos resultados muestran que los grupos -SH ms cidos forma ms estable
complejos de tiol de mercurio, que necesitan una mayor concentracin de
NaBH4 que ser reducido a Hg0.
Desde curva de reduccin de Hg (II) tambin se ha observado que
la estabilidad de NaBH alcalina diluido4 soluciones (0,1 mol L-1
NaOH) se ve comprometida si se almacenan durante corto tiempo en
frascos de polietileno. Esto se ha observado comparando la
curvas de reduccin para Hg (II) obtenidos mediante el uso de NaBH 4 Preservado
en cristal (Figura 2A, una curva) o en un matraz de polietileno durante 16 h a
temperatura ambiente (Figura 2A, curva de una_). El desplazamiento de la curva
hacia valores ms altos de NaBH4 concentraciones indica una significativa
descomposicin del agente reductor.
La reduccin selectiva de Hg (II) en presencia de su tiol
complejos ofrece la posibilidad de cuantificar tioles por el estudio
de curvas de valoracin, que se obtienen mediante la reduccin de Hg (II) con
NaBH4 en ausencia y en presencia de diferentes cantidades
de tioles. Figura 2muestra B, como un ejemplo, las curvas de valoracin de
mercurio por GSH utilizando cinco concentraciones diferentes de NaBH 4.
Al aumentar la concentracin de tiol, menos Hg (II) est disponible
para la reduccin y la absorbancia relativa de la seal tiende a
cero. En el punto de equivalencia ser el Hg (II) complejo -tiol
la especie predominante, mientras que ms all del punto de equivalencia
tanto Hg (II) -tiol y no tiol complejado estar presente.
Si una concentracin apropiada de NaBH4 se emplea (por
ejemplo, [NaBH4] = [Hg] / 4 o ligeramente superior), slo la no com-
Tabla 2
do50 valores (mediaDakota del Sur*) Obtenido a partir de las curvas de reduccin de Hg (RS)2 complejos
(510-8 mol L-1 Hg / 210-7 mol L-1 RSH)
RSH do50
*
CYS (7,4 0.9)10-4
GSH (5,6 0.6)10-5
HCys (6,0 1.3)10-5
CysGly (1,7 0.1)10-4
PSH (2,8 0.9)10-3
NAP (8,9 5.0)10-7
* SD en tres mediciones independientes.
plexed Hg (II) se reducir y se detect selectivamente. los
punto de equivalencia puede ser identificado por la interseccin de la
rama descendente de la curva de titulacin con la meseta obtenida
para tiol / Hg (II) relacin molar> nmero de grupos -SH titulable en
la solucin. Este tipo de curva se puede emplear para la estimacin
del nmero de accesible grupos -SH en una protena [23] o
de compuestos tilicos total en una muestra (ver la aplicacin).
Como se observ anteriormente, la posicin del punto equivalente
en la curva de valoracin es dependiente de NaBH4 concentracin y
esto es una consecuencia del comportamiento de Hg (II) -rs complejos
descrito por las curvas de reduccin [22]. Durante cuatro tioles investigados
(GSH, Cys, CysGly, HCys) el tiol / Hg ratios (II) calculado
en el punto final vari entre 1,140,14 (110-8 mol L-1
NaBH4) Y 1,970,16 (110-4 mol L-1 NaBH4). Cuando el
reduccin de soluciones de tiol de mercurio se lleva a cabo mediante el uso de
NaBH4 concentraciones para los cuales [NaBH4] / [Hg] est cerca de la
relacin de reaccin estequiomtrica de 0,25, a continuacin, slo la fraccin de
el mercurio no complejado por RSH se reducir. Bajo estas
condiciona las pointwas finales alcanzados para tiol / Hg (II) proporciones molares
cerca de uno. Este hallazgo experimental es consistente con la
formacin de Hg-RS complejos del tipo 1: 1 o 2: 2 [20]. los
aumento gradual de NaBH4 concentracin permite la reduccin de
una fraccin creciente de mercurio unido a HG-RS complejos
(Figura 2A) y el RSH / Hg (II) proporciones molares obtenidas al final
punto tenda a un valor de 2, que es consistente con la formacin
de Hg (RS)2 Complejos para RSH / Hg (II) proporciones molares 2.
