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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

EN PROCARIONTES

Francois Jacob Elementos Opern Lactosa Jacques Monod Regulacin fago SP01

Introduccin
Regulacin de la expresin gnica en bacterias: el opern
Sistemas constitutivos y sistemas adaptativos
Sistemas inducibles y sistemas represibles
Control positivo y control negativo
Elementos del opern
El opern lactosa: control negativo
El opern lactosa: control positivo
Represin por catabolitos
El opern triptfano
El opern triptfano: regulacin por el atenuador.
Interaccin entre operones
Regulacin de la expresin gnica en fagos
Regulacin del fago T7
Regulacin del Fago SP01
Regulacin del Fago l
Morfognesis en virus
Fago T4
Fago 29
Virus del mosaico del tabaco TMV

INTRODUCCIN

En nuestro recorrido por la Gentica hemos averiguado que son los genes, cmo se replican y
cmo se transmiten. Tambin hemos visto que la informacin contenida en los genes se
transcribe a ARN y que el ARN mensajero se traduce a protenas. De manera que la
informacin contenida en los genes se convierte en protenas. Sin embargo, an no hemos
visto de qu manera la clula regula su funcionamiento, es decir, Cmo decide la clula que
protenas necesita producir en cada momento y qu cantidad de protena es necesario
sintetizar?.

En los organismos pluricelulares con diferentes rganos y tejidos est claro que existe un
reparto de las funciones, de manera que las clulas de diferentes tejidos llevan a cabo distintas
misiones y para ello necesitan sintetizar diferentes tipos de protenas. De forma que un
hepatocito (clula del hgado) produce una coleccin de protenas diferentes a las de un
reticulocito. Por consiguiente, en los diferentes tejidos de un individuo pluricelular adulto, se
estn expresando distintas bateras de genes.
REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN BACTERIAS

En las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, tambin es necesario regular la


expresin de los genes adaptndola a las necesidades ambientales. Es un principio de
economa celular el que la expresin de los genes este regulada segn las circunstancias
celulares. Un buen ejemplo de esta situacin en bacterias es la regulacin de las enzimas
implicadas en el metabolismo de los azcares. Las bacterias pueden emplear para obtener
energa distintas fuentes de carbono, como la glucosa, lactosa, galactosa, maltosa, ramnosa y
xilosa. Existen enzimas capaces de introducir cada uno de estos azcares en la bacteria y
enzimas capaces de romperlos para obtener energa. Lgicamente, sera un despilfarro
energtico producir simultneamente todos los enzimas necesarios para metabolizar los
diferentes azcares mencionados. Por consiguiente, sera mucho ms econmico para la clula
producir solamente las enzimas necesarias en cada momento, es decir, si en el medio en el que
vive la bacteria la principal fuente de carbono es la lactosa, solamente se expresaran los genes
necesarios para metabolizar la lactosa, mientras que los otros genes no se expresaran. Por
tanto, es esencial que exista un mecanismo de regulacin de la expresin gnica, de manera
que los genes se expresen cuando sea necesario.

La regulacin de la produccin de protenas (sntesis de protenas) considerando el proceso en


su conjunto, puede llevarse a cabo en tres niveles:

Replicacin

Transcripcin

Traduccin.

De los tres niveles de regulacin, uno de los mejor conocidos actualmente es la regulacin
durante la transcripcin. Aunque la regulacin de la transcripcin en eucariontes es ms
compleja que en bacterias, muchos de sus aspectos son similares. Por tanto, comenzaremos
por el estudio de la regulacin de la transcripcin en bacterias.

SISTEMAS CONSTITUTIVOS Y SISTEMAS ADAPTATIVOS

Es evidente que existen algunos procesos metablicos que son necesarios para el
funcionamiento normal de casi todas las clulas, de manera que existen una serie de
necesidades bsicas para el mantenimiento normal de una clula. Por consiguiente, los genes
que codifican para las enzimas necesarias para el metabolismo bsico celular se estn
expresando continuamente, es decir, se expresan de forma constitutiva o continua. Por tal
motivo, a este tipo de genes se les denomina, "genes que guardan la casa" o genes
constitutivos. Estos genes que se estn expresando continuamente no significa que su
actividad no est regulada, simplemente estn sometidos a un tipo de regulacin diferente que
hace que se estn expresando siempre. Los genes constitutivos codifican para sistemas
enzimticos constitutivos, que se necesitan siempre para la actividad normal de la clula.

Frente a los genes constitutivos, nos encontramos con los genes que se expresan solamente
en determinadas situaciones y que, por consiguiente, codifican para enzimas que solamente se
necesitan en momentos concretos. A este tipo de genes se les llama genes adaptativos y a las
enzimas codificadas por ellos, sistemas enzimticos adaptativos. Se denominan as
pensando en que se expresan cuando la clula se adapta a una determinada situacin
ambiental. En algunos libros de texto se denomina a este tipo de genes, genes regulados, sin
embargo, esta nomenclatura no es demasiado buena, ya que parece que los nicos genes cuya
expresin est regulada seran estos.

SISTEMAS INDUCIBLES Y SISTEMAS REPRESIBLES

Sistemas inducibles: cuando el sustrato sobre el que va actuar la enzima provoca la sntesis
del enzima. Al efecto del sustrato se le denomina induccin positiva. Por ejemplo, en E. coli
en ausencia de galactsido (sustrato) hay de una diez unidades de galactosidasa (enzima) por
miligramo de materia seca, mientras que en presencia de galactsido se detectan hasta 10.000
unidades de galactosidasa por miligramo de materia seca. Al compuesto que desencadena la
sntesis del enzima se le denomina Inductor.

Sistemas represibles: cuando el producto final de la reaccin que cataliza el enzima impide la
sntesis de la misma. Este fenmeno recibe el nombre de induccin negativa. Al compuesto
que impide la sntesis del enzima se le denomina correpresor.

