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VIDAS Estradiol II (E2II)

VIDAS Estradiol II es una determinacin cuantitativa automatizada en el sistema de la familia VIDAS, que permite
cuantificar el 17 -estradiol total en suero o plasma humano (heparina de litio) por tcnica ELFA (Enzyme Linked
Fluorescent Assay).El test VIDAS Estradiol II es una ayuda en el diagnstico y tratamiento de los diferentes transtornos
sexuales de naturaleza hormonal y en la evaluacin de la funcin placentaria en caso de embarazo complicado.

INTRODUCCION Y OBJETIVO DE LA PRUEBA PRINCIPIO

El estradiol es secretado principalmente por los folculos
ovricos durante el ciclo menstrual femenino, y por la
placenta durante el embarazo (1).
En un grado menor la produccin est asegurada por las
glndulas suprarrenales, los testculos, y por la
conversin perifrica de los andrgenos.
Los receptores de los estrgenos se encuentran en
numerosos tejidos (hueso, glndulas mamarias, hgado,
endometrio,etc...). La sntesis y la secrecin del estradiol
estn estrechamente controladas por el complejo
hipotlamo-hipofisario, por el intermediario de la LHRH,
de la LH y de la FSH (2, 3, 4).
En el caso de sospecha de hipofertilidad tanto en el
hombre como en la mujer, la evaluacin de la
estradiolemia, asociada con las determinaciones de LH,
de FSH, y de progesterona, permite apreciar el
funcionamiento del eje hipotlamo-hipofisogondico y
determinar su grado de integridad (5, 6).
La valoracin cuantitativa del estradiol se utiliza para la
evaluacin y tratamiento de ciertos desrdenes sexuales:
pubertad retrasada o precoz, perturbaciones del ciclo
menstrual, menopausia, induccin de ovulacin y
ginecomastia. (7, 8, 9, 5).
Durante las estimulaciones ovricas en procesos de
fecundacin asistida, la determinacin del estradiol
permite seguir y apreciar la maduracin folicular
(8, 9, 10).
La determinacin del estradiol, completada por la de LH y
FSH, permite afirmar el diagnstico de menopausia (7).
El principio de la determinacin asocia el mtodo por
competicin con una deteccin final por fluorescencia
(ELFA).
El cono (SPR ) de un solo uso sirve a la vez de fase
slida y de sistema de pipeteo. El resto de los reactivos
de la reaccin inmunolgica estn listos al empleo y
distribuidos en el cartucho. Todas las etapas de la prueba
se realizan automticamente por el sistema. Estn
constituidas por una sucesin de ciclos de
aspiracin/expulsin del medio reaccional.
La muestra es transferida al pocillo que contiene el
conjugado, el cual es un derivado de estradiol marcado
con la fosfatasa alcalina. Se efectua una competicin
entre el estradiol presente en el suero y el derivado de
estradiol del conjugado frente a los sitios de unin del
anticuerpo especfico anti-estradiol fijado sobre el cono.
Las etapas de lavado eliminan los componentes no
fijados.
Durante la etapa final de revelado, el substrato (4-Metil-
umbeliferil fosfato) es aspirado y despus expulsado del
cono; el enzima del conjugado cataliza la reaccin de
hidrlisis de este substrato en un producto (4-Metil-
umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es medida a
450 nm.
El valor de la seal de fluorescencia es inversamente
proporcional a la concentracin del antgeno presente en
la muestra.
Al finalizar la determinacin, los resultados se calculan
automticamente por el sistema respecto a una curva de
calibracin memorizada, despus se imprimen.

COMPOSICION Y RECONSTITUCION DE LOS REACTIVOS DEL EQUIPO (60 DETERMINACIONES):

