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cincia EVOLUOy

Um cardume
de zebrafish:
modelo de estudos
para a formao
dos trios
e ventrculos

48 z outubro DE 2014
Como explicar
um corao
to dividido
Cmaras cardacas podem ser o resultado da ao
do cido retinoico, usado em cosmticos

Texto Carlos Fioravanti| Fotos Lo Ramos

P
equenos peixes de listras horizontais com o dimetro do corpo. Xavier parece no se
mantidos em um aqurio no Laboratrio importar com a proximidade. Do ponto de vista
Nacional de Biocincias (LNBio), em da cladstica, diz ele, referindo-se ao sistema de
Campinas, esto mostrando muito sobre classificao dos seres vivos que se baseia na rela-
a formao e a evoluo do corao das pessoas. o evolutiva entre as espcies, nunca deixamos
No final de junho, depois de meses examinando os de ser peixes. Somos peixes modificados, as na-
mecanismos de ativao de genes nos msculos dadeiras se transformaram em braos e pernas.
do corao do minsculo zebrafish, Jos Xavier Peixes primitivos como a lampreia j apresen-
Neto e sua equipe concluram uma srie de ex- tam um corao de quatro cavidades, mas orga-
perimentos que reforaram sua hiptese de que nizadas em sequncia, e no em um bloco nico,
a estrutura do corao dos seres humanos, com como no corao humano. Em outra espcie evo-
quatro cmaras internas divididas por vlvulas lutivamente muito antiga, que pode ter surgido h
que regulam o fluxo do sangue, poderia ter apa- cerca de 400 milhes de anos, a piramboia, um
recido h pelo menos 500 milhes de anos, bem peixe encontrado na Amaznia (h um exemplar
antes do surgimento da prpria espcie huma- tambm no laboratrio de Campinas), alongado
na, h 2 milhes de anos. O corao do homem, como uma cobra e dotado de pulmes, o corao
portanto, teria nascido antes mesmo do homem. j mais refinado, com uma diviso interna que
As implicaes dessa concluso so um pouco separa o sangue rico em oxignio do rico em gs
desconcertantes. Nosso corao praticamente carbnico. Para Xavier, o mais importante, a des-
o mesmo, em termos evolutivos, que o da lam- peito da forma, que o trajeto do fluxo do san-
preia, assegura Xavier. Em vista da importncia gue no corao j forma uma espcie de S, mais
e dos significados do corao humano, no mui- pronunciado nos peixes e mais sutil nas pessoas.
to confortvel pensar nessa semelhana, j que a Por meio de experimentos em zebrafish, tambm
lampreia um peixe alongado e primitivo, facil- chamados de paulistinhas e bem mais simpticos
mente considerado muito feio, sem nadadeiras que a lampreia, em camundongos, codornas e ga-
nem maxilar, e cuja boca uma ventosa circular linhas, a equipe de Campinas tem examinado a

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veis por sua contrao, as miosinas, so lentas. O
ventrculo, de superfcie rugosa e paredes mais
grossas, maior que o trio, com miosinas de ao
rpida, pode contrair com fora para fazer o san-
gue chegar a todas as clulas do corpo. O corao
humano um rgo do tamanho aproximado de
um punho fechado, com 250 gramas (g) nas mu-
lheres adultas e 300 g nos homens adultos, que
bate 100 mil vezes por dia, bombeando cerca de
cinco litros de sangue tem dois trios acima
dos dois ventrculos.

