UNIVERSIDAD POPULAR AUTNOMA DEL

ESTADO DE TLAXCALA

PRCTICA 02INTRODUCCIN A LA
BACTEROLOGA

Herrera Meneses Romina Daniela

GRUPO: 302

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA I

DRA. Senobia Rosala Cruz Lumbreras

CICLO ESCOLAR: 2017 - 2018

Mircoles, 18 de octubre de 2017

 INTRODUCCIN
BACTERIOLOGIA: Es la parte de las ciencias mdicas que se dedica al
estudio de las bacterias, incluyendo su clasificacin y la prevencin de
enfermedades de etiologa bacteriana. Las bacterias no solo son objeto de
estudio de microbilogos sino de qumicos, bioqumicos, genetistas,
patlogos inmunlogos y mdicos.
BACTERIA: Bacteria proviene del griego bakteira bastn nombre que
reciben los organismos unicelulares y microscpicos que carecen de
ncleo diferenciado y se reproducen por divisin celular sencilla.
SISTEMA DE CLASIFICACION DE LOS CINCO REINOS DE WHITTAKER
PLANTAS
FUNGIS
ANIMALIAS
PROTISTAS (Microalgas y Protozoos)
MONERAS (Bacterias y algas azul-verdosas)
En el actual sistema de clasificacin en cinco reinos segn Whittaker, se
basa en tres niveles de organizacin celular.
As como en los tres tipos principales de nutricin: Fotosntesis,
Absorcin e Ingestin

OBSERVACIONES
Cuando se realiza la tincin, no demos olvidar que se debe tener cierto
cuidado y tolerancia con el tiempo, ya que esto se debe hacer pausado y con
calma.

Tincin de Ziehl Neelsen

1. Encender el mechero a una llama considerable.
2. Esterilizar el asa de siembra, introducindola en el mechero.
3. Colocar una pequea gota de agua en el centro del portaobjetos
(limpio) del tamao de una lenteja. Es necesaria muy poca cantidad
de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que el extremo
 curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que
resulta eficiente.
4. Flamear el asa de siembra, tomar en condiciones aspticas una
pequea cantidad de cultivo bacteriano en medio slido y
transferirlo a la gota de agua.
5. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una
suspensin homognea, que quede bastante extendida para facilitar
su secado.
6. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin
acercando el portaobjetos a la llama de mechero por 3 veces. En este
caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el
portaobjetos, pues las clulas pueden deformarse o romperse.

Fijacin de las bacterias al portaobjetos

7. Por calor: Pasar 3 veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar el portaobjetos. Una vez realizado el frotis y
fijadas las bacterias; las preparaciones pueden ser observadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar
con el proceso de tincin.

Tincin del frotis sanguneo

8. Cubrir le frotis con abundante colorante y dejarlo actuar durante el
tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele
oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tie solo en
caliente, por lo que el tiempo que dura su actuacin se deber
sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero
para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que n
llegue a hervir, ya que se producir la destruccin de las clulas.
9. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Est
operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro
de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis,
pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra
arrastrar parte del frotis consigo.
 10. Secar el portaobjetos: en ningn caso se debe frotar el
portaobjetos.
11. A continuacin, se realiza la tincin de Gram, utilizando
nuestro portaobjetos.

Tincin de Gram
1) Fijacin: Primero de todo hay que coger bacterias sanas de un cultivo
y ponerlas en un portaobjetos (MCK) y secar la gota bien con
mechero, sin quemar ni hervir las clulas, o bien al aire.
2) Tincin 1: durante 1 minuto se cubre la superficie donde estn las
bacterias con unas pocas gotas del colorante violeta de genciana.
Pasado este tiempo se elimina el exceso y se lava el portaobjetos con
agua corriente, con cuidado para que el chorro de agua no caiga
directamente sobre la muestra ni sea un flujo demasiado rpido
como para eliminar las bacterias del portaobjetos.
3) Tincin 2: Colocar el fijador Yodo sobre el violeta de genciana por 1
minuto.
4) Tincin 3: Proceder a colocar el Alcohol Acetona, hasta que el violeta
de genciana desaparezca.
5) Tincin 4: Se aade Safranina hasta desaparecer los colorantes por
un tiempo de 1 minuto.
6) Secar el portaobjetos cerca del mechero y observar al microscopio
Gram negativos = Color rojo - rosa
Gram positivos Agrupados = Violeta intenso o azul.
 AGRUPACIONES DE LAS FORMAS BSICAS DE LAS
BACTERIAS
Las agrupaciones bacterianas aparecen cuando las clulas se mantienen
juntas despus de la divisin celular. Son caractersticas de diferentes
microorganismos.
A partir de los cocos: Diplococos, Estreptococos (un plano de divisin),
Ttradas, Sarcinas y Estafilococos (dos o ms planos).
Diplococos: dos clulas
Estreptococos: cadenetas de varias clulas
Ttradas: dos planos perpendiculares
Sarcinas: tres planos ortogonales (paquetes cbicos)
 Estafilococos: muchos planos
aleatorios
A partir de bacilos aparecen:
Diplobacilos
Estreptobacilos
Otras agrupaciones son: En
Empalizada, en V o L, letras chinas o
rosetas.