60 cartuchos E2 II STR Listos al empleo.
60 conos E2 II SPR Listos al empleo.
2 x 30 Conos sensibilizados por inmunoglobulinas policlonales de conejo anti-estradiol.
Control E2 II C1 Listo al empleo.
1 x 3 ml (lquido) Suero humano* + 17 - estradiol + azida sdica 1 g/l.
El intervalo de confianza en pg/ml est indicado en la tarjeta MLE con la
indicacin: "Control C1 Dose Value Range".
Calibrador E2 II S1 Listo al empleo.
2 x 4 ml (lquido) Suero humano* + 17 - estradiol + azida sdica 1 g/l.
La concentracin en pg/ml est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin:
"Calibrator (S1) Dose Value". El intervalo de confianza en "Relative Fluorescence
Value" est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: "Calibrator (S1) RFV
Range".
1 Tarjeta MLE (Master Lot Entry) Especificaciones con los datos necesarios para calibrar el test: leer los datos
MLE, consultar el Manual de Utilizacin.
1 Ficha tcnica
* Se ha verificado la ausencia de antgeno HBs, de anticuerpos anti-VIH1, anti-VIH2, de anticuerpos anti-VHC. Sin embargo, ninguna
prueba puede aportar una garanta absoluta, este producto debe manipularse con las precauciones de uso relativas a los productos
potencialmente infecciosos.

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VIDAS Estradiol II 08098 L - es - 2010/06

El cono El cartucho
El cono est sensibilizado por inmunoglobulinas El cartucho est compuesto por 10 pocillos recubiertos de
policlonales de conejo anti-estradiol. Cada cono est una hoja de aluminio sellada y etiquetada. La impresin
identificado por el cdigo E2II. Extraer nicamente el incluye un cdigo de barras donde se indica el tipo de
nmero de conos necesarios y luego cerrar bien la prueba realizada, el nmero de lote y la fecha de
bolsa. caducidad del equipo. El primer pocillo tiene una parte
precortada para facilitar la introduccin de la muestra. El
ltimo pocillo es una cubeta que permite la lectura por
fluorimetra. Los diferentes reactivos necesarios para el
anlisis se incluyen en los pocillos intermedios.
Descripcin del cartucho E2 II
Pocillo Reactivos
1 Pocillo de muestra.
2-3-4 Pocillos vacios.
5 Conjugado: derivado del estradiol marcado con fosfatsa alcalina + azida sdica 0,9 g/l (400 l).
6 Pocillo vacio.
7-8 Tampn de lavado: Tris-NaCl (0,05 mol/l) pH 9 + azida sdica 1 g/l (600 l).
9 Tampn de lavado: dietanolamina* (DEA) (1,1 mol/l soit 11,5 %, pH 9,8) + azida sdica 1 g/l
(600 l).
10 Cubeta de lectura con substrato: 4-Metil-umbeliferil fosfato (0,6 mmol/l) + dietanolamina**
(0,62 mol/l es decir 6,6 %, pH 9,2) + azida sdica 1 g/l (300 l).
* Reactivo NOCIVO:
- R 48/22 Nocivo: riesgos de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por ingestin.
- R 41: riesgo de lesiones oculares graves.
- S 26: en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente y abundantemente con agua y consultar un especialista.
- S 46: en caso de ingestin, consultar inmediatamente un mdico y mostrarle el embalaje o la etiqueta.
**Reactivo IRRITANTE:
- R 36: irritante para los ojos.
- S 26: en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente y abundantemente con agua y consultar un especialista.
Para ms informacin, consultar la ficha de seguridad disponible bajo pedido.

MATERIALES Y DESECHABLES NECESARIOS NO No utilizar los reactivos despus de la fecha de