En el caso lmite de la utilizacin de NaBH4 concentracin que es capaz
para reducir completamente Hg (RS)2 complejos de la curva de valoracin es
plano.
Las curvas de reduccin de Hg-CYS y complejos de Hg-GSH
Tambin se investigaron con soluciones que contengan RSH / Hg (II)
relaciones molares diferente de cuatro. curvas de reduccin obtenida para
[Hg (II)] = 510-8 mol L-1 (10 ngmL-1) Y relaciones molares de
1/1, 2/1 y 4/1 se reportan en Fig. 4.
Para relaciones molares 2, slo Hg (CYS)2 complejos de (Fig. 4UN)
se obtienen como se ha demostrado por la similitud de reduccin
curvas (b) y (c); reduccin completa se obtiene a [NaBH 4]
940 E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943
Fig. 2. (A) curvas de reduccin de Hg (II) y de Hg (SR)2 complejos obtenidos
con [Hg (II)] = 510-8 mol L-1 y [RSH] = 210-7 mol L-1 en PBS / NaCl:
Hg (A y A (II)_, Donde por 'a' NaBH4 almacenado en vidrio y de 'una_'NaBH4
almacenado en un matraz de polietileno durante 16 h a temperatura ambiente se ha utilizado),
Hg (NAP)2 (B), Hg (GSH)2 (C), Hg (HCys)2 (D), Hg (CysGly)2 (E), Hg (CYS)2
(F), Hg (PSH)2 (gramo). La desviacin estndar de cada punto solo tiene en cuenta
la variabilidad entre das (norte= 3 repeticiones realiza en tres das posteriores).
(B) Las curvas de valoracin de Hg (II) (410-8 mol L-1) Con GSH obtenido por
la reduccin de las soluciones de mercurio-tiol con cinco concentraciones diferentes de
NaBH4: 110-8 mol L-1 (A), 110-7 mol L-1 (B), 110-6 mol L-1 (do),
610-5 mol L-1 (D), 310-4 mol L-1 (mi).
> 10-2 mol L-1. Esto no es cierto para GSH (Fig. 4B) que da
complejos ms dbiles con mercurio con respecto a CYS. En esto
caso de que la curva de reduccin de Hgnorte(GSH)metro complejos se desplazan hacia
menor NaBH4 concentraciones, lo que indica un complejo ms lbil
formado por GSH a relaciones molares inferiores GSH / Hg (II).
Fig. 5 muestra un grfico tridimensional de mercurio normalizado
seal de absorbancia como una funcin de NaBH4 concentracin
(Valor log) empleado para su reduccin y la concentracin de GSH
utilizado para su valoracin. La superficie 3D se ha interpolado desde
los datos obtenidos por las curvas de valoracin realizaron a diferentes NaBH 4
Fig. 3. grfica del logaritmo de do50 valores de p vs.Kun del correspondiente tiol
grupo -SH. do50 los valores se han obtenido para [Hg (II)] = 510-8 mol L-1 y
[RSH] = 210-7 mol L-1 en PBS / NaCl.
concentraciones y por curvas de reduccin realizaron a diferentes
Hg (II) / relaciones molares de GSH.
3.3. La cuantificacin de tioles totales en muestras de vino
El enfoque descrito se ha aplicado a la determinacin
de los grupos tilicos totales en muestras de vino.
productos voltiles de azufre tales como sulfuro de hidrgeno (H2S),
sulfuro de carbonilo (COS), dixido de azufre (SO 2), tioles reducidos
(RSH), sulfuros (RSR), polisulfuros (RSnorteR, norte= 2, 3, . . .) o
tiosteres (RCOSR_) Se encuentra en el vino [37] as como en
otras bebidas fermentadas [38,39]. mercaptanos polifuncionales
de peso molecular ms alto se han encontrado en micromolar
(GSH) y los niveles de concentracin sub-micromolar [9,10,40,41]
y que son responsables de algunos aromas del vino ([42,43] y
sus referencias).
Fig. 6A muestra como ejemplo la curva de valoracin de 510-8
mol L-1 Hg (II) (5 ml) con vino diluido 1:50 obtenido por
el trazado de la seal de absorbancia normalizada en funcin de la
volumen (_L) de vino aadi. 110-7 mol L-1 NaBH4 estaba
utilizado para la reduccin de mercurio, que representa una concentracin de reductor
capaz de discriminar no acomplejada de acomplejado
mercurio.