Los sistemas inducibles se corresponden a procesos catablicos de degradacin, por ejemplo,


el opern lactosa, el opern arabinosa, el opern maltosa. Se trata de sistemas enzimticos
encargados de degradar la lactosa, arabinosa, maltosa, etc.

Los sistemas represibles se corresponden con procesos sntesis o Anabolismo, por ejemplo el
opern triptfano y el opern histina. Se trata de las rutas metablicas que conducen a la
sntesis de triptfano y sntesis de histidina.

CONTROL POSITIVO Y CONTROL NEGATIVO

Control positivo: Se dice que un sistema est bajo control positivo cuando el producto del gen
regulador activa la expresin de los genes, acta como un activador.

Control negativo: se dice que un sistema est bajo control negativo cuando el producto del
gen regulador reprime o impide la expresin de los genes, acta como un represor.

ELEMENTOS DEL OPERN

Jacob, Monod y colaboradores analizaron el sistema de la lactosa en E. coli, de manera que los
resultados de sus estudios permitieron establecer el modelo gentico del Opern que permite
comprender como tiene lugar la regulacin de la expresin gnica en bacterias. Jacob y Monod
recibieron en 1965 el Premio Nobel pos estas investigaciones.
Francois Jacob Jacques Monod

Un Opern es grupo de genes estructurales cuya expresin est regulada por los mismos
elementos de control (promotor y operador) y genes reguladores.

Los principales elementos que constituyen un opern son los siguientes:

Los genes estructurales: llevan informacin para polipptidos. Se trata de los genes
cuya expresin est regulada. Los operones bacterianos suelen contener varios genes
estructurales, son polignicos o policistrnicos. Hay algunos operones bacterianos que
tienen un solo gene estructural. Los operones eucariticos suelen contener un slo gen
estructural siendo monocistrnicos.

El promotor (P): se trata de un elemento de control que es una regin del ADN con una
secuencia que es reconocida por la ARN polimerasa para comenzar la transcripcin. Se
encuentra inmediatamente antes de los genes estructurales. Abreviadamente se le
designa por la letra P.

El operador (O): se trata de otro elemento de control que es una regin del ADN con una
secuencia que es reconocida por la protena reguladora. El operador se sita entre la
regin promotora y los genes estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra O.

El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la protena reguladora que
reconoce la secuencia de la regin del operador. El gen regulador est cerca de los genes
estructurales del opern pero no est inmediatamente al lado. Abreviadamente se le
denomina gen i.

Protena reguladora: protena codificada por el gen regulador. Est protena se une a la
regin del operador.

Inductor: sustrato o compuesto cuya presencia induce la expresin de los genes.


Elementos del opern lactosa

Promotor
Elementos de control
Operador
Elementos que intervienen
en la regulacin de la Protenas reguladoras
expresin gnica en Molculas difusibles Efectores
bacterias. Elementos del Inductores
Opern.
Genes Estructurales Codifican para polipptidos
Gen regulador Codifica para protena reguladora

EL OPERN LACTOSA: CONTROL NEGATIVO

El Opern lactosa, que abreviadamente se denomina Opern lac, es un sistema inducible que
est bajo control negativo, de manera que la protena reguladora, producto del gen regulador i,
es un represor que impide la expresin de los genes estructurales en ausencia del inductor. El
inductor del sistema es la lactosa. Como veremos ms adelante, el opern lac tambin est
bajo control positivo, ya que existe otra protena que estimula la transcripcin de los genes
estructurales.

Los genes estructurales del opern lactosa son los siguientes:

El gen z+: codifica para la b-galactosidasa que cataliza la hidrolisis de la lactosa en


glucosa ms galactosa.

El gen y+: codifica para la galactsido permeasa que transporta b-galactsidos al


interior de la clula bacteriana.

El gen a+: codifica para la tiogalactsido transacetilasa que cataliza la transferencia del
grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalatsido. Este gen no est
relacionado con el metabolismo de la lactosa.
El verdadero inductor del sistema es la Alolactosa y no la lactosa de manera que la -
galactosidasa transforma la lactosa en Alolactosa. En los estudios del opern lactosa se
utiliza como inductor un anlogo sinttico de la lactosa que es el Isopropil tiogalactsido
(IPTG). El IPTG no necesita ser transportado por la galactsido permeasa para entrar en la
bacteria.

Las cepas normales de E. coli son inducibles, de manera que en ausencia del inductor (la
lactosa), la protena represora producto del gen i se encuentra unida a la regin operadora e
impide la unin de la ARN-polimerasa a la regin promotora y, como consecuencia, no se
transcriben los genes estructurales.

Opern lactosa en ausencia de lactosa

Sin embargo, en presencia del inductor (la lactosa), este se une a la protena reguladora que
cambia su conformacin y se suelta de la regin operadora dejando acceso libre a la ARN-
polimerasa para que se una a la regin promotora y se transcriban los genes estructurales. Por
consiguiente, la presencia del inductor hace que se expresen los genes estructurales del
opern, necesarios para metabolizar la lactosa.
Opern lactosa en presencia de lactosa

Tambin es conveniente recordar que los tres genes estructurales del opern lactosa se
transcriben juntos en un mismo ARNm, es decir que los ARN mensajeros de bacterias suelen
ser policistrnicos, polignicos o multignicos. Sin embargo, en eucariontes los mensajreos
suelen sen monocistrnicos o monognicos, es decir, corresponden a la transcripcin de un
solo gen estructural.

Opern lactosa: ARNm multignico o policistrnico

En la siguiente tabla se muestra la expresin de los genes del opern lactosa en ausencia y en
presencia del inductor (lactosa) en una bacteria normal i+ p o z+y+a+. SI = significa que se
expresan, NO = significa que no se expresan.

Bacteria Expresin de los genes estructurales del Opern lactosa


normal Ausencia de inductor (Sin lactosa) Presencia de inductor (Con lactosa)
Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+
i+ p o z+y+a+ NO NO NO SI SI SI

El conocimiento profundo del funcionamiento del opern lactosa se obtuvo gracias a la


obtencin de mutantes que afectaban a los genes estructurales, a los elementos de control
(promotor y operador) y al gen regulador. Adems, tambin fue muy importante el estudio del
opern lactosa en bacterias diploides parciales o merocigotos.