SUMINISTRADOS
- Pipeta de punta desechable de 200 l.
- Guantes sin talco de un solo uso.
- Para otros materiales y desechables especficos,
consultar el Manual de Utilizacin del instrumento.
- Instrumento de la familia VIDAS.
PRECAUCIONES DE EMPLEO
Para diagnstico in vitro nicamente.
Para uso profesional nicamente.
Este equipo contiene componentes de origen
humano. Ningn mtodo de anlisis actualmente
conocido puede garantizar de forma absoluta que
estos productos no contienen ningn agente
patgeno transmisible. Se recomienda
manipularles con las precauciones de uso
relativas a los productos potencialmente
infecciosos (consultar el Manual de bioseguridad
en el laboratorio - OMS - Ginebra - ltima edicin).
Este equipo contiene componentes de origen animal.
El origen y/o el estado sanitario de los animales no
pueden garantizar de forma absoluta qu estos
productos no contienen ningn agente patgeno
transmisible, se recomienda manipularles con las
precauciones de uso relativas a los productos
potencialmente infecciosos (no ingerir; no inhalar).
No utilizar los conos si la bolsa est perforada.
No utilizar cartuchos visiblemente alterados (hoja de
aluminio o plstico daados).
caducidad indicada sobre la etiqueta del estuche.
No mezclar los reactivos (o consumibles) de lotes
diferentes.
No utilizar guantes con talco, el talco puede originar
falsos resultados con ciertas determinaciones
inmunoenzimticas.
Los reactivos del equipo contienen un conservante
(azida sdica), suceptible de reaccionar con las
tuberas de plomo o cobre y formar azidas metlicas
explosivas . Se recomienda enjuagar con agua todo
resto.
El tampn de lavado (pocillo 9 del cartucho) contiene
un agente nocivo (dietanolamina 11,5 %). Tener en
cuenta las frases de riesgo "R" y los consejos de
prudencia "S" indicados anteriormente.
El substrato (pocillo 10 del cartucho) contiene un
agente irritante (dietanolamina 6,6 %). Tener en
cuenta la frase de riesgo R y los consejos de
prudencia S citados anteriormente.
Las proyecciones deben ser tratadas con un lquido
detergente o una solucin de leja con al menos
0,5 % de hipoclorito sdico. Consultar en el Manual
de Utilizacin para eliminar los derramamientos
producidos sobre o en el interior del instrumento. No
autoclavar productos con leja.
El instrumento debe limpiarse y desinfectarse con
regularidad (consultar el Manual de Utilizacin).

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VIDAS Estradiol II
CONDICIONES DE ALMACENAJE
Conservar el equipo VIDAS E2II a 2-8C.
No congelar los reactivos.
Dejar a 2-8C los reactivos no utilizados.
Cuando se abra el equipo, verificar la integridad y el
correcto cierre de (de las) bolsa(s) de los conos. En
caso contrario, no utilizar los conos.
Despus de cada utilizacin, cerrar bien la bolsa
con el deshidratante para mantener la estabilidad
de los conos y conservar todo el equipo a 2-8C.
Todos los componentes son estables hasta la fecha
de caducidad indicada sobre la etiqueta del equipo, si
se conserva en las condiciones aconsejadas.
MUESTRAS
Naturaleza y toma de muestra:
Utilizar sueros o plasmas (heparina de litio). No utilizar
tubos con EDTA.
Si es necesario, clarificar las muestras por
centrifugacin.
Se aconseja, antes de el uso definitivo de tubos nuevos
de toma de muestra, verificar la calidad de los
resultados. De hecho, se ha observado en algunos
casos, que ciertos activadores de la coagulacin
podran interferir con la determinacin.
La utilizacin de sueros inactivados por el calor no se
ha establecido para esta prueba no utilizar sueros
calentados.
No se ha observado para esta dosificacin influencia
significativa:
- de hemlisis (despus de una sobrecarga de la
muestra en hemoglobina de 0 a 322,5 mol/l
(monmero),
- de la lipemia (despus de una sobrecarga de la
muestra en lpidos de 0 a 2 g/l o 2 mmol/l de
equivalencia en triglicridos ),
- de la bilirrubinemia (despus de una sobrecarga de la
muestra en heparina de 0 a 50 UI/ml).
Se aconseja no utilizar muestras visiblemente
hemolizadas, lipmicas o ictricas y efectuar si es
posible
una nueva muestra.
Estabilidad de las muestras:
Las muestras pueden almacenarse a 2-8 C en tubos
con tapn 3 das como mximo; sino congelar el suero
o plasma a -25 6 C 4 meses como mximo. Evitar
las congelaciones y descongelaciones sucesivas.
TECNICA
Para instrucciones completas, consultar el Manual
de Utilizacin.
Introduccin de los datos MLE
Cuando se utiliza un nuevo lote de reactivos, las
especificaciones (o datos de fabricacin) deben
introducirse en el instrumento con la ayuda de los datos
MLE. Si esta operacin no se efectua antes de
comenzar las pruebas, el sistema no podra editar los
resultados. Estas especificaciones se introducen solo
una vez para cada lote.
Es posible introducir las especificaciones MLE
manualmente o de forma automtica segn el
instrumento (consultar el Manual de Utilizacin).
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Calibracin
La calibracin, con la ayuda del calibrador suministrado
en el equipo, debe efectuarse con cada nuevo lote que
se abra despus de introducir las especificaciones del
lote, y despus cada 14 das. Esta operacin permite
ajustar la calibracin a cada instrumento y a la eventual
evolucin del reactivo en el tiempo.
El calibrador, identificado por S1, ser analizado en
triple (ver Manual de Utilizacin). El valor del calibrador
debe estar comprendido en los lmites de RFV (Relative
Fluorescence Value) fijados. Si no es as, la media no
ser memorizada: repetir una calibracin.
Realizacin de la determinacin
1. Sacar nicamente los reactivos necesarios,
dejarles 30 minutos a temperatura ambiente
antes de su utilizacin.
2. Utilizar un cartucho E2II y un cono E2II para
cada muestra, control o calibrador a analizar.
Verificar que la bolsa de los conos est bien
cerrada despus de cada utilizacin.
3. El test se identifica con el cdigo "E2II" en el
instrumento. El calibrador identificado
obligatoriamente por "S1", debe analizarse en
triple. Si debe procesarse el control se identificar
por C1.
4. Homogeneizar con la ayuda de un agitador tipo
vortex el calibrador, el control y las muestras (para
suero o plasma separado del pellet) para una mejor
reproductibilidad de los resultados.
5. Para este test, la cantidad de muestra, control y
calibrador es 200 L.
6. Colocar en el sistema los conos "E2II" y los
cartuchos "E2II" en las posiciones indicadas en la
pantalla. Verificar bien la concordancia de los
cdigos (colores y letras) entre el cono y el
cartucho.
7. Iniciar el anlisis como se indica en el Manual de
Utilizacin. Todas las etapas son creadas
automticamente por el sistema.
8. Volver a cerrar los viales y tras el pipeteado
ponerlos de nuevo a 28 C.
9. La duracin de la prueba es de aproximadamente
60 minutos. Al finalizar el anlisis, retirar los conos y
los cartuchos del sistema.
10. Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un
recipiente apropiado.
RESULTADOS E INTERPRETACION
Una vez finalizada la prueba, los resultados se analizan
automticamente por el sistema informtico. El sistema
efectua dos lecturas de fluorescencia en la cubeta de
lectura para cada determinacin. La primera lectura
tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta del
substrato antes de ponerse en contacto el substrato
con el cono. La segunda lectura se efectua despus de
la incubacin del substrato con el enzima presente en
el cono. El clculo del RFV (Relative Fluorescence
Value) es el resultado de la diferencia de estas dos
lecturas. Aparece sobre la hoja de resultados.
Los resultados se calculan automticamente por el
sistema respecto a una curva de calibracin
memorizada (modelo matemtico: modelo logstico de
4 parmetros), despus se imprimen; las
concentraciones en estradiol se expresan en pg/ml.
La determinacin VIDAS Estradiol II est calibrada
respecto a la tcnica ID-GCMS (Isotope Dilution - Gas
Chromatography Mass Spectrometry).
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Las muestras con concentraciones en estradiol PRESTACIONES TECNICAS

