Laboratorio de reconocimiento de lpidos y cuantificacin espectrofotomtrica de protenas

I. OBJETIVO GENERAL
1. Reconocer algunas propiedades de los lpidos
2. Cuantificar protenas en una muestra problema

II. INTRODUCCIN

Los seres vivos en su composicin tienen molculas comunes conocidas como biomolculas. En esta
categora se reconocen compuestos orgnicos como los carbohidratos, las protenas, los lpidos y los cidos
nucleicos.

Las biomolculas cumplen diversas funciones, por ejemplo: los carbohidratos reconocidos como importantes
fuentes de energa adems tiene funciones estructurales, tal es el caso de la quitina del exoesqueleto de los
insectos; los lpidos sirven de reserva de energa pero pueden ser servir como aislante trmico en animales
superiores; as protenas pueden servir como receptores de seales y otras como catalizadores biolgicos; los
cidos nucleicos contienen la informacin gentica y en otros casos sirven como molculas reguladoras de la
expresin de genes.

Las caractersticas y propiedades, como estructura qumica, solubilidad en agua, tamao molecular entre
otros, determinan la funcin y localizacin.

Estas molculas adems son halladas en aguas residuales y subproductos de la actividad agrcola e industrial
que empleen derivados de material vivo. Por lo tanto, el conocimiento de sus caractersticas, reactividad y
su transformacin pueden dar luz sobre el manejo de ciertos residuos.

III. MATERIALES
Material suministrado por el estudiante:, caldo de pollo, gasolina o ACPM, mantequilla, aceite de cocina,
sobrenadante de trampa de grasa de restaurante o fbrica de alimentos, huevo y semillas.

12 Tubos de ensayo, gradilla, pipeteador, pipetas de 1mL, 2 mL, 5mL y 10mL, tubos de centrifuga, beaker de
100mL y de 250mL, probeta de 50mL, Erlenmeyer de 250mL, embudo, gasa, mortero y pistilo, , vidrio reloj,
esptula, termmetro, agitador de vidrio, 2 pipetas de transferencia (pasteur plstica), gasa, pinzas para
tubo.

IV. REACTIVOS

Almidn 1%, Patrn de BSA 5mg/mL, NaOH 20%, Biuret, ter de petrleo, acetona, aceite mineral.

Bao de maria, centrifuga y espetrofotmetro con celdas.

V. PROCEDIMIENTO

Preparacin de las muestras problema.

1. Batir la clara de un huevo y mezclarla con 5 volmenes de agua. Fltrelas en una gasa y preserve el
filtrado en tubo marcado de 15mL.
2. Triturar en un mortero 0,5mgde semilla y adicionar 8mL de agua. Centrifugar por 10 min. Preservar el
sobrenadante debidamente marcado

Parte I- Reconocimiento de propiedades de los lpidos

Reconocimiento de lpidos saponificables.

Coloque en un tubo de ensayo 3 mL de aceite y 3 mL de NaOH al 20%. Agite vigorosamente con ayuda de un
vortex o por inversin del tubo previamente tapado. Coloque al bao Mara por 30 minutos (remueva la
tapa del tubo si la tiene).

Terminado el tiempo de incubacin, retire del bao mara y observe las tres fases formadas: la fase superior
lquida debe contener parte del aceite no consumido en la reaccin de saponificacin; retire la mayor parte
de esta fase con el gotero y transfiera a un tubo nuevo.

La fase intermedia slida contiene sales de cido graso obtenidas al saponificar el aceite. Transfiera con una
pipeta esta fase a otro tubo.

Ensayo de solubilidad de lpidos

Tome 5 tubos de ensayo con una pequea muestra de un lpido especfico en cada tubo. Adicione el
solvente que le asigne su docente. Agite fuertemente los tubos y deje reposar unos 5 minutos. Observe y
registre los resultados. Determine la solubilidad de cada lpido en el solvente asignado.

Muestras Agua Eter Acetona

dietilico
Aceite
vegetal
Mantequilla
Aceite
mineral
Gasolina o
ACPM
Petrleo o
sobrenadante
de trampa de
grasa

Cuestionario de parte I

1. Explique en que consiste la saponificacin.

2. Explique el fundamento qumico de las pruebas realizadas.
 3. Explique y compare la diferencia en la solubilidad en agua de la mantequilla, los aceites e investigue
como seria la solubilidad de un cidos grasos como el cido linoleico.
4. Investigue cul es la importancia y la aplicacin ambiental de los biosurfactantes.

Parte II- Cuantificacin de protenas

Un mtodo para determinar protenas consiste en hacerlas reaccionar con el reactivo de Biuret en solucin
alacalina, lo que forma un compuesto de color azul violeta cuya absorbancia mxima se presenta a 540nm.
La intensidad del color es proporcional a la concentracin entre 1 10mg.

Prepare 8 tubos de ensayo y pipete los reactivos segn el orden y cantidades sealadas en la tabla
Tubo Blanco 1 2 3 4 5 6 Problema
Sln. - 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1 -
patrn de
ALB (mL)
Sln. - - - - - - - 1
Problema
(mL)
Agua 1 0,9 0,8 0,6 0,4 0,2 - -
destilada
(mL)
Reactivo 2 2 2 2 2 2 2 2
de Biuret
(mL)
Volumen 3 3 3 3 3 3 3 3
total(mL)

Mezcle bien los tubos y consrvelos a bao maria a 37C por 10 min. Retrelos y djelos enfriar a
temperatura ambiente. Ajuste el espectrofotmetro con blanco a ABS 0. Lea en espectrofotmetro a
540nm.
El tubo de la muestra problema debe tener un color que a simple vista se encuentre entre la gama de los
tubos 1 a 6. En caso que sea mayor o menor haga los ajustes.

Resultados y consulta de parte II.

1. Construya una grfica de ABS vs. concentracin de protena. Esta curva tambin es conocida como
curva patrn o estndar.
2. A partir de la curva, calcule cul es la concentracin de las protenas en la muestra problema.

IX. BIBLIOGRAFA

Hepper, E., Urioste, A., Castao, C., Iturri, A., Larroulet, S., Olivieri, P., & Bollini, J. 2010. GUIA DE TRABAJOS