Bacteria diploide parcial o merocigoto: bacteria que tiene parte de sus genes en dos dosis.
Lo habitual en las bacterias es que los genes estn en una sola dosis, ya que se trata de
individuos haploides. Sin embargo, a veces es posible mediante conjugacin entre una bacteria
donadora F+ y una receptora F-, obtener bacterias descendientes diploides parciales o
merocigotos. Sin embargo, estos diploides parciales son inestables. Por tal motivo, fue muy
importante el descubrimiento de bacterias F' que tienen en el factor sexual (plasmidio) parte del
cromosoma principal bacteriano. En el caso del estudio del opern lactosa, se consiguieron
factores F' que tenan incorporado exclusivamente los genes del opern lactosa. De esta forma,
una bactera con un factor F' de estas caractersticas tiene dos veces los genes del opern
lactosa, una en el cromosoma principal y otra en el factor F'.

Los primeros mutantes fueron aislados por Lederberg y colaboradores y afectaban a los genes
estructurales (z, y, a). Se dedujo que los estos genes estaban juntos y en el orden z-y-a. Los
mutantes en estos genes se denominan z-, y- e a- y ,dan lugar a alteraciones en la estructura de
las enzimas codificadas por estos genes.

Jacob y Monod aislaron bacterias mutantes i- y OC que afectan al gen regulador (i) que lleva
informacin para la protena reguladora y a la regin operadora (O), respectivamente. Ambos
son mutantes de tipo constitutivo.

Mutantes constitutivos: son aquellos en los que siempre se expresan o transcriben los genes
del opern lactosa, independientemente de si est o no est presente el inductor.

La mutacin constitutiva i- altera la estructura de la protena reguladora o protena


represora de manera que ya no es capaz de unirse a la regin operadora. Por tanto, esta
alteracin afecta a la regin de la protena represora encargada de unirse al operador. Al
no poder unirse la protena represora al operador, la regin promotora queda asequible
para la ARN polimerasa y se produce la transcripcin de los genes estructurales en
ausencia de inductor (lactosa). La protena represora es un tetrmero (cuatro cadenas
polipeptdicas idnticas).

La mutacin constitutiva en el operador (OC), consiste en una alteracin en la


secuencia de bases nitrogenadas de la regin del Operador que tienen como
consecuencia que la protena reguladora producto del gen i ya no sea capaz de unirse al
operador. Al no poder unirse la protena represora al operador, la regin promotora queda
asequible para la ARN polimerasa y se produce la transcripcin de los genes estructurales
en ausencia de inductor (lactosa). El estudio de diferentes mutantes del operador ha
permitido determinar que el operador es una regin de 17 a 25 nucletidos situada justo
antes del gen z y despus del promotor. Esta regin muestra una enorme especificidad
por la protena represora.

Es importante destacar que tanto la mutacin i- como la OC actan simultneamente sobre los
tres genes estructurales del opern lactosa. En la siguiente tabla se indica la expresin de los
genes del opern lactosa en los dos mutantes constitutivos estudiados, en el regulador
constitutivo (i- ) y en el operador constitutivo (OC).

Expresin de los genes estructurales del Opern lactosa


Mutantes
constitutivos Presencia de inductor (Con
Ausencia de inductor (Sin lactosa)
lactosa)
Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+
i- P OC z+y+a+ SI SI SI SI SI SI
i+P O z+y+a+ SI SI SI SI SI SI

Tambin es importante conocer lo que sucede en los diploides parciales o merocigotos que
contienen una regin operadora normal y una regin operadora mutante constitutiva, es decir,
bacterias diploides parciales O/OC.

Diploide parcial: opern lactosa

En estos diploides parciales, se ha comprobado que el operador constitutivo es dominante en


posicin CIS, es decir, ejerce su efecto solamente sobre los genes estructurales que estn en
su misma molcula de ADN que la mutacin del operador, pero no acta sobre los genes
estructurales de otra molcula de ADN. Esto significa que el operador es una secuencia de
bases en el ADN que no codifica para ninguna molcula difusible. En el siguiente diploide
parcial i+ P O z+y+a+/ i+ P OC z+y+a+ tanto en ausencia como en presencia de lactosa se
produce la expresin de los tres genes estructurales del opern. Esto se debe a que los genes
estructurales que estn en la misma molcula de ADN que la mutacin constitutiva OC se van a
expresar siempre. En el siguiente esquema se indica lo que sucede en un diploide parcial O/OC
en ausencia de inductor.
Diploide parcial O/OC: Sin Inductor (lactosa)

En el siguiente esquema se indica lo que sucede en un diploide parcial O/OC en presencia de


inductor.

Sin embargo, en los diploides parciales con un gen regulador normal y un gen regulador
mutante constitutivo, es decir, en baterias diploides parciales i+/i-, el gen regulador normal i+ es
dominante en posicin TRANS, es decir, ejerce su efecto sobre los genes estructurales de la
misma molcula de ADN en que est la mutacin del gen regulador y tambin sobre los genes
estructurales de otra molcula de ADN diferente. Por tanto, el gen regulador codifica para una
protena o producto difusible que puede ejercer su efecto en diferentes molculas de ADN. En
el siguiente diploide parcial i+P O z+y+a+/ i- P O z+y+a+ en ausencia de lactosa no hay
expresin de los genes estructurales mientras que en presencia de lactosa si se expresan. Esto
se debe a que la protena represora normal producida por el gen i+ al ser difusible se puede
unir a ambas regiones operadoras. En el siguiente esquema se indica lo que sucede en un
diploide parcial i+/i- en ausencia de inductor de inductor.
Diploide parcial i+/i-: Sin Inductor (lactosa)

En la siguiente tabla se indica la expresin de los genes del opern lactosa en los dos diplides
parciales, uno con en el regulador constitutivo (i- ) y el otro con en el operador constitutivo (OC).