superiores a 3000 pg/ml deben volverse a analizar Los estudios de VIDAS Estradiol II han dado los
despus de diluir de forma manual al 1/2 en un suero siguientes resultados:
de hombre.
Los valores de concentracin en estradiol obtenidos Rango de medida
deben ser utilizados como complemento junto con otras El rango de medida del reactivo VIDAS E2II se extiende
informaciones obtenidas por el mdico (cuestionario, de 9 a 3000 pg/ml.
medicamentos tomados, ecografa, observaciones
clnicas, otros exmenes, etc ... ). Lmite de deteccin
En caso de tratamientos con estrgenos y en El limite de deteccin analtico,definido como la menor
particular, durante tratamientos hormonales sustitutivos concentracin en estradiol significativamente diferente
(menopausia), los resultados pueden ser a veces de la concentracin cero con una probabilidad del
sobre-estimados. 95 % es 9 pg/ml.
El lmite de deteccin funcional, definido como la ms
La interpretacin de los resultados de la prueba debe pequea concentracin en estradiol con un coeficiente
hacerse teniendo en cuenta el contexto clnico y los igual al 20%, es 25 pg/ml.
resultados de otras pruebas.
Precision
CONTROL DE CALIDAD
Reproductibilidad intraserie
Un control se incluye en cada equipo VIDAS Estradiol
II. Este control debe ser utilizado cuando se abra un Cinco muestras se analizaron 30 veces en la misma
nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de serie.
alteracin de los reactivos. Cada calibracin debe ser Nmero Media CV
igualmente verificada con la ayuda de este control. (pg/ml) (%)
Para que el instrumento pueda verificar el valor del
30 38,1 7,5
control, es preciso identificarlo como C1.
Si el valor del control se desvia de los valores 30 174,1 3,9
esperados, los resultados no pueden ser validados.
30 594,3 2,4
Advertencia 30 1290,0 2,2
Es responsabilidad del usuario garantizar que el control
30 2863,0 4,6
de calidad se realiza conforme a la legislacin local en
vigor. Reproductibilidad interserie
LIMITE DE LA PRUEBA Cinco muestras se analizaron en simple en 29 series
diferentes sobre un mismo sistema VIDAS y sobre un
Se puede encontrar una interferencia con ciertos
periodo de 8 semanas.
sueros con anticuerpos dirigidos contra los
componentes del reactivo, es por esto que los Nmero Media CV
resultados de esta determinacin deben ser (pg/ml) (%)
interpretados teniendo en cuenta el contexto clnico y el 29 39,0 9,5
resultado de otraspruebas.
29 173,0 5,1
VALORES ESPERADOS 29 586,0 6,4
En una poblacin clinicamente sana, se han 29 1258,0 7,4
encontrado los siguientes valores :
29 2800,0 3,2
Hombres (n=173) < 62 pg/ml
Especificidad
Mujeres:
- Fase folicular (n=129): 18 - 147 pg/ml Compuestos probados % de reacciones cruzadas