El volumen, Vw (Expresado en L), de la muestra requerida para el
valoracin de 510-8 mol L-1 Hg (II) se ha extrapolado por
la interseccin de la rama descendente de la curva de titulacin con
el x-eje. La concentracin total de RSH (mol L-1) En el vino era prima
calculado sobre la base de la formacin de RS-Hg complejos
y la siguiente ecuacin:
[RSH] =
_
norteHg (II)
Vw
_
50 (2)
dnde norteHg (II) indica los moles de mercurio empleadas y 50 es
el factor de dilucin vino. Tabla 3 informa los valores de concentracin
de RSH total encontrada en las ocho muestras de vino examinados.
E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943941
Fig. 4. Curvas de reduccin obtenida para [Hg (II)] = 510-8 mol L-1
(10 ngmL-1) y RS / Hg (II) proporciones molares de 1/1 (a), 2/1 (b) y 4/1 (c).
(A) RS = Cys; (B) RS = GSH.
problema de interferencia podra ser originada por S2O5
2-, cual
es un aditivo comn de los vinos. Se encontr que la titulacin
de 510-8 mol L-1 Hg (II) con 6,210-3 mol L-1 S2O5
2-
solucin, lo que genera un gran exceso de SO2 en solucin
con respecto al lmite permitido de 2,510-3 mol L-1 no lo hizo
cambiar la seal de mercurio, lo que demuestra que no interfiera
con la medicin RSH (datos no mostrados por razones de brevedad).
Fig. 6B muestra las curvas de reduccin tpicos obtenidos para tres
de los ocho vinos. curvas de reduccin no fueron significativamente
diferente, do50 siendo los valores (3.880.36)10-5 (Rosso di
Montalcino), (5,350.39)10-5 (Chianti Rosso Nipozzano)
(2.110.25)10-5 (Chianti Rosso Felisina).
El principal inconveniente del mtodo descrito es la incertidumbre
en el conocimiento de la relacin de reaccin eficaz entre
Hg (II) y los grupos -SH de las muestras examinadas. Sin embargo, datos
Tabla 3
La cuantificacin del total RSH (mediaDakota del Sur*) En muestras de vino
Concentracin de la vendimia de RSH
(10-6 mol L-1)
Vecchia Cantina Chianti (roja
vino, 2005)
28.2 1.9
Vecchia Cantina Chianti (blanco,
2005)
11.0 1.0
Vinca vermentino (White, 2005) 16.4 1.9
Rosso di Montalcino Chianti (roja
vino, 2005)
19.0 2.0
Traste Barbera d'Alba (vino tinto,
2004)
14.3 1.6
Nero d'Avola (Sicilia) (vino tinto,
2005)
17.2 2.9
Barbera Pavia (vino tinto, 2005) 13.1 1.0
Rosso Chianti Nipozzano
Reserva (vino tinto, 2003)
21.7 2.8
* SD en tres mediciones independientes.
se informa en la seccin showthat anterior mediante una baja concentracin
de NaBH4 (Nominalmente 10-8 a 10-7 mol L-1, dependiendo
en el tiol) de mercurio se comporta, desde el punto de estequiometra
ver, como un agente complejante monofuncional.
Por esta razn, los valores totales RSH encuentran en muestras de vino
por el mtodo de titulacin de mercurio se han comparado con los datos
obtenido por anlisis de HPLC, basado en la derivatizacin de
grupo -SH con el compuesto mercurial monofuncional paghydroxymercurybenzoate
(PHMB) (trabajo en progreso). Fig. 7
muestra la comparacin del cromatograma AFS-mercurio especfica
de un vino tinto y blanco (1 ml con derivatiz
210-4 mol L-1 PHMB). Todos los compuestos tilicos eluye dentro de
12 min, el exceso de elucin PHMB como un pico ancho entre
16 y 30 min.
La inyeccin de soluciones estndar de GSH y 3-ethylmercaptopropionate
permiti la identificacin de picos a 10,78 y 5,62 min,
respectivamente. Identificacin de los otros picos todava est en marcha
Fig. 5. 3D representacin de mercurio normaliz la seal de absorbancia integrada
como una funcin de NaBH4 concentracin empleada para su reduccin (reduccin
curva) y GSH utilizado para su valoracin (curva de valoracin).