Expresin de los genes estructurales del Opern


lactosa
Diploides parciales
Ausencia de inductor (Sin Presencia de inductor
lactosa) (Con lactosa)
Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+
i+ P O z+y+a+/ i+ P OC z+y+a+ SI SI SI SI SI SI
i+P O z+y+a+/ i- P O z+y+a+ NO NO NO SI SI SI

Mutantes del Promotor (OO): estos mutantes presetan una alteracin en la secuencia de
bases nitrogenadas de la regin promotora, como consecuencia la ARN-polimerasa no
reconoce la secuencia promotora y, por consiguiente, no se produce la transcripcin de los
genes estructurales. A estos mutantes se les ha denominado "Operador cero" (OO), pero es
necesario recordar que afectan a la regin promotora.

Adems de los mutantes anteriormente indicados tambin se han obtenido otros tipos de
mutantes que afectan al gen regulador. Entre estos mutantes se encuentran los siguientes:

Mutante i-: la primera mutacin que hemos visto es el mutante i- que ya hemos dicho que
es recesivo con respecto al i+ en los diploides parciales(i+/i-). Da lugar a un represor que
es inactivo.

Mutante iQ: mutacin en el promotor del gen regulador que codifica para la protena
reresora (iQ): la consecuencia es que no aparece protena represora y, por tanto, siempre
se estn expresando los genes del opern lactosa tanto en ausencia como en presencia
del inductor. Se trata, por consiguiente, de un mutante de tipo constitutivo.

Mutante i-d: afecta al gen estructural de la protena represora en la regin que codifica
para el extremo amino terminal (NH2). Esta regin es la encargada de reconocer la regin
operadora. La protena represora mutante se une al inductor (al IPTG) pero no es capaz
de unirse al operador. Esta mutacin es dominante sobre la i+ en los diploides parciales
(i+/i-d). En los diploides parciales la protena represora mutante no se une a las regiones
operadoras y se produce siempre la trasncripcin de los genes estructurales.

Mutante iS: afecta al gen estructural de la protena represora modificando la parte central
de la protena encargada de unirse al inductor (al IPTG). La protena represora mutante se
une al operador pero no es capaz de reconocer al inductor (IPTG). Se trata de un mutante
que est siempre reprimido en el que no se expresan los genes del opern lactosa ya que
la protena represora est permanentemente unida a la regin operadora y no se suelta a
pesar de aadir el inductor. Este mutante es dominante sobre i+ en los diploides parciales
(i+/iS). En los diploides parciales el represor mutante se une a ambas regiones operadoras
bloqueando la transcripcin de los genes estructurales.

El comportamiento de las mutaciones i-d e iS en los diploides parciales se explica mejor


sabiendo que la protena represora del opern lactosa es un tetrmero (protena constituida por
cuatro cadenas polipptdicas idnticas con un peso molecular cada una de 38.000). En el
diploide parcial (i+/iS) ,los tetrmeros con polipptidos mutantes estaran unidos a las regiones
operadora acaparndolas de forma permanente e impidiendo la transcripcin. En el diploide
parcial (i+/i-d) los polipptidos normal y mutante se unen al azar para formar tetrmeros, de
manera que la mayora de los tetrmeros tienen al menos un polipptido mutante (15/16) y
solamente una pequea fraccin de los tetrmeros tiene todos los polipptidos normales (1/16),
por tanto, la inmensa mayora de los tetrmeros no son capaces de unirse a las regiones
operadoras y se transcribiran los genes estructurales.

OPERN LACTOSA: CONTROL POSITIVO

Como ya he mencionado anteriormente, el opern lactosa tambin est sujeto a un control de


tipo positivo, de manera que existe una protena que estimula la transcripcin de los genes
estructurales. En los sistemas de control negativo existe una protena que que impide la
transcripcin de los genes estructurales, en los sistemas de control positivo existe una prtena
activadora que estimula la transcripcin de los genes. En principio existen cuatro tipos de
sistemas posibles de regulacin de la expresin gnica:

Tipo 1: Inducible, control negativo (opern lactosa y opern galactosa)

Tipo 2: Inducible, control positivo (opern arabinosa y opern maltosa)

Tipo 3: Represible, control negativo (opern triptfano y opern histidina)

Tipo 4: Represible, control positivo (no se han descrito)

Por supuesto, un opern pude estar sujeto a ms de un tipo de control, como sucede en el caso
del opern lactosa que esta bajo control negativo ejercido por la protena represora y bajo
control positivo ejecutado por una protena activadora por catabolitos (CAP) tambin llamada
protena activadora del AMP cclico (CRP). El control positivo del opern lactosaa como
veremos est estrechamente relacionado con la Represin catablica.

REPRESIN POR CATABOLITOS

Cuando la bacteria E. coli crece en un medio que contiene glucosa, prefiere este azcar como
fuente de energa y como consecuencia los operones que ponen producen las enzimas
necesarias para obtener energa de otros azcares estn bloqueados. Uno de los catabolitos
del metabolismo de la glucosa acta sobre el AMP cclico (AMPc). El AMP cclico (AMPc) es
necesario para la transcripcin de todos los operones que son inhibidos por el catabolismo de la
glucosa. Es decir, para que se transcriban los genes del opern lactosa se necesitan niveles
elevados de AMPc. Esto mismo sucede con los operones de arabinosa, maltosa, galactosa,
etc.. Se trata. por tanto de un sistema general de control positivo que se denomina represin
catablica. Cuando E. coli crece en un medio con glucosa, los niveles de AMPc son muy bajos
y como consecuencia no se transcriben los operones de otros azcares. An no se conoce el
motivo por el que los niveles de AMPc son bajos cuando E. coli crece en un medio con glucosa
como fuente de energa.