O
s estudos da equipe de Campinas e outros
nessa linha esto ajudando a entender a
origem de problemas cardacos associa-
dos ao cido retinoico, um derivado da vitamina
A bastante usado em cosmticos. Se uma mu-
lher usa no comeo da gestao, a m-formao
quase certa. Por isso os mdicos pedem um teste
1 de gravidez antes de receitarem cido retinoico
para tratamento de pele, diz Xavier, carioca for-
mado em medicina pela Universidade Federal do
Cear. O ser humano extremamente sensvel
ao cido retinoico, mas sem ele no estaramos
aqui. Tudo depende da dose e do lugar onde vai
atuar. A possibilidade de preveno e a correo
de problemas cardacos por enquanto so remo-
tas, porque o cido retinoico atua nas primeiras
semanas de gestao, quando a mulher em geral
ainda no sabe que est grvida.
Com os experimentos mais
recentes, assim que forem pu-
Se uma blicados, Xavier pretende re-
forar sua hiptese e contestar
mulher usar as vises antagnicas de outras
equipes interessadas em eluci-
cido retinoico dar os mecanismos que definem
As cores do no incio o tamanho, a forma e o modo de
corao: de peixe formao das cmaras internas funcionamento de cada cmara
e de camundongo
(ao lado)
do corao trios ou ventr- da gestao, cardaca. Em 2008, um artigo da
culos, essenciais para o arma- equipe de Deborah Yelon, atual-
zenamento ou distribuio do a m-formao mente na Universidade da Ca-
sangue que circula pelo orga- lifrnia em San Diego, Estados
nismo. Quase duas dcadas de
fetal Unidos, amenizou o papel do
trabalho fizeram concluir que quase certa cido retinoico, que estaria as-
os tipos de cmara do corao sociado apenas ao tamanho do
devem resultar da ao do cido corao, e valorizou a prote-
retinoico. uma ao em ondas, na produzida a partir do gene
ora mais intensa, ora menos, em momentos espe- Hox-B5, que tambm atua na formao do intes-
cficos do desenvolvimento embrionrio. Segundo tino e dos pulmes, com base em experimentos
ele, quando entram em contato com o cido re- em zebrafish. Quando vi esse paper, lembra-se
tinoico, clulas ainda pouco especializadas rece- Xavier, quase chorei. Por causa da situao de
bem instrues para se organizar na forma de um meu trabalho em 2008, diz Xavier, eu sabia que
reservatrio de sangue, ou seja, um trio. Quando iria demorar para contestar.
no detectam nada, formam uma forte bomba Em 2005, como pesquisador do Instituto do
propulsora de sangue um ventrculo. Corao (InCor) da Universidade de So Paulo
So estruturas bem diferentes: o trio, de su- (USP), Xavier, com sua equipe, tinha apresentado
perfcie lisa, funciona como um reservatrio que sua hiptese sobre a formao e a evoluo dos
infla ao receber sangue. As protenas respons- compartimentos de sangue no corao de ani-

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mais vertebrados. Com base em experimentos Mesmo agora, com mais argumentos, Xavier
com uma variedade impressionante de organis- sabe que ter de batalhar muito para fazer sua
mos, a exemplo da Ciona intestinalis, um inver- viso prevalecer; se no conseguir, poder ser
tebrado marinho cilndrico que representa os desconsiderada ou mesmo esquecida. Hipteses
parentes vivos mais prximos dos vertebrados sobre evoluo dificilmente podem ser testadas,
(a formao do corao desse grupo, os tunica- observa. Alm disso, o corao facilmente enga-
dos, similar aos estgios iniciais da formao na quem procura entend-lo. O mdico romano
do corao dos vertebrados), a equipe argumen- Claudio Galeno, um dos fundadores da medicina
tava que o corao de cmaras de vertebrados ocidental, afirmou que o corao era feito de um
poderia ter surgido a partir de modificaes de tecido especial. Quase 1.500 anos depois, Leo-
nardo da Vinci, depois de
dissecar cadveres, como
Galeno, e fazer vrios de-
Depois de dissecar cadveres, senhos da anatomia do co-
rao, sentenciou: O cora-
Da Vinci corrigiu Galeno ao ver que o o o principal mscu-
lo em relao fora. J
corao era um poderoso msculo era um avano, mas outros
equvocos persistiram. Du-
rante sculos se pensava
que as veias transportavam
um tubo cardaco equivalente ao da Ciona, que ar, j que estavam vazias em animais e pessoas
capaz de fazer movimentos semelhantes ao do mortas. Um sculo depois de Da Vinci, o mdi-
intestino quando impulsiona a massa alimentar co ingls Willian Harvey descreveu a circulao
durante o processo de digesto. Animais como do sangue em detalhes, mostrando que as veias,
a lagosta e outros crustceos representam outro como as artrias, transportavam sangue e no ar.
modelo para a formao das cmaras cardacas,