942 E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943
Fig. 6. (A) curvas de valoracin de Hg (II) (510-8 mol L-1 en 5 ml) con el vino
diluido 1:50 en PBS / NaCl (a) usando 110-7 mol L-1 NaBH4 para el mercurio
reduccin. (B) las curvas de reduccin tpicos de tres vinos tintos diferentes.
y est ms all del objetivo de este trabajo. Sin embargo, teniendo en cuenta
que todos los tioles PHMB acomplejados casi cuantitativamente, que el Hg
se recupera cuantitativamente en el procedimiento HPLC-AFS [44,45] y
que la respuesta analtica es especfico para el mercurio, una respuesta
factor puede ser ms o menos calcula sobre la base de la curva de calibracin
de complejo GS-PHMB [45]. Entonces, la suma de reas de los picos de
compuestos tilicos se convierte en el valor del total RSH en
muestras de vino utilizando el factor de respuesta estimado anteriormente. los
bondad de esta aproximacin puede ser verificada mediante la comparacin de
los resultados obtenidos por anlisis de FI-CV-AAS y por HPLC-AFS
anlisis (vase Fig. 8).
El bastante buena correlacin (pendiente = 0,95010,0847,
R = 0,8185; norte= 8; PAG = 0,095) es compatible con la aproximacin
introducido en los clculos y apoya la buena potencialidad
cromatograma AF Fig. 7. Mercurio-especfica de un vino tinto y blanco (1 ml
derivatizado con 210-4 mol L-1 PHMB). Condiciones cromatogrficas:
columna Hydra RPC (Phenomenex); velocidad de flujo: 1 ml min-1; 50_L bucle; isocrtica
elucin en 97% 210-2 mol L-1 PBS pH 5,96, MeOH al 3%. para la deteccin
condiciones, vase ref. [45].
Fig. Parcela 8. Correlacin de valor RSH encontrado por anlisis FI-CV-AAS y por
El anlisis por HPLC. (A) Vecchia Cantina Chianti (vino tinto, 2005); (B) Vecchia
Cantina Chianti (vino blanco, 2005); (C) Vinca vermentino (vino blanco, 2005);
(D) Rosso di Montalcino Chianti (vino tinto, 2005); (E) Fret Barbera d'Alba (roja
vino, 2004); (F) Nero d'Avola (Sicilia) (vino tinto, 2005); (G) Barbera Pavia (rojo
vino, 2005); Nipozzano Reserva (H) Rosso Chianti (vino tinto, 2003).
del mtodo de FI-CV-AAS en la determinacin del tiol en ultratrazas
nivel.
4. Conclusin
Los resultados presentados en este trabajo demuestran la posibilidad de transferir
del mtodo desarrollado originalmente para un laboratorio
sistema de CF-CV-AFS montado en la determinacin y caracterizacin
de Hg (II) -tiol [22], A un comercialmente
analizador de mercurio disponible FI-CV-AAS. Los principios bsicos de
el mtodo [22] Tambin se aplica a FI-CV-AAS y esto permite que el
E. Bramanti et al. / Talanta 74 (2008) 936-943943
determinacin de grupos -SH de mercurio-reactivo y / o la determinacin
de los grupos tilicos total en la muestra a nivel nanomolar,
de una manera rpida y sencilla. En cuanto a la seguridad asociada con
el uso de mercurio y la eliminacin, la concentracin de Hg (II) en el lquido
residuos es comparable al lmite mximo permitido en el agua potable
agua; menor concentracin se puede lograr mediante la reduccin de la concentracin
de mercurio por debajo del nivel empleado de 10 ngmL-1.
La aplicacin del mtodo FI-CV-AAS puede ser, en principio,
atractiva para la industria farmacutica y alimentaria, tanto en la calidad
control de los procesos de anlisis y en el desarrollo de nuevo
drogas tilicos.
Expresiones de gratitud
Los autores desean agradecer a Perkin-Elmer Life y Analytical
Ciencias, Via Tiepolo, 24, -20052 Monza (Milano), Italia
para el suministro de FIMS-100 y sus accesorios.
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