- Pico preovulatorio (n=33): 93 - 575 pg/ml 17 -Estradiol 100

- Fase luteal (n=131): 43 - 214 pg/ml Estrona 23,5
- Menopausia (n=26) < 58 pg/ml Estriol 1,15
Etinil estradiol 0,33
Estos resultados se dan a ttulo indicativo, se
recomienda a cada laboratorio establecer sus propios Progesterona < 0,003
valores de referencia sobre una poblacin Testosterona < 0,003
rigurosamente seleccionada. Noretindrona < 0,003
Factores de conversin: Corticosterona < 0,003
De pmol/l a pg/ml (ng/l), multiplicar por 0.272 Danazol < 0,003
De pg/ml (ng/l) a pmol/l, multiplicar por 3,67 Dietilstilbestrol < 0,003
17 -Estradiol glucurnico 0,18

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Exactitud: Prueba de dilucin:

Tres muestras se diluyeron en un suero de hombre y se valoraron en simple en 3 series. La concentracin media
medida respecto a la concentracin esperada se expresa en porcentaje de recuperacin media.
Sueros Factor Concentracin media Concentracin media Porcentaje de
de dilucin esperada (pg/ml) medida (pg/ml) recuperacin media (%)
1 1/1 2324 2324 100,0
1/2 1176 1219 103,6
1/4 603 623 103,3
1/8 316 318 100,8
2 1/1 2014 2014 100,0
1/2 1022 1015 99,4
1/4 525 542 103,2
1/8 277 276 99,6
3 1/1 2788 2788 100,0
1/2 1409 1408 100,0
1/4 719 710 98,8
1/8 374 391 104,6

Comparacin con otro mtodo de valoracin
Se ha establecido una correlacin sobre 166 muestras
entre el equipo VIDAS E2II (Y) y un equipo
inmunoenzimtico comercializado (X):
Y = 1,145 X + 14,28 r =0,996 (n = 166)
ELIMINACION DE LOS DESECHOS
Eliminar los reactivos utilizados o no utilizados asi
como los materiales de un solo uso contaminados
siguiendo los procedimientos relativos a los productos
infecciosos o potencialmente infeccisos.
Es responsabilidad de cada laboratorio la gestin de
sus desechos y efluentes segn su naturaleza y
peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) su
tratamiento y eliminacin, segn las reglamentaciones
aplicables.
8. YAMASHITA T., OKAMOTO S., THOMAS A., MAC LACHLAN V.,
HEALY D.L. Predicting pregnancy outcome after in vitro fertilization
and embryo transfer using estradiol, progesterone and human
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TABLA DE SIMBOLOS
Smbolo Significado
Nmero de catlogo

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