X
pois tm apenas uma cmara e so muito mais avier, como outros cientistas contempo-
rpidos, por exemplo, que os onicforos, vermes rneos, tambm tomou caminhos equivo-
dotados apenas de um tubo peristltico simples, cados. Logo depois de chegar Universi-
afirma. As cmaras cardacas so um atributo de dade Harvard para o ps-doutorado, em 1997, ele
vertebrados, apresentam contrao simultnea e se viu atrado, quase inevitavelmente, pela ideia
so separadas por vlvulas, tudo dentro de uma ento em moda de que um nico gene poderia
membrana, o pericrdio. Uma argumentao ser capaz de definir a formao do corao. Ha-
coerente, porm, no era o bastante. Eu sabia via um gene candidato, mas os experimentos os
que ainda teria de provar minhas hipteses, diz. camundongos, mesmo sem esse gene, nasciam
Tive de esperar seis anos at refazer os expe- com corao, embora morressem logo depois
rimentos e mostrar o papel do cido retinoico. indicaram que o corao dependia de muitos

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As quatro cmaras
do corao, vistas
por Da Vinci: o
artista desfez
o equvoco de
Galeno, que
imaginava apenas
duas cmaras

genes para se formar. E ele se rendeu: muito ficavam verdes, indicando que o cido retinoico
mais complicado do que pensvamos. estava atuando naquela rea, como ativador ou
Depois disso, Xavier conseguiu reunir animais represssor de vrios genes.
transgnicos e reagentes apropriados que aos Ele observou que at o stimo dia da gestao,
poucos caam nas mos da coordenadora do la- que demora 21 dias, o corao ainda no havia
boratrio, Nadia Rosenthal para planejar os se formado, nem havia nenhum sinal da ao do
experimentos que poderiam indicar coisas novas cido retinoico em tecidos cardacos. Dois dias
sobre a formao do corao. Mesmo se fracas- depois o corao j havia se delineado como um
sar, pensei, j sou grato por observar o desenvol- tubo, ocorria uma descarga de cido retinoico e
vimento do embrio, ele recorda. E, como eu es- o trio se formava. Logo depois, o cido retinoi-
tava comeando na biologia do desenvolvimento, co desaparecia e se formava o ventrculo. Ou- reproduo de desenho Leonardo da VinciSCIENCE PHOTO LIBRARY

podia ver com meus prprios olhos os processos tros experimentos, em codorna, indicaram que,
de formao dos rgaos, sem estar contaminado sem cido retinoico, o trio no se formava e, de
pelo excesso de leitura de artigos cientficos. modo complementar, o excesso dessa substn-
cia impedia a formao do ventrculo. O cido

X
avier comeou ento a examinar como a retinoico um ator que entra e sai do palco, na
expresso da enzima betagalactosidade mesma pea, em papis diferentes, diz Xavier.
poderia indicar a ao do cido retinoico O cido retinoico de fato um ator-chave
em diferentes regies do corao de embries na formao das cmaras cardacas, observa
de camundongos de nove dias. Quase descolei Didier Stainier, coordenador de uma equipe da
a retina tentando ver o que no existia nos em- Universidade da Califrnia em So Francisco
bries de camundongos, diz ele. Aos poucos ele (UCSF), que estuda a formao do corao em
viu claramente o padro de colorao definido zebrafish. Em 2002, Stainier e Deborah Yelon,
pela ativao do cido retinoico: Dependendo que trabalhou em seu laboratrio, viram o papel
da expresso da enzima, as regies do corao do cido retinoico em um estgio anterior do de-