Cuando E. coli crece en un medio sin glucosa pero con lactosa los niveles de AMPc son altos,
el AMPc se une a la protena receptora receptora de AMPc (CRP) activndola y la protena
activada CRP-AMPc a su vez estimula la transcripcin de los genes estructurales del opern
lactosa y de otros operones de azcares. La protena activadora por catabolitos (CAP) es un
dmero que al unirse al AMPc se activa y estimula la transcripcin de los genes del opern
lactosa, de manera que la protena activadora CAP-AMPc es necesaria para la unin de la
ARN-polimerasa al promotor de los genes del opern lactosa. La protena activadora CAP-
AMPc parece ser que se une a la regin promotora cerca del nucletido que ocupa la posicin
-60 (60 nucletidos antes del comienzo del gen z).

Los mutantes que afectan a la adenilato ciclasa, enzima que transforma el ATP en AMPc,
muestran niveles muy bajos de expresin de los genes del opern lactosa, debido a que los
niveles de AMPc son muy bajos en ausencia de glucosa.

Los mutantes que afectan a la protena CRP o CAP tambin presentan niveles muy bajos de
expresin de los genes del opern lactosa en ausencia de glucosa.

EL OPERN TRIPTFANO

El opern triptfano (opern trp) es un sistema de tipo represible, ya que el aminocido


triptfano (Correpresor) impide la expresin de los genes necesarios para su propia sntesis
cuando hay niveles elevados de triptfano. Sin embargo, en ausencia de triptfano o a niveles
muy bajos se transcriben los genes del opern trp. Los elementos del opern trp son en esencia
semejantes a los del opern lactosa:

Genes estructurales: existen cinco genes estructurales en el siguiente orden trpE-trpD-


trpC-trpB-trpA.

Elementos de control: promotor (P) y operador (O). El promotor y el operador estn al


lado de los genes estructurales y en el siguiente orden: P O trpE-trpD-trpC-trpB-trpA.
Curiosamente, las enzimas codificadas por estos cinco genes estructurales actan en la
ruta metablica de sntesis del triptfano en el mismo orden en el que se encuentran los
genes en el cromosoma.

Gen regulador (trpR): codifica para la protena reguladora. Este gen se encuentra en otra
regin del cromosoma bacteriano aunque no muy lejos del opern.

Correpresor: triptfano.

En el siguiente esquema se indican los elementos del Opern Triptfano:


Elementos del Opern Triptfano

Los genes estructurales del opern triptfano se encuentran en el mismo orden que actan las
productos codificados por ellos en la ruta biosinttica del triptfano (ver el siguiente esquema).

Orden de los genes estructurales del opern triptfano y ruta de sntesis del triptfano

En ausencia de triptfano, o cuando hay muy poco, la protena reguladora producto del gen
trpR no es capaz de unirse al operador de forma que la ARN-polimerasa puede unirse a la
regin promtora y se transcriben los genes del opern triptfano.
Opern triptfano: en ausencia de triptfano

En presencia de triptfano, el triptfano se une a la protena reguladora o represora cambiando


su conformacin, de manera que ahora si puede unirse a la regin operadora y como
consecuencia la ARN-polimerasa no puede unirse a la regin promotora y no se transcriben los
genes estructurales del opern trp.

Opern triptfano: en presencia de triptfano

Por tanto, la diferencia esencial entre el opern lac (inducible) y el opern trp (represible), es
que en este ltimo el represor del triptfano solamente es capaz de unirse al operador cuando
previamente est unido al trp.

Al estudiar ms profundamente el opern trp se encontr que adems del mecanismo de


regulacin represor-operador exista otro mecanismo de regulacin que se denomin
regulacin por atenuacin.
EL OPERN TRIPTFANO: REGULACIN POR ATENUACIN

Cuando Yanosfky analiz mutantes que afectaban al gen trpR que codifica para la protena
represora y que continuaban produciendo ARNm del opern trp an en presencia de triptfano,
observ que la eliminacin del triptfano del medio produca un aumento casi de 10 veces en la
produccin del ARNm del opern trp, incluso aunque el represor estuviera inactivo. Yanofsky
identific la regin del ADN responsable de este aumento en la produccin del ARNm del
opern trp. Demostr que estos mutantes tenan una delecin entre el operador y el primer gen
estructural, el gen E.

La secuencia atenuadora se encuentra en la regin lder

Secuencia de bases de la regin atenuadora y comienzo de la secuencia del gen trpE

Yanofsky aisl el ARN-m multignico del opern trp y secuenci la regin del extremo 5
encontrando una regin lder del 160 bases que no se traduce a aminocidos. Esta secuencia
se encuentra antes del primer triplete que se transcribe. Cuando analiz la secuencia
correspondiente en el mutante que siempre produce niveles mximos de trp, detect una
delecin de una 30 bases que se extenda desde la posicin 130 a la 160. Yanofsky llam
atenuador a la regin del ADN inactivada por la delecin, ya que su presencia conduce
aparentemente a disminuir la tasa de transcripcin.

Yanofsky comprob utilizando mutantes trpR- que incluso en presencia de altos niveles de trp,
que deberan hacer que la regin atenuadora redujera en 10 veces la tasa de transcripcin, se
seguan transcribiendo las primeras 141 bases de la regin lder del ARN-m del opern trp,
aunque el ARN-m de longitud normal solo apareca a un nivel 10 veces menor. De forma, en
presencia de altos niveles de trp las primeras 141 bases se transcriben al mximo, pero por el
mecanismo de atenuacin que tiene lugar en esa regin, solamente uno de cada 10 ARNm se
transcribe hasta el final. Por consiguiente, la regin atenuadora acta como una regin
terminadora de la transcripcin en presencia de triptfano, mientras que en ausencia de
triptfano el atenuador se desactiva y todas las molculas de ARNm se completan.

