Microbiologa clnica

13.10.2016 (jueves)

PRACTICA: Tinciones hematolgicas convencionales.

A) FUNDAMENTO:

. Tinciones hematolgicas convencionales son aquellas tinciones que se realizan para

colorear las diversas estructuras de las clulas sanguneas aumentando as el contraste
entre ellas y el medio que las rodea, y facilitando la identificacin de los diferentes
tipos celulares a microscopio.

Las tinciones convencionales ms utilizadas son las denominadas tinciones policromas

y las supravitales, tambin se pueden aplicar algunas tinciones especiales, aunque se
utilizan principalmente para tinciones de muestras de mdula sea.

. Tinciones convencionales policromas: Son tinciones hematolgicas que utilizan

combinaciones de colorantes con distintas afinidades para que las estructuras
celulares se tian con colorantes diferentes. Se aplican sobre clulas muertas y por
tanto, es necesario realizar una fijacin previa.

La fijacin evita alteraciones de la estructura celular y facilita la adherencia de las

clulas a la superficie del portaobjetos.

Las tinciones policromas ms utilizadas en hematologa derivan de la tincin

Romanowsky, que se basa en la combinacin de derivados de azul de metileno y la
eosina; la ms habituales son la tincin de May Grnwald-Giemsa, la tincin de
Wright y la tincin Pantica rpida.

TINCIN MAY GRNWALD-GIEMSA:

Para sta tcnica se utilizan dos soluciones:

La solucin de May-Grnwald, que contiene eosina (como colorante cido) y

azul de metileno (bsico) disueltos en metanol.

La solucin de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y productos de la

oxidacin del azul de metileno (azur A, azur B, violeta de metilo y azul de
metilo).
TINCION WRIGH:

Es otra de las tinciones que se realiza de manera rutinaria para teir frotis de sangre
perifrica. Se usa un solo colorante, que es una mezcla de eosina, azul de metileno y
derivados de azul de metileno en metanol.

TINCION PANPTIICA RPIDA:

Es un mtodo de tincin muy utilizado en laboratorios de urgencias.

Se utilizan 3 reactivos, cada uno de ellos en un vaso de Coplin.

1. En el primer vaso: Una solucin fijadora, normalmente a base de metanol.

2. En el segundo vaso: Un colorante cido tamponado, normalmente un derivado
de eosina en tampn fosfato.
3. En el tercer vaso: Un colorante bsico tamponado, normalmente derivado de
azul de metileno.

B) OBJETIVO:

-Realizar las tinciones ms usadas en hematologa.

-Familiarizarse con el material de laboratorio.

C) MATERIAL:

- Frotis - Agua destilada .

- Colorantes explicados en fundamento. -Batea.

- Microscopio - Puente de tincin.

- Aceite de inmersin (para ver a 100 -Papel de filtro.

aumentos).
 D) PROCEDIMIENTO:

TINCIN MAY GRNWALD-GIEMSA:

1. Colocar la extensin en un puente de tincin .

2. Cubrir la extensin con solucin de May Grnwald (20 -25 gotas) durante dos
minutos (fijacin).
3. Aadir 20 - 25 gotas de agua desionizada ( dilucin 50%).
4. Volcar la extensin para eliminar el colorante, lavar con agua destilada y
escurrir.
5. Cubrir la extensin con solucin diluida de Giemsa ( 2 gotas de Giemsa y 18
gotas de agua desionizada, preparado antes en tubo).
6. Volcar la extensin para eliminar el colorante, lavar y dejar
secar al aire.

TINCIN WRIGHT:

1. Colocar la extensin en un puente de tincin.

2. Cubrir la extensin con colorante de Wright ( 20- 25 gotas)
durante 5-8 minutos.
3. Realizar dilucin 1/1 sobre portaobjetos con agua
desionizada.
4. Soplar para mezclar.
5. Volcar la extensin para eliminar el colorante.
6. Lavar con agua y escurrir.
7. Dejar secar al aire.

PANPTICA RPIDA:

1. Realizar inmersin de la extensn en los 3 vasos en el

orden citado anteriormente. (solucin fijadora,
colorante cido, colorante bsico).

Cada inmersin debe durar entre 5- 10 segundos. Tambien se

puede relizar ralizando 5 inmersiones de un segundo en cada reactivo.

2. Lavar con agua y dejar secar al aire.