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Embrio de senvolvimento: com outras molculas, poderia que era professor de bioqumica na universidade,
galinha: sob a induzir a formao de um tecido embrionrio aos laboratrios e estufas de plantas. Lembra do
ao do cido
primordial chamado endoderme (o corao vai kit Os cientistas, da dcada de 1970? Eu tinha to-
retinoico
se formar a partir de outro tecido, a mesoderme). dos. Vivo nesse mundo desde cedo.
Segundo ele, Xavier tem estado na vanguarda Xavier demorou cinco anos at montar sua pr-
dessas investigaes que, sem dvida, levaro a pria equipe e o laboratrio de que precisava para
insights adicionais sobre o processo de desen- retomar o ritmo de trabalho que desejava. Se fi-
volvimento do corao. car sozinho, est perdido, ele conclui. Network
tudo. Por meio de testes em galinhas e em co-

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esmo depois do corao formado, o ator dornas, ele verificou que a ao do cido retinoico,
verstil continua em cena. Em 2011, pes- por sua vez, era regulada pela enzima RALDH2.
quisadores da Universidade Duke, Es- Detalhei o que e quando acontecia, diz. Ele no
tados Unidos, mostraram que o cido retinoico, parou mais de aproveitar os estudos sobre outros
por causa de sua capacidade de induzir a mul- animais vermes marinhos, escargots, lagostas e
tiplicao celular, facilitava a regenerao do outros para examinar os processos evolutivos de
endocrdio, a camada interna do corao. Outra formao do corao e, a partir de 2010, quando
vez, o modelo experimental era o zebrafish; essa se mudou para o LNBio, continuou a produzir
espcie usada h dcadas porque as fmeas pro- linhagens de animais transgnicos, a maioria sob
duzem muitos ovos, coletados com facilidade, e encomenda, para experimentos de outros pes-
o embrio se forma a partir de uma nica clula, quisadores e de seu prprio grupo. Incapaz de
em apenas um dia aps a fertilizao. se aquietar, em agosto ele percorreu outra vez a
Depois de dois anos em Harvard, Xavier voltou chapada do Araripe, no Cear, em busca de fs-
feliz para o InCor disposto a montar um grupo de seis de peixes com idade mdia de 120 milhes de
pesquisa em gentica do desenvolvimento embrio- anos que, examinados por tomografia, poderiam
nrio e continuar trabalhando como nos dois anos revelar um pouco mais da evoluo do corao. n
em que passou em Harvard. Sua primeira dificulda-
de foi conseguir camundongos, que no chegavam
na quantidade e no prazo esperados. Ele no se aco- Projeto
modou e saiu perguntando onde poderia comprar Evoluo e desenvolvimento das cmaras cardacas (n 06/50843-0);
ovo de galinha fertilizado e estufa, de modo a no Modalidade Auxlio Pesquisa Regular; Pesquisador responsvel
Jos Xavier Neto (LNBio); Investimento R$ 311.558,83 (FAPESP).
deixar o trabalho parar. Muitos anos antes, com a
mesma avidez por fazer cincia, ele tinha caado Artigos cientficos
sapos para fazer os experimentos previstos em seu SIMES-COSTA M. S. et al. The evolutionary origin of cardiac cham-
estgio j no primeiro ano do curso de medicina bers. Developmental Biology. v. 277, n. 1, p. 1-15. 2005.
em Fortaleza. Desde a graduao eu j queria ser MOSS, J. B. et al. Dynamic patterns of retinoic acid synthesis and res-
ponse in the developing mammalian heart. Developmental Biology.
pesquisador, diz ele, ao comentar, em seguida, v. 199, p. 55-71. 1998.
que gostava muito das disciplinas bsicas como WAXMAN, J. S. et al. Hoxb5b acts downstream of retinoic acid signa-
bioqumica, para as quais os aspirantes a mdicos ling in the forelimb field to restrict heart field potential in zebrafish.
Developmental Biology. v. 15, n. 6, p. 923-34.
normalmente torcem o nariz. Desde antes ele j YELON D. e STAINIER, D.Y. Pattern formation: swimming in retinoic
gostava do mundo da cincia, acompanhando o pai, acid. Current Biology. v. 12, n. 20, p. 707-9.

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