La regin lder del opern triptfano se caracteriza por tener una sede de reconocimiento para
los ribosomas y los codones de 14 aminocidos, entre ellos dos residuos de triptfano.
Adems, la siguiente regin puede formar una estructura secundaria palindrmica en forma de
lazo u horquilla. Cuando los niveles de triptfano son altos, la traduccin de la primera parte del
segmento lder del mensajero impide de alguna manera la transcripcin ms all de la
estructura secundaria. Cuando los niveles de triptfano son bajos disminuye o cesa la
traduccin del polipptido sintetizado por la secuencia lder, permitiendo que la ARN polimerasa
transcriba el opern completo. Aunque no se conoce la forma en la que tiene lugar la
terminacin anticipada, es posible que los ribosomas que traducen la regin lder produzcan la
desaparicin de la estructura secundaria de la segunda parte de la regin lder y se produzca el
reconocimiento de esta regin por el factor de terminacin.

Estructura secundaria de la regin lder


Esquema de lo que sucede con niveles altos (b) y bajos (c) de
triptfano

La regulacin por atenuacin probablemente tiene lugar en otros operones bacterianos


relacionados con la sntesis de aminocidos, ya que en todos los casos el segmento inicial del
polipptido transrcito es rico en el aminocido que controla dicho opern. Cuando hay poca
cantidad del aminocido correspondiente la traduccin del pptido lder se detiene en los
codones correspondientes al mismo el tiempo suficiente para que se formen las estructuras
secundarias que permiten que la ARN polimerasa pueda continuar con la transrcipcin.

Porcin que se traduce de la regin lider del opern triptfano

Porcines que se traducen de las regiones lder de los operones de Fenilalanina (a) e
Histidina (b)
INTERACCIN ENTRE OPERONES

Es obvio que en las clulas existen muchos genes que estn sometidos a diferentes sistemas
de regulacin. Si nos fijamos en dos sistemas enzimticos cualesquiera, puede darse los
siguientes casos:

Que ambos sean dependientes: de manera que la presencia de uno de ellos sea
necesaria para la presencia del otro.

Que sean excluyentes: la presencia de uno impide la presencia del otro.

Que sean alternativos: la presencia de uno no depende de la presencia del otro.

Esta situacin puede explicarse suponiendo que los productos finales catalizados por los
diferentes enzimas acten como inductores o correpresores del otro sistema. Por ejemplo, el
producto de un enzima induce la expresin de los genes de otro sistema enzimtico, o por el
contrario, el producto de otra enzima impide la expresin de los genes de otro sistema
enzimtico.

Por consiguiente, las interacciones entre operones son algo frecuente en los seres vivos y
hacen ms complejo el entendimiento de la regulacin de la expresin gnica.

REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN FAGOS

Los bacteriofagos son virus que infectan a bacterias que han desarrollado a lo largo de la
evolucin mecanismos cada vez ms eficientes para poner a su servicio la maquinaria de las
clulas bacterianas a las que infectan, de forman que ponen a su servicio la sntesis de ADN y
la sntesis de protenas. Por tanto, el conocimiento profundo de los sucesos que tienen lugar
durante la infeccin de una bacteria por un fago, nos indicar que genes del fago se estn
expresando para llevar a cabo su ataque y en qu momento lo hacen.

Los fagos han desarrollado diferentes sistemas para infectar a las bacterias. Los principales
mecanismos utilizados por los fagos para dirigir la sntesis del ADN y de protenas de la bacteria
a la que infectann ponindola a su servicio son los siguientes:

Sntesis de una nueva ARN polimerasa (Fago T7)

Sntesis de subunidades de nueva formacin de la ARN polimerasa (Fago SP01)

Produccin de protenas activadoras o represoras de los operones del fago (Fago l)

Seguidamente vamos a ver unos ejemplos de Regulacin temporal o Regulacin encascada


que tienen lugar durante la infeccin de los fagos T7, SP01 y fago l.

REGULACIN DEL FAGO T7

Vamos a comenzar con un ejemplo de regulacin de la expresin gnica en virus en el que el


mecanismo empleado es la sntesis de una nueva ARN polimerasa a partir del ADN del virus.

El fago T7 tiene una relacin de tipo ltico con la bacteria E. coli, su ADN doble hlice lineal de
12 micras de longitud carece de extremos redundantes. Los genes del fago T7 estn
organizados en tres tipos o grupos de genes que se denominan:

Genes de la clase I: entre otros los genes 0.3 (Metilasa, vence el sistema restriccin de la
bacteria), 0.7 (Protena quinasa), 1 (ARN polimerasa) y 1.3 (ADN ligasa).

Genes de la clase II: entre oltros los genes 2 (Sntesis de ADN), 3 (Endonucleasa), 3.5
(Lisozima, 4 (Sntesis de ADN), 5 (ADN polimerasa) y 6 (Exonucleasa).

Genes de la clase III: entre otros los genes 10 (Protina principal de la cpside), 11, 12 y
17 (Protenas de la cola), 13 (Protena interna), 14, 15 y 16 (Protenas de la cpside), 18 y
19 (Maduracin del ADN).

En el siguiente esquema se indica la disposicin d estos tres tipos de genes en el ADN lineal
del fago T7:

Esquema de los genes del Fago T7

Cuando el fago T7 inyecta su ADN en el interior de E. coli, la ARN polimerasa de la bacteria


reconoce tres promotores que se encuentran en el extremo del ADN del fago junto a los genes
de la clase I. Los genes de la clase I tambin reciben el nombre de genes tempranos por ser los
primeros en expresarse. El ARN mensajero policistrnico que se produce contiene los
siguientes cinco genes: 0.3, 0,7, 1, 1.1 y 1.3. Entre estos genes es preciso destacar al gen 1, ya
que lleva informacin para una nueva ARN polimerasa de origen viral que reconoce al resto de
los promotores de los genes de la clase II y de la clase III. La protena quinasa producto del
gen 0.7 fosforila la ARN polimerasa de la bacteria e impide su funcionamiento, de manera que
una vez trasncritos los genes de la clase I del fago T7, dejan de transcribirse los genes
bacterianos.
Posteriormente, la nueva ARN polimerasa transcribe los genes de la clase II, tambin
denominados genes medios. Dichos genes estn relacionados con la replicacin del ADN del
virus (2, 4 y 5) y con ls degradacin del ADN bacteriano (genes 3 y 6) y lisis de la bacteria (gen
3.5).