FUNDAMENTO E INTERPRETACIN
TINCIN DE GRAM: Esta tincin es un procedimiento de gran utilidad
empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiolgicas.
Es definida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos colorantes y
clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas. Hoy en da, sigue siendo una de las tinciones ms
utilizadas universalmente debido a lo econmico, sencillo y eficaz que
resulta. En microbiologa clnica resulta de gran utilidad, ya que a partir de
muestras clnicas directas provenientes de sitios estriles se puede saber
de manera rpida las caractersticas de la muestra y hacer una diferencia
de los potenciales microorganismos causantes de una infeccin. Los
principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la
pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades
determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias
Gram negativas est constituida por una capa fi na de peptidoglicano y una
membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas
poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; as pues, la composicin qumica y
el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram
negativas y Gram positivas explica y determina las caractersticas
tintoriales.
Las muestras tiles para su uso son lquidos estriles, biopsias para cultivo,
abscesos, hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo.

Las bacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro a morado,

mientras que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo.

ZIEHL NEELSEN: La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir

la decoloracin con cidos fuertes despus de ser coloreadas con solucin
de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominacin general de
bacterias cidoresistentes o cido-alcohol resistentes. La cido-alcohol
resistencia es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos
despus de someterlos a la accin de cidos y alcohol y est determinada
por la presencia en la pared celular de los cidos miclicos que son cidos
grasos de cadenas ramificadas de alto peso molecular (60 a 70 tomos de
carbono). Las micobacterias son bacilos cido-alcohol resistentes, cortos,
ligeramente curvos. El gnero Mycobacterium, incluido en esta
clasificacin, comprende especies patgenas para el hombre, animales y
especies saprfitas. El grado de cido-alcohol resistencia es variable
entre las especies de este gnero y est relacionado muchas veces con las
condiciones culturales, no pudiendo utilizarse esta diferencia para
distinguirlos entre s. Los bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR) se
observan de color rojo al ser coloreados con los colorantes para Ziehl
Neelsen, mientras que otros grmenes y clulas toman distintos tonos de
azul debido al azul de metileno que se utiliza como colorante de contraste.
La coloracin de Ziehl Neelsen consituye una tcnica sencilla rpida y
econmica, de baja sensibilidad pero es una valiosa herramienta para
detectar los casos de tuberculosis pulmonar.
Las muestras clnicas tiles para su uso son mltiples, como el lquido
cefalorraqudeo, lquido pleural, lquido sinovial, lquido pericrdico,
biopsias para cultivo, abscesos, aspirados, crecimiento de colonias aisladas
en medios de cultivo, expectoraciones, aspirados endotraqueales y lavados
bronquioalveolares. Una tincin positiva es aqulla en la que se observan
bacilos cido-alcohol resistentes, los cuales son de color rojo fucsia.

CONCLUSIN
Realizar ests tinciones nos permite observar de una mejor manera como
estn agrupadas o su forma de dichas bacterias.
Tambin los mtodos utilizados en dichas tinciones nos ayudan a
comprender mejor el por qu se realizan este tipo de tinciones.

BIBLIOGRAFA

1. Koneman WE y cols., Diagnstico Microbiolgico, Mxico, Ed. Mdica

Panamericana 2001.
2. Prats Guillem, Microbiologa Clnica, Madrid Espaa, Mdica
Panamericana 2005.