Por ltimo, la nueva ARN polimerasa transcribe los genes de la Clase III tambin llamados
genes tardos. Dichos genes codifican para protenas de la cabeza, de la cola, protenas de
maduracin del ADN y protenas necesarias para el ensamblaje final de las partculas virales.

Como se puede observar, los genes del fago T7 se encuentran situados en el cromosoma en el
mismo orden en el que se expresan, producindose una Regulacin temporal o Regulacin en
cascada que implica un orden de expresin de los genes que va de los genes de la clase I
(tempranos), pasa a los genes de la clase II (medios) y termina con los genes de la clase III
(tardos).

REGULACIN DEL FAGO SP01

El siguiente ejemplo que vamos a ver es el de un virus cuya estrategia cuando infecta a las
bacterias es producir subunidades nuevas que se unen a la ARN polimerasa del la bacteria y
modifican su capacidad para reconocer a los promotores de los genes bacterianos.

Este es el caso del fago SP01 que infecta a la bacteria Bacillus subtilis. En este virus tambin
se distinguen tres tupos de genes en cuanto al orden temporal de expresin:

Genes tempranos: los promotores de dichos genes son reconocidos por la ARN
polimerasa de la bacteria Bacillus subtilis y entre ellos se encuentra el Polipptido 28. El
polipptido 28 se une a la ARN polimerasa de la bacteria que ahora es capaz de
reconocer a los promotores de los genes medios. Dicha polimerasa al interaccionar con el
polipptido 28 deja de reconocer a los promotores de los genes bacterianos.

Genes medios: la ARN polimeras de la bacteria unida al polipptido 28 transcribe


seguidamente los genes medios entre los que se encuentran los polipptidos producto de
los genes 33 y 34. Los polipptidos producto de los genes 33 y 34 se unen a la ARN
polimerasa de la bacteria y reconocen los promotores de los genes tardos.

Genes tardos: son los ltimos en expresarse.

En el siguiente esquema se indican los sucesos fundamentales que tienen lugar durante la
regulacin de la infeccin del fago SP01:
Regulacin del Fago SP01

Como se puede observar, de nuevo se ha producido una expresin ordenada en el tiempo de


tres tipos de genes, por consiguiente se trata de una Regulacin Temporal o Regulacin en
cascada.

REGULACIN DEL FAGO l

El fago l posee ADN lineal doble hlice con extremos cohesivos. Cuando el fago l infecta a E.
coli pueden iniciarse dos respuestas diferentes:

Respuesta Ltica: el fago inyecta su ADN en el interior de la bacteria, su ADN se replica,


se sintetizan los distintos componentes de la cpside y se lisa la bacteria liberndose
nuevas partculas virales.

Repuesta Lisognica: el fago inyecta su ADN en el interior de la bacteria, El ADN se


circulariza y posteriormente se integra en el ADN principal de la bacteria en un punto
concreto. Cuando el ADN del fago est integrado se le denomina profago y se replica al
mismo tiempo que se replica el ADN bacteriano. A veces el profago se suelta del ADN
bacteriano, fenmeno denominado induccin, y despus se replica y termina lisando a la
bacteria.

Se pueden distinguir varias regiones en ADN lineal del fago l en base al tipo o funcin de los
genes que contiene cada una de ellas: regines con funciones de regulacin, funciones de
integracin (recombinacin) del ADN del fago en el ADN bacteriano, regiones que contienen
genes relacionados con la replicacin del ADN, la lisis bacteriana, regiones con genes
relacionados con la maduracin del virus (regiones con genes para las protenas de la cabeza y
de la cola). En el siguiente esquema se indican ls posiciones de las mutaciones letales y no
letales adems de los agrupamientos de genes con funciones relacionadas:
Mapa del Fago l

El mecanismo que utiliza el fago para expresar sus genes es la produccin de protenas
activadoras o represoras de los operones del fago. Para explicar la regulacin de este fago
distinguiremos los siguientes aspectos:

Regulacin durante el ciclo ltico.

Regulacin durante el ciclo lisognico

Competencia entre lisis y lisogenia.

Induccin del profago.

Regulacin durante el ciclo ltico

El ciclo ltico consta de tres fases sucesivas que se corresponden con tres rondas de
trasncripcin:

Transcripcin temprano-inmediata

Trasncripcin temprano-retrasada

Trasncripcin tarda.

En la transcripcin temprano-inmediata la ARN polimerasa de E.coli se une al promotor de la


hlice derecha (PR) para transcribir hacia la derecha el gen cro y al promotor de la hlice
izquierda (PL) para transcribir la protena N producto del gen N.
Transcripcin temprano-inmediata de los genes N y cro

El gen cro est relacionado con la decisin lisis versus lisogenia, por tanto, hablaremos ms
tarde de l.

La protena N acta como activador de la transcripcin de los genes temprano-retrasados que


son cII, O, P y Q en la hlice R que se transcribe hacia la derecha y del gen cIII en la hlice L
que se transcribe hacia la izquierda. El producto N impide que termine la transcripcin antes
del gen Q interaccionando con la ARN polimerasa antes de que se inicie la transcripcin cerca
de los promotores PR y PL.

Transcripcin temprano-retrasada

Los genes cII y cIII estn involucrados en la regulacin de la lisogenia. Sin embargo, los genes
O y P codifican para productos necesarios para la replicacin del ADN. El producto del gen Q
acta como activador de la transcripcin de los genes tardos de manera semejanbte a comonel
producto del gen N. La transcripcin de los genes tardos incluye los genes S y R que
intervienen en la lisis bacteriana, los genes A, W, B, C, nu3, D, E FI y FII involucrados en la
sntesis y el ensamblaje de las protenas de la cabeza del fago, y los genes Z, U, V, G, T, H, M,
L, H, I y J necesarios para la sntesis y ensamblaje de las protenas de la cola del virus. De esta
manera se completa el ciclo ltico del virus con la liberacin de nuevas partculas virales, ya que
se ha llevado a cabo la replicacin del ADN, sntesis y ensamblaje de todas las protenas
necesarias (cabeza y cola), la lisis y maduracin.

El producto N es muy inestable de manera que su concentracin intracelular disminuye


rpidamente, de forma que para que se establezca el ciclo ltico se necesita la expresin
continua del gen N.

Regulacin durante el ciclo lisognico

Como ya hemos visto en el apartado anterior, una vez que el fago ha inyectado su ADN en el
interior de la bacteria se produce la transcripcin temprano- inmediata de los genes N y cro.
Posteriormente el producto N estimula la transcripcin de los genes cII en la hlice derecha (R)
y del gen cIII en la hlice izquierda (L). Los productos cII y cIII estimulan la transcripcin del gen
cI y del gen rex a partir del promotor PRE (promotor para el establecimiento del represor). El gen
cI codifica para el represor I o represor del fago l. El producto cIII protege a la protena cII de
la proteolisis. La protena represora I bloquea las regiones operadoras OR y OL e impide la
transcripcin de los genes temprano-inmediatos N y cro, y por tanto, tampoco se expresan los
genes O, P y Q (temprano-retrasados) ni los genes tardos necesarios para el ciclo ltico. De
esta forma se establece la lisogenia. Por tanto, el represor I impide el ciclo ltico.

Transcripcin de los genes cI y rex a partir del promotor PRE

Ahora bien, el establecimiento de la lisogenia necesita adems que el ADN del fago se integre
en el ADN bacteriano. Se ha visto que los productos cII y cIII estimulan la expresin de los
genes necesarios para la integracin a partir del promotor PINT situado en la regin att-exo.

El anlisis de los operadores OR y OL revela que estn formados por tres regiones semejantes
(OR1, OR2, OR3, OL1, OL2 y OL3), pero no idnticas, de unas 17 pares de bases capaces de
unirse de forma independiente al represor I. Dichas regiones estn separadas entre si por
regiones ricas en pares A-T.
Detalle de las regiones operadoras OR y OL .

Competencia entre lisis y lisogenia

La produccin de la protena represora I se puede llevar a cabo a partir de dos promotores


diferentes. Como hemos visto la transcripcin del gen cI se estimula por los productos cII y cIII a
partir del promotor para el establecimiento del represor, PRE . El gen cI tambin se transcribir
estimulado por el propio represor I a partir del promotor para el mantenimiento del represor,
PRM. En este ltimo caso, se trata de un proceso de autorregulacin o regulacin autgena, en
el que una propia protena (represor I) regula su propia expresin.

Transcripcin del gen cI a partir del promotor PRM

Si recordamos, cuando la lisogenia est establecida, el represor I impide la transcripcin de los


productos cII y cIII a partir de los promotores PR y PL . Por tanto, la transcripcin del gen cI a
partir del promotor PRM mantiene la sntesis del represor I. Adems, el promotor solapa con la
regin operadora OR en la regin OR3 .
El represor del fago l (represor I) y el producto del gen cro (antirrepresor) pueden bloquear los
operadores OR y OL. El represor I es indispensable para el mantenimiento de la lisogenia y el
producto de cro es necesario para la lisis. Para mantener la lisogenia (represin) tienen que
dejar de expresarse todos los genes implicados en el desarrollo viral (ciclo ltico) y expresarse
los genes del sistema de represin. El represor I consigue realizar esta funcin mediante su
autorregulacin y mediante su actividad represora de los promotores PR y PL. Esta regulacin
incluye el uso de las tres regiones OR1, OR2 y OR3.

La respuesta ltica depende de la protena reguladora cro, cuya afinidad pos las tres regiones
operadoras es la siguiente: OR3 > OR2 = OR1. A bajas concentraciones de cro se une
preferentemente a OR3 que impide la trascripcin de cI a partir del promotor PRM y estimula la
transcripcin del promotor PR. Concentraciones altas de cro bloquean las regiones OR2 y OR1
impidiendo su propia transcripcin.

La actuacin del represor I y del producto del gen cro (antirrepresor) puede resumirse de la
siguiente forma:

Respuesta lisognica: los dmeros del represor ocupan las sedes OR1 y OR2 y dejan libre
la OR3, como consecuencia se transcribe el gen cI y no se transcribe el gen cro.

Cambio de respuesta lisognica a ltica (induccin): se inactiva el represor I debido a la


actividad protesica de la protena RecA codificada por el gen reca que se activa por dao
gentico en el ADN (respuesta SOS). Disminuye la concentracin de dmeros del
represor, quedan libres las sedes OR2 y OR1 como consecuencia deja de transcribirse el
gen cI y comienza a transcribirse el gen cro.

Induccin del profago

La integracin y la escisin del ADN del fago son tambin procesos clave de la regulacin del
ciclo del fago l. La integracin del ADN circular del fago se produce por recombinacin en la
regin att del ADN del virus y conduce a la aparicin del profago (ADN integrado del virus). La
situacin opuesta consiste en la liberacin o escisin del ADN del fago que vuelve a ser ADN
doble hlice circular libre.

Se ha propuesto que la integracin y la escisin se llevaran a cabo a travs de una regin de


15 pares de bases (regin central O) comn a las sedes att del virus y de la bacteria. La
secuencia de estos quince pares de bases de la regin O y los puntos de corte es la siguiente:
GCTTTTTTATACTAA.

La integracin requiere solamente la actuacin de la protena int, mientras que la escisin


necesita de la actuacin de las protenas int y xis. Las protenas cII y cIII son necesarias para
producir altos niveles de la protena int y para realizar una eficiente integracin.

Se ha propuesto que la protena int podra actuar como una endonucleasa de restriccin que
reconocera a la regin O y producira extremos cohesivos en el ADN el fago y de la bacteria.

MORFOGNESIS EN VIRUS

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